Transkript

1 BProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplified DNA Assay Dansk U Se symbolglossaret i slutningen af indlægssedlen /4 USA patent nr 5,27,184; 5,547,861; 5,648,211; 5,712,124; 5,744,311; 5,846,726; 5,851,767; 5,866,336; 5,919,63; 5,928,869; 5,958,7; 6,54,279; 6,9,552; 6,117,635; 6,277,582; 6,316,2; 6,656,68; 6,743,582 TILSIGTET BRUG BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplified DNA Assay (BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) forstærket DNA-analyse), til brug med BD ProbeTec ET System (BD ProbeTec ET systemet), anvender Strand Displacement Amplification (SDA) teknologi til direkte kvalitativ påvisning af Mycoplasma pneumoniae DNA Analysen er indiceret til brug ved testning af svælgpodninger (med og uden transportmedium) fra patienter med kliniske tegn og symptomer og andre diagnostiske tegn på pneumoni Analysen kan bruges som et hjælpemiddel ved tentativ diagnose af Mycoplasma pneumoniae-associeret pneumoni RESUMÉ OG FORKLARING Mycoplasma pneumoniae er en pleuropneumoni-lignende organisme uden cellevæg, som klæber til epitelceller i luftvejene, og som er ansvarlig for cirka 15 til 2 % af alle tilfælde med samfundserhvervet pneumoni Den kliniske præsentation af patienter med M pneumoniae infektion er ikke betydeligt anderledes end præsentationen af patienter med infektioner forårsaget af andre luftvejspatogener, såsom Chlamydophila pneumoniae Diagnose tiltros derfor primært laboratorietestning 1 M pneumoniae infektioner kan forekomme hos alle aldersgrupper, og selvom de ofte anses for at være en fremherskende årsag til CAP hos unge voksne, er det blevet demonstreret, at forekomsten af M pneumoniae pneumoni stiger med alderen, hvilket derved fremhæver vigtigheden af dette patogen hos ældre mennesker 2 Transmission forekommer blandt personer via luftvejsdråber, og symptomer inkluderer feber, kuldegysen, hoste, brystsmerte, ondt I halsen og hævede lymfekirtler De kliniske symptomer på M pneumoniae pneumoni er ofte milde og selvbegrænsende Betydelige lungekomplikationer kan dog forekomme og inkluderer pleuraekssudat, pneumatocele, lungebyld, pneumothorax, bronkiektasi, kronisk fibroseinterstitium og åndedrætsbesvær En ofte uregistreret komplikation er bronchiolitis obliterans, hvilket kan føre til respirationssvigt 2 Alvorlige infektioner, som kræver hospitalsindlæggelse, vides at forekomme, især hos middelaldrene og ældre personer 3 Vigtigheden af at etablere en diagnose for pneumoni og tilknyttet ætiologi forhøjes pga øget bekymring om overbrug af antibiotika Infectious Diseases Society of America panel fastslog dog, at ingen tilgængelig diagnostisk test pålideligt og hurtigt kan detektere M pneumoniae, 4 som kræver specialiseret cellefri medium og 2-3 ugers inkubering for at gro in vitro Den retrospektive diagnose af Mycoplasma infektion er mulig ved brug af serologi Denne metode har dog varierende følsomhed og specificitet og kræver endivdere indsamling af konvalescent sera til nøjagtig fortolkning af resultater 2 Hurtige teknikker, som bruger nukleinsyre-forstærkning kan være nyttige ved etablering af diagnose, og derved muliggøre rettidig indgivelse af passende tilskrevet behandling PROCEDURENS PRINCIPPER BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplified DNA Assay er baseret på den samtidige amplifikation og påvisning af fokus-dna ved hjælp af amplifikationsprimere og en fluorescensmærket detektorprobe SDAreagenserne tørres i to separate engangsmikrobrønde Den bearbejdede prøve tilsættes primermikrobrønden, som indeholder amplifikationsprimere, fluorescensmærket detektorprobe og andre reagenser, som er nødvendige for amplifikation Primerne er udformet til at forstærke et 73-base-par område i M pneumoniae P1 genet Efter inkubation overføres reaktionsblandingen til amplifikationsmikrobrønden, som indeholder to enzymer (en DNA polymerase og en restriktionsendonuklease), som er nødvendig for SDA Amplifikationsmikrobrøndene forsegles for at forhindre kontaminering, og de inkuberes derefter i en varmekontrolleret fluorescensaflæser, som overvåger hver reaktion for dannelsen af forstærkede produkter Hver reaktion sam-forstærker og påviser en intern amplifikationskontrol (Internal Amplification Control, IAC), hvis formål er at verificere, at de rigtige forhold eksisterer til amplifikation og at reducere muligheden for rapportering af et falsk negativt resultat på grund af tilstedeværelse af analysehæmmere Tilstedeværelsen eller fraværet af M pneumoniae DNA bestemmes ved at beregne PAT (Passes After Threshold) scoringer for prøven baseret på forudbestemte tærskelværdier Instrumentet rapporterer automatisk resultater som positive, negative eller inkonklusive REAGENSER OG MATERIALER Hver BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplified DNA Assay reagenspakke indeholder: Mycoplasma pneumoniae (MP) primermikrobrønde, (1x24) 6 oligonukleotider 7,5pmol, dntp'er 15,2nmol, 2 detektorprober 22,5pmol, Syntetisk oligonukleotid 6 kopier Mycoplasma pneumoniae (MP) amplifikationsmikrobrønde, (1x24) Restriktionsenzym: 33 enheder, DNA polymerase 14 enheder 1 Primerlåg, 16 amplifikationsforseglere (1/2), 8 engangsposer BD ProbeTec ET Respiratory and Media Diluent and Control Kit (BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder og kontrolkit) (CF*/LP**/MP): Indhold: Luftvejspræparat- og mediediluent: Bicin, kaliumphosphat, kaliumhydroxid, DMSO og Proclin; 1 (CF/LP/MP) positive kontroller: 15 ng laksesædvæske-dna, 47,3 µg Tris, 9, µg EDTA, 36 kopier CF plasmid, 48 kopier LP plasmid, 54 kopier MP plasmid; 1 (CF/LP/MP) negative kontroller: 15 ng laksesædvæske-dna, 47,3 µg Tris, 9, µg EDTA; 1 2-mL glas med trykhætte * Refererer til BD ProbeTec ET Chlamydiaceae familien (CF) amplificeret DNA-analyse ** Referer til BD ProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) amplificeret DNA-analyse BD ProbeTec ET podepindsdiluent og kontrolkit (tcf/tmp)*:

