BD MAX MRSA-analyse

Transkript

1 BD MAX MRSA-analyse Til in vitro-diagnostik Til brug med BD MAX-systemet P0133(06) Dansk TILSIGTET BRUG BD MAX MRSA XT-analysen udført på BD MAX-systemet er en automatisk kvalitativ in vitro diagnostisk test til direkte påvisning af methicillinresistent Staphylococcus aureus (MRSA) DNA fra næsepodninger hos patienter med risiko for næsekolonisering. Testen anvender polymerasekædereaktion (PCR) i realtid til opformering af MRSA DNA og fluorogene, mål-specifikke hybridiseringssonder til detektering af det opformerede DNA. BD MAX MRSA-analysen er tiltænkt som en hjælp til at forhindre og kontrollere MRSA-infektioner i hospitalsmiljøer. Den er ikke beregnet til diagnosticering, vejledning eller overvågning af MRSA-infektioner. Et negativt resultat udelukker ikke kolonisering i næsen. Konkomitante dyrkninger er nødvendige for at regenerere organismer til epidemiologisk typebestemmelse eller til yderligere følsomhedstestning. RESUMÉ OG FORKLARING AF PROCEDUREN MRSA er en af hovedårsagerne til infektioner i hospitalsmiljøer. Hovedparten af smitteoverførsler i hospitalsmiljøer sker via sundhedspersonalets kontaminerede hænder eller som følge af smitte fra patienter med MRSA. MRSA kan forårsage infektion med kliniske manifestationer, der spænder fra pustler til sepsis og død 1, men kan også findes i næsen eller på huden hos enkeltpersoner (asymptomatiske bærere). Behandlingen af MRSA-infektioner er blevet udfordrende i takt med udviklingen af stammer, som er resistente over for en lang række antimikrobielle stoffer. Methicillinresistente stammer af Staphylococcus aureus registreres ofte i sundhedsmiljøer og repræsenterer over 50 % af hospitalserhvervede Staphylococcus aureus-isolater på visse nordamerikanske hospitaler 2. Risikofaktorer for infektion med MRSA i sundhedsmiljøer inkluderer forlængede hospitalsophold, kontakt med patienter, der er inficeret eller koloniseret med MRSA, kolonisering med andre resistente organismer, såsom vancomycinresistent enterococci (VRE) og Clostridium difficile, eksponering for flere og/eller længerevarende behandlinger med bredspektret antibiotika, eksponering for høje MRSA-prævalensområder indenfor sundhedsmiljøet og forudgående nasal MRSA-infektion eller bæretilstand. Tidlig identifikation af patienter, som er næsebærere af MRSA, kan indgå i et effektivt program til forebyggelse af MRSA-infektion. For at påvise MRSA ved dyrkning kræves der isolering af rene kolonier efterfulgt af følsomhedstestning med oxacillin eller cefoxitin, påvisning af meca-genet eller påvisning af det penicillinbindende protein (PBP 2a) som kodet af meca-genet. Dyrkningsprocessen tager mindst 24 timer, men der går i gennemsnit nærmere 48 timer, inden resultatet foreligger, og MRSA kan identificeres. I betragtning af den hastighed, hvormed MRSA-infektioner kan spredes især i hospitalsmiljøer, hvor bærerne ofte findes er muligheden for at få resultater fra MRSA-næsebærere på den samme dag, hvor prøven indsamles, en fordel for et program til forebyggelse af infektioner. 1

2 En næseborsprøve udtages og sendes til laboratoriet ved brug af den anbefalede type podepind (se afsnittet Nødvendigt udstyr og materialer, der ikke er vedlagt). Podepinden placeres i et BD MAX MRSA Sample Buffer Tube (prøvebufferrør). Prøvebufferrøret vortexes for at frigøre cellerne fra podepinden til bufferen. Prøvebufferrøret placeret i BD MAX-systemet, hvorefter følgende automatiserede procedurer foretages: Bakteriecellerne lyseres, DNA ekstraheres på magnetiske perler og koncentreres, og derefter tilsættes en afmåling af den eluerede DNA til PCR-reagenser, som indeholder MRSA-specifikke primere, der bruges til at amplificere det genetiske mål, hvis de er til stede. Analysen omfatter også en prøvebearbejdningskontrol. Prøvebearbejdningskontrollen er til stede i ekstraktionsrøret og udsættes for ekstraktions-, koncentrations- og amplifikationstrinnene for at kunne overvåge for hæmmende stoffer og procesineffektivitet, som skyldes instrument- eller reagensfejl. Operatørindgriben er ikke nødvendig, så snart prøven, en BD MAX DNA Unitized Reagent Strip (reagensstrimmel) og BD MAX PCR-kassetten er sat i BD MAX-systemet. BD MAX-systemet automatiserer prøvelysis, DNA-ekstraktion og -koncentration, reagensrehydrering, nukleinsyre-amplifikation og påvisningen af målnukleinsyresekvensen vha. polymerasekædereaktion (PCR) i realtid. Amplificerede mål påvises med hydrolysesonder mærket med hæmmede fluoroforer. Amplifikation, påvisning og tolkning af signaler udføres automatisk af BD MAX-systemet. PROCEDURENS PRINCIPPER BD MAX-systemet anvender en kombination af lytiske og ekstraktionsreagenser til at udføre cellelysis og DNA-ekstraktion. Efter enzymatisk cellelysering ved forhøjet temperatur indfanges de frigjorte nukleinsyrer af magnetiske affinitetsperler. Perlerne med de bundne nukleinsyrer vaskes, og nukleinsyrerne elueres vha. varme i elueringsbuffer. Elueret DNA neutraliseres med neutraliseringsbuffer og overføres til Master Mix-røret for at rehydrere PCR-reagenserne. Det rekonstituerede amplifikationsreagens dispenseres i BD MAX PCR-kassetten. Mikroventiler i BD MAX PCR-kassetten forsegles af systemet, inden PCR igangsættes, for at forhindre fordampning og amplikonkontaminering. De amplificerede DNA-mål påvises vha. hydrolysesonder (TaqMan), som er mærket med en fluorescerende reporterfarvestof (fluorofor) i den ene ende og med en quencherdel. Sonder, der er mærket med forskellige fluoroforer anvendes til at påvise MRSA- og prøvebearbejdningskontrolamplikoner i to forskellige optiske kanaler i BD MAX-systemet: MRSA-amplikoner påvises i FAM-kanalen, og prøvebearbejdningskontrolamplikoner påvises i ROX-kanalen. Når sonderne er i deres normale tilstand, kvæles fluoroforen af fluorescensen pga. dens nærhed til quencheren. Ved tilstedeværelsen af mål-dna hybridiseres sonderne dog til deres komplementære sekvenser og hydrolyseres af DNA-polymerasens 5'-3' exonukleaseaktivitet, da den syntetiserer den nydannede streng langs DNA-skabelonen. Som følge heraf adskilles fluoroforerne fra quenchermolekylerne, og fluorescensen afgives. Mængden af fluorescens, der påvises i de to optiske kanaler, der anvendes til BD MAX MRSA-analysen, er direkte proportional med mængden for den tilsvarende sonde, som hydrolyseres. BD MAX-systemet måler disse signaler i slutningen af amplifikationscyklussen og fortolker dataene for at levere et resultat. REAGENSER REF Indhold Antal BD MAX MRSA Master Mix (A1) Tørret PCR Master Mix, der indeholder polymerase, nukleotider og MRSA-specifikke molekylære sonder og primere sammen med en 24 test prøvebearbejdningskontrolspecifik molekylær sonde. BD MAX MRSA Reagent Strips Unitized Reagent Strips (reagensstrimler), der indeholder alle reagenser på væskeform og engangspipettespidser, som er nødvendige for 24 test præparatbearbejdning og DNA-ekstraktion. BD MAX MRSA Extraction Tube (A2) Frysetørret pellet, der indeholder DNA-magnetiske affinitetsperler, 24 test achrompeptidase og prøvebearbejdningskontrol. BD MAX MRSA Sample Buffer Tube (prøvebufferrør) (med 25 membranhætter) 24 test 2

