(19) DANMARK C12,. (12) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen (11) DK B1

Størrelse: px
Starte visningen fra side:

Download "(19) DANMARK C12,. (12) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen (11) DK 175520 B1"

Transkript

1 (19) DANMARK C12,. (12) PATENTSKRIFT (11) DK B1 Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: C 12 Q 1/68 C 07 H 21/00 (21) Patentansøgning nr: PA (22) Indleveringsdag: (24) Løbedag: (41) Alm. tilgængelig: (45) Patentets meddelelse bkg. den: (86) International ansøgning nr: PCT/US87/02050 (86) International indleveringsdag: (85) Videreførelsesdag: (30) Prioritet: US (73) Patenthaver: The Trustees of Columbia University in the City of New York, West 116th Street and Broadway, New York, NY 10027, USA (72) Opfinder: Paul J. Maddon, 60 Haven Avenue, New York, NY 10032, USA Dan R. Littman, 367 Liberty Street, San Francisco, CA 94114, USA Leonard Chess, 81 Greenacres Avenue, Scarsdale, NY 10583, USA Richard Axel, 445 Riverside Drive, New York, NY 10027, USA Robin Weiss, 25 Cyprus Avenue, Finchley, London N3, Storbritannien Steven J. McDougal, 818 Springdale Road, Atlanta, GA 30306, USA (74) Fuldmægtig: Plougmann & Vingtoft A/S, Sundkrogsgade 9, 2100 København Ø, Danmark (54) Benævnelse: DNA, der koder T-celleovertladeproteinet T4, og anvendelse af T-4 i behandlingen. af AIDS (56) Fremdragne publikationer: Ingen (57) Sammendrag: Et enkeltstrenget nukleinsyremolekyle koder for en aminosyresekvens, som omfatter i det mindste en del af et T4-glycoprotein, og som kan anvendes til profylakse ved behandling af en patient med erhvervet immundefektsyndrom. Denne aminosyresekvens, som er i stand til specifikt at danne et complex med et kappeglycoprotein fra humant immundefektvirus og er opløselig i en vandig opløsning, kan administreres til en patient, som er inficeret med et humant immundefektvirus, for at blokere det humane immundefektvirus fra at binde til T4 + celler. Monoklonale antistoffer rettet mod de vandopløselige aminosyresekvenser kan anvendes som vacciner til immunisering af en patient mod erhvervet immundefektsyndrom. BOO nuoreac n 3T3 LTD , A + ta FICOZ Leern.

