Validering af A 1, Lu a og Lu b fænotypebestemmelse på NEO (Immucor) ved metodesammenligning og holdbarhedsforsøg

Størrelse: px
Starte visningen fra side:

Download "Validering af A 1, Lu a og Lu b fænotypebestemmelse på NEO (Immucor) ved metodesammenligning og holdbarhedsforsøg"

Transkript

1 2014 Validering af A 1, Lu a og Lu b fænotypebestemmelse på NEO (Immucor) ved metodesammenligning og holdbarhedsforsøg Validation of A 1, Lu a and Lu b phenotyping on NEO (Immucor) by method comparison and storage experiment Figur 1: NEO (Immucor). Reference: NEO Brochure lokaliseret på: O-Brochure_US_web.pdf Camilla Thinggård Jacobsen studienr Professionsbachelor i perioden fra til Bioanalytikeruddannelsen på University College Lillebælt Blangstedgårdsvej Vejledere: Helle Isak Adal Wihan, Bioanalytiker underviser på Klinisk Immunologisk Afdeling, Odense Universitetshospital og Tone Elisabeth Bernchou, Adjunk/Molekulær- og cellebiolog samt underviser på University College Lillebælt Antal anslag:77.964

2 Forord Jeg vil gerne sige tak til Klinisk Immunologisk Afdeling på Odense Universitetshospital for at give mine forsøgssamarbejdspartner og jeg, lov til at udføre vores forsøg til bachelorprojektet på deres afdeling i speciallaboratoriet. Projektet henvender sig til personalet på Klinisk Immunologisk afdeling, Odense Universitetshospital som skal bruge valideringen af NEO (Immucor). Særlig tak til Mette Henneby og sekreterne på Klinisk Immunologisk Afdeling, Odense Universitetshospital som har hjulpet os med at booke donorer med den sjældne Lutheran fænotype. Stor tak til Marianne Grønholdt Pedersen, Afdelingsbioanalytiker på Klinisk Immunologisk Afdeling, for hjælp til problemer på NEO (Immucor). Samtidig vil jeg også gerne sige særligt tak til Diannie Boysen, produktchef hos Triolab, for hjælp til brug af NEO (Immucor) og fejludregninger. Stor tak til Ulrik Sprogøe, analyseansvarlig overlæge på Klinisk Immunologisk Afdeling, for hjælp til statistik. Jeg vil gerne takke mine to vejledere Helle Isak Adal Wihan, Bioanalytiker underviser på Klinisk Immunologisk Afdeling, Odense Universitetshospital og Tone Elisabeth Bernchou, Adjunk/Molekulær- og cellebiolog samt underviser på University College Lillebælt i Odense for god hjælp og vejledning samt støtte gennem projektet. Til sidst vil jeg gerne takke Sandra Gaedt Schmidt, Ida Niebuhr Moser Hausted og Lisa Maria Mathiesen for et godt samarbejde samt støtte undervejs gennem hele projektet. Side 2 af 76

3 Indhold Forord... 2 Resumé... 6 Problembaggrund:... 6 Metode:... 6 Resultater:... 6 Konklusion:... 6 Introduktion... 7 Problemformulering:... 8 A Lutheran-antigenerne... 9 Antigeners holdbarhed Analyseprincipper NEO(Immucor) Søljeagglutinationsteknik Glasteknik Metodiske overvejelser: Prøvemateriale: Antal dage til holdbarhedsforsøg Kontroller: Aflæsning af resultater Databehandling Materialer Apparatur Utensilier Reagenser til manuel teknik Reagenser til NEO(Immucor) Prøvemateriale Metode Manuel fænotypebestemmelse Søjleagglutinationsteknik i LISS Coombs gelkort, Lu a og Lu b Glasteknik, A Automatiseret fænotypebestemmelse Side 3 af 76

4 Hæmagglutinationsteknik med IgM-antistoffer på NEO(Immucor) til A 1 fænotypebestemmelse Fast fase teknik med IgG-antistoffer på NEO (Immucor) til Lu a og Lu b fænotypebestemmelse Tolkning af resultater på NEO (Immucor) Databehandling Resultater Metodesammenligning mellem manuel teknik og NEO (Immucor) A Lu a Lu b Holdbarhedsforsøg A A 1 prøver opbevaret ved 4 C A 1 prøver opbevaret ved stuetemperatur Lu a Lu a prøver opbevaret ved 4 C Lu a prøver opbevaret ved stuetemperatur Reaktionsstyrker sammenholdt ud fra opbevaringstemperatur Lu b prøver opbevaret ved 4 C Lu b prøver opbevaret ved stuetemperatur Reaktionsstyrker sammenholdt ud fra opbevaringstemperatur Diskussion Metodesammenligning og holdbarhed for A Metodesammenligning for Lu a fænotypen Holdbarhed for fænotypen Lu a ved 4 C Holdbarhed for fænotypen Lu a ved stuetemperatur Metodesammenligning for fænotypen Lu b Holdbarhed for fænotypen Lu b ved 4 C Holdbarhed for fænotypen Lu b ved stuetemperatur Fordele og ulemper ved NEO(Immucor) vs. manuelle teknikker Forsøgsdesign Konklusion Perspektivering Litteraturliste: Side 4 af 76

5 Bilag 1 Indlægsseddel for Anti-A1 Lectin Bilag 2 - Aflæsning: Graduering af agglutination i søjleagglutinationsteknik Aflæsning: Graduering af agglutination i glasteknik Bilag 3 Indlægsseddel for Rh-Hr Control til NEO (Immucor) Bilag 4 NEO (Immucor) cut-off værdier til fænotypebestemmelse af A 1, Lu a og Lu b Bilag 5 - NEO (Immucor), Konklusion for fænotypebestemmelser Bilag 6 Forskrifter for manuelle teknikker Bilag 7 - Konklusion for manuelle fænotypebestemmelser Bilag 8 - Uddrag af NEO s (Immucor) forskrift Vask af donorerytrocytter: Bilag 9 Flowcharts over fremgangsmetode til fænotypebestemmelse på NEO (Immucor) Bilag 10 Databehandling af rådata Fishers Eksakte test- Metodesammenligning Lu a Lu b Undersøgelse af Normalfordeling - Holdbarhedsforsøget Friedman test på Lu a prøver opbevaret ved 4 C, hvor dag 1,2,4,7,10 og 14 sammenholdes Friedman test på Lu a prøver opbevaret ved 4 C, hvor dag 1,2,4,7 og 10 sammenholdes Friedman test på Lu a prøver opbevaret ved stuetemperatur, hvor dag 1,2,4,7,10 og 14 sammenholdes Friedman test på Lu a prøver opbevaret ved stuetemperatur, hvor dag 1,2,4,7 og 10 sammenholdes Friedman test på Lu b prøver opbevaret ved 4 C, hvor dag 1,2,4,7, 10 og 14 sammenholdes Friedman test på Lu b prøver opbevaret ved stuetemperatur, hvor dag 1,2,4,7, 10 og 14 sammenholdes Resultatark for metodesammenligning ved fænotypebestemme af A Resultatark for metodesammenligning ved fænotypebestemme af Lu a Resultatark for metodesammenligning ved fænotypebestemme af Lu b Side 5 af 76

6 Resumé Problembaggrund: Klinisk Immunologisk Afdeling, Odense Universitetshospital fænotypestemmer på nuværende tidspunkt A 1 manuelt ved glasteknik og Lu a og Lu b manuelt ved søjleagglutinationsteknik i LISS Coombs gelkort, men har et ønske om fremadrettet at få gjort fænotypebestemmelserne automatiseret på NEO (Immucor). NEO (Immucor) anvender hæmagglutinationsteknik til fænotypebestemmelse af A 1 og fast fase teknologi til fænotypebestemmelse af Lu a og Lu b. Ligeledes ønsker afdelingen at donorblodprøver skal kunne opbevares i 14 dage ved 4 C. Metode: Det undersøges ved metodesammenligning mellem manuel fænotypebestemmelse af A 1 ved glasteknik, Lu a og Lu b ved manuel søjleagglutinationsteknik i LISS Coombs gelkort og hæmagglutinationsteknik og fast fase teknologi på NEO (Immucor) om fænotyperne kan blive automatiseret på NEO (Immucor). Ved et holdbarhedsforsøg undersøges det om opbevaringstemperaturen påvirker donorblodprøverne når disse opbevares ved hhv. 4 C og stuetemperatur i 14 dage. Resultater: Begge metoder finder samme analysesvar for fænotypebestemmelserne af A 1 og Lu b, også efter 14 dages opbevaring ved hhv. 4 C og stuetemperatur. For fænotypebestemmelsen af Lu a på NEO (Immucor) bestemmes mange donorblodprøver inkonklusive og efter 14 dage ved hhv. 4 C og stuetemperatur bliver alle donorblodprøver bestemt negative. Konklusion: Fænotypebestemmelserne for A 1 og Lu b kan blive automatiseret på NEO (Immucor) og har en holdbarhed på 14 dage ved hhv. 4 C og stuetemperatur. Fænotypebestemmelsen for Lu a kan på nuværende tidspunkt ikke automatiseres og har ikke en holdbarhed på 14 dage ved hverken 4 C eller stuetemperatur. Det kræver derfor yderligere undersøgelser for at kunne få fænotypebestemmelsen af automatiseret. Side 6 af 76

7 Introduktion Problembaggrund Patienter kan i forbindelse med blodtransfusioner danne irregulære antistoffer rettet mod fremmede blodtypeantigener. Det er derfor vigtigt, at fænotypebestemme donorerytrocytterne med henblik på at kunne give forligeligt blod ved efterfølgende transfusioner og herved undgå transfusionskomplikationer [1]. Ved transfusionskomplikationer forstås, at patientens antistoffer binder til det korresponderende blodtypeantigen på donorerytrocytternes overflade, hvilket fører til hæmolysering af erytrocytterne [2]. Ved en fænotypebestemmelse bestemmes sammensætningen af blodtypeantigenerne på overfladen af donorerytrocytterne. På nuværende tidspunkt foretager Klinisk Immunologisk Afdeling, Odense Universitetshospital (KIA, OUH) fænotypebestemmelsen af A 1 manuelt ved glasteknik og fænotypebestemmelsen af Lu a og Lu b manuelt ved søljeagglutinationsteknik i LISS Coombs gelkort. Afdelingen fænotypebestemmer A 1 på donorerytrocytter for at differentiere mellem A 1 og A 2 antigener, da afdelingen anvender fænotypen A 2 til validering af nyt apparatur, for at sikre at det kan detekterer svage reaktioner. KIA bruger også A 2 som modtagekontrol til f.eks. gelkort og testsera, for at sikre at en ny leverance af samme testmateriale har samme kvalitet som tidligere leverancer. KIA undersøger forud for transfusion patienter for irregulære antistoffer rettet mod Lu a (anti-lu a ) og Lu b (anti-lu b ) vha. en antistofscreentest. Ved en antistofscreentest undersøges patientens irregulære antistoffer i plasma over for donorerytrocytter med kendte antigener. Har patienten irregulære antistoffer ses en agglutination med det pågældende antigen [2]. Afdelingen skal kunne fremskaffe donorer med fænotyperne Lu(a-) og Lu(b-) til de patienter, der danner irregulærer antistoffer. Da Lu(b-) fænotypen er sjælden vil KIA gerne undersøge alle donor for fænotypen Lu(a+) i håb om, at finde flere Lu(b-) bloddonorer [3]. Men, da Lu(b-) fænotypen er sjælden, er der tilsvarende også sjældent patienter der danner anti-lu b. Tilfælde forekommer dog, og KIA vil derfor gerne have fænotypebestemt bloddonorer for kunne give forligeligt blod. Af hensyn til økonomi og personaleressourcer har KIA derfor et ønske om, fremadrettet at få gjort fænotypebestemmelserne af A 1, Lu a og Lu b automatiseret på NEO (Immucor). Fænotypebestemmelserne kan blive automatiseret på NEO (Immucor), såfremt den automatiserede metode findes at være valid. Ved overflytning af manuelt fænotypebestemmelse til NEO (Immucor) er det relevant at udføre en metodevalidering, herunder en metodesammenligning. Formålet med en metodesammenligning er, at sikre at analyserne finder frem til samme svar, enten positiv eller negativ [4]. På KIA valideres Side 7 af 76

8 en metode ved en metodesammenligning hvis metoden skal overføres til nyt apparatur [TMS]. Ved validering af nyt apparatur fastlægges kontrol- og cut-off værdier. Det undersøges, om apparaturet er installeret korrekt i henhold til manualer, indlægssedler og leverandøroplysninger. Apparaturet afprøves med donorblodprøver for at undersøge analysens robusthed og egnethed [5]. Da KIA allerede anvender NEO (Immucor) til rutineprøver, er den derfor allerede blevet valideret [6]. Det er derfor ikke relevant at udføre en metodevalidering, men i stedet lave en metodesammenligning for at undersøge og vurderer, om NEO (Immucor) får de samme resultater som glasteknik og søjleagglutinationsteknik i LISS Coombs gelkort. KIA opbevarer på nuværende tidspunkt deres donorblodprøver til fænotypebestemmelse ved stuetemperatur, men ønsker fremadrettet at opbevarer dem ved 4 C. Ifølge producenten af NEO (Immucor) bør EDTA-prøver, der ikke analyseres inden 24 timer, opbevares ved 1-10 C og ikke længere end 14 dage [7]. Afdelingen har før oplevet problemer ved fænotypebestemmelse af prøver, der er ældre end en uge, ved analysering med IgG-antistoffer på NEO (Immucor), hvor brøndene i mikrotiterpladerne ikke coates ordentligt [8]. KIA vil indføre fænotypebestemmelserne A 1, Lu a og Lu b som en del af rutinen, hvor de skal analyseres én gang ugentligt. I tilfælde af reanalysering skal prøvernes holdbarhed kunne holde yderligere en uge. Det er i den forbindelse relevant, at undersøge om donorblodprøvernes holdbarhed korresponderer med afdelingens behov, ved at undersøge om opbevaring ved 4 C og stuetemperatur (stuetemp.) i op til 14 dage påvirker reaktionsstyrken for fænotyperne A 1, Lu a og Lu b. Problemformulering: Hvilken betydning har det for resultatet af A 1, Lu a og Lu b fænotypebestemmelsen at anvende hæmagglutinationsteknik og fast fase teknologi på NEO (Immucor) frem for manuel glasteknik og søjleagglutinationsteknik i LISS Coombs kort, og hvordan påvirker opbevaring af donorblodprøver ved hhv. 4 C og stuetemperatur i op til 14 dage resultatet af A 1, Lu a og Lu b fænotypebestemmelsen på NEO (Immucor)? Side 8 af 76

9 A 1 Blodtypeantigenet A 1 er en fænotype som hører under AB0 blodtypesystemet. Antigenerne i blodtypesystemet AB0 består af oligosakkarider, som er bundet til enten proteiner eller lipider i erytrocytmembranen. Individer med blodtypen A kan opdeles i flere subtyper, hvor de to hyppigst forekommende er A 1 og A 2. Disse fænotyper adskiller sig ved, at A 1 individer både udtrykker A-antigen og A 1 -antigen på overfladen af erytrocytterne, mens A 2 individer kun udtrykker A-antigener [2][8][9]. A 1 -antigener agglutinerer hurtigere og giver stærkere agglutinater end A 2 -antigener [2]. Det kan forekomme, at A 2 individer danner antistoffer imod A 1 -antigen, jf. bilag 1, [9]. Antistoffet imod A 1 (anti-a 1 ) kan i sjældne tilfælde reagere ved 37 C, men har normalt ikke nogen klinisk relevans, da disse ikke reagerer ved temperaturer over 25 C [2][9]. Frekvensen for blodtype A i Europa er % [2]. Lutheran-antigenerne Lu a og Lu b tilhører blodtypesystemet Lutheran. Lutheran systemet består af 20 forskellige antigener, hvoraf Lu a og Lu b er de hyppigst forekomne. Lu a og Lu b er glykoproteiner, der tilhører immunoglobulin superfamilien, og fungerer som adhæsionsmolekyler, der binder til laminin i ekstracellulær matrix [8][10]. Lu a og Lu b inddeles i homo- og heterozygot, hvilket betyder, at de inddeles efter hvilke blodtypeantigener erytrocytterne udtrykker på deres overflade. Har et individ en fænotype Lu(a+ b-), beskrives denne som homozygot, da der kun er Lu a blodtypeantigener udtrykt på overfladen af erytrocytterne. En heterozygot fænotype Lu(a+ b+) har både Lu a og Lu b udtrykt [3]. Individer der er heterozygote for Lu a, dvs. Lu(a+ b+) kan mellem deres erytrocytter, variere i styrke[8]. Dette kan give inkonklusive resultater ved anvendelse af for svagt antisera [8]. For at en analysemetode kan anvendes til detektion af blodtypeantigenet Lu a, skal den kunne detektere Lu(a+ b+) for, at sikre at den kan detekterer de svage reaktioner [8]. Der er for blodtypeantigenet Lu b ligeledes variation i styrke, da det er forskelligt for individer hvor mange antigener der er udtrykt på overfladen af erytrocytterne. Denne variation er nedarvet [3]. Fænotypernes frekvens for de fleste populationer er som følgende: Lu(a+ b+) 7,4 %, Lu(a+ b-) 0,2 %, Lu(a- b+) 92,4 % og Lu(a- b-) sjælden [3][11]. Antistoffer imod Lu a (anti-lu a ) reagerer normalt ikke ved 37 C, og er derfor af mindre klinisk relevans [12]. Antistoffer mod Lu b (anti-lu b ) kan i sjældne tilfælde forårsage mild og/eller forsinket hæmolytisk transfusions reaktion (HTR) [3][12]. Lu a og Lu b antigener er kun lidt udviklede hos fostre og nyfødte, og derfor forårsager antistofferne sjældent hæmolytisk sygdom hos fostre og nyfødte [11][12]. Side 9 af 76

