Implementering af flowcytometri til identifikation af CD3, CD4, CD8 og CD20 i Bronkoalveolær lavage

Størrelse: px
Starte visningen fra side:

Download "Implementering af flowcytometri til identifikation af CD3, CD4, CD8 og CD20 i Bronkoalveolær lavage"

Transkript

1 Implementering af flowcytometri til identifikation af CD3, CD4, CD8 og CD20 i Bronkoalveolær lavage Professionsbachelorprojekt Udarbejdet af: Jesper Larsen Projektperiode: til K-vejleder: Susanne Merete Nielsen Klinisk Patologi, Næstved Sygehus. I-vejleder: Marianne Nielsen. Adjunkt MSc. Ph.d. University Collage Sjælland.

2 Implementering af flowcytometri til identifikation af CD3, CD4, CD8 og CD20 i Bronkoalveolær lavage Professionsbachelorprojekt Billede forside Kilde: Protein funktion [hjemmeside på internettet]. Aarhus: AH diagnostics as [lokaliseret d. 4. december 2011]. Tilgængelig på Udarbejdet af Jesper Larsen Projektperiode: til K-vejleder: Susanne Merete Nielsen. Klinisk Patologi, Næstved Sygehus. I-vejleder: Marianne Nielsen. Adjunkt MSc. Ph.d. University Collage Sjælland. 2

3 Resume Baggrund Bronkoalveolær lavage (BAL), er væske ophentet efter skylning af det perifere bronkietræ og alveoler og udtages rutinemæssigt til udredning af hovedsageligt sarkoidose. Til bestemmelse af lymfocyt differentiation i BAL-væske benyttes på klinisk patologi Næstved immuncytokemi (ICC). Svar afgives efter manuel kvantitativ bestemmelse af andelen af CD3 + og af CD4 + /CD8 + ratioen. Det kunne derfor være en fordel at benytte flowcytometri (FCM) til analyse af BAL-væsker. Ved analyse vha. FCM tælles celler. Dette giver en mere repræsentativ bestemmelse af celledifferentiation. BALvæsker modtages fikseret i alkohol. Det er ikke muligt at foretage en flowcytometrisk analyse på alkoholfikserede BAL-væsker. Formål Implementering af flowcytometri til identifikation af CD3,CD4,CD8 og CD20 i BAL. At finde en metode til behandling af alkoholfikseret BAL, så en flowcytometrisk analyse er mulig. Metoder I dette projekt foretages sammenligning af 12 patienter med henholdsvis immuncytokemi på alkoholfikseret BAL-væske og flowcytometri på ufikseret BAL-væske til bestemmelse af CD3, CD4, CD8, CD20 og CD4/CD8 ratio. Der er i dette projekt foretaget 4 forsøg, med forskellige fikseringsreagenser og antistof kloner, på alkoholfikseret BAL-væsker, for at kunne benytte disse til flowcytometrisk analyse. Resultater Resultater viser ved metodesammenligning giver for CD20 + en korrelationskoefficient på r=0,424, CD3 + r = 0,974, CD4 + r = 0,641, og CD8 + r = 0,803 samt CD4 + /CD8 + ratio r= 0,760. Konklusion Der er ikke fundet statistisk signifikant forskel mellem analyser foretaget immuncytokemisk og flowcytometrisk på CD3, CD4, CD8, CD20 eller på CD4/CD8 ratioen. Resultater af efterfikserings- og demaskerings forsøg viste ingen brugbare resultater. 3

4 Forord Først en tak til min medstuderende Gry Knudsen, som jeg har udført dette projekt sammen med. Det har gennem hele projektet været en fornøjelse at arbejde sammen med Gry, som med ideer og entusiasme har været med til at gøre dette projekt muligt. Projektet er udført p Klinisk Patologi på Næstved Sygehus, region Sjælland, Sygehus Syd. Jeg vil derfor gerne takke hele afdelingen for den altid positive og hjælpsomme atmosfære, hvor jeg gennem hele projektet har følt mig velkommen. Derudover vil jeg specielt gerne takke flow-teamet og immun-teamet, for altid at være behjælpelige med råd og vejledning og for deres tålmodighed overfor to studerende og deres mange spørgsmål. En stor tak rettes til vores K-vejleder Susanne Merete Nielsen og I-vejleder: Marianne Nielsen, for deres støtte gennem projektet og for deres inspirerende og konstruktive vejledninger, der har hjulpet mig gennem projektet. Til sidst også Lunge Medicinsk afdeling Patologi på Næstved Sygehus, region Sjælland, Sygehus Syd, for at være behjælpelige med indhentning af fikserede som ufikserede BAL-væsker og være villige til at svare på vores spørgsmål vedrørende udtagning af BAL-væsker. 4

5 Indholdsfortegnelse Indhold Resume... 3 Forord... 4 Indholdsfortegnelse... 5 Introduktion... 7 Problembaggrund Materialer og metoder Materialer Apparatur Reagenser Metoder Immuncytokemisk analyse af CD3, CD4, CD8 og CD20 på alkoholfikseret cytospinpræpareret BAL-væske Flowcytometrisk analyse af CD3, CD4, CD8 og CD20 på ufikseret BAL-væske Efterfikserings- og demaskeringsforsøg Forsøg 1. Efterfiksering af alkoholfikseret cytospinpræpareret BAL-væske Forsøg 2. Efterfikserings- og demaskeringsforsøg til flowcytometrisk analyse på alkoholfikseret BAL-væske Forsøg 3. Kvalitetsforsøg på cytospinspræpareret BAL-væske af FITC og Alexa F luor Forsøg 4. Efterfiksering og demaskeringsforsøg til flowcytometrisk analyse på BAL-væske Sikring af kvalitet Behandling af resultater Resultater Metodesammenligning Efterfikserings- og demaskeringsforsøg Forsøg 1. Efterfiksering af alkoholfikseret cytospinpræpareret BAL-væske Forsøg 2. Efterfiksering- og demaskeringsforsøg til flowcytometrisk analyse på alkoholfikseret BAL-væske Forsøg 3. Kvalitetsforsøg på cytospinspræpareret BAL-væske af FITC og Alexa Fluor Forsøg 4. Efterfiksering og demaskeringsforsøg til flowcytometrisk analyse på BAL-væske Diskussion

6 Konklusion Perspektivering Litteraturliste Bilag Bilag A. Litteraturliste inkl. evidensvurdering af litteratur Bilag B. Bekræftelse for udfærdigelsen af den skriftlige besvarelse

7 Introduktion På klinisk patologi Sygehus Syd Næstved, modtog man de første 11 måneder af 2011, 120 Bronkoalveolær lavage (BAL), i form af alkoholfikseret BAL -væske, hovedsageligt i forbindelse med udredning af sarkoidose. Efter en vurdering af lymfocyt fraktionen på May-Grünwald Gimsa (MGG) farvning, bestemmes om der skal foretages yderligere immuncytokemisk (ICC) analyse af BALvæsken. På BAL-væsker fortages analyse af CD3 + celler, som er en pan T-cellemarkør, CD4 + som påviser T-hjælper celler, CD8 + som påviser T-cytotoksiske celler og CD20 + som er en pan B- cellemarkør. Diagnosticering af sarkoidose fortages ved bestemmelse af mængden af lymfocytter, samt CD4 + /CD8 + ratioen [1]. Bronkoalveolær lavage, eller bronkialskyllevæske er væske ophentet efter skylning af det perifere bronkietræ og alveoler og udtages rutinemæssigt til udredning af interstitielle lungesygdomme og andre lungesygdomme, hovedsageligt sarkoidose. BAL foretages ved at indføre et bronkoskop gennem næse ned i det ønskede område i lungen. Derefter sprøjtes 100 ml. isotonisk NaCl i lungen, som straks derefter opsuges. Der ophentes omkring 1/3 til halvdelen af den anvendte væske [2]. Det er muligt at skylle 2 til 3 gange. 100 ml skyllevæske vil indsamle materiale fra omkring alveoler, svarende til op til 3 % af det samlede lungeareal [3] Ved hjælp af denne metode kan der opnås et repræsentativt billede af cellefordelingen i de perifere dele af lungen. Ved bronkialskyl føles kun et kortvarigt efterfølgende ubehag og ellers kun få og ukomplicerede bivirkninger [4] og kan være et alternativ til transbronkial lungebiopsi (TBB). I BAL-væsker findes typisk 3 typer af leukocytter. B-celler, T-celler og makrofager. Til at identificerer overflademarkører på leukocytter i BAL-væsker, benyttes på klinisk patologi, Næstved sygehus, rutinemæssigt ICC. ICC har været benyttet siden 1942, hvor Coons et al. [5] beskrev en metode, til at visualisere antigener, ved hjælp af antistoffer konjugeret med Fluorescein Isothiocyant (FITC). Senere er udviklingen gået mod mere holdbare og brugervenlige metoder og der benyttes i dag hovedsageligt enzym konjugerede antistoffer. ICC foretages ved at cytospin centrifugering af µl alkohol fikseret BAL-væske på 4 objektglas til henholdsvis CD3 +, CD4 +, CD8 + og CD20 +. Efter lufttørring fikseres glassene i 4 % neutral buffet formalin (NBF) i 15 minutter og efterfølgende i 96 % ethanol i 5 minutter. Derefter demaskeres ved 10 minutters varmebehandling i mikrobølgeovn, nedsænket i TRIS-EGTA (T-EG). Derefter påbegyndes en indirekte immunfarvning af prøver og afsluttes med en kernefarvning i Mayers sure hæmatein. Prøver bedømmes ved manuel tælling af 100 celler til bedømmelse af CD3 + og CD20 + og tælling af 100 lymfocytter til bedømmelse af CD4 + og CD20 +. Dette er en ressource krævende metode, med mange procedurer og brug af mange reagenser. 7

8 Det kunne derfor være en fordel, at foretage denne bestemmelse ved hjælp af flowcytometri (FCM). Denne metode kræver minimal præparering og der tælles et stort antal celler, ud fra 1500 µl BALvæske, hvilket giver et mere repræsentativt udsnit af lymfocytfordelingen i prøven. FCM er en sensitiv og specifik analyse, der giver en kvantitativ vurdering af prøven. Flere studier har vist, at flowcytometrisk analyse af BAL-væsker, giver et lige så godt billede af cellepopulationen, om ikke bedre, end analyse foretaget immuncytokemisk [6][7]. Flowcytometri har været benyttet siden Crosland og Taylor beskrev et fungerende system til detektion af erytrocytter, ved hjælp af en sheath 1 væske, gennem et rørsystem forbundet til en udboret messing klods [8]. Dette er det princip, der stadig benyttes i dag til adskillelse og fremføring af celler. De første flowcytometre talte blodets celler, men kunne ikke identificerer dem. Senere blev der forsøgt, ved farvning af celler, at differentiere celletyper, men den egentlige udvikling kom først med indførelsen af computere og computer algoritmer[9]. I begyndelsen af firserne, var der i forbindelse med opdagelsen af HIV, en stor interesse for at kunne identificerer membranproteiner som CD3, CD4 og CD8, til monitorering af udviklingen af AIDS i HIV smittede patienter. Ved moderne flowcytometri belyses celler med en argon-laserstråle, som udsender et lys på 488nm og det tilbagekastede lys måles henholdsvis forward-scatter (FSC), som måler cellens størrelse og sidescatter (SSC), som måler cellens granula. Derudover der det muligt at identificere cellerne med fluorescensmærkede antistoffer, enten direkte, eller indirekte, ved sekundært fluorescensmærket antistof, som reagerer på cellebundet ikke farvet primært antistof. Ved at analysere flere CDmarkører samtidig er det muligt direkte at sammenligne celle fraktioner som for eksempel CD4/CD8 ratioen. Ved at gate de forskellige celletyper, kan de forskellige celletyper differentieres. Alle events afbilledes i et dot plot, men det er muligt, med en metodisk tilgang, at adskille celletyper. Der findes flere forskellige tilgange til adskillelse af celletyper i flowcytometriske analyser [10][11], hvor det ved at sammenligne forskellige markører, kan udelukke celler og ender op med at have et billede af de forskellige markører der benyttes. Fluorokromer mister dog deres fluorescens over tid, da molekylet kun kan exciteres et begrænset antal gange hvorefter intensiteten af fluorescensen aftager og er et fænomen der kaldes fotoblegning. Denne egenskab forudsætter derfor at prøver analyseres hurtigst muligt efter at fluorokromet er tilsat prøven. For at fluorokromet skal kunne binde til antistoffet konjugeres det med en crosslinker, der er et molekyle, der har affinitet for antistoffet. Det mest benyttede fluorokrom er fluorescien, som ofte er konjugeret til isothyocyanat (FITC), men også med en anden crosslinker, succinimidyl ester, benyttes til fluorokromet Alexa Fluor, som er udviklet af Molecular 1 Fra engelsk, betydende beskyttende lag, som skede til en kniv, der beskytter bladet. 8

