/08. BBL klargjort plademedium til differentiering af Escherichia coli. MacConkey II Agar with MUG

Transkript

1 /08 BBL klargjort plademedium til differentiering af Escherichia coli MacConkey II Agar with MUG Se symbolglossaret i slutningen af indlægssedlen. TILSIGTET BRUG MacConkey II Agar with MUG anvendes til den sandsynlige identifikation af Escherichia coli. RESUMÉ OG FORKLARING Trepeta og Edberg 1 modificerede MacConkey Agar ved at inkorporere MUG (4-methylumbelliferyl-ß-D-glukuronid). Resultatet var et medium, der gjorde det muligt for forfatterne at lave en sandsynlig identifikation af E. coli fra det primære plademedium indenfor 5 min. BBL MacConkey II Agar-formuleringen blev designet til at forbedre hæmningen af sværmende Proteus-arter for at opnå en mere definitiv differentiering af laktosefermenter og ikke-fermenter samt til vækstfremning af enteriske patogener. PROCEDURENS PRINCIPPER De fleste stammer (96 97 %) af E. coli producerer ß-D-glukuronidase. 2 Enzymet hydrolyserer MUG til at afgive 4-methylumbelliferon, en forbindelse, der fluorescerer under ultraviolet lys med langbølgelængde (366 nm). Tilsætningen af MUG til formuleringen tillader ß-D-glukuronidase-positive stammer af E. coli at fluorescere blå-grønt, når de undersøges under ultraviolet lys. MacConkey II Agar er et selektivt og differentialt medium. Det er kun let selektivt, da koncentrationen af galdesalte, som hæmmer grampositive mikroorganismer, er lav i sammenligning med andre enteriske plademedier. Krystalviolet inkluderes også i mediet for at hæmme vækst af grampositive bakterier, specielt enterokokker og stafylokokker. Differentiering af enteriske mikroorganismer opnås ved kombinationen af laktose og den neutralt røde indikator. Farveløse eller lyserøde til røde kolonier produceres, afhængigt af isolatets evne til at fermentere kulhydratet. REAGENSER MacConkey II Agar with MUG Omtrentlig formel* pr. liter renset vand Pankreatisk fordøjelse af gelatine...17,0 g Pankreatisk fordøjelse af kasein... 1,5 g Peptisk fordøjelse af animalt væv... 1,5 g Laktose...10,0 g Galdesalte... 1,5 g Natriumklorid... 5,0 g Neutral rød... 0,03 g Krystalviolet... 0,001 g Agar...13,5 g MUG (4-methylumbelliferylß-D-glukuronid)...0,1 g *Justeret og/eller suppleret som påkrævet for at leve op til præstationskriterier.

2 Advarsler og forholdsregler: Til in vitro diagnostik. Hvis der observeres overdreven fugtighed, inverteres bunden over et låg til lufttørring for at forhindre, at en forsegling mellem toppen og bunden af pladen dannes under inkubation. Patogene mikroorganismer, inklusive hepatitisvira og humant immundefekt virus, kan forekomme i kliniske prøver. Standardforholdsregler 3-6 og institutionelle retningslinier skal overholdes ved håndtering af alle emner, der er kontamineret med blod og andre kropsvæsker. Klargjorte plader, prøvebeholdere og andre kontaminerede materialer steriliseres ved autoklavering, før de kasseres. Opbevaringsinstruktioner: Pladerne skal straks efter modtagelse opbevares i mørke ved 2 8 C. Undgå nedfrysning og overophedning. Må ikke åbnes, før de skal bruges. Minimér eksponering for lys. Klargjorte plader, der er opbevaret i deres originale emballage ved 2 8 C indtil lige før brug, kan inokuleres indtil udløbsdatoen og inkuberes i de anbefalede inkubationstider. Lad mediet opnå stuetemperatur inden inokulering. Produktforringelse: Pladerne må ikke anvendes, hvis de viser tegn på mikrobiel kontaminering, misfarvning, udtørring, brud eller andre tegn på forringelse. PRØVEOPSAMLING OG -HÅNDTERING Se litteraturen for oplysninger om prøveopsamlings- og håndteringsprocedurer. 7-9 PROCEDURE Vedlagte materialer: MacConkey II Agar with MUG Nødvendige materialer, der ikke er vedlagt: Hjælpedyrkningsmedier, reagenser, kvalitetskontrolorganismer og laboratorieudstyr, som det påkræves til proceduren. Testprocedure: Anvend aseptiske teknikker. Agaroverfladen skal være glat og fugtig, men uden overdreven fugt. Udstryg prøven så hurtigt som muligt efter modtagelse i laboratoriet. Udstrygningspladen anvendes primært til at isolere rene kulturer fra prøver, der indeholder blandet flora. Et ikke-selektivt medium skal også udstryges for at forøge chancen for restitution, når populationen af gramnegative organismer er lav, og for at give en indikation for andre organismer, der måtte være til stede i prøven. Hvis materialet dyrkes direkte fra en vatpind, kan vatpinden rulles over et lille område på overfladen ved kanten. Derefter stryges væk fra dette inokulerede område. Inkubér pladerne beskyttet mod lys ved 35 ± 2 C (en CO2-beriget atmosfære må ikke anvendes med MacConkey II Agar) eller anden passende temperatur i h. Hvis de er negative efter 24 h, inkuberes igen i yderligere 24 h. Brugerkvalitetskontrol: 1. Undersøg pladerne for tegn på forringelse, som beskrevet i "Produktforringelse". 2. Undersøg præstationen ved at inokulere en repræsentativ prøve af plader med rene kulturer af stabile kontrolorganismer, der giver kendte, ønskede reaktioner. Følgende teststammer anbefales:

