(19) DANMARK -7- (12) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen (11) DK B1
|
|
- Benjamin Christen Jørgensen
- 8 år siden
- Visninger:
Transkript
1 (19) DANMARK (11) DK B1-7- (12) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: A 61 K 38/17 C 07 K 14/705 (21) Patentansøgning nr: PA (22) Indleveringsdag: (24) Løbedag: (41) Alm. tilgængelig: (45) Patentets meddelelse bkg. den: (30) Prioritet: US US US (73) Patenthaver: Bayer Corporation, One Mellon Center, 500 Grant St., Pittsburgh, PA , USA (72) Opfinder: Jeffrey Greve, 64 Wildwood Drive, Branford, CT 06405, USA Alan McClelland, 300 Schoolhouse Road, Old Saybrook, CT 06475, USA Gary Davis, 42 Holbrook Street, Milford, CT 06460, USA (74) Fuldmægtig: Budde, Schou & Ostenfeld A/S, Vester Søgade 10, 1601 København V, Danmark (54) Benævnelse: Anvendelse af et humant rhinovirus (HRV)-hovedreceptorpræparat til fremstilling af et lægemiddel til inhibering af initieringen eller spredningen af rhino-virusinfektion (56) Fremdragne publikationer: Ingen (57) Sammendrag: En vandopløselig humant-rhinovirus-(hrv)-hovedreceptortilberedning omfatter fra dyreceller isoleret detergentkompleksbundet glycoprotein, som udtrykker hoved-hrv-receptor, og som udviser evne til at bindes til HRV-capsider og i det væsentlige reducere virussets smitteevne.
2 Den foreliggende opfindelse angår anvendelsen af et humant rhinovirus(hrv)-hovedreceptorpræparat til fremstilling af et lægemiddel til inhibering af initieringen eller spredningen af rhinovirusinfektion. 5 Det har vist sig, at man kan isolere af HRV-receptorproteiner, som kan bindes til HRV og derved blokere virussens smittevne. Denne egenskab kan fungere som basis for at inhibere initieringen eller spredningen af HRV-infektion, bedre kendt som almindelig forkølelse. 10 For at inficere værtsceller skal vira nødvendigvis bindes til og derpå trænge ind i celler for at påbegynde en infektion. Siden 1959 har der i litteraturen samlet sig beviser på, at tilstedeværelsen af specifikke bindingssteder (receptorer) på værtsceller kunne være en overvejende deter- 15 minant for visse viras vævstropisme [J.J. Holland og L.C. McLaren, The Mammalian Cell-Virus Relationsship. II. Absorption, Reception, and Eclipse of Poliovirus by HeLa-Cells, J. Exp. Med. 109, (1959); J.J. Holland, Receptor Affinities as Major Determinants of Enterovirus Tissue Tro- 20 pisms in Humans, Virology 15, (1961)]. Blandt picornavira, såsom poliovirus, coxsacchie-virus og rhinovira er specifik binding til værtsceller blevet påvist. Ved konkurrenceforsøg er det blevet påvist, at nogle af disse receptorer kan skelnes fra hinanden derved, at mætningen af en 25 virus' receptor ikke havde nogen virkning på bindingen af en anden virus. [K. Lonberg-Holm, R.L. Crowell og L. Philipson, Unrelated Animal Viruses Share Receptors, Nature 259, (1976)]. Rhinovira udgør den største familie af picornavira 30 med 115 særskilte serotyper identificeret til dato. En stor fraktion af rhinovira (skønnes at være 80%) synes at bindes til en fælles receptor på humane celler. (G. Abraham og R.J. Colonno, Many Rhinovirus Serotypes Share the Same Cellular Receptor, J. of Virology 51, (1984)]. I er isoleringen af et monoklont antistof beskrevet, som synes at være rettet mod den overvejende rhinovirus-receptor. 1
3 [W.J. Colonno, P.L. Callahan og W.J. Long, Isolation of a Monoclonal Antibody that Blocks Attachment of the Major Group of Human Rhinoviruses, J. of Virology 57, 7-12 (1986)]. Det inhiberer infektion af celler med de pågældende serotyper 5 af rhinovirus, og det inhiberer binding af radiomærket rhinovirus til celler. Denne gruppe rapporterer derefter, at det monoklone antistof bindes til et protein med en tilsyneladende molekylvægt på dalton. (J.E. Tomassini og R.J. Colonno, Isolation of a Receptor Protein Involved in 10 Attachment of Human Rhinoviruses, J. of Virology 58, (1986)]. Dette monoklone antistof er blevet anvendt til kliniske prøver med primater og mennesker og menes at tilvejebringe en vis beskyttelse mod rhinovirus-infektion. Der findes adskillige andre rapporter om forsøg med 15 terapeutisk indgriben i rhinovirus-infektioner. Intranasal indgift af interferon hos mennesker har været forsøgt. [R.M. Douglas m.fl., Prophylactic Efficacy of Intranasal a-2-interferon against Rhinovirus Infections in the Family Setting, The New England J. of Medicine, 314, (1986)]. I dette 20 tilfælde fandt man signifikant reduktion af infektionens sværhedsgrad, selv om der blev observeret næseblod som en bivirkning. Der er ligeledes blevet afprøvet flere disoxarilanaloge ("Win"-forbindelser), som reducerer smitteevnen hos en række picornavira (med stærkt varierende effektivitet, 25 afhængig af serotypen), i vævskultur og i nogle dyremodeller. [M.P. Fox, M.J. Otto og M.A. McKinlay, Antimicrob. Ag. and Chemotherapy 30, (1986)]. Disse forbindelser synes at inhibere replikation på et trin efter receptorbinding, sandsynligvis i et eller andet trin i virusafdækning. Atom- 30 coordinaterne for disse forbindelsers bindesteder inden for serotype HRV14's virale capsid er blevet konstateret ved hjælp af røntgen-krystallografi og er placeret i en hydrofobisk lomme, der forekommer i hver protomer enhed i capsidet. [T.J. Smith m.fl., The Site of Attachment in Human 35 Rhinovirus 14 for Antiviral Agents that Inhibit Uncoating, Science 233, (1986)]. Bindingslommens særlige 2
4 funktion, hvis der er nogen, kendes ikke, men præparat-resistente mutanter med ombytninger af en enkelt aminosyre i denne region forekommer med stor frekvens og er levedygtige. [J. Badger m.fl., Structural Analyses of a Series of An- 5 tiviral Agents Complexed with Human Rhinovirus 14, PNAS 85, (1988)]. Dette resultat sætter spørgsmålstegn ved sådanne forbindelsers effektivitet som lægemiddel. Der findes rapporter om produktion af anti-peptid-antistoffer i kaniner ved brug af peptider afledt fra aminosyresekvensen 10 i det virale capsids proteiner, som ordner "receptor canyonen i HRV14. (J. McCary og G. Werner, Different Rhinovirus Serotypes Neutralized by Antipeptide Antibodies", Nature 329, (1987)]. Selvom disse seras titre er ret lave, påvises kryds-serotype-beskyttelse af celler i vævskultur 15 fra rhinovirus-infektion, hvilket stiller muligheden for en vaccine i udsigt. Det har vist sig, at man kan isolere et HRV-receptorprotein fra celler med den egenskab, at de blokerer HRVinfektion. I betragtning af den høje affinitet, som virusset 20 har for receptoren, er den hypotese blevet fremsat, at et terapeutisk middel, der er effektivt mod HRV-infektion, kunne være selve receptoren, eller især receptorens virusbindende domæne. Et protein, proteinfragment eller peptid, som omfatter det virus-bindende domæne, kunne blokere virus' 25 evne til at bindes til værtsceller ved at besætte (blokere) den receptor-bindende spalte på virusset. Eftersom endvidere et sådant molekyle ville udgøre nogle eller alle de molekylekontakter med viruscapsidet, som receptoren har, ville virusmutationer, som negativt påvirker molekylets binding af 30 receptoren, negativt påvirke receptorens binding og ville således være skadelige eller dødelige for virusset; derfor ville sandsynligheden for præparat-resistente mutanter være meget ringe. Endvidere ville et sådant molekyle være humant, hvilket reducerer sandsynligheden for, at det er antigent 35 hos mennesker. Det har nu vist sig, at den overvejende humane rhi- 3
5 novirus-(hrv)-receptor kan isoleres som en vandopløselig tilberedning, der udviser den ønskede egenskab, at den bindes til HRV-capsider og i væsentlig grad reducerer virussets smitteevne. Tilberedningen foreligger i form af detergent- 5 kompleksbundet glycoprotein isoleret fra dyreceller, fortrinsvis pattedyreceller, som udtrykker hoved-hrv-receptoren. Det rensede receptorprotein kan karakteriseres på følgende måde. Det er et glycoprotein med en tilsyneladende molekylvægt på dalton og omfatter bindingsstedet for 10 HRV. Glycoproteinet indeholder 6-7 asparaginforbundne oligosaccharid-kæder og foreligger i tilberedningen i form af et detergent-micelle-bundet protein. Opfindelsen angår således anvendelsen af et humant rhinovirus (HRV)-hovedreceptorpræparat indeholdende ICAM-1-15 monomer af funktionelle domæner, fragmenter eller analoger omfattende det test-ig-lignende domæne af ICAM-1, som udviser evne til binding til HRV-capsider, til fremstilling af et lægemiddel til inhibering af initieringen eller spredningen af rhinovirusinfektion, og opfindelsen angår tillige anven- 20 deisen af et humant rhinovirus (HRV)-hovedreceptorpræparat indeholdende en forbindelse fra gruppen: det hele ekstracellulære domæne af ICAM-1, aminosyrerne 1-200, t1cam (1-453), t1cam (1-283), t1cam (1-184) eller t1cam (1-88), som udviser evne til binding til HRV-capsider, til fremstilling af et 25 lægemiddel til behandling af rhinovirusinfektion. Generelt kan hoved-hrv-receptor-tilberedningen fås ved ekstraktion af passende dyreceller, som man ved udtrykker hoved-hrv-receptoren, med et ikke-ionisk detergent, efterfulgt af immunrensning. Mange humane cellelinier udtrykker 30 receptoren, såsom HeLa og W138. En hvilken som helst af disse humane HRV-receptor-kilder kan ekstraheres. Særlig anvendelige er HeLa-celler. Desuden kendes transficerende ikke-humane pattedyrecellelinier, som udtrykker HRV-receptoren, eller de kan fremstilles, hvilket udgør en anden 35 anvendelig receptorkilde. Især udgør transficerende cellelinier, der er beskrevet i offentliggjort Europa-patent- 4