2 Indhold: Podepindsdiluent: Bicin, kaliumphosphat, kaliumhydroxid, DMSO og Proclin; 1 (tcf/tmp) positive kontroller: 175 ng laksesædvæske-dna, 78,8 µg Tris, 15, µg EDTA, 6 kopier CF plasmid, 8 kopier LP plasmid, 9 kopier MP plasmid; 1 (tcf/tmp) negative kontroller: 175 ng laksesædvæske-dna, 78,8 µg Tris, 15, µg EDTA * Designationen "t" refererer til reagenser, som udelukkende er udformet til brug med svælgpodning (uden transportmedium) Instrumenter, udstyr og materialer: BD ProbeTec ET Instrument and Instrument Plate (BD ProbeTec ET instrument og instrumentplade), BD ProbeTec ET Priming and Warming Heater (BD ProbeTec ET primer- og opvarmerapparat), BD ProbeTec ET Lysing Heater (BD ProbeTec ET lyseringsvarmeapparat), BD ProbeTec ET Lysing Rack (BD ProbeTec ET lyseringsstativ), BD ProbeTec ET Pipettor, stand and Power Supply (BD ProbeTec ET pipettor, platform og strømforsyning), BD ProbeTec ET Accessories kit (BD ProbeTec ET tilbehørssæt), BD ProbeTec ET 2 ml and 4 ml Sample Tubes and Caps (BD ProbeTec ET 2 ml og 4 ml prøveglas og hætter), BD ProbeTec ET Pipette Tips (BD ProbeTec ET pipettespidser) Nødvendige materialer, der ikke er vedlagt: Klasse II biologisk sikkerhedsskab (biological safety cabinet, BSC), vortexmixer, -2 C og/eller -7 C (eller koldere) en ikke-selvafrimende fryser, mikrocentrifuge, der kan klare 16 x g, vandbade, digitalt termometer, vandbadstativ med låg, der kan skrues på, 2 ml prøveglasstativ og andre egnede prøveglasstativer, BBL CultureSwab EZ swabs (BBL CultureSwab EZ podepinde), engangshandsker, mikropipetter i stand til at overføre volumener på 2-1 µl, aerosol-resistente pipettespidser, destilleret vand, molekulært biologisk vand, 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox * * Opløs 7,5 g Alconox med 1 L af en 1 % (vol/vol) natriumhypochloritopløsning og bland Klargør frisk blanding dagligt Krav til opbevaring og håndtering: BD ProbeTec ET MP reagent packs (BD ProbeTec ET MP reagenspakker) kan opbevares ved 2-33 C De uåbnede reagenspakker må ikke anvendes efter udløbsdatoen Så snart en pose er åbnet, er mikrobrøndene stabile i 8 uger, hvis de genlukkes korrekt, eller indtil udløbsdatoen, alt efter hvad der kommer først Må ikke fryses BD ProbeTec ET Respiratory and Media Diluent and Control Kit (CF/LP/MP) kan opbevares ved 2-33 C Reagenserne må ikke anvendes efter udløbsdatoen Må ikke fryses BD ProbeTec ET Swab Diluent and Control Kit (tcf/tmp) kan opbevares ved 2-33 C Reagenserne må ikke anvendes efter udløbsdatoen Må ikke fryses Advarsler og forholdsregler Til in vitro diagnostik 1 Patogene mikroorganismer, herunder hepatitisvira og humant immundefekt virus, kan forekomme i kliniske prøver "Standard forholdsregler" 5-8 og institutionelle retningslinier skal følges ved håndteringen af alle materialer, der er kontamineret med blod og andre legemsvæsker 2 BD ProbeTec ET Swab Diluent og Respiratory og Media Diluent indeholder dimethylsulfoxid (DMSO) DMSO er skadelig ved indånding, ved hudkontakt eller ved indtagelse Undgå kontakt med hud og øjne og brug altid handsker ved håndtering Kommer stof i øjnene, skylles straks grundigt med vand og læge kontaktes Kommer stof på huden, vaskes straks med store mængder vand 3 Selv om specielle arbejdsområder ikke kræves, fordi BD ProbeTec ET designet nedsætter muligheden for kontaminering med forstærket DNA-fragment i testmiljøet, er andre forholdsregler til kontrol af kontaminering nødvendige, især for at undgå kontaminering af præparater under bearbejdning 4 Reagensposer indeholdende ubrugte primermikrobrønde og amplifikationsmikrobrønde SKAL lukkes omhyggeligt igen efter åbning Bekræft, at der findes et tørremiddel, inden reagensposerne lukkes 5 Pladen indeholdende amplifikationsmikrobrønde SKAL være korrekt lukket med amplifikationsforsegleren, inden pladen flyttes fra BD ProbeTec ET primer- og opvarmerapparat til BD ProbeTec ET instrumentet Forsegling sikrer en lukket reaktion til amplifikation og påvisning og er nødvendig for at undgå kontaminering med amplifikationsprodukter af instrumentet og arbejdsområdet Forseglingsmaterialet må ikke på noget tidspunkt fjernes fra mikrobrønde 6 Primermikrobrønde med residualvæske (efter overførsel af væske fra primermikrobrønde til amplifikationsmikrobrønde) udgør en kilde til kontaminering af fokus Forsegl omhyggeligt primermikrobrønde med en pladeforsegler inden bortskaffelse 7 For at forhindre kontaminering af arbejdsmiljøet med amplifikationsprodukter bruges engangsposerne, der følger med reagenspakkerne, til at kassere testede amplifikationsmikrobrønde Sørg for, at poserne er korrekt lukket inden bortskaffelse 8 SKIFT HANDSKER ved specificerede trin under bearbejdning af prøver og analyseproceduren for at undgå krydskontaminering af præparater Hvis handsker får kontakt med præparater, skiftes handskerne straks for at undgå at kontaminere andre præparater 9 I tilfælde af, at arbejdsområdet eller udstyret kontamineres med prøver eller kontroller, rengøres det kontaminerede område grundigt med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox, og der skylles grundigt med vand Lad overfladen tørre fuldstændigt, inden De fortsætter med yderligere testning 1 Brug kun BD ProbeTec ET pipettor og BD ProbeTec ET pipettespidser til overførsel af bearbejdede prøver til primermikrobrønde og overførsel af prøver fra primermikrobrøndene til amplifikationsmikrobrøndene 11 Anvend fastlagt laboratoriepraksis ved bortskaffelse af brugte pipettespidser, prøveglas, primermikrobrønde og andre engangsartikler Bortskaf engangsartikler omhyggeligt Forsegl og kassér affaldsbeholdere, når de er ¾ fyldte eller dagligt (alt efter hvad der kommer først) 12 Mikrobrønde, kontroller eller bearbejdningsreagenser fra kits med forskellige lotnumre må ikke ombyttes eller blandes 13 Kontakt Teknisk service i tilfælde af en usædvanlig situation, som for eksempel, hvis der spildes ned i BD ProbeTec ET instrumentet, eller kontaminering med DNA, som ikke kan fjernes ved hjælp af rengøring PODNING OG TRANSPORT 1 Prøvetagning Præparater skal opsamles som anbefalet i Clinical Microbiology Procedures Handbook 9 (håndbogen om kliniske mikrobiologiprocedurer) eller Deres laboratoriemanual BBL CultureSwab EZ (BD kat nr 22144) bør anvendes til indsamling af svælgpodninger opbevaret uden transmedium 2

3 2 Prøveopbevaring og -transport Svælgpodninger (uden transportmedium): Præparater kan opbevares/transporteres ved C i højst 2 dage Præparater kan opbevares i køleskab ved 2-8 C i højst 3 dage Præparater kan opbevares ved -2 C eller derunder til opbevaring i højst 14 uger Svælgpodninger i 2SP medium: 9 Præparater skal nedkøles ved 2-8 ºC øjeblikkeligt Transportér på vådis eller kølepakker, hvis transportiden er længere end få minutter Præparater skal opbevares ved 2-8 C i højst 2 dage Præparater, som kræver længere opbevaringsperioder, skal opbevares ved -7ºC TESTPROCEDURE Der henvises til brugermanualen til BD ProbeTec ET systemet for specifikke instruktioner i betjening og vedligeholdelse af komponenterne i systemet A Klargøring af instrument: 1 Der skal være tændt for strømmen til instrumentet, og det skal have tid til at varme op, inden analysen påbegyndes a Lyseringsvarmeapparatet og primer- og opvarmerapparat kræver ca 9 min til opvarmning og stabilisering Indstillingspunktet til lyseringsvarmeapparatet er 114 C Indstillingspunktet for primerkomponenten i primer- og opvarmerapparatet er 72,5 C Indstillingspunktet for opvarmerkomponenten i primer- og opvarmerapparatet er 54 C b BD ProbeTec ET instrumentet er softwarestyret og kræver ca 3 min til opvarmning 2 Varmeapparatets temperaturer skal kontrolleres inden analysen påbegyndes Notér temperaturerne på BD ProbeTec ET System Maintenance Log (BD ProbeTec ET systemets vedligeholdelsesjournal) a Lyseringsvarmeapparat Fjern plasticlåget og lad temperaturen komme i ligevægt i 15 min Termometret skal vise mellem C b Primer- og opvarmerapparat Termometret i primervarmerapparatet skal vise mellem C Termometret i opvarmerapparatet skal vise mellem 53,5-54,5 C 3 Kontrollér temperaturen, der vises på BD ProbeTec ET skærmbilledet Temperaturen skal læse mellem 47,5-55, C Notér temperaturerne på BD ProbeTec ET System Maintenance Log B Pipettor: Der henvises til brugermanualen til BD ProbeTec ET systemet for en detaljeret forklaring på tastaturfunktionerne i BD ProbeTec ET Pipettoren Desuden skal BD ProbeTec ET pipettoren rengøres efter hver brug Der henvises til repræsentanten fra Teknisk service for vejledning om korrekt rengøring og vedligeholdelse af BD ProbeTec ET pipettoren Følgende programmer er påkrævet til udførelse af BD ProbeTec ET MP Assay (BD ProbeTec ET MP analysen) Program 1 overfører væske fra de bearbejdede prøver til MP primermikrobrøndene Program 5 overfører væske fra MP primermikrobrøndene til MP amplifikationsmikrobrøndene Programmér pipettoren som følger: Program 1: 1 TÆND for pipettoren Pipettoren vil bippe en gang, blinke "ZERO" (nul), blinke softwareversionsnummer og bippe en gang til 2 Tryk på den blå "Prog" (Program) tast Tryk på "Vol" (Volumen) tasten, indtil "1" vises for at vælge Program 1 Tryk på "Enter" 3 Tryk på "Prog" (Program) tasten for at gå i programmeringsmodus Mens De trykker på "Prog" (Program) tasten, trykker De samtidigt på specialfunktionstasten med en pipettespids eller enden af en papirclips 4 Tryk på "Fill" (Fyld) Tryk på pil-op-tasten, indtil der står 2 Tryk på "Enter" 5 Tryk på "Disp" (Dispensér) Tryk på pil-op-tasten, indtil der står 15 Tryk på "Enter" 6 Tryk på "Enter" endnu en gang for at gemme programmet og afslutte De skulle høre et "bip," der angiver, at programmeringen er færdig 7 Bekræft programmet ved at trykke på udløseren for at gå frem gennem hvert punkt Efterhånden som De går gennem hvert punkt, indstiller De hastigheden på fyld/dispensér med "Vol" (Volumen) tasten Hastighedsindikatoren fremkommer ved hvert punkt Brug "Vol" (Volumen) tasten til at justere hastighedsindikatoren til at vise 2 firkanter for "Fill" (Fyld) og "Disp" (Dispensér) punkterne Program 5 1 Tryk på "Prog" (Program) tasten Tryk på "Vol" (Volumen) tasten, indtil "5" vises for at vælge Program 5 Tryk på "Enter" 2 Tryk på "Prog" (Program) tasten og hold den nede for at gå i programmeringsmodus Mens De trykker på "Prog" (Program) tasten, trykker De samtidigt på specialfunktionstasten med en pipettespids eller enden af en papirclips 3 Tryk på "Fill" (Fyld) Tryk på pil-op-tasten, indtil der står 1 Tryk på "Enter" 4 Tryk på "Disp" (Dispensér) Tryk på pil-op-tasten, indtil der står 1 Tryk på "Enter" 5 Tryk på "Mix" (Bland) Tryk på pil-op-tasten, indtil der står 5 Tryk på "Enter" 6 Tryk på "Enter" endnu en gang for at gemme programmet og afslutte De skulle høre et "bip," der angiver, at programmeringen er færdig 7 Bekræft programmet ved at trykke på udløseren for at gå frem gennem hvert punkt Efterhånden som De går gennem hvert punkt, indstiller De hastigheden på fyld/dispensér/bland med "Vol" (Volumen) tasten Hastighedsindikatoren fremkommer ved hvert punkt Brug "Vol" (Volumen) tasten til at justere hastighedsindikatoren til at vise 2 firkanter for funktionerne fyld og dispensér Brug "Vol" (Volumen) tasten til at justere hastigheden for blandingen, så den viser 3 firkanter 3