3 NØDVENDIGE MATERIALER OG UDSTYR, DER IKKE ER VEDLAGT BD BBL CultureSwab Liquid Stuart enkelt eller dobbelt podepind (Becton Dickinson-katalognr eller ), Copan (Venturi) Transystem * Liquid Stuart enkelt eller dobbelt podepind (Copan, katalognr. 141C eller 139C) eller BD BBL CultureSwab Liquid Amies enkelt eller dobbelt podepind (Becton Dickinson-katalognr eller ), Copan (Venturi) Transystem Liquid Amies enkelt eller dobbelt podepind (Copan, katalognr. 140C eller 138C) BD BBL CHROMagar Staph aureus (BD Diagnostic Systems-katalognr ), BD BBL CHROMagar MRSA (BD Diagnostic Systems-katalognr ), Mannitol Salt Agar (MSA) (BD Diagnostic Systems-katalognr eller ) eller tilsvarende medier (valgfrit) VWR Multi-Tube Vortexer (VWR-katalognr ) NALGENE Cryogenic Vial Holder (VWR, katalognr ) Gram-farvningsreagens (valgfrit) BD BBL Trypticase Soy Broth (5 ml) med 6,5 % NaCl (BD-katalognr ) (valgfrit) Plade med 5 % fåreblodsagar (f.eks. BBL Trypticase Soy Agar (TSA II) med 5 % fåreblod, BD Diagnostic Systems-katalognr eller ) (valgfrit) Engangshandsker, pudderfri Steril saks (valgfri) Steril gaze Stopur eller timer BD MAX PCR-kassetter (BD Diagnostic Systems-katalognr ) ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER The BD MAX MRSA-analysen er beregnet til in vitro-diagnostik. Anvend ikke reagenserne og/eller materialer, der er for gamle. Sættet må ikke bruges, hvis mærkaten, der forsegler den ydre emballage, er brudt ved modtagelse. Reagenserne må ikke bruges, hvis beskyttelsesposerne er åbne eller beskadigede ved modtagelsen. Anvend ikke reagenser, hvis tørremidlet ikke er til stede eller er brudt inden i reagensposerne. Tørremidlet må ikke tages ud af reagensposerne. De beskyttende poser med reagenser skal straks lukkes til med lynlåsen efter hver brug. Fjern eventuel luft i poserne, inden de forsegles. Beskyt reagenser mod varme og fugt. Længerevarende udsættelse for fugt kan have en negativ indflydelse på produktets ydelse. Reagenserne må ikke anvendes, hvis folien er blevet brudt eller beskadiget. Bland ikke reagenser fra forskellige poser og/eller kits og/eller partier. Hætter fra de forskellige reagenser må ikke ombyttes eller genbruges, da dette kan medføre kontaminering og kompromittere testresultaterne. Kontrollér Unitized Reagent Strips for korrekt væskefyldning (sørg for, at væskerne befinder sig i bunden af rørene) (se figur 1). Kontrollér Unitized Reagent Strips for at sikre, at alle pipettespidser er til stede (se figur 1). Udvis forsigtighed, når der anvendes kemiske opløsninger, da læsbarheden for stregkoder på Master Mix-blanding og ekstraktionsrør kan ændres. God laboratorieteknik er afgørende for korrekt udførelse af denne analyse. På grund af høj analytisk sensitivitet for denne test, skal der udvises meget stor forsigtighed for at opretholde renheden for alle materialer og reagenser. Hvis der udføres andre PCR-test i det samme laboratorieområde, skal der udvises forsigtighed for at sikre, at denne BD MAX MRSA-analyse, de nødvendige reagenser til testning og BD MAX-systemet ikke kontamineres. Undgå altid mikrobiologisk kontaminering og deoxyribonucleasekontaminering (DNase) af reagenser. Der skal skiftes handsker, inden der håndteres reagenser og kassetter. For at undgå kontaminering af miljøet med amplikoner må BD MAX PCR-kassetter ikke adskilles efter brug. Forseglingerne af BD MAX PCR-kassetterne er udviklet for at forhindre kontaminering. Laboratoriet skal rutinemæssigt udføre miljømæssig overvågning med henblik på at minimere risikoen for krydskontaminering. Udførelse af BD MAX MRSA-analysen uden for de anbefalede tids- og temperaturintervaller for præparattransport og -opbevaring kan resultere i ugyldige resultater. Analyser, som ikke udføres inden for de specificerede tidsrammer, bør gentages. 3

4 Yderligere kontroller kan testes i henhold til retningslinjer eller regler fra lokale eller offentlige myndigheder eller akkrediteringsorganisationer. Alle præparater skal altid håndteres som værende smittefarlige og i henhold til sikre laboratorieprocedurer, som f.eks. dem, der er beskrevet i CLSI Document M29 3 og i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4. Benyt egnet beskyttelsestøj og engangshandsker ved håndtering af alle former for reagenser. Vask hænderne grundigt efter udførelse af testen. Undgå pipettering med munden. Undgå at ryge, drikke, tygge eller spise inden for områder, hvor der behandles prøver eller analysekitreagenser. Bortskaf ubrugte reagenser og affald i overensstemmelse med lokale og/eller nationale regler. Se brugervejledningen til BD MAX-systemet 7 for yderligere advarsler, forholdsregler og procedurer. OPBEVARING OG STABILITET Indsamlede prøver skal opbevares ved en temperatur på mellem 2 C og 25 C under transport. Beskyttes mod frost eller for kraftig varme. Prøverne kan opbevares ved 25 C i maksimalt 48 timer eller ved 2-8 C i maksimalt 120 timer (5 dage) inden testning. BD MAX MRSA-analysereagenser og -komponenter er stabile ved 2-25 C inden den angivne udløbsdato. Anvend ikke komponenter, der er for gamle. BD MAX MRSA Master Mix og ekstraktionsrør leveres i forseglede poser. Produktet skal forsegles igen umiddelbart efter åbning for at beskytte det mod fugt. Reagensrør er stabile i op til 7 dage ved 2-25 C efter første åbning og genforsegling af posen. Ikke-rekonstituerede ekstraktions- og Master Mix-reagensrør er stabile i op til 3 timer ved 2-25 C efter fjernelse fra beskyttelsesposen. BRUGSANVISNING Prøveindsamling/transport Brug en anbefalet podepind med transportrør (se afsnittet Nødvendigt udstyr og materialer, der ikke er vedlagt) til at udtage næseborsprøver i henhold til standardprocedurerne for betjening for institutioner og laboratorier og/eller følgende: 1. Fugt podepinden(e) med to dråber (ca. 50 µl) sterilt fysiologisk saltvand, eller brug den tør. 2. Før podepinden(e) forsigtigt ind i patientens næsebor (spidsen af podepinden skal indføres op til 2,5 cm fra næseborskanten). 3. Rul podepinden(e) 5 gange langs slimhinden inden i næseboret. 4. Før de(n) samme podepind(e) ind i det andet næsebor, og gentag trin 2 og Anbring podepinden(e) i transportrøret. 6. Mærk transportrøret med patientidentifikation. 7. Transporter podepinden(e) til laboratoriet i henhold til instituttets og laboratoriets standardprocedurer (se afsnittet Opbevaring og stabilitet). Klargøring af prøver BEMÆRK: Der kræves ét (1) prøvebufferrør, én (1) membranhætte, én (1) Master Mix (A1), ét (1) ekstraktionsrør (A2) og én (1) Unitized Reagent Strip til hver prøve og hver ekstern kontrol, der skal testes. BEMÆRK: Ved dyrkning af kliniske prøver inden udførelse af en BD MAX MRSA-analyse henvises der til afsnittet Dyrkning af kliniske prøver. 1. Indsaml det antal prøvebufferrør (klar hætte), der svarer til antallet af prøver og eksterne kontroller, der skal køres. 2. Mærk hvert prøvebufferrør med den relevante patientidentifikation, og sørg for, at stregkoderne ikke skjules, overskrives eller mærkes. 3. Tag hætten af prøvebufferrøret. 4