2 i I nærværende beskrivelse henvises der til flere publikationer med arabertal i parenteser. En liste over disse publikationer er angivet i slutningen af beskrivelsen umiddelbart før patentkravene. Der henvises til disse publikationer i deres helhed, således at der kan gives en mere omfattende beskrivelse af standpunktet af den 5 teknik, hvortil opfindelsen hører. De forskellige funktionelle klasser af T-lymfocytter genkender antigener på overfladen af bestemte populationer af målceller. Hjælper-T-celler interagerer i stort omfang med makrofager og B-celler; cytotoxiske T-celler interagerer med et bre- 10 dere udvalg af antigen-bærende mål-celler. Disse cellulære genkendelsesbegivenheder medieres sandsynligvis af den specifikke association mellem overflademolekyler på både effektor- og målceller. T-cellers overflade er karakteristisk ved en række polymorfe samt ikke-polymorfe proteiner, som for størstedelens vedkommende ikke findes andre steder end på T-lymfocytter. Selv om de fleste af disse 15 molekyler er fælles for alle T-celler, varierer to klasser overfladeproteiner konsekvent med hensyn til de forskellige funktionelle klasser af T-celler, og disse proteiner er inddraget i interaktioner mellem T-celler og målceller. En klasse af overflademolekyler adskiller de vigtigste funktionelle undergrupper af 20 T-lymfocytter: overfladeglycoproteinerne T4 og T8. Tidligt i udviklingen af thymus udtrykkes glycoproteinerne T4 og T8 sammen på overfladen af thymocytter (1). I det perifere immunsystem udtrykkes T4- og T8-molekylerne på T-celleundergrupper, der indbyrdes udelukker hinanden, og udtrykkes kun sjældent på den samme celle (2, 3). T4-molekylet udtrykkes på T-celler, der interagerer med målceller, der 25 bærer molekyler fra det store histokompatibilitetskompleks ("major histocompatibility complex", MHC) af klasse II, hvorimod T8-bærende T-celler interagerer med målceller, der udtrykker MHC-proteiner af klasse I (4, 5, 6, 7, 8, 9). T4-populationen af T-lymfocytter indeholder hjælperceller, mens T8-populationen indeholder hovedparten af de cytotoxiske celler og suppressorceller (6, 10). Imidlertid kan 30 sjældne T4 + T-celler fungere som cytotoxiske celler eller suppressorceller (6, 10), hvilket viser, at ekspressionen af T4 eller T8 mere stringent er forbundet med MHC-klassegenkendelse end med effektor-funktion. Betydningen af disse molekyler ved interaktioner mellem T-celler og målceller kan påvises ved undersøgelser med monoklonale antistoffer. Antistoffer rettet mod specifikke epitoper af T4-molekylet 35 (eller muse-ækvivalenten L3T4) inhiberer antigen-induceret T-celleproliferation,

3 lymfokin-frigivelse og hjælpercellefunktion (7, 8, 11, 12, 13). På lignende måde inhiberer monoklonale antistoffer rettet mod T8 (eller muse-ækvivalenten Lyt2) cytotoxisk T-cellemedieret drab (14, 15). Disse iagttagelser har sammen med den kendsgerning, at T4 og T8 ikke udviser polymorfisme af betydning, ført til den 5 hypotese, at T4 og T8 genkender ikke-polymorfe områder af henholdsvis klasse II og klasse I molekyler. En anden klasse af proteiner, som antages at være forskellige på forskellige effektor-t-celler, er de receptorer, der genkender antigen i forbindelse med polymorfe 10 områder af MHC-molekyler (16, 17, 18). Interaktionerne mellem hjælper-t-lymfocytter er stort set begrænset til antigenbærende målceller, der udtrykker klasse II MHC-proteiner, mens cytotoxiske celler og suppressor-t-celler er begrænset til målceller, der bærer klasse I MHC-molekyler (4, 5, 6, 7, 8, 9). Disse specifikke interaktioner medieres måske af T-cellereceptoren (eller -receptorerne), som gen- 15 kender antigen i forbindelse med specifikke MHC-molekyler (17, 18). T-lymfocytten kan således have to uafhængige receptorer, der er i stand til at genkende både konstante og polymorfe MHC-proteindeterminanter, og disse receptorer kan være ansvarlige for specifik målretning af funktionelt forskellige populationer af T-celler. 20 Erhvervet immundefektsyndrom (AIDS) hos mennesker er kendetegnet ved depletering af T + -lymfocytter. Som følge heraf er T-cellemedieret immunitet svækket hos AIDS-patienter, hvilket medfører forekomst af alvorlige opportunistiske infektioner og usædvanlige neoplasmer. AIDS skyldes infektion af T-lymfocytter med en række nært beslægtede retrovirus (LAV, HTLV-III eller ARV), 25 som nu betegnes human immundefektvirus (HIV). Omfanget af infektivitet hos disse agentier er begrænset til celler, der udtrykker T4-glycoproteinet på deres overflade. Derfor kan T4-glycoproteinet ikke blot tjene som receptor for molekyler på overfla- 30 den af målceller, men også som receptor for AIDS-virus. Monoklonale antistoffer rettet mod T4 blokerer AIDS-virusinfektion af T4 + -celler in nitro. Desuden har nylige undersøgelser vist, at når T4 + T-lymfocytter udsættes for AIDS-virus, er det 110 kd lange kappeglycoprotein på viruset associeret med T4-molekylet på værtscellen. Virusets lymfotrope beskaffenhed kan derfor forklares ved den begrænsede 35 ekspression af dets receptor, T4, i subpopulationer af T-lymfocytter.