4 Programgennemgang Programmerne skal gennemgås, inden proceduren påbegyndes Sæt pipettoren til TÆNDT for at gennemgå programmet Tryk på den blå "Prog" (Program) tast Tryk på "Vol" (Volumen) tasten, indtil det rette programnummer (1 eller 5) vises Tryk på "Enter" tasten Brug pipetteringsudløseren for at gå frem punkt for punkt gennem programmet Program 1: Dette program aspirerer 2 µl; dispenserer 15 µl i MP mikrobrønden Pipettorens display skal vise som følger: Fill 2 µl SII (Fyld 2 µl SII ) Dispense 15 µl SII (Dispensér 15 µl SII ) Program 5: Dette program fylder 1 µl; dispenserer 1 µl; og blander 5 µl tre gange Pipettorens display skal vise som følger: Fill 1 µl SII (Fyld 1 µl SII ) Dispense 1 µl SII (Dispensér 1 µl SII ) Mix 5 µl SIII (Bland 5 µl SIII ) Zero (nul) (blinker skiftevis) C Pladelayout: Pladelayoutrapporten genereres fra BD ProbeTec ET instrumentet efter analysetype, præparatidentifikation, kontrollotnumre, og kitlotnumre logges ind i systemet Pladelayoutrapporten viser den fysiske layout af præparater og kontroller for hver plade, der skal testes Denne orientering bruges til både primermikrobrøndpladen og amplifikationsmikrobrøndpladen For MP analysen er primermikrobrøndene helt rødbrune mikrobrøndstrimler Amplifikationsmikrobrøndene er rødbrune mikrobrøndstrimler med striber D Svælgpodning (uden transportmedium) præparatbearbejdning: NOTER: Lad BD ProbeTec ET Swab Diluent (tcf/tmp) opnå stuetemperatur og bland forsigtigt ved at vende den op og ned inden brug Afmål den nødvendige mængde BD ProbeTec ET Swab Diluent (tcf/tmp) ned i en ren beholder Den nødvendige mængde bestemmes ved at bruge 1 ml for hvert præparat og tilsætte yderligere 1-2 ml, så det er let at pipettere Undgå kontaminering af fortynderen - Hæld ikke tiloversbleven fortynder tilbage i flasken 1 Sæt mærkat på et 4 ml prøveglas for hver podepind, der skal bearbejdes 2 Lad præparaterne nå stuetemperatur 3 Pipettér 1 ml BD ProbeTec ET Swab Diluent (tcf/tmp) i hvert prøveglas 4 Indsæt podepinden Bland ved at slynge podepinden i fortynderen i 5-1 s 5 Tryk podepinden af langs indersiden på glasset, således at væsken løber tilbage til bunden af glasset 6 Fjern podepinden forsigtigt for at undgå at stænke BEMÆRK: Små dråber kan kontaminere arbejdsområdet 7 Sæt podepinden tilbage i transportglasset og kassér det 8 Sæt hætten godt fast på glasset 9 Vortex glasset i 5 s 1 Gentag punkt 3-9 for yderligere svælgpodninger 11 Præparér kontrollerne Se Præparering af svælgpodningskontroller (Afsnit F) 12 Anbring ved hjælp af pladelayoutrapporten prøver og kontroller i rækkefølge i lyseringsstativet 13 Lås prøverne på plads i BD ProbeTec ET Lysing Rack 14 Sæt BD ProbeTec Lysing Rack i BD ProbeTec ET Lysing Heater 15 Opvarm prøverne i 1 min 16 Fjern efter 1 min BD ProbeTec ET Lysing Rack fra BD ProbeTec ET lyseringsvarmeapparatet og lad det køle ned i mindst 15 min Bank stative let på et bord for at samle så meget kondensat som muligt i bunden af glasset BEMÆRK: Efter lysering af prøver: a De kan opbevares ved C i op til 6 h og kan testes uden relysering b De kan opbevares i op til 3 dage ved 2-8 C Prøver skal vortexes og lyseres igen inden testning c De kan opbevares i op til 14 uger ved -2 C Prøver skal optøs ved stuetemperatur, vortexes og lyseres igen inden testning 17 Præparaterne er klar til Testing Procedure for the BD ProbeTec ET MP Assay (BD ProbeTec ET MP analysen) (Afsnit G) E Svælgpodning (2SP medium) præparatbearbejdning Procedurerelaterede bemærkninger: Skift pipettespidser mellem alle væskeoverførsler Det anbefales at bruge spidser med aerosolbarriere Lad BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) opnå stuetemperatur og bland forsigtigt ved at vende den op og ned inden brug Afmål den nødvendige mængde BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) ned i en ren beholder Den nødvendige mængde bestemmes ved at bruge,4 ml for hvert præparat og tilsætte yderligere 1-2 ml, så det er let at pipettere Undgå kontaminering af fortynderen - Hæld ikke tiloversbleven fortynder tilbage i flasken 1 Lad præparaterne nå stuetemperatur 2 Mærk et 2 ml glas med skruelåg for hvert præparat, der skal testes 3 Overfør 4 µl luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) til hvert glas med skruehætte Følgende trin 4-6 skal udføres i et biologisk sikkerhedsskab (BSC): 4 Vortex præparaterne i 5-15 s for at blande grundigt 4

5 5 Pipettér 2 µl af præparatet i det mærkede glas BEMÆRK: Hvis præparatvolumen er mindre end 2 µl (prøven skal være mindst 1 µl), bringes volumen til 2 µl ved brug af molekulært, biologisk vand 6 Skift handsker efter tilsætning af præparater BEMÆRK: Fyld et vandbad med destilleret vand og bring badet i kog, inden der fortsættes til trin 7 7 Vortex i 5 s 8 Præparér kontrollerne Se Præparering af 2SP mediekontrol (Afsnit F) 9 Overfør præparater og kontroller til et kogende stativ 1 Anbring det kogende stativ i det kogende vandbad i 1 min 11 Når de 1 min er gået, tages det kogende stativ op og glassene får lov at afkøle ved stuetemperatur i mindst 15 min ADVARSEL: Vær forsigtig med at undgå forbrændinger fra det kogende vand, vandbadstativet eller overfladen af vandbadet, der kan være meget varme 12 Efter afkøling centrifugeres (16 x g) i ca 5 s BEMÆRK: Efter kogning af prøver: De kan opbevares ved C i op til 6 h og kan testes uden genkogning De kan opbevares i op til 3 dage ved 2-8 ºC Prøver skal vortex og lyseres igen inden testning De kan opbevares i op til 14 uger ved -2ºC Prøver skal optøs ved stuetemperatur, vortex og koges igen inden testning 13 Præparaterne er klar til Testing Procedure for the BD ProbeTec ET MP Assay (BD ProbeTec ET MP analysen) (Afsnit G) F Kontrolpræparation: Præparation af svælgpodningskontrol 1 For hver kørsel (plade), der skal testes, klargøres et negativt kontrolglas (tcf/tmp) og et positivt kontrolglas (tcf/tmp) Hvis en plade indeholder mere end et reagenspakke-lotnummer, skal kontroller testes med hvert lot 2 Tag hætten af det negative kontrolglas (tcf/tmp) 3 Brug en ny pipettespids og tilsæt 1 ml podningsfortynder 4 Sæt hætten godt fast på glasset 5 Tag hætten af det positive kontrolglas (tcf/tmp) 6 Brug en ny pipettespids og tilsæt 1 ml podningsfortynder 7 Sæt hætten godt fast på glasset 8 Vortex kontrolglassene i 5 s 9 Kontrolglassene er klar til at blive lyseret Se Svælgpodningsbearbejdning (Afsnit D) Præparation af 2SP mediekontrol: 1 For hver kørsel (plade), der skal testes, klargøres et negativt kontrolglas (CF/LP/MP) og et positivt kontrolglas (CF/LP/MP) Hvis en plade indeholder mere end et reagenspakke-lotnummer, skal kontroller testes med hvert lot 2 Vend forsigtigt luftvejspræparat- og mediefortynder op og ned inden brug 3 Tag hætten af det negative kontrolglas (CF/LP/MP) 4 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 2 µl molekulært, biologisk vand 5 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 4 µl luftvejspræparat- og mediefortynder 6 Sæt hætten godt fast på glasset 7 Tag hætten af det positive kontrolglas (CF/LP/MP) 8 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 2 µl molekulært, biologisk vand 9 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 4 µl luftvejspræparat- og mediefortynder 1 Sæt hætten godt fast på glasset 11 Vortex kontrolglassene 5 s 12 Kontrollerne er klar til at blive kogt Se Bearbejdning af 2SP mediepræparat (Afsnit F) G Testningsprocedure for BD ProbeTec ET MP assay: BEMÆRK: Inden udførelse af testningsproceduren arrangeres de bearbejdede præparater og kontroller i et stativ, der kan håndtere 2 ml eller 4 ml prøveglas, som fx BD ProbeTec ET 2 ml Sample Tube Rack eller BD ProbeTec ET Lysing Rack, som begge er kompatible med BD ProbeTec ET Pipettor 1 Fjern og bortskaf hætterne fra de afkølede præparater og kontroller 2 SKIFT HANDSKER, inden De fortsætter for at undgå kontaminering 3 Klargør primermikrobrøndpladen ved hjælp af pladelayoutrapporten - se Pladelayout (Afsnit C) 4 Forsegl mikrobrøndposerne igen som følger: a Anbring posen på en plan flade Hold den åbne ende fladt med den ene hånd b Med påføring af tryk køres fingeren hen over ydersiden af forseglingen fra den ene kant af posen til den anden c Se efter for at sikre, at posen er forseglet 5 Vælg Program 1 på BD ProbeTec ET pipettoren 6 Saml pipettespidserne op Udvid BD ProbeTec ET System Pipettor ved at trække afstandsknappen helt ud BEMÆRK: Sørg for, at spidserne er sat forsvarligt på pipettoren, så lækage undgås 7 Aspirér 2 µl fra den første kolonne af prøver 8 Pres forsigtigt pipettoren sammen, lad pipettespidser berøre siderne af brøndene og dispensér 15 µl i den tilsvarende kolonne af primermikrobrønde (1 A-H) BEMÆRK: Pipettoren må ikke presses sammen over prøver eller mikrobrønde, da dette kan give kontaminering Pludselige bevægelser kan give dråber eller aerosoler 5