5 4. Fjern podepinden fra prøvetransportrøret, og anbring podepinden i det tilsvarende prøvebufferrør. 5. Hold fast i podepinden tæt ved prøvebufferrørets kant (brug steril gaze til at mindske risikoen for kontaminering). Løft podepinden ca. én (1) cm fra bunden af prøvebufferrøret, og bøj strimlen mod rørets kant for at knække den. Alternativ metode: Brug en steril saks til at klippe strimlen over. 6. Luk prøvebufferrøret med en membranhætte. 7. Anbring prøvebufferrøret i en NALGENE Cryogenic Vial Holder, og vortex ved maksimal hastighed i ét (1) minut med Multi-Tube Vortexer. Der kan bearbejdes op til 24 prøver på én gang med Multi-Tube Vortexer. Betjening af BD MAX-systemet BEMÆRK: Der henvises til brugervejledningen til BD MAX-systemet 7 for detaljerede instruktioner (afsnittet Betjening). BEMÆRK: Test af BD MAX MRSA-analysen skal udføres umiddelbart efter vortexing ovenfor (Klargøring af prøver, trin 7). Hvis det er nødvendigt at udføre testen igen, skal de(n) relevante prøve(r) vortexes igen. 1. Tænd for BD MAX-systemet (hvis det ikke allerede er gjort), og log ind ved at indtaste <brugernavn> og <adgangskode>. 2. Der skal skiftes handsker, inden der håndteres reagenser og kassetter. 3. Fjern det påkrævede antal Unitized Reagent Strips fra BD MAX MRSA-kittet. Bank forsigtigt hver Unitized Reagent Strip på en hård overflade for at sikre, at alle væskerne befinder sig i bunden af rørene. 4. Fjern det nødvendige antal ekstraktionsrør og Master Mix-blandingsrør fra beskyttelsesposerne. Fjern eventuel overskydende luft, og luk poserne vha. lynlåsen. 5. For hvert præparat, der skal testes, skal der placeres én (1) Unitized Reagent Strip på BD MAX systemstativet. Start med position 1 på stativ A, og fortsæt fortløbende. 6. Klik ét (1) ekstraktionsrør (hvid folie) fast i hver Unitized Reagent Strip i position 1 som vist på figur Klik ét (1) Master Mix-blandingsrør (grøn folie) fast i hver Unitized Reagent Strip i position 2 som vist i figur 1. Figur 1: Klik BD MAX MRSA-ekstraktionsreagensrør og Master Mix-rør ind i Unitized Reagent Strips. 8. Klik på kørselsikonet, og indtast kittets lotnummer for BD MAX MRSA-analysen (så partiet kan spores) ved enten at scanne stregkoden med scanneren eller indtaste det manuelt. BEMÆRK: Gentag trin 8 for hver gang, der anvendes et nyt kitlotnummer. 9. Gå til arbejdslisten. Brug rullemenuen til at vælge <BD MAX MRSA>. 10. Angiv id for prøvebufferrøret, patient-id og accessionsnummer (hvis relevant) på arbejdslisten ved enten at scanne stregkoden med scanneren eller ved at indtaste oplysningerne manuelt. 11. Vælg det relevante kitlotnummer (findes på den udvendige emballage) på rullemenuen. 12. Gentag trin 9 til 11 for alle resterende prøvebufferrør. 13. Anbring BD MAX UVE-prøvebufferrør i BD MAX-systemstativ(er) svarende til de Unitized Reagent Strips, der blev samlet i trin 5 til 7. BEMÆRK: Anbring prøvebufferrørene i prøvestativ(er) med 1D-stregkodeetiketterne udad (det gør det lettere at scanne prøvebufferrørene, når prøverne logges på). 14. Anbring det påkrævede antal BD MAX PCR-kassetter i BD MAX-systemet (se figur 2). 5

6 Hver BD MAX PCR-kassette kan rumme op til 24 prøver. BD MAX-systemet vælger automatisk positionen og rækken på BD MAX PCR-kassetten for hver kørsel. BD MAX PCR-kassetter kan bruges flere gange, indtil alle baner er anvendt. For at maksimere brugen af BD MAX PCR-kassetter med 2000 Sample Mode skal du vælge Run Wizard (Kørselsguide) under fanen Worklist (Arbejdsliste) for banetildelinger. Se brugervejledningen til BD MAX-systemet for at få flere oplysninger. Figur 2: Isæt BD MAX PCR-kassetter. 15. Sæt stativ(er) i BD MAX-systemet (se figur 3). Figur 3: Sæt stativ(er) i BD MAX-systemet. 16. Luk låget på BD MAX-systemet, og klik på <Start> for at starte behandlingen. 17. Når kørslen er færdig, skal resultaterne kontrolleres med det samme, eller prøvebufferrørene skal opbevares ved 2-8 C i op til 5 dage ELLER ved 25 ± 2 C i maksimalt 36 timer, indtil resultaterne er kontrolleret. BEMÆRK: Hvis en membranhætte blev beskadiget under kørslen, skal den udskiftes med en ny, inden prøven stilles til opbevaring. 6