10 Antigeners holdbarhed Studier af Hess et al. og Sparrow et al. har vist, at opbevaring af fuldblod forårsager forskellige biokemiske og morfologiske ændringer af erytrocytterne samt forandringer eller reducering af blodtypeantigener [13][14][15]. Erytrocytter anvender glykolysen for at danne energi, adenosin trifosfat (ATP), hvor affaldsprodukterne gør at ph falder. Ved opbevaring i 4 C vil glykolysen og dannelsen af ATP falde med % pr. grader celsius. Opbevares erytrocytter derimod ved 25 C vil de metaboliserer 10 gange hurtigere end ved 4 C og bliver derved langsommere hæmolyseret [16]. Er der leukocytter tilstede sammen med erytrocytter, vil disse, når de nedbrydes, frigive enzymer som protease, lipase og glycosidase der kan angribe og nedbryde proteiner, dvs. formentligt blodtypeantigenerne på erytrocytternes membran [16]. Analyseprincipper NEO(Immucor) Hæmagglutinationsteknik og fast fase teknologi og på NEO (Immucor) er baseret på antigenantistof reaktion i en mikrotiterplade. Ved hæmagglutinationsteknik på NEO (Immucor) tilsættes donorerytrocytter og testsera til en ucoated mikrotiterplade. IgM-antistoffer i testsera vil bindes til donorerytrocytterne, hvis det korresponderende blodtypeantigen udtrykkes derpå, og dermed dannes et agglutinat. Ved positivt resultat ses et eller flere agglutinater, mens der ved negativt resultat ingen agglutinater er, hvilket ses som en rød sky fordelt i brønden. Ved fast fase teknologi anvendes IgG-antistoffer. Ved denne teknik er mikrotiterpladerne coated med antistoffer imod erytrocytter (anti- RBC) hvortil donorerytrocytter kan immobiliseres og denne immobilisering betegnes monolayer. Antistoffer i testsera vil binde til deres korresponderende blodtypeantigen, hvis dette udtrykkes på donorerytrocytterne. Indikatorceller som er sensibiliserede med anti humant IgG vil, ved tilsætning, bindes til de bundne antistoffer på donorerytrocytterne. Ved et positiv resultat binder indikatorcellerne til de bundne antistoffer på erytrocytterne og dette ses som en rød sky fordelt i brønden. Ved negativt resultat binder antistofferne ikke til indikatorcellerne og vil derfor lægge sig som et pellet. Figur 2: Fast fase teknologi med anvendelse af IgGantistoffer på NEO (Immucor). Side 10 af 76

11 Søljeagglutinationsteknik Ved søjleagglutinationsteknik anvendes Indirekte Agglutinationsteknik (IAT) i LISS Coombs gelkort. Gelen i LISS Coombs kortene er opbygget som et netværk og er tilsat Lav Ion Styrke Saltvand (LISS), anti- IgG og anti- C3d der muliggør, at IgG antistoffer kan danne agglutinater med donorerytrocytter, der udtrykker det pågældende blodtypeantigen. LISS er et medie der indeholder et reduceret antal af positive og negative ioner, hvilket gør, at den negativt ladede ionsky der omgiver erytrocytterne reduceres, således positivt ladede antistoffer lettere og hurtigere kan bindes hertil [17][18]. Ved anvendelse af LISS, nedsættes inkubationstiden [18]. Da sensibilisering med IgG-antistoffer ikke kan ses med det blotte øje, er gelen i LISS Coombs gelkort tilsat Anti- IgG og C3d, der binder til de sensibiliserede erytrocytterne, dvs. binder til antistofferne i testsera, hvorved sensibiliseringen synliggøres ved at danne agglutinat [17][18]. Ved agglutination vil erytrocytterne blive liggende øverst i gelen efter centrifugering, da agglutinaterne ikke kan trænge gennem gelens netværk og resultatet er derved positivt. Ved negativt resultat bliver ikke-agglutinerede erytrocytter centrifugeret ned i bunden af gelen, da der ingen agglutination er sket, jf. bilag 2. Glasteknik Ved glasteknik sker direkte hæmagglutination, som er baseret på agglutinationsreaktioner mellem blodtypeantigener på erytrocytterne og specifikke IgM-antistoffer i testsera. Ved positiv reaktion vil antistoffet i testsera bindes til donorerytrocytterne som udtrykker det pågældende blodtypeantigen, og herved dannes et agglutinat. Ved negativ reaktion ses ingen agglutinater, jf. bilag 2. Metodiske overvejelser: Prøvemateriale: Antallet af donorblodprøver er valgt efter, at variationen mellem donorerne er meget lav ved de respektive fænotyper. Det ikke nødvendig med stort antal prøver, da der kun kan undersøges for to variationer, nemlig positiv eller negativ. Derudover tages hensyn til afdelingens økonomi. Prøvernes fænotype er bekræftet på forhånd og fremsøgt i KIA s laboratoriesystem ProSang, hvor donors blodtyper og fænotyper fremgår. I ProSang fremgår det ikke ud fra hvilken teknik fænotyperne er bestemt ved. For at sikre at NEO (Immucor) kan detektere de svageste reaktioner, medtages derfor homo- og heterozygote fænotyper for Lu a og Lu b. De svageste reaktioner er fra heterozygote fænotyper, hvor der udtrykkes færre blodtypeantigener på overfladen af erytrocytterne end ved fænotyper som er Side 11 af 76

12 homozygote. Til metodesammenligningen indsamles 20 donorblodprøver i alt. Den fænotype prøverne analyseres for, markeres i det efterfølgende med fed. Til fænotypebestemmelse af Lu a indsamles fem donorblodprøver med fænotypen Lu(a+ b-) og 10 donorblodprøver med fænotypen Lu(a+ b+), hvoraf fem af disse anvendes til fænotypebestemmelse af Lu b. Til fænotypebestemmelse af Lu b indsamles også fem prøver med fænotypen Lu(a+ b+). Ligesom der anvendes 10 positive fænotyper for Lu a og Lu b, indsamles også 10 donorblodprøver, der er positive for A 1, for at have samme antal. Der anvendes fem prøver fra donor med svagere fænotyper f.eks. A 2 for at sikre at NEO (Immucor) kan ikke finder falsk positive, da donorerytrocytter med blodtypeantigener med A 2 giver en negativ reaktion med anti-a 1 testsera [2]. Til holdbarhedsforsøget anvendes 10 donorblodprøver til Lu a fænotypen, hvoraf fem af prøverne har fænotypen Lu(a+ b-), mens de resterende fem har fænotypen Lu(a+ b+). Til fænotypebestemmelse af Lu b anvendes ligeledes 10 i alt, hvor af fem har fænotypen Lu(a+ b+) og de resterende fem har fænotypen Lu(a- b+). For fænotypebestemmelse af A 1 anvendes fem A 1 prøver i holdbarhedsforsøget, men ingen A 1 negative prøver (A 2 ), da der ikke ville kunne ses en ændring når blodtypeantigenet ikke er til stede på overfladen af donorerytrocytterne. Fænotypen Lu(a- b-) medtages ikke i nogle af forsøgene, da denne forekommer yderst sjældent [3]. For at undersøge om opbevaringstemperatur kan ændre på analysesvar, deles hver prøver til holdbarhedsforsøget i to, hvor den ene halvdel opbevares ved 4 C og den anden opbevares ved stuetemperatur. Prøver mærkes så det fremgår hvilken temperatur de opbevares ved og hvilke prøver der hører sammen. Resultaterne fra dag 1 i holdbarhedsforsøget anvendes som resultater til metodesammenligningen, da dette er mere tidsbesparende og billigere og der anvendes mindre testsera. Forud for valideringen undersøges det, om der er nok prøvemateriale i én donorblodprøve, når prøven deles i to, til hhv. analysering på NEO (Immucor) og ved manuel teknik, når der yderligere skal analyseres seks gange pr. prøve i holdbarhedsforsøget. Antal dage til holdbarhedsforsøg Antallet af dage til holdbarhedsforsøget vurderes ud fra anbefalinger fra producenten af NEO (Immucor) samt ønsker fra KIA om en holdbarhed på 14 dage, da prøverne skal analyseres en gang ugentligt og i tilfælde af reanalysering skal de kunne stå til ugen efter [7]. Det vurderes at dag 1, 2, 4, 7, 10 og 14 er relevante at analysere prøverne på. Dag 1 er valgt, da KIA analysere deres prøver den dag og dag 2 for at se om der allerede sker en forandring der. Dag 7 og 14 er valgt på baggrund af afdelingens ønske om analysering én gang ugentlig, evt. reanalysering en uge senere samt efter Side 12 af 76

13 anbefalinger fra producenten af NEO (Immucor). Dag 10 er valgt for at se om der sker en ændring af blodtypeantigerne mellem dag 7 og 14. Tappedagen er dag 0. Kontroller: For at sikre at analysen, ved søjleagglutinationsteknik til fænotypebestemmelse af Lu a, kan finde de svage reaktioner der kan være ved heterozygote donorprøver, anvendes derfor homo- og heterozygote kontroller. Den heterozygote donorblodprøve anvendes som negativ kontrol, da blodtypeantigenet ikke er til stede på overfalden af testerytrocytterne, mens den homozygote donorblodprøve anvendes som positiv kontrol, da testerytrocytterne har det korresponderende blodtypeantigen udtrykt på overfladen. Ved fænotypebestemmelsen af A 1 via glasteknik anvendes en positiv kontrol, fra panel 16 der er en 5 % erytrocytsuspension (fortyndingsmedie og pakkede erytrocytter fra donor), hvor A 1 - blodtypeantigener udtrykt på erytrocytternes overflade. Der skelnes ikke mellem homo- og heterozygot, da dette ikke bestemmes serologisk, men genomisk. Derudover skal yderligere anvendes en negativ kontrol til fænotypebestemmelse af A 1. Den negative kontrol vil blive fremsøgt i ProSang under rutine 330, (kontrollen er en komponent til blodportionerne klar til transfusion), da den skal være negativ for A 1. Den negative kontrol vil derfor være positiv for A 2 eller A 3 blodtypeantigener. På NEO (Immucor) skal der anvendes en Rh-kontrol, som består af et fortyndingsmedie, til analyser, hvor der anvendes hhv. IgM- og IgGantistoffer. Ved hæmagglutinationsteknik, hvor der anvendes IgMantistoffer, medtages Rh-kontrollen for at undersøge om donors blodlegemer agglutinerer spontant jf. bilag 3, og ved fast fase teknik, hvor der anvendes IgG-antistoffer, medtages Rh-kontrollen til hver prøve for at undersøge om donor er Coombs positiv. Aflæsning af resultater For at sikre ens aflæsning for alle resultater til aflæsningen af fænotyperne Lu a og Lu b ved søjleagglutinationsteknik i LISS Coombs gelkort og for fænotypen A 1 i glasteknik, skal samme person stå for aflæsningen, da der kan variation i den måde der aflæses på. Da KIA graduerer deres resultater, vil resultaterne i metodesammenligningen blive behandlet med samme graduering i Figur 3: Til venstre graduering ved manuel glastenik. Til højre aflæsningen af hæmagglutionasteknik på NEO (Immucor). Side 13 af 76

14 projektet, se bilag 4. Resultaterne vil blive gradueret fra til ++++, hvor - er negativ, mens ++++ er stærkes positiv. Til holdbarhedsforsøget vil der blive anvendt talværdier (score) som NEO (Immucor) måler, for at anvende relevant statistik og derved undersøge om der sker ændring af blodtypeantigenerne over tid. Der kan ikke udføres statistiske beregninger med gradueringer. Databehandling Resultater fra metodesammenligningen skal indføres i en kontigenstabel i format 3x3 der sammenholder frekvenser. I denne tabel skal metoderne sættes overfor hinanden med antallet af de prøver de hver især finder positive, inkonklusive eller negative. Kontigenstabellen i 3x3 format er valgt for at kunne lave en χ 2 -test og undersøge om antallet af inkonklusive resultater er uafhængigt af hvilken metode der anvendes. Resultaterne for holdbarhedsforsøget skal fremvises med beskrivende statistik, hvor hver fænotype afbildes i et xy-plot for at visualisere prøvernes forløb over antallet af analyseringsdage. Ved disse plots kan der vurderes om der er en klinisk betydning og om prøverne ændre svar fra positiv til inkonklusiv eller til negativ. For at vurdere om temperaturen har en indflydelse på reaktionsstyrkerne opstilles for hver analyseringsdag, et xy-plot hvor temperaturerne angives på akserne. Hver prøves score for hhv. 4 C og stuetemp. plottes og der indtegnes en identitetslinje (x=y) med skæring i (0,0), hvorved det kan ses om temperaturen har indflydelse på reaktionsstyrkerne. Jo tættere punkterne ligger på linjen, jo mindre afhænger reaktionsstyrkerne af opbevaringstemperaturen. Ligger punkterne mere på den ene side af identitetslinjen, jo mere har opbevaringstemperaturen en indflydelse på reaktionsstyrkerne. I alle grafer vil der blive indtegnet NEO s (Immucor) positive og negative cut-off værdi samt afdelingens positive cut-off værdi, så det visuelt kan ses hvilke prøver som accepteres som positive, inkonklusive og negative. Er scoren for A 1 fænotypen under 23,000 på NEO (Immucor) accepteres denne som negativ, ligger den mellem 23,000 og 50,000 vurderes den som inkonklusiv, mens den accepteres som positiv over en score på 50,000, se bilag 5. Afdelingens cut-off værdier er de samme, se bilag 6. Er scoren for fænotyperne Lu a og Lu b under 20,000 på NEO (Immucor) accepteres disse som negative, ligger scoren mellem 20,000 og 40,000 vurderes de som inkonklusive og ligger scoren over 40,000 accepteres de som positive, se bilag 5. Afdelingens positive cut-off ligger på 72,000, mens den negative er den samme som NEO s (Immucor) negative cut-off, se bilag 6. Side 14 af 76

15 Materialer Apparatur - Hettich Zentrifugen ROTINA 46 blev anvendt til centrifugering af blodprøver og til centrifugering af widalglas anvendt til glasteknik - ID- centrifuge 24 S fra DiaMed ID Micro Typing System (Schweiz) blev anvendt til centrifugering af LISS Coombs gelkort - ID-Incubator 37 S II fra DiaMed ID Mirco Typing System (Schweiz) blev anvendt til inkubation af LISS Coombs gelkort - Galileo NEO fra Immucor, Gamma (Rödermark, Tyskland) blev anvendt til fænotypebestemmelse af A 1, Lu(a+ b+), Lu(a- b+) og Lu(a+ b-) Utensilier - Widalglas (Rundbodengläser) 75x12x0,8-1 mm blev anvendt at lave suspensioner til manuelle teknikker og til deling af prøver - Reagensglas 75x9,85x0,7 mm fra Buch og Holm (Herlev, Danmark) blev anvendt manuel fænotypebestemmelse af A 1 ved glasteknik - LISS Coombs gelkort fra BIO-RAD (Schweiz) - Spejl blev anvendt til aflæsning af resultater fra manuel fænotypebestemmelse af A 1 ved glasteknik - Capture-R Select fra Immucor, Gamma (USA) mikrotiterplader, 96 brønde blev anvendt til fast fase teknologi - Neutrale mikrotiterplader med 96 brønde fra Triolab (Brøndby, Danmark) blev anvendt til hæmagglutinationsteknik - Stirrballs fra Immucor, Gamma (Tyskland) til Capture-R Ready Indicator-cells blev anvendt blanding af reagens på NEO (Immucor) Reagenser til manuel teknik - ID-Cellstab fra BIO-RAD (Schweiz) blev anvendt som suspensionsmedie til fænotypebestemmelse - Seraclone TM Anti-A1 fra BIO-RAD (Tyskland) blev anvendt til fænotypebestemmelse af A 1 og anvendt ved glasteknik - Anti-Lu a fra BIO-RAD (Tyskland) blev anvendt som testsera til fænotypebestemmelse af Lu(a+) og Lu(a-) anvendt ved søjleagglutinationsteknik Side 15 af 76

16 - Anti-Lu b fra BIO-RAD (Tyskland) blev anvendt som testsera til fænotypebestemmelse af Lu(b+) og Lu(b-) anvendt ved søjleagglutinationsteknik - Testerytrocytter fortyndet til 0,8 % erytrocytsuspension fra et panel. Panel donor 1, 3 og 5 godkendt og af KIA, OUH (Danmark) og blev anvendt som kontroller. Panel 1 som Lu(a-), panel 3 som Lu(b-)og panel 5 som Lu(a+) og Lu(b+) ved søjleagglutinationsteknik - Testerytrocytter fortyndet til 5 % erytrocytsuspensioner fra et panel. Panel donor 16 godkendt fra KIA, OUH (Danmark) blev anvendt som positiv kontrol ved glasteknik til fænotypebestemmelse af A 1 - To blodprøver tilhørende komponent fra donor med kendt A 1 negativ fænotype med nr. V og V blev anvendt som negativ kontrol ved glasteknik. - Blodprøver i EDTA-glas fra donorer Reagenser til NEO(Immucor) - System Liquid Concentrate fra Immucor, Gamma (Tyskland) anvendt af NEO til fortynding af pakkede erytrocytter i Capture-R Select, samt vask af brønde i mikrotiterplader. - Galileo diluent fra Immucor, Gamma (Tyskland) anvendt af NEO til fortynding pakkede erytrocytter i neutrale mikrotiterplader ved hæmagglutination - Capture LISS fra Immucor, Gamma (Tyskland) anvendt af NEO til Capture-R Select - Capture-R Ready Indicator-cells fra Immucor, Gamma (Tyskland) anvendt af NEO til Capture-R Select - ImmuClone Rh-hr kontrolreagens fra Immucor, Gamma (Tyskland) anvendt af NEO som kontrol til A 1 og Lu a - Anti-A 1 testsera fra Immucor, Gamma (Tyskland) anvendt af NEO til fænotypebestemmelse af A 1 - Anti-Lu a testsera fra Immucor, Gamma (Tyskland) anvendt af NEO til fænotypebestemmelse af Lu a - Anti-Lu b testsera fra Immucor, Gamma (Tyskland) anvendt af NEO til fænotypebestemmelse af Lu b Prøvemateriale Forinden projektets start blev der, med hjælp fra donorsekretariatet, booket fem donorer med den sjældne fænotype Lu(a+ b-). Disse prøver er indsamlet fra donorer i Region Syddanmark i uge Øvrige blodprøver til projektet blev indsamlet blandt daglige prøver til fænotypebestemmelse Side 16 af 76

17 i blodtypelaboratoriet indsamlet fra donorer i Region Syddanmark i perioden uge I afdelingens EDB-system, ProSang, i patientrutine 386, fremgår det under fænotyper om donors Lutheran og A 1 fænotype er bestemt. ProSang er blevet anvendt for at indsamle prøver med fænotyperne A 1, Lu(a+ b+) og Lu(a- b+). Holdbarhedsforsøget blev startet op af flere hold, i alt 4 hold afhængig af hvornår prøver med de ønskede fænotyper kunne fremsøges. Resultater fra dag 1 i holdbarhedsforsøget anvendes til metodesammenligningen, hvor alle prøver til Lutheran fænotypebestemmelse blev analyseret for både Lu a og Lu b. Der blev indsamlet 10 prøver med fænotypen Lu(a+ b+), 5 prøver Lu(a+ b-), 5 prøver Lu(a- b+), 10 prøver A 1 og 5 A 1 - negative prøver. Metode Indsamlede donorblodprøver til holdbarhedsforsøget blev grundigt vendt for at opnå homogenitet, hvorefter de blev delt i to, hvoraf den ene blev opbevaret ved 4 C og den anden ved stuetemp.. Med en automatpipette blev 2 ml fuldblod fra EDTA prøveglasset afpipetteret til widalglas. Med hjælp fra sekretærerne i donorsekretariatet var der forinden udskrevet ekstra tappeformularer fra blodprøveglassene som blev påsat det tilhørende widalglas. Prøverne blev delt i to stativer, et opbevaret i afdelingens karantæne kølerum (4 o C) og et ved stuetemperatur. Stativerne blev påsat mærkater for at overskueliggøre, hvilket hold, hvilken fænotype den enkelte prøve havde og hvad der specifikt skulle analysere på prøven. På hver prøve blev der desuden noteret hvilken temperatur den skulle opbevares ved, hvilket hold den tilhørte og hvilken fænotype der skulle bestemmes. Prøverne blev derefter centrifugeret i ROTINA 46 (Hettich Zentrifugen) i 5 min. ved 1800 g og 3000 rpm, jf. 4. Prøver til opbevaring ved 4 o C blev herefter placeret i kølerum, således de så vidt muligt kunne opfylde anbefalingen fra indlægssedler om, at prøver skal på køl senest 24 timer efter tapning, jf. bilag 3. Manuel fænotypebestemmelse Prøver til dag 1 ved stuetemp. i holdbarhedsforsøget, uanset hold, blev analyseret manuelt og på NEO (Immucor), således at resultatet kunne bruges til metodesammenligningen. Ved den manuelle analysering blev medtaget negative kontroller til alle fænotypebestemmelser. Der blev ligeledes medtaget positive kontroller, hvor der til fænotypebestemmelse af Lu a og Lu b blev brugt en positiv heterozygot kontrol til, for at sikre at svagt positive reaktionsstyrker kan påvises. Til fænotypebestemmelse af A 1 blev en positiv kontrol fra panel 16 medtaget.. Kontrollerne til Lu a Side 17 af 76