6 9 Kassér spidserne Tryk ned på pipetteringsudløseren for at nulstille pipettoren BEMÆRK: Kassér spidserne forsigtigt for at undgå små dråber eller aerosoler, hvilket kan kontaminere arbejdsområdet 1 Saml nye spidser op, udvid pipettoren og aspirér 2 µl fra den anden kolonne af prøver 11 Pres forsigtigt pipettoren sammen, lad pipettespidser berøre siderne af brøndene og dispensér 15 µl i den tilsvarende kolonne af primermikrobrønde (2 A-H) 12 Kassér spidserne 13 Fortsæt med at overføre de resterende prøver til kørslen 14 Dæk primermikrobrøndpladen med primerlåget og lad pladen inkubere ved stuetemperatur i mindst 2 min (Kan inkubere op til 6 h) BEMÆRK: Sæt nye hætter på de bearbejdede prøver SKIFT HANDSKER 15 Når inkubationen af primeren er færdig, klargøres amplifikationsmikrobrøndpladen Konfigurér amplifikationsmikrobrønden i en plade, der matcher pladelayoutrapporten (samme som primerpladen) Forsegl mikrobrøndposerne igen som beskrevet i punkt 4 16 Tag låget af primermikrobrøndpladen og overfør pladen til primervarmeapparatet Anbring STRAKS amplifikationsbrøndpladen i opvarmerapparatet for at forvarme 17 Indstil uret til 1 min (BEMÆRK: Korrekt tid er vigtig for dette punkt ) 18 Ved afslutningen af de 1 min (±1 min) inkubation vælges Program 5 på pipettoren 19 Saml pipettespidser op og overfør 1 µl fra kolonne 1 i primermikrobrøndenpladen til kolonne 1 i amplifikationsmikrobrøndpladen Lad pipettespidserne berøre siderne af brøndene og dispensér væsken Lad efter dispenseringen pipettoren blande væsken i brøndene automatisk Løft forsigtigt pipettoren væk fra pladen Undgå berøring af andre brønde 2 Kassér spidserne Saml nye spidser op og fortsæt med at overføre reaktionsblandingen fra primermikrobrøndene til amplifikationsmikrobrøndene, kolonne efter kolonne, idet der bruges nye spidser for hver kolonne 21 Når den sidste kolonne er blevet overført, fjernes bagbeklædningen fra en amplifikationsforsegler (én amplifikationsforsegler (1/2) vil dække op til 6 kolonner Hvis pladen overstiger 6 kolonner, SKAL et helt forseglerark bruges) Hold forsegleren i kanterne og læg den over mikrobrøndene Brug retningslinierne på opvarmerapparatet for at hjælpe Dem med at lægge forsegleren over Tryk nedad på forsegleren for at sikre, at alle mikrobrønde er fuldstændig forseglet 22 Ved BD ProbeTec ET betjeningspanelen flyttes bæreren ud og døren åbnes og pladelåget løftes Overfør STRAKS (inden for 3 s) den forseglede amplifikationsmikrobrøndplade til BD ProbeTec ET instrumentet og start kørslen (Der henvises til brugermanualen til BD ProbeTec ET systemet for detaljerede instruktioner ) 23 Når kørslen er startet, fortsættes med følgende del af rengøringsproceduren: a Forsegl primermikrobrøndene med amplifikationsforsegleren og fjern pladen fra primer- og opvarmerapparatet ADVARSEL: Temperaturen er over 7 C - Brug den varmebestandige handske til at fjerne pladen b Lad pladen afkøle på bordet i 5 min c Fjern de forseglede primermikrobrønde fra pladen ved at holde fat i begge sider af forsegleren og løfte brøndene lige op som en enhed Anbring de forseglede mikrobrønde i en engangspose og forsegl d Rengør metalpladen: Skyl pladen med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit - Alconox opløsning Skyl pladen med vand Pak pladen ind i et rent papirhåndklæde og lad den tørre, inden den tages i brug igen 24 Når kørslen er færdig, vil der genereres en udskrift af testresultaterne 25 Flyt pladebæreren ud af platformen, åbn døren og fjern pladen Luk døren og sæt pladeplatformen tilbage ind i instrumentet 26 Fjern de forseglede amplifikationsmikrobrønde fra pladen FORSIGTIG: Forseglingsmaterialet må ikke fjernes fra mikrobrøndene De forseglede mikrobrønde kan let fjernes som en enhed ved at holde fat i top og bund af forsegleren og løfte lige op og ud af pladen Anbring de forseglede mikrobrønde i engangsposen Forsegl posen 27 Rengør metalpladen: Skyl pladen med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit - Alconox opløsning Skyl pladen med vand Pak pladen ind i et rent papirhåndklæde og lad den tørre, inden den tages i brug igen 28 Ved dagens sidste kørsel udføres følgende rengøringsprocedurer: a Gennemvæd papirhåndklæder eller gazestykker med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox opløsning og påfør det på bordflader og på de udvendige flader af lyseringsvarmeapparetet, primer- og opvarmerapparatet, prøveglasstativet, vandbadet, centrifuge og BD ProbeTec ET instrument Lad opløsningen sidde på overfladerne i 2-3 min Gennemvæd papirhåndklæder eller gazestykker med vand og aftør rengøringsopløsningen Skift håndklæder eller gaze hyppigt, når der påføres rengøringsopløsning og skylles med vand Fugt papirhåndklæder eller gazestykker med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox og aftør pipettorens håndtag (KUN HÅNDTAGET) Efter 2-3 min aftørres håndtaget med papirhåndklæder eller gazestykker fugtet med vand b Læg lyseringsstativet, sokkel til lyseringsstativ og låg til lyseringsstativ og plader eller vandbadets stativ i 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox i 1-2 min Skyl grundigt med vand og lad det lufttørre c Genoplad pipettoren d Bortskaf den forseglede engangspose og biofareposen i overensstemmelse med fastlagte procedurer for bortskaffelse af kontamineret affaldsmateriale 29 Udfør de følgende procedurer mindst én gang om ugen: a Bortskaf vandet i vandbadene b Rengør vandbadene med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox Skyl grundigt med vand og lad dem lufttørre c Fyld op med destilleret vand 6