7 BEMÆRK: Forberedte BD MAX MRSA-prøvebufferrør kan opbevares ved 2-8 C i maksimalt 120 timer (5 dage) ELLER ved 25 ± 2 C i maksimalt 36 timer, efter at prøven er føjet til prøvebufferrøret. Når der opnås inkonklusive (IND), uafklarede (UNR) eller ufuldstændige (INC) resultater, eller når der opstår en ekstern kontrolfejl, skal der inden for denne tidsramme udføres en gentagen test fra det klargjorte prøvebufferrør (se afsnittet Gentagen testprocedure). KVALITETSKONTROL Kvalitetskontrolprocedurer overvåger udførelsen af analysen. Laboratorierne skal etablere antallet, typen og hyppigheden for testning af kontrolmaterialer i henhold til retningslinjerne eller kravene i de lokale, statslige og/eller nationale regulativer eller akkrediteringsorganisationer for at overvåge effektiviteten for hele den analytiske proces. For at finde en generel vejledning omkring kvalitetskontrol kan brugeren vælge at se CLSI MM3 and EP12. 5,6 1. Eksterne kontrolmaterialer leveres ikke af BD. Eksterne positive og negative kontroller anvendes ikke af BD MAX-systemsoftwaren med henblik på tolkning af prøvetestresultater. Eksterne kontroller behandles på samme måde som patientprøver. (Se tabellen i afsnittet Tolkning af resultater for at få oplysninger om tolkning af resultater for eksterne kontrolanalyser). 2. Én (1) ekstern positiv kontrol og én (1) ekstern negativ kontrol skal mindst køres dagligt, indtil der er opnået tilstrækkelig procesvalidering på BD MAX-systemet i hvert laboratoriemiljø. Nedsat hyppighed for kontroltestning skal ske i henhold til gældende lovgivning. 3. Den eksterne positive kontrol er beregnet til overvågning med henblik på alvorlige reagensfejl. Den eksterne negative kontrol er beregnet til påvisning af kontaminering af reagenser eller miljø (eller carryover) fra målnukleinsyrer. 4. Diverse typer eksterne kontroller anbefales, for at brugeren kan vælge den mest relevante til vedkommendes kvalitetskontrolprogram for laboratoriet. a. Ekstern negativ kontrol: Kommercielt tilgængelige kontrolmaterialer (f.eks. en methicillinfølsom Staphylococcus aureus-stamme (ATCC 25923)) eller en tidligere karakteriseret prøve, som er påvist at være negativ. BD anbefaler, at den eksterne negative kontrol forberedes inden den eksterne positive kontrol for at reducere potentiel kontaminering pga kontrolforberedelse. b. Ekstern positiv kontrol: Kommercielt tilgængelige kontrolmaterialer (f.eks. MRSA-referencestamme (ATCC 43300)) eller en tidligere karakteriseret prøve, som er påvist at være positiv. I forbindelse med klargøring af eksterne kontrolsuspensioner anbefales det, at isolater resuspenderes i en saltvandsopløsning til en uklarhed på 0,5 McFarland (~1 X 10 8 CFU/mL). Udfør serielle fortyndinger med saltvand for at få en endelig suspension på ~8,0 X 10 3 CFU/mL. Dyp en podepind i den fortyndede bakteriesuspension, tryk overskydende væske af, og placer podepinden i det tilsvarende prøvebufferrør. Bearbejd og test som en prøve (se afsnittene Klargøring af prøver og Betjening af BD MAX-systemet). 5. Alle eksterne kontroller skal give de forventede resultater (positiv for ekstern positiv kontrol, negativ for ekstern negativ kontrol) og ingen mislykkede eksterne kontroller (uafklarede eller inkonklusive resultater). 6. En ekstern negativ kontrol, som viser et positivt testresultat, viser, at der er et problem med prøvehåndtering og/eller kontaminering. Gennemgå prøvehåndteringsteknikken for at undgå sammenblanding og/eller kontaminering. En ekstern positiv kontrol, som viser et negativt testresultat, viser, at der er et problem med prøvehåndtering/-forberedelse. Gennemgå prøvehåndterings-/forberedelsesteknikken. 7. En ekstern negativ kontrol, som giver et uafklaret, inkonklusivt, uafklarede eller ufuldstændigt testresultat, indikerer en fejl i reagenset eller i BD MAX-systemet. Kontrollér BD MAX-systemets skærm for eventuelle fejlmeddelelser. Der henvises afsnittet Oversigt over systemfejl i brugervejledningen til BD MAX-systemet 7 for tolkning af advarsels- og fejlkoder. Hvis problemet fortsætter, skal der anvendes reagenser fra en uåbnet pose eller et nyt analysekit. 7

8 8. Hvert ekstraktionsrør indeholder en prøvebearbejdningskontrol, som er et plasmid, der indeholder en syntetisk mål-dna-sekvens. Prøvebearbejdningskontrollen ekstraheres, elueres og amplificeres sammen med eventuel DNA, der er til stede i den bearbejdede prøve, hvilket sikrer prædiktionen af analysen. Prøvebearbejdningskontrollen overvåger effektiviteten for DNA-opsamling, -vask og -eluering under prøvebearbejdningstrinnene samt effektiviteten for DNA-amplifikation og -påvisning under PCR-analyse. Hvis resultatet for prøvebearbejdningskontrollen ikke opfylder godkendelseskriterierne, rapporteres resultatet for præparatet som uafklaret. Eventuelle positive (POS) analyseresultater rapporteres dog, og ingen mål kaldes NEG. Et uafklaret resultat viser, at der er en prøverelateret hæmning eller reagensfejl. Gentag alle præparater, der rapporteres som uafklarede i henhold til afsnittet Gentagen testprocedure nedenfor. TOLKNING AF RESULTATER Resultaterne findes under fanen Results (Resultater) i vinduet Results (Resultater) på BD MAX-systemets skærm. BD MAX-systemsoftwaren tolker automatisk testresultaterne. Et testresultat kan angives som NEG (negativt), POS (positivt) eller UNR (uafklaret) på baggrund af amplifikationsstatussen for målet og prøvebearbejdningskontrollen. Resultaterne IND (inkonklusiv) eller INC (ufuldstændig) skyldes en fejl i BD MAX-systemet. Resultaterne er baseret på følgende bestemmelsesalgoritme: Tabel 1: Tolkning af resultater for BD MAX MRSA-analyse Rapporteret analyseresultat MRSA POS Tolkning af resultatet MRSA DNA påvist MRSA NEG MRSA DNA ikke påvist Uafklaret hæmmende præparat eller reagensfejl MRSA UNR ingen amplifikation af mål eller prøvebearbejdningskontrol Inkonklusivt resultat pga. en fejl i BD MAX-systemet IND (med advarsels- og fejlkoder a ) Ufuldstændig kørsel INC (med advarsels- eller fejlkoder a ) a Der henvises til afsnittet Fejlfinding i brugervejledningen til BD MAX-systemet 7 vedrørende tolkning af advarsler og fejlkoder. GENTAGEN TESTPROCEDURE BEMÆRK: Mængden er tilstrækkelig til at udføre én gentagen test med prøvebufferrøret. For prøvebufferrør, der opbevares ved 2-25 C, skal den gentagne test udføres inden for 36 timer efter den første prøvebufferrørsinokulering af prøven. Alternativt for prøvebufferrør, der opbevares ved 2-8 C, skal gentagne test udføres inden for 120 timer (5 dage). BEMÆRK: Nye prøver kan testes i samme kørsel som gentagne prøver. Uafklaret resultat Uafklarede resultater kan opnås, hvis et hæmmende stof forhindrer korrekt amplifikation af target eller prøvebearbejdningskontrol. En prøve(r) kan gentages fra deres tilsvarende prøvebufferrør inden for tidsrammerne, der er defineret ovenfor. Vortex de(n) relevante prøve(r) i ét (1) minut, og start forfra fra afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Inkonklusivt resultat Inkonklusive resultater kan opnås, hvis der opstår en systemfejl. En prøve(r) kan gentages fra deres tilsvarende prøvebufferrør inden for tidsrammerne, der er defineret ovenfor. Vortex de(n) relevante prøve(r) i ét (1) minut, og start forfra fra afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Se brugervejledningen til BD MAX 7 vedrørende tolkning af advarsler eller fejlkoder (afsnittet Fejlfinding). 8

