Amplified DNA Assay (analys med DNA-amplifiering) /01

Transkript

1 B ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q x Amplified DNA Assay (analys med DNA-amplifiering) /01 U 0344 Patentnumre: ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; Dansk TILSIGTET BRUG BD ProbeTec CT Q x diagnostik med DNA-amplifikationsmetode, når den testes med BD Viper system i ekstraheret funktion, bruger amplifikation ved hjælp af strengforskydning til direkte, kvalitativ detektion af Chlamydia trachomatis DNA i klinikerindsamlede endocervikale podepindsprøver til kvinder og urethrale podepindsprøver til mænd, patientindsamlede vaginale podepindsprøver (i et klinisk miljø) og urinprøver fra kvinder og mænd. Analysen er indiceret til brug med asymptomatiske og symptomatiske individer til at hjælpe med at diagnosticere klamydiasygdom. Resumé og forklaring World Health Organization (WHO) anslår, at 92 millioner nye tilfælde af infektion på grund af Chlamydia trachomatis diagnosticeres hvert år. 1 I USA er klamydia den mest almindelige rapporterede infektionssygdom med over tilfælde i 2006, og mængden af tilfælde er tre gange højere blandt kvinder end mænd. 2 Mængden af tilfælde af chlamydiainfektion er vokset i det sidste årti, hovedsagelig på grund af udvidelsen af screeningsprogrammerne for asymptomatiske individer og brugen af stadig mere følsomme diagnostiske tests. 70 til 90 % af chlamydiainfektioner hos kvinder er asymptomatiske med det resultat, at der kan opstå langsigtede helbredsproblemer, før en kvinde overhovedet ved, at hun er udsat. 3 C. trachomatis kan forårsage langsigtede sequelae, såsom inflammatorisk sygdom i pelvis og infertilitet samt fødsel af undervægtige spædbørn. Halvtreds procent af C. trachomatis-inficerede mænd er også asymptomatiske, og hvis de ikke behandles, kan der opstå infektion i akut urethritis eller epididymitis og kronisk proctitis. Overførsel af C. trachomatis sker gennem seksuel kontakt, men kan også finde sted i fødselsvejen, hvilket fører til neonatal conjunctivitis og/eller chlamydia pneumoniae. 4 Der findes effektiv antibiotisk behandling til chlamydiale infektioner og Advisory Committee on Human Immunodeficiency Virus (HIV) and Sexually Transmitted Disease (STD) Prevention opfordrer til indførelse af aktive kontrolprogrammer, der er rettet mod STD er, der kan behandles, som en primær intervention i HIV-epidemien. 5 For at forebygge komplikationer og mindske overførsel har US Preventive Services Task Force desuden offentliggjort anbefalinger til screening af unge, seksuelt aktive kvinder og dem, der er ældre og menes at have forhøjet risiko for infektion. 3,6 Chlamydiaceae (Klamydia-bakterier) er gramnegative, obligate, intracellulære bakterier, der danner karakteristiske intracellulære inklusioner, som kan observeres i cellekultur ved fluorescensmikroskopi efter anvendelse af antigen-specifik farvning. 7 Der anerkendes femten serotyper af C. trachomatis bestående af tre grupper, der hver har tilknytning til en forskellig sygdomstilstand: trachoma serotyperne, A-C; de occulogenitale serotyper D-K; og Lymphogranuloma venereum serotyperne, L 1 L 3. De aktuelle metoder til diagnosticering af C. trachomatis infektion omfatter kultur- og immunologiske analyser samt detektion af nukleinsyrer ved direkte hybridisering eller amplifikation. Selvom dyrkning historisk set har været den gyldne standard for detektion af C. trachomatis, har den forbedrede følsomhed af amplificerede metoder medført, at de i stigende grad er taget i anvendelse og til gengæld bidraget til stigningen i antallet af rapporterede tilfælde af infektion. Ved anvendelse sammen med BD Viper systemet indebærer BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse automatiseret ferrioxid-baseret ekstraktion af DNA fra kliniske prøver med BD FOX ekstraktionsteknologi med den kemiske lysering af celler efterfulgt af binding af DNA til paramagnetiske partikler, skylning af den bundne nukleinsyre og eluering i en amplifikationskompatibel buffer. Når C. trachomatis DNA er til stede, detekteres det ved strengforskydning (Strand Displacement Amplification, SDA) af en specifik fokussekvens ved tilstedeværelse af en fluorescensmærket detektorprobe. 8,9 PROCEDURENS PRINCIPPER BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse er udviklet til brug med BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Q x prøveindsamlings- og transportanordninger, relevante reagenser, BD Viper systemet og BD FOX ekstraktion. Prøver indsamles og transporteres i deres respektive transportanordninger, der bevarer integriteten af C. trachomatis DNA i de angivne temperatur- og tidsintervaller. Urin- og podepindsprøver gennemgår et forvarmningstrin i BD Viper lyseringsvarmeapparatet for at opløse slim og homogenisere prøven. Efter nedkøling overføres prøverne til BD Viper systemet, som derpå udfører alle de trin, der indgår i ekstraktion og amplificering af fokus-dna uden yderligere intervention fra brugeren. Prøverne overføres til et ekstraktionsglas, der indeholder ferrioxidpartikler i en opløselig film og tørret ekstraktionskontrol. En høj ph anvendes til at lysere bakteriecellerne og frigøre deres DNA i opløsningen. Der tilføjes derpå syre for at sænke ph og inducere en positiv ladning på ferrioxiden, der derpå binder det negativt ladede DNA. Partiklerne og det bundne DNA trækkes derefter til siderne af ekstraktionsglasset med magneter, og den behandlede prøve aspireres til affald. Partiklerne skylles, og en elueringsbuffer med høj ph tilføjes for at indsamle det rensede DNA. Endelig bruges en neutraliseringsbuffer til at bringe den ekstraherede opløsnings ph til det optimale niveau for amplificering af fokus. BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA analyse er baseret på den samtidige amplifikation og påvisning af fokus- DNA ved hjælp af amplifikationsprimere og en fluorescensmærket detektorprobe. 8,9 Reagenserne for SDA tørres i to separate mikrobrønde til engangsbrug: Primermikrobrønden indeholder amplifikationsprimerne, den fluorescensmærkede detektorprobe, nukleotider og andre reagenser, som er nødvendige for amplifikation, mens amplifikationsmikrobrønden indeholder de to enzymer (en DNA polymerase og en restriktionsendonuklease), der er påkrævet for SDA. BD Viper systemet pipetterer en del af den rensede DNA-opløsning fra hvert ekstraktionsglas

2 i en primermikrobrønd for at rehydrere indholdet. Efter en kort inkubation overføres reaktionsblandingen til en tilsvarende forvarmet amplifikationsmikrobrønd, der er forseglet for at forebygge kontaminering, og inkuberes derpå i en af de to varmekontrollerede fluorescensaflæsere. Tilstedeværelsen eller fraværet af C. trachomatis DNA bestemmes ved at beregne spidsfluorescensen (maksimale relative fluorescerende enheder [MaxRFU]) i løbet af amplificeringsprocessen og ved at sammenligne denne måling med en forudbestemt tærskelværdi. Ud over den fluorescerende probe, som bruges til at detektere amplificeret C. trachomatis fokus-dna, inkorporeres et andet fluorescensmærket oligonukleotid i hver reaktion. Ekstraktionskontrol (EC) oligonukleotid mærkes med en anden farve end den, der bruges til at detektere det C. trachomatis-specifikke fokus og bruges til at bekræfte gyldigheden af ekstraktionsprocessen. EC tørres i ekstraktionsglassene og rehydreres efter tilføjelse af prøven og ekstraktionsreagenserne. Ved afslutningen af ekstraktionsprocessen monitoreres EC fluorescensen med BD Viper instrumentet, og der anvendes en automatisk algoritme på både EC and C. trachomatis-specifikke signaler for at rapporteres prøveresultater som positive, negative og EC fejl. REAGENSER Hver BD ProbeTec CT Q x reagenspakke indeholder: CT Q x primermikrobrønde med amplificeret DNA-analyse, 12 x 96: hver primermikrobrønd indeholder ca. 110 pmol oligonukleotider, 45 pmol fluorescensmærket detektorprobe, 80 nmol dntp er, med stabilisatorer og bufferkomponenter. CT Q x amplifikationsmikrobrønde med amplificeret DNA-analyse, 12 x 96: hver amplifikationsmikrøbrønd indeholder ca. 100 enheder DNA polymerase og 620 enheder restriktionsenzym med stabilisatorer og bufferkomponenter. BEMÆRK: Hver mikrobrøndpose indeholder et tørremiddelbrev. Kontrolsæt for BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser: 24 CT/GC Q x positive kontrolglas indeholder ca kopier hver af pctb4 og pgcint3 lineariserede plasmider i carrier nukleinsyre og 24 CT/GC Q x negative kontrolglas, som indeholder carrier nukleinsyre alene. Koncentrationerne af pctb4 og pgcint3 plasmiderne bestemmes ved UV spektrofotometri. CT/GC Q x podepindsdiluent til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser: 48 glas, der hver indeholder ca. 2 ml kaliumphosphat-/kaliumhydroxidbuffer med DMSO og konserveringsmiddel. BD FOX ekstraktionsglas til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser: 48 strimler af 8 glas, der hver indeholder ca. 10 mg jernoxid i en opløselig film og ca. 240 pmol fluorescensmærket ekstraktionskontrol/ oligonukleotid. Ekstraktionsreagens og lyseringstrug til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser: hver ekstraktionsreagenstrug med 4 kaviteter indeholder ca. 16,5 ml bindingssyre, 117 ml vaskebuffer, 35 ml elueringsbuffer og 29 ml neutraliseringsbuffer med konserveringsmiddel. Hvert lyseringstrug indeholder ca. 11,5 ml lyseringsreagens. Instrument, udstyr og materialer Vedlagte materialer: BD Viper Instrument, BD Viper Instrument Plates (instrumentplader), BD Viper Pipette Tips (pipettespidser), BD Viper Tip Waste Boxes (spidsaffaldsbeholdere), BD Viper Amplification Plate Sealers (amplifikationspladeforseglere) (sort), BD Viper Lysing Heater (lyseringsvarmeapparatet), BD Viper Lysing Rack (lyseringsstativ), BD Viper Neutralization Pouches (neutraliseringsposer), prøveglas og hætter til brug på BD Viper (ekstraheret funktion), Urine Preservative Transport (urinkonserveringstransport) til BD ProbeTec Q x amplificerede DNA-analyser [Q x UPT]), Female Endocervical Specimen Collection Kit (prøvetagningssæt til endocervikale prøver fra kvinder) til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser, Male Urethral Specimen Collection Kit (prøvetagningssæt til urethralprøver fra mænd) til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser, Vaginal Specimen Transport (transportsæt til vaginalprøver) til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificeret DNA-analyse, BD ProbeTec Accessories (tilbehør). Nødvendige, ikke vedlagte materialer: Nitrilhandsker, 1 % (v/v) natriumhypochlorit*, DNA AWAY, 3 % (w/v) hydrogenperoxid, Chlamydia trachomatis ATCC VR-902B (fortyndet i saltvand med fosfatbuffer) eller Blackhawk AmpliTrol CT/GC. *Bland 200 ml blegemiddel med 800 ml vand. Klargør frisk blanding dagligt. Krav til opbevaring og håndtering: Reagenser skal opbevares ved 2 33 C. Uåbnede reagenspakker er stabile indtil udløbsdatoen. Så snart en pose åbnes, er mikrobrøndene stabile i 6 uger, hvis de forsegles korrekt, eller indtil udløbsdatoen, alt efter hvad der kommer først. Må ikke fryses. Advarsler og forholdsregler Generelt: 1. Til in vitro diagnostik 2. Patogene mikroorganismer, deriblandt hepatitisvira og humant immundefekt virus, kan forekomme i kliniske prøver. Standardforholdsregler og institutionelle retningslinjer skal overholdes ved håndtering af alt materiale, der er kontamineret med blod og andre legemsvæsker. 3. For andre specifikke advarsler, forholdsregler og noter, som særlig gælder for BD Viper henvises der til brugervejledningen til BD Viper systemet. Præparat: 4. Til indsamling af endocervikale podepindsprøver anvendes kun prøvetagningssæt til endocervikale prøver fra kvinder for BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser. 5. Til selvprøvetagning og transport af vaginalprøver anvendes kun transportsættet til vaginalprøver for BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser. 6. Til indsamling af urethrale podepindsprøver til mænd anvendes kun prøvetagningssæt til urethrale prøver fra mænd for BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser. 7. Til urinprøver anvendes kun Q x UPT eller ukonserveret (ren) urin. 2