4 3 Depletering af T4 + -T-lymfocytter ved AIDS bevirker en svækkelse af den cellulære immunrespons. Desuden ledsages AIDS hyppigt af centralnervesystem-(cns)- dysfunktion, hvilket som oftest er en følge af en subakut encephalitis. RNA og DNA fra AIDS-virus er blevet identificeret i angrebne hjerner, og virus er blevet isoleret 5 fra både hjernen og cerebrospinalvæsken fra patienter med neurologiske lidelser. Disse iagttagelser viser, at AIDS-virus inficerer hjerneceller og er direkte ansvarligt for de CNS-læsioner, der ses hos AIDS-patienter. AIDS-virus kan således være neurotropisk såvel som lymfotropisk. Det er derfor vigtigt at bestemme, om T4 også udtrykkes i CNS, eller om yderligere hjernespecifikke overflademolekyler 10 kan tjene som receptor for AIDS-virus. Opklaringen af de specifikke interaktioner mellem T4 og T8 ville blive faciliteret af isolering af T4- og T8-generne, bestemmelse af deres struktur og indføring heraf i forskellige cellulære omgivelser. Isolering og sekventering af cdna, som koder for 15 T8-molekylet, er for nylig beskrevet (19, 20, 21). Den afledte proteinsekvens viser, at T8 er et membranbundet glycoprotein med et N-terminalt område, som er homologt med det variable område af de lette immunglobulinkæder. For nylig er isoleringen af og nukleotidsekvensen for et cdna, der koder for 20 hellængde-t-celleoverfladeproteinet T4, blevet beskrevet (se Maddon, P.J. et al., Cell, bind 42, nr. 1, august 1985, side og Isobe, M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, bind 83, side ). Det er blevet foreslået, at T4 kan udgøre en komponent af AIDS-virusreceptoren, da AIDS-virusers infektivitetsområde er begrænset til celler, der udtrykker T4-overfladeprotein. Nylige undersøgelser viste, 25 at monoklonale antistoffer rettet mod T4-epitoper blokerer AIDS-virusinfektoin af T5 +-celler. Tilgængeligheden af T4 bør derfor muliggøre en detaljeret undersøgelse af denne specifikke genkendelsesbegivenhed (se Maddon, P.J. et al., Cell, bind 42, nr. 1, august 1985, side 101). 30 Baseret på disse fund var problemet ved den foreliggende opfindelse at tilvejebringe terapeutiske midler baseret på T4-glycoproteiner til anvendelse i behandlingen af sygdomme forårsaget af AIDS-virus. 35