9 Ufuldstændigt resultat Ufuldstændige resultater kan opnås i tilfælde af, at klargøringen af prøver eller PCR ikke blev udført. En prøve(r) kan gentages fra deres tilsvarende prøvebufferrør inden for tidsrammerne, der er defineret ovenfor. Vortex de(n) relevante prøve(r) i ét (1) minut, og genstart ved at følge vejledningen i afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Der henvises til brugervejledningen til BD MAX-systemet 7 (afsnittet Fejlfinding) for tolkning af meddelelser for advarsels- og fejlkoder. Ekstern kontrolfejl Eksterne kontroller skal resultere i de forventede resultater, når de testes. Hvis prøverne skal gentages pga. et forkert eksternt kontrolresultat, skal de gentages fra deres prøvebufferrør sammen med de nyligt klargjorte eksterne kontroller inden for de tidsrammer, der er angivet ovenfor. Vortex prøverne i ét (1) minut, og start forfra fra afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Dyrkning af kliniske prøver For at udføre antimikrobiel følsomhedsbestemmelse eller epidemiologisk typebestemmelse kan kliniske prøver dyrkes fra prøvetagningsanordningen (podepind), inden prøveklargøringsproceduren udføres (vha. udstrygningsmetoden), eller efter at prøveklargøringsproceduren er udført (vha. berigelsesbouillonmetoden). Podepinde kan opbevares ved 2-8 C i op til 36 timer i prøvebufferrør inden dyrkning ved at følge hospitalets procedurer. PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Dette produkt er beregnet til brug ved analyse af næseborsprøver udtaget vha. de prøvetagnings- og transportanordninger, der er beskrevet i afsnittet Nødvendigt udstyr og materialer, der ikke er vedlagt. Dette produkt må kun bruges sammen med BD MAX-systemet. Der kan dannes forkerte testresultater som følge af ukorrekt prøvetagningsmetode, håndtering eller opbevaring, tekniske fejl, sammenblanding af prøver, eller fordi antallet af organismer i prøven ligger under testens analytiske følsomhedsniveau. Det er nødvendigt omhyggeligt at overholde anvisningerne i indlægssedlen og i brugervejledningen 7 til BD MAX-systemet for at undgå fejlagtige resultater. Screening bestemmer kolonisationens status på et bestemt tidspunkt. Kolonisering kan variere afhængigt af patientens behandling (f.eks. dekolonisationsregime), patientens tilstand (f.eks. forbigående MRSA-kolonisering) eller eksponering for højrisikomiljøer (f.eks. kontakt med MRSA-bærere og/eller langvarigt hospitalsophold). Koloniseringsstatus skal overvåges i henhold til institutionens retningslinjer. Et positivt BD MAX MRSA-resultat er ikke nødvendigvis tegn på fejlbehæftet udryddelsesbehandling, da tilstedeværelsen af DNA kan være vedvarende. Et negativt resultat efter et tidligere positivt testresultat kan være tegn på vellykket udryddelsesbehandling eller kan opstå som følge af intermitterende kolonisering. Et positivt testresultat er ikke nødvendigvis ensbetydende med forekomsten af levedygtige organismer. Et positivt resultat viser, at MRSA DNA er til stede. BD MAX MRSA-analysen påviser samtidig SCCmec-kassetten (bærer meca-genet) og den Staphylococcus aureus-specifikke sekvens, som findes i orfx-genet. Tyve (20) MREJ-genotyper (MREJ-genotyper i to xx) er blevet beskrevet i litteraturen baseret på sekvensanalyser af SCCmec/orfX-forbindelsesstedet for forskellige kliniske isolater af MRSA. MREJ-genotypen korrelerer ikke med SCCmec-type. Det betyder, at forskellige MREJ-genotyper kan knyttes til hver af de kendte SCCmec-typer. BD MAX MRSA-analysen er kun beregnet til at påvise MREJ-genotyperne i, ii, iii, iv, v og vii. Disse seks (6) MREJ-genotyper udgør over 98 % af de stammer, der er blevet testet af BD Diagnostics indtil nu. BD MAX MRSA-analysen påviser muligvis ikke andre MREJ-genotyper, hvilket resulterer i falsk negative resultater. Methicillin-resistente Staphylococcus aureus-stammer, der bærer meca LGA251 -genmutationen, en ny meca-variant, kan muligvis ikke påvises af BD MAX MRSA-analysen, hvilket resulterer i falsk negative resultater. BD MAX MRSA-analysen påviser ikke meca-genet direkte og heller ikke det penicillinbindende protein (PBP 2a), der kodes af dette gen. Der kan opstå et falsk positivt MRSA-resultat, hvis en der er en Staphylococcus aureus-variant med "tom kassette" til stede. 9

10 BD MAX MRSA-analysen rapporterer ikke Borderline Oxacillin Resistant Staphylococcus aureus (BORSA). Mekanismen for oxacillinresistens i BORSA-stammer skyldes en øget produktion af β-lactamaser, ikke meca-genet. BORSA-stammer er sjældne i USA. Effektiviteten af BD MAX MRSA-analysen, når det gælder om at påvise modificeret Staphylococcus aureus (MOD-SA), kendes ikke, da disse stammer ikke er evalueret. Mekanismen for oxacillin-resistens i MOD-SA-stammer skyldes ændringer i affiniteten for penicillinbindende proteiner for oxacillin og ikke meca-genet. MOD-SA-stammer er sjældne i USA. Af de 213 ikke-målorganismer, der blev testet i løbet af den analytiske specificitetsundersøgelse, gav 5 stammer et falsk positivt resultat, men dette blev senere påvist til at være forårsaget af kontaminering. Ved gentagelse genererede alle 5 stammer de forventede negative resultater. Som med alle PCR-baserede in vitro-diagnostiske test, kan der påvises meget lave mål under påvisningsgrænsen for analysen, men resultaterne er ikke nødvendigvis reproducerbare. Tobramycin i høj koncentration kan forårsage lettere hæmning i BD MAX MRSA-analysen (se afsnittet Interfererende stoffer for at få yderligere oplysninger). Falsk negative resultater kan opstå pga. tab af nukleinsyre fra utilstrækkelig indsamling, transport eller opbevaring af prøverne, eller de kan skyldes utilstrækkelig bakteriecellelysering. Prøvebearbejdningskontrollen er føjet til testen for at bidrage til identifikationen af præparater, som indeholder hæmmere af PCR-amplifikation. Prøvebearbejdningskontrollen viser ikke, om der er opstået tab af nukleinsyre pga. utilstrækkelig indsamling, transport eller opbevaring af prøverne, eller om bakterieceller er tilstrækkeligt lyseret. BD MAX MRSA-analyseresultater vil undertiden være uafklarede pga. en ugyldig prøvebearbejdningskontrol eller inkonklusive eller ufuldstændige pga. instrumentfejl og derfor kræve gentaget testning, hvilket kan medføre forsinkelser, inden de endelige resultater foreligger. Mutationer eller polymorfismer i primerregioner eller sondebindende regioner kan påvirke påvisning af nye eller ukendte MRSA-varianter og medføre et falsk negativt resultat med BD MAX MRSA-analysen. Som med alle in vitro-diagnostiske test er positive og negative værdier stærkt afhængige af prævalens. Effektiviteten af BD MAX MRSA-analysen kan variere afhængigt af den testede prævalens og population. BD MAX MRSA-analysen kræver brugen af kun to optiske kanaler fra BD MAX-systemet, grøn ( nm) og orange ( nm) til påvisning af henholdsvis FAM- og ROX-fluoroforerne. Ydeevnen for de resterende optiske kanaler er ikke fastlagt for denne analyse. FORVENTEDE VÆRDIER I den kliniske undersøgelse af BD MAX MRSA-analysen blev i alt 1903 prøver testet på 4 geografisk forskellige kliniske undersøgelsessteder i USA med direkte/beriget dyrkning. Studiepopulationen blev grupperet i indlagte og ikke-indlagte patientkategorier. Antallet og procentdelen af positive tilfælde som bestemt ved referencemetoden er præsenteret i tabellen herunder: Tabel 2: Opsummering af overensstemmende inklusion i klinisk undersøgelse efter patientgruppe MRSA efter direkte/beriget dyrkning Gruppe N i alt Antal positive Antal negative Prævalens a Hospitalsindlagte patienter ,0% (133/1473) Ambulante patienter ,0% (26/430) I alt 1903 b ,4% (159/1903) a Prævalens udelukkende beregnet vha. referencemetoden. 1 Samlede prøver baseret på overensstemmende referencemetoderesultater. 10

