AFP. system. Symbolforklaring

Transkript

1 system da AFP P6 BP66 G4-54/R04 Ændringer er markeret Revideret i august 0 AFP Kundeservice: Kontakt den lokale Abbott-repræsentant, eller find landespecifikke kontaktoplysninger på Anvisningerne i denne brugsanvisning skal følges nøje. Hvis anvisningerne ikke følges, kan testresultaternes pålidelighed ikke garanteres. Symbolforklaring Bestillingsnummer Medicinsk udstyr til in vitrodiagnostik Lotnummer Udløbsdato Serienummer Opbevares ved -8 C Se brugsanvisningen Fabrikant Kontrolnummer RV-celler Reagenslot Ekstra skruelåg Prøvekopper Gummimembran Advarsel: Kan udløse allergisk reaktion Indeholder natriumazid. Udvikler meget giftig gas ved kontakt med syre. Se afsnittet REAGENSER for nærmere oplysninger om de enkelte reagenssymboler.

2 ADVARSEL: Koncentrationen af alfaføtoprotein (AFP) i en given prøve, der er bestemt med analyser fra forskellige fabrikanter, kan variere på grund af forskelle i analysemetoder og reagensspecificitet. Resultater, der afgives fra laboratoriet til lægen, skal indeholde angivelse af den anvendte AFP-analyse. Værdier fra forskellige analysemetoder er ikke direkte sammenlignelige. Hvis analysemetoden til seriel bestemmelse af AFP-niveauer ændres i løbet af overvågningen af en patient, skal der udføres yderligere parallel testning. Inden analyser udskiftes, SKAL laboratoriet gøre følgende:. For cancerbehandling: Kontrollere basisværdierne for patienter, der overvåges serielt.. For prænatal testning: Fastsætte et område for forventede værdier for den nye analyse baseret på serum, plasma og fostervand fra gravide kvinder med konfirmeret graviditetslængde. Vigtigt: Amerikansk lovgivning begrænser denne enhed til salg og distribution af eller på foranledning af en læge eller til et klinisk laboratorium, og anvendelsen begrænses til, af eller på foranledning af en læge. BETEGNELSE ARCHITECT AFP ANVENDELSE ARCHITECT AFP-analysen er en kemiluminescens mikropartikel immunanalyse (CMIA) til kvantitativ bestemmelse af alfaføtoprotein (AFP) i:. Humant serum eller plasma som hjælp til overvågning af sygdomsprogression i løbet af sygdomsforløbet og behandling af patienter med nonseminom testikelcancer.. Humant serum, plasma og fostervand i graviditetsuge 5- som hjælp til påvisning af åbne føtale neuralrørsdefekter (NTD). Når testresultaterne anvendes sammen med ultralydsscanning eller amniografi, udgør de et sikkert og effektivt redskab til påvisning af åben føtal neuralrørsdefekt. RESUME OG ANALYSEFORKLARING Alfaføtoprotein (AFP) i føtalt serum blev opdaget af Bergstrand og Czar i 956. Alfaføtoprotein er et enkeltpolypeptidkædet glykoprotein med en molekylvægt på ca dalton. Stoffets fysisk-kemiske egenskaber og aminosyresammensætning ligner albumins., AFP-syntesen foregår primært i fosterets lever og blommesæk. Det udskilles i fosterets serum og når maksimumniveau omkring graviditetsuge, hvorefter det gradvist falder. Forhøjede AFP-niveauer i serum genfindes herefter under graviditet og ved flere maligne sygdomme. Cancerbehandling Alfaføtoprotein (AFP) blev første gang beskrevet som et humant tumorrelateret protein i 964 af Tatarinov. 4 Siden da er det blevet påvist, at serum-afp over de værdier, der typisk findes hos raske personer, optræder ved flere maligne sygdomme, 5-8 herunder især nonseminom testikelcancer og primært hepatocellulært karcinom. Ved nonseminom testikelcancer er der observeret et direkte forhold mellem incidensen af forhøjede AFP-niveauer og sygdomsstadiet. 9,0 Forhøjede AFP-niveauer er også observeret hos patienter med diagnosticeret seminom med nonseminome elementer, men er ikke observeret hos patienter med seminom alene. 9,, Humant choriongonadotropin (hcg) og AFP er også vigtige indikatorer for overlevelsesprognosen for patienter med avancerede nonseminome testikelgerminalcelletumorer. AFP-målingernes nyttighed ved behandling af patienter med nonseminom testikelcancer er veldokumenteret. 7,,4 AFP-niveauerne falder generelt efter behandling hos patienter i klinisk remission. Postoperative AFPværdier, som ikke returnerer til normalniveau, er et vægtigt tegn på residualtumor. 6,7, Tumorrecidiv ledsages ofte af en stigning i AFP, før progressiv sygdom er klinisk evident. 7,9 Det er rapporteret, at over 70% af patienter med primært hepatocellulært karcinom har forhøjede AFP-niveauer i serum. 5,6,5 Forhøjede AFP-niveauer er i nogle tilfælde fundet i forbindelse med gastrointestinal cancer med eller uden levermetastaser 6 og kun sjældent ved andre maligniteter. 5,6 Der er observeret forhøjede AFP-niveauer i serum under graviditet, ved sygdomme som ataxia teleangiectasia, arvelig tyrosinæmi, teratokarcinom og benigne leversygdomstilstande, f.eks. akut viral hepatitis, kronisk aktiv hepatitis og cirrose. 6,5,7 Forhøjede AFP-niveauer i serum ved benigne leversygdomme er normalt forbigående. 5 AFP-testning anbefales ikke som screeningstest til påvisning af cancer hos befolkningen generelt. Prænatal testning Mange undersøgelser har bekræftet AFP s anvendelighed til tidlig påvisning af åbne føtale neuralrørsdefekter (NTD). 8-0 I USA optræder NTD, primært anencefali og spina bifida, hos - af levendefødte børn og er blandt de mest almindelige medfødte misdannelser., Incidensen af NTD varierer efter geografisk placering og race. -6 Børn med anencefali kan ikke leve, og mellem en tredjedel og halvdelen af alle NTD-tilfælde er netop anencefali. Åben spina bifida kan variere bredt i sværhedsgrad. Rapporter i den videnskabelige litteratur antyder, at der skal tages hensyn til yderligere faktorer ved vurdering af risikoen for NTD. -8 En af dem er moderens vægt. Det er rapporteret, at moderens blodvolumen som en afspejling af vægten påvirker koncentrationen af AFP i maternelt serum (MSAFP) i moderens blodbane. Jo højere moderens vægt er, desto lavere er koncentrationen af MSAFP. 6-9 En anden faktor, der skal tages i betragtning, er maternel diabetes. Det rapporteres, at kvinder med insulinkrævende diabetes har væsentligt lavere MSAFP-niveauer og højere incidens af NTD end kvinder uden diabetes. 7,8,0 AFP-niveauer i serum hos sorte kvinder er gennemsnitligt ca. 0% højere end MSAFPværdierne hos den ikke-sorte befolkning. Der er i litteraturen foreslået en justeringsfaktor eller brug af en egnet normativ database. 