3 8. Under- eller overdispensering af urin i prøveglas eller Q x UPT kan påvirke analyseydelsen. Overfyldning af glassene kan også medføre væskeoverløb på BD Viper dækket og kan give anledning til kontaminering. 9. Ved mandlige og kvindelige urethrale podepindsprøver skal prøverne udtages og testes inden udløbsdatoen for glasset med CT/GC Q x transportmedium. 10. Ved vaginalprøver skal prøverne udtages og behandles inden udløbsdatoen for transportsættet til vaginalprøver. Efter eksprimering skal prøverne testes inden udløbsdatoen for glasset med CT/GC Q x transportmedium. 11. Ved urinprøver skal prøverne testes inden udløbsdatoen for Q x UPT. Analyse/reagens: 12. Denne reagenspakke er beregnet på at teste endocervikale og patientindsamlede vaginale podepindsprøver (i et klinisk miljø), urethralpodninger fra mænd og urinprøver fra kvinder og mænd med BD Viper systemet i ekstraheret funktion. 13. Q x UPT indeholder NAP Guard (ca. 742,5 mm K 2 EDTA). NAP Guard kan irritere øjnene, huden og luftvejene. Kommer stoffet i øjnene, skylles de åbne øjne straks grundigt med vand, og læge kontaktes, hvis symptomerne varer ved. Kommer stoffet på huden, vaskes straks med store mængder vand og sæbe. Hvis stoffet indåndes, kontaktes læge, hvis der opstår problemer. 14. Brug kun prøve- og kontrolglas med hætter, som kan gennemstikkes, på BD Viper systemet i ekstraheret funktion. Undlad at fjerne gennemstikshætter inden instrumentet sættes i gang. Sørg for at udskifte alle gennemstikshætter med nye gennemstikshætter, inden instrumentet sættes i gang. 15. Kitreagenser fra kits med forskellige lotnumre må ikke ombyttes eller blandes. 16. CT/GC Q x podepindsdiluenten til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser indeholder dimethyl sulfoxid (DMSO). DMSO er farlig ved indånding, ved hudkontakt og ved indtagelse. Undgå kontakt med øjnene. Kommer stof i øjnene, skylles straks grundigt med vand og læge kontaktes. Efter kontakt med huden vaskes straks med store mængder vand. 17. Test ikke glasset med CT/GC Q x transportmedium fra prøvetagningssæt til endocervikale prøver fra kvinder eller urethrale prøver fra mænd, hvis det modtages i laboratoriet uden podepinden. Der kan forekomme et falsk negativt testresultat. 18. Brug kun BD Viper pipettespidserne som leveret af BD med BD Viper systemet. 19. Ekstraktionsreagens og lyseringstrug til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser indeholder korroderende stoffer: Det anbefales kraftigt at benytte personligt beskyttelsesudstyr, såsom nitrilhandsker, beskyttelsesbriller og laboratoriekittel, ved håndtering af disse reagenser. Disse opløsninger har en stærk kaustisk virkning og kan forårsage alvorlige forbrændinger på huden og slimhinderne. Undgå kontakt med øjne og hud. Undgå at indånde røg, dampe eller sprøjt. Skadelig ved indtagelse. Undlad at spise eller drikke i nærhed af disse reagenser. Hvis der opstår kontakt, skal kontamineret tøj straks fjernes, og huden skal vaskes med vand og sæbe og skylles grundigt. Kommer stof i øjnene, skylles straks grundigt med vand og læge kontaktes. 20. Brug kun BD Viper amplifikationspladeforseglerne (sort) på amplifikationspladerne med BD Viper systemet. Brug af klare forseglere til forsegling af amplifikationspladerne kan give fejlagtige resultater. 21. Reagensposer indeholdende ubrugte primermikrobrønde og amplifikationsmikrobrønde SKAL lukkes omhyggeligt igen efter åbning. Bekræft, at tørremiddel er til stede, inden reagensposerne lukkes. 22. Da CT/GC Q x positiv kontrol bruges til både CT Q x og GC Q x testning, er korrekt placering af mikrobrøndstrimlerne vigtig for rapportering af endelige resultater. 23. Den plade, som indeholder amplifikationsmikrobrønde SKAL forsegles korrekt med BD Viper amplifikationspladeforsegler (sort), inden pladen tages væk fra BD Viper systemet. Forsegling sikrer en lukket reaktion til amplifikation og påvisning og er nødvendig for at undgå kontaminering med amplifikationsprodukter af instrumentet og arbejdsområdet. Forseglingsmaterialet må ikke på noget tidspunkt fjernes fra mikrobrønde. 24. Primermikrobrønde med residualvæske (efter overførsel af væske fra primermikrobrønde til amplifikationsmikrobrønde) udgør en kilde til kontaminering af fokus. Forsegl omhyggeligt primermikrobrønde med pladeforsegleren inden bortskaffelse. 25. For at forhindre kontaminering af arbejdsmiljøet med amplifikationsprodukter bruges engangsposerne, der følger med tilbehørssættet, til at kassere testede amplifikationsmikrobrønde. Sørg for, at poserne er korrekt lukket inden bortskaffelse. 26. Selv om specielle arbejdsområder ikke kræves, fordi BD Viper-designet nedsætter muligheden for kontaminering med amplificeret DNA-fragment i testmiljøet, er andre forholdsregler til kontrol af kontaminering nødvendige, især for at undgå kontaminering af præparater under bearbejdningen. 27. SKIFT HANDSKER, hvis de kommer i kontakt med præparater eller forekommer våde, for at undgå at kontaminere andre præparater. Skift handsker inden arbejdsområdet forlades og ved indgang til arbejdsområdet. 28. I tilfælde af at arbejdsområdet eller udstyret kontamineres med prøver og kontroller, skal det kontaminerede område rengøres omhyggeligt med 1 % (v/v) natriumhypochlorit, DNA AWAY eller 3 % (w/v) hydrogenperoxid (brug ikke hydrogenperoxid fra en flaske, der har været åben i mere end 8 dage) og skyl grundigt med vand. Lad overfladen tørre fuldstændigt, inden De fortsætter arbejdet. 29. I tilfælde af at der spildes på BD Viper lyseringsstativet, neddyppes stativet i 1 % (v/v) natriumhypochlorit i 1 2 min. Overstig ikke 2 min. Skyl stativet grundigt med vand og lad det lufttørre. 30. Rengør hele arbejdsområdet bordflader og instrumentflader med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit dagligt. Skyl grundigt med vand. Lad overflader tørre fuldstændigt, inden der fortsættes med yderligere testning. 31. Kontakt BD Teknisk service i tilfælde af en usædvanlig situation, som for eksempel, hvis der spildes ned i BD Viperinstrumentet, eller kontaminering med DNA, som ikke kan fjernes ved hjælp af rengøring. PRØVETAGNING, -OPBEVARING OG -TRANSPORT MED PODEPIND For podepindsprøverne er der indhentet ydelsesdata i denne indlægsseddel med de angivne BD ProbeTec indsamlingskit. Ydelse er ikke evalueret med andre indsamlingsanordninger end de angivne. Prøvetagningssæt til endocervikale prøver fra kvinder til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser 3