5 4 KORT BESKRIVELSE AF OPFINDELSEN Den foreliggende opfindelse angår et isoleret, enkeltstrenget nukleinsyremolekyle, som koder for et vandopløseligt polypeptid, som omfatter en del af et T4-5 glycoprotein, kendetegnet ved, at det vandopløselige polypeptid er i stand til specifikt at danne et kompleks med et kappeglycoprotein fra et humant immundefektvirus. Opfindelsen angår endvidere et vandopløseligt polypeptid, som er i stand til at danne et kompleks med et kappeglycoprotein fra et humant immundefektvirus, kendetegnet ved, at det vandopløselige polypeptid omfatter en 10 del af et T4-glycoprotein. Dette polypeptid kodes for af det ovenfor beskrevne enkeltstrengede nukleinsyremolekyle. Det opløselige polypeptid ifølge den foreliggende opfindelse kan anvendes som terapeutisk middel, dvs. som profylakse, til behandling af en patient, der er 15 inficeret med et humant immundefektvirus. Desuden kan et monoklonalt antistof rettet mod det opløselige polypeptid ifølge den foreliggende opfindelse være nyttigt som vaccine til immunisering af en human patient mod et humant immundefektvirus. Ydermere kan et monoklonalt antistof rettet mod det opløselige polypeptid ifølge den foreliggende opfindelse være nyttigt til fremstilling af T4-glycoprotein- 20 a nti-idiotype-antistoffer. Disse T4 -g lycoprotein-a nti-id iotype-a ntistoffer kan være nyttige som profylakse til behandling af en patient, der er inficeret med et humant immundefektvirus. 25 KORT BESKRIVELSE AF FIGURERNE Fig. 1 Cvtofluorografiske mønstre for indirekte immunfluorescens-farvning med OKT 4 og OKT 8 Celler (5x10 5) blev inkuberet med de murine monoklonale antistoffer OKT 46 eller 30 OKT 8, vasket og derpå inkuberet med FITC-konjugeret gede-antimuse-immunglobulin. Cellerne blev analyseret på en FACS IV Cell Sorter og plottet med en VAX 11/780-computer som celletal i forhold til log fluorescens. Utransformerede NIH 3T3-celler og L-celler gav identiske cytofluorografiske spor. Fro 2.2 er en leukæmisk T-cellelinje med fænotypen T3 - ; T4 + ; T8 + ; T11 +. LTD-4 er en T4 + primær

6 5 L-celletransformant vundet efter overførsel af totalt genomisk DNA. 3A+ er en NIH 3T3-cellelinje, som var transformeret med en T4-pMV6tk/neo retrovirusekspressionskonstruktion. 5 Fig. 2 Northern blot-analyse af RNA fra T4 + -og T4"-L-celler og humane celler 3 pg poly(a) +-RNA eller 12 pg totalt RNA (perifere T-celler og thymocytter) blev underkastet elektroforese gennem en 0,8% agaroseformaldehydgel, blottet på 10 GeneScreen (New England Nuclear) og probet med et 32P-mærket 0,6 kb lang T4- cdna-insert. T4 + -celler indbefatter LTD-4 (T4 +, T8' L-celletransformant), SK-7 T- cellehybridom (T4 +, T8-), CT-CLL leukæmi (T4 +, T8'), Fro 2.2 leukæmi (T4 +, T8-), T4-berigede perifere T-lymfocytter og humane thymocytter. T4 --celler indbefatter utransformerede celler, tk7 (T8 +-L-celletransformant), HeLa-celler, human neu- 15 roblastomceller (IMR) og T8-berigede perifere T-lymfocytter. Banen for human thymocyt blev eksponeret 4 gange længere og fotograferet på højkontrastfilm. Fig. 3 Restriktionsnukleasekort over pt4b og T4-genet, sekventerings- strategi og rekombinante vektorer 20 A. Alignment af BamHI-restriktionsfragmenterne af pt4b cdna og T4-genet. Rækkefølgen af BamHI-fragmenter i T4-genet blev bestemt ved Southern blotanalyse og genomisk klonkortlægning. Alignment af 5`-enden af pt4b og T4-genet er vist med stiplede linjer, og det mørke område i pt4b svarer til den kodende 25 sekvens. De angivne størrelser er i kilobaser. B. Sekventeringsstrategi. Pilene viser længden af sekvensen bestemt ved subkloning af fragmenter i M13 og sekventering ved dideoxyterminerings-proceduren (36). 30 C. Eukaryote ekspressionsvektorer. Disse konstruktioner indeholder to Moloney museleukæmivirus-"iong terminal repeats" (LTR), hvis orientering er vist med pile. pt4b cdna'et blev subklonet i EcoRI-stedet på hver vektor i den viste orientering. (a) T4-pVcos7-konstruktionen.

