Kode K4008 Sættet indeholder følgende materialer, der rækker til 150 vævssektioner ved 100 µl pr. sektion: Peroxidase Block (peroxidase-blokker)

Transkript

1 Dako EnVision + System HRP (AEC) For Use With Rabbit Primary Antibodies Kode K4008 Kode K4009 Færdigblandet Anvendelsesområde Til in vitro diagnostisk brug. Denne vejledning gælder for Dako EnVision + System, peroxidase (Dako EnVision+ System, HRP). Sættet er beregnet til anvendelse sammen med primære kaninantistoffer, som brugeren leverer, ved kvalitativ identificering af antigener ved hjælp af lysmikroskopi i normalt og patologisk paraffinindlejret væv, kryostatvæv eller cellepræparater. Væv, som er behandlet i fiksativer såsom ethanol, B-5, Bouin s, zinkformalin og neutral buffered formalin, kan anvendes. Resumé og forklaring Dako EnVision+ System, HRP, består af en IHC-farvningsteknik i to trin. Systemet er baseret på en HRPmærket polymer, som er konjugeret til sekundære antistoffer. Den mærkede polymer indeholder ikke avidin eller biotin. Følgelig elimineres uspecifik farvning, der er et resultat af endogen avidin-biotin-aktivitet i lever, nyrer, lymfevæv og kryostatsektioner, eller den reduceres betydeligt. Alle reagenser i Dako EnVision+ System, HRP med AEC+-substrat er færdigblandet. Systemet udgør en yderst følsom metode, og derfor er de optimale fortyndinger af det primære antistof op til 20 gange større end de, der anvendes til den traditionelle PAP-teknik, og mange gange større end de, der anvendes til de traditionelle ABC- eller LSAB-metoder. Denne protokol omfatter et forbedret signalgenereringssystem til påvisning af de antigener, der findes i lave koncentrationer, eller til primære antistoffer med lav titer. Primære antistoffer, der er dyrket i kaniner, reagerer godt på den mærkede polymer. Fortolkningen af en eventuel positiv farvning eller mangel på samme skal sammenholdes med morfologiske og histologiske undersøgelser med korrekte kontroller. Principper for proceduren Medfølgende reagenser Stands enhver endogen peroxidase-aktivitet ved at inkubere præparatet i fem minutter med Dako s peroxidaseblokker. Præparatet inkuberes derefter med et korrekt karakteriseret og fortyndet, primært kaninantistof, efterfulgt af inkubering med den mærkede polymer, idet der anvendes to efterfølgende inkuberinger á 30 minutter. Bemærk, at det ved antistoffer, som kræver enzymfordøjelse eller target retrieval, kan være nødvendigt at øge inkuberingstiden for det primære antistof og den mærkede polymer med 5 til 10 minutter. Farvningen afsluttes med en inkubering på 5 30 minutter med 3-amino-9-ethylcarbazol (AEC)+ substrat-kromogen, hvilket medfører et rødt præcipitat på antigenstedet. (AEC er et potentielt carcinogen, se afsnittet Forholdsregler). Kode K4008 Sættet indeholder følgende materialer, der rækker til 150 vævssektioner ved 100 µl pr. sektion: Mængde 1x15 ml Beskrivelse Peroxidase Block (peroxidase-blokker) 0,03 % hydrogenperoxid indeholdende natriumazid. 1x15 ml Labelled Polymer (mærket polymer) Peroxidasemærket polymer konjugeret til ged anti-kanin immunoglobuliner i Tris-HCl-buffer indeholdende stabiliserende protein og et antimikrobielt stof. 1x15 ml AEC+ Substrate Chromogen (AEC+-substrat-kromogen) 3-amino-9-ethylcarbazol indeholdende hydrogenperoxid, stabilisatorer, forstærkere og et antimikrobielt stof. Opbevares ved 2 8 C. ( ) P04046DK_01_K4008_K4009/ s. 1/7