11 FUNKTIONSDATA Klinisk funktion De kliniske funktionsdata for BD MAX MRSA-analysen blev fastlagt i en prospektiv forskningsundersøgelse på flere klinikker. Fire (4) forsøgscentre deltog i undersøgelsen. For at blive inkluderet i undersøgelsen skulle patienterne være egnede til MRSA-testning i henhold til institutionens retningslinjer. Kravene til egnethed for målrettet screening i henhold til forsøgscentrets politikker omfattede, men var ikke begrænset til: patienter, der er indlagt i det pågældende sundhedssystem, patienter, der er indlagt på intensivafdeling, patienter, der er overført til intensivafdeling, patienter til præ-elektiv kirurgi og patienter, der indlægges fra plejeinstitutioner. Prøver fra patienter, der tidligere har været inkluderet i undersøgelsen, blev ekskluderet. Den komparative referencemetode bestod af direkte dyrkning suppleret med beriget dyrkning. Beriget dyrkningsanalyse blev udført for alle prøver, som var negative for MRSA ved direkte dyrkning. Formodede Staphylococcus aureus-kolonier observeret på selektivt (Staphylococcus aureus) kromogent medium blev videredyrket på blodagar (BA). Identifikation blev bekræftet med agglutinationstest, mens methicillin-resistens blev bekræftet med cefoxitindiskdiffusionstest (30 μg). Berigelse i Trypticase-sojabouillon med 6,5 % NaCl (TSB 6,5 % NaCl) blev udført, hvis methicillin-resistent Staphylococcus aureus ikke blev bekræftet af den første direkte dyrkningsmetode. Uklar TSB 6,5 % NaCl-bouillon blev brugt til inokulering af yderligere kromogene medier og BA-plader. MRSA-bekræftelse blev udført, som det er beskrevet ovenfor. Der var 1881 rapporterbare resultater (se tabel 3 og 5). 106 nasale podningsprøver blev ekskluderet fra funktionsanalysen pga. manglende overensstemmelse med protokollen for de kliniske undersøgelse. Sammenlignet med referencemetoden (direkte/beriget dyrkning) identificerede BD MAX MRSA-analysen 93,0 % af de MRSA-positive prøver og 95,9 % af de MRSA-negative prøver (se tabel 4). Resultatet af dette for den testede population var en negativ prædiktiv værdi (NPV) på 99,3 % og en positiv prædiktiv værdi (PPV) på 67,3 %. Tabel 3: Resultater opnået med BD MAX MRSA-analysen sammenlignet med referencemetoden Alle steder Referencemetode + - I alt BD MAX MRSA-analyse I alt a a Det samlede antal prøver, der var overensstemmende med referencemetoden og PCR-metoden Tabel 4: Resultater opnået vha. BD MAX MRSA-analysen sammenlignet med referencemetoden Kliniske steder Prævalens a Sensitivitet med 95 % CI b Specificitet med 95 % CI b Forsøgscenter 1 5,6% (28/496) Forsøgscenter 2 4,6% (23/505) Forsøgscenter 3 13,2% (55/417) Forsøgscenter 4 10,9% (53/485) Samlet c 8,4% (159/1903) a Prævalens udelukkende baseret på referencemetoden b CI: Konfidensintervaller c 1903 prøver stemte overens med referencemetoden 100,0% (28/28) (87,9%, 100,0%) 91,3% (21/23) (73,2%, 97,6%) 90,9% (50/55) (80,4%, 96,1%) 92,2% (47/51) (81,5%, 96,9%) 93,0% (146/157) (87,9%, 96,0%) 95,8% (435/454) (93,6%, 97,3%) 96,5% (465/482) (94,4%, 97,8%) 95,8% (346/361) (93,3%, 97,5%) 95,3% (407/427) (92,9%, 96,9%) 95,9 % (1653/1724) (94,8 %, 96,7 %) 11

12 Sammenlignet med den direkte dyrkning identificerede BD MAX MRSA-analysen 95,0 % af de MRSA-positive prøver og 95,2 % af de MRSA-negative prøver (se tabel 6). Tabel 5: Resultater tilvejebragt med BD MAX MRSA-analysen sammenlignet med direkte dyrkning Alle steder BD MAX MRSA-analyse Direkte dyrkning + - I alt I alt Tabel 6: Resultater tilvejebragt med BD MAX MRSA-analysen sammenlignet med direkte dyrkning Kliniske steder Forsøgscenter 1 Forsøgscenter 2 Forsøgscenter 3 Forsøgscenter 4 Samlet Positiv procentvis overensstemmelse med 95 % konfidensinterval 100,0% (22/22) (85,1%, 100,0%) 95,5% (21/22) (78,2%, 99,2%) 94,1% (48/51) (84,1%, 98,0%) 93,3% (42/45) (82,1%, 97,7%) 95,0% (133/140) (90,0%, 97,6%) Negativ procentvis overensstemmelse med 95 % konfidensinterval 94,6% (435/460) (92,1%, 96,3%) 96,5% (466/483) (94,4%, 97,8%) 95,3% (348/365) (92,7%, 97,1%) 94,2% (408/433) (91,6%, 96,1%) 95,2% (1657/1741) (94,1%, 96,1%) Af 1884 overensstemmende nasale podningsprøver, der blev testet med BD MAX MRSA-analysen, blev 10 (0,5 %) rapporteret som værende uafklarede efter den første test (se tabel 7). Hyppigheden for uafklaret efter gentaget testning er baseret på 1882 prøveresultater (2 prøver, som i starten gav uafklarede resultater, blev ikke testet igen). Alle prøver havde rapporterbare resultater efter gentaget testning. Kliniske steder Tabel 7: Uafklarede prøver Uafklarede prøver efter første test med 95 % CI a Uafklarede prøver efter gentagelse med 95 % CI a Forsøgscenter 1 0,8% (4/484) (0,3%, 2,1%) 0,0% (0/483) (0,0%, 0,8%) Forsøgscenter 2 0,0% (0/505) (0,0%, 0,8%) 0,0% (0/505) (0,0%, 0,8%) Forsøgscenter 3 0,2% (1/416) (0,0%, 1,3%) 0,0% (0/416) (0,0%, 0,9%) Forsøgscenter 4 1,0% (5/479) (0,4%, 2,4%) 0,0% (0/478) (0,0%, 0,8%) Samlet 0,5 % (10/1884) b (0,3%, 1,0%) 0,0% (0/1882) (0,0%, 0,2%) a CI: Konfidensintervaller b 1884 prøver var i overensstemmelse med PCR-metoden Af 1913 nasale podningsprøver, der blev testet med BD MAX MRSA-analysen, blev 24 (1,3 %) rapporteret som inkonklusive efter første testning. Efter gentaget testning var 2 (0,1 %) stadig inkonklusive. Treoghalvfjerds (3,8 %) prøver blev rapporteret som ufuldstændige efter første testning. Efter gentaget testning var der ingen (0,0 %) prøver, der blev rapporteret som ufuldstændige. 12