6 ansøgning nr , en nærliggende receptorkilde, især sådanne sekundære transfektanter, som er blevet udvalgt for receptoroverekspression. Andre dyreceller, som er kendt på området eller senere er blevet udviklet, såsom insektvævs- 5 kulturceller, som er blevet transficeret med genet og udtrykker receptoren, kan også anvendes. Hovedsagelig et hvilket som helst ikke-ionisk detergent kan anvendes til ekstraktion, forudsat at proteinreceptorens oprindelige konformation ikke ødelægges. Denaturering 10 af receptoren kan bestemmes ved at overvåge det ekstraherede proteins evne til at inhibere virussmitteevne eller følsomhed over for proteolyse. Det er blevet konstateret, at receptoren kan denatureres ved opvarmning ved 60 C i 30 min. eller ved behandling med 1% SDS, hvilket viser, at man må sørge for 15 at bibeholde HRV-bindingsstedets oprindelige konformation. Eksempler på anvendelige ikke-ioniske detergenter er alkylpolyoxyethylenethere (såsom Brij), alkylphenylpolyoxyethylenethere (såsom Triton X-100 og Nonidet P-40), acylpolyoxyethylensorbitanestere (såsom Tween), og Z-D-alkylglucosider, 20 idet Triton X-100 anses for særlig foretrukket. Nøgletrinnet i rensningen af receptoren er fraktionering med stærkt selektivt anti-receptor-antistof. Den nemmeste måde til opnåelse af et sådant antistof er monoklone metoder. Det foretrækkes især at fremstille monoklone 25 muse-antistoffer ved dannelse af hybridomcellelinier ud fra fusionering af muse-myelomceller og muse-transficerende celler, der udtrykker HRV-receptoren. Yderligere enkeltheder findes i offentliggjort Europa-patentansøgning nr Efter at detergent/glycoprotein-komplekserne, der fås fra 30 celleekstrakten, er bundet til det valgte monoklone antistof, adskilles komplekser, der er bundet til antistof, fra det øvrige af blandingen. Derefter dissocieres detergent/receptor-komplekser bundet til antistof, idet man atter sørger for at forhindre denaturering, og den opnåede vandopløselige 35 receptortilberedning isoleres. Passende betingelser til dissociering af detergent/receptor-komplekser fra antistoffet 5
7 'kan konstateres empirisk og kan forventes at variere noget fra antistof til antistof. Dissociering ved at hæve ph har i nogle tilfælde vist sig at være mest effektiv ved lavt ph eller højt saltindhold, betingelser, der fungerer, men 5 som giver lavere proteinudbytter. Det foretrækkes at udføre en mellemliggende rensning før rensning med antistof. Sådanne mellemliggende trin omfatter adsorbering af de detergent-ekstraherede proteinkomplekser på en lectin, der kan binde HRV-receptor, fraskil- 10 lelse af absorberede komplekser fra resten af blandingen og dissociering af sådanne komplekser til efterfølgende behandling med antistof. Valget af lectin og dissocieringsbetingelser er i reglen empirisk. Det har vist sig, at HRV-receptoren bindes på passende måde til hvedekimagglutininlectin 15 og dissocieres effektivt ved vask med en opløsning af N- acetylglucosamin. Da oligosacchariderne på receptorproteinet ikke er fuldstændig karakteriserede, og fordi receptorproteinet kan glycosyleres forskelligt på forskellige celletyper (f.eks. musecelletransfektanter), kan det forventes, at også 20 andre lectiner er egnede. Valg af et passende alternativ til hvedekimagglutinin og/eller elueringsmiddel kan overlades til fagfolk på området. Den opnåede tilberedning kan behandles med proteolytiske midler, såsom proteaser, f.eks. trypsin, til fremstil- 25 ling af mindre glycoproteinfragmenter, som bibeholder evnen til at binde og reducere HRV's smitteevne. Således kan peptidfragmenter spaltes fra den endestillede region i glycoproteinet, f.eks. C-endestillingen, hvilket giver glycoprotein-fragmenter, som bibeholder HRV-binding. Sådanne glyco- 30 protein-fragmenter kan f.eks. have en tilsyneladende molekylvægt mellem ca og ca dalton. Mindre fragmenter, som bibeholder receptorens HRV-bindingsdomæne, anses også for at være omfattet af den foreliggende opfindelses omfang. 35 Receptor-tilberedningen har vist sig at inhibere virussets smitteevne, formodentlig ved at bindes til HRV- 6
8 capsidet, så at dets evne til at binde og inficere humane celler blokeres. En sådan iagttagelse viser, at receptortilberedningen vil være anvendelig til at reducere infektionen af humane værtsceller in vivo ved at bringe virusset i kon- 5 takt med tilberedningen under betingelser, der er egnede til binding med virusset. En terapeutisk form vil være en vandig opløsning af receptoren i nærvær af ikke-ionisk detergent for at bibeholde receptoren i opløsning og i dens oprindelige konformation. Detergenter med lavere kritiske 10 micelle-koncentrationer, såsom alkylpolyoxyethylenetheren Brij 58, vil være at foretrække for at reducere koncentrationen af detergent i den terapeutiske opløsning. Receptortilberedningen kan indgives in vivo ved passende kontakt med de områder af kroppen, der kan inficeres med HRV, f.eks. 15 ved hjælp af intranasal spray. Opfindelsen vil i det følgende blive belyst ved hjælp af nedenstående eksempler, som dog ikke skal fortolkes begrænsende Fremstilling af renset human rhinovirus-receptor-(hrr)-protein (1) Humane celler (f.eks. HeLa) eller muse-l-celletransfektanter (f.eks. cellelinierne, der er beskrevet i offentliggjort Europa-patentansøgning nr ), dyrkes 25 op i store antal som cellulære monolag i standard-vævskulturmedium (Dulbecco's modificerede essentielle medium indeholdende 10% kalvefosterserum; transficerende celler holdes i samme medium indeholdende HAT (hypoxanthanin/aminoptherin/- thymidin) for at opretholde selektive tryk for udvælgelses- 30 markøren (Herpes TK). Celler opløses i én time ved 4 C i en fysiologisk puffer (phosphatpufret saltopløsning) indeholdende en ikke-ionisk detergent f.eks. Triton X-100) (T-puffer) og en blanding af protease-inhibitorer (aprotinin, leupeprin ved 10µg/ml, EDTA ved 1 mm) for at forhindre pro- 35 teolytisk nedbrydning af receptoren. Uopløseligt materiale fjernes ved filtrering gennem et 0,22 g filter.
9 (2) Ekstrakten absorberes på en affinitietsharpiks, der indeholder hvedekimagglutinin (WGA), (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA), tværbindes til Sepharose i 18 timer ved 4 C under forsigtig blanding (2 ml pakket harpiks 5 indeholdende 5 mg WGA/ml harpiks, pr celler). Affinitetsharpiksen vaskes derpå omhyggeligt med puffer for at fjerne ubundne glycoproteiner og elueres med det konkurrerende monosaccharid N-acetylglucosamin (0,3 M N-acetylglucosamin i T-puffer) i én time ved stuetemperatur. 10 (3) WGA-Sepharose-elueringsmidlet absorberes derpå til en affinitetsharpiks, hvortil der er koblet renset monoklont antistof mod HRR (f.eks. ATCC HB 9a594, der omtales i offentliggjort Europa-patentansøgning nr Det monoklone antistof IgG renses ved ammoniumsulfat-fældning [P. 15 Parham, Meth. Enzymol. 92, (1983)] efterfulgt af affinitetschromatografi på enten protein A-Sepharose [P.L. Ey m.fl., Immunochem. 15, (1978)] eller en Abx-kolonne (J.T. Baker Co., Phillipsburg, NJ, USA) ved at følge fabrikantens anvisninger. Monoklont IgG-affinitetsharpiks 20 fremstilles ved at koble IgG til cyanogenbromid-aktiveret Sepharose (P. Parham; supra). Efter at der er tilsat 10 gg/ml humant transferrin for at blokere adsorption af transferrin-receptor til harpiksen, inkuberes elueringsmidlet ved 4 C i 18 timer med har- 25 piksen under blanding ( gl harpiks indeholdende 5 mg IgG/ml harpiks, pr celler), vaskes udtømmende med T- puffer for at fjerne ubundne proteiner og elueres derpå under ikke-denaturerende betingelser med en høj-ph-puffer [0,05 M diethanolamin (ph 11,5) med 0,1% Triton X-100] i én 30 time ved stuetemperatur. Elueringsmidlet fjernes, neutraliseres ved tilsætning af 0,2 volumendele 1 M HEPES (ph 7,2) og dialyseres mod tre skift af en fysiologisk puffer indeholdende en smule ikke-ionisk detergent for at opretholde receptorens opløselighed (0,01 HEPES, 0,150 M NaC1, 0, M CaC12, 0,1% Triton X-100, ph 7,5). 8 Receptoren kan renses yderligere ved hastighedssedi-
10 mentation ved hjælp af saccharose-gradienter for at fjerne en gruppe mindre forureninger med høj molekylvægt (> dalton). Receptortilberedningen lejres foroven på en 15-35% saccharose-gradient (samlet volumen ca 4,5 ml) og centrifu- 5 geres ved x G i 18 timer ved 4 C. Fraktioner opsamles fra gradienten, og fraktioner, der indeholder rhinovirusreceptor, der sedimenterer ca. 1/3 ned ad gradienten, slås sammen, inddampes (om nødvendigt) og dialyseres. (4) Den opnåede tilberedning ud fra HeLa-celler viser 10 sig at indeholde et glycoprotein med en tilsyneladende molekylvægt på dalton. Ud fra muse-transfektant-celler isoleres et protein med samme molekylvægt, men med større heterogeneitet (efter analyse ved SDS-PAGE). Det isolerede protein har vist sig at omfatte rhinovirus-receptoren ved: 15 (a) Immunfældning ud fra med overflademærkede HeLaceller og musetranfektanter, der udtrykker den humane rhinovirus-receptor med et monoklont antistof, som inhiberer rhinovirus' binding til celler. (b) Immunfældning af renset med mærket receptor med 20 monoklont ATCC HD 9594 antistof. (5) Der fremstilles et tryptisk fragment ved at fordøje receptoren med 1% (vægt E/vægt receptorprotein) trypsin i &I time ved 37 C. Reaktionsblandingen påføres på en GF- 450 gelfiltreringskolonne (Dupont), der er bragt i ligevægt 25 i N-puffer, og det proteolytiske fragment adskilles fra enzymet. Analyse af de opnåede fragmenter ved hjælp af SDS- PAGE viser en blanding af et receptorfragment på dalton og et receptorfragment på dalton. Disse fragmenter elueres i samme position på en gelfiltreringskolonne 30 som intakt receptor, hvilket tyder på, at de er bundet til en detergent-micelle. Aminosyre-sekvensbestemmelse af fragmenterne giver ingen sekvens, hvilket viser, at de ligesom den intakte receptor har en blokeret N-endestilling, og endvidere, at peptider, der mistes fra og dalton-fragmenterne, er fra proteinets C-endestilling. 9