4 Transportsættet til vaginalprøver BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser Prøvetagningssæt til urethrale prøver fra mænd til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser Indsamling af podepræparat Indsamling af endocervikalt podepræparat ved hjælp af prøvetagningssæt til endocervikale prøver fra kvinder til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser 1. Tag rensevatpinden ud af pakningen. 2. Fjern blod og slim fra orificium af cervix med rensevatpinden med polyesterspids og hvidt skaft. 3. Kassér den brugte rensevatpind. 4. Tag den pinkfarvede podepind ud af pakningen. 5. Indfør podepinden i cervikalkanalen og drej den rundt i s. 6. Træk forsigtigt podepinden ud. Undgå kontakt med vaginalslimhinden. 7. Tag låget af glasset med CT/GC Q x transportmedium. 8. Før podepinden helt ind i glasset med CT/GC Q x transportmedium. 9. Bræk skaftet af podepinden ved knækmærket. Udvis forsigtighed, så indholdet ikke sprøjter ud. 10. Sæt låget godt fast på glasset. 11. Mærk glasset med patientdata og dato/klokkeslæt for prøvetagningen. 12. Sørg for transport til laboratoriet. Selvprøvetagningsprocedure af vaginalprøver ved hjælp af transportsæt til vaginalprøver til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser. BEMÆRK: Sørg for at patienterne læser anvisningen i selvprøvetagning, inden de får prøvetagningssættet. 1. Vask hænderne med vand og sæbe. Skyl og tør dem. 2. Det er vigtigt at stå sikkert på benene under prøvetagningen. 3. Drej låget, så forseglingen brydes. Træk låget med den fastgjorte podepind ud af glasset. Den bløde spids på podepinden må ikke røres, og podepinden må ikke lægges ned. Hvis der røres ved podepindsspidsen, eller den tabes, eller podepinden lægges ned, skal podepinden kasseres, og der skal anmodes om en ny vaginalpodepind. 4. Man skal holde fat i låget på podepinden med den ene hånd og med podepindsspidsen pegende hen mod sig. 5. Spred forsigtigt huden uden for vagina med den anden hånd. Før spidsen af podepinden ind i vagina. Spidsen skal pege mod lænden; slap af i musklerne. 6. Før forsigtigt podepinden højst 5 cm ind i vagina. Hvis podepinden ikke går let ind, skal den forsigtigt drejes samtidig med, at den skubbes. Hvis det stadigvæk er vanskeligt, skal man ikke forsøge at fortsætte. Sørg for at podepinden rører vaginalvæggene, så den opsuger fugt. 7. Drej podepinden rundt i s. 8. Træk podepinden ud uden at røre huden. Sæt podepinden i glasset, og sæt låget godt på. 9. Efter prøvetagningen vaskes hænderne med vand og sæbe; skyl og tør dem. 10. Returner glasset med podepinden til sygeplejersken eller klinikeren jf. instruktionerne. 11. Mærk præparatet med patientinformation og dato/klokkeslæt for indsamling. 12. Sørg for transport til laboratoriet. Indsamling af urethralt podepræparat ved hjælp af prøvetagningssæt til urethrale prøver fra mænd til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser 1. Tag podepinden ud af pakningen. 2. Indfør podepinden 2 4 cm i urethra og drej den rundt i 3 5 s. 3. Træk podepinden ud. 4. Tag låget af glasset med CT/GC Q x transportmedium. 5. Før podepinden helt ind i glasset med CT/GC Q x transportmedium. 6. Bræk skaftet af podepinden ved knækmærket. Udvis forsigtighed, så indholdet ikke sprøjter ud. 7. Sæt låget godt fast på glasset. 8. Mærk glasset med patientdata og dato/klokkeslæt for prøvetagningen. 9. Sørg for transport til laboratoriet. Opbevaring og transport af podepind Tabel 1 giver instruktioner i opbevarings- og transportbetingelser til laboratoriet og/eller teststedet podepindsprøver. De endocervikale og de til mænd beregnede urethrale podepindsprøver skal opbevares og transporteres til laboratoriet og/eller teststedet inden for 30 dage efter indsamlingen, hvis de opbevares ved 2 30 C eller inden for 180 dage efter indsamlingen, hvis de opbevares nedfrosset ved -20 C. De patientindsamlede podepindsprøver skal opbevares og transporteres til laboratoriet og/eller teststedet inden for 14 dage efter indsamlingen, hvis de opbevares ved 2 30 C eller inden for 180 dage efter indsamlingen, hvis de opbevares nedfrosset ved -20 C. Patientindsamlede vaginale podepindsprøver, der eksprimeres i CT/GC Q x podepindsdiluent kan opbevares og bearbejdes inden for 30 dage efter ekspression, hvis de opbevares ved 2 30 C eller inden for 180 dage efter ekspressionsdatoen, hvis de opbevares nedfrosset ved -20 C. 4

5 Tabel 1: Opbevaring og transport af podepindsprøve Type podepindsprøve som skal bearbejdes Temperaturforhold for transport til teststed og opbevaring Bearbejd præparat i henhold til instruktioner Endocervikal podepindsprøve for kvinder/urethral podepindsprøve for mænd Tør vaginal podepindsprøve Vaginal podepindsprøve Eksprimeret vaginal podepindsprøve (indsamlingssted) (teststed) 2 30 C -20 C 2 30 C -20 C 2 30 C -20 C Højst 30 dage efter indsamling Højst 180 dage efter indsamling Eksprimer og bearbejd højst 14 dage efter indsamling Eksprimer og bearbejd højst 180 dage efter indsamling Højst 30 dage efter ekspression Højst 180 dage efter ekspression Ved amerikanske og internationale forsendelser skal præparaterne mærkes i overensstemmelse med gældende statslige, nationale og internationale regulativer, der dækker transport af kliniske præparater og ætiologiske midler/ smitsomme stoffer. Tids- og temperaturforhold vedr. opbevaring skal opretholdes under transport. INDsamling af urinprøve, opbevaring og transport Til urinprøver er ydelse fastslået med Q x UPT og med urin indsamlet i en steril prøveindsamlingskop af plastic og uden konserveringsmiddel (dvs. ren urin uden konserveringsmiddel). Ydelse med andre indsamlingsmetoder og indsamlingsanordninger er ikke fastlagt. Indsamling af urinprøve 1. Patienten må ikke have ladet vandet i mindst 1 time før prøveindsamling. 2. Indsaml præparatet i en steril indsamlingskop uden konserveringsmiddel. 3. Patienten skal indsamle de første ml udtømt urin (den første del af strålen IKKE midtstråle) i en urinprøveindsamlingskop. 4. Sæt låg på og mærk præparatet med patientidentifikation og dato/klokkeslæt for indsamling. Urinoverførsel til Q x UPT BEMÆRK: Urinprøverne skal overføres fra indsamlingskoppen til Q x UPT-sættet senest 8 timer efter indsamling, forudsat at urinen er blevet opbevaret ved 2 30 C. Urinprøver opbevaret ved 2 8 C kan holdes i op til 24 timer forud for overførsel til Q x UPT. Bær rene handsker ved håndtering af Q x UPT glasset og urinprøven. Hvis handskerne kommer i kontakt med præparatet, skiftes de straks for at undgå kontaminering af andre præparater. 1. Åbn Q x UPT indsamlings- og transportsættet, og tag Q x UPT-sættet og dråbepipetten ud af indpakningen. 2. Mærk Q x UPT med patientidentifikation og indsamlingsdato/tid. 3. Hold Q x UPT lodret, og bank bunden af glasset hårdt mod en flad overflade for at løsne eventuelle store dråber inde i låget. Gentag om nødvendigt. 4. Tag låget af Q x UPT, og brug overførselspipetten til at dispensere urin til glasset. Den rette mængde urin er blevet overført, når væskestanden er mellem de sorte streger i ruden på Q x UPT-etiketten. Denne mængde svarer til cirka 2,0 3,0 ml urin. Glasset MÅ IKKE fyldes for meget eller for lidt. 5. Kassér overførselspipetten i en beholder til biologisk farligt affald. BEMÆRK: Overførselspipetten er kun beregnet til brug med et enkelt præparat. 6. Skru låget sikkert på Q x UPT-sættet. 7. Vend Q x UPT-sættet 3 4 gange for at sikre, at prøven og reagenset er blandet tilstrækkeligt. Opbevaring og transport af Q x UPT urin Q x UPT urinprøver opbevares og transporteres ved 2 30 C og forvarmes senest 30 dage efter overførsel til Q x UPT. Prøverne kan opbevares i Q x UPT ved -20 C i op til 180 dage inden forvarmning. Opbevaring og transport af ren urin Rene urinprøver opbevares og transporteres fra indsamlingsstedet til teststedet ved 2 8 C og forvarmes senest 7 dage efter indsamlingen. Ren urin opbevaret ved 2 30 C skal forvarmes senest 30 timer efter indsamlingen. Rene urinprøver kan også opbevares frosset ved -20 C i op til 180 dage inden forvarmning. 5

6 Tabel 2: Opbevaring og transport af urinprøve Type af Q x UPT REN urinpræparat, som skal bearbejdes Urinhåndteringsmuligheder inden overførsel til Q x UPT Opbevar urinprøve ved 2 30 C og overfør til Q x UPT senest 8 timer efter indsamlingen Eller Opbevar urinprøve ved 2 8 C og overfør til Q x UPT senest 24 timer efter indsamlingen Eller Overfør straks til Q x UPT Temperaturforhold for opbevaring og transport til teststed 2 8 C 2 30 C -20 C 2 8 C 2 30 C -20 ºC Bearbejd og test præparat i henhold til instruktioner Senest 30 dage efter overførsel til Q x UPT Senest 180 dage efter overførsel til Q x UPT Højst 7 dage efter indsamling Højst 30 timer efter indsamling Højst 180 dage efter indsamling BEARBEJDNING AF PODEPINDSPRØVER Bearbejdningsprocedure for prøvetagningssæt til endocervikale prøver fra kvinder for BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Q x amplificerede DNA-analyser eller prøvetagningssæt til urethrale prøver fra mænd for BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Q x amplificerede DNAanalyser BEMÆRK: Hvis præparater er nedkølede eller frosne, skal det sikres, at de bringes til stuetemperatur og blandes ved invertering, inden der fortsættes. 1. Brug glaslayoutrapporten til at anbringe CT/GC Q x transportmedium med sort gennemstikshætte ved bestilling af BD Viper lyseringsstativ og lås på plads. 2. Gentag punkt 1 for yderligere podepræparater. 3. Præparaterne er klar til at blive forvarmet. 4. Skift handsker, inden De fortsætter for at undgå kontaminering. Bearbejdningsprocedure for transportsæt til vaginalprøver til BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Q x amplificerede DNA-analyser BEMÆRK: Bær rene handsker ved håndtering af den vaginale podepindsprøve. Hvis handskerne kommer i kontakt med præparatet, skiftes de straks for at undgå kontaminering af andre præparater. BEMÆRK: Hvis præparaterne er nedkølede eller nedfrosne, skal det sikres, at de bringes til stuetemperatur før ekspression. 1. Mærk et på forhånd fyldt BD ProbeTec CT/GC Q x Amplified DNA Assay glas med transportmedium for hvert podepræparat, som skal bearbejdes. 2. Tag hætten af og før podepræparatet ind i CT/GC Q x podepindsdiluent Bland ved at slynge podepinden rundt i CT/GC Q x podepindsdiluenten i 5 10 s. 3. Tryk podepinden af langs indersiden på glasset, således at der løber væske tilbage til bunden af glasset. 4. Tag forsigtigt podepinden ud fra CT/GC Q x glasset med transportmedium for at undgå sprøjt. 5. Sæt den eksprimerede podepind tilbage i transportglasset og bortskaf sammen med biologisk farligt affald. 6. Sæt hætten godt fast på CT/GC Q x glas med transportmedium med den sorte gennemstikshætte. 7. Gentag punkt 1 6 for yderligere podepræparater. 8. Brug glaslayoutrapporten til at placere glasset i rækkefølge i BD Viper lyseringsstativet og lås på plads. 9. Præparaterne er klar til at blive forvarmet. 10. Skift handsker, inden De fortsætter for at undgå kontaminering. BEARBEJDNING AF URINPRØVE BEMÆRK: Hvis præparater er nedkølede eller frosne, skal det sikres, at de bringes til stuetemperatur og blandes ved invertering, inden der fortsættes. Bearbejdningsprocedure for Q x UPT 1. Sørg for, at urinmængden i hvert Q x UPT glas ligger mellem stregerne på glassets etikette. Underopfyldning eller overopfyldning af glasset kan påvirke analyseeffektivitet. Overfyldning af glasset kan også medføre væskeoverløb på BD Viper dækket og kan give anledning til kontaminering. 2. Sørg for, at Q x UPT glasset har en sort gennemstikshætte. 3. Gentag trin 1 og 2 for yderligere Q x UPT glasprøver. 4. Brug glaslayoutrapporten til at placere Q x UPT glasset i rækkefølge i BD Viper lyseringsstativet og lås på plads. 5. Præparaterne er klar til at blive forvarmet. 6. Skift handsker, inden De fortsætter for at undgå kontaminering. 6