18 og Lu b fænotypebestemmelsen bestod af paneldonor 1, 3 og 5, der er fortyndet blodsuspensioner med donor erytrocytter, og blev fundet i afdelingens paneldonor af testerytrocytter (0,8 %). Den positive kontrol til A 1 fænotypebestemmelsen bestod af panel 16 og blev fundet i afdelingens panel af testerytrocytter (5 %), mens den negative kontrol (A 1 -) blev fremsøgt i erytrocytlaboratoriets EDB- system, ProSang i rutine 330. Alle prøver der ved manuel analysering blev vurderet inkonklusiv (+) blev jf. afdelingens praksis reanalyseret, se bilag 7. Søjleagglutinationsteknik i LISS Coombs gelkort, Lu a og Lu b For at fremstille erytrocytsuspensioner for hver prøve blev 1 ml cellstab overført til widalglas, hvorefter 8 µl pakkede erytrocytter fra donorblodprøven blev tilsat. 50 µl 0,8 % erytrocytsuspension blev afpipetteret til de respektive brønde ovenover gelen i LISS Coombs gelkortet. Derefter blev 25 µl anti-lu a og anti-lu b afpipetteret øverst i brønden ovenover gelen. LISS Coombs gelkortet blev inkuberet i 15 min. ved 37 C i ID-Incubator 37 S II, og derefter centrifugeret i 10 min. ved 910 rpm 1800 g i ID- centrifuge 24 S. Ved brug af aflæsningsskema blev resultaterne af reaktionerne gradueret fra til ++++, hvor betyder, at alle erytrocytter ligger i bunden af søjlen plus betyder, at alle erytrocytter ligger i toppen af gelen, jf. bilag 2, da disse bliver tilbageholdt af gelens netværk. Ved tvivl blev der konfereret med erfarne bioanalytikere på afdelingen. De samme to personer aflæste resultaterne. Glasteknik, A 1 For at fremstille 5 % erytrocytsuspensioner for hver prøve anvendt i analysen blev 1 ml cellstab overført til widalglas hvorefter 50 µl pakkede erytrocytter fra donorblodprøven blev tilsat. Ved samme fremgangsmåde blev suspensionen fra blodprøven, tilhørende den fremsøgte A 1 - blodkomponent (negativ kontrol) fremstillet. 50 µl 5 % erytrocytsuspension blev afpipetteret over i nyt reagensglas hvorefter 50 µl testsera Seraclone TM anti-a 1 blev afpipetteret i glasset. Reagensglassene blev inkuberet ved stuetemp. i 5 min. og centrifugeret i ROTINA 46 (Hettich Zentrifugen) ved 1000 rpm i 1 min. ved 200 g, jf. bilag 4. Aflæsningen foregår ved at vippe glasset forsigtigt over et spejl og reaktionerne graduereres fra til ++++ vha. aflæsningsskema. Ved (negativ) ses ved en homogen blanding, mens ++++ ses som et fuldkomment agglutinat uden frie erytrocytter i supernatanten. Den samme person aflæste alle resultater. Side 18 af 76

19 Automatiseret fænotypebestemmelse Hold 2, 3 og 4 til holdbarhedsforsøget blev analyseret dag 1, 2, 4, 7, 10 og 14 efter tapning. På prøve nr (Lu(a+ b+)), fra hold 3, blev der detekteret clot på dag 7 og denne prøve er derfor ikke analyseret før dag 10. Alle prøver fra hold 1 blev analyseret dag 1, 2, 4, 7 og 10. Lu(a- b+) prøver fra hold 1 i holdbarhedsforsøget blev analyseret dag 16 i stedet for dag 14, mens de resterende prøver fra hold 1 blev analyseret dag 14. På prøve nr (Lu(a+ b+)) fra hold 3, blev der på dag 14 detekteret clot. Prøvens pakkede erytrocytter blev vasket 2 x med PBS, jf. anbefalinger i forskrift for NEO (Immucor), se bilag 8. Fænotypebestemmelserne foregik på NEO (Immucor), hvor der var medtaget Rh-kontrol til hver prøve undtagen ved Lu b fænotypebestemmelsen. Hæmagglutinationsteknik med IgM-antistoffer på NEO(Immucor) til A 1 fænotypebestemmelse Reagenser (Galileo diluent, anti-a 1 Lectin testsera, Rh-kontrol) blev varmet op til stuetemperatur og holdbarheden samt mængden blev kontrolleret. Herefter blev prøver, reagenser og neutrale mikrotiterplader loaded på NEO (Immucor). Mikrotiterpladen blev aflæst af CCD kamera for at kontrollere korrekt mængde af strips og om de var anvendelige til analysen. For hver prøve blev der fremstillet 0,9 % erytrocytsuspensioner af pakkede erytrocytter samt fortyndet med diluent direkte i brønden. En mængde erytrocytsuspension blev overført til Rh-kontrol brønden. Herefter blev Rh-kontrol og testsera afpipetteret til de respektive brønde, hvorefter mikrotiterpladen blev inkuberet. Efter endt inkubation blev mikrotiterpladen centrifugeret og reaktionsstyrken blev aflæst af CCD kamera, for ovenstående metode se bilag 9. Et positivt resultat ses som et eller som flere mindre agglutinater, mens der ved en negativ resultat ikke ses agglutination, se figur 4. Figur 4: Billedet til venstre viser et positivt resultat, mens billedet til højre viser et negativt resultat. Billederne er fra NEO (Immucor). Side 19 af 76

20 Fast fase teknik med IgG-antistoffer på NEO (Immucor) til Lu a og Lu b fænotypebestemmelse Reagenser (Capture LISS, Capture-R Indikatorceller, Rh- kontrol, anti-lu(a) og anti-lu(b) testsera) blev varmet op til stuetemperatur og holdbarhed samt mængde blev kontrolleret. Indikator, der påviser om kittet til Capture-R SELECT mikrotiterplader har været udsat for fugt, blev kontrolleret for farveskrift. Herefter blev blodprøver, reagenser og mikrotiterplader loaded på NEO (Immucor). Mikrotiterpladen blev aflæst af CCD kamera for at kontrollere korrekt mængde af strips samt om de var anvendelige til analysering. Havde stripsene været udsat for fugt kunne der ikke dannes et korrekt monolayer i bunden af brøndene. For at undgå spild og kontaminering af øvrige brønde afpiptteres system liquid solution til hver brønd i Lu a fænotypebestemmelsen. For hver prøve til fænotypebestemmelse af Lu a blev der fremstillet 3,2 % erytrocytsuspensioner af pakkede erytrocytter som blev fortyndet med system liquid solution direkte i brønden. Til fænotypebestemmelse af Lu b blev 4,1 % erytrocytrosuspensioner fremstillet ved samme fremgangsmetode. Ved Lu a fænotypebestemmelsen blev en mængde erytrocytsuspension overført videre til Rh-kontrol-brønden. Mikrotiterpladen blev centrifugeret for at fremme bindingen mellem anti-rbc coated til brønden, og donor erytrocytter (monolayer). Mikrotiterpladen blev efterfølgende vasket for at fjerne overskydende ubundende erytrocytter. For at sikre, at monolayer er korrekt, blev mikrotiterpladen aflæst af CCD kamera. 50 µl LISS, 15 µl Rh-kontrol og 25µl testsera blev efterfølgende afpipetteret til de respektive brønde. Mikrotiterpladen aflæses for at kontrollere at LISS, Rh-kontrol og testsera er afpipetteret til de korrekte brønde og herefter mikrotiterpladen blev inkuberet. Efter endt inkubation blev mikrotiterpladen vasket for at fjerne alt ubundet materiale i brøndene og dernæst aflæst. Efter blev 55 µl indikatorceller afpipetteret til alle brønde, hvorefter centrifugering blev foretaget for at fremme bindingen af indikatorceller til evt. bundne antistoffer. Herefter blev resultatet af reaktionsstyrkerne aflæst i CCD kamera, se bilag 9 for ovenstående metode. Et positivt resultat ses som en sky af indikatorceller som er bundet i brønden, mens et negativt resultat ses som et pellet, se figur 4. Ved endt analysering blev Rh-kontrollerne ved Lu a kontrolleret og godkendt, og evt. fejlmeddelelser blev gennemset. For at Rh-kontrollen er godkendt skal denne være negativ, er den positiv gentages analysen, jf. bilag 6. Side 20 af 76

21 Figur 5: Billedet til venstre viser en positiv reaktion, mens billedet til højre viser en negativ reaktion. Billederne er fra NEO (Immucor). Ved endt analysering blev Rh-kontrollerne kontrolleret og godkendt, og evt. fejlmeddelelser blev gennemset. For at Rh-kontrollen er godkendt skal denne være negativ, er den positiv gentages analysen, jf. bilag 6. Tolkning af resultater på NEO (Immucor) Apparaturet kan afgive svar på fire forskellige måder: ved graduering fra til ++++, ved et billede, score og positiv/negativ. Fra holdbarhedsforsøget blev rådata anvendt i form af den score NEO (Immucor) beregner, mens der til metodesammenligningen blev anvendt reaktionsstyrker gradueret fra til ++++, hvorefter at disse blev omsat til enten positiv, inkonklusiv eller negativ alt efter apparaturets samt afdelingens fastsatte cut-off værdier. Afdelingen accepterer donors fænotype positive ved +++ og ++++, mens NEO (Immucor) s positive cut-off værdi accepterer donors fænotyper positive ved +, jf. bilag 5 og 6. Databehandling Til behandling af rådata i metodesammenligningen blev opstillet en kontigenstabel i 3x3 format, én for hver fænotype, der sammenholder den manuelle teknik overfor automatiseret teknik på NEO (Immucor). I tabellen blev resultaterne inddelt i positive, inkonklusive og negative. For at undersøge om der evt. var en signifikant forskel mellem antallet af inkonklusive resultater for hver metode, blev anvendt en Fishers eksakte test anvendt. Pga. økonomiske årsager var stikprøven ikke stor nok til at kunne lave en χ 2 -test og derfor blev Fishers eksakte test anvendt i stedet for. For at kunne beregne Fishers eksakte test blev resultaterne fra metodesammenligningen konverteret til et 2x2 format, hvor det derfor var antallet af inkonklusive resultater holdt op mod antallet af konklusive resultater. Antallet af konklusive resultater udgøres af accepterede positive og negative resultater. H 0 hypotesen blev opstillet: H 0 -hypotese: Antallet af inkonklusive resultater afhænger ikke af hvilken metode der anvendes. Side 21 af 76

22 H A hypotese: Antallet af inkonklusive resultater afhænger af hvilken metode der anvendes. Fishers eksakte test blev udført vha. det statistiske værktøj på og signifikansniveauet blev valgt til 0,05. Som resultat af denne test fås en p-værdi, der angiver sandsynligheden for at der begås en fejl, hvis H 0 hypotesen forkastes. Ved det anvendte signifikans niveau på 0,05 (α = 0,05) accepteres det, at der er op til 5 % sandsynlighed for at der tages fejl. Er p>0,05 accepteres H 0 hypotesen, men er p<0,05 forkastes H 0 og H A hypotesen accepteres. I figur 3 ses opstillingen til beregning af Fishers eksakte test for inkonklusive prøver på hhv. manuel teknik overfor automatiseret teknik på NEO (Immucor). I Gp 1, Class 1 er indtastet antallet af inkonklusive resultater ved manuel teknik. I Gp 1, Class 2 er indtastet differensen mellem totale antal konklusive prøver og antallet af inkonklusive. I Gp 2, Class 1 er indtastet antallet af inkonklusive resultater på NEO (Immucor) og i Gp 2, Class 2 er indtastet differensen mellem totale antal konklusive prøver og antallet af inkonklusive, se figur 6. Figur 6: Eksempel på beregning af Fishers eksakte test. For resultaterne fra holdbarhedsforsøget blev det undersøgt om de var normalfordelt. Dette blev undersøgt for hver fænotype vha. probit-plots, for hver analyseringsdag ved hhv. 4 o C og stuetemperatur, se bilag 10 for eksempel. Rådata fra holdbarhedsforsøget blev for hver fænotype samt hver temperatur opstillet i xy-plots for, at visualisere forløbet for hver prøve i tidsrummet dag Afdelingens og NEO s (Immucor) positive og negative cut-off værdier blev desuden indtegnet i hvert xy-plot. For at overskueliggøre resultaterne i disse xy-plots er der lavet yderligere to plots, hvor der i det ene fremvises alle de prøver der var accepteret positive ud fra afdelingens cut-off værdi dag 1, mens der i det andet fremvises alle de prøver der var vurderet inkonklusive for både afdelingens og NEO s (Immucor) cut-off dag 1. For at vurderer om der er en signifikant forskel mellem reaktionsstyrkerne og antallet af dage donorblodprøverne opbevares, blev der anvendt Freidman test. H 0 hypotesen blev opstillet: Side 22 af 76

23 H 0 hypotesen: Resultatet af fænotypebestemmelsen er uafhængigt af antal dage blodprøven opbevares. H A hypotese: Resultatet af fænotypebestemmelsen afhænger af antal dage blodprøven opbevares. Signifikansniveauet blev valgt til 0,05. Som resultat af denne test fås en p-værdi der angiver sandsynligheden for at der begås en fejl, hvis H 0 hypotesen forkastes. Ved det anvendte signifikans niveau på 0,05 (α = 0,05) accepteres det, at der er op til 5 % sandsynlighed for at der tages fejl. Er P>0,05 accepteres H 0 hypotesen. Er P<0,05 forkastes H 0 og H A hypotesen accepteres. Friedman test er beregnet i XLSTAT. Pga. clot i prøve nr ved 4 C blev denne ikke medtaget i Friedman testen, da dette værktøj ikke kunne udfører beregningen med manglende data. Side 23 af 76

24 Resultater Metodesammenligning mellem manuel teknik og NEO (Immucor) A 1 Resultaterne fra analysering af 15 donorblodprøver for blodtypeantigenet A 1 med hhv. manuel teknik og automatiseret teknik på NEO (Immucor) ses i tabel 1 og er inddelt i positive, inkonklusive og negative ud fra afdelingens og NEO s (Immucor) positive og negative cut-off værdier, der for denne fænotype er de samme. Af tabel 1 ses det, at ingen af de 10 positive prøver bestemt ved manuel teknik blev bestemt negative på NEO (Immucor). Af de 5 negative prøver bestemt ved manuel teknik blev ingen bestemt positive på NEO (Immucor). Hverken ved manuel teknik eller på NEO (Immucor) er der ved A 1 fænotypebestemmelsen fundet inkonklusive resultater. Inden af metoderne vurderer donorblodprøverne inkonklusive og derfor er Fishers eksakte test ikke relevant at udføre, se bilag 10. Manuelteknik Positiv Inkonklusiv Negativ Total Positiv NEO Inkonklusiv Negativ Total Tabel 1: Kontingenstabel i 3x3 format for fænotypen A 1, angiver antallet af positive, inkonklusive og negative resultater bestemt ved hhv. manuel teknik og automatiseret teknik på NEO (Immucor) inddelt efter afdelingens og NEO s (Immucor) cut-off værdier. Lu a Resultaterne fra analysering af 20 donorblodprøver for blodtypeantigenet Lu a med hhv. manuel teknik og automatiseret teknik på NEO (Immucor) ses i tabel 2 og er inddelt i positive, inkonklusive og negative ud fra afdelingens og NEO s (Immucor) positive og negative cut-off værdier. Ud fra afdelingens cut-off værdier ses det af tabel 2, at der ved manuel teknik er bestemt 13 prøver positive, hvoraf ingen af dem er bestemt negative på NEO (Immucor) og ingen af de 6 prøver bestemt positive på NEO (Immucor), er negative ved manuel teknik. Ud af de 13 positive prøver bestemt ved manuel teknik, blev 8 bestemt inkonklusive på NEO (Immucor). Af 2 prøver bestemt inkonklusive ved manuel teknik blev 1 prøve bestemt inkonklusiv, mens den anden prøve blev bestemt positiv på NEO (Immucor). Ud af 5 negative prøver bestemt ved manuel teknik var 1 prøve Side 24 af 76

25 bestemt inkonklusiv og 4 prøver negative på NEO (Immucor). Ud fra NEO s (Immucor) cut-off værdier, se tabel 2, ses det, at ingen af de 13 positive prøver bestemt ved manuel teknik er bestemt negative på NEO (Immucor) og at ingen af de 12 positive bestemt på NEO (Immucor) er bestemt negative ved manuel teknik. Ud af de 13 positive bestemt ved manuel teknik er 2 prøver bestemt inkonklusive og 11 prøver bestemt positive på NEO (Immucor). Ud af 2 prøver bestemt inkonklusive ved manuel teknik er den ene prøve bestemt positiv og den anden bestemt inkonklusiv på NEO (Immucor). Ud af 5 prøver bestemt negative ved manuel teknik er 4 prøver bestemt negative og 1 prøve bestemt inkonklusiv på NEO (Immucor), se bilag 10. Manuelteknik Positiv Inkonklusiv Negativ Total Positiv 5 (11) 1 (1) 0 (0) 6 (12) NEO Inkonklusiv 8 (2) 1 (1) 1 (1) 10 (4) Negativ 0 (0) 0 (0) 4 (4) 4 (4) Total Tabel 2: Kontingenstabel i 3x3 format for fænotypen Lu a, angiver antallet af positive, inkonklusive og negative resultater fundet ved hhv. manuel teknik og automatiseret teknik på NEO (Immucor) ud fra afdelingens positive og negative cut-off værdier for begge metoder. Tallene i parentes angiver antallet af prøver der er angivet hhv. positive, inkonklusive eller negative sammenholdt med NEO s (Immucor) positive og negative cut-off værdier. Ud fra afdelingens cut-off værdier sammenholdes antallet af inkonklusive og konklusive prøver fra hver metode overfor hinanden i Fishers eksakte test. P-værdien fås til 0,0069. Ved α=0,05 fås at 0,0069<0,05 og dermed forkastes H 0 hypotesen og H A hypotesen accepteres. Ud fra NEO s (Immucor) positive cut-off værdi sammenholdes antallet af inkonklusive og konklusive prøver bestemt ved hhv. manuel teknik overfor automatiseret teknik på NEO (Immucor) med Fishers eksakte test. P-værdien fås til 0,3307,sand. Ved α=0,05 fås at 0,3307>0,05 og H 0 hypotesen accepteres. Lu b Resultaterne fra analysering af 20 donorblodprøver for blodtypeantigenet Lu b med hhv. manuel teknik og automatiseret teknik på NEO (Immucor), ses i tabel 3 og er inddelt i positive, inkonklusive og negative ud fra afdelingens og NEO s (Immucor) positive og negative cut-off værdier. Ud fra afdelingens cut-off værdier ses det af tabel 3, at der ved manuel teknik er bestemt 11 prøver Side 25 af 76