11 Karakterisering af tilberedningen (1) Receptortilberedningens renhed bedømmes ved hjælp af SDS-PAGE ved sølvfarvning. Mængdebestemmelse af protein foretages ved at sammenligne sølvfarvet protein med en række 5 standard-proteiner med kendt mængde på SDS-PAGE og bekræftes ved hjælp af aminosyre-analyse, idet man går ud fra en protein-molekylvægt på dalton (sker ved at bestemme den tilsyneladende molekylvægt på SDS-PAGE for deglycosyleret receptor). 10 (2) Proteinet viser sig ved fordøjelse af kerne-glycosyleret receptor med endoglycosidase H at være et glycoprotein, der indeholder 6-7 asparagin-bundne oligosaccharidkæder. Efter gelfiltrering elueres receptoren med et volumen, der svarer til en protein-molekylvægt på dalton. 15 Denne oplysning sammen med bevis fra kemiske tværbindingsforsøg, der viser, at receptoren er en monomer, stemmer overens med receptoren, der opfører sig som et protein bundet til en detergentmicelle. (3) Det rensede receptor-protein viser sig at bindes 20 til rhinovirus in vitro. Når med mærket og med 35 S- cystein metabolisk mærket HRR inkuberes i 30 min. ved 34 C med 1 jg/ml HRV14 eller HRV3, viser det sig at associere med virus ved sedimentering i saccharose-gradienter eller ved pelletering i en centrifuge med høj hastighed. Det kan på- 25 vises, at denne binding er specifik ved at lade bindingen med radiomærket receptor konkurrere med umærket receptor. Reaktionen in vitro har samme temperaturafhængighed som in vivo: receptor bindes til virusset ved ved 37 C, men ikke ved 4 C. 30 (4) Receptoren viser sig at inhibere rhinovirus' smitteevne, når man inkuberer HRR med virus (under de samme betingelser som beskrevet ovenfor, hvor binding kan påvises) og derpå afprøver de opnåede blandinger med hensyn til smitteevne ved en begrænsende standard-fortyndingssmitteevneprø- 35 ve. Der fremstilles en HeLa-celle-suspension ved frigørelse med 0,03% EDTA/PBS i 10 min., og cellerne vaskes i 2% FBS/ - 10
12 DMEM (I medium) med 10 mm HEPES og justeres til en koncentration på 1,1 x 10 7 celler/ml. Virus eller virus/receptorblandinger fortyndes serievis i I medium, og 20 gl virus blandes med 180 pl celler og inkuberes i 60 min. ved stue- 5 temperatur. Blandingen fortyndes derpå med 9 volumendele medium og udstryges i 8-10 fordybninger på en vævskulturplade med 96 fordybninger (ca. 200 gl/fordybning) og dyrkes ved 34 C i 5 dage. Kulturerne får derpå point efter CPE (cytopatisk virkning), og titeren af den oprindelige beholdning 10 bestemmes ved hjælp af følgende formel: 11 antal døde fordybninger/10 x 50 x fortyndingsfaktor = PFU/ml 15 Resultaterne ses i nedenstående tabel. TABEL Virus HRR (M/L) Virustiter (PFV/ml HRV x u 6,6 x ,5 x 10 6 Tf - 2 x ,5 x 10 6 n 6,6 x x 10 6 i, 2 x x 10 4 HRV3 0 2,5 x , 6,6 x x 10 5 /I 2 x ,5 x 10 5,, 6,6 x ,5 x 10 4 Il 2 x x Der afprøves yderligere HRV-aerotyper. HRV4, -11-, -17- og -89-serotyper (hovedklasse) inhiberes af virusset, hvorimod HRV la og 2 (mindre klasse) ikke inhiberes. De ovenfor beskrevne resultater viser, at det rensede HRR kan blokere smitteevnen hos rhinovira, der hører til 35 hovedreceptorklassen af rhinovira. Receptorproteinets inhiberende egenskab på smitteevnen har forbindelse med dets
13 evne til at bindes til virusset og formodes at virke blokerende på receptorbindingsstedet på virusset. Denne egenskab hos receptoren kommer til udtryk ved lave koncentrationer af receptorproteinet og viser en høj affinitet hos receptoren 5 for virusset. Betydningen af disse resultater er, at den rensede opløselige receptor kan anvendes til at inhibere igangsætningen af spredningen af rhinovirus-infektioner in vivo. Det rensede protein udgør også en kilde til materiale, hvorfra mindre proteinfragmenter og peptider kan derivati- 10 seres, der har samme aktivitet som den intakte receptor. På tegningens fig. 1 ses ICAM's aminosyresekvens (minus signalsekvens). Sekvenser, der fås fra peptidfragmenter i HRR, vises med punkterede eller stiplede linier under ICAM's tilsvarende sekvens; stiplet betyder sikkert 15 angivne peptidsekvenser, punkteret betynder tvivlsomme angivelser, og xx betyder ukorrekte bestemmelser af tvivlsomme angivelser. Tallene under peptidsekvenser viser kodenanvnet på proteinsekvensbestemmelsesforsøget. Derpå underkastes renset protein begrænset eller 20 komplet proteolytisk nedbrydning, peptider renses enten ved omvendt-fase-chromatografi, gelfiltrering eller SDS-PAGE og underkastes derpå automatiseret proteinsekvensbestemmelse. Disse sekvenser anvendes til at søge i proteinsekvens- (NRFB og MIPSX) og DNA-sekvensdatabaser (genbank). Der foretages 25 en matchning af alle kendte peptidsekvenser bestemt ud fra HRR-protein. [Intercellulær Adhesion Molecule-1, Simmons m.fl., "ICAM, An Adhesion Ligand of LFA-1, Is homologous To The Neural Cell Adhesion Molecule of NCAM", Nature 331, (1988)]. ICAM undersøges af andre forskere på grund af sin rolle med hensyn til T-lymphocytters adhæsion til en række forskellige celletyper. Man har fremsat den hypotese, at ICAM (der forekommer på fibroblaster, epithelceller, leukocytter og endothelceller) samvirker med en struktur kaldet 35 LFA-1 (med lymphocyt-funktion associeret antigen-1), der forekommer på T-lymphocytters overflade, og derved er an- 12
14 svarlig for adhæsionen til disse celletyper. Man har nu bestemt sekvensen i 106 aminosyrer i rhinovirusreceptoren, og alle 106 passer nøjagtig til sekvensen i ICAM (ud af ialt 507 aminosyrer, der er forudsagt for 5 ICAM-sekvensen). Andre biokemiske informationer understøtter HRR's identitet med ICAM. For det første har det primære mrna-translationsprodukt, der er syntetiseret i et in vitrotranslationssystem, en tilsyneladende molekylvægt på dalton, hvilket er den samme som ICAM's. For det andet har 10 den HRR-proteintype, der findes i celler forgiftet med tunicamycin, der er en specifik inhibitor af asparagin-bundet glycosylering, en tilsyneladende molekylvægt på dalton, hvilket passer med fjernelsen af en signalsekvens fra proteinets N-endestilling. For det tredie viser delvis for- 15 døjelse af kerne-glycosyleret HRR-protein tilstedeværelse af 7 aspargin-bundne carbonhydrat-grupper, hvilket stemmer med tilstedeværelsen af 8 mulige carbonhydrat-acceptorsekvenser (N-S/T) i ICAM's aminosyresekvens. Endelig bestemmes HRR's chromosomkortposition til at være humant chromosom 20 19, identisk med, hvad der er konstateret for ICAM. Eftersom det komplette nucleotid og aminosyresekvensen i ICAM er blevet bestemt, og der er væsentlige, om ikke, overvældende tegn på, at ICAM og HRR er de samme eller meget lignende molekyler, kendes nu rhinovirusreceptorens 25 komplette aminosyresekvens. Bestemmelsen af denne aminosyresekvens, som er dette molekyles partielle kemiske struktur, giver mulighed for at udforme og producere en stor mængde receptorprotein, fragmenter, funktionelle domæner og afkortede versioner samt receptorproteinanaloge og peptider, som 30 har inhiberende aktivitet over for rhinovirus- og coxsackie A-virusinfektion. Den komplette aminosyresekvens giver også oplysninger, der er nødvendige for biofysiske og biokemiske undersøgelser af rhinovirus/receptor-samspil, som vil føre til identifikationen af afgørende molekylære kontakter, som 35 kan anvendes til udformningen af hidtil ukendte inhiberende molekyler. 13
15 Eftersom ICAM-molekylet er et medlem af immunglobulinsupergen-familien [Eur. J. Immunol. 15, (1984)], og eftersom andre picornavira, såsom poliovirus og coxsackievirus, bindes til receptorer, hvis gener er anbragt på chro- 5 mosom 19, er det muligt, at ICAM kan anvendes som basis for udviklingen af terapeutica til modvirkning af infektioner også af andre picornavira. Det er muligt, at ICAM eller fragmenter deraf er anvendelige direkte som terapeutica til andre virus- og inflarnmationssygdomme. Alternativt vil kend- 10 skabet til ICAM-struktur være anvendeligt til identifikation af sådanne viras receptorer. Endvidere er ICAM-1 nært beslæget med to adhæsionsproteiner i det voksne nervesystem, neuralt celleadhæsionsmolekyle (NCAM) og myelin-associeret glycoprotein (MAG) og en familie af epithelcellemolekyler, 15 herunder CEA, NCA, TM-CEA og de graviditets-specifikke Blglycoproteiner. NCAM, MAG og ICAM-1 har hver 5 immunglobulinlignende domæner, jfr. Dustin m.fl., "Supergene Families Meet In The Immunesystem", Commentary, Elsevier Publications, Cambridge (1988). Slægtskabet mellem picornavira og super- 20 genfamilien bestående af ICAM, NCAM og MAG danner basis for udviklingen af proteiner, proteinfragmenter, funktionelle domæner, analoge og blandinger deraf til inhibering af smitteevnen hos denne virusklasse. Kendskab til aminosyresekvensen og oplysninger om 25 ICAM-proteinet sammen med kendskabet til HHR og rhinovirus danner basis for de følgende forslag til udformning af proteinfragmenter og analoge til behandling af rhinovirus-infektion og til behandling af inflammation. Opløselige former af biologisk aktivt værtscellepro- 30 tein kan anvendes til at inhibere virusinfektion i modsætning til det cellemembran-bundne receptorprotein, som i reglen letter infektionen. Opløselige former af biologisk aktivt receptorprotein, proteinfragmenter, funktionelle domæner eller analoge kan omfatte anvendelsen af detergenter som 35 beskrevet ovenfor. Alternativt kan eliminering af C-endestillingen gøre proteinet(rne) opløseligt(e). Et biologisk 14