5,6 AFP-niveauer i fostervand (AFAFP) opnår maksimalniveau omkring graviditetsuge, hvorefter de falder hurtigt indtil omkring graviditetsuge, og derefter falder de gradvist indtil fødslen. AFP overføres primært til moderens blodbane ved diffusion gennem placenta. Hvis fosteret har en åben neuralrørsdefekt, menes AFP at sive direkte ud i fostervandet, hvor det forårsager uventet høje AFAFP-niveauer. AFAFP når efterfølgende ud i moderens blodbane, hvor det forårsager abnormt høje MSAFP-niveauer. Visse fostermisdannelser som kongenit nyresygdom og atresia esophagia medfører også forhøjede AFAFP-niveauer., Andre fostermisdannelser som omphalocele eller gastroschisis, nyremisdannelser, truende abort, præmatur fødsel og i nogle tilfælde fosterdød 4-7 kan forårsage abnormt høje MSAFP-niveauer. Forhøjede MSAFP-værdier ses også ved flerfostergraviditeter 8 og ved normale enkeltfostergraviditeter, hvor graviditetslængden er undervurderet. Lave MSAFP-værdier er blevet associeret med molagraviditet, missed abortion, graviditas spuria, overvurderet graviditetslængde og Downs syndrom. 9,9 I en rapport med over graviditeter har U.K. Collaborative Study fastslået multipla af medianen (MoM) som den foretrukne metode til at udtrykke AFP-resultater. 8 Først bestemmes AFP-medianværdien for hver graviditetsuge. Derefter rapporteres de individuelle AFP-niveauer som multipla af denne værdi. Denne metode letter sammenligningen af AFPtestresultater på tværs af graviditetsuger og laboratorier. AFP-testning under graviditet anbefales som en effektiv metode til påvisning af kvinder, som potentielt har risiko for at bære et foster med åben neuralrørsdefekt. Anvendt sammen med andre konfirmatoriske analyser som ultralydsscanning og amniografi er AFP-måling et vigtigt redskab til behandling af disse patienter. ANALYSEPRINCIP ARCHITECT AFP-analysen er en totrinsimmunanalyse til kvantitativ bestemmelse af AFP i humant serum, plasma og fostervand og er baseret på CMIA-teknologi med fleksible analyseprocedurer, kaldet Chemiflex. I første trin blandes prøven med paramagnetiske mikropartikler, der er coatet med anti-afp. AFP i prøven binder til mikropartiklerne, der er coatet med anti-afp. I andet trin efter udført vask tilsættes acridinmærket anti-afp-konjugat for at frembringe en reaktionsblanding. Efter endnu en vaskecyklus tilsættes prætrigger- og triggeropløsning til reaktionsblandingen. Den efterfølgende kemiluminescensreaktion måles i form af relative lysenheder (RLU). Mængden af AFP i prøven og mængden af RLU, som optikken i System måler, er direkte proportional. Se kapitel i ARCHITECT-brugermanualen for yderligere oplysninger om systemet og analyseteknologien. REAGENSER Reagenssæt, 00/500 test BEMÆRK: Nogle reagenssæt kan ikke fås i alle lande eller til anvendelse på alle Systems. Kontakt venligst Abbotts ordrekontor for nærmere oplysninger. ARCHITECT AFP Reagent Kit (P6) flaske (6,6 ml/7,0 ml) mikropartikler, der er coatet med anti-afp (mus, monoklonalt), i MES-buffer med okseproteinstabilisator. Minimumskoncentration: 0,% tørstof. Konserveringsmiddel: ProClin 00. flaske (5,9 ml/6, ml) acridinmærket anti-afpkonjugat (mus, monoklonalt) i MES-buffer med okseproteinstabilisator. Minimumskoncentration: 400 ng/ml. Konserveringsmidler: anti mikrobielle midler og natriumazid.

3 Analysefortyndingsopløsning Multi-Assay Manual Diluent (7D8-50) flaske (00 ml) ARCHITECT i Multi-Assay Manual Diluent indeholdende fosfatbufferopløsning. Konserveringsmiddel: antimikrobielt middel. Andre reagenser Pre-Trigger Solution Prætriggeropløsning indeholdende,% (w/v) hydrogenperoxid. Trigger Solution Triggeropløsning indeholdende 0,5 N natriumhydroxid. Wash Buffer Vaskebuffer indeholdende fosfatbufferopløsning. Konserveringsmidler: antimikrobielle midler. VIGTIGE FORHOLDSREGLER Til in vitro-diagnostisk brug Anvisningerne i denne brugsanvisning skal følges nøje. Hvis anvisningerne ikke følges, kan testresultaternes pålidelighed ikke garanteres. Sikkerhedsforanstaltninger VIGTIGT: Brug af dette produkt kræver håndtering af humane prøver. Det anbefales, at alt materiale af human oprindelse betragtes som potentielt smittefarligt og håndteres i overensstemmelse med det amerikanske arbejdsmiljøinstitut OSHA's standard Bloodborne Pathogens. 40 Biosafety Level 4 eller andre gældende sikkerhedsforanstaltninger for biologisk materiale 4,4 bør anvendes ved håndtering af materiale, der indeholder eller mistænkes for at indeholde smittefarlige stoffer. Konjugatet indeholder natriumazid. Udvikler meget giftig gas ved kontakt med syre. Materialet og dets beholder skal bortskaffes på en sikker måde. Følgende advarsler og forholdsregler gælder for disse komponenter: Mikropartikler ADVARSEL: Indeholder methylisothiazoloner. H7 Kan forårsage allergisk hudreaktion. Forebyggelse P6 Undgå indånding af tåge/damp/spray. P7 Tilsmudset arbejdstøj bør ikke fjernes fra arbejdspladsen. P80 Bær beskyttelseshandsker/beskyttelsestøj/ øjenbeskyttelse. Reaktion P0+P5 VED KONTAKT MED HUDEN: Vask med rigeligt vand. P+P Ved hudirritation eller udslæt: Søg P6 lægehjælp. Tilsmudset tøj skal vaskes, før det kan anvendes igen. Materialet og dets beholder skal bortskaffes på en sikker måde. Sikkerhedsdatablade er til rådighed på eller kan fås ved henvendelse til kundeservice. Se kapitel 8 i ARCHITECT-brugermanualen for oplysninger om sikker bortskaffelse af natriumazid og en detaljeret beskrivelse af sikkerhedsforanstaltningerne ved brug. Forholdsregler ved anvendelse Anvend ikke reagenssæt, hvor udløbsdatoen er overskredet. Bland ikke reagenser med andre reagenser fra samme eller andre reagenssæt. Før ARCHITECT AFP-reagenssættet placeres i systemet første gang, skal flasken med mikropartikler blandes grundigt for at få mikropartikler, som har bundfældet sig under transporten, til at resuspendere. For anvisninger vedrørende blanding af mikropartikler henvises til afsnittet PROCEDURE, Analyseprocedure i denne brugsanvisning. Gummimembran SKAL anvendes for at undgå fordampning og kontaminering og for at sikre reagensernes holdbarhed. Hvis ikke gummimembran anvendes som anført i denne brugsanvisning, kan testresultaternes pålidelighed ikke garanteres. Brug rene handsker for at undgå kontaminering, når der sættes gummimembran på en åben reagensflaske. Når den åbne reagensflaske er forsynet med en gummimembran, må flasken ikke vendes, da dette vil medføre udsivning af reagens, hvilket vil kunne have indflydelse på testresultaterne. Med tiden vil tilbagebleven væske kunne tørre fast på gummimembranen. Der vil typisk være tale om indtørrede salte, der ikke har nogen betydning for analysen. Se kapitel 7 i ARCHITECT-brugermanualen for en nærmere beskrivelse af forholdsreglerne ved betjening af systemet. Opbevaring ARCHITECT AFP-reagenssættet skal opbevares ved -8 C i oprejst