7 Kvalitetskontrol Kvalitetskontrol skal udføres i overensstemmelse med gældende lokale og/eller nationale krav eller akkrediteringskrav samt laboratoriets standardkvalitetskontrolprocedurer Det anbefales at læse de relevante CLSI (tidligere NCCLS)-retningslinjer og CLIA-regulativer mht passende kvalitetskontrolprocedurer Podningsfortynder og kontroller leveres sammen i podningsfortynder og kontrolkittet (tcf/tlp/tmp) Luftvejspræparat- og mediefortynder og kontroller leveres sammen i Luftvejspræparat- og mediefortynder og kontrolkit (CF/LP/MP) En positiv og en negativ kontrol skal inkluderes i hver prøvetype / analysekørsel på en plade og for hvert nyt reagenskit-lotnummer Kontroller kan placeres tilfældigt Den positive kontrol overvåger for væsentlige reagensfejl Den negative kontrol overvåger for reagens- og/eller miljømæssig kontaminering De positive og negative kontroller skal teste som henholdsvis positiv og negativ for at rapportere prøveresultater Hvis kontrollerne ikke præsterer som forventet, betragtes analysekørslen som ugyldig og instrumentet vil ikke rapportere patientresultater Hvis kørselskontrollerne ikke giver de forventede resultater, gentages hele kørslen med et nyt sæt kontroller, nye mikrobrønde og de bearbejdede præparater Hvis der ikke er nok af bearbejdet præparat for en gentagen test, genbearbejdes en anden afmåling af det primære præparat Hvis de gentagede kontroller ikke giver de forventede resultater, kontaktes Teknisk service (se "Tolkning af resultater") En intern amplifikationskontrol (IAC) er tørret i primermikrobrønden IAC indeholder nukleinsyrefokus, som forstærkes ved tilstedeværelsen af prøvematricen IAC er designet for at bekræfte gyldigheden af amplifikationsreaktionen og for at identificere potentiel hæmning fra det bearbejdede præparat Præparatbearbejdningskontroller Præparatbearbejdningskontroller kan testes i overensstemmelse med kravene fra relevante akkrediteringsorganisationer Positive og negative kontroller bør teste hele analysesystemet Til dette formål kan kendte positive præparater tjene som kontroller ved at blive bearbejdet og testet sammen med ukendte præparater Præparater, der bruges som bearbejdningskontroller, kan lagres, bearbejdes og testes i henhold til produktindlægssedlen Positive og negative kontroller er udformet til at kontrollere for effektiviteten af præparatbearbejdningsprocedurerne, når svælgpodninger testes (enten med eller uden transportmedium; podningskontrol og luftvejspræparat- og mediekontroller, henholdsvist), da kontrollerne bearbejdes på samme måde som selve præparaterne Overvågning af tilstedeværelsen af kontaminering med DNA Mindst en gang om måneden bør følgende testprocedurer udføres for at overvåge arbejdsområdet og udstyrsflader for tilstedeværelse af kontaminering med DNA Overvågning af miljøet er væsentligt for at påvise kontaminering, inden der opstår et problem 1 For hvert område*, der skal testes, bruges en BBL CultureSwab EZ swab 2 Mærk et prøveglas for hvert område, som skal podes, og pipettér 1 ml podningsfortynder (tcf/tmp) over i hvert glas 3 Dyp den første podepind i fortynderen, og aftør det første område med en bred, fejende bevægelse 4 Bland podepinden i fortynderen, tryk podepinden af, sæt hætten tilbage på glasset og vortex i 5 s Kassér podepindene 5 Gentag for hvert podet område 6 Anbring glassene i lyseringsstativet og opvarm i lyseringsvarmeapparatet i 1 min Fjern stativet fra varmeapparatet og lad prøverne køle ned i 15 min, inden der fortsættes 7 Mens glassene varmes op, bruges rene håndklæder vædet med vand til at fjerne rester af bufferblandingen fra de podede overflader 8 Når prøverne er afkølet, fortsættes med Testningsprocedure for BD ProbeTec ET MP analysen (Afsnit G) *Anbefalede områder, der skal testes, omfatter: Overflader på lyseringsstativet, lyseringsvarmeapparatet, vandbadstativet, mikrocentrifugen, primer- og opvarmerapparatet, sorte mikrobrøndplader, pipettorhåndtaget, instrumentets berøringstaster, instrumentets tastatur, de tørre overflader på vandbadene, overfladerne på prøvestativerne og arbejdsbordene, herunder områder hvor prøver bearbejdes Hvis et område giver et positivt resultat, rengøres området med frisk 1 % (v/v) natriumhypochlorit med Alconox Sørg for, at hele området er vædet med rengøringsopløsningen og lad rengøringsopløsningen få lov at blive på fladen i mindst 2 min, eller indtil tørhed opnås Fjern overskydende rengøringsopløsning med et rent håndklæde, hvis det er nødvendigt Aftør området med et rent håndklæde vædet med vand og lad fladen tørre Test området igen Gentag, indtil der foreligger negative resultater Hvis der bliver ved med at være kontaminering, kontaktes Teknisk service for yderligere information TOLKNING AF TESTRESULTATER Tilstedeværelsen eller fraværet af M pneumoniae DNA bestemmes ved at beregne PAT (Passes After Threshold) scoringer for prøven baseret på forudbestemte tærskelværdier PAT scoren er en metrik, der anvendes til at vurdere signalstørrelsen som et resultat af reaktionen Ved denne metrik indikerer store tal, at tærsklen blev nået i de tidlige faser af amplifikation, mens små tal betyder, at tærsklen blev nået senere i reaktionsforløbet PAT scoringens størrelse antyder ikke niveauet af M pneumoniae DNA i præparatet 7

8 Hvis analysekontrolresultater ikke er som forventet, skal patientresultaterne ikke rapporteres Se afsnittet Kvalitetskontrol for forventede kontrolværdier Rapporterede resultater bestemmes som følger: PAT score MP fokus IAC fokus Resultat Tolkning Rapport > > eller = Positiv M pneumoniae DNA påvist ved SDA = > Negativ M pneumoniae DNA ikke påvist ved SDA Positiv for M pneumoniae arter, antydende aktuel eller nylig infektion Formodet negativ for M pneumoniae Infektion på grund af M pneumoniae kan ikke udelukkes, da niveauet af tilstedeværende DNA kan være under testens påvisningsgrænse = = Inkonklusivt Amplifikationskontrol inhiberet Yderligere testning nødvendig for tolkning af resultat a a Gentag BD ProbeTec ET MP Assay fra det bearbejde prøveglas Hvis der ikke er tilstrækkelig volumen tilbage fra den bearbejdede prøve, gentages fra det oprindelige præparat eller anmod om et nyt præparat, hvis det er nødvendigt Hvis resultatet fra gentagelsen er positivt eller negativ, tolkes som beskrevet ovenfor Hvis resultatet gentager som inkonklusivt, bør der anmodes om et nyt præparat Bestemmelse af MP og IAC tærskel: Tærskelværdierne for M pneumoniae fokus DNA og IAC blev initialt fastlagt ved hjælp af Receiver Operator Characteristic kurveanalyse af data opnået fra positive og negative kontroller Disse tærskelværdier blev bekræftet og valideret i kliniske undersøgelser PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER 1 BD ProbeTec ET MP Assay er kun blevet evalueret med svælgpodninger (med og uden 2SP transportmedium) Ydelse med andre præparattyper er ikke blevet bestemt 2 BD ProbeTec ET MP Assay er kun blevet evalueret med patienter på ét år og ældre 3 Som det er tilfældet med mange diagnostiske tests, bør resultater fra BD ProbeTec ET MP Assay tolkes sammen med andre laboratorie- og kliniske data, som er til rådighed for lægen Et positivt resultat for denne analyse i kombination med andre kliniske tegn og symptomer og diagnostiske tegn på pneumoni er indikative for Mycoplasma pneumoniae-associeret pneumoni 4 Et negativt testresultat bør ikke anvendes til at udelukke diagnosen af Mycoplasma pneumoniae-associeretpneumoni, fordi testresultater kan være påvirket af ukorrekt opsamling af præparatet, tekniske fejl, sammenblanding af præparater, samtidig antibiotikabehandling eller tilstedeværelsen af en mængde Mycoplasma pneumoniae-dna i præparatet, som ligger under testens analytiske sensitivitet Yderligere diagnostiske testprocedurer kan derfor være nødvendige, såsom dyrkning, serologi og/eller en valideret nuklein-forstærkningstest 5 BD ProbeTec ET MP Assay kan ikke bruges til at vurdere terapeutisk succes eller fiasko, da nukleinsyrer fra M pneumoniae kan persistere efter animikrobiel behandling 6 Optimal ydelse af denne analyse kræver adækvat præparatopsamling og -håndtering 7 Brug af BD ProbeTec ET MP Assay begrænses til personale, som er blevet uddannet i analyseproceduren og BD ProbeTec ET systemet 8 BD ProbeTec ET MP Assay giver kvalitative resultater Der kan ikke bestemmes en sammenhæng mellem størrelsen af PAT scoren og mængden af M pneumoniae DNA i en prøve FORVENTEDE RESULTATER A: Prævalens Hypigheden af positiviteten, der kan observeres i M pneumoniae testning, vil variere afhængigt af prøvetagningsmetoden, patientens alder, tilstedeværelse af underliggende risikofaktorer, geografisk beliggenhed, og vigtigst af alt, den lokale sygdomsprævalens B: Fordeling af Pat scoringshyppighed Prospektiv undersøgelse Bemærk: Alle BD ProbeTec ET MP Assay resultater blev sammenlignet med dyrkningsresultatet for en svælgpodning trykket ud i SP-4 transportmedium Se afsnittet Ydelseskarakteristika for en detaljeret beskrivelse af det kliniske undersøgelsesdesign I alt 316 svælgpodninger (opbevaret uden transportmedium) indsamlet prospektivt fra 316 patienter på syv kliniske steder i USA og Canada blev testet med BD ProbeTec ET MP Assay En hyppighedsfordeling af de indledningsvise MP PAT scoringer sammenlignet med dyrkningsresultaterne vises i Figur 1 Fireogtres af svælgpodningerne, som blev indsamlet prospektivt og trykket ud i 2SP transportmedium, blev også testet med BD ProbeTec ET MP Assay En hyppighedsfordeling af de indledningsvise MP PAT scoringer sammenlignet med dyrkningsresultaterne vises i Figur 2 Retrospektiv undersøgelse Otteoghalvfjerds retrospektive svælgpodninger, som blev trykket ud i 2SP transportmedium og opbevaret frosne, blev testet med BD ProbeTec ET MP Assay på et klinisk sted i Euorpa En hyppighedsfordeling af de indledningsvise MP PAT scoringer sammenlignet med det originale dyrkningsresultat vises i Figur 3 En hyppighedsfordeling for de indledningsvise MP PAT scoringer sammenlignet med det originale PCR resultat fra de samme præparater vises i Figur 4 8