13 Analytisk sensitivitet Den analytiske sensitivitet (påvisningsgrænse) af BD MAX MRSA-analysen blev fastlagt på følgende måde: simulerede positive prøver blev klargjort med iblødsatte podepinde i en lang række forskellige bakterielle MRSA-suspensioner, der blev klargjort og kvantificeret fra dyrkninger af 6 MRSA-stammer, som repræsenterede 6 MREJ-genotyper (i, ii, iii, iv, v og vii) samt 4 SCCmec-typer (I, II, III, IV). Podepindene blev elueret i en poolet klinisk negative næsematrix. Hver MRSA-stamme blev testet i replikater på 24 pr. koncentration af 2 forskellige operatører vha. 3 forskellige produktionslotnumre af BD MAX MRSA-analysen. Analytisk sensitivitet (påvisningsgrænse), defineret som den laveste koncentration, hvor 95 % af alle replikater testede positive, varierede fra 273 til 645 CFU/podepind (se tabel 8). Tabel 8: Påvisningsgrænse for BD MAX MRSA-analysen MRSA-stamme MREJ-genotype SCCmec-type Koncentration for påvisningsgrænse (CFU/podepind (95 % CI a )) 1 type i I 645 (314, 1326) 2 type ii II 400 (237, 678) 3 type iii III 346 (197, 608) 4 type iv III 490 (264, 908) 5 type v IV 273 (148, 504) 6 type vii II 357 (215, 594) a CI: Konfidensintervaller Analytisk inklusivitet Der blev foretaget en analytisk inklusivitetsundersøgelse vha. flere forskellige methicillin-resistente Staphylococcus aureus-stammer, hvor der blev taget hensyn til den geografiske oprindelse, MREJ-genotype, SCCmec-type, PFGE-type (Pulse Field Gel Electrophoresis), midlertidig mangfoldighed og følsomhedsmønster. Syvoghalvfjerds (77) MRSA-stammer fra 30 lande blev testet i denne undersøgelse, herunder stammer fra offentlige indsamlinger og fra velkarakteriserede kliniske isolater, herunder vancomycin-resistente Staphylococcus aureus- (VRSA) og vancomycin-intermediære Staphylococcus aureus-stammer (VISA). BD MAX MRSA-analysen påviste alle MREJ-typerne i, ii, iii, iv, v og vii (vilde og mutanter) ved testning med lav bakteriel belastning (2-3 x påvisningsgrænsen). BD MAX MRSA-analysen påviste MRSA SCCmec-typerne I, II, III, IV, V og VI, VII og VIII samt MRSA PFGE-typerne USA 100 til 800, 1000 og 1100 ved 2-3 x påvisningsgrænsen. Alle methicillin-resistente Staphylococcus aureus-stammer, der viste yderligere resistens over for vancomycin (VRSA og VISA), blev også påvist. Evaluering af veldefineret panel med anfægtede stammer En yderligere analytisk undersøgelse blev udført for at evaluere den analytiske effektivitet af BD MAX MRSA-analysen vha. et veldefineret panel med anfægtede stammer, der indeholder følgende: MRSA-stammer med høje og lave minimalt hæmmende koncentrationer (MIC), herunder PFGE-typerne USA 100, 300 og 400 BORSA-stammer (borderline oxacillinresistente Staphylococcus aureus-stammer Methicillinfølsomme Staphylococcus aureus-stammer (MSSA) Methicillinfølsomme Staphylococcus epidermidis -stammer (MRSE) Det anfægtningspanel, der blev anvendt i denne undersøgelse, bestod af 17 MRSA-, 4 BORSA-, 1 MRSEog 5 MSSA-stammer. Alle de testede MRSA-stammer (herunder PFGE-typerne USA 100, 300 og 400) viste positive resultater ved testning med lav bakteriel belastning (2-3 x påvisningsgrænsen). Alle de testede BORSA-, MSSA- and MRSE-stammer viste negative resultater ved testning med høje bakterielle belastninger. 13

14 Analytisk specificitet BD MAX MRSA-analysen blev udført på prøver med høje niveauer af ikke-målorganismer ved brug af BD MAX systemet for at demonstrere analysens specificitet med henblik på påvisning af MRSA. Syvoghalvtreds (57) ud af 57 stammer af diverse ikke-stafylokokarter, som blev testet ved en koncentration på mindst 10 6 CFU/mL viste negative resultater med BD MAX MRSA-analysen. Femogfyrre (45) koagulase-negative stafylokokstammer (CoNS) og koagulase-positive stafylokokstammer (CoPS), som repræsenterer 29 arter, blev testet ved en koncentration på 0,5 McFarland med BD MAX MRSA-analysen. Femogfyrre (45) ud af 45 stammer, som blev testet, viste negative resultater med BD MAX MRSA-analysen. Ethundredeelleve (111) ud af 111 testede MSSA-stammer ved meget høje koncentrationer (> 10 6 CFU/podepind), viste negative resultater med BD MAX MRSA-analysen. Sytten (17) vira, der repræsenterede 12 forskellige virusarter, blev testet ved 10 5 PFU/mL. Alle 17 vira viste negative resultater med BD MAX MRSA-analysen. Interfererende stoffer Tyve (20) biologiske og kemiske substanser, der undertiden anvendes i næseborskanten eller findes i næseborsprøver, blev evalueret for potentiel interferens med BD MAX MRSA-analysen (se tabel 9). MRSA-negative prøver og MRSA-positive prøver ved 2-3 x påvisningsgrænsen blev testet med den største mængde af hvert stof, som med stor sandsynlighed findes på prøvestedet eller i næseborsprøver. Resultaterne påviste ingen rapporterbar interferens med nogen substanser bortset fra Tobramycin, som viste mild hæmning i BD MAX MRSA-analysen. De forventede analyseresultater blev dog stadig opnået. Tabel 9: Endogene og kommercielle eksogene substanser testet med BD MAX MRSA-analysen Substans Resultat a Substans Resultat a Mucin fra bovine submaksillære kirtler NI Rhinocort aqua* NI Dexamethasone Sodium Phosphate Ophtalmic Solution USP, 0,1 % NI Nasonex* NI Dexamethasone Phosphate Equivalent Chloraseptic* NI Fluticasonpropionat NI Taro-Mupirocin, mupirocin-salve USP, 2 % NI Luffeel* NI Long Lasting Dristan* næsespray NI Zicam* No-Drip Liquid* Nasal Gel* Extreme Congestion Relief NI Neo-Synephrine* NI Relenza* NI Otrivin* Complete Nasal Care* NI Tobramycin b Beconase AQ* NI Blod NI Flunisolide Nasal Solution USP, 0,025 % NI MSSA (ATCC 29213) NI Nasacort* AQ NI CNS (ATCC 35983) NI a NI: Ingen rapporterbar interferens med BD MAX MRSA-analysen. b Tobramycin viste mild hæmning (forsinket SDPA (Second Derivative Peak Abscissa)) i BD MAX MRSA-analysen. De forventede analyseresultater blev dog stadig opnået. Præcision Præcision inden for laboratoriet blev evalueret for BD MAX MRSA-analysen på ét (1) forsøgscenter. Præcisionspanelet bestod af 4 prøvekategorier nær påvisningsgrænsen. Hver prøve indeholdt simuleret nasal flora (Staphylococcus epidermidis (ATCC 14990)). To MRSA-stammer blev testet i hver af følgende 4 kategorier: Moderat positiv (MP): 2-5 x påvisningsgrænsen Lav positiv (LP): 1-2 x påvisningsgrænsen Høj negativ 1:10 (HN1:10): 10-fold fortynding af 1 x påvisningsgrænse Høj negativ 1:100 (HN1:100): 100-fold fortynding af 1 x påvisningsgrænse En femte kategori bestod af negative (Neg) prøver (simuleret nasal flora og ingen MRSA). 14