7 Bearbejdningsprocedure for ukonserverede (rene) urinpræparater BEMÆRK: Bær rene handsker ved håndtering af urinprøven. Hvis handskerne kommer i kontakt med præparatet, skiftes de straks for at undgå kontaminering af andre præparater. 1. Mærk prøveglasset til brug på BD Viper systemet (ekstraheret funktion) med patientidentifikation og indsamlingsdato/tid. 2. Vortex urinhætten for at blande urinprøven og åbn den forsigtigt. BEMÆRK: Åbn forsigtigt for at undgå at spilde, da det kan kontaminere handkser eller arbejdsområdet. 3. Tag hætten af glasset og brug en pipette til at overføre urinprøven til glasset. Den rette mængde urin er blevet overført, når væskestanden er mellem de sorte streger i ruden på etiketten. Denne mængde svarer til cirka 2,0 3,0 ml urin. Glasset MÅ IKKE fyldes for meget eller for lidt. 4. Sæt en sort gennemstikshætte godt fast på hvert glas. 5. Gentag trin 1 gennem 4 for hver urinprøve. Brug en ny pipette eller pipettespids for hver prøve. 6. Brug glaslayoutrapporten til at placere rene urinprøver i rækkefølge i BD Viper lyseringsstativet og lås på plads. 7. Præparaterne er klar til at blive forvarmet. 8. Skift handsker, inden De fortsætter for at undgå kontaminering. BEMÆRK: Forvarmningstrinnet skal startes senest 30 timer efter indsamlingen, hvis urinen skal opbevares ved 2 30 C; senest 7 dage efter indsamlingen, hvis den opbevares ved 2 8 C; eller efter senest 180 dage, hvis den opbevares nedfrosset ved -20 C. Klargøring til kvalitetskontrol BEMÆRK: Undlad at rehydrere kontrollerne, før de sættes i BD Viper lyseringsstativet. 1. Brug glaslayoutrapporten til at placere CT/GC Q x negative kontroller i de rigtige positioner i BD Viper lyseringsstativet. 2. Brug glaslayoutrapporten til at placere CT/GC Q x positive kontroller i de rigtige positioner i BD Viper lyseringsstativet. 3. Kontrollerne er klar til at blive forvarmet med prøverne, hvis det ønskes. FORVARMNINGSPROCEDURE FOR PODEPINDS- OG URINPRØVER BEMÆRK: Forvarmningsproceduren skal anvendes på alle podepinds- og urinprøver for at sikre, at prøvematricen er homogen, inden de sættes i BD Viper systemet. Hvis ikke prøverne varmes op, kan det have en uheldig indvirkning på ydelsen af BD ProbeTec CT/GC Q x analyserne og/eller BD Viper systemet. Podepinds- og urinprøver skal forvarmes. Forvarmning af kontrollerne er dog valgfri. BEMÆRK: Nedkølede eller frosne prøver skal optøs til stuetemperatur inden forvarmning. 1. Sæt BD Viper lyseringsstativet i BD Viper lyseringsvarmeren. 2. Forvarm prøverne i 15 min ved 114 ± 2 C. 3. Fjern lyseringsstativet fra lyseringsvarmeren, og lad prøverne køle af til stuetemperatur i mindst 15 min., før de sættes i BD Viper instrumentet. 4. Der henvises til testproceduren for testning af prøver og kontroller. 5. Efter forvamning kan prøverne opbevares i 7 dage ved 2 30 C eller i 180 dage ved -20 C uden yderligere forvarmning, før de testes på BD Viper systemet. TESTPROCEDURE Der henvises til brugermanualen til BD Viper instrumentet (drift med ekstraheret funktion) for specifikke instruktioner i betjening og vedligeholdelse af komponenterne i systemet. De optimale miljømæssige betingelser for CT Q x -analysen er C og % relativ luftfugtighed. KVALITETSKONTROL Der skal udføres kvalitetskontrol i overensstemmelse med lokale og nationale regulativer eller akkrediteringskrav og brugerens laboratoriums standard kvalitetskontrolprocedurer. Det anbefales at læse de relevante CLSI-retningslinjer og CLIA-regulativer mht. passende kvalitetskontrolprocedurer. Kontrolsættene for BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser leveres separat. En positiv og en negativ kontrol skal inkluderes i hver analysekørsel og for hvert nyt reagenskit-lotnummer. Kontroller skal anbringes i henhold til brugervejledningen for BD Viper instrumentet. CT/GC Q x positiv kontrol vil kun overvåge for væsentlige reagensfejl. Q x CT/GC negativ kontrol overvåger for reagens- og/eller miljømæssig kontaminering. Yderligere kontroller kan testes i overensstemmelse med retningslinjer eller krav i lokale, regionale og/eller nationale regulativer eller akkrediteringsorganisationer. Der henvises til CLSI C24-A3 for yderligere vejledning om relevant testpraksis i forbindelse med intern kvalitetskontrol. 14 Den positive kontrol indeholder ca kopier pr. ml pctb4 og pgcint3 lineariserede plasmider. Ekstraktionskontrol (EC) oligonukleotid bruges til at bekræfte validiteten af ekstraktionsprocessen. EC tørres i ekstraktionsglassene og rehydreres af BD Viper systemet efter tilføjelse af prøven og ekstraktionsreagenserne. Ved afslutningen af ekstraktionsprocessen monitoreres EC fluorescensen med instrumentet, og der anvendes en automatisk algoritme på både EC and C. trachomatis-specifikke signaler for at rapporteres prøveresultater som positive, negative og EC fejl. Generel QC information til BD Viper systemet: Mikrobrøndenes placering er vist i en farvekodet pladelayoutskærm på LCD-monitoren. Plussymbolet (+) i mikrobrønden angiver den positive QC prøve. Minussymbolet (+) i mikrobrønden angiver den negative QC prøve. Et QC par skal logges ind for partinummeret til hvert reagenssæt og for hver plade, der skal testes. Hvis QC par ikke er logget korrekt ind, vises en meddelelsesboks, som gør det umuligt at lagre stativet og fortsætte med kørslen, til den er færdig. 7

8 Der tillades højst to QC par pr. stativ. Der kan tilføjes yderligere kontrolmaterialer, såfremt de logges ind som prøver. BEMÆRK: BD Viper systemet vil rehydrere kontrollerne under analysekørslen. Forsøg ikke at rehydrere analysekontrollerne, før de sættes i BD Viper lyseringsstativet. Kørsel af én plade i et BD Viper system: De første to positioner (A1 og B1) er forbeholdt henholdsvis de positive (A1) og negative (B1) kontroller. Den første tilgængelige position for en patientprøve er C1. Kørsel af to plader i et BD Viper system: For plade ét, er de første to positioner (A1 og B1) forbeholdt henholdsvis de positive (A1) og negative (B1) kontroller. Den første tilgængelige position for en patientprøve er C1. For plade to (fuld plade), er de sidste to positioner (G12 og H12) forbeholdt henholdsvis de positive (G12) og negative (H12) kontroller. For plade to (delvis plade) tildeles de to sidste positioner efter den sidste patientprøve automatisk som henholdsvis de positive og negative kontroller. Tolkning af kvalitetskontrolresultater: CT/GC Q x positiv kontrol og CT/GC Q x negativ kontrol skal teste henholdsvis positive og negative for at opnå patientresultater. Hvis kontrollerne ikke præsterer som forventet, betragtes kørslen som ugyldig, og intrumentet vil ikke rapportere patientresultater. Hvis ingen af kontrollerne giver de forventede resultater, gentages hele kørslen ved hjælp af et nyt sæt kontroller, nye ekstraktionsglas, nyt ekstraktionsreagenstrug, nyt lyseringstrug og nye mikrobrønde. Hvis den nye kvalitetskontrol ikke giver de forventede resultater, kontaktes BD Teknisk serviceafdeling. Hvis det C. trachomatis-specifikke signal er større end eller lig en tærskel på 125 maksimale relative fluorescerende enheder (MaxRFU), ignoreres EC fluorescensen af algoritmen. Hvis det C. trachomatis-specifikke signal er mindre end en tærskel på 125 MaxRFU, benytter algoritmen EC fluorescensen til at tolke resultatet. Tabel 3: Tolkning af kvalitetskontrolresultater Kontroltype Rapporteringssymbol for glassets resultat CT Q x MaxRFU QC disposition CT Q x positiv kontrol OK 125 Bestået QC CT Q x positiv kontrol <125 Fejlslagen QC CT Q x positiv kontrol eller eller Vilkårlig værdi Fejlslagen QC CT Q x negativ kontrol OK <125 Bestået QC CT Q x negativ kontrol 125 Fejlslagen QC CT Q x negativ kontrol Vilkårlig værdi Fejlslagen QC eller eller eller Der henvises til tolkningen af testresultaterne for en beskrivelse af rapporteringssymbolerne for glassets resultat. TOLKNING AF TESTRESULTATER BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse anvender fluorescensenergioverførsel som påvisningsmetode til at teste for tilstedeværelsen af C. trachomatis i kliniske præparater. Alle beregninger udføres automatisk af BD Viper softwaren. Tilstedeværelsen eller fraværet af C. trachomatis DNA bestemmes ved at beregne spidsfluorescensen (MaxRFU) i løbet af amplificeringsprocessen og ved at sammenligne denne måling med en forudbestemt tærskelværdi. MaxRFUscorens størrelse antyder ikke organismeniveauet i præparatet. Hvis det C. trachomatis-specifikke signal er større end eller lig en tærskel på 125 MaxRFU, ignoreres EC fluorescensen af algoritmen. Hvis det C. trachomatis-specifikke signal er mindre end en tærskel på 125 MaxRFU, benytter algoritmen EC fluorescensen til at tolke resultatet. Hvis analysekontrolresultater ikke er som forventet, rapporteres patientresultaterne ikke. Se afsnittet Kvalitetskontrol for forventede kontrolværdier. Rapporterede resultater bestemmes som følger. 8