2 Kode K4009 Sættet indeholder følgende materialer, der rækker til 1100 vævssektioner ved 100 µl pr. sektion: Mængde 1x110 ml Beskrivelse Peroxidase Block (peroxidase-blokker) 0,03 % hydrogenperoxid indeholdende natriumazid. 1x110 ml Labelled Polymer (mærket polymer) Peroxidasemærket polymer konjugeret til ged anti-kanin immunoglobuliner i Tris-HCl-buffer indeholdende stabiliserende protein og et antimikrobielt stof. 1x110 ml AEC+ Substrate Chromogen (AEC+-substrat-kromogen) 3-amino-9-ethylcarbazol indeholdende hydrogenperoxid, stabilisatorer, forstærkere og et antimikrobielt stof. Opbevares ved 2 8 C. Nødvendige men ikke vedlagte materialer Absorberende servietter Kontrolvæv, positivt og negativt Modfarvestof; vandbaseret, f.eks. Mayer s Hematoxylin eller Lillie s Modified Mayer s Hematoxylin (kode S3309) Dækglas Destilleret vand Ethanol, absolut og 95 % Lysmikroskop (20x 800x) Monteringsmedier, såsom Glycergel Mounting Medium (kode C0563) eller Faramount Aqueous Mounting Medium, klar til brug (kode S3025) eller ikke-vandigt permanent monteringsmedium, Ultramount (kode S1964) Primære antistoffer og negativ kontrolreagens Poly-L-lysin belagte objektglas eller Silanized Slides (silaniserede objektglas) (kode S3003) Farvningsbeholdere eller bade Stopur (der kan måle intervaller på 3 40 minutter) Vaskeflasker Vaskebufferopløsning Xylen, toluen eller xylenerstatninger Valgfri materialer Ammoniumhydroxid, 15 mol/l fortyndet til 0,037 mol/l PAP Pen (PAP-pen) (kode S2002) Forholdsregler 1. Til professionel brug. 2. Produktet indeholder natriumazid (NaN 3), som er et kemisk stof, der er yderst giftigt i ren form. Selvom det ikke er klassificeret som farligt, kan ophobninger af NaN 3 i produktkoncentrationer reagere med bly- og kobberrør og danne yderst eksplosive metaloxider. Ved bortskaffelse skal der skylles med store mængder vand for at forhindre azidophobninger i rørene. 1, 2 3. AEC+-substrat-kromogenet er følsomt over for kontaminering fra flere forskellige oxiderende stoffer, såsom metaller, bakterier, støv og almindelige laboratorieglasting. Undgå kontaminering og for lav holdbarhed ved at undlade at udsætte AEC+-opløsningen for potentielle kontamineringskilder og aldrig pipettere direkte fra flasken. Hæld den påkrævede mængde ud i en ren beholder, og pipetter herfra. Hæld aldrig overskydende AEC+-opløsning tilbage i den oprindelige opbevaringsbeholder. 4. Anvend ikke reagenser efter udløbsdatoen ved den anbefalede opbevaringsmetode. Hvis reagenser opbevares under andre betingelser end de, der er angivet i indlægssedlen, skal de bekræftes af brugeren. 5. Udskift ikke med reagenser fra andre lotnumre eller sæt fra andre producenter. 6. Enzymer og substrat-kromogener kan blive påvirket negativt, hvis de udsættes for kraftigt lys. Opbevar ikke sættets komponenter, og udfør ikke farvning i stærkt lys, f.eks. direkte sollys. 7. Andre inkuberingstider eller temperaturer end de angivne kan give fejlbehæftede resultater. Sådanne ændringer skal bekræftes af brugeren. 8. Som ved alle produkter, der er udledt af biologisk materiale, gælder det, at produkterne skal håndteres på korrekt vis. 9. Brug egnet personligt beskyttelsesudstyr for at undgå kontakt med øjne og hud. 10. Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokal og national lovgivning. 11. Sikkerhedsdatablade til professionelle brugere kan fås ved anmodning. ( ) P04046DK_01_K4008_K4009/ s. 2/7

3 Fare AEC+ Substrate Chromogen: 5-10% Polyethylene glycol, 1-5% N-Methyl-2-pyrrolidone, 0.1-1% Acetic acid, 0.1-1% 3-amino-9-ethyl carbazole H320 Forårsager øjenirritation. H350 Kan fremkalde kræft. P201 Indhent særlige anvisninger før brug. P202 Anvend ikke produktet, før alle advarsler er læst og forstået. P281 Anvend de påkrævede personlige værnemidler. P280 Bær øjen- eller ansigtsbeskyttelse. P264 Vask hænder grundigt efter brug. P308 + P313 VED eksponering eller mistanke om eksponering: Søg lægehjælp. P305 + P351 + P338 VED KONTAKT MED ØJNENE: Skyl forsigtigt med vand i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser, hvis dette kan gøres let. Fortsæt skylning. P337 + P313 Ved vedvarende øjenirritation: Søg lægehjælp. P405 P501 Opbevares under lås. Indholdet og beholderen bortskaffes i henhold til alle lokale, regionale, nationale og internationale regler. Opbevaring Reagenser til Dako EnVision+ System, HRP skal opbevares ved 2 