9 Figur 1: Fordeling af hyppighed af MP PAT scoring - Prospektive svælgpodningsresultater (uden transportmedium) sammenlignet med dyrkning Hyppighed (-) (+) Dyrkning - Dyrkning MP PAT scoring Dyrkningsresultat I alt Negativ Positiv I alt Figur 2: Fordeling af hyppighed af MP PAT scoring - Prospektive svælgpodningsresultater (2SP medium) sammenlignet med dyrkning Hyppighed (-) (+) Dyrkning - Dyrkning MP PAT scoring Dyrkningsresultat I alt Negativ Positiv I alt

10 Figur 3: Fordeling af hyppighed af MP PAT scoring - Retrospektive svælgpodningsresultater (2SP medium) sammenlignet med dyrkning (2SP medium) Hyppighed (-) (+) 3 Dyrkning - Dyrkning MP PAT scoring Dyrkningsresultat I alt Negativ Positiv I alt Figur 4: Fordeling af hyppighed af MP PAT scoring - Retrospektive svælgpodningsresultater (2SP medium) sammenlignet med PCR (2SP medium) Hyppighed (-) (+) 4 9 PCR - PCR MP PAT scoring PCR resultat I alt Negativ Positiv I alt C Kontroller Under den kliniske evaluering blev i alt 47 kørsler foretaget ved brug af luftvejs- og mediekontrollerne (CF/LP/MP) Alle kørsler havde acceptable kontrolresultater I alt 78 kørsler blev foretaget ved brug af podningskontrollerne (tcf/tmp) Fejlfrekvensen for kørsler med svælgpodninger var 2,6 % (2/78) To af kørslerne havde kontrolfejl; både de positive og negative kontroller mislykkedes i én kørsel, kun den negative kontrol mislykkedes i den anden kørsel Én fejl var på grund af en procedurefejl, den anden var fordi operatøren undlod at vortexe kontroller, som angivet i BD ProbeTec ET MP Assay package insert (BD ProbeTec ET MP Assay indlægssedlen) PAT scoringerne for CF/LP/MP kontrollerne og tcf/tmp kontrollerne sammenfattes i Tabel 1 og Tabel 2, henholdsvist Tabel 1: Oversigt over MP PAT scoring for luftvejs- og mediekontroller (CF/LP/MP) Kontrol N Område 5 percentil Middel Median 95 percentil MP Negativ 47 MP Positiv 47 21,7 49,9 27,5 42,2 44,2 48,5 1

11 Tabel 2: Oversigt over MP PAT scoring for podningskontroller (tcf/tmp) Kontrol N Område 5 percentil Middel Median 95 percentil MP Negativ 76 MP Positiv ,6 34,7 45,4 46,4 5,4 YDELSESKARAKTERISTIKA Prospektiv undersøgelse BD ProbeTec ET MP analysen blev evalueret prospektivt ved syv kliniske centre i USA og Canada i sæsonen for luftvejslidelser Disse kliniske centre evaluerede svælgpodninger En svælgpodning (CultureSwab EZ opbevaret uden transportmedium) og én polyesterpodepind blev indsamlet fra hver patient Én svælgpodning (CultureSwab EZ - opbevaret uden transportmedium) blev brugt til testning med BD ProbeTec ET MP Assay på BD ProbeTec ET System Efter indsamling blev polyesterpodepinden suspenderet i SP-4 medium for at referere Mycoplasma dyrkning og PCR testning BD ProbeTec ET MP Assay resultater fra alle prospektivt indsamlede præparater blev sammenlignet med resultatet for svælgpodningsdyrkning fra SP-4 medium Et ottende klinisk center blev valgt på baggrund af dets ekspertise med Mycoplasma testningsmetoder til at foretage alle referencetest på alle prospektive præparater i undersøgelsen Polyester-svælgpodning fra hver patient blev trykket ud i SP-4 medium, hvorefter svælgpodning blev kasseret, og den inokulerede glas blev straks opbevaret ved -7 ºC Da de inokulerede, frosne SP-4 glas blev modtaget på referenceteststedet, blev bouillonen straks optøet og serielt fortyndet i SP-4 medium En afmåling af det originale SP-4 præparat og en afmåling af hver fortynding blev inokuleret på SP-4 agar Alle positive SP-4 boulliondyrkninger, samt alle organismer isoleret på SP-4 fraktioneret agarmedium blev bekræftet som M pneumoniae ved brug af en PCR metode for M pneumoniae 16S rrna genet Alle inkonklusive resultater skulle gentages med det bearbejdede præparat eller med det oprindelige præparat (hvis der ikke var tilstrækkeligt bearbejdet præparat til rådighed) Præparater, som gav et initialt og et gentaget (dvs endeligt) inkonklusivt resultat, blev ikke inkluderet i funktionsdataene Et præparat, som gav et initialt inkonklusivt resultat og ved gentagelse gav et positivt eller negativt resultat, blev inkluderet i funktionsdataene Et præparat, som gav et initialt inkonklusivt resultat, og som ikke kunne gentages på grund af en utilstrækkelig præparatmængde, gav fortsat et "initialt inkonklusivt" resultat og blev ikke inkluderet i funktionsdataene I alt 316 svælgpodninger (opbevaret uden transportmedium), som blev indsamlet fra 316 patienter opfyldte inklusionskriterierne for undersøgelsen (dvs radiologisk tegn på pneumoni, patienter på 1 år, på antibiotika 14 dage, gyldige præparattyper opsamlet, relevante referencemetoder udført osv ) Resultater fra svælgpodninger (uden transportmedium) blev sammenlignet med dyrkningsresultaterne fra en prallel svælgpodning trykket ud i SP-4 medium for at estimere ydelseskarakteristika for BD ProbeTec ET MP Assay Et præparat blev betragtet som positivt, hvis dyrkningsresultatet var positivt Et præparat blev betragtet som negativt, hvis dyrkningsresultatet var negativt Resultater for svælgpodningerne (uden transportmedium) sammenfattes i Tabel 3 11

12 Tabel 3: BD ProbeTec ET MP Assay prospektive svælgpodningsresultater (uden transportmedium) sammenlignet med dyrkning Dyrkning Sted MP analyse Positiv Negativ I alt Følsomhed (95 % CI) Specificitet (95 % CI) Inkonklusivt Inkonklusiv Initial/Endelig 1 Positiv Negativ I alt IR 2 Positiv 1 a 1 Negativ I alt IR 3 Positiv Negativ 1 b % (83/83) (95,7 % 1 %) 96,2 % (25/26) (8,4 % 99,9 %) / / I alt % (/1) ( % 97,5 %) 1 % (89/89) (95,9 % 1 %) 1/ c 4 Positiv Negativ I alt IR 6 Positiv Negativ I alt IR 7 Positiv 1 a 1 Negativ I alt IR Samlet Positiv % (21/21) (83,9 % 1 %) 1 % (29/29) (88,1 % 1 %) 98,5 % (66/67) (92 % 1 %) / / / Negativ I alt % (/1) ( % 97,5 %) 99,4 % (313/315) (97,7 % 99,9 %) 1/ IR = Ikke relevant a Direkte PCR testning blev foretaget på de to SP-4 præparater; begge præparater var PCR positive b Direkte PCR testning blev foretaget på SP-4 præparatet; præparaterne var PCR negative c Ét initialt inkonklusivt resultat; præparatet gentestede som negativt Fireogtres svælgpodninger (trykket ud i 2SP medium), som blev indsamlet prospektivt, blev også testet med BD ProbeTec ET MP Assay Resultater fra svælgpodninger trykket ud i 2SP medium blev sammenlignet med dyrkningsresultaterne fra SP-4 medium Et præparat blev betragtet som positivt, hvis dyrkningsresultatet var positivt Et præparat blev betragtet som negativt, hvis dyrkningsresultatet var negativt Resultater fra svælgpodningerne opbevaret i 2SP transportmedium sammenfattes i Tabel 4 12