16 aktivt tryptisk fragment er en blanding af to arter, &I med en tilsyneladende molekylvægt på dalton og &I på dalton (i forhold til HRR på 95 Kd). N-endestillingen i begge arter blokeres, hvilket viser, at de begynder fra 5 rest 1 i det intakte HRR-molekyle, og peptider fjernes fra C-endestillingen: Det størst mulige fragment vil gå fra rest 1 til rest 488. En nedadgående ændring i tilsyneladende molekylvægt i forhold til intakt HRR viser et tab på >5.000 dalton eller 45 aminosyrerester, hvilket vil anbringe de 10 nye fragment-c-endestillinger i stillinger proximalt (Nendestillet) til transmembransegmentet. Eksempler på opløselige fragmenter kan omfatte hele det ekstracellulære domæne (op til a.a. 480) eller kan omfatte &I eller begge adskilte dele i det ekstracellulære 15 domæne (a.a ; ) i receptorproteinets aminosyresekvens. Det forventes endvidere, at mindre peptidfragmenter kan udgøre biologisk aktive analoge til inhibering af virusinfektion. En cdna-klon med fuld længde af HRR isoleres fra et 20 cdna-bibliotek over Hel- eller andre celler, der udtrykker receptoren, ved at screene med oligonucleotider fremstillet ud fra den offentliggjorte ICAM-1-sekvens. Konstruktion og ekspression af domænefragmenter af HRR opnås ved anvendelse af etablerede rekombinant-dna-metoder [Fisher m.fl., Nature , (1988); Hussey m.fl., Nature 331, (1988); og Deen m.fl., Nature 331, (1988)]. Et opløseligt ekstracellulært domæne fremstilles ved i HRR at spalte en cdna-klon, der koder sekvensen, med ThaI, som skærer i position 37 i signalpeptidregionen og i position 1415, aminosyrer før begyndelsen af det transmembrane domæne. Syntetiske oligonucleotid-forbindelsesstykker tilføjes trinvis på molekylets 5'- og 3'-ender for at genoprette signalpeptidet og initiator ATG ved N-endestillingen og for at indføre et ramme-translationsstopcodon ved C-endestillingen. 35 Stopcodonets position kan varieres, så at der fremstilles alternative afkortede former af molekylet. På lignende måde 15
17 anvendes forskellige sjældne skærerestriktionsenzymer til at indsætte stopcodoner i andre regioner af molekylet. Restriktionsenzymsteder medtages i enderne af forbindelsesstykkerne for at tillade styret kloning til en række forskellige eks- 5 pressionsvektorer. Oligonucleotidsteds-dirigeret mutagenese ved hjælp af gængse metoder anvendes til at indføre restriktionsenzymsteder, når der ikke findes passende naturligt forekommende steder. Yderligere anvendes polymerase-kædereaktions-(pca)-metoden til at fremstille særlige DNA-frag- 10 menter, der koder domæner og andre underregioner i molekylet. De ovennævnte løsninger anvendes også til fremstilling af yderligere underfragmenter af receptoren, såsom de 5 immunglobulin-lignende domæner (resterne 1-88, , , og ), Staunton m.fl., Cell 52, (1988). I dette tilfælde medtages der passende signalsekvenser til styring af proteinudskillelse til det ekspressionssystem, der anvendes. Der anvendes forskellige ekspressionssystemer, herunder virale promotorer i pattedyre- 20 celler [Gate m.fl., Cell 45, (1986)1; insektceller [Smith m.fl., Proc. Acad. Sci. USA 82, (1985)]; og E.coli [Skerra og Pluckthun, Science 240, (1988)]. Underfragmenter af receptoren, der fremstilles på ovennævnte måde, afprøves for deres evne til at binde over- 25 vejende rhinovirus-serotyper og til at reducere virus' smitteevne. Ekspression af det ekstracellulære domæne som beskrevet ovenfor anvendes ligeledes til at aflede tilstrækkelig mængder af den opløselige receptor til strukturundersøgelser, såsom røntgenkrystallografi. 30 Strukturundersøgelser ved hjælp af enzymatisk og kemisk fragmentering af ureduceret ICAM-1 har kortlagt tre disulfidbindinger af Lait 7 potentielle par og har forsøgvis kortlagt yderligere to disulfidbindinger. Disse resultater viser disulfidbindinger mellem 0108 og C159, mellem C210 og 35 C263 og mellemn C305 og C344; spaltning ved M64 med CNBr viser, at C21 og C25 danner par med C65 og C69, og modelop- 16
18 bygning baseret på den Iq-lignende foldning viser pardannelse af C21 til C65 og C25 til C69. Disse data bidrager til at støtte en strukturmodel af ICAM-1 med tre N-endestillede Ig-lignende domæner (jfr. tegningens fig. 2). 5 Ud fra ICAM-1 cdna konstrueres en række cdna'er (ticam'er eller forkortede ICAM'er), så at de indeholder præmature stopcodoner ved aminosyrepositionerne 454, 284 og 185 i det modne protein til fremstilling udskilte proteiner, der progressivt afkortes fra C-endestillingen. Afkortninger- 10 nes positioner udvælges på basis af de forudsagte grænser for transmembrandomænet [ticam(1-453)], immunglobulin-lignende domæner (ticam)1-283) og immunglobulin-lignende domæner 1+2 (ticam1-183)) og immunglobulinlignende domæne i (ticam(1-88). Proteinprodukterne af disse gener findes i 15 diagram i fig. 2 på tegningen. De konstrueres ved hjælp af polymerasekædereaktioner (PCR) ved hjælp af 5'- og 3'-oligonucleotid-igangsættere, som overlapper ICAM-2-kodningssekvensen og indeholder restriktionsenzymsteder; 5'-igangsætteren indeholder et yderligere EcoRl-sted, og 3'-igangsætterne 20 indeholder et yderligere translationsstopcodon og et Bamlsted. Disse DNA'er klones i korrekt retning ind i Bluescript- SK-vektoren (Strategene), der er udskåret ved en HindIII/Xbafordøjelse. Disse gener og en kontrol-icam-1 cdna med fuld længde klones derpå i korrekt retning ind i ekspressionsvek- 25 toren CDM8 (Seed m.fl.) ved hjælp af HindIII-stedet i genets 5'-ende og Xba-stedet i 3'enden. Disse plasmider transficeres ind i COS-celler ved hjælp af DEAE-dekstran-metoden, og cellerne dyrkes i 72 timer før afprøvning. Overfladeekspression overvåges ved hjælp af FACS ved brug af indirekte im- 30 munfluorescens og et monoklont antistof, der er specifikt for ICAM-1. Udskillelse af ICAM-1 i mediet overvåges ved metabolisk mærkning af celler i 7 timer med 35 S-cystein efterfulgt af immunabsorption af kulturoverfaserne med en monoklon anti-icam-1-sepharosepharpiks. Facs-analysen viser 35 tydeligt overfladeekspression af ICAM-1 i celler transficeret med IBAM-1 i fuld længde; celler transficeret med CMS8-vek- 17
19 * toren alene eller med ticam (1-453) udviser ingen overfladeekspression. Når materialet, der er isoleret fra de metabolisk mærkede kulturoverfaser, bliver analyseret ved hjælp af SDS-PAGE efterfulgt af fluorgrafi, iagttages ingen ICAM-1 i 5 kontrol- eller fuld-længde-icam-1-transfektanter, og der udskilles et protein på dalton af ticam (1-453)-transfektanter, et protein på dalton af ticam (1-283(- transfektanter og et protein på dalton af ticam )1-184)-transfektanter. Når det samme materiale farves for 10 protein ved sølvfarvning, er det klart, at ticam(1-453) i det væsentlige er rent. Stabile transfektanter dannes ved at transficere de samme cdna'er blandet med genet for en markør, der kan udvælges (thymidin-kinase til muse-l-celler, dihydrofolatreductase til CHO-celler), ind i muse-ltk-celler 15 eller hamster-cho(dhfr-)-celler og underkastes præparatudvælgelse (HAT-udvælgelse til Ltk-celler og methatrexat til CHO(dhfr-)-celler). Overlevende celler klones, og kulturoverfaser fra disse celler screenes ved hjælp af en radioimmunprøve, hvor MAb c78,5 absorberes på mikrotiterskåle, 20 renset ICAM-1 eller kulturoverfaser inkuberet med de MAbovertrukne skåle, og derefter påvises bundet ICAM-1 ved inkubation med 125-mærket MAb c78.4. Der fås adskillige L- celletransfektanter og 6n CHO-celletransfektant, der udskiller ticam(1-453) og L-celler, som udtrykker ticam(1-183). 25 Ekspression bekræftes ved hjælp af metabolisk mærkning af celler efterfulgt af immunabsorption af kulturoverfaser som beskrevet ovenfor. ticam(1-88) er blevet udtrykt i E.coli ved hjælp af OmpA-sekretionsvektor fra Inoue. I dette system fusioneres 30 OmpA-signalpeptidet med modent ICAM-1-proteins N-endestilling. ticam(1-88) og ticam(1-183) anbringes i OmpA-vektoren; E.coli, der er transformeret med disse vektorer, udtrykker proteinprodukter af den forventede størrelse som påvist ved Western-aftryk af SDS-PAGE-geler af celleekstrakter med 35 anti-peptid-antistoffer mod en sekvens inden for domæne 1 i ICAM-1. 18
20 Blokeringsundersøgelser med et panel af 6 MAbier mod ICAM-1 (som alle inhiberer virusbinding til ICAM-1) viser, at der findes to adskilte epitoper, der defineres af disse antistoffer, &I defineret af c78.4 (indeholdende c78.1, 5 c78.2, c92.1 og c92.5). Immunfældningsundersøgelser med proteolytiske fragmenter af ICAM-1 og med in vitro-translationer af afkortede ICAM-1-cDNAier viser, at begge disse epitoper indeholdes i det første Ig-lignende domæne. In vitro-virusbindings-undersøgelser, ved hvilke der 10 anvendes radiomærket ticam(1-453) og renset rhinovirus har vist, at det kan bindes til rhinovirus i opløsning. Yderligere biologisk aktive fragmenter bedømmes ved hjælp af overlappende sæt af syntetiske peptider på rester svarende til en del af eller alt HRR-proteinet. Pep- 15 tiderne fremstilles og afprøves individuelt for deres evne til at inhibere virusbinding til receptoren. Disse peptidfragmenter kan være direkte kopier af en del af rhinovirus-receptoren eller kan indeholde sekvenser fra ikke-tilgrænsende regioner i receptoren. 20 Man har på basis af homologi med NCAM forudsagt, at ICAM er et medlem ak immunglobulin-gen-superfamilien. Man skulle forvente, at immunglobulin-lignende domæner i ICAM ville have den grundlæggende nimmunglobulin-fold", som den er blevet påvist for to andre medlemmer af familien, ( mikroglobulin og HLA-A2-a-3-domænet. Denne fold består af en "8-barrel" udformning bestående af to antiparallele!- foldede plader, en sammensat af tre og &I sammensat af fire 5-strenge; en disulfidbinding mellem to cystein-rester (adskilt af ca. 60 aminosyrer langs kæden) forbinder de to 30 plader [A.F. Williams, Immun. Today 8, (1987)]. To af disulfidbindingerne, dem, der svarer til domæne 2 (C110- C161) og 3 (C212-C265), er blevet bestemt forsøgsmæssigt af ansøgerne og støtter modellen. Denne strukturmodel danner basis for udformning af unike analoge, som kan efterligne 35 virusbindingsstedet og være anvendelige som receptorblokeringsmidler. Hvert par antiparallele ø-strenge i "8-barrel" 19