26 positive, hvoraf ingen af dem er bestemt negative på NEO (Immucor) og ingen af de 15 positive prøver bestemt på NEO (Immucor) er bestemt negative ved manuel teknik. Af de 11 positive prøver bestemt ved manuel teknik blev 11 bestemt positive på NEO (Immucor). Ud af 5 inkonklusive prøver bestemt ved manuel teknik blev 1 prøve bestemt inkonklusiv og 4 prøver positive på NEO (Immucor). Ud af 4 prøver negative bestemt ved manuel teknik blev 1 prøve bestemt inkonklusiv og 3 prøver negative på NEO (Immucor). Ud fra NEO s (Immucor) cut-off værdier, ses i tabel 3, at ingen af de 11 positive prøver bestemt ved manuel teknik er bestemt negative på NEO (Immucor), og ingen af de 16 positive prøver bestemt på NEO (Immucor) er bestemt negative ved manuel teknik. Ud af 5 inkonklusive prøver bestemt ved manuel teknik er 5 prøver bestemt positive på NEO (Immucor). Ud af 4 negative prøver bestemt ved manuel teknik er 3 prøve negative og 1 prøve inkonklusiv på NEO (Immucor), se bilag 10. Manuelteknik Positiv Inkonklusiv Negativ Total Positiv 11 (11) 4 (5) 0 (0) 15 (16) NEO Inkonklusiv 0 (0) 1 (0) 1 (1) 2 (1) Negativ 0 (0) 0 (0) 3 (3) 3 (3) Total Tabel 3: Kontingenstabel i 3x3 format for fænotypen Lu b, angiver antallet af positive, inkonklusive og negative resultater fundet ved hhv. manuel teknik og automatiseret teknik på NEO (Immucor) ud fra afdelingens positive og negative cut-off værdier for begge metoder. Tallene i parentes angiver antallet af positive, inkonklusive eller negative inddelt efter NEO s (Immucor) positive og negative cut-off værdier. Én prøve var i ProSang angivet som Lu(b-), men blev ved begge metoder bestemt som Lu(b+) og blev fortsat medtaget. Ud fra afdelingens cut-off værdier sammenholdes antallet af inkonklusive og konklusive prøver bestemt ved hhv. manuel teknik overfor automatiseret teknik på NEO (Immucor) med Fishers eksakte test. P-værdien fås til 0,2037. Ved α=0,05 fås at 0,2037>0,05 og H 0 hypotesen accepteres. Side 26 af 76

27 Reaktionsstyrke, score Camilla Thinggård Jacobsen Bachelorprojekt, Holdbarhedsforsøg A 1 Ved analysering af 5 donorblodprøver med fænotypen A 1 på hhv. dag 1,2, 4, 7, 10 og 14 ved 4 C og stuetemp. på NEO (Immucor) er reaktionsstyrkerne inddelt ud fra afdelingens og NEO s (Immucor) positive og negative cut-off værdier. Hvert prøvenummer har samme farve punkter og kurve i xy-plots ved hhv. 4 C og stuetemp.. A 1 prøver opbevaret ved 4 C Ud fra figur 7 ses, at alle 5 prøver opbevaret ved 4 o C, dag 1-14 bestemmes positive for A 1 ud fra afdelingens og NEO s (Immucor) cut-off Holdbarhedsforsøg over 14 dage på A 1 ved 4 grader Analyseringsdage Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr NEO/ Afd. Positiv cutoff Negativ cutoff Figur 7: xy-plot ud fra holdbarhedsforsøg på prøver med fænotypen A 1 opbevaret ved 4 C. Reaktionsstyrkerne, beregnet som en score på NEO (Immucor), er afsat som funktion af analyseringsdagene. I plottet er indtegnet afdelingens og NEO s (Immucor) krav til positive og negative cut-off værdier A 1 prøver opbevaret ved stuetemperatur Ud fra figur 7 ses, at alle 5 prøver opbevaret ved stuetemp., dag 1-14 bestemmes positive for A 1 ud fra afdelingens og NEO s (Immucor) cut-off. Side 27 af 76

28 Reaktionsstyrke, score Camilla Thinggård Jacobsen Bachelorprojekt, Holdbarhedsforsøg over 14 dage på A 1 ved stuetemp. Prøvenr Prøvenr Prøvenr Analyseringsdage Prøvenr Prøvenr NEO/ Afd. Positiv cutoff Negativ cutoff Figur 8: xy-plot ud fra holdbarhedsforsøg på prøver med fænotypen A 1 opbevaret ved stuetemp.. Reaktionsstyrkerne, beregnet som en score på NEO (Immucor), er afsat som funktion af analyseringsdagene. I grafen er indtegnet afdelingens og NEO s (Immucor) krav til positive og negative cut-off værdier. Friedman testen er undladt, da der ikke ses nogen betydelig ændring af reaktionsstyrkerne over analyseringsdagene for hhv. 4 o C og stuetemp. Yderligere er der ikke foretaget temperatursammenligninger ved xy-plot, da der ikke ses nogen ændring i reaktionsstyrkerne ved begge opbevaringstemperaturer, se figur 7 og 8. Lu a Ud fra xy- plot ses reaktionsstyrkerne ved analysering af 10 donorblodprøver med fænotypen Lu a opbevaret ved hhv. 4 C (figur 9) og stuetemperatur (figur 10) analyseret på dag 1,2, 4, 7, 10 og 14 på NEO (Immucor). Reaktionsstyrkerne er inddelt ud fra afdelingens og NEO s (Immucor) positive og negative cut-off værdier. Hvert prøvenummer har samme farve punkter og kurve i xy-plots ved hhv. 4 C og stuetemp.. Lu a prøver opbevaret ved 4 C På figur 9 ses det af afdelingens cut-off dag 1, at 6 prøver accepteres som positive og 4 prøver som inkonklusive på. Dag 2 accepteres 4 prøver som positive og 6 prøver som inkonklusive. Dag 4 Side 28 af 76

29 accepteres 5 prøver som positive, mens 4 prøver vurderes som inkonklusive og 1 prøve som negativ. Dag 7 accepteres 2 prøver som positive, 7 prøver som inkonklusive og 1 prøve som negativ. Dag 10 accepteres 5 prøver positive, 4 prøver som inkonklusive og 1 prøve som negativ. Dag 14 ses, at 8 prøver er inkonklusive og 2 prøver negative. Af figur 9 ses det af NEO s (Immucor) cut-off værdier dag 1, at 8 prøver accepteres som positive og 2 prøver som inkonklusive. Dag 2 accepteres 9 prøver positive og 1 prøve som inkonklusiv. Dag 4 accepteres 7 prøver som positive, mens 2 prøver vurderes inkonklusive og 1 negativ. Dag 7 accepteres 7 prøver som positive, 2 prøver som inkonklusive og 1 prøve negativ. Dag 10 accepteres 7 prøver som positive, mens 2 prøver vurderes inkonklusive og 1 negativ. Dag 14 accepteres 3 prøver som positive, mens 5 inkonklusive og 2 negative. Hvert prøvenummer har samme farve punkter og kurve for hvert xy-plots ved hhv. 4 C og stuetemp.. Side 29 af 76

30 Figur 9: xy-plots ud fra holdbarhedsforsøg på prøver med fænotypen Lua opbevaret ved 4 C. Reaktionsstyrkerne beregnet som en score på NEO (Immucor) er afsat som funktion af analyseringsdagene. I plottet er indtegnet afdelingens og NEO s (Immucor) krav til positive og negative cut-off værdier. (1) Alle prøver er afbildet, (2) Prøver som ud fra afdelingens cut-off er positive dag 1 er afbildet, (3) Prøver som ud fra afdelingens og NEO s (Immucor) cut-off er vurderet inkonklusive dag 1 er afbildet. Data for analysering af Lu a ved 4 C for alle analyseringsdage sammenholdes i en Friedman test og p-værdien fås til 0,002. Ved α=0,05 ses det, at 0,002< 0,05 og H 0 hypotesen forkastes. Ved derefter at sammenholde analyseringsdagene 1,2,4,7 og 10 fås p-værdien 0,573. Ved α=0,05 fås at 0,573>0,05 og H 0 hypotesen accepteres. Lu a prøver opbevaret ved stuetemperatur Af figur 10 ses det af afdelingens cut-off værdier dag 1, at 5 prøver accepteres som positive og 5 prøver som inkonklusive. Dag 2 accepteres 4 prøver som positive og 6 prøver som inkonklusive. Side 30 af 76

31 Dag 7 accepteres 1 prøve som positiv, 8 prøver som inkonklusive og 1 prøve som negativ. Dag 10 accepteres 3 prøver som positive, mens 5 prøver vurderes inkonklusive og 2 prøver som negative. Dag 14 er 8 prøver vurderes som inkonklusive og 2 prøver negative. Af figur 10 ses det af NEO s (Immucor) cut-off værdier dag 1, at 8 prøver er positive og 2 prøver er inkonklusive. Dag 2 accepteres 9 prøver som positive og 1 prøve vurderes inkonklusiv. Dag 4 accepteres 1 prøve positiv, mens 8 prøver vurderes inkonklusive og 1 prøve som negativ. Dag 7 accepteres 5 prøver som positive, mens 4 prøver vurderes inkonklusive og 1 prøve som negativ. Dag 10 accepteres 5 prøver som positive, mens 3 prøver vurderes inkonklusive og 2 som negativ. Dag 14 accepteres 2 prøver som positive, mens 6 prøver vurderes inkonklusive og 2 som negative. Side 31 af 76

32 Figur 10: xy-plots ud fra holdbarhedsforsøg på prøver med fænotypen Lu a opbevaret ved stuetemp.. Reaktionsstyrkerne, beregnet som en score på NEO (Immucor), er afsat som funktion af analyseringsdagene. I grafen er indtegnet afdelingens og NEO s (Immucor) krav til positive og negative cut-off værdier. (1) Alle prøver er afbildet, (2) Prøver som ud fra afdelingens cut-off er positive dag 1 er afbildet, (3) Prøver som ud fra afdelingens og NEO s (Immucor) cut-off er vurderet inkonklusive dag 1 er afbildet. Side 32 af 76

33 Data for alle analyseringsdage ved analysering af Lu a donorblodprøver opbevaret ved stuetemp. sammenholdes i en Friedman test og p-værdien fås til 0,014. Ved α=0,05 ses det, at 0,014< 0,05 og H 0 hypotesen forkastes hvorved H A hypotesen må accepteres. Når analyseringsdagene 1,2,4,7 og 10 sammenholdes fås p-værdien 0,181. Ved α= 0,05 fås at 0,181>0,05 og H 0 hypotesen accepteres. Reaktionsstyrker sammenholdt ud fra opbevaringstemperatur Af figur 11 ses at de målte reaktionsstyrker ved hhv. 4 o C og stuetemperatur dag 1, 2 og 4 ligger tilnærmelsesvis på den indtegnede identitetslinje med skæring i (0,0). Dag 7 ligger 6 prøver over den indtegnede identitetslinje, mens 1 prøve ligger under. Dag 10 ses at 5 prøver ligger over identitetslinjen, mens 3 prøver ligger under. Dag 14 ligger 6 prøver over identitetslinjen, mens 4 prøver ligger under. Figur 11: xy-plot hvor reaktionsstyrker ved 4 C er sat som funktion af reaktionsstyrker ved stuetemperatur. Plottet viser sammenhængen mellem reaktionsstyrkerne ved Lu a fænotypebestemmelsen på 10 prøver opbevaret hhv. 4 C og stuetemperatur. Der er indtegnet en identitetslinje (x=y) med skæring i (0,0). Side 33 af 76

34 Ud fra xy-plot ses reaktionsstyrkerne ved analysering af 10 donorblodprøver med fænotypen Lu b opbevaret hhv. 4 o C (figur 6) og stuetemperatur (figur 7) analyseret på dag 1,2, 4, 7, 10 og 14 på NEO (Immucor). Reaktionsstyrkerne er inddelt ud fra afdelingens og NEO s (Immucor) positive og negative cut-off værdier. Hvert prøvenummer har samme farve punkter og kurve i samme xy-plots ved hhv. 4 C og stuetemp.. Lu b prøver opbevaret ved 4 C Af figur 12 ses det af afdelingens cut-off værdi dag 1, at 9 prøver accepteres som positive og 1 prøve vurderes inkonklusiv. Dag 2 accepteres 8 prøver positive og 2 prøver vurderes inkonklusive. Dag 4 accepteres 9 prøver positive og 1 prøve vurderes inkonklusiv. Dag 7 udgik prøve nr pga. clot og ved efterfølgende reanalysering var NEO (Immucor) ude af drift. Denne analyseringsdag accepteres 8 prøver som positive og 1 som inkonklusiv. Dag 10 accepteres 9 prøver positive og 1 prøve vurderes inkonklusiv. Dag 14 accepteres 10 prøver positive. Af figur 12 ses det af NEO s (Immucor) cut-off værdier dag 1, 2 og 4, at 10 prøver accepteres positive. Dag 7 accepteres 9 prøver som positive, da prøve nr pga. clot og at NEO (Immucor) og ved efterfølgende reanalysering var NEO (Immucor) ude af drift. Dag 10 og dag 14 accepteres 10 prøver positive. Side 34 af 76

35 Reaktionsstyrke, score Camilla Thinggård Jacobsen Bachelorprojekt, Holdbarhedsforsøg over 14 dage ved på Lu b ved 4 C Analyseringsdage Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Afd. Positiv cut-off NEO positiv cut-off Figur 12: xy-plot ud fra holdbarhedsforsøg på prøver med fænotypen Lu b opbevaret ved 4 C. Reaktionsstyrkerne, beregnet som en score på NEO (Immucor), er afsat som funktion af analyseringsdagene. I plpootet er indtegnet afdelingens og NEO s (Immucor) krav til positive og negative cut-off værdier. Data for alle analyseringsdage ved analysering af Lu b prøver opbevaret ved 4 o C sammenholdes i en Friedman test. Prøve nr er ikke medtaget i beregningerne af Friedman test, da der ikke er data for dag 7. P-værdien fås til 0,874. Ved α=0,05 ses det at 0,874 >0,05 og H 0 hypotesen accepteres. Lu b prøver opbevaret ved stuetemperatur Af figur 13 ses det af afdelingens cut-off værdier dag 1, 2 og 4, at 9 prøver accepteres som positive og 1 inkonklusiv. Dag 7 accepteres 6 prøver positive, mens 4 prøver vurderes inkonklusive. Dag 10 accepteres 7 prøver positive, mens 3 prøver vurderes som inkonklusive. Dag 14 blev pakkede erytrocytter fra prøve nr vasket 2 x med PBS pga. clot. Herefter bestemmes 8 prøver positive og 2 prøver vurderes inkonklusive. Af figur 13 ses det af NEO s (Immucor) cut-off værdier dag 1,2 og 4 at 10 prøver accepteres som positive. Dag 7 og dag 10 accepteres 9 prøver er positive og 1 inkonklusiv. Dag 14 blev pakkede erytrocytter fra prøve nr vasket 2 x med PBS pga. clot, hvorefter at 10 prøver accepteres som positive. Side 35 af 76

36 Reaktionsstyrke, score Camilla Thinggård Jacobsen Bachelorprojekt, Holdbarhedsforsøg over 14 dage på Lu b ved stuetemp Analyseringsdage Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Prøvenr Afd. Positiv cut-off NEO positiv cut-off Negativ cut-off Figur 13: xy-plot ud fra holdbarhedsforsøg på prøver med fænotypen Lu b opbevaret ved stuetemp.. Reaktionsstyrkerne, beregnet som en score på NEO (Immucor), er afsat som funktion af analyseringsdagene. I plottet er indtegnet afdelingens og NEO s (Immucor) krav til positive og negative cut-off værdier. Data for alle analyseringsdage ved analysering af Lu b prøver opbevaret ved stuetemp. sammenholdes i en Freidman test og p-værdien fås til 0,026. Ved α=0,05 ses det, at 0,026< 0,05 og H 0 hypotesen forkastes og derved må H A hypotesen accepteres. Reaktionsstyrker sammenholdt ud fra opbevaringstemperatur Af figur 14 ses det, at de målte reaktionsstyrker ved hhv. 4 o C og stuetemperatur dag 1, 2, 4, 7, 10 og 14 ligeligt fordelt omkring den indtegnede identitetslinje med skæring i (0,0). Side 36 af 76

37 Figur 14: xy-plot hvor reaktionsstyrker ved 4 C er sat som funktion af reaktionsstyrker ved stuetemperatur. Plottet viser sammenhængen mellem reaktionsstyrkerne ved Lu b fænotypebestemmelsen på 10 prøver opbevaret hhv. 4 C og stuetemperatur. Der er indtegnet en identitetslinje (x=y) med skæring i (0,0). Side 37 af 76