9 Probes. Fluorokromet binder kovalent til crosslinkeren, som er rettet mod frie aminogrupper i antistoffet, hvor denne bindes kovalent. FITC var den første kommercielle fluorescens markør til antistoffer [9] og er stadig meget benyttet. Flere typer af fluorokromer fungerer bedre end FITC. FITC har hurtig fotoblegning og ph følsomhed i det fysiologiske område [12], hvilket betyder en variation i koncentrationen af fluorescensen. En af de nyere fluorokromer, Alexa Fluor, har højere koncentration af fluorescens, er mere ph stabil og har højere affinitet for antistoffet, end flere andre fluorokromer [13]. I praksis er det normalt, at købe et færdigt produkt med antistof, allerede konjugeret med fluorokrom. Rutinemæssigt foretages analyse på alkoholfikseret BAL-væsker, som beskrevet immuncytokemisk på cytospinpræpareret materiale. Formålet med fiksering er, at bevare celler- og vævsmorfologi og hindre autolyse og når der er tale om immunkemiske analyser, at bevare antigener og antigenisitet. Forsøg på klinisk patologi, Næstved har vist, at det ikke er muligt direkte at benytte den alkohol fikserede BAL-væske i en flowcytometrisk analyse. Alkohol fiksering er en koagulerende, irreversibel fiksering, der ødelægger proteinets tertiære struktur. Fiksering medfører en ændring i antigenets epitop, hvorved antistoffets paratop ikke kan reagere med antigenet. Et andet fiksativ er formalin. Formalin er et gelerende fiksativ der danner methenbroer mellem formaldehyd og aminosyres aminogruppe [14]. Efter en dehydratisering vil formaldehyd derefter kunne binde til en aminogruppe i samme, eller i et andet protein. Dette vil således danne et komplekst netværk af methenbroer. Det tætte netværk binder proteinerne sammen og fastholder proteinets struktur hvorved væv- og cellestrukturer bevares, men der sker en maskering af epitoperne i antigenet. Derudover påvirker formalin antigeniciteten ved bindinger af metalioner, især calcium ioner og at reducerer den elektrostatiske ladning i antigenet [15]. Derfor er det nødvendigt at foretage en demaskerende behandling, før det er muligt at foretage en immunkemisk analyse. Fra midt i halvfjerdserne benyttedes proteaser til demaskering, men først i halvfemserne, fandt man frem til, at demaskering ved varmebehandling af vævet i en buffer, var en mere effektiv metode til reetablering af epitoper [16]. Ved hjælp af heat-induced epitope retrieval (HIER), er det muligt at genoprette antigeniciteten, ved brydning af methenbroerne. Brydningen sker til dels ved, at den termiske energi bryder en del af tværbindingerne, men ved varmebehandling i en TE-buffer bestående af TRIS(hydroxymethyl) aminomethane og ethylen-diamin-tetra-acetat (EDTA), med en ph på omkring 9, eller i citrat, med en ph på omkring 6, effektiveres epitop demaskeringen yderligere. Både EDTA og citrats evne til at binde metalioner, heriblandt især calcium og magnesium ioner, menes at have betydning for demaskeringen[17]. I dette projekt benyttes T-EG buffer ved 9

10 demaskering i mikrobølge ovn. T-EG består af en TRIS buffer og ethylen-glycol- tetra-acetat (EGTA). EGTA binder som EDTA metalioner, men har en langt højere affinitet for calcium ioner og en lavere affinitet for magnesium ioner [18]. Også ph i kogemediet har betydning for den immuncytokemiske farvning. Et studie af Shi et. Al.[19], der sammenligner forskellige kogemedier, med forskellig ph, viser store forskelle i antistoffers evne til at danne komplekser. Her ses at bl.a. anti CD20 klon L26 fungerer bedst ved ph 2, 3 og 8. Dette studie er foretaget på formalin fikseret væv og paraffinsnit. Ved valg af antistof diluent er ph en betydende faktor for dannelse af antigen/antistof komplekser. De kræfter der danner antigen-antistof komplekset er meget svage elektrostatiske kræfter, og kræver derfor, at antigenets epitop og antistoffets paratop er i meget nær kontakt med hinanden, før det er muligt at disse svage kræfter kan binde til hinanden og danne et kompleks. Antistoffer har en positiv nettoladning, mens antigener og andre proteiner, har en negativ ladning. Det vil derfor være muligt for antigener, at tiltrække antistoffer og dermed danne en primær kontakt mellem disse. Man vil derfor få den største tiltrækning mellem antigen og antistof, ved en ph, der ligger mellem den isoelektriske værdi af antigen og antistof[20]. Der er derfor to faktorer, der kan påvirke den elektrostatiske tiltrækning mellem antigener og antistoffer, og det er ph og ioner. En antistof diluent, med en ph omkring 7,2, vil give optimale betingelser. Problembaggrund BAL-væsker giver et repræsentativt billede af celletyper fra et relativt stort område i de perifere dele af lungen. Det vil derfor også være fordelagtigt at benytte flowcytometri, der effektivt og hurtigt foretager differentiering af et meget stort antal celler, og dermed giver et præcist og kvantitativt billede af cellefordelingen, i forhold til den nuværende immuncytokemiske farvning og efterfølgende manuelle og kvantitative tælling af et betydeligt mindre antal celler. Derfor undersøges om det er muligt at erstatte den immuncytokemiske metode til at bestemme fordelingen af CD3 +, CD4 +, CD8 + og CD20 + på alkoholfikserede BAL-væsker med flowcytometrisk analyse af ufikserede BAL-væsker, ved at sammenligne resultater af analyse foretaget med begge metoder, på samme patienter. I forbindelse med en stadig større centralisering inden for sygehusvæsnet, kunne det være fordelagtigt at sende prøvemateriale mellem sygehuse for analyse. I mange tilfælde er det derfor nødvendigt at fiksere materialet før forsendelse. Dette er et problem med hensyn til flowcytometri, da denne analyse kun foretages på ufikseret materiale. Det ville derfor være interessant, at finde en metode, til demaskering af alkoholfikseret materiale, så en flowcytometrisk analyse var mulig. I dette projekt vil der derfor blive foretaget forsøg på efterfiksering og demaskering af alkohol fikseret BAL-væsker, så en analyse på flowcytometri er muligt. Ved den rutinemæssige ICC metode 10

11 forbehandles alkoholfikserede BAL-væsker, der er påsat glas ved cytospin centrifugering, med formalinfiksering og efterfølgende fiksering i 96 % alkohol. Efter en efterfølgende demaskering ved varmebehandling i T-EG buffer, er det muligt at påvise CD markører, ved hjælp af antistoffer. Det betyder at CD markører stadig kan detekteres efter alkoholfiksering. Ved at benytte samme primære antistoffer som bliver benyttet ved ICC, og derefter påsætte fluorokrom, ville det være muligt at foretage analyse på FCM. Men dette kræver en oprensning af celler og en behandling af den fikserede BAL-væske. Dette har ført til følgende problemformulering. Hvordan kan analyserne af lymfocytmarkørerne CD3, CD4, CE8 og CD20 på cytospin præpareret, alkoholfikseret BAL-væsker erstattes af flowcytometrisk metode på ufikseret BAL-væske? Hvordan er det muligt at anvende alkohol fikseret BAL-væsker, så en analyse af lymfocytmarkørerne CD3, CD4, CD8 og CD20 kan udføres flowcytometrisk? Til sammenligning af metoder foretages rutinemæssig analyse af patientprøve med immuncytokemisk til bestemmelse af CD3, CD4, CD8 og CD20 på alkoholfikserede BAL-væsker. Cellepopulationer tælles manuelt og de procentvise andele af CD3 +, CD4 +, CD8 + og CD20 + beregnes. Dette gør det muligt direkte at sammenligne resultater af cellepopulationer analyseret med flowcytometri på ufikseret BAL-væske som blev foretaget på samme patienter som med ICC. CD3 +, CD4 +, CD8 + og CD20 + gates og den procentvise fordeling af de 4 celletyper bestemmes. Der foretages efterfølgende statistisk sammenligning af resultater af cellepopulationer, fra de 2 analyser. Analyser til metodesammenligning foretages i henhold til rutinemæssig analyse med henholdsvis ICC og FCM. Med hensyn til ICC betyder dette, at der ikke ændres på tider eller mængder og at prøver kan analyseres rutinemæssigt sammen med øvrige immuncytokemiske analyser. For flowcytometri betyder det, at der ikke ændres på flowcytometerets forudindstillede parametre, som laser og detektor indstillinger. Til demaskerings- og efterfikseringsforsøg er alkoholfikseret BAL-væske fra prøven nr. 5 udvalgt. Prøve nr. 5 er en klar BAL-væske, uden stort indhold af mucin og med en repræsentativ cellefordeling og der er ved rutinemæssig ICC og FCM opnået en procentfordeling på CD3 +, der ikke ligger langt fra hinanden. Prøve 5 er derfor vurderet egnet og som en prøve, der ikke bliver komplementeret af mucin, erytrocytter eller epithelvæv, som forefindes i nogle BAL-væsker. Med CD3 som markør, foretages der forsøg med forskellig efterbehandling af cytocentrifugerede alkoholfikserede prøver, hvor der efterfikseres med formalin med varierende tider, eller med andre fiksativer. Der udføres efterfølgende permeabilisering af cellemembran, demaskering i T-EG buffer og 11

12 ICC farvning af prøver. Der benyttes antistoffer, der benyttes rutinemæssigt i ICC farvning. Den bedste metode føres videre til et andet forsøg (forsøg 2), som er et forsøg, der skal klarlægge, om det er muligt, at demaskere alkoholfikserede BAL-væsker. Der benyttes alkohol fikserede BAL-væske, hvor der foretages forsøg med demaskering ved varierende varmebehandlings tider i T-EG buffer. Forsøget foretages på den alkoholfikserede BAL-væske i et falcon rør og til immunreaktioner benyttes samme fluorokrom konjugerede antistoffer som tidligere blev benyttes på ufikseret BAL-væske til flowcytometri og primære antistoffer, der benyttes i immuncytokemiske analyser, hvorpå der sættes fluorokrom konjugeret sekundært antistof, for at finde den bedst egnede antistof klon. I yderligere et forsøg (forsøg 3) foretages en vurdering af forskellige koncentrationer af den bedste klon af primært antistof fra forsøg 2 og forskellige fluorokromer, henholdsvis FITC og Alexa Fluor, på cytospin centrifugeret materiale og efterfølgende mikroskopering i fluorescens mikroskop. Det sidste forsøg (forsøg 4)foretages med alkohol fikseret BAL-væske i falcon rør. Der benyttes den bedste efterfikserings metode, fra forsøg 1, den bedste koncentration af primær antistof, samt det bedste fluorokrom, fra forsøg 3. Med denne kombination foretages varmebehandling i T-EG buffer af forskellig varighed og efterfølgende flowcytometrisk analyse. Til projektet benyttes materialer, herunder reagenser og apparatur, der allerede forefindes på afdelingen. Alle analyser foretages på allerede udtaget materiale og der udtages ikke ekstra materiale i forbindelse med projektet. Alle patientprøver erhverves fra lungemedicinsk afsnit, Næstved sygehus. Materialer og metoder Materialer Der er til forsøget benyttet henholdsvis ufikserede friske BAL-væsker samt BAL-væsker fikseret i 50 % alkohol i forholdet 1:1 v/v fra 12 patienter med ukendt diagnose. Alle patientprøver er fra lungemedicinsk afdeling Næstved sygehus, hvor der efter aftale er afhentet rutinemæssigt fikseret BAL-væske, hvoraf der inden fiksering er udtaget omkring 10 ml, til flowcytometrisk analyse. Apparatur Til immunkemisk analyse af fikseret prøvemateriale er der benyttet coatede histobond objektglas (Paul Marienfeld co. GmbH, Lauda-Königshofen, Tyskland). Til centrifugering af prøvemateriale er benyttet Cytospin 2 cytocentrifuge, cat. Nr , Shandon filtercards, cat. nr , samt cytospin tragte og klemmer, alle fra Shandon, (Shandon, Pittsburgh, USA). Til afpipettering er 12