21 forbindes ved hjælp af et hårnålesving med variabel størrelse; et sådant sving eller løkke, som rager ud fra sekundære strukturer, viser sig ofte af spille en rolle ved genkendelsen af ligander [Lezczynski og Rose, Science 224, (1986)]. Sådanne udadragende strukturer kan være af en særlig interesse i rhinovirus-receptoren, eftersom det foreslås, at receptorbindingsstedet på viruscapsidet ligger i en tilbagetrukket hulhed. Ved hjælp af HRR-sekvensen kan sådanne sving og løkker forudsiges på basis af en "5-barrel"-str uktur 10 og fremstilles som syntetiske peptider med tilføjelse af nye cysteinrester i peptidernes N- og C-endestilling; en disulfidbinding dannes derpå mellem sådanne rester på det samme peptid for at lukke løkken covalent (i modsætning til det oprindelige protein, hvor løkken lukkes ved ikke-covalent 15 samspil mellem tilstødende S-strenge). Sådanne peptider har en konformation, der er mere analog med konformationen i det oprindelige protein end et enkelt lineært peptids og afprøves for virus-bindende aktivitet. Fremgangsmåde til lokalisering af den region eller det 20 domæne i molekylet, der er ansvarligt for virusbindende aktivitet. Stedsdirigerede antistoffer rettet mod en særlig del af HRR (forudsagt ud fra en arbejdsmodel baseret på en immunglobulinfold) kan fremstilles ved at fremstille syntetiske peptider svarende til udvalgte regioner i proteinet, 25 koble sådanne peptider til større bærerproteiner og immunisere kaniner eller andre dyr med sådanne konjugater ved standardmetoder. Sådanne antistoffer kan afprøves for deres evne til at inhibere virusbinding; inhibering med en delmængde af sådanne antistoffer vil rette opmærksomheden mod 30 særlige domæner eller dele af domæner. Specifikke reaktive grupper på nogle aminosyrerester på receptorproteinet kan modificeres kemisk under ikke-denaturerende betingelser. Som følge af modifikationen af visse rester kan den virus-bindende evne gå tabt. Ved hjælp af 35 radioaktive sporstoffer i modificeringsreagenset kan modifikationen af nogle aminosyrerester koordineres med tab af 20
22 bindingsaktivitet, hvilket implicerer disse grupper i genkendelsen. Herved henledes opmærksomheden på en særlig del af molekylet eller en særlig aminosyrerest for at spille en bestemt rolle ved virusbinding. Sådanne rester kan derpå 5 forsøgsvis modificeres ved mutageneseforsøg in vitro. Det har eksempelvis vist sig, at når man mærker HRR med radioaktivt Bolton/Hunter-reagens (en N-hydroxysuccinimid-ester, som specifikt modificerer N-endestillinger og lysinrester), reduceres dets evne til at bindes til rhinovirus væsentligt. 10 Bestemmelse af den tredimensionale struktur af det virus-bindeide domæne i HRR ved hjælp af røntgen-krystallografi og/eller kernemagnetisk resonans. Ved hjælp af tredimensionale HRV14-koordinater (fra Brookhaven Data Bank) findes de to molekylers optimale "docking" ved hjælp af 15 grafisk computermetodologi. Det "dockede" kompleks' struktur kan derpå anvendes til at raffinere og forbedre egenskaberne hos proteinet eller receptorens peptidfragment. Eksempler på sådanne forbedringer kan være; (1) forøgelse af en virusbindende reaktions affinitet; (2) fremstilling af et mindre 20 molekyle; og (3) udeladelse eller beskadigelse af andre regioner i Molekylet; såsom det, der er nødvendigt for binding til LFA - 1. Hvis bindingsstedet for LFA-1 sidder på et andet domæne, kan domænet udelades. Alternativt, dersom bindingsstedet for LFA-1 sidder på det virus-bindende domæne, 25 kan der benyttes stedsdirigeret mutagenese af særlige aminosyrer for at inhibere bindingsevnen. Receptorens nøglerester, der er involveret i virusbinding, bestemmes af oligonucleotidsteds-dirigeret mutagenese. Således screenes mutantpuljer fremstillet ved mæt- 30 ningsmutagenese ved hjælp af den af Peterson og Seed i Cell 54 beskrevne metode, (1988), ved anvendelse af enten HRV14 eller monoklont antistof/komplementaflivning som negativ udvælgelse og et kanin-polyklont antistof som den positive udvælgelse. Syntetiske peptider svarende til regi- 35 oner på molekylet, der er identificeret på denne måde, fremstilles og afprøves med hensyn til virusbinding og evnen 21
23 til at reducere smitteevne. Farmaceutiske tilberedninger af proteiner, proteinfragmenter, funktionelle domæner og analoge finder anvendelse ved mange sygdomme. Med den viden, at HRV og LFA-1 begge 5 bindes til ICAM, forventes det, at der kan udformes ICAManaloge, som bindes til rhinovirus og derved inhiberer rhinovirusinfektion, men som ikke afbryder samspillet mellem ICAM og LFA-1. Alternativt foretages mutagenese af udvalgte rester (aminosyrer) på basis af strukturelle forudsigelser 10 og biokemisk struktur. Det forventes endvidere ud fra den viden, at ICAM og HRR er det samme molekyle, at det kan anvendes i fragmenter, funktionelle domæner eller LFA-1-analoge til at afbryde samspillet mellem HRR og rhinovirus og derved til 15 behandling af rhinovirusinfektioner. HRR eller fragmenter deraf kan finde anvendelse ved afbrydelsen af samspil mellem ICAM og LFA-1, hvilket kan anvendes til behandling af inflammation. Peptider afledt fra de kendte capsid-proteiner i 20 rhinovirus kan anvendes til afbrydelse af samspil mellem ICAM og LFA-1, hvilket kan anvendes til behandling af inflammation. Carbonhydratgrupper, som ikke er "nec" med hensyn til biologisk aktivitet, kan fjernes for at forøge produktionen af peptider i bakterier. 25 Stedsdirigeret mutagenese af cystiner kan anvendes til at begrænse genfoldning til biologisk aktive konformationer. 22
24 Patentkra v. 1. Anvendelse af humant rhinovirus (HRV)-hovedreceptorpræparat indeholdende ICAM-1-monomer af funktionelle domæner, fragmenter eller analoger omfattende det test-ig- 5 lignende domæne af ICAM-1, som udviser evne til binding til HRV-capsider, til fremstilling af et lægemiddel til inhibering af initieringen eller spredningen af rhinovirusinfektion. 2. Avendelse af et humant rhinovirus (HRV)-hovedre- 10 ceptorpræparat indeholdende en forbindelse fra gruppen: det hele ekstracellulære domæne af ICAM-1, aminosyrerne 1-200, t1cam (1-453), t1cam (1-283), t1cam (1-184) eller t1cam (1-88), som udviser evne til binding til HRV-capsider, til fremstilling af et lægemiddel til behandling af rhinovirus- 15 infektion. 23
25 Intercellulat adhesloo mole.r. o CA Asn Ala Gln 'hl Sti Vfl Set Pro Set Lys Val lie Leu Pie Att, 41y Gly Ser Val Leu Val lhr Cys Set Tht Ser Cys Asp Gin Pro i '34 -) CO Lys Lou Les, G1y Ile t lu Thr Pro Leo Pro ty fy- Giu lou Lou Itu Pto Gly A.- n A, t, Akr; ly- Val Tyr Gin Lou Sor A'n VII rifl '1 94t96 )1 i7ski c11; n Glu Asp 'Sol Gin Pto not ly, lyt 'Cet Acn rys Pro Asp Gly Glo St r Thr Als Lys Tht Pho Lou Thr Val Tyr Trp Tht Pro Glu All -- -_-- ---_, Val Glu Leu Ala pt0 Lett Pro.;et Trp Gin Pro Vel Gly Lys Asn Leu Thr Lou Arg Cys Glo Val Glu Gly Gly Ala Pro Arg Als Asn Leo Thr Val Vel Leu Lou Arg Gly Gin lys Glu Leu Lys Arg Glu Pro Ala Vel Gly Glu Pro Ale Glu Val Thr Thr Thr Val Leu Val 1 134k1 103L (*x) Arg Arg Asp 111s His Gly Ala Asn Phe Ser Cyl Arg Thr Glu Lev Asp Leu Arg Pro Gin Gly Leu Glu Lou Phe Glu Asn Thr ser Mø.. ) Pro Tyr Gin Leu Gin Thr The vel Leo Pro Ale lbr Pro Pro Gln Lou Val Ser Pro Arg Val Lou Glu Val Asp Thr Gln Gly Thr Vel '11K1 (sok) tit) Cys Ser Leu Asp Gly Lou Phe Pro Val Ser Glu Alt Gin Val nis Leu Als Lou Gly Asp Gln Arg Leu Asn Pro Thr Val Thr Tyr FIG la LØ Na
26 Gly Asn Asp Ser Phe Set Ala Lys Ala Ser Val Ser Val Thr Al. Glu Asp Glu Gly Thc Gln Arg Leu Thr Cys Als Val Ile Leu Gly Asn GIn Ser Gin Glo Thr Let, Gln Thr Val Thr Ile Tyr Ser Phe Pro Als Pro Asn Val /le Leu Thr Lys Pro Glu Val Ser Glu Gly Thr GIu Val Thr Val Lys Cys Glu Ala Ilts Pro Arg Ala Lys Val Thr Leu Asn Gly Val Pro Ale Gln Pro Leu Gly Pro Arg Ale Gin Lou Leu Leu Lys Ala Thr Pro Glu Asp Asn Gly Arg Ser the Ser Cys Ser Ale Thr Leu Glu Val Ale Gly Gln 'AM Ile His Lys Asn Gln Thr Arg Glu Leu Acg Val Leu Tyr Gly Pro Arg Leu Asp Glu Arg Asp Cys Pro Gly Asn Trp Thr Trp Pro Glu Asn Ser Gln Gln Thr Pro Met Cys Gln Ala Trp Gly Asn Pro Leu Pro Glu Leu Lys Cys Leu Lys Asp Gly Thr Phe Pro Leu Pro Ile Gly Glu Ser Val Thr Val Thr Arg Asp Leo Glo Gly Thr Ttr Leu Cys Arg Ala Arg Ser Thr Gln Gly Glu Val Thr Arg Glu Val Thr Val Asn Val Leu B0 Sar Pro Arg Tyr Glu Ile Val Ile Ile Thr val val Ala Ala Ala Val Ile Met Gly Thr Ala Gly Leu Ser Thr Tyr Leu Ttr Asn Arg t J Gin Arg Ly.- ile 11(5 ly T%1 Atg leu Gln Glo Ala Gin tys Gly Tht Pro Met ly Pto Asn Tht Gln Ala Thr Pro Pro l 96 ri L142 > I > FIG lb La 560t7LL Na
27 SP TM ICAM- I II I n EI I l l LICAM(1-453) I II III tica.m( ) I ticam( 1-184) ILICAM(I-SS) F I G 2
BIOTEKNOLOGI HØJT NIVEAU
STUDENTEREKSAMEN 2007 2007-BT-1 BITEKNLGI HØJT NIVEAU Torsdag den 31. maj 2007 kl. 9.00 14.00 Sættet består af 1 stor og 2 små opgaver samt 1 bilag i 2 eksemplarer. Det ene eksemplar af bilaget afleveres
Læs mereBIOTEKNOLOGI HØJT NIVEAU
STUDETEREKSAME 2006 2006-BT-2 BIOTEKOLOGI HØJT IVEAU Onsdag den 16. august 2006 kl. 9.00 14.00 Sættet består af 1 stor og 2 små opgaver. Alle hjælpemidler tilladt. STOR OPGAVE 1. Myoglobin A. Den røde
Læs mereStudienummer: MeDIS Exam 2015. Husk at opgive studienummer ikke navn og cpr.nr. på alle ark, der skal medtages i bedømmelsen
MeDIS Exam 2015 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Videregående biokemi og medicinudvikling Bachelor i Medis 5. semester Eksamensdato: 26-01-2015 Tid: kl. 09.00-11.00 Bedømmelsesform 7-trin Vigtige
Læs meretdp 12-7Z (12) PATENTSKRIFT
(19) DANMARK DK 173629 B1 tdp 12-7Z (12) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: C 07 K 141315 A 61 K 39/09 C 12 N 15/31 (21) Patentansøgning nr: PA 1991 01155 (22) Indleveringsdag:
Læs mereEn forsker har lavet et cdna insert vha PCR og har anvendt det følgende primer sæt, som producerer hele den åbne læseramme af cdna et:
F2011-Opgave 1. En forsker har lavet et cdna insert vha PCR og har anvendt det følgende primer sæt, som producerer hele den åbne læseramme af cdna et: Forward primer: 5 CC ATG GGT ATG AAG CTT TGC AGC CTT
Læs mere3u BI, terminsprøve (Bio A)
3.u BI, terminsprøve, 2018 MV 3u BI, terminsprøve (Bio A) Torsdag den 12/4, 2018, kl. 9-14. Af opgaverne 1, 2, 3, og 4 skal tre, og kun tre, afleveres Tilladte hjælpemidler: Bøger, kompendier, noter, lommeregner.