38 Diskussion Metodesammenligning og holdbarhed for A 1 Som det fremgår af tabel 1, er NEO (Immucor) og glas teknik enige i fænotypebestemmelsen af A 1 og finder 10/10 positive prøver og 5/5 negative prøver. Der ikke er behov for at prøver skal reanalyseres, da der ikke er inkonklusive resultater. I et studie af Schmidt et al. finder manuel gelteknik og fast fase teknologi på Galileo (Immucor) ligeledes sammenlignelige resultater og det er derfor forventet at NEO (Immucor) og manuel gelteknik er enige [19]. Af figur 7 og 8 fremgår det, at der ikke sker nogen ændring af reaktionsstyrkerne for fænotypen A 1 efter opbevaring i 14 dage ved hhv. 4 C og stuetemp.. Opbevaringstemperaturen har derfor ikke nogen klinisk betydning for fænotypebestemmelse af A 1. Det kan på baggrund af resultaterne konkluderes, at fænotypebestemmelsen af A 1 fremover kan automatiseres på NEO (Immucor) efter opbevaring i 14 dage ved hhv. 4 C og stuetemp.. Producenten af NEO (Immucor) anbefaler at donorblodprøver i EDTA kan opbevares op til 14 dage [7] og derudover beskriver et studie af Vandromme et al. at erytrocytter kan opbevares op til 14 dage før, der begynder at ske ændringer [20]. Det antages på baggrund af dette, at blodtypeantigenerne derfor, på dag 14, endnu ikke er blevet nedbrudt af enzymerne lipase, glycosidase og protease, som frigives fra leukocytter, når disse nedbrydes [16][21]. Det kan derfor forventes at få stærke reaktionsstyrker de første dage og frem til dag 14. Metodesammenligning for Lu a fænotypen Af tabel 2 fremgår det af resultaterne, ud fra afdelingen cut-off værdier, at metoderne er enige om 5/13 positive prøver og 4/4 negative prøver. Ved Fishers eksakte test forkastes H 0 hypotesen og H A hypotesen accepteres, hvilket betyder, at antallet af inkonklusive resultater afhænger af hvilken metode der anvendes. Ved Fishers eksakte test ud fra NEO (Immucor) s positive cut-off værdi ses det at H 0 hypotesen kan accepteres. For at fænotypebestemmelsen af Lu a skal kunne blive automatiseret på NEO (Immucor) kan det på baggrund af resultaterne diskuteres, om afdelingen bør sætte deres cut-off værdi for positive resultater ned, for at få flere prøver accepteret positive for Lu a. For de donor der er heterozygote for Lu a, kan antallet antigener, der udtrykkes på deres erytrocytterne, varierer [8]. Selvom donorernes fænotype er positiv vil de blive vurderet inkonklusiv på NEO (Immucor), pga. de vil få svage reaktioner. Sammenlignet med fænotypebestemmelse for A 1 på NEO (Immucor) er det svære at detektere Lu a -antigenerne, da A 1 -antigenerne agglutinerer hurtigere og giver stærkere agglutinater [2]. Afdelingens cut-off værdi er sat på baggrund af andre fænotypebestemmelser som allerede er valideret på NEO (Immucor) og disse blodtypeantigener har nogle høje reaktionsstyrker [6]. Dog er Side 38 af 76

39 afdelingens positive cut-off værdi for fænotypebestemmelse af K og N sat ned, og disse fænotyper accepteres positive ved ++, jf. bilag 5. Sætter KIA ikke deres cut-off værdi ned, vil KIA ikke finde de svagt positive fænotyper og samtidig vil arbejdsbyrden for afdelingen blive stor, da alle de inkonklusive prøver skal reanalyseres. Den positive cut-off værdi må dog ikke sætte for lavt, da ellers negative fænotyper kan blive ende med at blive vurderet positive. Med hensyn til arbejdsbyrden, vil det på nuværende tidspunkt ikke være mere tidsbesparende at anvende automatiseret fænotypebestemmelse frem for manuel fænotypebestemmelse i LISS Coombs gelkort, da der på NEO (Immucor) er mange prøver der skal reanalyseres. Ved at sætte cut-off værdien for langt ned vil afdelingen risikere at få falsk positive resultater. Tidligere har KIA haft problemer med IgG-antistoffer hos donorblodprøver ældre end en uge. Dette problem blev løst med stærkere testsera, hvor der er en højere koncentration af antistoffer som kan binde til blodtypeantigenerne på donorerytrocytterne som igen binder til indikatorcellerne og derved fås en stærkere reaktion. Det kan evt. være en mulighed for denne fænotype, hvis ikke afdelingen ønsker at sætte deres positive cut-off værdi ned. Det er muligt at der kan forekomme flere agglutinater, som øger scoren for reaktionsstyrken ved, at forlænge inkubationstiden. Holdbarhed for fænotypen Lu a ved 4 C På figur 9 ses, at der er stor forskel på prøvernes reaktionsstyrke de enkelte dage. Reaktionsstyrkerne dag 2 for nogle af prøverne falder fra intervallet (positiv) til en score på omkring 40 (inkonklusiv). En prøves score falder fra 90 (positiv) dag 4 til 50 (inkonklusiv) dag 7 og stiger igen til 87 (positiv) dag 10. Det samme mønster ses at være gentagende for to andre prøver. Variation mellem reaktionsstyrkerne af den enkelte prøve over flere dage kan enten skyldes, at prøverne er heterozygote og derved har færre antigener udtrykt overfladen af erytrocytterne[8], eller en analysevariation. Ved beregning af Friedman test fås p-værdien 0,002, hvor H 0 hypotesen må forkastes og H A hypotesen accepteres, hvilket betyder, at resultaterne af fænotypebestemmelsen afhænger af antal dage blodprøven opbevares. Det fremgår af figur 9, ud fra afdelingens positive cut-off værdi, at alle resultater bliver inkonklusive og negative dag 14. Dette betyder, at fænotyper der i virkeligheden er positive, vil blive bestemt som værende negative og dette kan være farligt for patienten hvis vedkommende har dannet anti-lu a imod Lu a -antigenet, hvorved der kan opstå hæmolytisk transfusionsreaktioner [2]. Det vurderes på baggrund af reaktionsstyrkerne vist i figur 8 på dag 14, at dag 14 undlades i endnu en Friedman test, hvor p-værdien fås til 0,573 og dermed kan H 0 hypotesen accepteres. Dette betyder, at der ses en signifikant forskel, hvor resultaterne af fænotypebestemmelsen afhænger af Side 39 af 76

40 antal dage blodprøven opbevares, mellem dag 10 og 14, det vides dog ikke af hvilken dag den signifikante forskel forekommer. Donorblodprøver kan derfor på nuværende tidspunkt ikke opbevares længere end 10 dage ved 4 C. Det kan formodes at blodtypeantigenerne på dag 14 er ved at blive nedbrudt af enzymer som protease, lipase og glycosidase, som frigives fra leukocytter, når disse nedbrydes [14][15]. Et stærkere testsera kunne igen være en løsning på problemet, da en større koncentration af antistoffer kan binde til flere erytrocytter og derved igen binde flere indikatorceller, hvorved scoren for reaktionsstyrken bliver større. Ved at sætte afdelingen positive cut-off værdi ned, vil det formentlig ikke ændre meget på antallet af positive fænotyper dag 14, da scoren for reaktionsstyrkerne ligger fra omkring 65 (inkonklusiv ud fra afdelingens positive cut-off værdi) og falder helt ned til omkring 15 (negativ). Holdbarhed for fænotypen Lu a ved stuetemperatur Af figur 10 ses fire positive prøver dag 1 og 2 som falder fra en score på omkring (positiv) til en score på omkring 20 (inkonklusiv). De prøver der er bestemt inkonklusiv dag 1 og 2 har en score der varierer meget, men stadig inden for afdelingens inkonklusive område. En prøves score dag 2 var på 43 (inkonklusiv), hvor den dag 4 og 7 steg til 83 (positiv) og steg igen til 90 (positiv) på dag 10, hvilket kan skyldes analysevariation. For at gøre reaktionsstyrkerne højere kan ligeledes anvendes et stærkere testsera for de prøver der er opbevaret ved stuetemp., så der på donorerytrocytterne kan bindes mere antistof, som igen kan binde flere indikatorceller, hvorved reaktionsstyrken vil blive højere. I Friedman testen, fås p-værdien til 0,014, hvor H 0 hypotesen derfor må forkastes og H A hypotesen accepteres, hvilket betyder, at resultaterne af fænotypebestemmelsen afhænger af antal dage blodprøven opbevares. Som det ses af figur 10, ligger alle resultater i det inkonklusive eller negative område ud fra afdelingens cut-off på dag 14. Dette betyder, at fænotyper der i virkeligheden er positive, vil blive bestemt som værende negative og dette kan være farligt for patienten hvis vedkommende har dannet anti-lu a imod Lu a -antigenet, hvorved der kan opstå hæmolytisk transfusionsreaktioner [2]. For at undersøge om der på dag 14 forekommer en signifikant forskel undlades denne dag i en Friedman test, hvor p-værdien fås til 0,181. H 0 hypotesen kan herved accepteres. Dette betyder, at der ses en signifikant forskel, hvor resultaterne af fænotypebestemmelsen afhænger af antal dage blodprøven opbevares, mellem dag 10 og 14. Det vides dog ikke af hvilken dag den signifikante forskel forekommer. Det kan konkluderes ud fra p-værdien, hvor dag 14 er undladt, og ud fra figur Side 40 af 76

41 11 f, hvor prøverne ligger tilfældigt på begge sider af identitetslinjen, at donorblodprøverne ikke kan opbevares længere end 10 dage ved stuetemp. Som det også fremgår af figur 10, er reaktionsstyrkerne på dag 1, 2 og 4 næsten lig hinanden, dvs. x=y, hvor det på dag 7 og 10 kan ses, at prøverne ligger over identitetslinjen (x=y). Det fremgår derfor, at det har en betydning for blodtypeantigenerne at de bliver opbevaret ved 4 C, hvor de har en længere holdbarhed frem for ved opbevaring ved stuetemp., da erytrocytter der opbevares ved stuetemp metaboliserer 10 gange hurtigere end erytrocytter opbevaret ved 4 C [16]. Det kan formodes at blodtypeantigenerne på dag 14, er ved at blive nedbrudt af enzymerne protease, lipase og glycosidase, som frigivet fra leukocytter, når disse nedbrydes, da et studie af Hess et al. også bekræfter dette [14][15]. Metodesammenligning for fænotypen Lu b Af tabel 3 fremgår det ud fra afdelingens positive cut-off værdi, at NEO (Immucor) og manuel teknik, søjleagglutinationsteknik i LISS Coombs gelkort, detekterer 11/15 positive prøver og 3/3 negative prøver. Den manuelle teknik vurderer fire prøver inkonklusive ud fra afdelingens positive cut-off værdi, hvor NEO (Immucor) accepterer disse som positive med +++ og En af de homozygote prøver havde en bekræftet fænotype Lu(a+ b-), men blev bestemt til Lu(a+ b+) på NEO (Immucor) med en graduering på ++ og for den manuelle teknik en graduering på +. Det kan på baggrund af disse resultater diskuteres om NEO (Immucor) er mere sensitiv end den teknik der tidligere er blevet anvendt til fænotypebestemmelse af denne prøve. Resultaterne fra NEO (Immucor), ved fænotypebestemmelse af Lu b, er generelt et + stærkere end resultaterne fra den manuelle teknik, se bilag 10, og samtidig finder NEO (Immucor) en Lu(a+ b-) donor til at være Lu(a+ b+). Årsagen til dette er, at der muligvis anvendes et stærkere testsera på NEO (Immucor) end der gøres ved manuel søjleagglutinationsteknik i LISS Coombs gelkort. KIA kan uden problemer flytte fænotypebestemmelsen af Lu b til NEO (Immucor). Afdelingen behøver ikke sætte deres positive cut-off værdi ned eller anskaffe stærkere testsera, da reaktionsstyrkerne generelt er høje, jf. bilag 10. Som det ligeledes kan være svært at detektere Lu a - antigener, kan det også være svært at detektere Lu b -antigener, da disse også kan varierer i styrke i mellem erytrocytterne [8]. Holdbarhed for fænotypen Lu b ved 4 C På figur 12 fremgår det, at prøvernes reaktionsstyrke ligger over afdelingens cut-off værdi alle analyseringsdage, bortset fra én prøve som bestemmes til at være inkonklusiv. Én prøve som bestemmes positiv dag 1, vurderes inkonklusiv dag 2 og dag 4 bliver denne positiv igen og forbliver Side 41 af 76

42 positiv. Variationen kan skyldes en analysevariation og denne prøve vil i rutinen blive reanalyseret og har derfor ingen klinisk betydning. Scoren for reaktionsstyrkerne for alle prøver ligger generelt mellem 80 og 100 (positive) for alle analyseringsdage, hvilket betyder, at donorblodprøverne har en holdbarhed i 14 dage ved 4 C, som producenten af NEO (Immucor) lover [7]. Under opbevaring ved 4 C i 14 dage når blodtypeantigenerne givetvis ikke at blive nedbrudt af enzymer, som protease, lipase og glycosidase der frigives fra leukocytter når disse nedbrydes [16][21]. Resultatet er forventet, da erytrocytterne forventes at kan opbevares i 14 dage ved 4 C. Sammenlignes resultaterne for fænotypebestemmelse af Lu a og Lu b på dag 14, burde Lu a -antigenerne også kunne opbevares i 14 dage ved 4 C. Men dette er ikke tilfældet og det kan derfor formodes, at der anvendes stærkere testsera til fænotypebestemmelse af Lu b end til fænotypebestemmelse af Lu a. I Friedman testen forkastes H 0 hypotesen og H A hypotesen accepteres, hvilket vil sige, at der er en signifikant forskel mellem analysedagene, som betyder, at resultaterne for fænotypebestemmelsen afhænger af antal dage blodprøven opbevares, mellem dag 10 og 14. Det vides dog ikke af hvilken dag den signifikante forskel forekommer. Denne signifikante forskel har ingen klinisk relevans, da analysesvarene ikke ændres. Figur 14 viser, at prøvernes reaktionsstyrker er en anelse højere ved 4 C end ved stuetemp., hvilket også var forventet ud fra studierne af Hess et al. Den ene prøve der vurderes inkonklusiv dag 1-10 accepteres positiv dag 14, hvilket er uforklarligt, men kan eventuelt skyldes analysevariation, da dens score ellers er inden for 40 til omkring 55. Ved stuetemp. forbliver denne prøve inkonklusiv dag 14, se figur 12. Grunden til at denne prøve vurderes inkonklusiv, kan givetvis være fordi at der er udtrykt færre blodtypeantigener på overfladen af donorerytrocytterne i denne prøve [8]. Holdbarhed for fænotypen Lu b ved stuetemperatur Det kan ud fra figur 12 og 13 ses, at reaktionsstyrkerne for prøverne variere mindre hos de prøver der er opbevaret ved 4 C frem for de prøver der er opbevaret ved stuetemp., hvor reaktionsstyrkerne ses at ligge mere spredt. Dag 7 bestemmes tre prøver inkonklusive, hvoraf to af prøverne forbliver inkonklusive på dag 10, men bliver igen accepteret som positiv på dag 14 og denne variation kan skyldes analysevariation. De tre prøver vil KIA, i rutinen, reanalysere og har derfor ingen klinisk betydning. Blev prøverne ved med at forblive inkonklusive ville det få en klinisk betydning, da det herved ikke ville kunne vurderes om fænotypen er positiv. Prøvenr som havde været opbevaret ved stuetemp. kunne på dag 14 ikke analyseres på grund af clot. Prøvens pakkede erytrocytter blev ifølge forskriften vasket med to gange med PBS, jf. bilag 8, hvorefter den blev analyseret. Ifølge forskriften burde alle prøver have været vasket efter Side 42 af 76

43 dag 7, men dette er ikke blevet udført. Det kan derfor diskuteres om det er nødvendigt at vaske alle prøver for at opnå valide resultater, da det fremgår af figur 13, at den prøve der blev vasket dag 14, har samme reaktionsstyrke som tidligere er målt. Hvis resultaterne er valide uden at de pakkede erytrocytter er blevet vasket, kan dette spare afdelingens personale for at udfører dette for prøver ældre end 7 dage. Det fremgår af figur 13, at variationen af reaktionsstyrkerne påvirkes meget lidt af opbevaringstemperaturen. Opbevaringstemperaturen for fænotypebestemmelsen af Lu b ikke har nogen klinisk betydning, da der ikke er nogle prøver som har været accepteres som positiv som falder i reaktionsstyrke og bliver accepteret som negativ. I Friedman testen må H 0 hypotesen forkastes og H A hypotesen accepteres, hvor der derfor er en signifikant forskel mellem analyseringsdagene. Dette betyder, at resultaterne for fænotypebestemmelsen afhænger af antal dage blodprøven opbevares, mellem dag 10 og 14. Dog vides det ikke af hvilken dag mellem dag 10 og 14 at den signifikante forskel forekommer. Den signifikante forskel har dog ingen betydning, da der ikke ses at være en klinisk betydning, da resultaterne ikke ændre analysesvar. Som det forventes på baggrund af studierne af Hess et al. og Vandromme et al. er blodtypeantigenerne ikke nedbrudt ved hverken 4 C eller stuetemp. Som producenten af NEO (Immucor) lover, kan KIA opbevare donorblodprøver i 14 dage ved 4 C [7]. Yderligere kan donorblodprøverne også opbevares i 14 dage ved stuetemp. Fordele og ulemper ved NEO(Immucor) vs. manuelle teknikker Ved manuel fænotypebestemme af A 1 ved glasteknik kan der under aflæsning forekomme fejl, da er chance for, at agglutinaterne rystes i stykker. Samtidig foregår resultataflæsning for både glasteknik og søjleagglutinationsteknik subjektivt og der kan derfor være forskel på hvordan f.eks. en erfaren og uerfaren bioanalytiker aflæser. Ved subjektiv aflæsning er der derfor en kilde til variation. Der er flere fordele ved at få automatiseret fænotypebestemmelserne, hvilket er relevant for bioanalytikerprofessionen. Den ene fordel er at NEO (Immucor) er tidsbesparende, da den hurtigere end de manuelle teknikker og samtidig kan der analyseres mange flere prøver på én gang. En anden fordel ved at få automatiseret fænotypebestemmelserne på NEO (Immucor) er, at resultater overføres automatisk til ProSang, så der ikke forekommer fejl i resultaterne ved indtastning af disse. Analysemetoden har været anvendt i årtier og sikre derfor at analysemetoden er valid [7]. Resultaterne fra NEO (Immucor) kan ikke sammenlignes direkte med resultaterne fra glasteknik og søjleagglutinationsteknik, da aflæsningen ikke foregår ens. NEO (Immucor) aflæser med CCD kamera og vurderer med en score om ud fra fastlagte cut-off værdier om prøverne vurderes positive, Side 43 af 76

44 inkonklusive eller negative, mens resultatet ved aflæses subjektivt for glasteknik og søjleagglutinationsteknik. Ud fra det antal prøver der blev brugt til metodesammenligningen, var det ikke mere tidsbesparende at anvende NEO (Immucor) frem for at udfører fænotypebestemmelserne manuelt, men ved større antal prøver vil det være mere tidsbesparende at anvende NEO (Immucor), da den samtidig kan have flere fænotypebestemmelser i gang på samme tid. Ved fænotypebestemmelse på NEO (Immucor) kan bioanalytikeren have hænderne fri til at udfører andet arbejde, mens NEO (Immucor) automatisk analysere og aflæser prøverne. Modsat skal bioanalytikeren hele tiden skal udfører alle trin ved de manuelle teknikker, hvilket f.eks. kunne være afpippettering af prøverne, inkubation af widalglas eller gelkort, centrifugere og aflæse. Forsøgsdesign En artikel af Schoenfeld et al. beskriver valideringen af en FREELYS Nano system som skal anvendes til blodtypebestemmelse af AB0, Rh-fænotypebestemmelse og Kell (K) fænotypebestemmelse. I studiet blev der anvendt 304 prøver til valideringen for at kunne beregne analysens sensitivitet og specificitet. Antallet af prøver (stikprøven) til metodevalideringen af NEO (Immucor) burde ved sammenligningen af artiklen og KIA s valideringsrapport for NEO (Immucor), hvor der blev brugt over 100 prøver til validering af blodtyperne AB0, have været større for, at kunne bruge stikprøven til statistiske beregninger og samtidig gøre resultaterne mere valide [6][13]. For resultaterne er det undersøgt om disse er normalfordelte for at kunne udføre statistiske beregner, som en tosidet ANOVA uden gentagelser, til at undersøge om det er en signifikant forskel mellem analyseringsdagene i holdbarhedsforsøget. En tosidet ANOVA uden gentagelser er en stærkere analyse end Friedman testen, men stikprøven er ikke stor nok til at anvende ANOVA og samtidig var resultaterne ikke normalfordelte. En Frieman test kan anvendes til data som ikke er normalfordelt og derfor er denne test blevet anvendt [22]. Det har pga. økonomiske omkostninger ikke kunne lade sig gøre, men stikprøvens størrelse kan forsvares i forhold til, at resultaterne viser det KIA gerne ville have undersøgt, nemlig om NEO (Immucor) og de manuelle teknikker, glasteknik og søjleagglutinationsteknik finder frem til samme resultater. Der er også indirekte foretaget dobbeltbestemmelser i forbindelse med holdbarhedsforsøget, da den samme prøve på dag 1 er bestemt to gange, én gang for hver opbevaringstemperatur. For de prøver der har været opbevaret ved 4 C, har temperaturen ikke nået at have en effekt på erytrocytterne, da prøverne kun har stået på køl to-tre timer før analysering på NEO (Immucor). Det fremgår af figur 7,8,9,10,12 og 13 over holdbarhedsforsøget, at reaktionsstyrkerne for samme prøve der er opbevaret ved hhv. 4 C Side 44 af 76