13 benyttet µl pipette nr.: og µl pipette nr.: T83981 begge fra Thermo labsystems, (Thermo Fisher Scientific Inc., England), Der er benyttet Whilpool 6th sense mikrobølgeovn (Whirlpool Corporation, Jenn-air, USA) til varmebehandling af prøvematerialet, samt plastikbeholder med låg og rack til objektglas, begge af ukendt oprindelse. Til immunfarvning er benyttet DAKO autostainer Plus, serie nr.: AS1650D1006, cat. nr.: S3800 og DAKO Cover Slipper cat. nr.: CR100 (DAKO, Glostrup, DK). Desuden er der benyttet lokalt fremstillet fugtkammer, til forhindring af udtørring af prøver. Mikroskopering er foretaget med Olympus B50 F4 lysmikroskop, (Olympus Corporation, Tokyo, Japan). Til flowcytometrisk analyse er benyttet BD FACSCantio II Flowcytometer, S.N: V , med tilhørende BD FACSDiva Software, samt Falconrør 5 ml, u. prop, cat. nr (Becton Dickinson, San Jose, Californien, USA). Der er benyttet Heidolph Rotamax 120, S.N: (Heidolph Instruments GmbH & Co. Schwabach, Tyskland) og Vortex, S.N: , (VWR International, Seattle, USA), Stuart Rotator drive STR4, S.N: R , (Bibby Scientific Limited, Staffordshire, UK) og til centrifugering Sigma 3-18K, S.N: , (Sigma-Aldrich Co, St. Louis, USA). Derudover er der benyttet en lokalt fremstillet sugeapparatur, til dekantering af prøver. Der er benyttet eline finpipetter m100, CE og m1000 CE , (Biohit, Helsinki, Finland). Til varmebehandling af cytologisk materiale er benyttet vandbad: Julabo 13 CE nr.: , (Julabo labortechnik, Seelbach, Tyskland) Reagenser Til immunkemisk analyse er der benyttet 4 % neutral buffet formalin (NBF) WAT A LOT.: , fra CellPath (CellPath Newton, England), samt finsprit ethylen 96 % vol. cat. nr.: Batch.: se , fra Kemetyl (Kemetyl A/S, Køge, DK) og T-EG buffer ph 8,7-8,8, fremstillet af 60,55 g TRIS (hydroxymethyl) amionmethane T-1378 fra sigma (Sigma-Aldrich. Co., USA), 19 g TiTriplex VI-EGTA, fra Merch (MERCH, Darmstadt, Tyskland) og opløst i 5000 ml demineraliseret vand, hvorefter ph justeres med NaOH-2 M. Denne opløsning fortyndes 1:10 til anvendt T-EG buffer, med en endelig koncentration på henholdsvis 10 mm for TRIS og 0,5 mm for EGTA. Til visualisering af immuncytokemisk farvning er benyttet EnVision FLE kit cat. nr. K8002 (DAKO, Glostrup, DK). Kittet indeholder EnVision FLE+ Mouse(LINKER), EnVision FLE/HRP, EnVision FLE Substrate buffer, EnVision FLE DAB+Chromogen. Derudover benyttes EnVision FLE Anti-Body Diluent, fra DAKO, cat.: K8006. De benyttede antistoffer til ICC fremgår af tabel 1. 13

14 Tabel 1. Til immuncytokemisk analyse, af cytospin centrifugeret prøver, er benyttet følgende primære antistoffer, alle monoklonale mus anti human. Klon Isotype Koncentration 3 Producent 3 Cat. nr. Lot. nr. Anti CD3 PS1 IgG 2 a, 200 µg/ml Leica 1 CD3-PS1-L-CE Anti CD4 4B12 IgG 1, kappa 200 µg/ml Leica 1 CD4-368-L Anti CD8 C8/144B IgG 1, kappa 200µg/ml DAKO 2 M Anti CD20cy L26 IgG 2 a, kappa 175µg/ml DAKO 2 M Leica (Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Germany) 2 DAKO (DAKO, Glostrup, DK) 3 Koncentration af antistof erhvervet fra producent. Til kernefarvning er benyttet Mayers sure hæmatein, som er fremstillet lokalt. Til flowcytometrisk analyse er benyttet cytometer setup and tracking beads, ref , Nilered fluorecscent particle ref , FACS clean solution, ref , FACS steath solution, ref og FACS shut-down solution, ref , alle fra Becton Dickinson (Becton Dickinson San Jose, CA, USA), samt fosfatbuffet saltvand (PBS) til fortynding af prøver, bestående af potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) 0,017M, Disodium hydrogen phosphate (Na2 HPO4) 0,05M og NaCl 1,5M, ph 7,4, fra Lonza cat.nr , lot.: 1MB030 (Verviers, Belgien). Denne opløsning fortyndes 1:10 til endelig brugsopløsning. De benyttede fluorokrom konjugerede antistoffer fremgår af tabel 2. Tabel 2. Til flowcytometrisk analyse er benyttet følgende antistoffer, alle monoklonale mus anti human: Klon Isotype Koncentration 3 Fluorokrom Producent Cat. nr. Lot. nr. Anti CD3 SK7 IgG 1, kappa 12,5µg/ml PerCP BD Anti CD4 SK3 IgG 1, kappa 6µg/ml APC BD Anti CD8 SK1 IgG 1, kappa 12,5 µg/ml PE BD Anti CD20 L27 IgG 1, kappa 50µg/ml FITC BD Becton Dickinson (Becton Dickinson San Jose, CA, USA) 2 ebiosceince (ebiosceince San Diego, CA. USA) 3 Koncentration af antistof erhvervet fra producent. Til efterfikseringsforsøg er benyttet Fixation medium, og Permabilization medium, cat. nr.: GAS-003 og goat anti-mouse Alexa Fluor F488 (konc. fra prod.: 2000 µg/ml), cat. Nr. A11001 LOT.: , alle fra Invitrogen (Invitrogen, Origon USA), samt Polyclonal Rabbit Anti-Mouse Immunoglobulins/FITC Rabbit F(ab ) 2 (konc. fra prod.: 970µg/ml) cat. nr.:f 0313, (DAKO, Glostrup, DK). Til montering af dækglas er der benyttet VectaSheild Mounting Medium med DAPI H-120, cat. H-1200 LOT.: 0204 fra 14

15 Vector (Vector Laboratories Inc. Burlingame. CA. USA) og 70,80 og 90 % alkohol. Der er benyttet et Nikon eclipse 80i (Nikon, Japan) mikroskop til visualisering af fluorescerende immunfarvninger. Metoder Immuncytokemisk analyse af CD3, CD4, CD8 og CD20 på alkoholfikseret cytospinpræpareret BAL-væske Materialet blev afhentet fikseret med 50 % alkohol, i forholdet 1:1 v/v, således at den endelige alkoholprocent er 25 %. Efterfølgende udtages hhv. 200µl eller 300µl homogent materiale (afhængig af celletætheden) til cytospin prøvekammer inkl. coatede objektglas (se figur 1). Der centrifugeres i 10 min. ved 1200 rpm og objektglassene lægges til lufttørring. Figur 1. Prøvekammer og tilhørende objekter til cytospin Objektglassene efterfikseres i 4 % NBF i 15 min. og efterfølgende 96 % alkohol i 5 min., afsluttes med kort skyl i rindende vand til afskylning af alkohol. Demaskeringforetages ved varmebehandling i T-EG buffer i 10 min. i mikrobølgeovn, sat på boiling program og afkøler efterfølgende 10 min. i bufferen. Afslutningsvis skylles glassene i rindende vand i 5 min. Immunfarvningen foretages på DAKO autostainer plus. Til blokering af uønsket peroxidaseaktivitet anvendes EnVision FLE Peroxidase-Blocking reagent, der inkuberes i 5 min. Efter inkubering skylles med EnVision Wash Buffer. Til analyse benyttes CD3,fortyndet 1:200, CD4, fortyndet 1:100, CD8, fortyndet 1:400 og CD20 fortyndet 1:1500. Alle antistofferne er fortyndet i EnVision FLE antibody diluent. Der påføres 150 µl 15

16 fortyndet antistof og dette inkuberer på de respektive objektglas i 30 min. og efterskylles med EnVision Wash Buffer. Tabel 3. Koncentrationer af antistoffer påført prøver Koncentration Mængde antistof påført antistof/glas CD3 1 µg/ml 0,15 µg CD4 2 µg/ml 0,3 µg CD8 0,5 µg/ml 0,075 µg CD20 0,12 µg/ml 0,018 µg Efter inkubering tilsættes sekundært antistof; 150 µl EnVision FLE+ Mouse (LINKER) som inkuberer i 20 min. og efterskylles med EnVision Wash Buffer. Herefter tilsættes 150µl EnVision FLE/HRP som inkubere i 30 min., efterskylles med EnVision Wash Buffer. Der tilsættes 300µl EnVision substrate working solution, bestående af 40 ml EnVision FLE Substrate Buffer samt 20 dråber EnVision FLE DAB+Chromogen. Denne opløsning inkubere i 10 min. og skylles af 2 omgange i EnVision Wash Buffer og slutteligt i rindende vand. Efter immunfarvning farves objektglassene i Mayers sure hæmatoxylin i 2 min. og efterfølgende blåning sker i rindende vand i 5 min. Herefter begyndes dehydreringen i 4 kar ad 2 min. indeholdende 99 % ethanol. Dækglas monteres med pertex, uden udtørring af materialet. Farvningerne vurderes i lysmikroskop. To personer har hver talt fordelingen af CD3, CD4, CD8 og CD20. Der er i alt talt 200 celler til bestemmelse af CD3 og CD20 og den procentvise fordeling af henholdsvis CD3 og CD20 er beregnet. Der er i alt talt 200 lymfocytter til bestemmelse af CD4 og CD8 og den procentvise fordeling af henholdsvis CD4 og CD8 er beregnet. Flowcytometrisk analyse af CD3, CD4, CD8 og CD20 på ufikseret BAL-væske Analyse foretages på ufikseret BAL-væske. Til den immunkemiske reaktion afpippeteres 1500 µl homogent BAL-væske i 3 falconrør. Der tilføjes 2000 µl PBS i hvert rør, som centrifugeres i 5 min. ved rpm. Supernantenten dekanteres og der efterlades ca. 80 µl cellesuspension i hvert falconrør. Herefter tilsættes fluorokrom konjugeret antistof ifølge tabel 4. 16