stilling og kan anvendes straks, efter at det er fjernet fra køl (-8 C). Reagenserne er holdbare indtil udløbsdatoen, hvis de opbevares og håndteres efter forskrifterne. ARCHITECT AFP-reagenssættet kan opbevares i System i højst 0 dage, hvorefter det skal bortskaffes. Se kapitel 5 i ARCHITECTbrugermanualen for oplysninger om styring af reagensholdbarhed i systemet. Reagenserne kan opbevares i eller uden for System. Hvis reagenserne fjernes fra systemet, bør de opbevares oprejst ved -8 C (med gummimembran og nyt skruelåg). Det anbefales i så fald at placere dem i de originale bakker og æsker, hvori de står korrekt. Hvis flasken med mikropartikler ikke står oprejst (forsynet med gummimembran) på køl uden for systemet, skal reagenssættet bortskaffes. Se kapitel 5 i ARCHITECT-brugermanualen for oplysninger om udtagning af prøver. Indikation af reagenshenfald Hvis en værdi ligger uden for det specificerede område, kan dette være et tegn på reagenshenfald eller procedurefejl. Tilhørende testresultater er ugyldige, og prøverne skal testes igen. Rekalibrering kan være påkrævet. Se kapitel 0 i ARCHITECT-brugermanualen for oplysninger om fejlfinding. INSTRUMENTPROCEDURE ARCHITECT AFP-analysen er udviklet til brug på System. ARCHITECT AFP-analysefilen (analysenummer 00) skal installeres på System, før analysen udføres. Se kapitel i ARCHITECT-brugermanualen for nærmere oplysninger om installation af analysefil samt om visning og ændring af analyseparametre. Se kapitel 5 i ARCHITECT-brugermanualen for yderligere oplysninger om udskrivning af analyseparametre. Se ARCHITECT-brugermanualen for en detaljeret beskrivelse af systemprocedurer. Standardresultatenheden for ARCHITECT AFP-analysen er ng/ml. Det er muligt at vælge en anden resultatenhed, IU/ml, til frigivelse af resultater. Dette gøres ved at ændre analyseparametret Result units til IU/ml. Systemet benytter omregningsfaktor 0,8: (Koncentration i ng/ml) x (0,8) = IU/ml. PRØVETAGNING OG KLARGØRING Prøvetyper Serum-, plasma- eller fostervandsprøver kan anvendes med ARCHITECT AFP-analysen. De prøvetagningsrør, der er angivet nedenfor, er verificeret til brug sammen med serum og plasma med ARCHITECT AFP-analysen. Ingen andre prøvetagningsrør er blevet testet med denne analyse. Humant serum, plastik (herunder serum udtaget i plastikgelglas). Humant plasma udtaget i: natriumheparin, plastik dikalium-edta, plastik litiumheparin, plastik natrium-edta, glas Serum- og plasmaprøver bør udtages aseptisk med henblik på at undgå hæmolyse. Til analyse af maternelt serum eller plasma skal blodprøverne udtages før amniocentese. Det er påvist, at forhøjede AFP-niveauer kan optræde i maternelt serum eller plasma efter amniocentese. 44 Ved vurdering af serielle prøver skal samme type prøvemateriale anvendes under hele vurderingen. Udtagning af fostervand bør foretages af uddannet personale og udføres aseptisk under overholdelse af korrekte sikkerhedsforanstaltninger i forhold til både fosterets og moderens sikkerhed. Prøver med synlig blodtilblanding bør undersøges for forekomst af fosterblod med Kleihauer-Betkes-teknikken og/eller for føtalt hæmoglobin ved elektroforese, immunelektroforese eller andre tilgængelige teknikker. Fostervandsprøver, der er kontamineret med fosterblod, kan udvise abnormt høje AFP-værdier, hvilket kan føre til fejlfortolkning af testresultaterne.

4 Der er ikke fastlagt ydeevne for anvendelsen af kadaverprøver eller andre kropslige væsker end humant serum, plasma og fostervand. System lerer ikke prøvetypen. Det er brugerens opgave at lere, at den korrekte prøvetype anvendes til ARCHITECT AFP-analysen. Forhold vedrørende prøvemateriale Anvend ikke prøver, der er: varmeinaktiverede puljede kraftigt hæmolyserede tydeligt mikrobielt kontaminerede For at opnå de mest præcise resultater bør serum- og plasmaprøver være fri for fibrin, røde blodlegemer og andre udfældninger. Serumprøver udtaget fra patienter i antikoagulant eller trombolytisk behandling kan indeholde fibrin på grund af ufuldstændig koagulation. Vær forsigtig ved håndtering af patientprøver for at undgå krydskontaminering. Det anbefales at bruge engangspipetter eller -pipettespidser. Kontrollér alle prøver for bobler for at få de bedst mulige resultater. Fjern alle bobler med en rørepind, inden analysen påbegyndes. Anvend en ny rørepind til hver prøve for at undgå krydskontaminering. Klargøring Følg rørfabrikantens brugervejledning for serum- og plasma prøvetagningsrør. Passiv separation ved henstand er ikke tilstrækkelig til prøveforberedelse. Frosne prøver skal forberedes som følger: Frosne prøver skal optøs helt inden blanding. Bland optøede prøver grundigt ved at vortexe dem ved lav hastighed eller ved at vende dem 0 gange. Kontrollér prøverne visuelt. Hvis en lagdeling kan konstateres, skal prøverne vendes yderligere, indtil de er synligt homogene. Hvis prøverne ikke blandes grundigt, kan det give upræcise resultater. Centrifugér blandede prøver, som beskrevet nedenfor. For at sikre overensstemmende resultater skal prøver overføres til et centrifugerør og centrifugeres ved RCF (relativ centrifugalkraft) i 0 minutter, inden analysen påbegyndes, hvis de indeholder fibrin, røde blodlegemer eller andre udfældninger, eller de har været nedfrosset og optøet. Centrifugerede prøver med et lipidlag i overfladen skal overføres til en prøvekop eller et sekundært rør. Sørg for, at kun den klare del af prøven og ikke det lipæmiske materiale overføres. Overfør den klare del af prøven til en prøvekop eller et sekundært rør før testning. Opbevaring Serum eller plasma Prøverne kan opbevares enten sammen med eller adskilt fra koaglet, de røde blodlegemer eller separatorgelen i op til dage ved stuetemperatur eller op til 7 dage ved -8 C. Hvis testningen bliver forsinket i mere end 7 dage, skal serum og plasma separeres fra koaglet, de røde blodlegemer eller gelen og opbevares ved -0 C eller koldere. Undgå mere end 5 nedfrysnings-/optøningscyklusser. Fostervand Prøver kan opbevares i: op til dage ved stuetemperatur eller op til 5 dage ved -8 C. Hvis testningen bliver forsinket i mere end 5 dage, skal prøverne opbevares ved -0 C eller koldere. Undgå mere end nedfrysnings-/optøningscyklusser. Forsendelse Det anbefales at fjerne prøvematerialet fra koaglet, de røde blodlegemer eller gelen inden forsendelse. Ved forsendelse skal prøverne pakkes og mærkes i overensstemmelse med gældende nationale og internationale regler for transport af kliniske prøver og smittefarlige stoffer. Prøverne kan forsendes ved stuetemperatur, ved -8 C (med