45 og stuetemp. ligger inden for de samme cut-off værdier. Den variationen der er mellem reaktionsstyrkerne på dag 1 kan skyldes en analysevariation. Producenten af NEO (Immucor) nævner ingen steder noget om analysevariation. Konklusion Det kan på baggrund af resultaterne fra metodesammenligningen mellem NEO (Immucor) og manuel glasteknik til fænotypebestemmelse af A 1 konkluderes, at metoderne når frem til samme resultater og fænotypebestemmelsen kan derved overføres fra manuel glasteknik til automatiseret fænotypebestemmelse på NEO (Immucor). Holdbarheden på donorblodprøver til fænotypebestemmelse af A 1 opfylder afdelingens ønske om en holdbarhed på 14 dage ved opbevaring i 4 C. Det kan konkluderes på baggrund af resultaterne fra metodesammenligningen mellem NEO (Immucor) og manuel søjleagglutinationsteknik til fænotypebestemmelse af Lu a, at ud fra afdelingens positive cut-off værdi vil arbejdsbyrden blive større ved at automatiserer fænotypebestemmelsen på NEO (Immucor), da mange prøver bestemmes inkonklusive og derfor skal reanalyseres. En mulighed for at få fænotypebestemmelsen kan blive automatiseret på NEO (Immucor) er, at KIA sætter deres positive cut-off værdi ned eller anskaffer et stærkere testsera for at få stærkere reaktionsstyrker og derved få flere prøver accepteret positive. Donorblodprøver til fænotypebestemmelse af Lu a har på nuværende tidspunkt ikke en holdbarhed i 14 dage når de opbevares ved 4 C, da der er en signifikant forskel eller dag 10. Det kan på baggrund af resultaterne fra metodesammenligningen mellem NEO (Immucor) og manuel søjleagglutinationsteknik til fænotypebestemmelse af Lu b konkluderes, at NEO (Immucor) er mere sensitiv, da den finder flere donorblodprøver positive frem for den manuelle teknik og fænotypebestemmelsen kan derfor automatiseres på NEO (Immucor). Holdbarheden på donorblodprøver til fænotypebestemmelse af Lu b opfylder afdelingens ønske om en holdbarhed på 14 dage ved opbevaring i 4 C. Side 45 af 76

46 Perspektivering Hvis jeg fik en mulighed for at udfører projektet igen, ville jeg udføre fænotypebestemmelse for Lu a, hvor jeg vil analysere denne fænotype flere gange på samme donorblodprøve for, at se om reaktionsstyrkerne (analysesvarene) forbliver de samme eller om sker analysevariation, som kan have klinisk betydning for resultatet af fænotypebestemmelsen. Den kliniske betydning er hvor fænotypen f.eks. starter med at være positiv, men ved efterfølgende analysering bestemmes til at være negativ. Ved at analysere prøverne flere gange undersøges det ligeledes om de prøver der er bestemt inkonklusive kan bestemmelses ved efterfølgende reanalysering. I dag er stort set alle gener for de humane blodtypesystemer kortlagt og derved kan individers fænotype bestemmes ud fra deres DNA [23]. KIA kan i fremtiden anvende molekylelærbiologiske metoder, som polymerase chain reaction (PCR)-baserede metoder, til genotypebestemmelse af hvilke antigener donor og patienter har på overfladen af deres erytrocytter [2][23]. Det DNA der anvendes til molekylærbiologiske metoder er hyppigst fra ekstraheret fra celler der ikke udtrykker blodtypeantigenet på membranoverfladen, dvs. f.eks. leukocytter [24]. Ved genotypebestemmelse kan de donorer der har en svag blodtype, dvs. at donors alleller koder for et svagt antigen, nemmere bestemmes i forhold til bestemmelse ved serologiske analyser [24]. Det kan yderligere også bestemmes om donors fænotype er homo- eller heterozygot [24]. De donorblodprøver der bestemmes inkonklusive på NEO (Immucor) kan med fordel bestemmes vha. af en genotypebestemmelse frem for at prøverne skal reanalyseres flere gange og derved sikre, at fænotypen ikke bliver falsk negativ, hvilket kan fører et lavere antal af donorer som er antigennegative. Genotypebestemmelse er en dyre analyse end serologiske analyser, men der kan analyseres flere prøver ad gangen og udvikling indenfor områder har gjort at analyseringstiden er inden for en acceptabel tidsramme [2][23]. Af hensyn til økonomi er det ikke relevant at lave en genotypebestemmelse på alle donorblodprøver, da det vil betyde, at blodportionerne vil blive dyre, men i stedet kun udfører det på de donorblodprøver som bestemmes inkonklusive på NEO (Immucor). Samtidig kan det være en ulempe kun at genotypebestemme donor, hvis donorerytrocytterne ikke udtrykker de blodtypeantigener som donor har anlæg for, og dette vil også betyde færre antigen-negative donorer [23]. Side 46 af 76

47 Litteraturliste: 1. Sand O.; Menneskets anatomi og fysiologi, 2. udgave, Gad, Kbh, Daniels G., Bromilow I.; Essential Guide to Blood Groups. John Wiley & Sons; Reid M. E., Lomas-Francis C. and Olsson M. L., The Blood Group Antigen Factsbook, 3.rd edition, 2012, 31-51; INFONET Region Syddanmark Vejledning til metodevalidering Lokaliseret den kl på 5. Dansk Selskab for Klinisk Immunologi; Transfusionsmedicinske standarder version 3.5; 2014 Lokaliseret på 6. Pedersen M. G., Lillevang S. T.; Valideringsrapport, resultater og konklusion - Fænotypebestemmelse, svag RhD screening, svag RhD supplering og donorkontroltypebestemmelse på NEO Immucor Gamma. Capture-R Select - Solid Phase System or the Immobilization of Human Erythrocytes. Immucor Gamma; 8. Daniels G.; Human Blood Groups. John Wiley & Sons; McCullough J.; Transfusion Medicine. John Wiley & Sons; p. 10. Pedersen J. S., Oliveira C. L. P., Lammie D., Wess T., Mohandas N.,et al.; The Laminin 511/521 binding site on the Lutheran blood group glycoprotein is located at the flexible junction of Ig domains 2 and 3; July 2007;American Society of Hematology 11. Klein H. G. and Anstee D. J.; Mollison s blood transfusion in clinical medicine; 12 th edition; Poole J., Daniels G.; Blood group antibodies and their significance in transfusion medicine. Transfus Med Rev jan; 21(1): Sparrow RL, Healey G, Patton KA, Veale MF. Red blood cell age determines the impact of storage and leukocyte burden on cell adhesion molecules, glycophorin A and the release of annexin V. Transfus Apher Sci Off J World Apher Assoc Off J Eur Soc Haemapheresis feb; 34(1): Hess J. R.; Red cell storage; Journal Proteomics jan;3;73(3): Lokaliseret den kl på Hess J. R.; Red cell changes during storage; Transfus Apher Sci. August 2010;43(1):51-9 Lokaliseret den kl på Side 47 af 76

48 16. Hess J. R.; Measures of stored red blood cell; Vox Sanguinis The International Journal of Transfusion Medicine; 2014; Review 17. Torreggianai, L.; Blodtypeserologiske metoder. 2 udgave. Odontologisk Forlag; 2008; side Jensen, T.B.. Erytrocytserologiske teknikker og metoder. 1. udgave. Bioanalytikeruddannelsen Metropol Schmidt A. M., Bendix B. J., Jacob E. K., Bryant S. C. and Stubbs J. R.; Single-center comparison of gel mircocolumn and solid-phase methods for antibody screening; Immunohematology; 2013; vol. 29, nr. 3, side Lokaliseret den kl på _3_05reader.pdf#page=5 20. Vandromme M.J., McGwin G.,and Weinberg J. A.; Blood transfusion in the critically ill: does storage age matter?; Scandinavian Journal of Trauma, Resuscitation and Emergency Medicine; 2009, 17: Bagnis C.; Silencing and overexpression of human blood group antigens in transfusion: Paving theway for the next steps, Blood Rev; 2014 Lokaliseret den på S X main.pdf?_tid= e e4-a34f aab0f6b&acdnat= _079df469f4ee8f350b760a431dc Lærd Statistics; Friedman Test in SPSS Lokaliseret den på Reid M. E. and Denomme G. A.; DNA-Based Methods in the Immunohematology Reference Laboratory; Transfus Apher Sci. (Feb) 2011; 44(1): Lokaliseret den kl på Reid M. E.; Transfusion in the age of molecular diagnostics; American Society of Hematology; (Jan) 2009; vol. 2009; nr. 1, side Side 48 af 76

49 Bilag 1 Indlægsseddel for Anti-A1 Lectin Side 49 af 76

50 Side 50 af 76

51 Bilag 2 - Aflæsning: Graduering af agglutination i søjleagglutinationsteknik Side 51 af 76

52 Aflæsning: Graduering af agglutination i glasteknik Side 52 af 76

53 Bilag 3 Indlægsseddel for Rh-Hr Control til NEO (Immucor) Side 53 af 76

54 Side 54 af 76

55 Bilag 4 NEO (Immucor) cut-off værdier til fænotypebestemmelse af A 1, Lu a og Lu b Figur 15: NEO (Immucor) cut-off værdier til fænotypebestemmelse af A 1 Figur 16: NEO (Immucor) cut-off værdier til fænotypebestemmelse af Lu a Side 55 af 76

56 Figur 17: NEO (Immucor) cut-off værdier til fænotypebestemmelse af Lu b Side 56 af 76

57 Bilag 5 - NEO (Immucor), Konklusion for fænotypebestemmelser Side 57 af 76

58 Bilag 6 Forskrifter for manuelle teknikker KIA s forskrift for manuel fænotypebestemmelse for A 1 ved glasteknik: KIA s forskrift for manuel fænotypebestemmelse for Lu a og Lu b ved søjleagglutinationsteknik: Side 58 af 76

59 Bilag 7 - Konklusion for manuelle fænotypebestemmelser Kvalitetskontroller Reaktion med antigenpositive testerytrocytter skal være ³ ++ Reaktion med antigennegative testerytrocytter skal være - Patient / donor Reaktion med testsera Konklusion ³ ++ Positiv fænotype < ++ Fænotype gentages. Hvis ³ + konkluderes som positiv fænotype Mixed field (MF) - Negativ fænotype Fænotype kan ikke konkluderes. Undersøg om patienten er transfunderet med antigenpositiv erytrocytsuspension inden for de sidste 3 måneder. Side 59 af 76

60 Bilag 8 - Uddrag af NEO s (Immucor) forskrift Vask af donorerytrocytter: IgG fænotyper Vare EDTA eller CPD-A blodprøve (centrifugeres hvis de ikke har været opbevaret opretstående inden analysering) På bloddonorer skal der anvendes EDTA blodprøver (flag 10) for at kunne overføre til ProSang. Mængde pr. enhed Antal pr. enhed Blodprøver til IgG analyser skal helst være under en uge gamle. Er det nødvendigt at udføre IgG fænotypebestemmelse på ældre prøver, kan man gøre det på pakkede erytrocytter der forinden er vaskede to gange. Mikrotiterplade, select 12 profiler/plade anti-fy, Fy, Jk, Jk, S, s 5 ml 115 fænotyper/flaske anti- 2 ml 10 ml 40 fænotyper/flaske 200 fænotyper/ suspensionsglas LISS 11,5 ml 2 selectplader/flaske Indikatorceller 11,5 ml 2 selectplader/flaske Label med stegkode til anti-kpa og Wra: aktuelt lot nr. Vær opmærksom på at når der skiftes lot. nummer skal det nye lot nummer registreres på Neo af superbrugerne eller afsnitsansvarlige afdelingsbioanalytikere. Vær opmærksom på at der kun kan være ét igangværende lot nummer på Neo. Side 60 af 76

61 Bilag 9 Flowcharts over fremgangsmetode til fænotypebestemmelse på NEO (Immucor) Hænagglutinationsteknik på NEO (Immucor) med IgM-antistoffer til fænotypebestemmelse af A Aflæsning af mikrotiterpladen med CCD kamera Afpipettering af 320 µl Galileo Diluent + 3 µl pakkede erytrocytter som blandes. Ved sidste blanding opsuges 270 µl og overfører 53 µl fortynding til Rh-kontrol brønd. 3 Afpipettering af 10 µl Rh- kontrol reagens Afpipettering af 10 µl Anti- A1 Lectin testsera 4 Inkubering af mikrotiterpladen i 300 sek (5 min) 5 Centrifugering af mikrotiterpladen i 60 sek. ved 80 g + i 60 sek. kraftig rystning + 10 sek. ved 15 g 6 Resultatet aflæses vha. CCD kamera Side 61 af 76

62 Fast fase teknik på NEO (Immucor) med IgG-antistoffer til fænotypebestemmelse af Lu a og Lu b 1 Aflæsning af mikrotiterpladen med CCD kamera 2 Afpipettering af 50 µl system liquid til fortynding µl system liquid+ 5 µl erytocytter som blandes Ved sidste blanding opsuges 79 µl og 76 µl overføres til brønd til Rh-kontrol 3 Mikrotiterpladen centrifugeres i 60 sek. ved 150 g + 60 sek ved 500 g 5 Vask af mikrotiterpladen 6 Aflæsning af mikrotiterpladen vha. CCD kamera (monolayer) 7 Apipettering 15 µl Rh-kontrol reagens Afpipettering 25 µl anti-lu(a) testsera Afpipettering 50 µl LISS 8 Aflæsning af mikrotiterpladen vha. CCD kamera (LISS farveskift) 9 Inkubering ved 39 C i 1200 sek (20 min.) 10 Vask 11 Aflæsning af mikrotiterpladen vha. CCD kamera 12 Afpipettering af 55µl Capture- R indikatorceller 13 Mikrotiterpladen centrifugeres i 90 sek. ved 600 g 14 Aflæsning af resultater vha. CDD kamera Figur 18: Flowchart over fænotypebestemmelsen for Lu a på NEO (Immucor) Side 62 af 76

63 1 Aflæsning af mikrotiterpladen med CCD kamera 2 Afpipettering af 70 µl system liquid + 3 µl pakkede erytrocytter som blandes. 3 Mikrotiterpladen centrifugeres i 60 sek. ved 150 g + 60 sek ved 500 g 4 Vask af mikrotiterpladen 5 Aflæsning af mikrotiterpladen vha. CCD kamera (monolayer) 6 Afpipettering 25 µl anti-lu(b) testsera Afpipettering 50 µl LISS 7 Aflæsning af mikrotiterpladen vha. CCD kamera (LISS farveskift) 8 Inkubering ved 39 C i 900 sek (15 min.) 9 Vask 10 Aflæsning af mikrotiterpladen vha. CCD kamera 11 Afpipettering af 55µl Capture- R indikatorceller 12 Mikrotiterpladen centrifugeres i 90 sek. ved 600 g 13 Aflæsning af resultater vha. CCD kamera Figur 19: Flowchart over fænotypebestemmelsen for Lub på NEO (Immucor) Side 63 af 76

64 Bilag 10 Databehandling af rådata Fishers Eksakte test- Metodesammenligning Lu a Ud fra afdelingens cut-off værdier: Ud fra NEO s (Immucor) cut-off værdier: Side 64 af 76

65 N(0,1)-Fraktil Camilla Thinggård Jacobsen Bachelorprojekt, Lu b Ud fra afdelingens cut-off værdier Undersøgelse af Normalfordeling - Holdbarhedsforsøget Rang Dag 1 4 C Sandsynlighed N(0,1)- Fraktil , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,5 1 0,5 Probit plot dag 1 ved 4 C for Lu a R² = 0, ,5-1 -1, Målinger Serie1 Lineær (Serie1) Side 65 af 76

66 N(0,1)- fraktil Camilla Thinggård Jacobsen Bachelorprojekt, Dag 4 rang sandsynlighed fraktil ,1-1, ,2-0, ,5 0,35-0, ,5 0,35-0, ,5 0,55 0, ,5 0,55 0, ,8 0, ,8 0, ,8 0, I følgende undersøgelse er prøve nr taget ud da denne prøve har langt lavere reaktionsstyrker gennem hele forløbet. 1,5 1 0,5 Probit plot dag 4 ved 4 C for Lu b R² = 0, ,5-1 -1, Målinger Serie1 Lineær (Serie1) Side 66 af 76

67 Friedman test på Lu a prøver opbevaret ved 4 C, hvor dag 1,2,4,7,10 og 14 sammenholdes Side 67 af 76

68 Friedman test på Lu a prøver opbevaret ved 4 C, hvor dag 1,2,4,7 og 10 sammenholdes Side 68 af 76

69 Friedman test på Lu a prøver opbevaret ved stuetemperatur, hvor dag 1,2,4,7,10 og 14 sammenholdes Side 69 af 76

70 Friedman test på Lu a prøver opbevaret ved stuetemperatur, hvor dag 1,2,4,7 og 10 sammenholdes Side 70 af 76

71 Friedman test på Lu b prøver opbevaret ved 4 C, hvor dag 1,2,4,7, 10 og 14 sammenholdes Side 71 af 76

72 Friedman test på Lu b prøver opbevaret ved stuetemperatur, hvor dag 1,2,4,7, 10 og 14 sammenholdes Side 72 af 76

Validering af A1, Lu a og Lu b fænotypebestemmelse på NEO (Immucor) ved metodesammenligning og holdbarhedsforsøg

Validering af A1, Lu a og Lu b fænotypebestemmelse på NEO (Immucor) ved metodesammenligning og holdbarhedsforsøg Professionsbachelorprojekt, University College Lillebælt Efteråret 2014 Validering af A1, Lu a og Lu b fænotypebestemmelse på NEO (Immucor) ved metodesammenligning og holdbarhedsforsøg Udført af: Sandra

Læs mere

Bachelorprojekt Andelen af højtitret trombocytportioner ved anvendelsen af EU - Rådets anbefaling. Indledning... 3. Formål... 3. Mål...