8 C. Må ikke fryses. Må ikke anvendes efter udløbsdatoen, som er trykt på reagensglassene og etiketten på sættet. Ændringer i reagensernes udseende (f.eks. bundfald) kan være tegn på ustabilitet eller nedbrydning. I så fald må reagensen/reagenserne ikke anvendes. AEC+-substrat-kromogen-opløsningen er ustabil ved temperaturer over 8 C. Opbevar AEC+-substratkromogen-opløsningen ved den anbefalede temperatur på 2 8 C. Opløsningen skal anvendes umiddelbart efter, at den er taget ud af køleskabet. Efter brug skal den så hurtigt som muligt stilles tilbage i 2 8 C. Der er ingen tydelige tegn, når disse produkter bliver ustabile. Derfor skal positive og negative kontroller analyseres samtidig med patientpræparater. Hvis der observeres en uventet farvning, som ikke kan forklares med forskelle i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et defekt sæt, kontaktes Dako teknisk support. Forberedelse af reagenser Det anbefales at forberede nedenstående reagenser inden farvningen. Vaskebufferopløsning TBST, 0,05 mol/l Tris Buffered Saline with Tween (kode S3006), er den anbefalede vaskebuffer til den automatiske og manuelle IHC-detektion. TBS, 0,05 mol/l Tris Buffered Saline (kode S1968), og PBS, 0,02 mol/l Phosphate Buffered Saline (kode S3024), er ligeledes egnede vaskebufferopløsninger til manuel farvning. Vaskebufferopløsninger, der indeholder natriumazid, frarådes. Natriumazid inaktiverer peberrodsperoxidase (HRP), hvilket medfører negativ farvning. Kasser bufferen, hvis den er uklar. Destilleret vand kan anvendes til skylning af peroxidase-blokkeren, substratet og modfarvestoffet. Primært antistof Antistoffer fra NP-serien "Plus" (færdigblandet) er optimeret og anbefales til brug sammen med Dako "Plus" højsensitive detektionssystemer. Koncentrerede antistoffer er ligeledes til rådighed fra Dako. Slutbrugeren skal optimere de koncentrerede antistoffer. Fortyndinger skal klargøres med Antibody Diluent (antistoffortynder) (kode S0809) eller en fortynder, der indeholder 0,05 mol/l Tris-HCl buffer med 1 % bovint serumalbumin (BSA). Klar til brug antistoffer fra Dako N-serien er ikke optimeret til anvendelse sammen med Dako "Plus"-detektionssystemer. Negativ kontrolreagens Når der anvendes klar til brug-antistoffer fra Dako NP-serien "Plus", anbefales Universal Negative Control(s)+ som negativ kontrolreagens. Disse kontroller er optimeret til anvendelse sammen med enten mouse- (kode NP015) eller rabbit-antistoffer (kode NP001) fra NP-serien "Plus", færdigblandet. Modfarvestof Det farvede slutprodukt fra farvningsreaktionen er alkoholopløseligt og må kun anvendes med vandbaserede modfarvestoffer, såsom Mayer s hematoxylin eller Lillie s Modified Mayer s Hematoxylin (kode S3309). Modfarvningen af hematoxylin efterfølges af en grundig skylning i destilleret vand, hvorefter objektglassene nedsænkes i et bad med 0,037 mol/l ammoniak eller lignende blånelsesmiddel. 0,037 mol/l ammoniakvand klargøres ved at blande 2,5 ml 15 mol/l (koncentreret) ammoniumhydroxid med 1 liter vand. Ubrugt 0,037 mol/l ammoniak kan opbevares ved stuetemperatur (20 25 C) i en flaske med tætsluttende prop i maks. 12 måneder. Se producentens vejledning vedrørende alternative modfarvningsprocedurer. ( ) P04046DK_01_K4008_K4009/ s. 3/7

4 Monteringsmedium Glycergel Mounting Medium (kode C0563) eller Faramount Aqueous Mounting Medium, klar til brug (kode S3025) anbefales til vandig montering. Glycergel skal opvarmes til mindst 50 C umiddelbart inden brug. Ikkevandigt permanent monteringsmedium (Ultramount, kode S1964) kan også anvendes. Forbehandling af prøver Farvningsprocedure Inden IHC-farvningen skal vævene fikseres og behandles. Fiksering forhindrer autolyse og putrefaktion af ekscideret væv, bevarer antigenicitet, forbedrer vævsbestanddelenes refraktive indeks og øger de cellulære elementers resistens over for vævsbehandling. Vævsbehandling