17 Tabel 4. Antistoffer tilsat cellesuspension CD8 PE CD3 PerCP CD4 APC CD45 Paci. Blue CD20 FITC Rør 1 Negativ kontrol Negativ kontrol Negativ kontrol Negativ kontrol Negativ kontrol Rør 2 10 µl 10 µl 10 µl 5 µl Rør 3 5 µl 10 µl Falconrørerne inkuberes i mørke i 30 min på Rotamax ved lav hastighed. Herefter tilsættes 2000 µl PBS til hvert falconrør og der centrifugeres i 5 min. ved 1600 rpm og supernantanten hældes fra. Der tilsættes 500 µl PBS i hvert rør, som mikses og opbevares mørkt til senere aflæsning på flowcytometer. A B C Figur 2. Figur A viser CD20 + gated med CD20 mod SSC. Figur B viser CD3 + gated med CD3+ mod SSC og figur C viser CD4 + og CD8 +, gated CD4 mod CD8. Alle figurer er fra prøve nr. 5 Der tælles i alt celler og med en forward scatter (FSC)på 320 og en side scatter (SSC)på 300 og treshold indstilles til CD20 + celler gates CD20 + mod SSC (Figur 2 A). CD3 + celler gates CD3 + mod SSC (Figur 2 B). CD 4 + og CD8 + gates ud fra CD3 + i et CD 4 + mod CD8 + plot (Figur 2 C). Efterfikserings- og demaskeringsforsøg Der foretages 4 forsøg, kun med CD3 antistoffer. Forsøg 1 er et efterfikserings forsøg på cytospin fra alkoholfikseret BAL-væsker, med forskellige fikserings og permabiliserings reagenser, til vurdering af effekten af disse uden efterfølgende antigen retrieval (AR). 17

18 Forsøg 2 er et efterfikserings og demaskerings forsøg på alkoholfikseret BAL-væske i rør. Forsøget foretages med og uden fiksering i 4 % NBF, med varierende antigen retrieval tider i 99 C varmt vandbad og med CD3 klon PS1 og klon SK7, med efterfølgende flowcytometrisk analyse. Forsøg 3 er et kvalitetsforsøg på cytospinspræpareret alkoholfikseret BAL-væske med CD3 klon PS1. forsøget består af 2 prøver med CD3, fortyndet 1:50 v/v og detekteret med henholdsvis Polyclonal Rabbit Anti-Mouse /FITC og goat anti-mouse Alexa Fluor og 2 prøver med CD3, fortyndet 1:200 v/v og detekteret med henholdsvis Polyclonal Rabbit Anti-Mouse /FITC og goat anti-mouse Alexa Fluor. Forsøg 4 er et efterfikserings- og demaskeringsforsøg, med og uden fiksering i 4 % NBF, med CD3 klon PS1, detekteret med goat anti-mouse Alexa Fluor med efterfølgende flowcytometrisk analyse. Forsøg 1. Efterfiksering af alkoholfikseret cytospinpræpareret BAL-væske Prøver med forskellig efterfiksering, uden efterfølgende demaskering. Til vurdering af efterfiksering fremstilles 6 cytospinpræparater af alkoholfikseret BAL-væske. Der udtages 300 µl homogent materiale til cytospin prøvekammer inkl. coatede objektglas (se figur 3). Der cytospin centrifugeres i 10 min. ved 1200 rpm og objektglassene lægges til lufttørring. Prøve nr. 1 Prøve nr. 2 Prøve nr. 3 Prøve nr. 4 Prøve nr. 5 Prøve nr. 6 Figur 3 Oversigt over forsøg 1. Viser efterfikseringsmetoder på cytospin centrifugeret alkoholfikseret BAL-væske. Som figur 3 angiver, benyttes CD3 klon PS1. Prøve nr. 1 efterfikseres ikke. Prøve nr. 2 og 3 påføres 100 µl Invitrogen Fixation Medium og inkuberer i 15 minutter. Efter inkubation skylles prøve 2 og 3 i EnVision Wash Buffer og prøve nr. 3 påføres 100 µl Invitrogen Permeabilization Medium og inkuberer i 20 minutter. Prøve nr. 4 og 5 efterfikseres begge i 4 % NBF i hhv. 5 min. og 30 sek. Der medtages negativ kontrol, uden efterfiksering og uden tilsætning af primært antistof, som er prøve nr

19 Efter efterfikseringen/inkubering immunfarves rutinemæssigt med anti CD3 klon PS1,som tidligere beskrevet. Farvningerne vurderes i lysmikroskop. Forsøg 2. Efterfikserings- og demaskeringsforsøg til flowcytometrisk analyse på alkoholfikseret BAL-væske Til vurdering af antigen retrievaltider i T-EG buffer fremstilles 16 falconrør indeholdende cellesuspension fra samme alkoholfikserede BAL-væske som ved forsøg 1. Varmebehandling foretages ved nedsænkning af falconrør i vandbad ved 99 C. Der anvendes samme antistof som blev benyttet ved flowcytometri og primære antistof benyttet ved immuncytokemisk analyse (se tabel 5) µl prøvemateriale afpippeteres i hvert falconrør. Der tilsættes 2000 µl PBS til hvert rør, der centrifugeres i 5 min. ved 1600 rpm. Supernantanten dekanteres, således at der er 80 µl cellesuspension tilbage i falconrørerne. 8 falconrør (prøve nr. 1-8) tilsættes 100 µl 4 % NBF, mikses og fiksere i 2 min. Herefter skylles cellerne i 2000 µl PBS i hvert falconrør. Disse centrifugeres i 5 min. Ved 1600 rpm. Supernantanten dekanteres, således at der er 80 µl cellesuspension tilbage i falconrørerne. De resterende 8 falconrør (prøve nr. 9-16)tilsættes ikke NBF. Der tilføjes der 100 µl T-EG buffer til 12 falconrør (prøve nr. 2-4, 6-8, og 13-15), der varmebehandles ved 99 C med henholdsvis 4 rør (prøve nr. 2, 6, 10 og 14)i 30 sek., 4 rør (prøve nr. 3, 7, 11 og 15)i 90 sek. Og 4 rør (prøve nr. 4, 8, 12 og 16)i 180 sek. (se figur 3). Efter endt demaskering i T-EG buffer, afkøles falconrørerne og alle rør skylles med 2000 µl PBS, centrifugers i 5 min. ved 1600 rpm og supernanten dekanteres, efterladende 80 µl cellesuspension. Herefter kan immunfarvning begyndes. Dette gøres både ved direkte og indirekte teknik. Ved direkte teknik tilsættes 10 µl Mouse anti-human CD3, klon SK7, med PerCP-fluorokrom. Dette tilsættes i 8 rør. 4 rør (prøve nr. 5-8)der er behandlet med NBF og som har været varmebehandlet i henholdsvis 0, 30, 90 og 180 sek. og 4 rør (prøve nr )der ikke har været behandlet med NBF og som har været varmebehandlet i henholdsvis 0, 30, 90 og 180 sek. (se figur 3). Dette inkuberer i 30 min. Herefter skylleprocedure med 2000 µl PBS, der centrifugeres i 5 min. ved 1600 rpm. Supernantanten dekanteres efterladende 80 µl cellesuspension. Den indirekte teknik, som benyttes på de resterende rør (prøve nr. 1-4 og 9-12), tilsættes 100 µl monoklonal mouse anti-human CD3, klon PS1 fortyndet 1:200 v/v. Dette inkubere i 30 min., hvorefter cellesuspensionen indeholdende antistoffer skylles med 2000 µl PBS, centrifugeres i 5 min. ved 1600 rpm. Supernantanten dekanteres efterladende 80 µl cellesuspension. Efterfølgende tilsættes 10 µl rabbit anti-mus FITC falconrøret, dette inkubere i 30 min., hvorefter falconrøret skylles med 2000 µl PBS, centrifugeres i 5 min. ved 1600 rpm. Supernantanten dekanteres efterladende 80 µl cellesuspension. Alle rør tilsættes 500 µl PBS, mikses og opbevares mørkt til senere aflæsning på 19

20 flowcytometer. Der ønskes kun diagrammer rettet mod indhold af CD3 + celler i prøven, derfor gates der kun ud fra dette, med både PerCP og FITC fluorokromerne. Tabel 5. Oversigt over forsøg 2. Fikserings tid i NBF, varmebehandlingstider og CD3 kloner. Klon PS1 konjugeres med FITC fluorokrom (indirekte metode), mens klon SK7 er konjugeret (direkte metode) Prøve nr. Fiksering i 4 % Varmebehandling Primær antistof NBF i sek. CD3 klon: Detektionssystem 1 2 min. 0 PS1 Indirekte metode 2 2 min. 30 PS1 Indirekte metode 3 2 min. 90 PS1 Indirekte metode 4 2 min. 180 PS1 Indirekte metode 5 2 min. 0 SK7 Direkte metode 6 2 min. 30 SK7 Direkte metode 7 2 min. 90 SK7 Direkte metode 8 2 min. 180 SK7 Direkte metode 9-0 PS1 Indirekte metode PS1 Indirekte metode PS1 Indirekte metode PS1 Indirekte metode 13-0 SK7 Direkte metode SK7 Direkte metode SK7 Direkte metode SK7 Direkte metode Forsøg 3. Kvalitetsforsøg på cytospinspræpareret BAL-væske af FITC og Alexa F luor 488 Til kvalitetsforsøg på cytospin centrifugeret alkoholfikseret BAL-væske, fremstilles cytospinpræperater ved indirekte detektion med Polyclonal Rabbit Anti-Mouse /FITC og goat antimouse Alexa Fluor F488, til påvisning af CD3 klon PS1, fortyndet henholdsvis 1:50 og 1:200 og efterfølgende vurdering i fluorescens mikroskop (se tabel 6). Der blev udtaget hhv. 200 eller 300 µl homogent materiale (afhængig af celletætheden) til cytospin prøvekammer inkl. coatede objektglas. Der centrifugeres i 10 min. ved 1200 rpm og objektglassene 20

21 lægges til lufttørring. Objektglassene efterfikseres i 4 % NBF i 15 min. og efterfølgende 96 % alkohol i 5 min., afsluttes med rindende vand til afskylning af alkohol. Tabel 6. Oversigt over prøver i forsøg 3. Fortynding af primære antistoffer og anvendte fluorokromer Fortynding af Prøve nr. Fluorokrom primært antistof 1 1:200 FITC 2 1:200 Alexa F :50 FITC 4 1:50 Alexa F488 Efter efterfikseringen ønskes epitoperne demaskerede, således at den immunfluoroscerende farvning kan påbegyndes. Objektglassene varmebehandles i T-EG buffer i 10 min. i mikrobølgeovn sat på boiling program og afkøler efterfølgende 10 min. i bufferen. Afslutningsvis skylles glassene i rindende vand i 5 min. Til blokering af uønsket peroxidaseaktivitet anvendes EnVision FLE Peroxidase-Blocking reagent, der inkuberes i 5 min. Efter inkubering skylles med EnVision Wash Buffer. Der fremstilles monoklonal mouse anti-human CD3 klon PS1, fortyndet henholdsvis i 1:200 (prøve nr. 1 og 2) og 1:50 (prøve nr. 3 og 4) v/v med anti-body Diluent. Disse inkubere på respektive objektglas i 30 min. Herefter skylles objektglassene i InVision Wash Buffer. Efter skylning tilføres 150 µl hhv. Polyclonal Rabbit Anti-Mouse FITC (prøve nr. 1 og 3) og goat antimouse Alexa Fluor F488 (prøve nr. 2 og 4), begge fortyndet 1:200 i EnVision FLE Anti-Body Diluent, fra DAKO, til objektglassene (se figur 6). Dette sker ved mørke. Der inkuberes i 30 min. i mørke. Herefter skylles objektglassene af 2 omgange i InVision Wash Buffer ad 5 min. Objektglassene dehydreres i hhv. 70, 80 og 90 % ethanol. Hvert kar 2 min. Herefter lufttørres objektglassene i mørke. Disse monteres med dækglas og Vectasheild Mounting Medium for fluorescense med DAPI H-120 fra vector. Opbevares på køl og mørkt til mikroskopering. Forsøg 4. Efterfiksering og demaskeringsforsøg til flowcytometrisk analyse på BAL-væske Der fremstilles 8 falconrør indeholdende cellesuspension fra samme prøve (se tabel 7) µl alkoholfikseret prøvemateriale afpippeteres i hvert falconrør. Der tilsættes 2000 µl PBS til hvert rør, der centrifugeres i 5 min. Ved 1600 rpm. Supernantanten dekanteres, således at der er 80 µl cellesuspension tilbage i falconrørerne. 4 prøver (prøve nr. 1-4) tilsættes 100 µl 4 % NBF, mikses og fikseres i 2 min. Herefter skylles cellerne i 2000 µl PBS i hvert falconrør og centrifugeres i 5 min. ved 21