køleelement) eller nedfrosset (på tøris). Ovenstående opbevaringstider må ikke overskrides. PROCEDURE Medfølgende produkter P6 ARCHITECT AFP Reagent Kit Nødvendigt tilbehør og udstyr System ARCHITECT AFP-analysefil fra System e-assay CD-ROM, som findes på System Assay CD-ROM P6-0 ARCHITECT AFP Calibrators P6-0 ARCHITECT AFP Controls eller andet materiale 7D8-50 Multi-Assay Manual Diluent Pipetter eller pipettespidser (valgfrit) til at dispensere de angivne mængder. Se kapitel 9 i ARCHITECT-brugermanualen for oplysninger om nødvendigt udstyr til brug i forbindelse med vedligeholdelsesprocedurer. Analyseprocedure Før ARCHITECT AFP-reagenssættet placeres i systemet første gang, skal flasken med mikropartikler blandes grundigt for at få mikropartikler, som har bundfældet sig under transporten, til at resuspendere. Når mikropartiklerne er blevet placeret i systemet første gang, er der ikke behov for yderligere blanding. Vend flasken med mikropartikler 0 gange. Kontrollér, at mikropartiklerne er resuspenderet i flasken. Hvis der stadig sidder mikropartikler fast i flasken, skal flasken vendes, indtil mikropartiklerne er helt resuspenderet. Hvis mikropartiklerne ikke kan resuspenderes, MÅ DE IKKE ANVENDES. Kontakt Abbotts kundeservice. Når mikropartiklerne er resuspenderet, sættes en gummimembran på flasken. Se afsnittet Forholdsregler ved anvendelse i denne brugsanvisning for oplysninger om anbringelse af gummimembran på flasker. Anbring ARCHITECT AFP-reagenssættet i System. Kontrollér, at alle nødvendige reagenser forefindes. Kontrollér, at alle reagensflasker er forsynet med en gummimembran. Bestil evt. kalibrering. Se kapitel 6 i ARCHITECT-brugermanualen for oplysninger om bestilling af kalibrering. Bestil testene. Se kapitel 5 i ARCHITECT-brugermanualen for oplysninger om bestilling af patientprøver og ler samt generelle betjeningsprocedurer. Prøvekoppens minimumsvolumen udregnes af systemet og fremgår af bestillingsudskriften (Orderlist report). Der må højst udføres 0 gentagelser fra samme prøvekop. For at reducere følgen af fordampning skal det leres, at der er nok prøvemateriale i prøvekoppen, inden testen køres. Hasteprøver: 75 µl til den første AFP-test plus 5 µl til hver yderligere AFP-test fra samme prøvekop. timer i systemet: 50 µl til den første AFP-test plus 5 µl til hver yderligere AFP-test fra samme prøvekop. > timer i systemet: Udskift med en ny prøve (patientprøver, ler og kalibratorer). Ved brug af primære og sekundære rør bør prøvemåler anvendes for at sikre, at der er nok prøvemateriale. Klargør kalibratorer og ler. Bland ARCHITECT AFP-kalibratorer og -ler ved at vende dem forsigtigt inden anvendelse. For at opnå de nødvendige mængder af ARCHITECT AFPkalibratorer og -ler holdes flaskerne lodret, mens 4 dråber af hver kalibrator eller dispenseres i de respektive prøvekopper. Isæt prøverne. Se kapitel 5 i ARCHITECT-brugermanualen for oplysninger om isætning af prøver. 4

5 Tryk på RUN. Se kapitel i ARCHITECT-brugermanualen for yderligere oplysninger om betjening. For at opnå optimal ydeevne er det vigtigt at følge procedurerne for rutinevedligeholdelse, som er beskrevet i kapitel 9 i ARCHITECTbrugermanualen. Hvis laboratoriets procedurer kræver hyppigere vedligeholdelse, bør disse følges. Prøvefortyndingsprocedurer Prøver med en AFP-koncentration over.000 ng/ml markeres som > ng/ml og kan fortyndes enten automatisk eller manuelt. Automatiseret fortyndingsprotokol til serum- og plasmaprøver Hvis den automatiserede fortyndingsprotokol vælges, skal forholdet :0 benyttes for serum og plasma. Systemet beregner automatisk prøvens koncentration før fortyndingen og afgiver resultatet. Andre fortyndinger end den automatiserede fortynding af serum/ plasma i forholdet :0 bør udføres manuelt. Automatiseret fortyndingsprotokol til fostervandsprøver BEMÆRK: Fostervandsprøver skal fortyndes. Hvis den automatiserede fortyndingsprocedure vælges, må der for fostervand KUN ANVENDES forholdet :40. Systemet beregner automatisk prøvens koncentration før fortyndingen og afgiver resultatet. Andre fortyndinger end den automatiserede fortynding af fostervand i forholdet :40 bør udføres manuelt. Manuel fortyndingsprocedure til alle prøvetyper BEMÆRK: Til manuelle fortyndinger skal der anvendes ARCHITECT i Multi-Assay Manual Diluent (7D8-50). Til en :0-fortynding tilsættes 50 μl patientprøve til 950 μl Multi-Assay Manual Diluent (7D8-50). Til en :0-fortynding tilsættes 0 μl patientprøve til ml ARCHITECT i Multi-Assay Manual Diluent (7D8-50). Det er brugerens opgave at indtaste fortyndingsfaktoren på skærmbilledet til bestilling af patientprøver og ler. Systemet anvender denne fortyndingsfaktor til automatisk at beregne prøvens koncentration før fortynding. Se kapitel 5 i ARCHITECT-brugermanualen for yderligere oplysninger om bestilling af fortyndinger. Kalibrering For at udføre en ARCHITECT AFP-kalibrering skal kalibrator A, B, C, D, E og F testes i dobbeltbestemmelse. Kalibratorerne bør køres som hasteprøver. Kalibreringsområde: 0 til.000 ng/ml. En enkelt prøve af hvert niveau skal testes for at evaluere analysens kalibrering. Bestil ler som beskrevet i afsnittet Analyseprocedure. Kontrollér, at værdierne ligger inden for de områder, der er anført i brugsanvisningen til lerne. Når en ARCHITECT AFP-kalibrering er godkendt og gemt, kan alle efterfølgende prøver testes uden yderligere kalibrering, medmindre: Et reagenssæt med et nyt lotnummer tages i brug. Kontrollerne ligger uden for det specificerede område. Se kapitel 6 i ARCHITECT-brugermanualen for yderligere oplysninger om udførelse af analysekalibrering. PROCEDURER FOR KVALITETSKONTROL For at overholde kravene til ARCHITECT AFP-analysen bør alle niveauerne testes i enkeltbestemmelse gang i døgnet på kørselsdage. Hvis laboratoriets procedurer for kvalitets kræver hyppigere brug af ler til verifikation af testresultater, bør disse procedurer følges. Der kan testes yderligere ler i henhold til lokale og/eller nationale forskrifter, akkrediteringskrav og laboratoriets kvalitetsprogram. Det anbefales, at det enkelte laboratorium fastsætter sine egne middelværdier og områder for ler til overvågning af analysens ydeevne. Hvis en værdi ligger uden for det specificerede område, er de tilhørende testresultater ugyldige, og prøverne skal retestes. Rekalibrering kan være nødvendig. Når der er fastsat AFP-medianværdier for maternelt serum/plasma og fostervand, bør middelværdierne ligge inden for de acceptgrænser, der er fastsat af laboratoriet. Acceptabiliteten af hver kalibrering bør nøje overvåges ved