Læs mereDanmarks Tekniske Universitet
Side 1 of 14 Danmarks Tekniske Universitet Skriftlig prøve, den 21/1-2013 Kursus navn: Kursus nr. 27633 Introduktion til Bioinformatik Tilladte hjælpemidler: Alle "Vægtning" Angivet ved de individuelle
Læs mereDette er en kladde til et genoptryk af Eksperimentel Genteknologi fra 1991. Ideer, rettelser og forslag modtages gerne. Kh Claudia.
Transformation af E.coli K 12 Version 3. marts 2009 (C) Claudia Girnth-Diamba og Bjørn Fahnøe Dette er en kladde til et genoptryk af Eksperimentel Genteknologi fra 1991. Ideer, rettelser og forslag modtages
Læs mereEksamen i Modul 2.2, Det hæmatologiske system og immunforsvaret MEDIS, AAU, 2. semester, juni 2010
MedIS, AAU. Det hæmatologiske system og immunforsvaret, 7. Juni 2010 1 Navn: Studienummer: Eksamen i Modul 2.2, Det hæmatologiske system og immunforsvaret MEDIS, AAU, 2. semester, juni 2010 Dette eksamenssæt
Læs mereEnzymkemi H. C. Ørsted Ungdomslaboratorium Kemisk Institut Københavns Universitet august 2001
Enzymkemi H.. Ørsted Ungdomslaboratorium Kemisk Institut Københavns Universitet august 2001 2 Indholdsfortegnelse Enzymkinetik Indledning...2 Teori:...2 Mekanismen...2 Reaktionshastigheden:...5 Fremgangsmåde:...7
Læs mereSpm. A: Hvad viser data i Figur 1?
Opgave 1 Leptin er et plasma proteinhormon der primært produceres af og secerneres fra fedtceller (adipocytter). Leptin, der er kodet af ob (obecity) genet, er 16 kda stort. Leptins fysiologiske funktion
Læs mereImmunologi- det store overblik. Dyrlæge Rikke Søgaard Teknisk rådgiver, Merial Norden A/S
Immunologi- det store overblik Dyrlæge Rikke Søgaard Teknisk rådgiver, Merial Norden A/S Hvem er jeg Rikke Søgaard Uddannet dyrlæge i 1998 Ansat 5 år i praksis både blandet og svinepraksis Ansat 5 år på
Læs mereBrugsvejledning for 7827.10 dialyseslange
Brugsvejledning for 7827.10 dialyseslange 14.06.07 Aa 7827.10 1. Præsentation Dialyseslangen er 10 m lang og skal klippes i passende stykker og blødgøres med vand for at udføre forsøgene med osmose og
Læs mereOpgave 1 Listeria. mørkviolette bakteriekolonier, se figur 1a. og b. 1. Angiv reaktionstypen for reaktion. 1 vist i figur 1b.
Opgave 1 Listeria Bakterien Listeria monocytogenes kan være sygdomsfremkaldende for personer, der i forvejen er svækkede. For at identificere Listeria kan man anvende indikative agarplader. Her udnyttes
Læs mereSpm. 1.: Hvis den totale koncentration af monomer betegnes med CT hvad er så sammenhængen mellem CT, [D] og [M]?
DNA-smeltetemperaturbestemmelse KemiF2-2008 DNA-smeltetemperaturbestemmelse Introduktion Oligonucleotider er ofte benyttet til at holde nanopartikler sammen med hinanden. Den ene enkeltstreng er kovalent
Læs mere(19) DANMARK d2) (12) PATENTSKRIFT
(19) DANMARK d2) (12) PATENTSKRIFT (11) DK 175065 B1 Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.CI 7.: A 61 K 39/02 (21) Patentansøgning nr: PA 1988 05200 (22) Indleveringsdag: 1988-09-16 (24) Løbedag: 1988-09-16
Læs mere9 Patent- og Varemærkestyrelsen
(19) DANMARK m 9 Patent- og Varemærkestyrelsen (12) PATENTSKRIFT (10) (51) lnt.ci. : B 28 B 5100 (2006.01) E 01 C 19100 (2006.01) (21) Ansøgningsnummer: PA 2013 00014 (22) Indleveringsdato: 2013-01-10
Læs merePATENT 109646 Int. Cl. A 61 k 3/62 Kl. 30h 6
PATENT 109646 Int. Cl. A 61 k 3/62 Kl. 30h 6 Ansøgning nr. 26 43 /65 Indleveret den 25.ma j 19 65 Fremlagt den 18. d e c emb er 19 6 7 DANMARK DIREKTORATET FOR PATENT-OG VAREMÆRKEVÆSENET KØBENHAVN Patentbeskrivelsen
Læs mereSide 1 af 14. Eksamen: Bioinformatik It og Sundhed 27 Jan 2011 kl 9-13
Side 1 af 14 Eksamen: Bioinformatik It og Sundhed 27 Jan 2011 kl 9-13 Navn: Studie nummer: Dette eksamenssæt vil også kunne ses som en pdf fil nederst på kursus-hjemmesiden udfor den sidste dag d. 27 Jan
Læs mereGenhæmning: et overblik
Forskningsnyheder om Huntingtons Sygdom På hverdagssprog Skrevet af forskere. Til det globale HS-fællesskab Genhæmning tager et målrettet skridt fremad Målrettet hæmning af det mutante Huntington's chorea-gen,
Læs merePå grund af reglerne for copyright er det ikke muligt at lægge figurer fra lærebøger på nettet. Derfor har jeg fjernet figurerne fra slides ne, men
På grund af reglerne for copyright er det ikke muligt at lægge figurer fra lærebøger på nettet. Derfor har jeg fjernet figurerne fra slides ne, men skrevet hvorfra de er taget. De tre bøger, hvorfra illustrationerne
Læs mereBioteknologi A. Gymnasiale uddannelser. Vejledende opgavesæt 1. Mandag den 31. maj 2010 kl. 9.40-14.40. 5 timers skriftlig prøve
Vejledende opgavesæt 1 Bioteknologi A Gymnasiale uddannelser 5 timers skriftlig prøve Vejledende opgavesæt 1 Mandag den 31. maj 2010 kl. 9.40-14.40 Side 1 af 8 sider pgave 1. Genmodificeret ris Vitamin
Læs mereSide%1%af%14% Eksamen: Bioinformatik It og Sundhed 27 Jan 2011 kl 9-13
Side1af14 Eksamen: Bioinformatik It og Sundhed 27 Jan 2011 kl 9-13 Navn: Studie nummer: Dette eksamenssæt vil også kunne ses som en pdf fil nederst på kursus-hjemmesiden udfor den sidste dag d. 27 Jan
Læs mereKOMMISSIONENS FORORDNING (EU) / af
EUROPA- KOMMISSIONEN Bruxelles, den 29.5.2018 C(2018) 3193 final KOMMISSIONENS FORORDNING (EU) / af 29.5.2018 om ændring af forordning (EF) nr. 847/2000 for så vidt angår definitionen af udtrykket "lignende
Læs mereMaterialeliste: Ready-to-loadTM DNA prøver til elektroforese. Medfølgende reagenser og tilbehør. Egne materialer
Elevvejledning 1 Materialeliste: Ready-to-loadTM DNA prøver til elektroforese A B C D E F Plasmid DNA (uskåret) Plasmid skåret med Bgl I Plasmid skåret med Eco RI Lambda DNA (uskåret) Lambda DNA skåret
Læs mereNyt studie kaster lys over hvorfor nogle hjerneområder nedbrydes før andre i HS Styr på foldningen
Forskningsnyheder om Huntingtons Sygdom På hverdagssprog Skrevet af forskere. Til det globale HS-fællesskab Nyt studie kaster lys over hvorfor nogle hjerneområder nedbrydes før andre i HS Hvorfor dør kun
Læs mereFind enzymer til miljøvenligt vaskepulver
Find enzymer til miljøvenligt vaskepulver Enzymer, der er aktive under kolde forhold, har adskillige bioteknologiske anvendelsesmuligheder. Nye smarte og bæredygtige produkter kan nemlig blive udviklet
Læs mereScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort
ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort GELER INDEHOLDENDE MONOKLONALE REAGENSER AF MURIN ELLER HUMAN OPRINDELSE ABO1, ABO2, RH1, KEL1 Ag BESTEMMELSE IVD Alle de af Bio-Rad producerede
Læs mereProteiners byggesten er aminosyrer
PTEIE G EZYME Proteiners byggesten er aminosyrer Lad os se på den kemiske opbygning af et protein. Proteiner er store molekyler der er opbygget af mindre molekyler, som man kalder aminosyrer. Der findes
Læs mereBiogas. Biogasforsøg. Page 1/12
Biogas by Page 1/12 Indholdsfortegnelse Indledning... 3 Hvad er biogas?... 3 Biogas er en form for vedvarende energi... 3 Forsøg med biogas:... 7 Materialer... 8 Forsøget trin for trin... 10 Spørgsmål:...
Læs mereEnzymer og katalysatorer
Enzymer og katalysatorer Reaktionsligningen: viser den kemiske reaktion, der leverer energi til alle stofskifteprocesser i cellerne i kroppen. Kemisk er der tale om en forbrændingsproces, hvori atmosfærisk
Læs mereBesvarelse af opgaverne til den Spm.A: efter TGA TCA Spm. B:
Besvarelse af opgaverne til den 20-9-06 Spm.A: Her vil vi gerne sætte et relativt lille stykke DNA (FLAG) sammen med et relativt stort stykke (PRB1). Det lille stykke er for lille til at vi kan PCR amplificere
Læs mereProteiner. Proteiner er molekyler der er opbygget af "aminosyrer",nogle er sammensat af få aminosyrer medens andre er opbygget af mange tusinde
Proteiner Proteiner er molekyler der er opbygget af "aminosyrer",nogle er sammensat af få aminosyrer medens andre er opbygget af mange tusinde Der findes ca. 20 aminosyrer i menneskets organisme. Nogle
Læs mereRapport. Sund tilberedning Delopgave 1b. Potentielle naturlige antioxidanter Screeningsforsøg med udvalgte råvarer i modelsystemer for marinader
Rapport Sund tilberedning Delopgave 1b. Potentielle naturlige antioxidanter Screeningsforsøg med udvalgte råvarer i modelsystemer for marinader Kirsten Jensen 3. marts 2014 Proj.nr. 2002283-14 Version
Læs mereSommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar
1 Sommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar Titel på kursus: Uddannelse: Semester: ksamensdato: Tid: Bedømmelsesform Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin
Læs mereStofskiftets afhængighed af temperatur og aktivitet hos vekselvarme dyr
Stofskiftets afhængighed af temperatur og aktivitet hos vekselvarme dyr Besøget retter sig primært til elever med biologi på B eller A niveau Program for besøget Hvis besøget foretages af en hel klasse,
Læs mereHvorfor har vi brug for salt?
