BACTEC Diluting Fluid

Størrelse: px
Starte visningen fra side:

Download "BACTEC Diluting Fluid"

Transkript

1 BACTEC Diluting Fluid TILSIGTET BRUG BACTEC Diluting Fluid (fortyndingsvæske) bruges i procedurer, hvor mykobakterielle kulturer fortyndes til inokulering. Dens primære brug er i standard BACTEC medikament følsomhedsundersøgelse af M. tuberculosis. 1,3-7 I denne procedure fortyndes podestoffet 1:100 til kontrolglasset. Fortyndingsvæsken kan også bruges til at fortynde kulturer i andre procedurer, såsom NAP-testen eller enhver anden test, hvor det er nødvendigt at fortynde en testkultursuspension. 2 RESUMÉ OG FORKLARING Brug af fortyndingsvæske er en del af BACTEC medikament følsomhedsundersøgelsen af M. tuberculosis. Fortyndingsvæsken indeholder et vaskemiddel, polysorbat 80 (Tween 80) og et fedtsyrefrit albumin. Disse stoffer hjælper i spredningen af mykobakterier i en suspension. Albuminet er fedtsyrefrit, således at det ikke konkurrerer med 14 C-mærket fedtsyre, som findes i mediet. Koncentrationen af polysorbat 80 er minimal, således at det ikke forstyrrer i undersøgelsen af medikamentfølsomhed, men stadig hjælper i dispergeringen af mykobakterier for at give en ensartet og homogen suspension. PROCEDURENS PRINCIPPER BACTEC-følsomhedstesten er baseret på en modificeret proportionsmetode. Den kritiske proportion for modstand tages som 1 %, hvilket betyder, at hvis 1 % eller mere af testens mykobakterielle population er modstandsdygtig, betragtes kulturen som værende modstandsdygtig. For at fastlægge 1 % proportionen af modstandsdygtighed i 12B-mykobaktiemediet, fortyndes det bakterielle podestof til kontrolglasset først 1:100, før det tilsættes medieglasset. BACTEC Diluting Fluid stilles til rådighed for at lette 1:100 fortyndingen af kultursuspensionen. Fedtsyrefrit albumin og polysorbat 80, som findes i fortyndingsvæsken, hjælper med spredning af suspensionen og giver en mere ensartet suspension af mykobakterier. REAGENSER Glassene med BACTEC Diluting Fluid indeholder følgende reaktive ingredienser (inden behandling): BACTEC DILUTING FLUID, 9,9 ML HVERT Mængde tilsat pr. liter behandlet vand Polysorbat ,2 ml Fedtsyrefrit bovint serumalbumin...2,0 g Advarsler og forholdsregler: BACTEC Diluting Fluid er til in vitro diagnostisk brug. Dette produkt indeholder tørt naturgummi. Patogene mikroorganismer, deriblandt hepatitisvira og HIV, kan forekomme i kliniske prøver. Standard forholdsregler 8-11 og institutionelle retningslinier skal overholdes ved håndtering af alle emner, der er kontamineret med blod eller andre kropsvæsker. Inden brug skal hvert glas undersøges for tegn på beskadigelse, nedbrydning eller kontaminering såsom uklarhed, opsvulmet eller indsunket membran. Hvis et dyrkningsglas viser tegn på kontaminering MÅ DET IKKE BRUGES. Et kontamineret glas kan indeholde overtryk. Kontaminering af glasset er ikke nødvendigvis umiddelbart synlig. Dyrkningsglas, der udviser uklarhed, kontaminering eller misfarvning (mørkfarvning), må ikke bruges. Dyrkningsglas, som viser tegn på beskadigelse, bør kasseres før inokulering. I sjældne tilfælde kan glasflaskerne være revnet, og halsen kan gå i stykker, når hætten fjernes eller under håndtering. I sjældne tilfælde kan et dyrkningsglas også være utilstrækkeligt forseglet. I begge tilfælde kan glassets indhold løbe ud især hvis glasset vendes om. Hvis dyrkningsglasset er blevet inokuleret, skal det spildte produkt behandles med varsomhed, da det kan indeholde patogene organismer/stoffer. Sterilisér alle inokulerede dyrkningsglas vha. autoklavering, inden de kasseres. Anvend konstant sterile teknikker og etablerede forholdsregler mod mikrobielle farer. Procedurer skal udføres i et egnet biologisk sikkerhedsskab i et rum med passende ventilationssystem som anbefalet af CDC. 12 Benyt passende beskyttelseskittel, maske og handsker, mens der håndteres præparater og kulturer af potentielle patogener. Følg CDC- og OSHA-anbefalingerne. 12 For at minimere risikoen for lækage under inokuleringen skal der bruges sprøjter med permanent fastmonterede kanyler eller fastgjorte Luer-Lok-spidser. OPBEVARINGSINSTRUKTIONER Glas med BACTEC Diluting Fluid skal opbevares ved 2 25 C et tørt sted uden for direkte sollys. PP117JAA 2007/06 Dansk