Bachelorprojekt Andelen af højtitret trombocytportioner ved anvendelsen af EU - Rådets anbefaling. Indledning... 3. Formål... 3. Mål... Indholdsfortegnelse Indledning... 3 Formål... 3 Mål... 4 Problemformulering:... 4 Begrebsdefinitioner... 4 Teori... 5 HTR... 5 Trombocytter... 6 AB0 antistoffer... 7 Saltvands teknik... 8 Glas- /Mikrotiterpladermetoden...

Læs mere

Comparison of homozygous and heterozygous erythrocytes suspensions on titration of irregular antibodies and during storage at 4 degrees for 4 weeks.

Comparison of homozygous and heterozygous erythrocytes suspensions on titration of irregular antibodies and during storage at 4 degrees for 4 weeks. Sammenligning af homozygote og heterozygote erytrocytrocytsuspensioner ved titrering af irregulære antistoffer og ved opbevaring ved 4 grader i 4 uger. Comparison of homozygous and heterozygous erythrocytes

Læs mere

Kvalitetssikring af trombocytpools mht. AB0-systemets kliniske betydning

Kvalitetssikring af trombocytpools mht. AB0-systemets kliniske betydning Kvalitetssikring af trombocytpools mht. AB0-systemets kliniske betydning Professionsbachelorprojekt 2012 Bioanalytikeruddannelsen VIA university college Produceret af Nanna Haahr Vorsaa (99906) I perioden

Læs mere

ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort

ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort GELER INDEHOLDENDE MONOKLONALE REAGENSER AF MURIN ELLER HUMAN OPRINDELSE ABO1, ABO2, RH1, KEL1 Ag BESTEMMELSE IVD Alle de af Bio-Rad producerede

Læs mere

2014 Professionshøjskolen Metropol

2014 Professionshøjskolen Metropol 2014 Professionshøjskolen Metropol Udarbejdet af: Diana Maarouf 020388-2920 Studienr: 60080560 Bachelorperioden : 17/03/14-20/06/14 Vejledere: Henriette Lorenzen Lektor Bioanaltikeruddannelsen København

Læs mere

A-plasma som det nye universalplasma - Antistoftitreringer af plasma fra A-donorer Professionsbachelorprojekt- modul 14

A-plasma som det nye universalplasma - Antistoftitreringer af plasma fra A-donorer Professionsbachelorprojekt- modul 14 A-plasma som det nye universalplasma - Antistoftitreringer af plasma fra A-donorer Professionsbachelorprojekt- modul 14 Udarbejdet af Bachelorstuderende: Anne-Marie Thommerup Kaasing Kristensen Forsøg

Læs mere

Vestsjællands Amtssygehus Klinisk Biokemisk Afdeling Centralsygehuset i Slagelse

Vestsjællands Amtssygehus Klinisk Biokemisk Afdeling Centralsygehuset i Slagelse Bilag D Vestsjællands Amtssygehus Klinisk Biokemisk Afdeling Centralsygehuset i Slagelse INTERN RAPPORT Afprøvning af Immunofixation af M-komponenter (Bestemmelse af immunoglobulin-klasse og -type) på

Læs mere

Patientinformation. Blodtransfusion. - råd og vejledning før og efter blodtransfusion. Afdeling/Blodbanken

Patientinformation. Blodtransfusion. - råd og vejledning før og efter blodtransfusion. Afdeling/Blodbanken Patientinformation Blodtransfusion - råd og vejledning før og efter blodtransfusion Kvalitet Døgnet Rundt Klinisk Immunologisk Afdeling/Blodbanken Til egne notater 2 Blodtransfusion Hvorfor gives der Blod

Læs mere

ScanGel NEUTRAL Kort Kort

ScanGel NEUTRAL Kort Kort ScanGel NEUTRAL 86429 48 Kort 86430 1080 Kort NEUTRAL GEL Serumkontrol, irregulær antistofscreening, forligelighed IVD Alle de af Bio-Rad producerede og markedsførte produkter gennemgår fra modtagelse

Læs mere

Patientinformation. Blodtransfusion. - råd og vejledning før og efter blodtransfusion

Patientinformation. Blodtransfusion. - råd og vejledning før og efter blodtransfusion Patientinformation Blodtransfusion - råd og vejledning før og efter blodtransfusion Kvalitet Døgnet Rundt Immunologisk Klinik, Blodbanken Til egne notater 2 Blodtransfusion Hvorfor gives der Blod består

Læs mere

ScanGel ReverScan A1, B 86790 2 x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O 86795 4 x 5 ml

ScanGel ReverScan A1, B 86790 2 x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O 86795 4 x 5 ml ScanGel ReverScan A1, B 86790 2 x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O 86795 4 x 5 ml HUMANE TESTERYTHROCYTER TIL ABO-SERUMKONTROL IVD Alle de af Bio-Rad producerede og markedsførte produkter gennemgår fra modtagelse

Læs mere

SOP for håndtering af standardsæt blod Regionernes Bio- og GenomBank

SOP for håndtering af standardsæt blod Regionernes Bio- og GenomBank SOP for håndtering af standardsæt blod Regionernes Bio- og GenomBank Introduktion Følgende standard operating procedure (SOP) beskriver arbejdsgangen i forbindelse med indsamling og håndteringen af blod

Læs mere

Afdeling og gruppemedlemmer. Klinisk og teoretisk vejleder

Afdeling og gruppemedlemmer. Klinisk og teoretisk vejleder Afdeling og gruppemedlemmer BA emne Klinisk og teoretisk vejleder KBF Sara, Lena, Antesar og Ilhan En undersøgelse der påviser om brugen af sommerfuglekanyle kan ændre kvaliteten af prøvematerialet i forhold

Læs mere

ScanGel Monoclonal ABO/RH 86496 48 kort 86426 288 kort

ScanGel Monoclonal ABO/RH 86496 48 kort 86426 288 kort ScanGel Monoclonal ABO/RH 86496 48 kort 86426 288 kort GELER INDEHOLDENDE MONOKLONALE REAGENSER AF MURIN ELLER HUMAN OPRINDELSE ABO-blodtypebestemmelse. RH1 Ag bestemmelse IVD Alle de af Bio-Rad producerede

Læs mere

Analyser i Blodbanken

Analyser i Blodbanken Analyser i Blodbanken Version 5 INDHOLDSFORTEGNELSE Blod Info 2 Allohæmagglutininer 2 Antistofscreentest 2 Antistoftitrering 2 BAS-test 3 BF-test (forligelighedsprøve) 3 Blodtypebestemmelse 4 DAT (Direkte-Antihumanglobulin-Test)

Læs mere

Screening af thrombocytter for HPA-1a antigener

Screening af thrombocytter for HPA-1a antigener Resume 1.0 På klinisk immunologisk afdeling, Hillerød Hospital, ønskes der at opsætte en screening af donorer for HPA-1 antigener. Til dette formål, er der ved et tidligere 6. Semester projekt, afprøvet

Læs mere

7. semester Bachelorprojekt, Bioanalytikeruddannelsen, Metropol. Metodevalidering af P- M-komponent; arb.k.(0,1), på Capillarys 2.

7. semester Bachelorprojekt, Bioanalytikeruddannelsen, Metropol. Metodevalidering af P- M-komponent; arb.k.(0,1), på Capillarys 2. 7. semester Bachelorprojekt, Bioanalytikeruddannelsen, Metropol Metodevalidering af P- M-komponent; arb.k.(0,1), på Capillarys 2. Skrevet af: Jesper Østrup Nielsen 29.10.1984 Vejledere: Conni Jølving,

Læs mere

Patientinformation. Blodtransfusion. Velkommen til Sygehus Lillebælt

Patientinformation. Blodtransfusion. Velkommen til Sygehus Lillebælt Patientinformation Blodtransfusion Velkommen til Sygehus Lillebælt Til patienten: Informationen på de følgende sider bør læses, inden man som patient giver sit samtykke til transfusionsbehandling. Det

Læs mere

Specifikationer for blodkomponenter Klinisk Immunologisk afdeling Region Hovedstaden Version 5, juni 2017

Specifikationer for blodkomponenter Klinisk Immunologisk afdeling Region Hovedstaden Version 5, juni 2017 Specifikationer for blodkomponenter Klinisk Immunologisk afdeling Region Hovedstaden Version 5, juni 2017 Værdierne er opgivet som median (2,5 percentil 97,5 percentil). Indhold Erytrocyt-komponenter...

Læs mere

SOP #1, HÅNDTERING AF BLOD

SOP #1, HÅNDTERING AF BLOD Introduktion Følgende standard operating procedure (SOP) beskriver arbejdsgangen i forbindelse med indsamling og håndteringen af blod til opbevaring i (DRB). Blod tappes fra reumatologiske patienter én

Læs mere

Neonatal screeningsalgoritme for cystisk fibrose

Neonatal screeningsalgoritme for cystisk fibrose Neonatal screeningsalgoritme for cystisk fibrose Forslag til dansk screeningsalgoritme for CF 1. First tier: Alle nyfødte får målt immunoreaktiv trypsinogen (IRT) i den etablerede filterpapirblodprøve,

Læs mere

Antistofidentifikation på AutoVue Innova

Antistofidentifikation på AutoVue Innova 2015 Antistofidentifikation på AutoVue Innova - Med anvendelse af tre forskellige panel-testerytrocytter Antibodyidentification with AutoVue Innova - Using three different panel-testerythrocytes Kilde:

Læs mere

ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d 86431 48 Kort 86432 1080 Kort

ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d 86431 48 Kort 86432 1080 Kort ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d 86431 48 Kort 86432 1080 Kort GEL, DER ER FREMSTILLET AF ET POLYSPECIFIKT ANTI-HUMANT GLOBULIN (POLYKLONALE OG MONOKLONALE MURINFRAKTIONER) Irregulær Ab-screening, forligelighed,

Læs mere

Leucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL. Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3

Leucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL. Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3 Leucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3 Vejledende information Tilsigtet anvendelse Leucosep rørene er beregnet til anvendelse i forbindelse med indsamling

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA sekvens,

Læs mere

Validitetserklæring for NPU02497 P-Insulin;stofk.

Validitetserklæring for NPU02497 P-Insulin;stofk. Valideringsperiode: December2010- Januar 2011 Arbejdsgruppe: Udstyr: Specialist bioanalytiker Britta Lende Poulsen Bioanalytiker underviser Britta Nielsen Kvalitetsleder Karin Heidemann Advia Centaur XP

Læs mere

Præanalytiske fejlkilder ved brug af POC udstyr

Præanalytiske fejlkilder ved brug af POC udstyr Præanalytiske fejlkilder ved brug af POC udstyr LKO temadag 2012 POC udstyr hvor der anvendes Kuvette/Kasette/Strips/Kapillærrør Fyldning af kuvetter/strips/kapillærrør Skal fyldes helt op, der må ikke

Læs mere

Vejledende eksamensopgaver vedr. hypotesetest (stx B og stx A)

Vejledende eksamensopgaver vedr. hypotesetest (stx B og stx A) Vejledende eksamensopgaver vedr. hypotesetest (stx B og stx A) Opgave 1 I nedenstående tabel ses resultaterne af samtlige hjerteklapoperationer i 007-08 ved Odense Universitetshospital (OUH) sammenlignet

Læs mere

ELISA Immuno Explorer TM Kit

ELISA Immuno Explorer TM Kit - 1 - ELISA Immuno Explorer TM Kit Katalog nummer 166-2400EDU Til læreren Dette kit er lavet for at lette og illustrere immunologiundervisningen og kan give en øget forståelse af antigen-antistof interaktionen,

Læs mere

Sammenligning af paneler til antistofidentifikation ved brug af AutoVue Innova. Comparison of Panels for Antibody Identification using AutoVue Innova

Sammenligning af paneler til antistofidentifikation ved brug af AutoVue Innova. Comparison of Panels for Antibody Identification using AutoVue Innova Kapitel: Forord 15-12-2015 UNIVERSITY COLLEGE SYDDANMARK SAMMENLIGNING AF PANELER TIL ANTISTOFIDENTIFIKATION VED BRUG AF AUTOVUE INNOVA Comparison of Panels for Antibody Identification using AutoVue Innova

Læs mere

MODULPLAN Bioanalytikeruddannelsen

MODULPLAN Bioanalytikeruddannelsen Obligatorisk Modulbeskrivelse præsenterer de studerende til bioanalytikerprofessionen og har fokus på basale laboratoriefærdigheder herunder den til grundlæggende naturvidenskabelige teori. Undervisningen

Læs mere

ScanGel Anti-IgG Kort Kort

ScanGel Anti-IgG Kort Kort ScanGel Anti-IgG 86437 48 Kort 86438 1080 Kort GEL, DER ER FREMSTILLET AF ET POLYKLONALE ANTI-IgG ANTI-HUMANT GLOBULIN Irregulær Ab-screening, forligelighed, fænotypebestemmelse IVD Alle de af Bio-Rad

Læs mere

Til patienter og pårørende. Blodtransfusion. Vælg billede. Vælg farve. Syddansk Transfusionsvæsen

Til patienter og pårørende. Blodtransfusion. Vælg billede. Vælg farve. Syddansk Transfusionsvæsen Til patienter og pårørende Blodtransfusion Vælg billede Vælg farve Syddansk Transfusionsvæsen Samtykke til blodtransfusion Sygehuset er forpligtet til at give dig den nødvendige information og indhente

Læs mere

Biotechnology Explorer

Biotechnology Explorer Biotechnology Explorer Oprensning af genomisk DNA fra plantemateriale Manual Katalog nr. 166-5005EDU explorer.bio-rad.com Oversat og bearbejdet af Birgit Sandermann Justesen, Nærum Gymnasium, februar 2009

Læs mere

En intro til radiologisk statistik

En intro til radiologisk statistik En intro til radiologisk statistik Erik Morre Pedersen Hypoteser og testning Statistisk signifikans 2 x 2 tabellen og lidt om ROC Inter- og intraobserver statistik Styrkeberegning Konklusion Litteratur

Læs mere

Graph brugermanual til matematik C

Graph brugermanual til matematik C Graph brugermanual til matematik C Forord Efterfølgende er en guide til programmet GRAPH. Programmet kan downloades gratis fra nettet og gemmes på computeren/et usb-stik. Det betyder, det også kan anvendes

Læs mere

Metodevalidering af High Sensitive C- Reaktive Protein

Metodevalidering af High Sensitive C- Reaktive Protein 2013/- 2014 Metodevalidering af High Sensitive C- Reaktive Protein BACHELOROPGAVE UGE 41/2013 TIL UGE 01/2014 PH METROPOL KØBENHAVN BIOANALYTIKER UDDANNELSE HEIDI RAVN FØDT: 090277-1972 HOVEDVEJLEDER:

Læs mere

Noter til SfR checkliste 3 Kohorteundersøgelser

Noter til SfR checkliste 3 Kohorteundersøgelser Noter til SfR checkliste 3 Kohorteundersøgelser Denne checkliste anvendes til undersøgelser som er designet til at besvare spørgsmål af typen hvad er effekten af denne eksponering?. Den relaterer sig til

Læs mere

Biotechnology Explorer ELISA Immuno Explorer Kit. Instruktionsmanual

Biotechnology Explorer ELISA Immuno Explorer Kit. Instruktionsmanual Biotechnology Explorer ELISA Immuno Explorer Kit Instruktionsmanual Katalognummer 166-2400EDU explorer.bio-rad.com Delene i dette kit er sendt i separate æsker. Opbevar posen med reagenser i køleskab indefor

Læs mere

Spørgsmål og svar (18/02-2015) 1. Udbudsbetingelserne: Pkt. 3.6 Energiforhold. Vi kan ikke se at dette bilag findes i udbudsmaterialet.

Spørgsmål og svar (18/02-2015) 1. Udbudsbetingelserne: Pkt. 3.6 Energiforhold. Vi kan ikke se at dette bilag findes i udbudsmaterialet. Spørgsmål og svar EU-udbud 2015/S 028-046718 Udbud af blodtypeserologisk udstyr med tilhørende forbrugsvarer Spørgsmål og svar (18/02-2015) 1. Udbudsbetingelserne: Pkt. 3.6 Energiforhold. Vi kan ikke se

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Forsøgsvejledning Navn: Side 1 af 7 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA

Læs mere

Bestemmelse af B-hæmoglobin (Fe) stofkoncentration i blodet ved metodesammenligning på ADVIA 2120 VS. HemoCue 102+.

Bestemmelse af B-hæmoglobin (Fe) stofkoncentration i blodet ved metodesammenligning på ADVIA 2120 VS. HemoCue 102+. Bestemmelse af B-hæmoglobin (Fe) stofkoncentration i blodet ved metodesammenligning på ADVIA 2120 VS. HemoCue 102+. Bachelorprojekt Bioanalytikeruddannelsen København Udarbejdet af Sabero Mohammad (f.

Læs mere

JULI 2015 REDEGØRELSE FOR BLODPRODUKTOMRÅDET 2014

JULI 2015 REDEGØRELSE FOR BLODPRODUKTOMRÅDET 2014 JULI 2015 REDEGØRELSE FOR BLODPRODUKTOMRÅDET 2014 REDEGØRELSE FOR BLODPRODUKTOMRÅDET 2014 Sundhedsstyrelsen, 2015 Du kan frit referere teksten i publikationen, hvis du tydeligt gør opmærksom på, at teksten

Læs mere

Forsøgsprotokol til larveforsøg: Tilsætning af 3 dage gamle larver til gødning inficeret med patogene bakterier

Forsøgsprotokol til larveforsøg: Tilsætning af 3 dage gamle larver til gødning inficeret med patogene bakterier Forsøgsprotokol til larveforsøg: Tilsætning af 3 dage gamle larver til gødning inficeret med patogene bakterier Formål: at undersøge udviklingen i mængden af tilsatte patogene bakterier til hønsegødning.

Læs mere

Sommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar

Sommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar 1 Sommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar Titel på kursus: Uddannelse: Semester: ksamensdato: Tid: Bedømmelsesform Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin

Læs mere

Øvelse med tarmkræftceller i kultur.

Øvelse med tarmkræftceller i kultur. Øvelse med tarmkræftceller i kultur. Baggrund Hver 3. dansker bliver ramt af kræft, inden de er blevet 75 år. Tyktarmskræft er den 3. hyppigste kræftform hos både mænd og kvinder, hvor henholdsvis 7.3

Læs mere

Vejledende besvarelser til opgaver i kapitel 14

Vejledende besvarelser til opgaver i kapitel 14 Vejledende besvarelser til opgaver i kapitel 14 Opgave 1 a) Det første trin i opstillingen af en hypotesetest er at formulere to hypoteser, hvoraf den ene støtter den teori vi vil teste, mens den anden

Læs mere

En intro til radiologisk statistik. Erik Morre Pedersen

En intro til radiologisk statistik. Erik Morre Pedersen En intro til radiologisk statistik Erik Morre Pedersen Hypoteser og testning Statistisk signifikans 2 x 2 tabellen og lidt om ROC Inter- og intraobserver statistik Styrkeberegning Konklusion Litteratur

Læs mere

Pak12 assay BRUGSANVISNING INDHOLDSFORTEGNELSE

Pak12 assay BRUGSANVISNING INDHOLDSFORTEGNELSE BRUGSANVISNING Pak12 assay REF PAK12 IVD INDHOLDSFORTEGNELSE ANVENDELSE... 2 SAMMENDRAG OG FORKLARING... 2 TESTPRINCIP... 2 REAGENSER... 2 FORHOLDSREGLER... 3 ADVARSEL:... 3 PRØVETAGNING OG OPBEVARING...