13 Tabel 4: BD ProbeTec ET MP Assay prospektive svælgpodningsresultater (2SP medium) sammenlignet med dyrkning Dyrkning Sted MP analyse Positiv Negativ I alt Sensitivitet (95 % konfidensinterval) Specificitet (95 % konfidensinterval) Inkonklusiver Initial/Endelig 2 Positiv 1 a 1 Negativ I alt 3 3 IR 3 Positiv Negativ 1 b ,7 % (29/3) (82,8 % 99,9 %) 1/1 I alt % (/1) ( % 97,5 %) 1 % (33/33) (89,4 % 1 %) / Samlet Positiv 1 1 Negativ I alt % (/1) ( % 97,5 %) 98 4 % (62/63) (91,5 % 1 %) 1/1 c IR = Ikke relevant a Direkte PCR testning blev foretaget på SP-4 præparatet; præparatet var PCR positivt b Direkte PCR testning blev foretaget på SP-4 præparatet; præparatet var PCR negative c Ét initialt inkonklusivt resultat; præparatet gentestede som inkonklusivt Èn af podningerne indsamlet fra hver patient optaget i BD ProbeTec ET MP Assay undersøgelsen blev trykket ud i SP-4 medium til dyrkning og PCR testning Alle positive, afvigende (MP Assay-positiv, kultur-negativ eller omvendt) og cirka 1 % af de konkordante negative præparater blev testet ved brug af en etableret C M pneumoniaespecific PCR metode Al PCR testning blev foretaget på et klinisk sted I alt 21 patienter havde præparater, som blev testet med en M pneumoniae PCR analyse Tabel 5 sammenfatter de samlede resultatskombinationer fra dyrkning, BD ProbeTec ET MP Assay og PCR analysen Tabel 5: Oversigt over prospektive patienttestmetoder og MP analyseresultater BD ProbeTec ET MP Assay resultater Dyrkningsresultat Svælgpodepind 2SP medium PCR resultat Patientantal Ι IR IR 242 IR 53 IR 1 7 IR IR 1 Forklaring: IR = Ikke relevant + angiver et positivt resultat angiver et negativt resultat Ι = Intermediær Retrospektiv undersøgelse På grund af det lave antal positive præparater i den prospektive undersøgelse, identificerede BD et sted i Europa, som havde 78 svælgpodningspræparater udtrykt og opbevaret frosne i 2SP transportmedium Disse retrospektive præparater blev opbevaret i frossen tilstand i op til otte år, med størstedelen af præparaterne (69 %; 54/78) opbevaret i under tre år De 78 retrospektive præparater blev karakteriseret af en kombination af dyrkning og PCR eller kun PCR Af de 78 præparater havde alle PCR resulater (63 positive, 15 negative) Af de 63 PCR positive præparater havde 19 præparater positive M pneumoniae dyrkningsresultater For de resterende 44 PCR positive præparater og 15 PCR negative præparater blev ingen dyrkningstestning foretaget BD ProbeTec ET MP Assay havde 84,2 % (16/19) positiveprocentvis overensstemmelse med retrospektive dyrkningsresultater Et præparat blev betragtet som positivt, hvis enten dyrkningsresultatet eller PCR resultatet var positivt Et præparat blev betragtet som negativt, hvis det tilgængelige PCR resultat var negativt De procentvise overensstemmelsesestimater for BD ProbeTec ET MP Assay fra svælgpodninger opbevaret i 2SP transportmedium sammenlignet med de tilgængelige dyrknings- og/eller PCR resultater sammenfattes i Tabel 6 13

14 Tabel 6: BD ProbeTec ET CF Assay retrospektive svælgpodningsresultater (2SP medium) sammenlignet med dyrkning (2SP medium) og/eller PCR (2SP medium) Dyrkning og/eller PCR Sted MP analyse Positiv Negativ I alt Positiv procentvis Negativ procentvis Samlet procentvis overensstemmelse overensstemmelse overensstemmelse 9 Positiv 52 a 52 Negativ 11 b I alt ,5 % (52/63) (7,9 % 9,9 %) 1 % (15/15) (78,2 % 1 %) 85,9 % (67/78) (76,2 % 92,7 %) a 16 af de 52 prøver blev også dyrket for M pneumoniae; all 16 prøver var dyrkning-positive b 3 af de 11 prøver blev også dyrket for M pneumoniae; all 3 prøver var dyrkning-positive Analytiske undersøgelser BD ProbeTec ET MP Assay amplifikationsreaktionsvolumen er 1 µl bearbejdet prøve Analytisk sensitivitet Den analytiske sensitivitet for BD ProbeTec ET MP Assay blev bestemt ved testning af et panel med otte M pneumoniae organismer Bakteriesuspensioner blev fortyndet til niveauer på 4, 8 og 1 2 celler pr reaktion for hver organisme Den analytiske sensitivitet for BD ProbeTec ET MP Assay ved tilstedeværelse af en matrix af præparater fra svælgpodning blev bestemt ved at udså podninger med 2 µl fortyndet M pneumoniae stamme (ATCC 29342) for at give niveuer på, 4, 8 og 1 2 celler pr reaktion Den analytiske sensitivitet for BD ProbeTec ET MP Assay ved tilstedeværelse af 2SP transportmedium blev bestemt ved at udså 2SP medium med fortyndet M pneumoniae (ATCC 29342) stamme for at give niveuer på, 4, 8, 1 6, 3 2 og 4 8 celler pr reaktion Alle prøver blev bearbejdet og analyseret i tre eksemplarer Baseret på 1 % positivitet sammenfattes den analytiske sensitivitet for de forskellige matricer af organismer og præparater i Tabel 7 Den faktiske påvisningsgrænse (Limit of Detection (LOD)) kan dog være under det laveste testede niveau Tabel 7: BD ProbeTec ET MP Assay - Analytisk isolatspecificitet M pneumoniae stamme Analytisk sensitivitet (celler/reaktion) ATCC ATCC ATCC ATCC ATCC ATCC ATCC ATCC Bearbejde svælgpodninger 4 2SP transportmedium 4 Analytisk specificitet I alt 79 mikroorganismer (64 bakterier, 6 svampe og 9 vira) blev evalueret ved brug af BD ProbeTec ET MP Assay Bakterieisolater blev testet ved koncentrationer fra 1,33 x 1 7 til 2,67 x 1 9 CFU/mL eller celler/ml, med undtagelse af Coccidioides immitis, som blev testet ved brug af en bakteriesuspension svarende til en McFarland 5 standard Vira blev testet ved en koncentration på 1 x 1 6 viruspartikler (VP) eller genomer/ml Ingen af de testede mikroorganismer producerede et positivt resultat eller inhiberede IAC (Tabel 8) 14

15 Tabel 8: BD ProbeTec ET MP Assay - Analytisk specificitet Acholeplasma laidlawii Haemophilus parainfluenzae Neisseria gonorrhoeae Acinetobacter calcoaceticus Herpes Simplex Virus-1 Neisseria meningitidis Actinomyces israelii Histoplasma capsulatum Neisseria mucosa Adenovirus-5 Influenzavirus A Parainfluenza type 1 Aeromonas hydrophila Influenzavirus B Peptostreptococcus anaerobius Blastomyces dermatitidis Kingella kingae Porphyromonas asaccharolytica Bordetella bronchiseptica Klebsiella pneumoniae subsp Prevotella melaninogenicus Bordetella parapertussis ozaenae type 4 Pseudomonas aeruginosa Bordetella pertussis Klebsiella pneumoniae subsp Respiratorisk syncytialvirus, lang Branhamella catarrhalis pneumoniae stamme Candida albicans Lactobacillus acidophilus Rhinovirus Chylamydophila pneumoniae, Legionella pneumophila Salmonella choleraesuis serotype AR-39 Moraxella osloensis enteritidis Chlamydia trachomatis, sero L2 Mycobacterium tuberculosis Salmonella choleraesuis serotype Citrobacter freundii Mycoplasma arginini typhi Coccidioides immitis Mycoplasma buccale Serratia marcescens Corynebacterium diphtheriae Mycoplasma faucium Staphylococcus aureus, Corynebacterium jeikeium Mycoplasma fermentans protein A-producerende Cryptococcus neoformans Mycoplasma gallinarum Staphylococcus aureus, Cytomegalovirus Mycoplasma gallisepticum ikke-protein A-producerende Eikenella corrodens Mycoplasma genitalium Staphylococcus epidermidis Enterobacter aerogenes Mycoplasma hominis Stenotrophomonas maltophilia Enterobacter cloacae Mycoplasma hyorhinis Streptococcus gruppe B Enterococcus faecalis Mycoplasma lipophilium Streptococcus mutans Enterococcus faecium Mycoplasma orale Streptococcus pneumoniae Enterovirus (Echovirus) Mycoplasma penetrans Streptococcus pyogenes Escherichia coli Mycoplasma primatum Tatlockia (Legionella) micdadei Fusobacterium nucleatum Mycoplasma salivarium Ureaplasma urealyticum Haemophilus influenzae Mycoplasma synoviae Veillonella parvula Interfererende stoffer Potentielt interfererende stoffer, som kan forekomme i svælgpodning, blev testet med BD ProbeTec ET MP Assay i fravær af MP DNA eller i tilstedeværelse af 2 celler/reaktion (svælgpodninger uden transportmedium) af M pneumoniae stamme ATCC I fravær af MP DNA producerede ingen af de testede stoffer et positivt resultat ved koncentrationerne opgivet i Tabel 9 Når MP DNA var i tilstedeværelse af stofferne ved koncentrationerne opgivet i Tabel 9 producerede alle testede prøver et positivt resultat 15