7 6 (b) T4-pMV6tk/neo-konstruktionen indeholder neomycin-phosphotransferasegenet fusioneret med HSV-thymidinkinase-promotoren. Fig. 4 Southern blot-analyse af DNA fra utransformerede L-celler og T4 + -L- 5 celler og T-, B- og ikke-lymfoide humane celler 10 Etg celle-dna'er blev spaltet med BamHI, underkastet elektroforese gennem en 0,8% agarosegel, blottet på GeneScreen og probet med et nick-translateret pt4bcdna-insert. De anførte størrelsesmarkører er i kilobaser. Hybridiserende bånd 10 med en størrelse på 20 kb, 6,6 kb, 4 kb, 1,8 kb og 1 kb fremkommer i alle humane DNA'er. DNA'er af T4", ikke-lymfoid oprindelse, indbefatter utransformerede L- celler, humane fibroblaster (GM), human neuroblastomceller (NB) og HeLa-celler. CB, CP58 og CP94 er DNA'er afledt af EBV-transformerede humane B-cellelinjer. LTD-4 er den T4 + primære L-celletransformant. RPMI og HSB2 er T4 --humane T- 15 celleleukæmilinjer; E +-celler og thymocytter (Thym.) indeholder T4 +-T-celler. CT- CLL, turkat (Jurk.), Fro 2.2, CEM og Molt 4 er T4 +-T-celler. gxm4 er en genomisk klon, som indeholder sekvenser, der strækker sig over Y-enden af T4-genet. Fig. 5 Immunudfældning af T4-glycoproteinet fra NII-1 3T3-celler 20 transformeret med de retrovirale ekspressionskonstruktioner L[ 3S5]-methioninmærkede proteiner fra to uafhængige NIH 3T3-transformanter, perifere T-lymfocytter og utransformerede 3T3-celler, blev underkastet linselectinchromatografi for at berige med hensyn til glycoproteiner. 2,5x10 6 cpm af hver 25 prøve blev forklaret og derefter immunudfældet med monoklonale OKT.4- antistoffer og Protein A-Sepharose. Kuglerne blev vasket, opløst i prøvebuffer og underkastet elektroforese i en 10% SDS-polyacrylamidgel under reducerende (bane a-d) og ikke-reducerende (bane e og f) betingelser. Bane a, utransformerede NIH 3T3-celler. Bane b, T4C2, en NIH 3T3-celle transformeret med T4-pVcos7-kon- 30 struktionen. Bane c og e, 3A+, en NIH 3T3-celle transformeret med T4- pmv6tkineo-konstruktionen. Bane d og f, perifere humane T-lymfocytter. Relative molekylmasser (M r) er angivet i kilodalton. 35

8 7 Fig. 6 Nukleotidsekvensen for T4-cDNA og den translaterede sekvens af T4- proteinet Nukleotidsekvensen og den afledte aminosyresekvens for cdna-klonen pt4b blev 5 opnået ved den i fig. 3B viste sekventeringsstrategi. Tal over aminosyre-sekvensen betegner aminosyreresternes stillinger. Tallene til højre angiver nukleotidstillinger. Alle ekstracellulære cysteiner er angivet med ( ) eller (o). Ledersekvensen (L), variabellignende (V), forbindelseslignende (J), transmembrane (TM) og cytoplasmiske (CYT) områder er vist med horisontale pile under sekven-sen, selv 10 om de nøjagtige grænser er uklare. To potentielle N-forbundne glyco-syleringssteder (Asn-Leu-Thr) er også vist (CHO). Fig. 7 In vitro translateret RNA stammende fra SP6-transkription 15 T4-cDNA-insertet af fuld længde blev subklonet i RNA-ekspressionsvek-toren psp65 (Promega Biotec). Lineariseret plasmid-dna blev transkriberet med SP6- polymerase (40), og RNA blev translateret i et hvedekimsystem (Bethesda Research Laboratories) indeholdende L-1 35S1-methionin. In vitro-transiationsprodukterne blev underkastet elektroforese gennem en 10% SDS-polyacrylamidgel 20 (bane T4). Bovin hypofyse-rna (BP) blev anvendt som kontrol. Relative molekylvægte (M r) er angivet i kilodalton. Fig. 8 Skematisk diagram over det T4-glycoprotein. der strækker sig over cellemembranen 25 T4 består af fire Vi-lignende tandemområder (V131-V434), et hydrofobt segment, der strækker sig over membranen (skraveret areal), og et ladet cytoplasmisk område (CYT). To potentielle N-forbundne glycosyleringssteder i den ekstracellulære del er vist ( ). Positionerne af intronerne 2-8 i T4-genet er også markeret 30 (A). 35