hjælp af lerne i henhold til CLSI I/LA5-A, 45 National Academy of Clinical Biochemistry (NACB) 46 og/eller laboratoriets interne betjeningsprocedurer for at påvise alle udsving, som kan kræve rekalibrering af analysen eller reevaluering af medianværdierne for maternelt serum/plasma og fostervand. Verifikation af analysens dokumenterede egenskaber Se appendiks B i ARCHITECT-brugermanualen for procedurer til verifikation af analysens dokumenterede egenskaber. ARCHITECT AFP-analysen tilhører metodegruppe. RESULTATER Til udregning af kalibreringskurven anvender ARCHITECT AFP-analysen en logistisk 4-parameterdatareduktionsmetode (4PLC, Y-vægtet). Andre resultatenheder Standardresultatenheden for ARCHITECT AFP-analysen er ng/ml. Hvis resultatenheden IU/ml vælges, benytter systemet omregningsfaktor 0,8. Omregningsformel: (Koncentration i ng/ml) x (0,8) = IU/ml. For at konvertere værdier for fostervand til μg/ml skal den afgivne AFPkoncentration (ng/ml) divideres med.000, da denne beregning ikke vil blive foretaget automatisk. Flag Nogle resultater har meddelelser i flagfeltet. Se kapitel 5 i ARCHITECTbrugermanualen for en beskrivelse af de flag, der kan forekomme i dette felt. Måleområde (rapporterbart område) Måleområdet er defineret som det område af værdier i ng/ml, som opfylder kriterierne for acceptabel ydeevne for både impræcision og bias for en ufortyndet prøve. I de studier, der er beskrevet i denne brugsanvisning, lå området fra,00 ng/ml (kvantiteringsgrænse - LoQ) til.000,00 ng/ml. Hvis den automatiserede fortyndingsprotokol med forholdet :0 anvendes, kan analysen afgive værdier op til 0.000,00 ng/ml. Hvis den automatiserede fortyndingsprotokol med forholdet :40 anvendes, kan analysen afgive værdier op til ,00 ng/ml. PROCEDUREBEGRÆNSNINGER Hvis AFP-resultaterne ikke stemmer overens med den kliniske udredning, anbefales det at foretage yderligere test for at konfirmere resultatet. Til diagnostisk brug bør resultaterne anvendes sammen med andre data, som f.eks. symptomer, resultater fra andre analyser, kliniske indtryk, osv. Prøver fra patienter, der har modtaget præparater med musemonoklonale antistoffer til diagnosticering eller behandling, kan indeholde humane anti-mus-antistoffer (HAMA-effekt). 47,48 Sådanne prøver kan udvise afvigende værdier ved anvendelse af reagenssæt såsom ARCHITECT AFP, der indeholder musemonoklonale antistoffer. 47 Heterofile antistoffer i humant serum kan reagere med reagensimmunglobuliner og dermed interferere med in vitro-immunanalyser. 49 Patienter, som ofte er i kontakt med dyr eller serumprodukter fra dyr, kan have tendens til denne interferens, og afvigende værdier kan ses. Yderligere oplysninger kan være påkrævet til diagnosticering. Selvom ARCHITECT AFP-analysen specifikt er udviklet til at minimere effekten af HAMA og heterofile antistoffer, kan analyseresultater, der ikke stemmer overens med andre kliniske observationer, kræve yderligere information for at stille en diagnose. ARCHITECT AFP-analysen er et værdifuldt redskab til behandling af patienter med nonseminom testikelcancer, når den anvendes sammen med oplysninger fra den kliniske evaluering og andre diagnostiske procedurer. Forhøjede koncentrationer af AFP i serum er også observeret ved ataxia telangiectasia, arvelig tyrosinæmi, primært hepato cellulært karcinom, teratokarcinom, gastrointestinal cancer med og uden levermetastaser og benigne leversygdomstilstande som akut viral hepatitis, kronisk aktiv hepatitis og cirrose. ARCHITECT AFP-analysen bør ikke anvendes som screeningstest for cancer. Der KAN IKKE foretages gyldig måling af AFP i maternelt serum eller plasma efter amniocentese, og maternelle serum- eller plasmaprøver SKAL derfor udtages FØR amniocentese. Se afsnittet PRØVETAGNING OG KLARGØRING i denne brugsanvisning for yderligere oplysninger. Fostervandsprøver, der er kontamineret med fosterblod, kan udvise abnormt høje AFP-værdier, hvilket kan føre til fejlfortolkning af testresultaterne. Prøver med synlig blodtilblanding bør undersøges for forekomst af fosterblod med Kleihauer-Betkes-teknikken og/eller for føtalt hæmoglobin ved elektroforese, immunelektroforese eller andre tilgængelige teknikker. Se afsnittet PRØVETAGNING OG KLARGØRING i denne brugsanvisning for yderligere oplysninger. Pålideligheden af MSAFP-evaluering ved prænatal testning afhænger af præcis bestemmelse af graviditetslængden. En forkert vurdering af graviditetslængden kan føre til en forkert vurdering af risikoen for NTD. Hvis graviditetslængden er usikker, er det vigtigt med en pålidelig ultralydsscanning. 5

6 Selv om forhøjede MSAFP-niveauer angiver øget risiko for NTD, er de ikke diagnostiske. Forhøjede koncentrationer af AFP i serum er set ved visse cancerformer og visse ikke-maligne sygdomme som beskrevet ovenfor og kan derfor være tegn på sygdomstilstande hos moderen. Andre sygdomstilstande som placentamisdannelser, åbne føtale misdannelser som omphalocele eller gastroschisis (bugvægsdefekter), føtale nyremisdannelser, truende eller overhængende abort og fosterdød associeres med forhøjede MSAFP-niveauer. Forhøjede MSAFP-niveauer er også blevet associeret med præmatur fødsel og lav fødselsvægt og er set ved flerlingefødsler. I sjældne tilfælde kan der være forhøjede MSAFP-niveauer ved upåvirket graviditet med et enkelt levedygtigt foster. Konfirmatorisk testning som amniocentese til AFAFP-evaluering, højopløsningsultralydsscanning eller amniografi udgør en vigtig del af AFP-testningen. Se afsnittet PRØVETAGNING OG KLARGØRING i denne brugsanvisning for oplysninger om prøvebegrænsninger. FORVENTEDE VÆRDIER Dataene i afsnittet FORVENTEDE VÆRDIER er genereret ved hjælp af 000/i 000 SR Systems. Fordelingen af ARCHITECT AFP-værdierne blev bestemt i 400 prøver fra tilsyneladende raske personer (00 mænd og 00 kvinder), i 8 prøver fra patienter med ikke-maligne sygdomme og i 4 prøver fra patienter, der var diagnosticeret med maligne sygdomme. Dataene er vist i følgende tabeller. Fordelingen af ARCHITECT AFP-værdier Fordelingen af værdier (%) efter AFP-koncentrationsområde i ng/ml Gruppe/ 0 - >8,78 - >5 - >00 - >500 - >000 kategori n 8,78 5, >000 Tilsyneladende raske ,5,0 0,5 a 0,0 0,0 0,0 0,0 a Disse prøver indeholdt AFP-koncentrationer på 5,6 og 7,8 ng/ml. De observerede nonparametriske centrale 95% af 400 tilsyneladende raske personer lå fra 0,89 til 8,78 ng/ml. Det anbefales, at laboratoriet fastsætter sit eget referenceområde for den population, der undersøges. Fordelingen af ARCHITECT AFP-værdier Fordelingen af værdier (%) efter AFP-koncentrationsområde