22 1600 rpm. Supernantanten dekanteres, således at der er 80 µl cellesuspension tilbage i falconrørerne. Resterende 4 prøver (prøve nr. 5-8) tilsættes ikke NBF. Der tilføjes der 100 µl T-EG buffer til udvalgte falconrør (prøve nr. 2-4 og 6-8), der varmebehandles ved 99 C, i henholdsvis 30, 90 og 180 sek. Tabel 7. Oversigt over prøver i forsøg 4. Fikserings tid i NBF og demaskeringsstider Prøve nr. Fiksering i 4 % demaskering i NBF sek. 1 2 min min min min Efter endt demaskering i T-EG buffer, afkøles falconrørerne og alle rør skylles med 2000 µl PBS, centrifugers i 5 minutter ved 1600 rpm og supernanten dekanteres, efterladende 80 µl cellesuspension. Herefter kan immunfarvning begyndes. Dette gøres ved indirekte teknik. Ved den indirekte teknik tilsættes 100 µl monoklonal mouse anti-human CD3 klon PS1, fortyndet 1:50 v/v. Dette inkubere i 30 min., hvorefter cellesuspensionen indeholdende antistoffer skylles med 2000 µl PBS, centrifugeres i 5 min. ved 1600 rpm. Supernantanten dekanteres efterladende 80 µl cellesuspension. Efterfølgende tilsættes 1 µl Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 falconrøret, dette inkubere i 30 minutter, hvorefter falconrøret skylles med 2000 µl PBS, centrifugeres i 5 min ved 1600 rpm. Supernantanten dekanteres efterladende 80 µl cellesuspension. 500 µl PBS tilsættes, miks og opbevares mørkt til senere aflæsning på flowcytometer. Sikring af kvalitet BAL-væsker afhentes alkoholfikseret og ufikseret straks efter prøvetagning. Ved afhentning er alkoholfikseret BAL-væske fikseret af personale på lunge medicinsk afdeling. Alkoholfikseret prøvemateriale analyseres cytospinpræpareret hurtigst muligt og senest dagen efter modtagelse. 22

23 Ufikseret prøvemateriale analyseres senest 2 timer efter modtagelse og opbevares indtil analyse på køl, ved 6 C. Ved metodesammenligning medtages ved immuncytokemisk analyse en negativ og en positiv kontrol. Kontrolmaterialet består af forskellige væv i en standard multiblok, skåret 1 µm tykke og påsat glas. På glasset er væv fra appendix, tonsil, pancreas, spytkirtel, lever, binyre og nyre. Alt væv er fra raske personer. Afparaffinerede kontroller præanalyseres som rutinemæssige prøver. Positiv kontrol analyseres rutinemæssigt, med påføring af anti CD3, mens negative kontrol analyseres rutinemæssigt, men der undlades primært antistof. I den positive kontrol skal ses en tydelig farvning af T-celler. I den negative kontrol skal der ikke kunne ses farvning. Ved metodesammenligning medtages ved flowcytometrisk analyse negativ kontrol i form af prøvemateriale, hvori der ikke er tilsat fluorokromer. Ved opstart af apparatur foretages en kalibrering, ved at foretage analyse af beads. Denne kontrol sikre flowcytometerets akkuratesse. Ved efterfikserings- og demaskeringsforsøg medtages ved forsøg 1,efterfiksering af alkoholfikseret cytospinpræpareret BAL-væske, en negativ kontrol farvning af alkoholfikseret cytospinpræpareret BAL-væske, uden efterfiksering. Den negative kontrol påføres ikke anti CD3. Forsøg 2, efterfiksering- og demaskeringsforsøg til flowcytometrisk analyse på alkoholfikseret BAL-væske, udføres to negative kontroller, der begge efterfikseres i 4 % formalin i 2 minutter. Første negative kontrol påføres ikke primær anti CD3, men tilsættes 10 µl rabbit anti-mus FITC. Anden negative kontrol tilsættes ikke fluorokrom konjugeret antistof. Kontroller varmebehandles ikke. Forsøg 3, kvalitetsforsøg på cytospinspræpareret BAL-væske af FITC og Alexa Fluor 488, medtages en negativ kontrol. Der påføres ikke primært antistof, men 150 µl hhv. Polyclonal Rabbit Anti-Mouse FITC. Forsøg 4, efterfiksering og demaskeringsforsøg til flowcytometrisk analyse på BAL-væske, medtages en negativ kontrol. Kontrollen efterfikseres i 4 % NBF i 2 minutter og der tilsættes ikke primært antistof, men tilsættes 1 µl Goat anti-mouse Alexa Fluor 488. Behandling af resultater. Til statistik beregning er benyttet Microsoft Office Excel 2007, samt formler og tabeller fra Johansen s Basal sundhedsvidenskabelig statistik begreber og metoder [21]. Til sammenligning af analyse metoder benyttes Wilcoxons test for parforskelle, med en p-værdi på 0,05. Der opstilles en tosidig hypotese. H 0 der siger, at der ikke er forskel af resultaterne, på de to analysemetoder og H 1 der siger at der er forskel på resultaterne af de to analysemetoder. Derudover foretages en korrelationsanalyse samt beregning af korrelationskoefficienten (Pearsons r). Der er ikke foretaget statiske beregninger på forsøg med demaskering. 23

24 Resultater Metodesammenligning Sammenligning af resultater fra 12 prøver foretaget rutinemæssigt vha. Immuncytokemisk (ICC) på alkoholfikseret cytospinpræparerede BAL-væsker med analyse på 200 talte celler og flowcytometri (FCM) på ufikseret BAL-væske, analyse på talte celler for CD3 + og CD20 + celler ses af tabel 8. Derudover ses den procentvisefordeling af fordelingen CD3 + af henholdsvis CD4 + og CD8 +, samt ratioen af CD4 + og CD8 +. I alt 3 prøver er kasseret på grund af et højt indhold af mucin og et meget lille antal celler ved immuncytokemisk analyse. Det var ikke muligt at gate disse tre prøver ved flowcytometrisk analyse. Resultater viser en stor variation i CD3 + celler samt i CD4 + /CD8 + ratioen, som ligger mellem 1/1,4 og 4,7/1 for prøver analyseret med ICC og 1/1,8 og 5,1/1 for prøver analyseret med FCM. Der findes 1 % CD20 + celler med ICC og 0,7 % med FCM. Tabel 8. Viser behandlede data med den procentvise fordeling af lymfocytter for henholdsvis Immuncytokemisk (ICC) analyse på 200 talte celler og flowcytometrisk (FCM) analyse på talte celler. Prøve 7, 10 og 11 er kasseret pga. musin. ICC Prøve nr. CD20 + CD3 + CD4 + CD8 + ratio CD20 + CD3 + CD4 + CD8 + ratio CD4 + /CD8 + CD4 + /CD ,0 9,5 64,5 18,0 3,6/1 0,1 10,5 61,9 34,4 1,8/1 2 0,0 3,0 34,5 17,0 2/1 0,5 8,0 63,2 28,8 2,2/1 3 1,0 18,0 44,5 24,5 1,8/1 0,4 14,1 71,1 25,4 2,8/1 4 1,0 54,5 87,5 18,5 4,7/1 0,1 43,8 80,7 16,0 5,1/1 5 0,5 7,5 64,0 17,5 3,7/1 0,1 8,4 76,0 18,2 4,2/1 6 0,5 10,0 56,0 24,5 2,3/1 0,0 7,0 73,1 23,7 3,1/1 7 KASSERET 8 0,0 6,0 30,0 42,5 1/1,4 0,0 0,6 32,2 59,3 1/1,8 9 0, ,5 28 2,6/1 0,0 10,2 62,2 28,7 2,2/1 10 KASSERET 11 KASSERET 12 1,0 12,5 56,5 35,5 1,6/1 0,7 12,3 57,5 35,0 1,6/1 FCM 24

25 Korrelationsplottet af CD20 + celler (se figur 4) viser en hældning på 0,77, en skæring med y aksen på +0,28 og korrelationskoefficientern r på 0,42. Wilcoxons test for parforskelle viser ikke signifikant forskel på de to analysemetoder. % Immuncytokemi 1 0,5 Korrelationsplot CD20 y=x 0 0 0,5 1 % Flowcytometrisk Figur 4. /Y plot, hvor den procentvise fordeling af prøver analyseret vha. ICC, er afsat som funktion af den procentvise fordeling af CD20 i prøver analyseret vha. FCM. Linjens ligning er y = 0,766x + 0,282med korrelationskoefficienten, r= 0,424. Identitetslinjen, hvor x=y er indtegnet. Korrelationsplottet af CD3 + celler(se figur 5) viser en hældning på 1,23, en skæring med y aksen på - 0,96 og korrelationskoefficienten r = 0,97. Wilcoxons test for parforskelle viser ikke signifikant forskel på de to analysemetoder. 60 Korrelationsplot CD3 y=x % Immuncytokemi % Flowcytometri Figur 5. /Y plot, hvor den procentvise fordeling af CD3 i prøver, analyseret vha. ICC, afsat som funktion af den procentvise fordeling af CD3 i prøver analyseret vha. FCM. Linjens ligning er y=1,233-0,963 med korrelationskoefficienten, r=0,974. Identitetslinjen, hvor x=y er indtegnet. 25

26 Korrelationsplottet af CD4 + (se figur 6)celler viser en hældning på 0,82, en skæring med y aksen på +3,78 og korrelationskoefficienten r = 0,641. Wilcoxons test for parforskelle viser ikke signifikant forskel på de to analysemetoder. 100 Korrelationsplot CD4 y=x % Immuncytokemi % Flowcytometrisk Figur 6. /Y plot, hvor den procentvise fordeling af CD4 + prøver analyseret vha. ICC, er afsat som funktion af den procentvise fordeling af CD4 + i prøver analyseret vha. FCM. Linjens ligning er y = 0,823x + 3,775 med korrelationskoefficienten, r=0,641. Identitetslinjen, hvor x=y er indtegnet. Korrelationsplottet af CD8 + (se figur 7)celler viser en hældning på 0,562, en skæring med y aksen på +8,404 og korrelationskoefficienten r = 0,80. Wilcoxons test for parforskelle viser ikke signifikant forskel på de to analysemetoder. 80 Korrelationsplot CD8 y=x % immuncytokemi % flowcytometrisk Figur 7. /Y plot, hvor den procentvise fordeling prøver analyseret vha. ICC, er afsat som funktion af den procentvise fordeling af CD8 i prøver analyseret vha. FCM. Linjens ligning er y = 0,562x + 8,403 med korrelationskoefficienten, r= 0,803. Identitetslinjen, hvor x=y er indtegnet. 26

EnVision FLEX, High ph, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)

EnVision FLEX, High ph, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) EnVision FLEX, High ph, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) Kode K8010 5. udgave Sættet indeholder reagenser til 400 600 analyser. Til Dako Autostainer/Autostainer Plus. Valgfri reagenser: Kode Produktnavn

Læs mere

IHC påvisning af CD3 og F4/80 antigen i CIA musepotevæv

IHC påvisning af CD3 og F4/80 antigen i CIA musepotevæv IHC påvisning af CD3 og F4/80 antigen i CIA musepotevæv Bachelorprojekt af Mikkel Malik Høegh Nygaard Nielsen Kilde Billede fra laboratoriet på Novo Nordisk Bioanalytikeruddannelsen CVU Øresund Nordisk

Læs mere

Appendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning. Faktor mellem total antal celler og antal celler der ønskes udsås:

Appendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning. Faktor mellem total antal celler og antal celler der ønskes udsås: Appendix Appendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning Fortyndingsfaktor: Efter trypsinering og centrifugering af celler fra cellestokken, opblandes cellerne i 1 ml medie. For at lave en

Læs mere

Herlev og Gentofte Hospital. The influence of different fixatives and preparation methods on morphology, immunohistochemistry and molecular analyses

Herlev og Gentofte Hospital. The influence of different fixatives and preparation methods on morphology, immunohistochemistry and molecular analyses Herlev og Gentofte Hospital The influence of different fixatives and preparation methods on morphology, immunohistochemistry and molecular analyses Problem Rutinemæssigt bruges 10% neutralbuffet formalin

Læs mere

EnVision G/2 dobbeltfarvning med antistofferne CD31 og DBA44.