Forskningsnyheder om Huntingtons Sygdom På hverdagssprog Skrevet af forskere. Til det globale HS-fællesskab Højeffekts-hjerneskanninger afslører natriumændringer ved HS En ny hjerneskanningsteknik afslører
Læs mereProteiner: en introduktion. Modul 1; F13 Rolf Andersen, 18/2-2013
Proteiner: en introduktion Modul 1; F13 Rolf Andersen, 18/2-2013 4 facts om proteiner Proteiner udgør én af de vigtigste stofgrupper i vores organisme; de varetager en lang række forskellige funktioner.
Læs mere(19) DANMARK (11) DK 175533 B1 ( 1 2) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen
(19) DANMARK (11) DK 175533 B1 ( 1 2) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: A 61 K 39/295 A 61 K 39/205 A 61 K 39/285 A 61 K 39/42 C 12 N 15/00 (21) Patentansøgning nr: PA 1985 06062
Læs mereKlip-og-kopier DNA: reparér mutationer med 'genom-redigering' DNA, RNA og protein
Forskningsnyheder om Huntingtons Sygdom På hverdagssprog Skrevet af forskere. Til det globale HS-fællesskab Klip-og-kopier DNA: reparér mutationer med 'genom-redigering' Forskere kan lave præcise ændringer
Læs mere[BESØGSSERVICE INSTITUT FOR MOLEKYLÆRBIOLOGI OG GENETIK, AU]
Enzymkinetik INTRODUKTION Enzymer er biologiske katalysatorer i alle levende organismer som er essentielle for liv. Selektivt og effektivt katalyserer enzymerne kemiske reaktioner som ellers ikke ville
Læs mereSupplerende udtalelse om mulige etiske problemer ved transgene, humaniserede dyr
NOTAT 8. september 2008 J.nr. ER 2005-2.5-209, dok.: 273 ALY Supplerende udtalelse om mulige etiske problemer ved transgene, humaniserede dyr På mødet mellem medlemmerne af Det Etiske Råd og af Det Dyreetiske
Læs mereUndervisningsbeskrivelse
Undervisningsbeskrivelse Stamoplysninger til brug ved prøver til gymnasiale uddannelser Termin Institution Uddannelse Fag og niveau Lærer(e) Termin hvori undervisningen afsluttes: maj-juni, 2013 Skive
Læs mereStatusrapport for projektet: Afprøvning af den nye PCR teknik til test for virus i kartoffelknolde til erstatning for den gamle ELISA-teknik
Bilag 2 Statusrapport for projektet: Afprøvning af den nye PCR teknik til test for virus i kartoffelknolde til erstatning for den gamle ELISA-teknik ved forsker Mogens Nicolaisen, Danmarks JordbrugsForskning,
Læs mereSommereksamen 2013. Det hæmatologiske system og immunsystemet. Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering. kl. 09.00-11.
1/10 Sommereksamen 2013 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Eksamensdato: Tid: Bedømmelsesform Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering
Læs mereOPGAVER ØL -verdens første svar på anvendt bioteknologi
OPGAVER ØL -verdens første svar på anvendt bioteknologi Biotech Academy BioCentrum-DTU Søltofts Plads DTU - Bygning 221 2800 Kgs. Lyngby www.biotechacademy.dk bioteket@biocentrum.dtu.dk SMÅ OPGAVER Nedskriv
Læs mereCYP7A1 (0,1 nm) CYP7A1 (0nM) UBIC (0,1 nm)
Opgave 1 Leveren spiller en central rolle i lipid metabolismen og i opretholdelse af lipid homeostasen i hele kroppen. Lipidmetabolismen er fejlreguleret hos blandt andet svært overvægtige personer samt
Læs mereEKSAMEN. ALMEN FARMAKOLOGI (Modul 1.2) MedIS 1. semester. Onsdag den 20. januar 2010
AALBORG UNIVERSITET EKSAMEN ALMEN FARMAKOLOGI (Modul 1.2) MedIS 1. semester Onsdag den 20. januar 2010 2 timer skriftlig eksamen Evalueres som bestået/ikke bestået. Intern censur. Vægtning af eksamenssættets
Læs mereTømiddelgruppen. Af: Peter Johnsen & Michel M. Eram
Tømiddelgruppen Af: Peter Johnsen & Michel M. Eram Agenda Baggrund Forskning Viden Praksis SIDE 2 SIDE 3 www.vejregler.dk Oversigt Håndbog for drift af veje og stier, juli 2003 Vejregel for Tømidler, sand
Læs mereKEELER HÅNDTAG C-STØRRELSE
KEELER HÅNDTAG C-STØRRELSE 13A 13B LÆS OG FØLG DENNE VEJLEDNING OMHYGGELIGT Keeler håndtag C-størrelse Læs dette instruktionsafsnit omhyggeligt inden Keeler-produktet tages i brug. For egen og kundernes
Læs mereFra DNA til protein - lærerens tekst
Fra DNA til protein - lærerens tekst Af sidsel sangild Denne øvelse handler om proteinsyntese og proteiners foldning. Den giver mulighed for at danne nogle andre billeder af fænomenet, end man får ved
Læs mereBestemmelse af koffein i cola
Bestemmelse af koffein i cola 1,3,7-trimethylxanthine Koffein i læskedrikke Læs følgende links, hvor der blandt andet står nogle informationer om koffein og regler for hvor meget koffein, der må være i
Læs merePATENTSKRIFT A 47 G 7100 ( ) (74) Fuldmægtig: LINGPAT V/OLE JAGTBOE, Letlandsgade 3, 2.mf., 1723 København V, Danmark
(19) DANMARK d.t> V Patent- og Varemærkestyrelsen (12) PATENTSKRIFT (10) (51) lnt.ci. : B 65 D 85150 (2006.01) A 47 G 7100 (2006.01) (21 ) Ansøgningsnummer: PA 2014 00700 (22) Indleveringsdato: 2014-12-02
Læs mere(19) DANMARK (12) PATENTSKRIFT. Ci2 (11) DK 175668 B1. Patent- og Varemærkestyrelsen
(19) DANMARK (11) DK 175668 B1 Ci2 (12) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: A 61 K 39/21 A 61 K 39/395 C 07 K 1/00 C 07 K 14/155 C 12 P 21/00 (21) Patentansøgning nr: PA 1989 02843
Læs mere(19) DANMARK. 2six,l (12) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen (11) DK 175072 B1
(19) DANMARK (11) DK 175072 B1 2six,l (12) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: C 12 N 15/38 A 61 K 39/245 C 12 N 15/63 G 01 N 33/569 (21) Patentansøgning nr: PA 1987 02888 (22).
Læs mere2. del. Reaktionskinetik
2. del. Reaktionskinetik Kapitel 10. Matematisk beskrivelse af reaktionshastighed 10.1. Reaktionshastighed En kemisk reaktions hastighed kan afhænge af flere forskellige faktorer, hvoraf de vigtigste er!
Læs mereRegistreret brugsmodel uden prøvning. (74) Fuldmægtig: LINGPAT V/OLE JAGTBOE, Letlandsgade 3, 2.mf., 1723 København V, Danmark
(19) DANMARK m 9 Patent- og Varemærkestyrelsen (10) ( 12 ) BRUGSMODELSKRIFT Registreret brugsmodel uden prøvning DK 2013 00099 U3 (51) lnt.ci.: A 47 F 8100 (2006.01) (21) Ansøgningsnummer: BA 2013 00099
Læs mereBILAG I PRODUKTRESUME
BILAG I PRODUKTRESUME 1 1. VETERINÆRLÆGEMIDLETS NAVN Porcilis PCV, injektionsvæske, emulsion til svin 2. KVALITATIV OG KVANTITATIV SAMMENSÆTNING Hver dosis af 2 ml indeholder: Aktivt stof Porcint circovirus
Læs mereDER ER IKKE PENGE I RASKE DYR OG MENNESKER!
TØR DU FODRE DIN HUND MED RÅ KOST? ELLER TØR DU VIRKELIG LADE VÆRE? DET HANDLER IKKE OM AT HELBREDE SYGDOMME, MEN OM AT SKABE SUNDHED LIVSSTIL OG IKKE LIVSSTILSSYGDOMME! DER ER IKKE PENGE I RASKE DYR OG
Læs mereEU-udbud Genbrugshjælpemidler 2015 Spørgsmål & svar 7-21
EU-udbud Genbrugshjælpemidler 2015 Spørgsmål & svar 7-21 Nr. Dato for modtagelse af spørgsmål Dato for besvarelse af spørgsmål Spørgsmål Svar 7 17.2.2015 18.2.2015 Delaftale 1A: Kravspecifikation 4.1A
Læs mereVejrtrækning pust nyt liv og livskraft ind i din krop
Vejrtrækning pust nyt liv og livskraft ind i din krop Der er et ordsprog, der lyder: Åndedræt er liv, og det kan ikke siges bedre. Du trækker vejret for at leve, og din livskvalitet bliver påvirket af,
Læs mereEgnen virksomhed - Carbon Capture
Egnen virksomhed - Carbon Capture Emil Hansen Jonas Fardrup Hennecke Mathias Brodersen Simon Paw Dam Bodholt Indholdsfortegnelse: Forside Side 1 Indholdsfortegnelse: Side 2 Forord Side 3 Indledning Side
Læs mereTissue_LC_200_V7_DSP og Tissue_HC_200_V7_DSP
August 2015 QIAsymphony SPprotokolark Tissue_LC_200_V7_DSP og Tissue_HC_200_V7_DSP Dette dokument er Tissue_LC_200_V7_DSP og Tissue_HC_200_V7_DSP QIAsymphony SPprotokolark, R2, til kitversion 1. QIAsymphony
Læs mere,OWýRJýFDUERQGLR[LG ,QWURGXNWLRQ 3ODQWHI\VLRORJL. Et plantefrø er bl.a. opbygget af de tre organiske stofgrupper: kulhydrater, lipider og proteiner.
3ODQWHI\VLRORJL,QWURGXNWLRQ,OWýRJýFDUERQGLR[LG Et plantefrø er bl.a. opbygget af de tre organiske stofgrupper: kulhydrater, lipider og proteiner. Disse tre forbindelser kan samles under det overordnede
Læs mereNordisk Lægemiddelkongres 2002
Nordisk Lægemiddelkongres 2002 Der bliver brug for farmaceuter som aldrig før NR. 13 JUNI 2002 Fra den farmaceutiske grundforsknings frontlinie TEKST: JOURNALIST & LÆGE JAN ANDREASEN, AZYGOS Professor
Læs mereEr der flere farver i sort?