i ng/ml Gruppe/ 0 - >8,78 - >5 - >00 >500 - >000 kategori n 8,78 5, >000 Ikke-maligne sygdomme Cirrose 49 98,0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 Urogenital 6 00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 Hepatitis 49 90,6 6,7,0 0,0 0,0 0,0 0,7 Pankreatitis 4 9,9 7, 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 Maligne sygdomme a Gastrointestinal 64 98,4,6 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 Hepatocellulær 9 69,0 0,0 7, 0,0 0,0 0,0,8 Pankreatisk 4 85, 0,0 5,9,9 0,0,9,9 Testikulært nonseminom 7 87,5,4 9,7,4 0,0 0,0 0,0 Testikulært seminom 5 00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 a Prøverne med nonseminom testikelcancer var fra behandlede patienter. Sygdomsstatus var ukendt for prøver fra andre maligne sygdomme. AFP-værdier i maternelt serum og fostervand Det er vigtigt, at laboratoriet fastsætter egne middelværdier for hver graviditetsuge for maternelt serum og fostervand på grund af forskelle i populationer forskellige steder. AFP-værdier bør være udtrykt som multipla af medianen (MoM), som vist i beregningen nedenfor: AFP-prøvekoncentration MoM = Median for AFP-koncentration for graviditetsuge Laboratoriet bør forsøge at indsamle cirka 00 prøver eller flere for hver graviditets uge for at beregne medianværdier 50 og derefter anvende den afskærings værdi (MoM), som er bedst egnet til behovet for specificitet og sensitivitet. I alt blev 685 maternelle serumprøver og 687 fostervandsprøver fra upåvirkede graviditeter eller lavrisikograviditeter med et enkelt foster evalueret med ARCHITECT AFP-analysen. AFP-værdier udtrykt som regresserede medianer og multipla af de regresserede medianer (MoM) for graviditetsuge 5- vises i nedenstående tabeller. AFP-værdier i maternelt serum Regresserede medianer a (ng/ml) Multipla af regresserede medianer (ng/ml) n,0,5,0 5 0,7 64,5 80,44 96, ,86 7,7 9,6 0, ,4 84,48 05,60 6, ,40 96,79 0,99 45, ,45 0,90 8,6 66, ,5 7,07 58,84 90, ,80 45,59 8,99 8,9 a De regresserede medianværdier er bestemt med en vægtet loglineær regressionsanalyse. 8 AFP-værdier i fostervand Multipla af regresserede medianer (µg/ml) Regresserede medianer a (µg/ml) n,0,5, ,4,8 4,0 49, 6 08,8 6,76,45 40, ,9,8 7,7, ,89 7,79, 6, ,5 4,50 8,, ,9,8 4,78 7,74 6 4,8 9,64,05 4,46 a De regresserede medianværdier er bestemt med en vægtet loglineær regressionsanalyse. 8 Bemærk: AFP-værdierne er tildelt på baggrund af afsluttede graviditetsuger. For eksempel tildeles en prøve, der er udtaget på dag (uge 8, dag 6), uge 8, da der kun er afsluttet 8 uger plus 6 dage af graviditeten. Klinisk specificitet og sensitivitet Estimeringerne for ARCHITECT AFP-analysens specificitet og sensitivitet (og tilhørende 95%-konfidensintervaller) blev fastlagt for maternelt serum og fostervand ved forskellige multipla af medianen (MoM). Som den er defineret her, udtrykker specificiteten sandsynligheden for, at testen vil være negativ, hvis der ikke er forekomst af åben neuralrørsdefekt (open NTD), og sensitiviteten udtrykker sandsynligheden for, at testen vil være positiv ved forekomst af åben neuralrørsdefekt (open NTD), Specificitetstabellen indeholder data om upåvirkede graviditeter med et enkelt foster fra graviditetsuge 5-, som er opnået med ARCHITECT AFP-analysen. Dataene er vist i følgende tabel. n Maternelt serum 68 Graviditetsuge Graviditetsuge Prøvetype Fostervand Specificitet (95%-konfidensinterval) efter multipla af medianen (MoM),0,5,0 95,45% 98,4% (9,6%, 96,89%) (96,95%, 99,09%) 98,65% 99,0% (96,0%, 99,7%) (96,78%, 99,89%) 99,7% (98,94%, 99,96%) 99,55% (97,5%, 99,99%) Sensitivitetstabellen viser data om bekræftet påvirkede enkelt fostergraviditeter, som er opnået med ARCHITECT AFP-analysen. Dataene er vist i følgende tabel: n Maternelt serum Prøvetype Fostervand 9 Sensitivitet (95%-konfidensinterval) efter multipla af medianen (MoM),0,5,0 95,4% (76,8%, 99,88%) 00,00% (8,5%, 00,00%) 80,95% (58,09%, 94,55%) 94,74% (7,97%, 99,87%) 7,4% (47,8%, 88,7%) 94,74% (7,97%, 99,87%) 6

7 Overvågning af seriel AFP-ydeevne Ændringer, der observeres i serielle AFP-analyseværdier, bør evalueres sammen med fysiske undersøgelser, histologi/patologi og andre kliniske evalueringsprocedurer ved overvågning af nonseminom testikel cancer. Referenceændringsværdien (RCV) blev anvendt til at fastlægge, om der opstod en signifikant ændring i AFP. 56 Til denne beregning blev RCV for hver analyse (ARCHITECT AFP og sammenligningsanalysen) udledt ved at tage den publicerede biologiske variation for AFP 57 og den totale impræcision for den specifikke analyse i betragtning. RCV for ARCHITECT AFP-metoden blev beregnet til at være 9,% og værdien for sammenligningsanalysen til at være 9,98%. Der blev taget mindst serielle prøver fra hver af de 7 personer, som blev analyseret for at fastlægge ændringen i AFP-koncentrationen pr. sekventielle par (n=07). Dataene er vist i følgende tabeller. Ændring i sygdomsstatus % ændring i AFP R n (%) S n (%) NED n (%) P n (%) Total n (%) > RCV-øgning (,8) (,45) (4,5) (,86) (,04) Ingen signifikant ændring (9,66) (8,6) (,8) (8,70) (70,5) > RCV-reduktion (,86) (5,80) (,4) (4,5) (6,4) Total (6,9) (5,60) (40,58) (6,9) (00,00) R = Responderende; S = Stabil; NED = Ingen tegn på sygdom; P = Progression. Ændring i sygdomsstatus Ingen % ændring i AFP Progression progression Total > 9,% øgning 8 (A) 9 (B) 7 (A+B) 9,% øgning 7 (C) 5 (D) 80 (C+D) Total 5 (A+C) 7 (B+D) 07 (A+B+C+D) Specificitet = D / (B+D) 00% = 88,95%; 95% CI = 84,5% til 9,55% Sensitivitet = A / (A+C) 00% =,86%; 95% CI = 9,8% til 40,00% Negativ prædiktiv værdi = D / (C+D) 00% = 85,00%; 95% CI = 78,4% til 90,68% Positiv prædiktiv værdi = A / (A+B) 00% = 9,6%; 95% Cl =,00% til 5,7% Derudover blev prøverne analyseret på basis af hver enkelt testperson. Effekten er påvist, når summen af sensitivitet og specificitet er mere end én. I dette studie blev RCV-effekten af overvågning af testikelcancer fastlagt til at være, med et 95 %-konfidensinterval fra 0,98 til,5. Ændringen i AFP-koncentrationsresultaterne for både ARCHITECT AFP-analysen og sammenlignings-afp-analysen blev analyseret for overensstemmelse ved hjælp af de respektive RCV er. Sammenlignings-AFP > 9,98% 9,98% ARCHITECT AFP øgning øgning Total > 9,% øgning 8 (A) 9 (B) 7 (A+B) 9,% øgning (C) 66 (D) 78 (C+D) Total 0 (A+C) 75 (B+D) 05 (A+B+C+D) Samlet overensstemmelse = (A+D) / (A+B+C+D) 00% = 89,76%; 95% CI = 84,77% til 9,55% Positiv overensstemmelse = A / (A+C) 00% = 60,00%; 95% CI = 40,60% til 77,4% Negativ overensstemmelse = D / (B+D) 00% = 94,86%; 95% CI = 90,46% til 