omfatter dehydrering, fjernelse af dehydrerende midler, infiltrering af de indlejrende medier, indlejring og sektionering af væv. De mest almindelige fiksativer til IHC-vævsforbehandling er beskrevet i "General Instructions for Immunohistochemistry". Ovenstående er kun beregnet som en vejledning. De optimale procedurer skal fastlægges og bekræftes af brugeren. Bemærkninger til proceduren Brugeren skal læse denne vejledning grundigt igennem og gøre sig fortrolig med sættets indhold inden brug. Reagenserne og vejledningen i dette sæt er udviklet med henblik på at opnå en optimal ydelse. Yderligere fortynding af sættets reagenser eller ændring af inkuberingstiderne eller -temperaturerne kan give fejlagtige resultater. Peroxidase-blokker og mærket polymer skal have stuetemperatur (20 25 C) inden immunofarvningen. Desuden skal alle inkuberinger foregå ved stuetemperatur. For nemheds skyld kan AEC+-substratet anvendes umiddelbart efter, at det er taget ud af køleskabet, og det behøver derfor ikke varmes op til stuetemperatur inden brug. Efter brug skal det opbevares ved 2 8 C igen. Opbevaring ved temperaturer over 8 C kan h ave en negativ virkning på AEC+-substrat-kromogen. Vævssektioner må ikke tørre ind under farvningsproceduren. Indtørrede vævssektioner kan udvise en øget ikke-specifik farvning. Tildæk objektglas, som udsættes for træk. Hvis der anvendes lange inkuberingstider, skal vævet anbringes i et fugtigt miljø. Sensitiviteten for Dako EnVision+ System, HRP, kan øges yderligere ved at forlænge inkuberingstiderne i trin 2 og 3 med 5 10 minutter. Farvningsprotokol TRIN 1 PEROXIDASE-BLOKKER Bank overskydende buffer af. Brug en fnugfri klud (f.eks. Kimwipe eller gaze), og tør forsigtigt rundt om præparatet for at fjerne eventuel overskydende væske og holde reagensen inden for det foreskrevne område. Påfør en tilstrækkelig mængde peroxidase-blokker, så præparatet er dækket. Inkuber i 5 (±1) minutter. Skyl forsigtigt med destilleret vand eller bufferopløsning fra en vaskeflaske (undgå at vandet/opløsningen rammer vævet direkte), og anbring det i et bad med frisk buffer. TRIN 2 TRIN 3 TRIN 4 PRIMÆRT ANTISTOF ELLER NEGATIV KONTROLREAGENS Bank overskydende buffer af, og tør objektglassene som oven for beskrevet. Påfør en tilstrækkelig mængde optimalt fortyndet primært antistof eller negativ kontrolreagens, så præparatet er dækket. Inkuber i 30 (±1) minutter. Skyl forsigtigt med bufferopløsning fra en vaskeflaske (undgå at opløsningen rammer vævet direkte), og anbring det i et bad med frisk buffer. Hvis farvningsproceduren skal afbrydes, kan objektglassene opbevares i et bufferbad efter inkubering af det primære antistof (trin 2) i maks. 1 time ved stuetemperatur (20 25 C), uden at farvningsfunktionen påvirkes. PEROXIDASE MÆRKET POLYMER Bank overskydende buffer af, og tør objektglassene som oven for beskrevet. Tilsæt en tilstrækkelig mængde mærket polymer, så præparatet er dækket. Inkuber i 30 (±1) minutter. Skyl objektglassene som i trin 2. SUBSTRAT-KROMOGEN Tør objektglassene som oven for beskrevet. Tilsæt en tilstrækkelig mængde af AEC+-substrat-kromogen-opløsningen, der er klar til brug, så præparatet er dækket. Inkuber i 5 30 minutter. Skyl forsigtigt med destilleret vand fra en vaskeflaske (undgå, at vandet rammer vævet direkte). Affald fra substrat-kromogen opsamles i en beholder til farligt materiale og bortskaffes på korrekt vis. ( ) P04046DK_01_K4008_K4009/ s. 4/7