EnVision G/2 dobbeltfarvning med antistofferne CD31 og DBA44. EnVision G/2 dobbeltfarvning med antistofferne CD31 og DBA44. Bachelorprojekt Projektperiode: November 2008 januar 2009 Forfatter: Winni Pedersen CPR nr. 230362 Bivejleder: Lone Bojesen, Herlev patologi

Læs mere

Vestsjællands Amtssygehus Klinisk Biokemisk Afdeling Centralsygehuset i Slagelse

Vestsjællands Amtssygehus Klinisk Biokemisk Afdeling Centralsygehuset i Slagelse Bilag D Vestsjællands Amtssygehus Klinisk Biokemisk Afdeling Centralsygehuset i Slagelse INTERN RAPPORT Afprøvning af Immunofixation af M-komponenter (Bestemmelse af immunoglobulin-klasse og -type) på

Læs mere

Kvalitetssikring af flowcytometri og komponenter bestemt med flowcytometri - Udsendelse 5 - December 2007 - Program 3708 og 3709 -

Kvalitetssikring af flowcytometri og komponenter bestemt med flowcytometri - Udsendelse 5 - December 2007 - Program 3708 og 3709 - Kvalitetssikring af og komponenter bestemt med - - December - Program og 9 - Opgørelse for måling af prøverne med beads (Prøve A & Prøve B) Generelle metodeoplysninger Jeres maskine er BDBiosciences FACSCalibur

Læs mere

FluoroSpheres Kodenr. K0110

FluoroSpheres Kodenr. K0110 FluoroSpheres Kodenr. K0110 6. udgave Kalibreringsperler til daglig overvågning af flow-cytometeret. Kittet indeholder reagenser til 40 kalibreringer. (105797-004) SSK0110CE_02/DK/2015.12 p. 1/9 Indholdsfortegnelse

Læs mere

Øvelse med tarmkræftceller i kultur.

Øvelse med tarmkræftceller i kultur. Øvelse med tarmkræftceller i kultur. Baggrund Hver 3. dansker bliver ramt af kræft, inden de er blevet 75 år. Tyktarmskræft er den 3. hyppigste kræftform hos både mænd og kvinder, hvor henholdsvis 7.3

Læs mere

EnVision FLEX+, Mouse, High ph, (Link)

EnVision FLEX+, Mouse, High ph, (Link) EnVision FLEX+, Mouse, High ph, (Link) Kode K8002 5. udgave Sættet indeholder reagenser til 400 600 analyser. Til Autostainer Link-instrumenter. Valgfri reagenser Kode Produktnavn Analyser K8004 EnVision

Læs mere

Skriftlig reeksamen august 2017

Skriftlig reeksamen august 2017 Studienummer: 1/10 Skriftlig reeksamen august 2017 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet Medicin og medicin med industriel specialisering 2. semester Eksamensdato:

Læs mere

Dako REAL Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse

Dako REAL Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse Dako REAL Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse Kode K5001 6. udgave Til brug sammen med automatiske Dako instrumenter til immunfarvning. Sættet indeholder reagenser til 500 analyser. (129655-001)

Læs mere

EnVision FLEX+, Mouse, High ph, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)

EnVision FLEX+, Mouse, High ph, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) EnVision FLEX+, Mouse, High ph, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) Kode K8012 6. udgave Sættet indeholder reagenser til 400 600 analyser. Til Dako Autostainer/Autostainer Plus. Valgfri reagenser: Kode

Læs mere

DNA origami øvelse. Introduktion. DNA origami øvelse 3 timer 2018

DNA origami øvelse. Introduktion. DNA origami øvelse 3 timer 2018 DNA origami øvelse Introduktion I denne øvelse bruger vi DNA origami teknikken til at samle en tavle af DNA med dimensioner på 70 nm x 100 nm. Tavlen dannes af et langt enkeltstrenget DNA molekyle, der

Læs mere

DNA origami øvelse DNA origami øvelse

DNA origami øvelse DNA origami øvelse DNA origami øvelse Introduktion I denne øvelse bruger vi DNA origami teknikken til at samle en tavle af DNA med dimensioner på 70 nm x 100 nm. Tavlen dannes af et langt enkeltstrenget DNA molekyle, der

Læs mere

Shandon Cytospin Collection Fluid Shandon Instant Eosin, Alcoholic Shandon Instant Eosin, Aqueous. Thermo ELECTRON CORPORATION

Shandon Cytospin Collection Fluid Shandon Instant Eosin, Alcoholic Shandon Instant Eosin, Aqueous. Thermo ELECTRON CORPORATION Shandon Cytospin Collection Fluid Shandon Instant Eosin, Alcoholic Shandon Instant Eosin, Aqueous Thermo ELECTRON CORPORATION Anatomical Pathology USA Clinical Diagnostics 171 Industry Drive Pittsburgh,

Læs mere

ELISA Immuno Explorer TM Kit

ELISA Immuno Explorer TM Kit - 1 - ELISA Immuno Explorer TM Kit Katalog nummer 166-2400EDU Til læreren Dette kit er lavet for at lette og illustrere immunologiundervisningen og kan give en øget forståelse af antigen-antistof interaktionen,

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA sekvens,

Læs mere

HTERT ANTISTOF TIL ICC PÅ URINCYTOLOGISKE PRÆPARATER

HTERT ANTISTOF TIL ICC PÅ URINCYTOLOGISKE PRÆPARATER HTERT ANTISTOF TIL ICC PÅ URINCYTOLOGISKE PRÆPARATER Cytologisk Årsmøde 1. marts 2019 Uddannelsesansvarlig bioanalytikerunderviser Marianne Schou Martiny Patologi, Aarhus Universitetshospital URINVEJSCYTOLOGI

Læs mere

Fra Bekendtgørelse om prøver og eksamen i erhvervsrettede uddannelser

Fra Bekendtgørelse om prøver og eksamen i erhvervsrettede uddannelser Sammenligning af FISH og Duo-CISH Fluorescerende og chromogen in situ hybridisering til detektion af translokationer i lymfomer ved brug af en break-apart probe Bachelorprojekt efterår 2009 Professionshøjskolen

Læs mere

Sommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar

Sommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar 1 Sommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar Titel på kursus: Uddannelse: Semester: ksamensdato: Tid: Bedømmelsesform Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin

Læs mere

Dako REAL EnVision Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse

Dako REAL EnVision Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse Dako REAL EnVision Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse Kode K5007 3. udgave Til brug sammen med automatiske Dako instrumenter til immunfarvning. Sættet indeholder reagenser til 500 analyser.

Læs mere

Biotechnology Explorer ELISA Immuno Explorer Kit. Instruktionsmanual

Biotechnology Explorer ELISA Immuno Explorer Kit. Instruktionsmanual Biotechnology Explorer ELISA Immuno Explorer Kit Instruktionsmanual Katalognummer 166-2400EDU explorer.bio-rad.com Delene i dette kit er sendt i separate æsker. Opbevar posen med reagenser i køleskab indefor

Læs mere

Atomic force mikroskopi på blodceller

Atomic force mikroskopi på blodceller 1 Atomic force mikroskopi på blodceller Problemstilling: Problemstillingen eleven bliver sat overfor er: Hvad er atomic force mikroskopi, og hvordan kan det bruges til at studere blodceller på nanometerskala?

Læs mere

PNA ISH Detection Kit Kodenr. K5201

PNA ISH Detection Kit Kodenr. K5201 PNA ISH Detection Kit Kodenr. K5201 9. udgave Til in situ hybridisering ved brug af fluoresceinkonjugerede PNA-prober. Sættet indeholder reagenser til mindst 40 tests*. * Antallet af tests er baseret på

Læs mere

EnVision DuoFLEX Doublestain System, (Link)

EnVision DuoFLEX Doublestain System, (Link) EnVision DuoFLEX Doublestain System, (Link) Kode SK110 Udgave 06/15 Dette sæt indeholder reagenser til 100-150 analyser. Til Autostainer Link instrumenter. (127841-001) P04070DK_01/SK110/2015.06 s. 1/11

Læs mere

Studieplan Bioanalyse Semester 1

Studieplan Bioanalyse Semester 1 OMRÅDET FOR SUNDHEDSUDDANNELSER Studieplan Bioanalyse Semester 1 Bioanalytikeruddannelsen i Odense Efterår 2017 Semester 1 Indhold 1. Fagets fokus og emner... 3 2. Lektionsplan... 4 3. Litteraturliste:...

Læs mere

Androstenon-indol-skatol-protokol.

Androstenon-indol-skatol-protokol. Androstenon-indol-skatol-protokol. Indholdsfortegnelse: 1. Formål side 2 2. Teori side 2 2. Prøvebehandling side 2 3. Materialer side 2 3.1 Apparatur side 2 3.2 Kemikalier side 3 3.3 Reagenser side 3 4.

Læs mere

Forårseksamen Titel på kursus: Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering

Forårseksamen Titel på kursus: Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering Studienummer: 1/10 Forårseksamen 2014 Titel på kursus: Det hæmatologiske system og immunsystemet Uddannelse: Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering Semester: 2. semester Eksamensdato:

Læs mere

ELISA metoden, til bestemmelse af den genetiske profil i høns.

ELISA metoden, til bestemmelse af den genetiske profil i høns. ELISA metoden, til bestemmelse af den genetiske profil i høns. 1 Formål: Formålet med denne øvelse er at demonstrere brugen af antistoffer i diagnostisk eller forskningsøjemed. Dvs. til at undersøge om

Læs mere

DNA origami øvelse 2013. DNA origami øvelse

DNA origami øvelse 2013. DNA origami øvelse DNA origami øvelse Introduktion I denne øvelse bruger vi DNA origami teknikken til at samle en tavle af DNA med dimensioner på 70 nm x 100 nm. Tavlen dannes af et langt enkeltstrenget DNA molekyle, der

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Forsøgsvejledning Navn: Side 1 af 7 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Side 1 af 8 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA

Læs mere

Mælkesyrebakterier og holdbarhed

Mælkesyrebakterier og holdbarhed Mælkesyrebakterier og holdbarhed Formål Formålet med denne øvelse er at undersøge mælkesyrebakteriers og probiotikas evne til at øge holdbarheden af kød ved at: 1. Undersøge forskellen på bakterieantal

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Side 1 af 8 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA-sekvens,

Læs mere

Immunhistokemi kombineret med special farvninger

Immunhistokemi kombineret med special farvninger BACHELOR 2015 Immunhistokemi kombineret med special farvninger - Udført med CD3, Alcian Blue, PAS og DPAS med henblik på diagnosticering af MB Sjögrens Syndrom Maria Villadsen Studienummer 60080725 Vejleder

Læs mere

Som substrat i forsøgene anvender vi para nitrophenylfosfat, der vha. enzymet omdannes til paranitrofenol

Som substrat i forsøgene anvender vi para nitrophenylfosfat, der vha. enzymet omdannes til paranitrofenol Enzymkinetik Introduktion I disse forsøg skal I arbejde med enzymet alkalisk fosfatase. Fosfataser er meget almindelige i levende organismer og er enzymer med relativt bred substrat specificitet. De katalyserer

Læs mere

EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis)

EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis) EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis) Code GV800 2. udgave Sættet indeholder reagenser til 600 analyser. Til Dako Omnis-instrumenter. Valgfri reagenser: Kode Produktnavn Analyser GV804 GV805 EnVision FLEX

Læs mere

Månedens case Oktober 2012

Månedens case Oktober 2012 Månedens case Oktober 2012 B R O N K O A L V E O L Æ R L A V A G E ( B A L ) U D L Å N T A F : D O R T H E E J E R S B O A F D E L I N G F O R K L I N I S K P A T O L O G I, O D E N S E U N I V E R S I

Læs mere

Kemiøvelse 2 1. Puffere

Kemiøvelse 2 1. Puffere Kemiøvelse 2 1 Puffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt andet

Læs mere

Isolering af DNA fra løg

Isolering af DNA fra løg Isolering af DNA fra løg Formål: At afprøve en metode til isolering af DNA fra et levende væv. At anvende enzymer.. Indledning: Isolering af DNA fra celler er første trin i mange molekylærbiologiske undersøgelser.