97,6% YDEEVNE Alle studier af ydeevne blev gennemført på 000/i 000 SR Systems. Analyseresultater fra de enkelte laboratorier kan variere fra de viste data. Præcision ARCHITECT AFP-analysen er udviklet til at have en intern laboratorieimpræcision på 7,5% (total) %CV for prøver mellem 0 og.000 ng/ml og en standard afvigelse på 0,75 for prøver med mindre end 0 ng/ml og ned til kvantiteringsgrænsen (dvs.,0 ng/ml). Systemreproducerbarhed Der blev udført et femdagespræcisionsstudie af ARCHITECT AFP-analysen baseret på retningslinjer fra National Committee for Clinical Laboratory Standards' (NCCLS) dokument EP5-A 5 og Clinical and Laboratory Standards Institutes (CLSI) dokument EP5-A. 5 Testning blev udført på laboratorier med lot ARCHITECT AFP-reagenser, -kalibratorer og -ler og 000/i 000 SR -instrument pr. laboratorium. Tre ler og 5 humane serumpaneler blev analyseret i firedobbelt bestemmelse gange om dagen i 5 dage. Resultaterne er vist i følgende tabel. Middelværdi (ng/ml) Intraseriel kørsel Samme dag Intern laboratoriepræcision (total) a Præcision inkl. variation mellem laboratorier Præcision inkl. variation mellem lotnumre Præcision inkl. variation mellem laboratorier og lotnumre (generel) b SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV Prøve n Lav 60 9,46 0,685,5 0,747,8 0,747,8 0,797 4, 0,8 4, 0,80 4, Mellem 60 0,65 7,50,7 7,987,9 7,987,9,984 6,9 7,9 8,5 7,9 8,5 Høj 60 97,0 45,46 4,7 46,9 4,8 46,450 4,8 6,066 6,5 65,66 6,7 65,89 6,8 Panel 60,95 0,4,9 0,7 4, 0,8 4,4 0,9 8, 0,78 9,4 0,78 9,4 Panel 60 9,47 0,55,7 0,59,8 0,77 4,0 0,506 5, 0,486 5, 0,57 5,6 Panel 60 59,6 5,0 4, 5,60 4, 6,50 4,5 4,77 7, 50,677 8,6 50,677 8,6 Panel ,80 70,406 4,7 75,99 5,0 8,050 5,4 90,69 6,0 90,69 6,0 90,69 6,0 Panel ,5 79,509 4,6 86, 4,9 89,956 5, 00,6 5,8 00,6 5,8 00,6 5,8 a Intern laboratorievariabilitet (total) omfatter følgende varianskomponenter: intraseriel, samme dag og dag til dag. b Den generelle variabilitet omfatter følgende varianskomponenter for interaktion: intraseriel, samme dag, dag til dag, lot til lot, lab. til lab. og lot-lab. Intern laboratoriepræcision Der blev udført et studie baseret på retningslinjer fra NCCLS-dokument EP5-A. 5 Testning blev udført med lot ARCHITECT AFP-reagenser og -kalibratorer, lot ARCHITECT AFP-ler og 4 instrumenter. Tre ler og 5 humane serumpaneler blev analyseret i minimum dobbeltbestemmelse gange om dagen i 0 dage. Til hvert reagenslot anvendtes den samme kalibreringskurve i hele studiet. Dataene er vist i følgende tabel. 7

8 Instrument i 000 SR () i 000 SR () i 000 () i 000 () Reag.- lot Prøve n Middelværdi (ng/ml) Intraseriel kørsel Intern lab.- præcision (total) a SD %CV SD %CV Lav 0 9,8 0,7,6 0,7,6 Mellem 0 99,,65,6,6,6 Høj 0 950,5 6,4,7 7,00,8 Lav 0 0,0 0,49,7 0,49,7 Mellem 0 95,9,75,4,04,6 Høj 0 98,69 6,40,8 7,68,9 Lav 0 0, 0,48, 0,86,4 Mellem 0 98,45,74,4,058,5 Høj 0 955,96 7,89,8 7,89,8 Panel 0,0 0,070, 0,08,7 Panel 0 9,54 0,9,0 0,0, Panel 0 577,58,7,,977,4 Panel ,74 4,47,7 47,765, Panel ,5 4,5,5 5,5,9 Panel 0,0 0,060,9 0,065, Panel 0 9,67 0,88,9 0,0, Panel 0 564,0,445,4 4,58,5 Panel ,9 4,567,9 44,077,0 Panel ,9 50,97,9 54,44, Panel 0,5 0,06,9 0,068, Panel 0 9,7 0,90,0 0,97,0 Panel 0 559,7,05,,05, Panel ,94 4,967,9 45,69, Panel ,06 5,49,0 55,58, Lav 0 9,5 0,40, 0,49, Mellem 0 9,55,896,0 4,6, Høj 0 95,64 0,8,,57,4 Lav 0 9,60 0,460, 0,476,4 Mellem 0 9,9 4,090, 4,, Høj 0 97,9 5,48,8 6,696,9 Lav 0 9,46 0,4, 0,48, Mellem 0 94,9,60,8,60,8 Høj 0 94,88 5,44,7 6,75,8 Panel 0,05 0,075,5 0,08,7 Panel 0 9,6 0,04, 0,05, Panel 0 569,00 5,65,8 6,04,8 Panel ,79 56,56,7 60,769 4,0 Panel ,54 6,9,6 70,9,9 Panel 0,0 0,070, 0,074,4 Panel 0 9,68 0,86,9 0,, Panel 0 55,4,4,4,97,5 Panel ,4 46,8, 49,57,4 Panel ,8 5,646, 56,9, Panel 0,87 0,07,5 0,077,7 Panel 0 9, 0,7,6 0,6,8 Panel 0 58,7 4,56,5 6,69,8 Panel ,89 44,,0 45,569, Panel ,40 46,687,8 49,78,0 a Intern laboratorievariabilitet (total) omfatter varianskomponenterne intraseriel, samme dag og dag til dag. WHO-genfindelse ARCHITECT AFP-analysen er udviklet til at have et genfindelsesområde på 00 ± 0% ved analysering af prøver, der er beriget med kendte AFP-mængder, ved hjælp af Verdenssundhedsorganisationens (WHO). internationale standard 7/5. Der blev udført et studie med 6 serumprøver med et lavt AFPniveau og 4 fostervandsprøver. Serumprøverne blev beriget med Verdenssundhedsorganisationens (WHO). internationale standard 7/5 for at fremstille patientprøver for hele analysens måleinterval. Fostervandsprøverne blev fortyndet i forholdet :40 med ARCHITECT i Multi-Assay Manual Diluent og beriget med WHO s internationale standard 7/5 for at fremstille patientprøver med AFP-koncentrationer inden for området fra,5 til.50 ng/ml.* Prøverne blev testet med ARCHITECT AFP-analysen på instrument, og genfindelsesprocenten blev beregnet. For serumprøver var middelgenfindelsesprocenten 0,% (område: 99,5% til 08,6%). For fostervandsprøver var middelgenfindelsesprocenten 0,% (område: 95,% til 07,%). * En :40-fortynding af prøver i området fra,5 til 50 µg/ml svarer til et område fra,5 til.50 ng/ml inden for analysens måleinterval. Linearitet ARCHITECT AFP-analysen er udviklet til at have en afvigelse fra lineariteten inden for ± ng/ml for prøver, der ligger under 0 ng/ml, og inden for ± 0% for prøver mellem 0 ng/ml og.000 ng/ml. Der blev udført et studie baseret på retningslinjer fra NCCLS-dokument EP6-A. 5 Tre fortyndingsserier blev forberedt som følger: En høj AFP-prøve (>.000 ng/ml) blev kombineret i specifikke forhold med en lav AFP-prøve (<,0 ng/ml). De fortyndingsserier, herunder lave og høje prøver, blev testet med ARCHITECT AFP-analysen. ARCHITECT AFP-analysen udviste linearitet fra 0,9 ng/ml til.487,76 ng/ml. Sensitivitet Detektionsgrænse og kvantiteringsgrænse ARCHITECT AFP-analysen er udviklet til at have en detektionsgrænse (LoD) på,0 ng/ml og en kvantiteringsgrænse (LoQ) på,0 ng/ml. LoQ er defineret som den laveste mængde analysekomponent i en prøve, der præcist kan kvantiteres med en TAE (total analytisk fejl) på,5 ng/ml. Baseret på retningslinjerne i NCCLS-dokument EP7-A 54 blev der udført et studie med 4 nulniveauprøver (kalibrator A) og 8 prøver med lavt AFPniveau ( prøver ved hvert af 4 unikke målkoncentrationsniveauer på ca. 0,50,,00,,50 og,00 ng/ml). Disse prøver blev testet i 5 separate kørsler over mindst dage med reagenslot og instrumenter. Den observerede LoD var 0,04 ng/ml, og den observerede LoQ var 0,5 ng/ml. Blindværdigrænse I samme studie blev blindværdigrænsen (LoB) fastlagt til at være 0,0 ng/ml. Interferens Potentielt interfererende