9 Tabel 4: Tolkning af testresultater for CT Q x analysen Rapporteret resultat for glas CT Q x MaxRFU 125 Rapport Tolkning Resultat C. trachomatis plasmid DNA påvist ved SDA. <125 C. trachomatis plasmid DNA ikke påvist ved SDA. Positiv for C. trachomatis. C. trachomatis organismens levedygtighed og/eller infektivitet kan ikke udledes, da fokus-dna kan persistere ved fravær af levedygtige organismer. Formodet negativ for C. trachomatis. Et negativt resultat udelukker ikke C. trachomatis infektion, fordi resultater er afhængige af adækvat præparatindsamling, fravær af inhibitorer og tilstedeværelsen af sufficient DNA, som skal påvises. <125 Fejl i ekstraktionskontrol. C. trachomatis, hvis til stede, kan ikke Gentag test fra detekteres. oprindelige prøveglas eller opnå en anden prøve til testning. Vilkårlig værdi Vilkårlig værdi Vilkårlig værdi Fejl i ekstraktionsoverførsel. Gentag test fra oprindelige prøveglas eller opnå en anden prøve til testning. C. trachomatis, hvis til stede, kan ikke detekteres. Fejl i væskeniveau. Gentag test fra C. trachomatis, hvis til stede, kan ikke oprindelige prøveglas detekteres. eller opnå en anden prøve til testning. Fejl. Gentag test fra oprindelige prøveglas eller opnå en anden prøve til testning. C. trachomatis, hvis til stede, kan ikke detekteres. 9 Positiv Negativ Fejl i ekstraktionskontrol Fejl i ekstraktionsoverførsel Fejl i væskeniveau Præparatbearbejdningskontroller Præparatbearbejdningskontroller kan testes i overensstemmelse med kravene fra relevante akkrediteringsorganisationer. En positiv præparatbearbejdningskontrol tester hele analysesystemet. Til dette formål kan kendte positive præparater tjene som kontroller ved at blive bearbejdet og testet sammen med ukendte præparater. Præparater, der bruges som bearbejdningskontroller, kan lagres, bearbejdes og testes i henhold til instruktionerne i indlægssedlen. I tilfælde af, at et kendt positivt præparat ikke forefindes, er en række andre alternativer for præparatbearbejdningskontroller beskrevet herunder: ATCC Chlamydia trachomatis: Analyser en stammedyrkning af C. trachomatis LGV2 (ATCC# VR-902B) klargjort som beskrevet nedenfor: 1. Optø et hætteglas med C. trachomatis LGV2 eller C. trachomatis serovar H celler modtaget fra ATCC. 2. Klargør 10-fold seriefortyndinger til en 10 5 fortynding (mindst 4 ml endelig volumen) i saltvand tilsat fosfatbuffer (PBS). 3. Kom 0,1 ml 10 5 fortynding i en BD ProbeTec CT/GC Q x glas med transportmedium og sæt hætten godt fast ved hjælp af en sort gennemstikshætte. 4. Brug glaslayoutrapporten til at placere præparatbearbejdningskontrol(ler) i rækkefølge i BD Viper lyseringsstativet og lås på plads. 5. Bearbejd kontrollerne i overensstemmelse med forvarmningsproceduren og følg derpå testproceduren. Blackhawk AmpliTrol - Chlamydia trachomatis & Neisseria gonorrhoeae: 1. Optø et hætteglas med Blackhawk AmpliTrol CT/GC. 2. Tilføj 100 µl Blackhawk AmpliTrol CT/GC til et BD ProbeTec CT/GC Q x glas med transportmedium og sæt hætten godt fast med en sort gennemstikshætte. 3. Bland opløsningen i vortex-mixer eller med invertering. 4. Brug glaslayoutrapporten til at placere præparatbearbejdningskontrol(ler) i rækkefølge i BD Viper lyseringsstativet og lås på plads. 5. Bearbejd kontrollerne i overensstemmelse med forvarmningsproceduren og følg derpå testproceduren. Overvågning af tilstedeværelsen af kontaminering med DNA Mindst en gang om måneden bør følgende testprocedure udføres for at overvåge arbejdsområdet og udstyrsflader for tilstedeværelse af kontaminering med DNA. Overvågning af miljøet er væsentligt for at påvise kontaminering, inden der opstår et problem. 1. For at teste hvert område bruges en ren podepind fra prøvetagningssættet til endocervikale prøver fra kvinder for BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser. Fejl

10 2. Dyp podepinden i BD ProbeTec CT/GC podepindsdiluentglasset og aftør det første område* med en bred, fejende bevægelse. 3. Før podepinden helt ind i glasset med CT/GC Q x transportmedium. 4. Bræk skaftet af podepinden ved knækmærket. Udvis forsigtighed, så indholdet ikke sprøjter ud. 5. Sæt hætten godt fast på glasset igen med den sorte gennemstikshætte. 6. Gentag for hvert ønsket område. 7. Når alle podepinde er indsamlet og er eksprimeret i diluent, bearbejdes de i overensstemmelse med forvarmningsproceduren. Derefter følges testproceduren. *Anbefalede områder, der skal testes, omfatter: Instrumentdæk: Pipette Tip Station Covers (overdækning til pipettespidsstation) (2); Tube Processing Station (glasbearbejdningsstation): Tube Alignment Block and Fixed Metal Base (glastilretningsblok og fast metalfod); Deck Waste Area (dækaffaldsområde), Priming and Warming Heaters/Stage (primer- og varmeapparater/stadium); Extraction Block (ekstraktionsblok); Plate Sealing Tool (pladeforseglingsværktøj); Tip Exchange Stations (spidsudvekslingsstationer) (2); Instrumentets ydre: Upper Door Handle (øvre dørhåndtag); Lower Door Handle (nedre dørhåndtag); Waste Liquid Quick Release Valve (lynkobling til væskeaffald); LCD Monitor (berøringsfølsom skærm); Keyboard/Scanner (tastatur/scanner); Staging Area (staging-område); Locking Plate and Fixed Metal Base (låseplade og fast metalfod); Tilbehør: Tube Lockdown cover (dækstykke til fastgørelse af glas), BD Viper Lysing Rack/Table Base (lyseringsstativ/bordsokkel); BD Viper Lysing Heater (lyseringsvarmer); Metal Microwell Plates (metalplader til mikrobrønde); Timer (ur); Laboratory Bench Surfaces (bordflader til laboratorium). Hvis et område giver et positivt resultat, eller hvis der er mistanke om kontamination, rengøres området med frisk 1 % (v/v) natriumhypochlorit, DNA AWAY eller 3 % (w/v) hydrogenperoxid. (Brug ikke hydrogenperoxid fra en flaske, som har været åben i mere end 8 dage). Sørg for, at hele området er vædet med opløsningen og får lov at blive på fladen i mindst to minutter, eller indtil tørhed opnås. Fjern overskydende rengøringsopløsning med et rent håndklæde, hvis det er nødvendigt. Aftør området med et rent håndklæde vædet med vand og lad fladen tørre. Test området igen. Gentag rengøringsprocessen, indtil der foreligger negative resultater. Hvis der bliver ved med at være kontaminering, kontaktes BD Teknisk service for yderligere information. PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER 1. Denne metode er kun blevet testet med endocervikale og vaginale podninger, urethralpodninger fra mænd og urinprøver fra mænd og kvinder. Testpræstationerne med andre typer prøver er ikke evalueret. 2. Optimal ydelse af testen kræver adækvat præparatindsamling og -håndtering. Der henvises til afsnittet Prøveindsamling og -transport i denne indlægsseddel. 3. Tilstrækkeligheden af et endocervikalt præparat kan kun vurderes ved mikroskopisk fremstilling af søjleepithelceller i præparatet. 4. Indsamling og testning af urinpræparater med BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse er ikke beregnet på at erstatte cervikal undersøgelse og endocervikal prøvetagning for diagnose på urogenital infektion. Cervicitis, urethritis, urinvejsinfektioner og vaginalinfektioner kan skyldes andre årsager, eller samtidige infektioner kan opstå. 5. BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse til testning af urinprøve fra mænd og kvinder bør udføres på tilfældige urinprøver fra første del af strålen (de første ml af urinstrålen). 6. Virkningerne af andre potentielle variabler, som f.eks. vaginaludflåd, brug af tamponer, udskylning og præparatindsamlingsvariabler, er ikke bestemt. 7. Et negativt testresultat udelukker ikke muligheden for infektion, fordi testresultater kan være påvirket af ukorrekt indsamling af præparatet, teknisk fejl, sammenblanding af præparater, samtidig antibiotikabehandling eller antallet af organismer i præparatet, som kan ligge under testens sensitivitet. 8. Som det er tilfældet med mange diagnostiske tests, bør resultater fra BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse tolkes sammen med andre laboratorie- og kliniske data, som er til rådighed for lægen. 9. BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse påviser ikke plasmid-frie varianter af C. trachomatis. 10. BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse bør ikke bruges til evaluering af mistænkt seksuelt misbrug eller til andre mediko-juridiske indikationer. Yderligere testning anbefales i ethvert tilfælde, hvor falsk positive eller falsk negative resultater kunne føre til uønskede medicinske, sociale eller psykologiske konsekvenser. 11. BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse kan ikke bruges til at vurdere terapeutisk succes eller fiasko, da nukleinsyrer fra C. trachomatis kan persistere efter behandling med antibiotika. 12. BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse giver kvalitative resultater. Der kan ikke bestemmes en sammenhæng mellem størrelsen af det positive analysesignal (MaxRFU) og antallet af celler i en inficeret prøve. 13. En analyses prædiktive værdi afhænger af sygdommens prævalens i en særlig population. Se Tabel 5 for hypotetiske prædiktive værdier, når forskelligartede populationer testes. 14. Da den positive kontrol til BD ProbeTec CT/GC Q x amplificerede DNA-analyser bruges ved testning af både C. trachomatis og N. gonorrhoeae, er det vigtigt at sørge for, at mikrobrøndstrimlerne sidder rigtigt af hensyn til den endelige resultatrapportering. 15. Brug af BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse begrænses til personale, som er blevet uddannet i analyseproceduren og BD Viper systemet. 16. Reproducerbarheden af BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse blev fastslået ved hjælp af udsåede simulerede podepinde og udsåede CT/GC Q x podepindsdiluent for at simulere urinprøver. Disse prøver blev inokuleret med enten C. trachomatis alene eller C. trachomatis plus N. gonorrhoeae. 17. Effektivitet er ikke blevet etableret for urinprøver i Q x UPT, når der bruges andre opfyldningsmængder end dem, der falder inden for de sorte streger på opfyldningsvinduet (ca. 2,0 ml til 3,0 ml). 18. Ydelsen af BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse på BD Viper systemet i ekstraheret funktion med podepindsprøver blev evalueret for interferens fra blod, gynækologiske smøremidler og spermicider. Ydelsen 10

11 med urinprøver blev evalueret for interferens fra blod og almindelige smertestillende præparater i håndkøb. Der observeredes ingen interferens med nogen af præparaterne ved de testede koncentrationer. 19. De selvtagne vaginalprøver er en metode til screening af kvinder, når en gynækologisk undersøgelse ellers ikke er indiceret. 20. Den patientindsamlede vaginale podepindsprøve applikation er begrænset til lægehuse, hvor der er støtte/ rådgivning til at forklare procedurer og forholdsregler. 21. BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse er ikke blevet valideret for vaginale podepindsprøver indsamlet af patienter i hjemmet. 22. Effektiviteten af vaginale podepindsprøver er ikke evalueret hos patienter, som er under 17 år gamle. 23. Effektiviteten af vaginale podepindsprøver er ikke evalueret hos gravide kvinder. FORVENTEDE RESULTATER BEMÆRK: De symboler og forkortelser, der anvendes i tabeller, er forklaret i afsnittet Tolkning af tabeller (i slutningen af indlægssedlen). A. Prævalens Prævalensen af positive C. trachomatis præparater i patientpopulationer afhænger af: klinisk type, alder, risikofaktorer, køn og testmetode. Den prævalens, der blev observeret med CT Q x analysen under et multicenter klinisk forsøg, lå på mellem 8,5 % og 18,3 % for prøver fra kvinder og mellem 0 % og 24,1 % for prøver fra mænd (tabel 9). B. Positiv og negativ prædiktiv værdi Hypotetiske positive og negative prædiktive værdier (PPV og NPV) for CT Q x analysen er vist i tabel 5. Disse beregninger er baseret på hypotetisk prævalens og overordnet sensitivitet og specificitet (sammenlignet med patientens infektionsstatus) på henholdsvis 94,5 % og 98,9 %. Derudover vises PPV og NPV baseret på faktisk prævalens, sensitivitet og specificitet som vist i tabel 8 og 9. PPV blev beregnet ud fra følgende: (sensitivitet x prævalens) / (sensitivitet x prævalens + [1 - specificitet] x [1 - prævalens]). NPV blev beregnet ud fra: (specificitet x [1 - prævalens]) / ([1-sensitivitet]) x prævalens + specificitet x [1-prævalens]). Tabel 5: CT hypotetiske positive og negative prædiktive værdier sammenlignet med patientens infektionsstatus Prævalens (%) Sensitivitet (%) Specificitet (%) PPV (%) NPV (%) 2 94,5 98,9 64,1 99,9 5 94,5 98,9 82,1 99, ,5 98,9 90,7 99, ,5 98,9 95,6 98, ,5 98,9 97,4 97, ,5 98,9 98,3 96, ,5 98,9 98,9 94,7 C. MaxRFU hyppighedsfordeling I alt CT Q x analyseresultater blev evalueret ved syv geografisk forskellige kliniske centre. En hyppighedsfordeling af de oprindelige MaxRFU værdier for CT Q x analysen er vist i figur A. Fordelingen af MaxRFU værdier fra CT Q x sande positive, sande negative, falske positive og falske negative prøver (dvs. fra de prøver, der gav resultater, som afveg fra patientens infektionsstatus [PIS]) er vist i tabel 6. Figur A: Hyppighedsfordeling for MaxRFU for CT Q x analysen Hyppighed 11