5 TRIN 5 TRIN 6 HEMATOXYLIN MODFARVESTOF (valgfri) Sænk objektglassene ned i et bad med aqueous hematoxylin (kode S3309). Inkuberingstiden afhænger af styrken af den anvendte hematoxylin. Skyl forsigtigt i et bad med destilleret vand. Dyp objektglassene 10 gange i et bad med 0,037 mol/l ammoniak eller et lignende blånelsesmiddel. Skyl objektglassene i et bad med destilleret eller deioniseret vand i 2 5 minutter. MONTERING Prøvepræparater kan monteres og forsynes med dækglas med et vandbaseret monteringsmedium, f.eks. Glycergel Mounting Medium (kode C0563) eller Faramount (kode S3025) eller det ikkevandige, permanente monteringsmedium, Ultramount (kode S1964). Bemærk: AEC-reaktionsproduktet kan opløses i organiske opløsningsmidler og er derfor ikke kompatibelt med toluen- eller xylen-baseret permanent monteringsmedium. Bemærk: Objektglassene kan aflæses når som helst. Farven kan imidlertid falme en smule, hvis objektglassene udsættes for stærkt lys i en uge. Dette kan minimeres ved at opbevare objektglassene mørkt ved stuetemperatur (20 25 C). Kvalitetskontrol Forskelle i vævsbehandlingen og de tekniske procedurer på brugerens laboratorium kan medføre, at resultaterne varierer betydeligt, hvilket gør det nødvendigt at gennemføre regelmæssige kontroller på laboratoriet udover nedenstående procedurer. I kvalitetskontrolvejledningen i College of American Pathologists (CAP) Certification Program for Immunohistochemistry og reference 3 til 5 findes der yderligere oplysninger. I specifikationsarket for hvert af de anvendte primære antistoffer findes oplysninger om sensitivitet og immunoreaktivitet. I "General Instructions for Immunohistochemical Staining" findes yderligere oplysninger om positive og negative kontroller. Fortolkning af farvning Generelle begrænsninger Produktspecifikke begrænsninger I "General Instructions for Immunohistochemical Staining" findes retningslinjer for fortolkning. I "General Instructions for Immunohistochemical Staining" findes generelle begrænsninger. Vævsfarvning afhænger af, om vævsprøverne bliver håndteret og behandlet korrekt inden farvningen. Ukorrekt fiksering, nedfrysning, optøning, vask, tørring, opvarmning, sektionering eller kontaminering med andre vævsprøver eller væsker kan medføre artefakter, antistof-trapping eller fejlagtigt negative resultater. Anvendelse af gamle eller ikke-buffered fiksativer eller vævs udsættelse for høj varme (højere end 60 C) under behandlingen kan medføre en reduceret farvningssensitivitet. Endogen peroxidase- eller pseudoperoxidase-aktivitet kan ses i hæmoproteiner, såsom hæmoglobin, myoglobin, cytokrom og catalase samt i eosinofiler. 6,7 Denne aktivitet kan hæmmes ved inkubering af præparater med peroxidase-blokker fra Dako EnVision+ System, HRP i fem minutter inden tilsættelse af det primære antistof. Blod- og knoglemarv-smear samt frosne vævsprøver kan ligeledes behandles med denne reagens. Proceduren fjerner imidlertid ikke det rødbrune pigment i hæmoproteiner. Alternativt kan en opløsning af methanol-hydrogenperoxid anvendes. Visse antigener kan blive denatureret med denne procedure. Vævsprøver fra personer, som er inficeret med hepatitis B-virus, og som indeholder hepatitis B overfladeantigen (HBsAg), kan udvise uspecifik farvning med peberrodsperoxidase. 8 Normal/ikke-immun serum fra de samme dyrekilder som det sekundære antiserum, der anvendes i blokeringen, kan medføre fejlagtigt negative eller fejlagtigt positive resultater, der skyldes autoantistoffer eller naturlige antistoffer. Reagenserne i dette sæt leveres i den optimale fortynding. Yderligere fortynding kan medføre tab af antigendetektion. ( ) P04046DK_01_K4008_K4009/ s. 5/7

6 Fejlfinding Problem Mulig årsag Forslag til afhjælpning 1. Ingen farvning af nogen objektglas. 1a. Reagenserne anvendes ikke i den korrekte rækkefølge. 1a. Gennemgå tilsætningen af reagenser. 2. Svag farvning af alle objektglas. 3. For høj baggrundsfarvning af alle objektglas. 1b. Natriumazid i buffer-badet. 1b. Brug frisk buffer uden azid. 2a. Der er for meget opløsning tilbage i sektionerne efter vaskebadet. sektionen. 2b. Objektglassene er ikke inkuberet længe nok med antistoffer eller substrat. 3a. Prøverne indeholder en høj endogen peroxidase-aktivitet. 2a. Bank forsigtigt overskydende opløsning af, inden der tørres rundt omkring 2b. Gennemgå de anbefalede inkuberingstider. 