endogene stoffer ARCHITECT AFP-analysen er udviklet til at have en forskel i AFPkoncentration, der ligger inden for eller er lig med ± 0% ved sammenligning af prøver, der indeholder forhøjede niveauer af endogene stoffer, med referenceprøver. Der blev udført et studie baseret på retningslinjer fra CLSI-dokument EP7-A. 55 Potentielt interfererende endogene stoffer blev evalueret for at fastslå, om AFP-koncentrationerne blev påvirket ved brug af ARCHITECT AFP-analysen. Prøver med AFP-niveauer (ca. 0 og.000 ng/ml) blev beriget med de endogene stoffer, der er angivet nedenfor. Prøverne blev analyseret (n = 0), og AFP-koncentrationerne i de berigede prøver blev sammenlignet med referenceprøverne. Dataene er vist i følgende tabel. Potentielt interfererende Interferensprocent a endogene stoffer Højt testniveau 0 ng/ml 000 ng/ml Bilirubin (ikke-konjugeret) 0 mg/dl -0,5 0, Bilirubin (konjugeret) 0 mg/dl -0,9-0,8 Hæmoglobin 500 mg/dl -0, -, Totalprotein g/dl,9-0, Triglycerider 000 mg/dl -,0 -,9 a Interferensprocent = Middel-/mediantestresultat - Middel-/medianreferenceresultat Middel-/medianreferenceresultat x 00 8

9 Potentielt interfererende stoffer ARCHITECT AFP-analysen er udviklet til at have en middelgenfindelsesprocent på 00% ± 0% ved analysering af reumafaktorprøver (RF) og humane anti-mus-antistofprøver (HAMA), der er beriget med kendte AFPmængder. Der blev udført et studie baseret på retningslinjer fra CLSI-dokument EP7-A. 55 Potentielt interfererende stoffer blev evalueret for at fastslå, om AFP-koncentrationerne blev påvirket ved brug af ARCHITECT AFPanalysen. Prøver fra personer med de stoffer, der er angivet nedenfor, blev opdelt i prøver. To af prøverne blev beriget til AFP-niveauer (ca. 0 og.000 ng/ml). Prøverne blev analyseret, og AFP-koncentrationen i de berigede prøver blev sammenlignet med prøver, der ikke blev beriget med AFP. Dataene er vist i følgende tabel. Potentielt interfererende Genfindelsesprocent a stoffer n 0 ng/ml 000 ng/ml Humane anti-mus-antistoffer 04,7 05,9 Reumafaktor 04,6 0, a Genfindelsesprocent = Middel-/median beriget resultat - Middel-/median ikke-beriget resultat Middel-/medianmængde tilsat AFP x 00 Analytisk specificitet ARCHITECT AFP-analysen er udviklet til at have en forskel i AFPkoncentration, der ligger inden for eller er lig med ± 0% ved sammenligning af prøver, der indeholder potentielt interfererende stoffer, med referenceprøver. Der blev udført et studie baseret på retningslinjer fra CLSI-dokument EP7-A. 55 Potentielt interfererende stoffer blev evalueret for at fastslå, om AFP-koncentrationerne blev påvirket ved brug af ARCHITECT AFPanalysen. Prøver med niveauer af AFP (ca. 0 og.000 ng/ml) blev beriget med de potentielt interfererende stoffer. Prøverne blev analyseret, og AFP-koncentrationerne i de berigede prøver blev sammenlignet med referenceprøverne. Dataene er vist i følgende tabel: Potentielt Interferensprocent a interfererende stoffer Højt testniveau 0 ng/ml 000 ng/ml 5-fluorouracil mmol/l -0,4 0, Acetaminophen 6,5 mg/ml -, -, Albumin 60 mg/ml,4-4, Alfa--syreglykoprotein mg/ml 0, -, Alfa--antitrypsin 5 mg/ml 8, 0, Alfa--makroglobulin 9 mg/ml 0, -0, Aspirin 0 mg/ml -4,7-4,9 Bleomycin 000 μu/ml -,5-4, Carboplatin 0,4 mg/ml 0,, Ceruloplasmin,5 mg/ml -0, -0,6 Choriongonadotropin 000 IU/ml -, -, Cisplatin 000 μg/ml -0,6 -, Cyklofosfamid 47 μmol/l 0, -0,7 Potentielt Interferensprocent a interfererende stoffer Højt testniveau 0 ng/ml 000 ng/ml Etoposid 0 μg/ml -0,8 0, Gammaglobulin 0 mg/ml -,7 -,4 Haptoglobin 6 mg/ml 0,7 -,0 Ifosfamid 49 μg/ml -, -,7 Methotrexat mmol/l -0,6-0,5 Humant placentalaktogen 00 μg/ml -, -,6 Prolaktin 500 ng/ml -4,8-5,0 Transferrin 5 mg/ml -,6 -,4 Vinblastin 500 μg/ml -,4 -,5 Vincristin 000 ng/ml -, -4,4 a Interferensprocent = Middel-/mediantestresultat - Middel-/medianreferenceresultat Middel-/medianreferenceresultat x 00 Verifikation af automatisk fortynding ARCHITECT AFP-analysen er udviklet til at have en middelforskel i koncentration inden for ± 0% ved sammenligning af den automatiske fortyndingsmetode med den manuelle fortyndingsmetode for prøver med værdier >.000 ng/ml. serumprøver blev evalueret med den automatiske :0-fortyndingsmetode versus en manuel :0-fortyndingsmetode. 5 fostervandsprøver blev evalueret med den automatiske :40-fortyndingsmetode versus en manuel :40-fortyndingsmetode. De manuelt fortyndede prøver og ufortyndede prøver, der var udvalgt til automatisk fortynding, blev analyseret i dobbeltbestemmelse med ARCHITECT AFP-analysen. For serumprøver var den gennemsnitlige procentvise forskel,9% (område: -5,8% til 0,9%), og for fostervandsprøver var den gennemsnitlige procentvise forskel 4,6% (område: -,% til,%). High Dose Hook-effekt High Dose Hook-effekt er et fænomen, hvor prøver med meget højt niveau kan aflæses inden for analysens måleinterval. I ARCHITECT AFP-analysen blev der ikke observeret High Dose Hook-effekt ved analyse af prøver med op til ng/ml AFP. SYSTEMSPECIFIKKE 000 SR -STUDIER Følgende studier blev udført med 000 SR System. Analyseresultater fra de enkelte laboratorier kan variere fra de viste data. Præcision ARCHITECT AFP-analysen er udviklet til at have en intern laboratorie - impræcision på 7,5 % (total) %CV for prøver mellem 0 og 000 ng/ ml og en standardafvigelse på 0,75 for prøver med mindre end 0 ng/ml og ned til kvantiteringsgrænsen (dvs.,0 ng/ml). Systemreproducerbarhed Der blev udført et femdagespræcisionsstudie af ARCHITECT AFP-analysen baseret på retningslinjer fra National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) dokument EP5-A 5 og Clinical and Laboratory Standards Institutes (CLSI) dokument EP5-A. 5 Testning blev udført på laboratorier med lot ARCHITECT AFP-reagenser, -kalibratorer og -ler og 000 SR -instrument pr. laboratorium. Tre ler og 5 humane serumpaneler blev analyseret i firedobbelt bestemmelse gange om dagen i 5 dage. Resultaterne er vist i følgende tabel. Samlet gennemsnit Intraseriel Samme dag Intern laboratoriepræcision (total) a Præcision inkl. variation mellem laboratorier (samlet) Prøve n (ng/ml) SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV Lav 0 0,0 0,9,6 0,7,9 0,5,6 0,5,6 Medium 0 00,45,85,4,90,4 4,66, 5,50,7 Høj 0 959,6 6,945,8 0,440, 6,446,8 6,446,8 Panel 0,05 0,049,6 0,084,8 0, 4,0 0,44 4,7 Panel 0 9,69 0,49,5 0,98,0 0,64,7 0,90,0 Panel 0 578,85 9,449,6,05,9 4,,5 5,580,7 Panel ,96 6,675,5 8,9,6 48,45, 49,885, Panel 5 0 7,05 7,7, 44,664,6 50,57,9 59,95,4 a Intern laboratorievariabilitet (total) omfatter varianskomponenterne intraseriel, samme dag og dag til dag. 9