Læs mere

8.1 Experimental setup

8.1 Experimental setup 8 Appendix Contents 8 Appendix... 62 8.1 Experimental setup... 63 8.2 Raw data... 65 8.2.1 Pilot experiment: Maturation with LPS... 65 8.2.2 Pilot experiment: Isolation kits, maturation with LPS and CD11c

Læs mere

Studienummer: MeDIS Exam 2015. Husk at opgive studienummer ikke navn og cpr.nr. på alle ark, der skal medtages i bedømmelsen

Studienummer: MeDIS Exam 2015. Husk at opgive studienummer ikke navn og cpr.nr. på alle ark, der skal medtages i bedømmelsen MeDIS Exam 2015 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Videregående biokemi og medicinudvikling Bachelor i Medis 5. semester Eksamensdato: 26-01-2015 Tid: kl. 09.00-11.00 Bedømmelsesform 7-trin Vigtige

Læs mere

Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer. Sammenhæng. Formål. Arbejdsform: Evaluering

Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer. Sammenhæng. Formål. Arbejdsform: Evaluering 1 Puffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt andet syrebaseteori

Læs mere

Ekstraktion af proteiner fra kød, æg og mælkeprodukter

Ekstraktion af proteiner fra kød, æg og mælkeprodukter Ekstraktion af proteiner fra kød, æg og mælkeprodukter Udarbejdet af Lektor Lars Haastrup Pedersen, forskningsadjunkt Claus Gyrup Nielsen, Phd. Anders Bundgaard Sørensen, Phd. Malene Bredal Brohus samt

Læs mere

Thermo. Shandon Rapid-Chrome Frozen Section Staining Kit ELECTRON CORPORATION. Rev. 3, 10/03 P/N 238644

Thermo. Shandon Rapid-Chrome Frozen Section Staining Kit ELECTRON CORPORATION. Rev. 3, 10/03 P/N 238644 Shandon Rapid-Chrome Frozen Section Staining Kit Thermo ELECTRON CORPORATION Anatomical Pathology USA Clinical Diagnostics 171 Industry Drive Pittsburgh, PA 15275, USA Tel: 1-800-547-7429 +1 412 788 1133

Læs mere

Kemiøvelse 2 C2.1. Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer

Kemiøvelse 2 C2.1. Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer Kemiøvelse 2 C2.1 Puffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Side 1 af 8 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA-sekvens,

Læs mere

Thermo. Shandon RAPID-CHROME Iron Stain and RAPID-CHROME Nuclear Fast Red Counterstain ELECTRON CORPORATION. Rev. 5, 09/03 P/N 238997

Thermo. Shandon RAPID-CHROME Iron Stain and RAPID-CHROME Nuclear Fast Red Counterstain ELECTRON CORPORATION. Rev. 5, 09/03 P/N 238997 Shandon RAPID-CHROME Iron Stain and RAPID-CHROME Nuclear Fast Red Counterstain Thermo ELECTRON CORPORATION Anatomical Pathology USA Clinical Diagnostics 171 Industry Drive Pittsburgh, PA 15275, USA Tel:

Læs mere

Til identifikation og tælling af CD34+ celler i humane, mobiliserede blodprøver og blodprøver taget ved leukaferese.

Til identifikation og tælling af CD34+ celler i humane, mobiliserede blodprøver og blodprøver taget ved leukaferese. CD34Count Kit Kodenr. K2370 2. udgave Til identifikation og tælling af CD34+ celler i humane, mobiliserede blodprøver og blodprøver taget ved leukaferese. Sættet indeholder reagenser til 50 dobbelte tests.

Læs mere

Protokol for genetisk bestemmelse af ABO blodtyper

Protokol for genetisk bestemmelse af ABO blodtyper Page1 Udarbejdet i samarbejde mellem: Kåre Lehmann, Annabeth Høgh Petersen, Anne Rusborg Nygaard og Jørn M. Clausen Page2 VIGTIGT: SKIFT PIPETTE SPIDSER/TIPS EFTER HVER GANG!! Så undgår du at forurene

Læs mere

Biotechnology Explorer

Biotechnology Explorer Biotechnology Explorer Oprensning af genomisk DNA fra plantemateriale Manual Katalog nr. 166-5005EDU explorer.bio-rad.com Oversat og bearbejdet af Birgit Sandermann Justesen, Nærum Gymnasium, februar 2009

Læs mere

DNA origami øvelse DNA origami øvelse

DNA origami øvelse DNA origami øvelse DNA origami øvelse Introduktion I denne øvelse bruger vi DNA origami teknikken til at samle en tavle af DNA med dimensioner på 70 nm x 100 nm. Tavlen dannes af et langt enkeltstrenget DNA molekyle, der

Læs mere

PROFESSIONSBACHELORPROJEKT Bioanalytikeruddannelsen UCL i Odense. Maria Erlinda Haugaard Gozun Studienummer: 32110505 Hold: SB 510 11-12-2013

PROFESSIONSBACHELORPROJEKT Bioanalytikeruddannelsen UCL i Odense. Maria Erlinda Haugaard Gozun Studienummer: 32110505 Hold: SB 510 11-12-2013 PROFESSIONSBACHELORPROJEKT Bioanalytikeruddannelsen UCL i Odense Optimering af FNA-materiale til forbedret subklassificering af lungecancer Optimization of FNA material for improvement of subclassification

Læs mere

2. Immunhistokemisk teknik

2. Immunhistokemisk teknik 2. Immunhistokemisk teknik Af Ole Nielsen 2.1 INDLEDNING... 11 2.2 DEFINITIONER... 11 2.2.1 Antigener... 11 2.2.2 Antistoffer... 11 2.3 PRÆPARATION: PARAFFINSNIT... 13 2.3.1 Fiksering...143 2.3.2 Afkalkning...

Læs mere

Præparerings- og screeningsteknikkens fordele og ulemper/fejlkilder

Præparerings- og screeningsteknikkens fordele og ulemper/fejlkilder TriPath imaging BD SurePath FocalPoint Guided Screening Imaging System Cervixcytologi (tyndtlagsprøver) Præparerings- og screeningsteknikkens fordele og ulemper/fejlkilder Ved cytobioanalytikerunderviser

Læs mere

Optimering af detektionen til diagnosticering. ved anvendelse af antistofferne HMB45 og Melan A

Optimering af detektionen til diagnosticering. ved anvendelse af antistofferne HMB45 og Melan A 20-12-2016 Optimering af detektionen til diagnosticering af maligne melanomer ved anvendelse af antistofferne HMB45 og Melan A Optimization of the detection to the diagnosis of malignant melanoma by use

Læs mere

Forårseksamen Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering

Forårseksamen Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering 1 Forårseksamen 2015 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering 2. semester Eksamensdato: 10. april

Læs mere

ELISA Kvantitativ bestemmelse af human IgA i brystmælk Elevvejledning.

ELISA Kvantitativ bestemmelse af human IgA i brystmælk Elevvejledning. ELISA Kvantitativ bestemmelse af human IgA i brystmælk Elevvejledning. Professionshøjskolen University College Nordjyland Laborantafdelingen 2012 Side 1 Indledning En kvinde føder og bliver mor til sit

Læs mere

Brugsvejledning for 7827.10 dialyseslange

Brugsvejledning for 7827.10 dialyseslange Brugsvejledning for 7827.10 dialyseslange 14.06.07 Aa 7827.10 1. Præsentation Dialyseslangen er 10 m lang og skal klippes i passende stykker og blødgøres med vand for at udføre forsøgene med osmose og

Læs mere

Kvalitetssikring af flowcytometri og komponenter bestemt med flowcytometri - Udsendelse 2 - Marts Program 3708 og

Kvalitetssikring af flowcytometri og komponenter bestemt med flowcytometri - Udsendelse 2 - Marts Program 3708 og Kvalitetssikring af og komponenter bestemt med - - Marts 9 - Program og 9 - Opgørelse for måling af prøverne med beads (Prøve A & Prøve B) Generelle metodeoplysninger Jeres maskine er BDBiosciences FACSCanto

Læs mere

Fremstilling af ferrofluids

Fremstilling af ferrofluids Fremstilling af ferrofluids Eksperiment 1: Fremstilling af ferrofluids - Elevvejledning Formål I dette eksperiment skal du fremstille nanopartikler af magnetit og bruge dem til at lave en magnetisk væske,

Læs mere

Dialyse og carbamidanalyse

Dialyse og carbamidanalyse C.12.1 Dialyse og carbamidanalyse Formål: Ved dialyse af en vandig opløsning af proteinet albumin og det lavmolekylære stof carbamid trænes forskellige laboratorieprocedurer (afpipettering, tidtagning,

Læs mere

ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort

ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort GELER INDEHOLDENDE MONOKLONALE REAGENSER AF MURIN ELLER HUMAN OPRINDELSE ABO1, ABO2, RH1, KEL1 Ag BESTEMMELSE IVD Alle de af Bio-Rad producerede

Læs mere

Analyse af proteiner Øvelsesvejledning

Analyse af proteiner Øvelsesvejledning Center for Undervisningsmidler, afdeling København Analyse af proteiner Øvelsesvejledning Formål At separere og analysere proteiner i almindelige fødevarer ved brug af gelelektroforese. Teori Alle dele

Læs mere

Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve

Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve Til isolering af genomisk DNA fra indsamlingssætserierne Oragene - og ORAcollect. Du kan finde flere sprog og protokoller på vores webside

Læs mere

Metodevalidering af High Sensitive C- Reaktive Protein

Metodevalidering af High Sensitive C- Reaktive Protein 2013/- 2014 Metodevalidering af High Sensitive C- Reaktive Protein BACHELOROPGAVE UGE 41/2013 TIL UGE 01/2014 PH METROPOL KØBENHAVN BIOANALYTIKER UDDANNELSE HEIDI RAVN FØDT: 090277-1972 HOVEDVEJLEDER:

Læs mere

Bilag til Kvantitativ bestemmelse af glucose

Bilag til Kvantitativ bestemmelse af glucose Bilag til Kvantitativ bestemmelse af glucose Det synlige formål med øvelsen er at lære, hvorledes man helt præcist kan bestemme små mængder af glucose i en vandig opløsning ved hjælp af målepipetter, spektrofotometer

Læs mere

Validering af gramfarvning af bakterier

Validering af gramfarvning af bakterier Valideringsrapport Gramfarvning af bakterier Formålet med valideringen At dokumentere at KMA, OUHs kan anvende gramfarvning til at identificere grampositive og negative bakterier, samt karakterisere morfologi/lejring.