Læs mere

Eksperimentelt kit de Luxe med kunstigt blod med Rhesusfaktor og simulerede blodlegemer.

Eksperimentelt kit de Luxe med kunstigt blod med Rhesusfaktor og simulerede blodlegemer. Blodtypebestemmelse med Rhesus faktoren, varenr. 3b1005072 Eksperimentelt kit de Luxe med kunstigt blod med Rhesusfaktor og simulerede blodlegemer. Lang holdbarhed uden opbevaring på køl! Indhold: 4 kunstige

Læs mere

Metodeblad for P-Insulinantistof

Metodeblad for P-Insulinantistof Quality Sheet Metodeblad for P-Insulinantistof C2 Ensure and Monitor Customer and Stakeholder Satisfaction Metodeblad for P-Insulin-antistof; arb.stofk.(proc.) Indikation Forberedelse af patient Præanalytiske

Læs mere

Velkommen til LKO temadag. 4. marts 2014

Velkommen til LKO temadag. 4. marts 2014 Velkommen til LKO temadag 4. marts 2014 Præanalytiske forhold ved prøvetagning Yokelin Chan Habibah Larsen Afdeling KBF Odense Universitetshospital Præanalytiske forhold Definition: Korrekt blodprøvetagning

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Side 1 af 8 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA-sekvens,

Læs mere

Laboratorieinformation Klinisk Immunologisk Afdeling

Laboratorieinformation Klinisk Immunologisk Afdeling Laboratorieinformation Klinisk Immunologisk Afdeling Møde for praktiserende læger d. 24. nov, 2015 Ulrik Sprogøe analyseansvarlig overlæge Emner KIAs funktioner Informationer om analysr Informationer om

Læs mere

Løsning til opgave 7, 9, 10 og 11C Matematik B Sommer 2014

Løsning til opgave 7, 9, 10 og 11C Matematik B Sommer 2014 Vejledning til udvalgte opgave fra Matematik B, sommer 2014 Opgave 7 Størrelsen og udbudsprisen på 100 fritidshuse på Rømø er indsamlet via boligsiden.dk. a) Grafisk præsentation, der beskriver fordelingen

Læs mere

X bundet arvegang. Information til patienter og familier. 12 Sygehus Lillebælt, Vejle Klinisk Genetik Kabbeltoft 25 7100 Vejle Tlf: 79 40 65 55

X bundet arvegang. Information til patienter og familier. 12 Sygehus Lillebælt, Vejle Klinisk Genetik Kabbeltoft 25 7100 Vejle Tlf: 79 40 65 55 12 Sygehus Lillebælt, Vejle Klinisk Genetik Kabbeltoft 25 7100 Vejle Tlf: 79 40 65 55 X bundet arvegang Århus Sygehus, Bygn. 12 Århus Universitetshospital Nørrebrogade 44 8000 Århus C Tlf: 89 49 43 63

Læs mere

Udvikling og validering af ELISA test til bestemmelse af Newcastle Disease antistoffer i serum og æg

Udvikling og validering af ELISA test til bestemmelse af Newcastle Disease antistoffer i serum og æg Udvikling og validering af ELISA test til bestemmelse af Newcastle Disease antistoffer i serum og æg Rapport over forsøg finansieret af Fjerkræafgiftsfonden i projektåret 2007/2008 Forfattere: Lis Olesen,

Læs mere

Bioanalytikeruddannelsen. Bioanalytisk udvikling og kvalitetssikring

Bioanalytikeruddannelsen. Bioanalytisk udvikling og kvalitetssikring Læringsudbytter og fag fra studieordningen som understøttes af det det teoretiske undervisningsforløb på modul 12: Læringsudbytter Ved modulets afslutning: har den studerende viden om statistik, som sætter

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Side 1 af 8 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA

Læs mere

Validitetserklæring for NPU19923 P-troponin I, hjertemuskel;massek.

Validitetserklæring for NPU19923 P-troponin I, hjertemuskel;massek. Valideringsperiode: Marts April 2011 Arbejdsgruppe: Udstyr: Specialist bioanalytiker Britta Lende Poulsen Bioanalytiker underviser Britta Nielsen Kvalitetsleder Karin Heidemann Advia Centaur XP Serienummer:

Læs mere

Kemiøvelse 2 C2.1. Buffere. Øvelsens pædagogiske rammer

Kemiøvelse 2 C2.1. Buffere. Øvelsens pædagogiske rammer Kemiøvelse 2 C2.1 Buffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt

Læs mere

Holdbarhed på Parathyreoideahormon; stofk. (pmol/l) på Cobas 8000

Holdbarhed på Parathyreoideahormon; stofk. (pmol/l) på Cobas 8000 Holdbarhed på Parathyreoideahormon; stofk. (pmol/l) på Cobas 8000 Forfatter:, 09-12-89, studienr.: 60080393 Bioanalytikeruddannelsen, PH Metropol, modul 14, 7. oktober 2013 2. januar 2014 Vejledere: Kathrine

Læs mere

Blodbankens InterInfo

Blodbankens InterInfo Blodbankens InterInfo Blodbankens InterInfo Hvad er det? InterInfo er en internetbaseret adgang til at få oplysninger fra Blodbankens edb-system. Hvordan kommer man ind på InterInfo? Der er to måder man

Læs mere

ScanGel Monoclonal RH/K pheno II kort

ScanGel Monoclonal RH/K pheno II kort ScanGel Monoclonal RH/K pheno II 86488 48 kort GELER INDEHOLDENDE MONOKLONALE REAGENSER AF HUMAN OPRINDELSE RH2, RH3, RH4, RH5, KEL1 Ag bestemmelse IVD Alle de af Bio-Rad producerede og markedsførte produkter

Læs mere

Spørgsmål og svar (18/ ) 1. Udbudsbetingelserne: Pkt. 3.6 Energiforhold. Vi kan ikke se at dette bilag findes i udbudsmaterialet.

Spørgsmål og svar (18/ ) 1. Udbudsbetingelserne: Pkt. 3.6 Energiforhold. Vi kan ikke se at dette bilag findes i udbudsmaterialet. Spørgsmål og svar EU-udbud 2015/S 028-046718 Udbud af blodtypeserologisk udstyr med tilhørende forbrugsvarer Spørgsmål og svar (18/02-2015) 1. Udbudsbetingelserne: Pkt. 3.6 Energiforhold. Vi kan ikke se

Læs mere

Kemiøvelse 2 C2.1. Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer

Kemiøvelse 2 C2.1. Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer Kemiøvelse 2 C2.1 Puffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt

Læs mere

X bundet arvegang. Information til patienter og familier

X bundet arvegang. Information til patienter og familier X bundet arvegang Information til patienter og familier 2 X bundet arvegang Følgende er en beskrivelse af, hvad X bundet arvegang betyder og hvorledes X bundne sygdomme nedarves. For at forstå den X bundne

Læs mere

Isolering af DNA fra løg

Isolering af DNA fra løg Isolering af DNA fra løg Formål: At afprøve en metode til isolering af DNA fra et levende væv. At anvende enzymer.. Indledning: Isolering af DNA fra celler er første trin i mange molekylærbiologiske undersøgelser.

Læs mere

REDEGØRELSE FOR BLODPRODUKTOMRÅDET 2010

REDEGØRELSE FOR BLODPRODUKTOMRÅDET 2010 ISSN 1901-2594 REDEGØRELSE FOR BLODPRODUKTOMRÅDET 2010 Lægemiddelstyrelsen Redegørelse for blodproduktområdet 2010 Udgivet juli 2011 af Lægemiddelstyrelsen 2 INDHOLDSFORTEGNELSE 1. INDLEDNING... 4 2. OVERSIGT

Læs mere

Immunisering i svangerskabet

Immunisering i svangerskabet Modul k8 Immunisering i svangerskabet Torben Barington, KIA Fosteret er et allotransplantat! Fosteret som allotransplantat Syncytiotrofoblast CT) Cytotrofoblast T) Interstitiel trofoblast E) Endovaskulær

Læs mere

Læring af test. Rapport for. Aarhus Analyse Skoleåret

Læring af test. Rapport for. Aarhus Analyse  Skoleåret Læring af test Rapport for Skoleåret 2016 2017 Aarhus Analyse www.aarhus-analyse.dk Introduktion Skoleledere har adgang til masser af data på deres elever. Udfordringen er derfor ikke at skaffe adgang

Læs mere

Kromosomforandringer. Information til patienter og familier

Kromosomforandringer. Information til patienter og familier 12 Odense: Odense Universitetshospital Sdr.Boulevard 29 5000 Odense C Tlf: 65 41 17 25 Kromosomforandringer Vejle: Sygehus Lillebælt, Vejle Klinisk Genetik Kabbeltoft 25 7100 Vejle Tlf: 79 40 65 55 Århus:

Læs mere

Ensidet eller tosidet alternativ. Hypoteser. tosidet alternativ. nul hypotese testes mod en alternativ hypotese

Ensidet eller tosidet alternativ. Hypoteser. tosidet alternativ. nul hypotese testes mod en alternativ hypotese Kursus 02402 Introduktion til Statistik Forelæsning 6: Kapitel 7: Hypotesetest for gennemsnit (one-sample setup). 7.4-7.6 Per Bruun Brockhoff DTU Compute, Statistik Bygning 305/324 Danmarks Tekniske Universitet

Læs mere

Intern rapport Afprøvning af HYDRASYS fra Sebia, ILS Aps Til analysering af Elektroforeser Januar 2003-01-21

Intern rapport Afprøvning af HYDRASYS fra Sebia, ILS Aps Til analysering af Elektroforeser Januar 2003-01-21 Klinisk Biokemisk Afdeling Slagelse Sygehus Intern rapport Afprøvning af HYDRASYS fra Sebia, ILS Aps Til analysering af Elektroforeser Januar 2003-01-21 Dorit Borgstrup Lis Bülow Birgit Hansen R:\Klinisk

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Side 1 af 8 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA-sekvens,

Læs mere

ELISA metoden, til bestemmelse af den genetiske profil i høns.

ELISA metoden, til bestemmelse af den genetiske profil i høns. ELISA metoden, til bestemmelse af den genetiske profil i høns. 1 Formål: Formålet med denne øvelse er at demonstrere brugen af antistoffer i diagnostisk eller forskningsøjemed. Dvs. til at undersøge om

Læs mere

Kromosomforandringer. Information til patienter og familier

Kromosomforandringer. Information til patienter og familier Kromosomforandringer Information til patienter og familier 2 Kromosomforandringer Den følgende information er en beskrivelse af kromosomforandringer, hvorledes de nedarves og hvornår dette kan medføre

Læs mere

Simulering af stokastiske fænomener med Excel

Simulering af stokastiske fænomener med Excel Simulering af stokastiske fænomener med Excel John Andersen, Læreruddannelsen i Aarhus, VIA Det kan være en ret krævende læreproces at udvikle fornemmelse for mange begreber fra sandsynlighedsregningen

Læs mere

BIOLOGI A-NIVEAU NY ORDNING. Tirsdag den 19. august 2008. Kl. 09.00 14.00 STX082-BIA STUDENTEREKSAMEN AUGUST 2008

BIOLOGI A-NIVEAU NY ORDNING. Tirsdag den 19. august 2008. Kl. 09.00 14.00 STX082-BIA STUDENTEREKSAMEN AUGUST 2008 STUDENTEREKSAMEN AUGUST 2008 BIOLOGI A-NIVEAU Tirsdag den 19. august 2008 NY ORDNING Kl. 09.00 14.00 Af opgaverne 1, 2, 3 og 4 skal tre og kun tre af opgaverne besvares STX082-BIA Undervisningsministeriet

Læs mere

Vi går derfor ud fra, at I ved, at DNA molekyler er meget lange molekyler

Vi går derfor ud fra, at I ved, at DNA molekyler er meget lange molekyler DNA-profil analyse Indledning DNA-profil analyser eller i daglig tale DNA-fingeraftryk er en metode, der bruges, når man skal finde ud af, hvem der er far et barn, hvis der altså er flere muligheder. Det

Læs mere

NIMAND A/S SINCE 1987

NIMAND A/S SINCE 1987 Control Master M 700 / 3100 spiritus kontrol- & doserings system Bruger- & programmerings manual Aflæsning af salg pr. prop med servicenøgle (kan ikke 0-stilles) Denne aflæsning benyttes kun hvis man ønsker

Læs mere

DNA origami øvelse 2013. DNA origami øvelse

DNA origami øvelse 2013. DNA origami øvelse DNA origami øvelse Introduktion I denne øvelse bruger vi DNA origami teknikken til at samle en tavle af DNA med dimensioner på 70 nm x 100 nm. Tavlen dannes af et langt enkeltstrenget DNA molekyle, der

Læs mere

Schweynoch, 2003. Se eventuelt http://www.mathematik.uni-kassel.de/~fathom/projekt.htm.

Schweynoch, 2003. Se eventuelt http://www.mathematik.uni-kassel.de/~fathom/projekt.htm. Projekt 8.5 Hypotesetest med anvendelse af t-test (Dette materiale har været anvendt som forberedelsesmateriale til den skriftlige prøve 01 for netforsøget) Indhold Indledning... 1 χ -test... Numeriske

Læs mere

Regnskovens hemmeligheder

Regnskovens hemmeligheder Center for Undervisningsmidler, afdeling København Regnskovens hemmeligheder Øvelsesvejledning Formål Et gen for et kræfthelbredende protein er blevet fundet i nogle mystiske blade i regnskoven. Forskere

Læs mere

Validering af molekylærbiologiske analyser. Marianne Antonius Jakobsen Afsnitsleder for molekylærbiologisk lab. Klinisk Immunologisk afdeling, OUH.

Validering af molekylærbiologiske analyser. Marianne Antonius Jakobsen Afsnitsleder for molekylærbiologisk lab. Klinisk Immunologisk afdeling, OUH. Validering af molekylærbiologiske analyser Marianne Antonius Jakobsen Afsnitsleder for molekylærbiologisk lab. Klinisk Immunologisk afdeling, OUH. Hvordan laver man en god validering? Standarden: Mere

Læs mere

Validering og implementering af en ELISA analyse, til screening af donorer for IgA mangel

Validering og implementering af en ELISA analyse, til screening af donorer for IgA mangel Validering og implementering af en ELISA analyse, til screening af donorer for IgA mangel Christine Marie Rasmussen Michael Lassen Schou Hussein Atallah Alhadidi Daniel Rodriguez Jensen Side 1 af 53 Professionsbachelorprojekt

Læs mere

Appendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning. Faktor mellem total antal celler og antal celler der ønskes udsås:

Appendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning. Faktor mellem total antal celler og antal celler der ønskes udsås: Appendix Appendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning Fortyndingsfaktor: Efter trypsinering og centrifugering af celler fra cellestokken, opblandes cellerne i 1 ml medie. For at lave en

Læs mere

DNA origami øvelse DNA origami øvelse

DNA origami øvelse DNA origami øvelse DNA origami øvelse Introduktion I denne øvelse bruger vi DNA origami teknikken til at samle en tavle af DNA med dimensioner på 70 nm x 100 nm. Tavlen dannes af et langt enkeltstrenget DNA molekyle, der

Læs mere

Der foretages en opgørelse af udviklingen i behovet for donorblod med henblik på at sikre en tilstrækkelig selvforsyning i regionen.

Der foretages en opgørelse af udviklingen i behovet for donorblod med henblik på at sikre en tilstrækkelig selvforsyning i regionen. NOTAT Regionshuset Viborg Hospitalsplanlægning Sundhedsplanlægning Skottenborg 26 8800 Viborg www.regionmidtjylland.dk Opgørelse af udviklingen i behovet for donorblod i Region Midtjylland Indledning I

Læs mere

Mælkesyrebakterier og holdbarhed

Mælkesyrebakterier og holdbarhed Mælkesyrebakterier og holdbarhed Formål Formålet med denne øvelse er at undersøge mælkesyrebakteriers og probiotikas evne til at øge holdbarheden af kød ved at: 1. Undersøge forskellen på bakterieantal

Læs mere

Kemiøvelse 2 1. Puffere

Kemiøvelse 2 1. Puffere Kemiøvelse 2 1 Puffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt andet

Læs mere

Immunisering. Rikke Bek Helmig

Immunisering. Rikke Bek Helmig Immunisering Rikke Bek Helmig Alloimmunisering Allo: græsk allos en anden fra samme art = isoimmunisering = immunisering imod fremmede celler (blod eller organer) Erytrocyt alloimmunisering Trombocyt alloimmunisering

Læs mere

Matematik A. Studentereksamen. Forberedelsesmateriale til de digitale eksamensopgaver med adgang til internettet

Matematik A. Studentereksamen. Forberedelsesmateriale til de digitale eksamensopgaver med adgang til internettet Matematik A Studentereksamen Forberedelsesmateriale til de digitale eksamensopgaver med adgang til internettet stx11-matn/a-080501 Tirsdag den 8. maj 01 Forberedelsesmateriale til stx A Net MATEMATIK Der

Læs mere

Kemiøvelse 2 C2.1. Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer

Kemiøvelse 2 C2.1. Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer Kemiøvelse 2 C2.1 Puffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt

Læs mere

DNA origami øvelse. Introduktion. DNA origami øvelse 3 timer 2018

DNA origami øvelse. Introduktion. DNA origami øvelse 3 timer 2018 DNA origami øvelse Introduktion I denne øvelse bruger vi DNA origami teknikken til at samle en tavle af DNA med dimensioner på 70 nm x 100 nm. Tavlen dannes af et langt enkeltstrenget DNA molekyle, der

Læs mere

Validering af P-TSH, P-T3 og P-FT4 udført på. Immulite 2500

Validering af P-TSH, P-T3 og P-FT4 udført på. Immulite 2500 Professionsbachelorprojekt 2010 Ved: Bioanalytikeruddannelsen København Metropol Validering af P-TSH, P-T3 og P-FT4 udført på Immulite 2500 Immulite 2500. [1] Udarbejdet af: Watfaa Saad Majeed, 28.04.1985

Læs mere

Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve

Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve Til isolering af genomisk DNA fra indsamlingssætserierne Oragene - og ORAcollect. Du kan finde flere sprog og protokoller på vores webside

Læs mere

Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer. Sammenhæng. Formål. Arbejdsform: Evaluering

Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer. Sammenhæng. Formål. Arbejdsform: Evaluering 1 Puffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt andet syrebaseteori

Læs mere

Note til styrkefunktionen

Note til styrkefunktionen Teoretisk Statistik. årsprøve Note til styrkefunktionen Først er det vigtigt at gøre sig klart, at når man laver statistiske test, så kan man begå to forskellige typer af fejl: Type fejl: At forkaste H

Læs mere