12 Tabel 6: CT Q x MaxRFU områder for falske negative, falske positive, sande negative og sande positive resultater MaxRFU område n FN FP TN TP FNU FS FUPT FV MNU MS MUPT I alt FNU FS FUPT FV MNU MS MUPT I alt FNU FS FUPT FV MNU MS MUPT I alt FNU FS FUPT FV MNU MS MUPT I alt D. Kontroller Under den kliniske evaluering var der ingen CT Q x positive kontrolfejl fra 253 CT Q x pladekørsler. For den CT Q x negative kontrol observeredes fejl i 1 ud af 253 CT Q x pladekørsler. CT/GC Q x positive og negative kontrol MaxRFU værdier iagttaget i de kliniske forsøg vises i den følgende tabel. Tabel 7: Fordeling af MaxRFU resultater for positive og negative CT Q x analysekontroller MaxRFU Kontrol n Område 5. percentil Middel Median 95. percentil CT Q x negativ kontrol ,0 0,7 0,0 4,3 CT Q x positiv kontrol , , , ,0 12

13 FUNKTIONSDATA Klinikerindsamlede endocervikale podepindsprøver fra kvinder og urethrale podepindsprøver fra mænd, patientindsamlede vaginale podepindsprøver (i et klinisk miljø) og Q x UPT og urinprøver fra kvinder og mænd blev indsamlet fra kvindelige forsøgspersoner og 479 mandlige forsøgspersoner, som besøgte klinikker for OB/GYN, seksuelt overførte sygdomme (STD) og familieplanlægning på syv geografisk forskellige kliniske steder i Nordamerika. Forsøgspersoner blev klassificeret som symptomatiske, hvis de rapporterede symptomer såsom vandladningsbesvær (dysuria), urethralflåd, koital smerte/besvær/blødning, smerte/hævelse i scrotum eller testikel, unormal vaginaludflåd eller smerte i pelvis/uterus/adnexa. Forsøgspersoner blev klassificeret som asymptomatiske, hvis de ikke rapporterede symptomer. Femogtres kvindelige forsøgspersoner og syv mandlige forsøgspersoner blev ekskluderet fra dataanalysen, fordi de faldt uden for alderskravene, havde modtaget antibiotisk behandling i de sidste 21 dage, valgte at trække sig ud af undersøgelsen efter først at have indvilliget heri, ikke opnåede parvise prøver fra både podning og urin eller havde en urinmængde, der var mindre end 20 ml, eller fordi der opstod transport- og opbevaringsfejl i forbindelse med prøveindsamlingen. Den endelige dataanalyse omfattede derfor 994 overensstemmende kvindelige forsøgspersoner og 472 overensstemmende mandlige forsøgspersoner. Der blev indsamlet fem prøver fra hver af de 994 egnede kvindelige forsøgspersoner. Der blev taget en urinprøve, og den blev opdelt i Q x UPT, ren urin og de to reference urinprøvetagningsinstrumenter efterfulgt af en vaginal podepindsprøve og tre randomiserede endocervikale podepindsprøver. Der blev indsamlet op til fire prøver fra hver af de 472 egnede mandlige forsøgspersoner. Op til tre randomiserede urethrale podepindsprøver blev indsamlet efterfulgt af en urinprøve, der blev opdelt i Q x UPT, ren urin og de to reference urinprøvetagningsinstrumenter. BD ProbeTec CT Q x analyseresultater blev genereret fra prøverne Q x UPT og ren urin, den vaginale podepindsprøve, en endocervikal podepindsprøve og en urethral podepindsprøve for mænd. De to resterende endocervikale podepindsprøver, op til to urethrale podepindsprøver for mænd og de to referenceurinprøver for hver mandlig og kvindelig forsøgsperson blev testet ved hjælp af to referencemetoder: BD ProbeTec ET CT/AC analysen og en anden kommercielt tilgængelig NAAT (nukleinsyreamplifikationstest). Prøvetagning blev testet enten det sted, hvor prøvetagningen fandt sted, eller på et udpeget BD Viper teststed. Alle ydelsesberegninger var baseret på det samlede antal BD ProbeTec CT Q x analyseresultater for endocervikal, vaginal og mandlig urethral podepindsprøver, og de mandlige og kvindelige prøver Q x UPT og ren urin blev sammenlignet med en algoritme for patientinfektionsstatus (PIS) for begge køn. I algoritmen var designationen af, om en forsøgsperson var inficeret med CT eller ej, baseret på endocervikale podepinds- og urinprøveresultater fra den kommercielt tilgængelige BD ProbeTec ET CT/AC analyse og den anden kommercielt tilgængelige NAAT. Forsøgspersoner blev betragtet som værende inficeret med CT, hvis to af de fire endocervikale podepinds- og urinprøver (eller to ud af de tre eller fire urethrale podepinds- og urinprøver) blev testet positive i BD ProbeTec ET CT/ AC analysen og den anden reference NAAT (en prøve, der testes positiv i hver NAAT). Forsøgspersoner blev betragtet som ikke værende inficerede, hvis mindre end to reference NAAT-resultater var positive. I alt BD ProbeTec CT Q x analyseresultater blev brugt til at beregne sensitivitet og specificitet. Sensitivitet og specificitet efter præparattype og symptomatisk status er vist i tabel 8. Effektiviteten af analysen med endocervikale podepinde, patientindsamlede vaginale podepindsprøver (i et klinisk miljø), UPT og ren urin fra kvinder blev vurderet i det kliniske forsøg. Særskilt effektivitet blev beregnet for prøver indsamlet fra gravide kvinder. For sidstnævnte var sensitivitet sammenlignet med patientinfektionsstatus for FS 62,5 % (5/8): Test og reference NAAT podepindsprøverne var negative. Test og reference NAAT urinprøverne var positive og gav et PIS positivt resultat. FV sensitivitet var 75 % (6/8): Test og reference NAAT podepindsprøverne var negative. Test og reference NAAT urinprøverne var positive og gav et PIS positivt resultat. FNU og FUPT sensitivitet var 100 % (8/8). Specificitet var 94,7 % (18/19) for FS, FV, FNU og FUPT separat. Tabel 10 og 11 sammenfatter antallet af resultater fra symptomatiske og asymptomatiske forsøgspersoner betegnet som inficeret eller ikke-inficeret med CT i henhold til PIS-algoritmen. 13

14 Tabel 8: CT Q x analyseydelse sammenlignet med patientinfektionsstatus (efter prøvetype og symptomatisk status). Prøvetype Symptomatisk Status n Sensitivitet 95 % konfidensinterval FS A ,0% (53/57) (83,0% 98,1%) S ,7% (52/58) (78,8% 96,1%) I alt ,3% (105/115) 1 (84,6% 95,8%) FV A ,2% (90,6% (56/57) 100,0%) S ,8% (55/58) (85,6% 98,9%) I alt ,5% (111/115) (91,3% 99,0%) FNU A ,0% (53/57) (83,0% 98,1%) S ,1% (54/58) (83,3% 98,1%) I alt ,0% (107/115) 4 (86,8% 96,9%) FUPT A 450 S ,7% (54/57) 91,4% (53/58) (85,4% 98,9%) (81,0% 97,1%) I alt ,0% (107/115) 6 (86,8% - 96,9%) MS A ,6% (31/35) (73,3% 96,8%) S ,9% (62/66) (85,2% 98,3%) I alt ,1% (93/101) (85,0% 96,5%) MNU A ,0% (90,0% (35/35) 100,0%) S ,0% (64/66) (89,5% 99,6%) I alt ,0% (99/101) (93,0% 99,8%) MUPT A ,0% (90,0% (35/35) 100,0%) S ,0% (64/66) (89,5% 99,6%) I alt ,0% (99/101) (93,0% 99,8%) I alt 5,388 94,5% (721/763) (92,6% 96,0%) Specificitet 98,0% (385/393) 98,6% (478/485) 98,3% (863/878) 99,5% (390/392) 99,0% (481/486) 99,2% (871/878) 100,0% (393/393) 99,0% (480/485) 99,4% (873/878) 99,5% (391/393) 99,0% (480/485) 99,2% (871/878) 98,9% (178/180) 97,9% (187/191) 98,4% (365/371) 98,9% (178/180) 99,5% (190/191) 99,2% (368/371) 98,9% (178/180) 97,4% (186/191) 98,1% (364/371) 98,9% (4,575/4,625) 95 % konfidensinterval PPV % NPV % Fejl initial/ endelig (96,0% 99,1%) 86,9 99,0 2/0 (97,0% 99,4%) 88,1 98,8 1/1 (97,2% 99,0%) 87,5 98,9 3/1 (98,2% 99,9%) 96,6 99,7 0/0 (97,6% 99,7%) 91,7 99,4 0/0 (98,4% 99,7%) 94,1 99,5 0/0 (99,1% 100,0%) 100,0 99,0 0/0 (97,6% 99,7%) 91,5 99,2 0/0 (98,7% 99,8%) 95,5 99,1 0/0 (98,2% 99,9%) 96,4 99,2 0/0 (97,6% 99,7%) 91,4 99,0 0/0 (98,4% 99,7%) 93,9 99,1 0/0 (96,0% 99,9%) 93,9 97,8 1/0 (94,7% 99,4%) 93,9 97,9 1/0 (96,5% 99,4%) 93,9 97,9 2/0 (96,0% 99,9%) 94,6 100,0 0/0 (97,1% 100,0%) 98,5 99,0 0/0 (97,7% 99,8%) 97,1 99,5 0/0 (96,0% 99,9%) 94,6 100,0 0/0 (94,0% 99,1%) 92,8 98,9 0/0 (96,2% 99,2%) 93,4 99,5 0/0 (98,6% 99,2%) 93,5 99,1 5/1 7 Bemærk: For kvindelige forsøgspersoner er infektion lokaliseret til endocervix eller urethra rapporteret i litteraturen (16-20). Analyser blev udført af endocervikale podepindsprøver og prøver UPT og ren urin fra kvinder med henblik på yderligere karakteristik af de ti negative endocervikale podepindsprøver fra kvinder (105/115) og de otte negative prøver UPT og ren urin fra kvinder (107/115). Ud af de 115 kvindelige forsøgspersoner, som blev angivet som positive af PIS-algoritmen, havde 10 infektion udelukkende lokaliseret til urethra som indiceret ved referenceresultaterne fra podepindsprøverne (dvs. at de endocervikale podepindsprøver var negative i BD ProbeTec ET CT/AC analysen og den anden NAAT, og urinprøverne var postive i BD ProbeTec ET CT/AC analysen og den anden NAAT. BD ProbeTec CT Q x ananlysen var negativ for ni ud af de ti endocervikale podepindsprøver fra disse forsøgspersoner. Ud af de 115 kvindelige forsøgspersoner, som blev angivet som positive af PIS-algoritmen, havde tre infektion lokaliseret til endocervix som indiceret ved referenceresultaterne fra podepindsprøverne (dvs. at urinprøverne var negative i BD ProbeTec ET CT/AC analysen og den anden NAAT, og de endocervikale podepindsprøver var postive i BD ProbeTec ET CT/AC analysen og den anden NAAT. BD ProbeTec CT Q x ananlysen var negativ for UPT og ren urin for disse tre forsøgspersoner. 1 Ti af de 115 endocervikale podepindsprøver, der var positive ved PIS, var kun positive i reference urin-naat erne. 2 Ud af de 994 kvindelige forsøgpersoner, som var optaget i undersøgelsen, var der en forsøgsperson, som ikke afgav en vaginal podepindsprøve. 14