Læs mere

Skriftlig reeksamen august 2017

Skriftlig reeksamen august 2017 Studienummer: 1/10 Skriftlig reeksamen august 2017 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet Medicin og medicin med industriel specialisering 2. semester Eksamensdato:

Læs mere

CYTOLOGISK TEKNIK. Sebastian Frische, Anatomisk Institut

CYTOLOGISK TEKNIK. Sebastian Frische, Anatomisk Institut CYTOLOGISK TEKNIK Sebastian Frische, Anatomisk Institut VÆV BESTÅR AF: Vand Proteiner (i cytoplasma, i organeller, i membraner) Lipider (lipiddråber, membraner) Kulhydrater (glykogengranula, glykosyleringer)

Læs mere

2UJDQLVNHýVWRIJUXSSHUýLýSODQWHIU

2UJDQLVNHýVWRIJUXSSHUýLýSODQWHIU 3ODQWHI\VLRORJL,QWURGXNWLRQ 2UJDQLVNHýVWRIJUXSSHUýLýSODQWHIU I et plantefrø findes bl.a. anlægget til en ny plante i form af det såkaldte kimanlæg. Dette anlæg skal kunne udvikle sig til en ny plante under

Læs mere

- og in vitro kontrol af affinitet til MUC1 antigen i forhold til 111 In-anti-TNP-DTPA

- og in vitro kontrol af affinitet til MUC1 antigen i forhold til 111 In-anti-TNP-DTPA 7. semester, Bachelor projekt Bioanalytikeruddannelsen København 111 In mærkning af anti-muc1-dtpa - og in vitro kontrol af affinitet til MUC1 antigen i forhold til 111 In-anti-TNP-DTPA Afleveret: Fredag

Læs mere

Spørgsmål Svar # 2. af d vedrørende. Offentligt udbud vedr. sag nr. MT2008/1042

Spørgsmål Svar # 2. af d vedrørende. Offentligt udbud vedr. sag nr. MT2008/1042 Udbud af automatiseret til håndtering af immunhisto- og cytokemiske analyser på 1 Spørgsmål Svar # 2 af d. 03.03.2009 vedrørende Offentligt udbud vedr. sag nr. MT2008/1042 Udbud af automatiseret til håndtering

Læs mere

En forsker har lavet et cdna insert vha PCR og har anvendt det følgende primer sæt, som producerer hele den åbne læseramme af cdna et:

En forsker har lavet et cdna insert vha PCR og har anvendt det følgende primer sæt, som producerer hele den åbne læseramme af cdna et: F2011-Opgave 1. En forsker har lavet et cdna insert vha PCR og har anvendt det følgende primer sæt, som producerer hele den åbne læseramme af cdna et: Forward primer: 5 CC ATG GGT ATG AAG CTT TGC AGC CTT

Læs mere

Bachelorprojekt Andelen af højtitret trombocytportioner ved anvendelsen af EU - Rådets anbefaling. Indledning... 3. Formål... 3. Mål...

Bachelorprojekt Andelen af højtitret trombocytportioner ved anvendelsen af EU - Rådets anbefaling. Indledning... 3. Formål... 3. Mål... Indholdsfortegnelse Indledning... 3 Formål... 3 Mål... 4 Problemformulering:... 4 Begrebsdefinitioner... 4 Teori... 5 HTR... 5 Trombocytter... 6 AB0 antistoffer... 7 Saltvands teknik... 8 Glas- /Mikrotiterpladermetoden...

Læs mere

[BESØGSSERVICE INSTITUT FOR MOLEKYLÆRBIOLOGI OG GENETIK, AU]

[BESØGSSERVICE INSTITUT FOR MOLEKYLÆRBIOLOGI OG GENETIK, AU] Enzymkinetik INTRODUKTION Enzymer er biologiske katalysatorer i alle levende organismer som er essentielle for liv. Selektivt og effektivt katalyserer enzymerne kemiske reaktioner som ellers ikke ville

Læs mere

Påvisning af collagen colitis ved lymfocytær colitis diagnosticeret væv

Påvisning af collagen colitis ved lymfocytær colitis diagnosticeret væv Påvisning af collagen colitis ved lymfocytær colitis diagnosticeret væv - udført med masson trichrom, picrosiriusrød og optimering af anti-tenascin Detection of collagenous colitis in lymphocytic colitis

Læs mere

Oprensning af fructofuranosidase fra gær. Matematik. Kemi. LMFK-bladet, nr. 3, maj

Oprensning af fructofuranosidase fra gær. Matematik. Kemi. LMFK-bladet, nr. 3, maj Oprensning af fructofuranosidase fra gær Formål Øvelsens formål er at demonstrere, hvordan et enzym kan ekstraheres fra gær og groft oprenses via gelfiltrering. Desuden bestemmes enzymets aktivitet og

Læs mere

Forsøgsprotokol til larveforsøg: Tilsætning af 3 dage gamle larver til gødning inficeret med patogene bakterier

Forsøgsprotokol til larveforsøg: Tilsætning af 3 dage gamle larver til gødning inficeret med patogene bakterier Forsøgsprotokol til larveforsøg: Tilsætning af 3 dage gamle larver til gødning inficeret med patogene bakterier Formål: at undersøge udviklingen i mængden af tilsatte patogene bakterier til hønsegødning.

Læs mere

Intern rapport Afprøvning af HYDRASYS fra Sebia, ILS Aps Til analysering af Elektroforeser Januar 2003-01-21

Intern rapport Afprøvning af HYDRASYS fra Sebia, ILS Aps Til analysering af Elektroforeser Januar 2003-01-21 Klinisk Biokemisk Afdeling Slagelse Sygehus Intern rapport Afprøvning af HYDRASYS fra Sebia, ILS Aps Til analysering af Elektroforeser Januar 2003-01-21 Dorit Borgstrup Lis Bülow Birgit Hansen R:\Klinisk

Læs mere

Til brug til klargøring og isolation af oprensede lymfocytter direkte fra fuldblod INDLÆGSSEDDEL. Til in vitro diagnostisk anvendelse PI-TT.

Til brug til klargøring og isolation af oprensede lymfocytter direkte fra fuldblod INDLÆGSSEDDEL. Til in vitro diagnostisk anvendelse PI-TT. Til brug til klargøring og isolation af oprensede lymfocytter direkte fra fuldblod INDLÆGSSEDDEL Til in vitro diagnostisk anvendelse PI-TT.610-DK-V6 Instruktionsinformation Beregnet anvendelse T-Cell Xtend-reagenset

Læs mere

Immunisering af høns med antigen i sprayform?

Immunisering af høns med antigen i sprayform? Immunisering af høns med antigen i sprayform? undersøgelse af en smertefri metode til produktion af antistoffer i æg. Af Aiko Sho Nielsen Forskere fra Afdeling for Eksperimentel Medicin på Københavns Universitet

Læs mere

Kemiøvelse 2 C2.1. Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer

Kemiøvelse 2 C2.1. Puffere. Øvelsens pædagogiske rammer Kemiøvelse 2 C2.1 Puffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt

Læs mere

Undersøgelser af polyethylenglykol (PEG)

Undersøgelser af polyethylenglykol (PEG) Undersøgelser af polyethylenglykol (PEG) HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT, FRANKFURT (MAIN), 1976 Moesgård Museum Jesper Frederiksen og Inge Gry Hyldkrog KONSERVERINGS- OG NATURVIDENSK ABELIG AFDELING Nr. 12

Læs mere

Kemiøvelse 2 C2.1. Buffere. Øvelsens pædagogiske rammer

Kemiøvelse 2 C2.1. Buffere. Øvelsens pædagogiske rammer Kemiøvelse 2 C2.1 Buffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt

Læs mere

Mercodia C-peptide ELISA

Mercodia C-peptide ELISA Mercodia C-peptide ELISA Brugsanvisning 10-1136-01 REAGENS TIL 96 BESTEMMELSER Til in vitro-diagnosticering Fremsstillet af Mercodia AB Sylveniusgatan 8A SE-754 50 Uppsala Sverige FORKLARING AF SYMBOLER

Læs mere

Citat Det synes altid umuligt, indtil det er gjort. Professionsbachelorprojekt

Citat Det synes altid umuligt, indtil det er gjort. Professionsbachelorprojekt 1 Citat Det synes altid umuligt, indtil det er gjort. NELSON MANDELA Professionsbachelorprojekt Titel : Gordon and Sweets overfor CD271 ved farvning af retikulære fibre Engelsk : Staining for reticular

Læs mere

Histology FISH Accessory Kit Kode K5799

Histology FISH Accessory Kit Kode K5799 Histology FISH Accessory Kit Kode K5799 6. udgave Til fluorescens in situ hybridisering (FISH) på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Sættet indeholder reagenser til 20 analyser. (128916-002)

Læs mere

Regnskovens hemmeligheder

Regnskovens hemmeligheder Center for Undervisningsmidler, afdeling København Regnskovens hemmeligheder Øvelsesvejledning Formål Et gen for et kræfthelbredende protein er blevet fundet i nogle mystiske blade i regnskoven. Forskere

Læs mere

Viden SIDE 1. Grundskole. Viden om appelsiner. Et kig indenfor

Viden SIDE 1. Grundskole. Viden om appelsiner. Et kig indenfor om appelsiner Et kig indenfor Rent basalt så består en appelsin af juice vesikler 1 som er omringet af en voksagtig hud, nemlig skrællen. Skrællen omfatter et tyndt og farvet yderlag som kaldes flavedoen,

Læs mere

Desinfektion - overordnet set

Desinfektion - overordnet set Desinfektion - overordnet set Temadag for Hygiejnekontaktpersoner 31. marts 2014 Bodil Forman Hygiejnesplejerske Stigende antibiotikaforbrug til mennesker og dyr her i landet har bevirket en stigende forekomst

Læs mere

Cytology FISH Accessory Kit Kode nr. K 5499

Cytology FISH Accessory Kit Kode nr. K 5499 Cytology FISH Accessory Kit Kode nr. K 5499 2. udgave Til in situ fluorescenshybridisering (FISH) på cytologiprøver. Kittet indeholder reagens tilstrækkeligt til 20 tests. Indhold Side Tilsigtet anvendelse...3

Læs mere

Analyserapport nr

Analyserapport nr ApodanNordic A/S Att. Heine Dalsgaard Legravsvej 63 2300 København S Teknologiparken Kongsvang Allé 29 DK-8000 Aarhus C Telefon 72 20 10 00 Telefax 72 20 10 19 info@teknologisk.dk www.teknologisk.dk Analyserapport

Læs mere

Skriftlig eksamen juni 2018

Skriftlig eksamen juni 2018 Studienummer: 1/10 Skriftlig eksamen juni 2018 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet (gl. studieordning) Medicin og medicin med industriel specialisering 2. semester

Læs mere

Test'af'EML4.ALK'fusion'i'lungeadenokarcinom.

Test'af'EML4.ALK'fusion'i'lungeadenokarcinom. Test'af'EML4.ALK'fusion'i'lungeadenokarcinom. Anbefalingerne udarbejdede af: Overlæge,Dr.Med.BirgitGuldhammerSkov.BispebjergHospital,PatologiskAfdeling. Professor,overlægeMogensVyberg.AalborgUniversitetshospital,PatologiskInstitut.

Læs mere

Sammendrag Den mest effektive måde til at nedbringe forekomst af Salmonella på mørbrad er at undgå kontamination på slagtegangen.

Sammendrag Den mest effektive måde til at nedbringe forekomst af Salmonella på mørbrad er at undgå kontamination på slagtegangen. Rapport Optimering af hygiejne ved håndtering af mørbrad 23. december 2015 Proj.nr.:2003021-15 Version 1 VHR/HCH Fedtendeskubber indflydelse på kimtal på mørbrad og i bækkengang Vinnie H. Rasmussen & Hardy

Læs mere

SOP for håndtering af standardsæt blod Regionernes Bio- og GenomBank

SOP for håndtering af standardsæt blod Regionernes Bio- og GenomBank SOP for håndtering af standardsæt blod Regionernes Bio- og GenomBank Introduktion Følgende standard operating procedure (SOP) beskriver arbejdsgangen i forbindelse med indsamling og håndteringen af blod

Læs mere

7. semester Bachelorprojekt, Bioanalytikeruddannelsen, Metropol. Metodevalidering af P- M-komponent; arb.k.(0,1), på Capillarys 2.

7. semester Bachelorprojekt, Bioanalytikeruddannelsen, Metropol. Metodevalidering af P- M-komponent; arb.k.(0,1), på Capillarys 2. 7. semester Bachelorprojekt, Bioanalytikeruddannelsen, Metropol Metodevalidering af P- M-komponent; arb.k.(0,1), på Capillarys 2. Skrevet af: Jesper Østrup Nielsen 29.10.1984 Vejledere: Conni Jølving,

Læs mere

Forårseksamen Med korte, vejledende svar

Forårseksamen Med korte, vejledende svar Studienummer: 1/10 Forårseksamen 2014 Med korte, vejledende svar (Heri angives de facts, der skal nævnes i besvarelserne, men ikke de uddybende forklaringer, tegninger etc., der i nogle af opgaverne også

Læs mere