3a. Anvend længere inkuberingstider med peroxidase-blokker. 3b. Paraffinen er ikke helt fjernet. 3b. Anvend friske xylen- eller toluenbade. Hvis flere objektglas farves samtidigt, skal det andet xylenbad indeholde frisk xylen. 3c. Objektglassene er ikke skyllet ordentligt. 3d. Hurtigere substratreaktion end normalt, f.eks. på grund af for høj stuetemperatur. 3e. Sektionerne er tørret ud under farvningen. 3c. Anvend friske opløsninger i bufferbade og vaskeflasker. Anvend TBST som vaskebuffer. 3d. Anvend kortere inkuberingstider med substrat-kromogen-opløsning. 3e. Anvend fugtkammer. Tør kun tre til fire objektglas af ad gangen, inden der tilsættes reagens. 3f. Ikke-specifik reagensbinding til 3f. Tilsæt en blokeringsopløsning, der vævssektion. indeholder et irrelevant protein. 3g. Antistoffet er for koncentreret. 3g. Anvend en større fortynding af det primære antistof. BEMÆRK: Hvis problemet ikke kan henføres til en eller flere af ovenstående årsager, eller hvis forslagene til afhjælpning ikke løser problemet, bedes du kontakte Dako teknisk support for at få yderligere hjælp. Yderligere oplysninger om farvningsteknikker og forbehandling af prøvepræparater kan ses i Handbook - Immunochemical Staining Methods 9 (kan fås hos Dako), Atlas of Immunohistology 10 og Immunoperoxidase Techniques, A Practical Approach to Tumor Diagnosis. 11 Referencer 1. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. Procedures for the decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides. DHHS (NIOSH) Publ. No , Current 13. August 16, Centers for Disease Control Manual Guide - Safety Management, No. CDC-22, Atlanta, GA. Decontamination of laboratory sink drains to remove azide salts. April 30, Elias JM, et al. Special report: Quality control in immunohistochemistry. Amer J Clin Pathol 1989; 92: National Committee for Clinical Laboratory Standards. Internal quality control testing: principles and definitions; approved guideline. Villanova, PA 1991; Order code C24-A:4 5. Herman GE and Elfont EA. The taming of immunohistochemistry: The new era of quality control. Biotech & Histochem 1991; 66: Escribano LM, et al. Endogenous peroxidase activity in human cutaneous and adenoidal mast cells. J Histochem Cytochem 1987; 35: Elias JM. Immunohistopathology: A practical approach to diagnosis. Chicago: Amer Soc of Clin Pathol Press 1990:46 8. Omata M, et al. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen: A possible source of error in immunohistochemistry. Amer J Pathol 1980; 73: Naish SJ (ed). Handbook - immunochemical staining methods. Carpinteria: DAKO Corporation Tubbs RR, et al. Atlas of immunohistology. Chicago: Amer Soc Clin Pathol Press Nadji M and Morales AR. Immunoperoxidase techniques, a practical approach to tumor diagnosis. Chicago: Amer Soc Clin Pathol Press 1986 Yderligere referencer Cartun RW. Immunohistochemistry of infectious diseases. J Histotechnol 1995; 18(3):195 Heras A, et al. Enhanced labelled-polymer system for immunohistochemistry. XVth Eur Cong Pathol. Copenhagen, Denmark 1995; Sept 3 8 Bisgaard K and Pluzek K-P. Use of polymer conjugates in immunohistochemistry: A comparative study of a traditional staining method to a staining method utilizing polymer conjugates. Abstract. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol and 12th World Cong Acad Environ Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct Pileri SA, et al. EnVision Plus: A new powerful tool for diagnosis and research. Symposium. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol and 12th World Cong Acad Environ Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct Bisgaard K. EnVision Plus - Introduction to a new technology. Abstract. DAKO Symposium. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct ( ) P04046DK_01_K4008_K4009/ s. 6/7

7 Edition 07/15 ( ) P04046DK_01_K4008_K4009/ s. 7/7