15 3 Ud af de 994 kvindelige forsøgspersoner, som var optaget i undersøgelsen, var én ren urinprøve ekskluderet for ikke-kompliant opbevaring af urinprøve. 4 Tre ud af af 115 rene urinprøver, der var positive ved PIS, var kun positive i reference podepinds-naat erne. 5 Ud af de 994 kvindelige forsøgspersoner, som var optaget i undersøgelsen, var én Q x UPT urinprøve ekskluderet for ikkekompliant opbevaring af urinprøve. 6 Tre ud af af 115 Q x UPT urinprøver, der var positive ved PIS, var kun positive i reference podepinds-naat erne. 7 Der blev genereret tre væskeniveaufejl og to ekstraktionskontrolfejl. Fire blev opklaret som negative og blev inkluderet i sensitivitets- og specificitetsberegningen. En væskeniveaufejl blev ikke opklaret og blev ikke inkluderet i sensitivitets- og specificitetsberegningen. Tabel 9: CT Q x analyseydelse sammenlignet med patientinfektionsstatus (efter klinisk sted) Prøvetype FS 8 FV 9 FNU 10 Klinisk sted Prævalens n 1 16,1 % ,0 % 155 Sensitivitet 96,0 % (24/25) 88,2 % (15/17) 95 % konfidensinterval (79,6 % 99,9 %) (63,6 % 98,5 %) 3 12,3 % 73 88,9 % (8/9) (51,8 % 99,7 %) 4 18,1 % ,0 % ,5 % ,5 % (17/19) (7/7) 90,3 % (28/31) (66,9 % 98,7 %) (59,0 % ) (74,2 % 98,0 %) 7 10,0 % 70 85,7 % (6/7) (42,1 % 99,6 %) 1 16,1 % ,0 % 155 (25/25) (17/17) (86,3 % ) (80,5 % ) 3 12,3 % 73 77,8 % (7/9) (40,0 % 97,2 %) 4 18,1 % ,0 % ,5 % ,0 % ,1 % ,0 % ,7 % (18/19) (7/7) 96,8 % (30/31) (7/7) 92,0 % (23/25) 82,4 % (14/17) (74,0 % 99,9 %) (59,0 % ) (83,3 % 99,9 %) (59,0 % ) (74,0 % 99,0 %) (56,6 % 96,2 %) 3 12,3 % 73 88,9 % (8/9) (51,8 % 99,7 %) 4 18,3 % ,0 % ,5 % ,0 % 70 (19/19) (7/7) 93,5 % (29/31) (7/7) (82,4 % ) (59,0 % ) (78,6 % 99,2 %) (59,0 % ) Specificitet 96,2 % (125/130) 98,6 % (136/138) (64/64) (86/86) 96,8 % (61/63) 98,5 % (329/334) 98,4 % (62/63) 97,7 % (127/130) 99,3 % (137/138) (64/64) (86/86) 96,8 % (61/63) (334/334) 98,4 % (62/63) 97,7 % (127/130) (138/138) (64/64) 97,6 % (83/85) (63/63) (335/335) (63/63) 95 % konfidensinterval # CT (+) og GC (+) PPV % NPV % (91,3 % 98,7 %) 5 82,8 % 99,2 % (94,9 % 99,8 %) 6 88,2 % 98,6 % (94,4 % ) 2 98,5 % (95,8 % ) 6 97,7 % (89,0 % 99,6 %) 0 77,8 % (96,5 % 99,5 %) 3 84,8 % 99,1 % (91,5 % ) 0 85,7 % 98,4 % (93,4 % 99,5 %) 5 89,3 % (96,0 % ) 6 94,4 % (94,4 % ) 2 97,0 % (95,8 % ) 6 98,9 % (89,0 % 99,6 %) 0 77,8 % (98,9 % ) 3 99,7 % (91,5 % ) 0 87,5 % (93,4 % 99,5 %) 5 88,5 % 98,4 % (97,4 % ) 6 97,9 % (94,4 % ) 2 98,5 % (91,8 % 99,7 %) 6 90,5 % (94,3 % ) 0 (98,9 % ) 3 99,4 % (94,3 % ) 0 fortsat 15

16 Prøvetype FUPT 11 MS 12 MNU 13 MUPT 14 Klinisk sted Prævalens n 1 16,1 % ,0 % 155 Sensitivitet 96,0 % (24/25) 82,4 % (14/17) 95 % konfidensinterval (79,6 % 99,9 %) (56,6 % 96,2 %) 3 12,3 % 73 88,9 % (8/9) (51,8 % 99,7 %) 4 18,3 % ,0 % ,5 % 366 (19/19) (7/7) 93,5 % (29/31) (82,4 % ) (59,0 % ) (78,6 % 99,2 %) 7 10,0 % 70 85,7 % (6/7) (42,1 % 99,6 %) 1 24,1 % ,4 % ,8 % ,5 % 71 87,8 % (43/49) (17/17) 95,8 % (23/24) 90,9 % (10/11) (75,2 % 95,4 %) (80,5 % ) (78,9 % 99,9 %) (58,7 % 99,8 %) 7 0,0 % 21 NA NA 1 24,1 % ,4 % ,8 % ,5 % 71 98,0 % (48/49) (17/17) 95,8 % (23/24) (11/11) (89,1 % 99,9 %) (80,5 % ) (78,9 % 99,9 %) (71,5 % ) 7 0,0 % 21 NA NA 1 24,1 % ,4 % ,8 % ,5 % 71 98,0 % (48/49) (17/17) 95,8 % (23/24) (11/11) (89,1 % 99,9 %) (80,5 % ) (78,9 % 99,9 %) (71,5 % ) 7 0,0 % 21 NA NA Specificitet 97,7 % (127/130) 99,3 % (137/138) (64/64) (85/85) (63/63) 99,4 % (333/335) 98,4 % (62/63) 98,1 % (151/154) 98,3 % (58/59) (77/77) 96,7 % (58/60) (21/21) 99,4 % (153/154) (59/59) 98,7 % (76/77) 98,3 % (59/60) (21/21) 98,1 % (151/154) 96,6 % (57/59) 98,7 % (76/77) 98,3 % (59/60) (21/21) 8 22 af de 115 FS PIS positive forsøgspersoner var samtidig inficeret med GC af de 115 FV PIS positive forsøgspersoner var samtidig inficeret med GC af de 115 FNU positive forsøgspersoner var samtidig inficeret med GC af de 115 FUPT positive forsøgspersoner var samtidig inficeret med GC af de 101 MS positive forsøgspersoner var samtidig inficeret med GC af de 101 MNU positive forsøgspersoner var samtidig inficeret med GC af de 101 MUPT positive forsøgspersoner var samtidig inficeret med GC. 95 % konfidensinterval # CT (+) og GC (+) PPV % NPV % (93,4 % 99,5 %) 5 88,9 % 99,2 % (96,0 % ) 6 93,3 % 97,9 % (94,4 % ) 2 98,5 % (95,8 % ) 6 (94,3 % ) 0 (97,9 % 99,9 %) 3 93,5 % 99,4 % (91,5 % ) 0 85,7 % 98,4 % (94,4 % 99,6 %) 9 93,5 % 96,2 % (90,9 % ) 10 94,4 % (95,3 % ) 11 98,7 % (88,5 % 99,6 %) 3 83,3 % 98,3 % (83,9 % ) 0 NA NA (96,4 % ) 9 98,0 % 99,4 % (93,9 % ) 10 (93,0 % ) 11 95,8 % 98,7 % (91,1 % ) 3 91,7 % (83,9 % ) 0 NA NA (94,4 % 99,6 %) 9 94,1 % 99,3 % (88,3 % 99,6 %) 10 89,5 % (93,0 % ) 11 95,8 % 98,7 % (91,1 % ) 3 91,7 % (83,9 % ) 0 NA NA 16

17 Tabel 10: Analyse af CT positive/negative prøver fra kvindelige forsøgspersoner baseret på patientens infektionsstatus PIS CT + Endocervikal podning NAAT 1 NAAT 2 Urin Endocervikal Podning Urin BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse Q x endocervikal podning 17 Q x vaginal podning Ren urin Symptomatisk status Q x UPT urin A S I alt NA Total PIS positiv NA NA NA NA NA NA I NA LE NA Total PIS negativ I = Intermediær LE = Liquid Level Error (væskeniveaufejl)

18 Tabel 11: Analyse af CT positive/negative prøver fra mandlige forsøgspersoner baseret på patientens infektionsstatus PIS CT + Urethral podning NAAT 1 NAAT 2 Urin Urethral podning Urin BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse Q x urethral podning Ren urin Q x UPT urin Symptomatisk status A S I alt NA NA Total PIS positiv NA NA I NA I NA NA Total PIS negativ