16 Hostesaft Tabel 9: BD ProbeTec ET MP Assay - Stoffer screenet for interferens Testede stoffer * Tre af 24 initiale resultater blev fundet at være inkonklusive Undersøgelse af spiket præparat For at supplere antallet af positive præparater, der træffes i den kliniske undersøgelse, blev 25 svælgpodninger spiket med 5 x 1 4 celler/ml M pneumoniae (positive præparater) For at simulere Mycoplasma-negative svælgpodninger, blev 5 podninger ligeledes spiket med en bakteriesuspension, som kun indeholdt L pneumophila and C pneumoniae Alle præparater blev testet i BD ProbeTec ET MP Assay Resultater sammenfattes i Tabel 1 Samlet nøjagtighed var 1 % (75/75) Tabel 1: BD ProbeTec ET MP Assay - Spikede resultater for svælgpodning BD ProbeTec ET MP Assay resultater Præparater fra svælgpodepind Reproducerbarhed Reproducerbarheden for BD ProbeTec ET MP Assay blev vurderet for svælgpodninger på tre laboratorier ved at teste paneler bestående af 24 prøver (12 negative og 12 positive), der blev forberedt i PBS/BSA Bestod panelet af 12 prøver, som var negative for M pneumoniae samt tre lave og tre høje M pneumoniae positive prøver (6 og 1 celler/reaktion, henholdsvist) Der var endvidere tre lave positive prøver, som indeholdte 45 EB, 4 CFU og 6 celler/reaktion af C pneumoniae (CP), L pneumophila (LP) og M pneumoniae (MP), henholdsvist, og tre høje positive prøver, som hver indeholdte 75 EB, 65 CFU og 1 celler/reaktion af disse organismer, henholdsvist En operatør pr sted testede panelerne én gang om dagen i tre dage Resultaterne er sammenfattet i Tabel 11 Tabel 11: BD ProbeTec ET MP Assay - Reproducerbarhed for svælgpodning Mellem dag på Mellem stedet sted Panelmedlem N % korrekt Middel PAT SD % CV SD % CV MP-HØJ 26* 1 % 5,5,,,, MP-LAV 27 1% 47,5 1,32 2,78,31,65 CP/LP/MP-HØJ 27 1 % 5,5,61 1,22,, CP/LP/MP-LAV 27 1 % 48,7,,,, Negativ 17* 1 %, IAC med MP-negative prøver 17* 1 % 51,9,15,28,7,13 * En prøve ekskluderet fra analysen på grund af en procedurerelateret fejl Koncentration i præparat Robitussin DM 25 % Triaminic (vindrue) 25 % Næsespray (poolet) Vicks Sinex 1 % Neo-Synephrine (almindelig styrke) 1 % Halsspray Cepacol (kølig menthol) 25 % Vicks Chloraseptic (kirsebær) 25 % Mundvand Scope (original pebermynte) 25 % Listerine (original) 25 %* Hostebolsjer Halls sukkerfri citrusblanding 25 % Cold-Eeze Zinc 25 % Organismer Chlamydophila pneumoniae Legionella pneumophila Chlamydophila pneumoniae and Legionella pneumophila 1 7 EB/mL 1 7 CFU/mL 1 7 EB/mL og 1 7 CFU/mL, henholdsvist Spike niveau Positiv Negativ I alt Positiv Negativ 5 5 I alt

17 BESTILLING De følgende BD ProbeTec ET produkter er disponible: Kat nr Beskrivelse BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) Amplified DNA Assay (BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) forstærket DNA analyse) BD ProbeTec ET Respiratory and Media Diluent and Control Kit (BD ProbeTec ET luftvejs- og mediefortynder og kontrolkit) 4473 BD ProbeTec ET Swab Diluent and Control Kit (BD ProbeTec ET podepindsfortynder og kontrolkit) BD ProbeTec ET Accessories Kit (BD ProbeTec ET tilbehørssæt) 4471 BD ProbeTec ET Accessories II Kit (BD ProbeTec ET tilbehørssæt II) BD ProbeTec ET Pipette Tips 6 x 12 (BD ProbeTec ET pipettespidser 6 x 12) BD ProbeTec ET 2 ml Sample Tubes and Caps and Labels (BD ProbeTec ET 2 ml prøveglas og hætter og etiketter), 2 af hver BD ProbeTec ET 2 ml Caps (BD ProbeTec ET 2 ml hætter), BD ProbeTec ET Instrument, uden for USA BD ProbeTec ET Instrument, USA og Canada BD ProbeTec ET Priming and Warming Heater (BD ProbeTec ET primer- og opvarmerapparat), 22V 4448 BD ProbeTec ET Priming and Warming Heater (BD ProbeTec ET primer- og opvarmerapparat), 12V BD ProbeTec ET Lysing Heater (BD ProbeTec ET lyseringsvarmeapparat), 22V BD ProbeTec ET Lysing Heater (BD ProbeTec ET lyseringsvarmeapparat), 12V BD ProbeTec ET Pipettor 4452 BD ProbeTec ET Lysing Rack (BD ProbeTec ET lyseringsstativ) LITTERATUR 1 Waring, A L, et al 21 Development of a genomics-based PCR assay for detection of Mycoplasma pneumoniae in a large outbreak in New York State J Clin Micro 39: File T M, Tan J S, Plouffe J F 1998 The role of atypical pathogens: Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae, and Legionella pneumophila in respiratory infection Infect Dis Clin of NA 12: Murray et al 1999 Manual of clinical microbiology, 7th edition, ASM Press 4 Bartlett, J G, Dowell, S F, Mandell, L A, File, T M, Musher, D M, Fine, M J 2 Guidelines from the Infectious Diseases Society of America - Practice guidelines for the management of community-acquired pneumonia in adults Clin Infect Dis 31: National Committee for Clinical Laboratory Standards 21 Approved Guideline M29-A2 Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed NCCLS, Wayne, Pa 6 Garner J S 1996 Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U S Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention Guideline for isolation precautions in hospitals Infect Control Hospital Epidemiol 17: U S Department of Health and Human Services 1999 Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed U S Government Printing Office, Washington, D C 8 Directive 2/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC) Official Journal L262, 17/1/2, p Isenberg, H D (ed ) 1992 Clinical microbiology procedures handbook Vol 1 American Society for Microbiology, Washington, D C 17

18 Manufacturer / Producent / Fabrikant / Valmistaja / Fabricant / Hersteller / ÊáôáóêåõáóôÞò / Ditta produttrice / Fabrikant / Fabricante / Tillverkare Use by / Anvendes før / Houdbaar tot / Viimeinkäyttöpäivä / A utiliser avant / Verwendbar bis / Çìåñïìçßá ëþîçò / Usare entro / Brukes før / Utilizar em / Usar antes de / Använd före / YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) / ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) / JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) VVVV-KK-PP / VVVV-KK (kuukauden loppuun mennessä) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) / JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) / ÅÅÅÅ-ÌÌ-ÇÇ / ÅÅÅÅ-ÌÌ (ÌÌ = ôýëïò ôïõ ìþvá) / AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) / ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) / aaaa-mm-dd / aaaa-mm (mm = fin del mes) / ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet på månaden) Batch Code (Lot) / Batch kode (Lot) / Chargenummer (lot) / Eräkoodi (LOT) / Code de lot (Lot) / Chargencode (Chargenbezeichnung) / Êùäéêüò ðáñôßäáò (Ðáñôßäá) / Codice del lotto (partita) / Batch- L kode (Serie) / Código do lote (Lote) / Código de lote (Lote) / Satskod (parti) Catalog number / Katalognummer / Catalogusnummer / Tuotenumero / Numero catalogue / Bestellnummer / Áñéèìüò êáôáëüãïõ / Numero di catalogo / Katalognummer / Numero do catalogo / Numero de catalogo / Katalognummer Authorized Representative in the European Community / Autoriseret repræsentant i EU / Erkend vertegenwoordiger in de Europese Unie / Valtuutettu edustaja Euroopan yhteisossa / Representant agree pour la C E E / Autorisierte EG-Vertretung / ÅîïõóéïäïôçìÝíïò áíôéðñüóùðïò óôçí ÅõñùðáúêÞ Êïéíüôçôá / Rappresentante autorizzato nella Comunita europea / Autorisert representant i EU / Representante autorizado na Uniao Europeia / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Auktoriserad representant i EU In Vitro Diagnostic Medical Device / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medisch hulpmiddel voor in vitro diagnose / Lääkinnällinen in vitro -diagnostiikkalaite / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro äéáãíùóôéêþ éáôñéêþ óõóêåõþ / Dispositivo medico diagnostico in vitro / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispositivo médico de diagnóstico in vitro / Medicinsk anordning för in vitro-diagnostik Temperature limitation / Temperaturbegrænsning / Temperatuurlimiet / Lämpötilarajoitus / Température limite / Zulässiger Temperaturenbereich / ¼ñéï èåñìïêñáóßáò / Temperatura limite / Temperaturbegrensning / Limitação da temperatura / Limitación de temperatura / Temperaturbegränsning Consult Instructions for Use / Læs brugsanvisningen / Raadpleeg gebruiksaanwijzing / Tarkista kayttoohjeista / Consulter la notice d emploi / Gebrauchsanweisung beachten / Óõìâïõëåõôåßôå ôéò ïäçãßåò ñþóçò / Consultare le istruzioni per l'uso / Se i bruksanvisningen / Consulte as instrucoes de utilizacao / Consultar las instrucciones de uso / Se bruksanvisningen Positive control / Positiv kontrol / Positieve controle / Positiivinkontrolli / Contrôle positif / Positive Kontrolle / èåôéêüò Ýëåã ïò / Controllo positivo / Positiv kontroll / Controlo positivo / Control positivo / Positiv kontroll Negative control / Negativ kontrol / Negatieve controle / Negatiivinkontrolli / Contrôle négatif / Negative Kontrolle / Áñíçôéêüò Ýëåã ïò / Controllo negativo / Negativ kontroll / Controlo negativo / Control negativo / Negativ kontroll Contains sufficient for <n> tests / Indeholder tilstrækkeligt til <n> test / Voldoende voor <n> tests / Sisältöon riittävä <n> testejä varten / Contenu suffisant pour <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / ÐåñéÝ åé åðáñêþ ðïóüôçôá <n> åîåôüóåéò / Contenuto sufficiente per <n> test / Innholder tilstrekkelig for <n> tester / Contémo suficiente para <n> testes / Contenido suficiente para <n> pruebas / Räckertill <n> antal tester 18

19 B m A Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: Proclin is a trademark of Rohm and Haas Co Alconox is a trademark of Alconox, Inc QIAamp is a trademark of QIAGEN, Inc ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection CultureSwab is a trademark of Difco Laboratories, a subsidiary of Becton, Dickinson and Company BD, BD Logo, BBL and BD ProbeTec are trademarks of Becton, Dickinson and Company 26 BD