15 Testning blev udført i duplikater over 12 dage med 2 kørsler pr. dag af 2 teknikere. Resultaterne for præcisionsundersøgelsen for Neg-, LP- og MP-prøver demonstrerede henholdsvis 98,6 %, 100 % og 100 % overensstemmelse. Resultaterne for præcisionsundersøgelsen for HN1:100 og HN1:10 demonstrerede overensstemmelse på henholdsvis 80,6 % og 37,5 %. Reproducerbarhed Undersøgelsen for reproducerbarhed blev udført vha. de samme prøvekategorier, som er angivet ovenfor for præcisionsundersøgelsen. Prøver i hver kategori blev testet tre gange, på 5 forskellige dage, hvor 2 paneler hver dag blev testet af 2 teknikere på 3 kliniske steder ved hjælp af 1 lot reagens (fra sted til sted). Ét (1) af disse kliniske steder deltog i et udvidet studie, hvor 2 yderligere lots reagenser blev testet (fra lot til lot). Resultaterne er vist for hver prøvekategori med dataene fra begge MRSA-stammer samlet. For reproducerbarhed fra klinik til klinik var den overordnede procentvise overensstemmelse 100 % for MP-, LP- og Neg-kategorierne samt henholdsvis 82,2 % og 31,1 % for HN1:100- og HN1:10-kategorierne (se tabel 10). For reproducerbarhed fra lot til lot var den overordnede procentvise overensstemmelse 100 % for MP-, LPog Neg-kategorierne samt henholdsvis 83,3 % og 34,4 % for HN1:100- og HN1:10-kategorierne (se tabel 11). SDPA (Second Derivative Peak Abscissa), et internt kriterie, der bruges til at bestemme det endelige analyseresultat, blev valgt som en yderligere metode til at vurdere analysens reproducerbarhed. De samlede gennemsnitlige SDPA-værdier med varianskomponenter (SD og %CV) er vist i tabel 10 og 11. Kategori Tabel 10: Undersøgelsesresultater for reproducerbarhed fra klinik til klinik ved brug af ét lot af BD MAX MRSA-analysen FORSØGSCENTER SDPA-værdier a Forsøgscenter 1 Forsøgscenter 2 Forsøgscenter 3 Procentvis overensstemmelse Procentvis overensstemmelse Procentvis overensstemmelse Samlet procentvis overensstemmelse Samlet gennemsnit Neg. 30/30 100,0% 30/30 100,0% 30/30 100,0% 100,0% (95,9%, 100,0%) 31,8 0,47 1,5 HN1:100 b 22/30 73,3% 27/30 90,0% 25/30 83,3% 82,2% (73,1%, 88,8%) 32,1 0,85 2,7 HN1:10 b 12/30 40,0% 3/30 10,0% 13/30 43,3% 31,1% (22,5%, 41,3%) 31,8 0,45 1,4 LP 60/60 100,0% 60/60 100,0% 60/60 100,0% 100,0% (97,9%, 100,0%) 31,7 0,66 2,1 MP 30/30 100,0% 30/30 100,0% 30/30 100,0% 100,0% (95,9%, 100,0%) 30,4 0,73 2,4 a For Neg-kategorien gælder de rapporterede SDPA-værdier for prøvebearbejdningskontrollen. For andre kategorier gælder de rapporterede SDPA-værdier for MRSA-målet. b For de høje negative kategorier blev det forventede analyseresultat betragtet som negativt. Derfor blev den procentvise overensstemmelse beregnet for negative resultater. SD % CV 15

16 Tabel 11: Undersøgelsesresultater for reproducerbarhed fra lot til lot ved brug af tre lot af BD MAX MRSA-analysen Kategori LOT Lot 1 Lot 2 Lot 3 Procentvis overensstemmelse Procentvis overensstemmelse Procentvis overensstemmelse Samlet procentvis overensstemmelse SDPA-værdier a Samlet gennemsnit Neg. 30/30 100,0% 30/30 100,0% 30/30 100,0% 100,0% (95,9%, 100,0%) 31,2 0,75 2,4 HN1:100 b 26/30 86,7% 24/30 80,0% 25/30 83,3% 83,3% (74,3%, 89,6%) 31,4 0,79 2,5 HN1:10 b 6/30 20,0% 12/30 40,0% 13/30 43,3% 34,4% (25,4%, 44,7%) 31,6 0,71 2,2 LP 60/60 100,0% 60/60 100,0% 60/60 100,0% 100,0% (97,9%, 100,0%) 31,6 0,73 2,3 MP 30/30 100,0% 30/30 100,0% 30/30 100,0% 100,0% (95,9%, 100,0%) 30,5 0,66 2,2 a For Neg-kategorien gælder de rapporterede SDPA-værdier for prøvebearbejdningskontrollen. For andre kategorier gælder de rapporterede SDPA-værdier for MRSA-målet. b For de høje negative kategorier blev det forventede analyseresultat betragtet som negativt. Derfor blev den procentvise overensstemmelse beregnet for negative resultater. Carryover/krydskontaminering Der blev udført en undersøgelse for at undersøge carryover inden for kørsler og mellem kørsler under bearbejdningen af prøver med høj bakteriel MRSA-belastning i BD MAX MRSA-analysen. Et panel bestående af et højt positivt medlem og et negativt medlem blev anvendt til at forberede mange prøver. En MREJ-type ift. en MRSA-stamme blev anvendt til det højt positive MRSA-panelmedlem (8 x 10 7 CFU/podepind). Det negative medlem indeholdt ikke målanalytter. Tolv (12) replikater af det højt positive panelmedlem og 12 replikater af det negative panelmedlem blev testet ved skiftende negative og positive prøver. Tre (3) teknikere udførte 3 på hinanden følgende kørsler, som i alt udgjorde 9 kørsler af 24 prøver. Der blev ikke opnået falsk positive resultater pga. overførselskontaminering. LITTERATUR 1. Centers for Disease Control and Prevention. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus skin or soft tissue infection in a state prison. Mississippi, MMWR 2001; 50: National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report, data summary from January 1992 to June 2002, issued August Am J Infect Control. 2002; 30: Clinical and Laboratory Standards Institute. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections; Approved Guideline. Document M29 (Refer to the latest edition). 4. Centers for Disease Control and Prevention, and National Institutes of Health. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. Chosewood L.C. and Wislon D.E. (eds) (2009). HHS Publication No. (CDC) Clinical and Laboratory Standards Institute. Molecular Diagnostic Methods for Infectious Diseases; Approved Guideline. Document MM3 (Refer to the latest edition). 6. Clinical and Laboratory Standards Institute. User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline, Document EP12 (Refer to the latest edition). 7. BD MAX System User s Manual (refer to the latest version) BD Diagnostics, Sparks, MD, USA. SD % CV 16