2 PRØVEINDSAMLING Se instruktioner for følsomhedsundersøgelse (indlægsseddel til S.I.R.E. Drug Kit, PP-118JAA). PROCEDURE Vedlagte materialer: BACTEC Diluting Fluid Nødvendige materialer, der ikke er vedlagt: BACTEC 12B Medium BACTEC 460TB Instrument Tuberkulinsprøjte med permanent fastmonteret kanyle Desinfektionsmiddel 70 % isopropylalkohol Fjern hætten fra glasset med BACTEC Diluting Fluid. Gummimembranen på et dyrkningsglas bør desinficeres, hver gang der indføres i glasset. Rens toppen af hvert glas med desinfektionsmiddel, efterfulgt af 70 % alkohol. Tilsæt den kultursuspension, som skal fortyndes, til glasset ved brug af en sprøjte med en permanent fastmonteret kanyle eller fastgjort Luer-Lok-spids. Når der er tilsat 0,1 ml til glasset, giver dette en 1:100 fortynding. Bland grundigt ved at vende mindst 10 gange. Hvis det er nødvendigt med andre fortyndinger end 1:100, fjern da en afmåling fra glasset og lav fortyndinger efter behov. Yderligere oplysninger om procedurer for undersøgelse af medikamentfølsomhed findes på indlægssedlen til S.I.R.E. Drug Kit (PP-118JAA) eller BACTEC 460TB Product and Procedure Manual (MA-0029). KVALITETSKONTROL BRUG IKKE glas efter deres udløbsdato. BRUG IKKE glas med revner eller fejl. Kassér glasset på passende vis. Inden brug skal brugeren undersøge glassene med fortyndingsvæske for tegn på nedbrydning. Oplysninger om kvalitetskontrol af bakterielle procedurer findes på indlægssedlen til S.I.R.E. Drug Kit (PP-118JAA) eller BACTEC 460TB Product and Procedure Manual (MA-0029). Kvalitetskontrolcertifikater er vedlagt hvert fortyndingsvæskesæt. Kvalitetskontrolcertifikater viser de testorganismer, der blev brugt til denne produkttype. Som en del af den daglige vedligeholdelsesplan, skal funktionstestglas (BACTEC Performance Test Kit) testes på BACTEC 460TB-systeminstrumentet. Hvis aflæsningerne er lave, selvom funktionstestglassene blev testet korrekt, kan dette tilkendegive mulige problemer med instrumentet (se BACTEC PTK indlægsseddel, PP-046JAA). PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Den nøjagtige klargøring af en 1:100 fortynding opnås kun, når den suspension, som skal fortyndes, er blevet grundigt dispergeret. Tilstedeværelsen af store klumper, især i tilfælde af M. tuberculosis, kan resultere i forkert fortynding og kan derfor påvirke følsomhedsresultaterne for medikamentet. Kontaminering Der bør udvises omhu for at forhindre kontaminering under inokulering i BACTEC-glasset. En kontamineret prøve vil give en positiv aflæsning, men vil ikke angive en klinisk relevant prøve. En sådan afgørelse skal foretages af brugeren baseret på sådanne faktorer som den isolerede organismetype, forekomst af den samme organisme i flere dyrkninger, sygdomsforløbet, passende udstyrskontrol, osv. Kontaminering kan også være et resultat af forkert vedligeholdelse af BACTEC-kanyler og slanger, dårlig rensning af membran eller funktionsfejl i BACTEC-kanylevarmelegemet (se betjenings- og vedligeholdelseshåndbogen). På grund af de biologiske materialers beskaffenhed i medieprodukter og den iboende varians blandt organismer skal brugeren være opmærksom på potentielt varierende resultater i opsamlingen af visse organismer. FORVENTEDE VÆRDIER OG SPECIFIKKE YDELSESKARAKTERISTIKA Se indlægssedlen til S.I.R.E. Drug Kit (PP-118JAA) for at få yderligere oplysninger. Når en kultursuspension såsom M. tuberculosis blandes i fortyndingsvæsken efter grundig blanding af en homogen suspension af kultursuspensionen, opnås der en ønsket fortynding. Tilstedeværelsen af polysorbat 80 påvirker ikke følsomhedsmønsteret betydeligt på grund af dets lave koncentration. 2

3 LITTERATUR 1. Hawkins, J.E. Non-weekend schedule for BACTEC susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 23: , Laszlo, A. and S.H. Siddiqi. Evaluation of a rapid radiometric differentiation test for the Mycobacterium tuberculosis complex by selective inhibition with r-nitro-a-acetylamino-b-hydroxy-propiophenone. J. Clin. Microbiol. 19: , Libonati, J.P. et al. Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric method. Abstract C300, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin. Microbiol. 18: , Siddiqi, S.H. et al. Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1981, 13: Siddiqi, S.H. et al. Interlaboratory drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and two conventional methods. J. Clin. Microbiol. 1985, 22: Snider, Jr., D.E. et al. Rapid drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Am. Rev. Respir. Dis. 123: , National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed., NCCLS, Wayne, PA. 9. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 11. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA,

4 4

5 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: BD, BD Logo, BACTEC and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.