Er der flere farver i sort? Hvad er kromatografi? Kromatografi benyttes inden for mange forskellige felter og forskningsområder og er en anvendelig og meget benyttet analytisk teknik. Kromatografi bruges
Læs mereINDLÆGSSEDDEL: INFORMATION TIL BRUGEREN. Allergodil 0,5 mg/ml øjendråber, opløsning. Azelastinhydrochlorid
INDLÆGSSEDDEL: INFORMATION TIL BRUGEREN Allergodil 0,5 mg/ml øjendråber, opløsning Azelastinhydrochlorid Læs denne indlægsseddel grundigt. Den indeholder vigtige informationer. Du kan få Allergodil uden
Læs mereReaktionsmekanisme: 3Br 2 + 3H 2 O. 5Br - + BrO 3 - + 6H + Usandsynligt at alle 12 reaktantpartikler støder sammen samtidig. ca.
Reaktionsmekanisme: 5Br - + BrO 3 - + 6H + 3Br 2 + 3H 2 O Usandsynligt at alle 12 reaktantpartikler støder sammen samtidig ca. 10 23 partikler Reaktionen foregår i flere trin Eksperimentel erfaring: Max.
Læs mereHS og tabet af hjerneceller
Forskningsnyheder om Huntingtons Sygdom På hverdagssprog Skrevet af forskere. Til det globale HS-fællesskab Stamcelle-neuroner danner de rigtige forbindelser Erstatning af neuroner med stamceller hos mus
Læs mereKomplementsystemets fysiologi og patofysiologi. Søren Hansen, Cancer og Inflammationsforskning, WP21-1, SHansen@health.sdu.dk
Komplementsystemets fysiologi og patofysiologi C3 Søren Hansen, Cancer og Inflammationsforskning, WP21-1, SHansen@health.sdu.dk Detaljeret - aktiveringsmekanismer - opbygning - effektorfunktioner (incl.
Læs mereFysiologi Louise Andersen 1.3, RTG 29/10 2007
Fysiologi Louise Andersen 1.3, RTG 29/10 2007 Indholdsfortegnelse Introduktion Metode... 3 Teori Steptesten... 4 Hvorfor stiger pulsen?... 4 Hvordan optager vi ilten?... 4 Respiration... 4 Hvad er et enzym?...
Læs mereGrønne proteinkilder perspektiver og udfordringer. Biobase
Biobase Grønne proteinkilder perspektiver og udfordringer Søren Krogh Jensen, Institut for Husdyrvidenskab, AU-Foulum Laboratorie-skala Pilot-skala Semi-produktion-skala Laboratorieanalyser Fodringsforsøg
Læs mereLøsninger til opgaverne den Spm. A: Spm. B Spm. C:
Løsninger til opgaverne den 12-9-07 Spm. A: Her er vi i en situation at det eneste der kendes til vores receptor er, at den kan binde en ligand, som vi har til rådighed i en radioaktiv mærket version.
Læs mereReaktionshastighed og ligevægt
Reaktionshastighed og ligevægt Reaktionshastighed Kemiske reaktioners hastigheder er meget forskellige - nogle er så hurtige, at de næsten er umulige at måle, mens andre helt åbenlyst tager tid. Blander
Læs mereBIOTEKNOLOGI HØJT NIVEAU
STUDENTEREKSAMEN 2005 2005-BT-1 BITEKNLGI HØJT NIVEAU Tirsdag den 17 maj 2005 kl 900 1400 Sættet består af 1 stor og 2 små opgaver samt et bilag i 2 eksemplarer Det ene eksemplar af bilaget afleveres sammen
Læs mereDosering af anæstesistoffer
Dosering af anæstesistoffer Køreplan 01005 Matematik 1 - FORÅR 2005 1 Formål Formålet med opgaven er at undersøge hvordan man kan opnå kendskab til koncentrationen af anæstesistoffer i vævet på en person
Læs mereVandafstrømning på vejen
Øvelse V Version 1.5 Vandafstrømning på vejen Formål: At bremse vandet der hvor det rammer. Samt at styre hastigheden af vandet, og undersøge hvilke muligheder der er for at forsinke vandet, så mindst
Læs mereFra spild til penge brug enzymer
Fra spild til penge brug enzymer Køreplan 01005 Matematik 1 - FORÅR 2010 Denne projektplan er udarbejdet af Per Karlsson og Kim Knudsen, DTU Matematik, i samarbejde med Jørgen Risum, DTU Food. 1 Introduktion
Læs mereTræning til klatring i klubben.
Træning til klatring i klubben. En måde at opnå nye resultater i din klatring. Af Thomas Palmkvist Jørgensen. 1. udgave 2009 INDHOLDSFORTEGNELSE. Junior program / for dig der gerne vil i gang med at klatre
Læs merePRODUKTRESUMÉ. for. AviPro IBD LC-75 Vet., pulver til opløsning i drikkevand
2. maj 2012 PRODUKTRESUMÉ for AviPro IBD LC-75 Vet., pulver til opløsning i drikkevand 0. D.SP.NR 21362 1. VETERINÆRLÆGEMIDLETS NAVN AviPro IBD LC-75 Vet. 2. KVALITATIV OG KVANTITATIV SAMMENSÆTNING Aktivt
Læs mereBioteknologi A. Studentereksamen. Af opgaverne 1 og 2 skal begge opgaver besvares. Af opgaverne 3 og 4 skal en og kun en af opgaverne besvares.
Bioteknologi A Studentereksamen Af opgaverne 1 og 2 skal begge opgaver besvares. Af opgaverne 3 og 4 skal en og kun en af opgaverne besvares. frs111-btk/a-31052011 Tirsdag den 31. maj 2011 kl. 9.00-14.00
Læs merePRODUKTRESUMÉ. for. Doxycyclin 2care4 Vet., pulver til opløsning i drikkevand (2care4)
10. november 2011 PRODUKTRESUMÉ for Doxycyclin 2care4 Vet., pulver til opløsning i drikkevand (2care4) 0. D.SP.NR. 09519 1. VETERINÆRLÆGEMIDLETS NAVN Doxycyclin 2care4 Vet. 2. KVALITATIV OG KVANTITATIV
Læs mereBiologisk rensning Fjern sukker fra vand
Øvelse B Biologisk rensning Fjern sukker fra Formål: På renseanlægget renses spildeet mekanisk, biologisk og kemisk. I den biologiske rensning på renseanlægget bruges bakterier og mikroorganismer til at
Læs mereSSOG Scandinavian School of Gemology
SSOG Scandinavian School of Gemology Lektion 12: Syntetisk smaragd Indledning Det er min forventning, med den viden du allerede har opnået, at du nu kan kigge på dette 20x billede til venstre af en syntetisk
Læs mereAnalyse af benzoxazinoider i brød
Analyse af benzoxazinoider i brød Øvelsesvejledning til kemi-delen af øvelsen. Af Stine Krogh Steffensen, Institut for Agroøkologi, AU Eleven har forberedt før øvelsen: 1. Eleven har udfyldt skemaet herunder
Læs merePCR (Polymerase Chain Reaction): Opkopiering af DNA
PCR (Polymerase Chain Reaction): Opkopiering af DNA PCR til at opkopiere bestemte DNA-sekvenser i en prøve er nu en af genteknologiens absolut vigtigste værktøjer. Peter Rugbjerg, Biotech Academy PCR (Polymerase
Læs mereEmbolisk medikamenteluerende kugle STERIL KUN TIL ENGANGSBRUG IKKE-PYROGEN
BRUGSANVISNING DC Bead M1 Embolisk medikamenteluerende kugle STERIL KUN TIL ENGANGSBRUG IKKE-PYROGEN BESKRIVELSE: DC Bead M1 er hydrogel-emboliske medikamenteluerende kugler, der er nøjagtigt kalibrerede.
Læs mereMedicinsk honning til sårbehandling revamil
Medicinsk honning til sårbehandling Revamil Revamil sårbehandlingsprodukter til professionel sårbehandling Med langvarig og effektiv antibakteriel virkning. Det brede udvalg er fokuseret på brugervenlighed,
Læs merewww.printo.it/pediatric-rheumatology/dk/intro
www.printo.it/pediatric-rheumatology/dk/intro Majeed Version af 2016 1. HVAD ER MAJEED 1.1 Hvad er det? Majeed er en sjælden genetisk sygdom. Børn med denne sygdom lider af CRMO (kronisk rekurrent multifokal
Læs mereFlemming Fischer. Anvendt Kemi 3. Opgavehæfte
Flemming Fischer Anvendt Kemi 3 A hæfte 1.1 I bind 2 blev ammoniaksyntesen omtalt i forbindelse med kemisk ligevægt. Eftersom der er tale om en ligevægt, er det muligt, at ammoniak nedbrydes og bliver
Læs mereBIOLOGI A-NIVEAU. Xxxxdag den xx. måned åååå. Kl STX061-BIA V. STUDENTEREKSAMEN MAJ 2006 Vejledende opgavesæt 2
STUDENTEREKSAMEN MAJ 2006 Vejledende opgavesæt 2 BIOLOGI A-NIVEAU Xxxxdag den xx. måned åååå Kl. 09.00 14.00 Af opgaverne 1, 2, 3 og 4 skal tre og kun tre af opgaverne besvares. STX061-BIA V 1. Osmose
Læs mereForsvundet ved oversættelsen? Ny viden om hvordan proteinet for Huntingtons Sygdom dannes Du siger kartoffel. huntingtingenet
Forskningsnyheder om Huntingtons Sygdom På hverdagssprog Skrevet af forskere. Til det globale HS-fællesskab Forsvundet ved oversættelsen? Ny viden om hvordan proteinet for Huntingtons Sygdom dannes Dannelsen
Læs mereScanGel ReverScan A1, B 86790 2 x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O 86795 4 x 5 ml
ScanGel ReverScan A1, B 86790 2 x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O 86795 4 x 5 ml HUMANE TESTERYTHROCYTER TIL ABO-SERUMKONTROL IVD Alle de af Bio-Rad producerede og markedsførte produkter gennemgår fra modtagelse
Læs mereNational Rådgivningstjeneste for MRSA fra dyr
National Rådgivningstjeneste for MRSA fra dyr Tinna Ravnholt Urth Statens Serum Institut MRSA Methicillin Resistent Staphylococcus aureus STAFYLOKOKKER Stafylokokker er bakterier, der findes overalt De
Læs mereElevens uni-login: Skolens navn: Tilsynsførendes underskrift: FP9. 9.-klasseprøven BIOLOGI
Elevens uni-login: Skolens navn: Tilsynsførendes underskrift: FP9 9.-klasseprøven BIOLOGI Maj 2016 B1 Indledning Rejsen til Mars Det er blevet muligt at lave rumrejser til Mars. Muligheden for bosættelser
Læs mereProtein syntese. return
Protein syntese. I artiklen redegøres for principperne i, hvordan octapeptidet SCHTFGDI kan syntetiseres. Som yderligere illustration heraf kan peptidet opbygges og visualiseres i Chem3D-Pro. Herved kan
Læs mereSyv transmembrane receptorer
Syv transmembrane receptorer Receptoren som kommunikationscentral Cellemembranen definerer grænsen mellem en celles indre og ydre miljø, der er meget forskelligt. Det er essentielt for cellens funktion
Læs mere