3 TESTSTAMME Escherichia coli ATCC Proteus mirabilis ATCC Salmonella choleraesuis choleraesuis underart Typhimurium serotype ATCC Enterococcus faecalis ATCC FORVENTEDE RESULTATER Vækst, rosenrøde kolonier, fluorescerende Vækst, farveløse kolonier, hæmning af sværmning, ingen fluorescens Vækst, farveløse kolonier, ingen fluorescens Hæmning (delvis eller fuldstænding), ingen fluorescens Krav til kvalitetskontrol skal udføres i overensstemmelse med gældende lokale og/eller nationale regulativer eller akkrediteringskrav samt laboratoriets standardkvalitetskontrolprocedurer. Det anbefales at læse de relevante NCCLS retningslinjer og CLIA-regulativer mht. passende kvalitetskontrolprocedurer. RESULTATER Efter inkubation undersøges mediet makroskopisk for typiske kolonier. Kolonier af laktosefermenterende bakterier forekommer lyserøde til rosenrøde og kan være omgivet af en zone af galdeudfældning, hvorimod kolonier, der ikke fermenterer laktose, er farveløse. Undersøg mediet under ultraviolet lys med langbølgelængde (366 nm). β-d-glukuronidase-positive kolonier har en blågrøn fluorescens. β-d-glukuronidase-negative kolonier fluorescerer ikke. PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Ikke alle E. coli-stammer fermenterer laktose eller producerer β-d-glukuronidase. Visse Salmonella- og Shigella-stammer producerer β-d-glukuronidase og vil fluorescere. 10 En lille procentdel af Yersinia og streptokokker er blevet rapporteret at have fluoresceret. 11 Yderligere biokemiske eller serologiske test er nødvendige for definitiv identifikation. 9,12,13 Et enkelt medium er sjældent tilstrækkeligt til at påvise alle organismer, der har potentiel betydning i en prøve. Stofferne i selektive medier kan hæmme visse stammer af den ønskede art eller tillade vækst af en art, de var designet til at hæmme, specielt hvis arterne er til stede i stort antal i prøven. Prøver, der dyrkes på selektive medier, skal derfor også dyrkes på ikke-selektive medier, for at man kan opnå yderligere information og hjælp til at sikre restitution af potentielle patogener. FUNKTIONSDATA I en klinisk undersøgelse, der blev foretaget på et universitetshospital, blev MUG inkorporeret i BBL MacConkey II Agar for at påvise tilstedeværelsen af β-glukuronidase. Det blev fundet, at den tid, der skulle til for at identicere E.coli-stammer, blev reduceret fra 1 h til 5 min, og evnen til at identificere denne organisme i blandede prøver blev forbedret. 1 BESTILLING Kat. nr. Beskrivelse BBL MacConkey II Agar with MUG, pakker à 20 plader

4 LITTERATUR 1. Trepeta, R.W., and S.C. Edberg Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide- based medium for rapid isolation and identification of Escherichia coli. J. Clin. Microbiol. 19: Killian, M., and P. Bulow Rapid diagnosis of Enterobacteriaceae. I. Detection of bacterial glycosidases. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec.B 84: National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 4. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 6. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Isenberg, H.D., F.D. Schoenknecht, and A. von Graevenitz Cumitech 9, Collection and processing of bacteriological specimens. Coordinating ed., S.J. Rubin. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Miller, J.M., and H.T. Holmes Specimen collection, transport, and storage, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 10. Feng, P.C.S., and P.A. Hartman Fluorogenic assays for immediate confirmation of Escherichia coli. Appl. Environ. Microbiol. 43: Robison, B.J Evaluation of a fluorogenic assay for detection of Escherichia coli in foods. Appl. Environ. Microbiol. 48: Holt, J.G., N.R. Krieg, P.H.A. Sneath., J.T. Staley, and S.T. Williams (ed.) Bergey's Manual of determinative bacteriology, 9th ed. Williams & Wilkins, Baltimore. 13. Murray, P.R., E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo and BBL are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD

5