19 Analytisk sensitivitet for CT Q x analyse: Påvisningsgrænserne (Limits of Detection eller LOD) for CT Q x analysen med C. trachomatis serovar H i urin- og podepindsprøver, når de ekstraheres på BD Viper systemet, blev fastslået til at være < 15 CT elementærlegemer (Elementary Bodies, EB) pr. ml for ren og Q x UPT urin og < 30 CT EB pr. ml for eksprimerede vaginale og endocervikale pod epindsprøver. En korrelation af EB til inklusionsdannende enheder (Inclusion-forming units, IFU) antyder, at CT Q x analyse LOD erne med serovar H i urin- og podepindsprøver svarer til < 1 IFU pr. ml. 20 CT Q x analysen på BD Viper systemet i ekstraheret funktion kunne detektere 16 isolater, som repræsenterer 15 CT serovarer (A, B, Ba, C, D, E (2), F, G, H, I, J, K, LGV1, LGV2 og LGV3) med 95 % proportion positiv ved en koncentration på 15 EB pr. ml i CT/GC Q x podepindsdiluent. *Test med CT serovar E inkluderede nvct-stammen, en ny variant med en fjernelse i ukendt plasmid. 21 Analytisk specificitet for CT Q x analyse: DNA fra 141 organismer angivet i tabel 12 blev ekstraheret på BD Viper systemet og testet med BD ProbeTec CT Q x amplificeret DNA-analyse. Alle potentielle krydsreaktive arter blev testet ved 1x10 8 celler/ml, medmindre andet er anført. CT Q x analysen krydsreagerede ikke med nogen af de testede organismer. Tabel 12: Potentielle krydsreagerende mikroorganismer Acinetobacter calcoaceticus Epstein Barr Virus *** Peptostreptococcus productus Neisseria elongata subsp. nitroreduscens (2) Acinetobacter lwoffi Escherichia coli Plesiomonas shigelloides Neisseria elongata Actinomyces israelii Flavobacterium meningosepticum Propionibacterium acnes Neisseria flava (4) Adenovirus*** Gardnerella vaginalis Providencia stuartii Neisseria flavescens (4) Aeromonas hydrophilia Gemella haemolysans Pseudomonas aeruginosa Neisseria gonorrhoeae Alcaligenes faecalis* Haemophilus influenzae Salmonella minnesota Neisseria lactamica (7) Bacillus subtilis* Herpes Simplex Virus ** Salmonella typhimurium Neisseria meningitidis (12) Bacteroides fragilis Human papillomavirus (16 og 18)*** Staphylococcus aureus Neisseria mucosa (5) Candida albicans* Kingella kingae Staphylococcus epidermidis Neisseria perflava (8) Candida glabrata* Klebsiella pneumoniae Streptococcus agalactiae Neisseria polysaccharea (2) Candida tropicalis* Lactobacillus acidophilus* Streptococcus mitis Neisseria sicca (5) Chlamydia pneumoniae**** Lactobacillus brevis Streptococcus mutans Neisseria subflava (15) Chlamydia psittaci* Lactobacillus jensenii* Streptococcus pneumoniae* Neisseria weaverii (3) Citrobacter freundii Listeria monocytogenes Streptococcus pyogenes Clostridium perfringens Mobiluncus mulieris Streptomyces griseus** Corynebacterium renale Moraxella lacunata* Trichomonas vaginalis** Cryptococcus neoformans* Moraxella osloensis Veillonella parvula Cytomegalovirus** Morganella morganii Vibrio parahaemolyticus Edwardsiella tarda Mycobacterium gordonae Yersinia enterocolitica Enterobacter cloacae Mycobacterium smegmatis Branhamella catarrhalis (5) Enterococcus faecalis Peptostreptococcus anaerobius Neisseria cinerea (2) Enterococcus faecium Peptostreptococcus asaccharolyticus Neisseria elongata subsp. glycolytica (n) antal stammer testet i BD ProbeTec CT Q x analysen * Testet ved > 1x10 7 celler eller EB pr. ml; **Testet ved > 1x10 6 celler eller viruspartikler pr. ml; ***Testet ved 1x10 6 genækvivalenter pr. ml;**** testet ved 1x10 5 TCID 50 /ml CT Q x interfererende stoffer BD ProbeTec CT Q x analysens ydelse på BD Viper systemet i ekstraheret funktion blev evalueret ved tilstedeværelse af potentielt interfererende stoffer, der kan forekomme i podepinds- og/eller urinprøver. Potentielt interfererende stoffer blev spiket ind i Q x UPT urin og vaginale podepindsprøvematricer ved både tilstedeværelse og fravær af CT elementarlegemer (30 CT EB/mL i urinmatrice og 90 CT EB/mL i podningsmatrice). Resultaterne er sammenfattet i Tabel

20 Tabel 13: CT Q x interfererende stoffer Tolkning Podning Urin Ingen interferens iagttaget Blod ( 60 %) Sædvæske Slim Vaginalprodukter og præventionsmidler i håndkøb Hæmoridecreme Receptpligtige vaginalbehandlinger Leukocytter (1x10 6 celler/ml) 1x10 6 celler/ml Neisseria gonorrhoeae Blod ( 1 %) Sædvæske Slim Antibiotika Analgetika Deodorantsprays og -pulvere i håndkøb Hormoner Leukocytter Albumin <1 mg/ml Glucose Sur urin (ph 4,0) Basisk urin (ph 9,0) Bilirubin 1x10 6 celler/ml Neisseria gonorrhoeae Organismer forbundet med urinvejsinfektioner Kan forårsage fejl i ekstraktionskontrol (EC) Blod (> 60%) Ikke relevant Ren og Q x UPT urin stabilitet Puljer af CT negative mandlige og kvindelige prøver blev brugt i analytiske eksperimenter til at understøtte påstandene om urinopbevaring og transportstabilitet. For ren urin blev puljer spiket samtidig med CT serovar H og GC stamme ATCC ved henholdsvis 45 EB pr. ml og 150 celler pr. ml. Rene urinprøver blev opbevaret ved enten 2 8 C i 1, 3 eller 7 dage; eller ved 30 C i 8, 24 eller 30 h; eller ved -20 C i 180 dage. På hvert tidspunkt blev prøver fjernet fra opbevaring og testet med BD ProbeTec CT Q x analyse på BD Viper systemet i ekstraheret funktion. Toogtredive analysereplikater blev genereret for hver tilstand (prøvetype/temperatur/varighed). De forventede resultater blev opnået med CT Q x analysen under alle testede forhold. For Q x UPT urin blev puljer spiket samtidig med CT serovar H og GC stamme ATCC ved henholdsvis 45 EB pr. ml og 150 celler pr. ml. De spikede urinprøvepuljer blev derpå opbevaret ved enten 2 8 C i 24 timer eller 30 C i 8 timer, før de blev overført til Q x UPT glassene. Q x UPT prøvepuljerne blev derpå opbevaret ved enten 2 8 C i 14, 21 eller 30 dage; eller ved 30 C i 14, 21 eller 30 dage; eller ved -20 C i 180 dage. På hvert tidspunkt blev Q x UPT prøver fjernet fra opbevaring og testet med BD ProbeTec CT Q x analyse på BD Viper systemet i ekstraheret funktion. Toogtredive analysereplikater blev genereret for hver tilstand (prøvetype/temperatur/varighed). De forventede resultater blev opnået med CT Q x analysen under alle testede forhold. Vaginal tør og eksprimeret podelindsstabilitet Puljer af CT negativ vaginal podningsmatrice blev brugt i analytiske eksperimenter til at støtte påstandene om opbevarings- og transportstabilitet for tørre vaginale podepindsprøver. Puljer blev spiket samtidig med CT serovar H og GC stamme ATCC for at opnå henholdsvis 90 EB pr. ml og 300 celler pr. ml, når de blev udsået på podninger og eksprimeret i CT/GC Q x podepindsdiluent. Udsåede tørre podninger blev opbevaret ved 2 8 C i 3, 7 eller 14 dage; eller ved 30 C i 3, 7 eller 14 dage; eller ved -20 C i 30, 60 eller 180 dage. På hvert tidspunkt blev tørre podninger fjernet fra opbevaring og eksprimeret i 2 ml CT/GC Q x podepindsdiluent og evalueret med BD ProbeTec CT Q x analyse på BD Viper systemet i ekstraheret funktion. Toogtredive analysereplikater blev genereret for hver tilstand (prøvetype/ temperatur/varighed). De forventede resultater blev opnået med CT Q x analysen under alle testede forhold. Puljer af CT negativ vaginal podningsmatrice blev brugt i analytiske eksperimenter til at støtte påstandene om opbevarings- og transportstabilitet for eksprimerede vaginale podepindsprøver. Puljer blev spiket med CT serovar H og GC stamme ATCC for at opnå henholdsvis 90 EB pr. ml og 300 celler pr. ml. Den spikede podepindsmatrice blev opbevaret ved 2 8 C i 7, 14 eller 30 dage; eller ved 30 C i 7, 14 eller 30 dage; eller ved -20 C i 30, 60 eller 180 dage. På hvert tidspunkt blev prøver fjernet fra opbevaring og testet med BD ProbeTec CT Q x analyse på BD Viper systemet i ekstraheret funktion. Toogtredive analysereplikater blev genereret for hver tilstand (prøvetype/temperatur/varighed). De forventede resultater blev opnået med CT Q x analysen under alle testede forhold. Stabilitet af endocervikale og urethrale podepindsprøver Puljer af CT negativ endocervikal podningsmatrice blev brugt i analytiske eksperimenter til at støtte påstandene om opbevarings- og transportstabilitet for endocervikale and urethrale podepindsprøver. Puljer af podningsmatrice blev spiket med CT serovar H og GC stamme ATCC ved henholdsvis 90 EB pr. ml og 300 celler pr. ml. Puljerne blev dispenseret i 2 ml volumener i BD prøveglas for at simulere våde endocervikale prøver og opbevaret ved enten 2 8 C i 7, 14 eller 30 dage; eller ved 30 C i 7, 14 eller 30 dage; eller ved -20 C i 30, 60 eller 180 dage. På hvert tidspunkt blev prøver fjernet fra opbevaring og testet med BD ProbeTec CT Q x analyse på BD Viper systemet i ekstraheret funktion. Toogtredive analysereplikater blev genereret for hver tilstand (prøvetype/temperatur/varighed). De forventede resultater blev opnået med CT Q x analysen under alle testede forhold. Prøvestabilitet efter forvamning Puljer af mandlig og kvindelig CT negativ ren urin blev brugt i analytiske eksperimenter til at støtte opbevaringsstabilitetskravene for forvarmede rene og Q x UPT urinprøver. Prøvepuljer blev spiket med CT serovar H og GC stamme ATCC ved henholdsvis 45 EB pr. ml og 150 celler pr. ml og enten føjet til Q x UPT glassene eller forblevet ubehandlet som ren urin. Begge prøvetyper blev forvarmet ved 114 C i 15 min, og afkølet i 15 min. Efter forvarmningsprocessen blev prøveglassene opbevaret ved enten 2 8 C i 1, 3 eller 7 dage; eller ved 30 C i 1, 3 eller 7 dage; eller ved -20 C i 30 eller 180 dage. På hvert tidspunkt blev prøver fjernet fra opbevaring og testet med BD ProbeTec CT Q x analyse på BD Viper systemet i ekstraheret funktion. Toogtredive analysereplikater blev genereret for hver tilstand (prøvetype/temperatur/varighed). De forventede resultater blev opnået med CT Q x analysen under alle testede forhold. 20