9 8 Fig. 9 Alignment af variable, forbindende og transmembrane områder af T4 med medlemmer af immunglobulingenfamilien 5 A. Alignment af T4's variable område med en muse-let kappa-immunglobulinkæde 3606 (66), T8 (20), en human T-celleantigenreceptors 13-kæde YT35 (97) og en human T-celleantigen-receptors a-kæde HPB-MLT a (98). De invariante rester i det variable område af let kæde er omfattet af den omhandlede alignment (Inv.). Alignment blev udført for at maksimere identiteter og strukturelle homologier med 10 T4, som er vist som rester i kasser:linjerne under sekvensen med bogstaverne A, B, C, C', D, E, F og G angiver de rester, som danner [3-strenge (67). [3-streng G fortsætter ind i 3-sekvensen. B. Alignment af aminosyresekvensen for T4's forbindende område med consensus sekvenserne af T-celleantigenreceptorensp-kæde, immunglobulin X og x lette kæder og 3-sekvensen for den humane T-cellereceptors a-kæde (99). 20 C. Alignment af T4's transmembrane områder med en MHC klasse II [3-kæde (100). Det formodede transmembrane område (TM) er angivet under sekvensen. Fig. 10 Restriktionsnukleasekort over T4-genet i humant chromosomalt DNA Positionerne af de 9 exoner blev bestemt ved genomisk klonkortlægning, Southern blot-analyse og nukleotidsekventering. Ledersekvensen (L), variabellignende (V), 25 forbindelseslignende (3), transmembrane (TM) og cytoplasmiske (CYT) områder er vist med kasser. Positionen af methioninkodonen omgivet af initierings-consensussekvensen er vist (ATG) ved begyndelsen af lederexonen (L); terminationskodonen TGA er vist ved enden af den anden cytoplasmiske exon (CYT). De angivne størrelser er i kilobaser. 30 Fig. 11 Rekombinante retrovirale ekspressionsvektorer og konstruktion af transformerede celler A. Rekombinante retrovirale ekspressionsvektorer. pmv7 indeholder to direkte gen- 35 tagne Moioney musesarkomvirus-"iong terminal repeats" (LTR) i den med pile viste

10 9 orientering. pmv7 indeholder også det bakterielle neomycin-phosphotransferasegen (neo) fusioneret til HSV-thymidinkinase-promotoren (tk). cdna-inserter i fuld længde, der koder for T4 (T4B) (70) eller T8 (T8F1) (20), blev subklonet i EcoRIstedet i den med pile viste orientering, hvilket gav henholdsvis T4-pMV7 og T8-5 pmv7. De kodende sekvenser er vist som sorte områder. De angivne størrelser er i kilobaser. B. Retrovirus-medieret genoverførselsstrategi. 10 Fig. 12 Effektiviteten af infektion af naturligt isolerede od transformerede T4 +-celler. Celler blev inokuleret med 10-foldsfortyndinger af AIDS-virus, inkuberet i 18 timer ved 37 C, vasket og udpladet i mikrokultur. Frekvensen af inficerede kulturer blev 15 bestemt ved et enzymbundet immunabsorbentassay (ELISA) 12 dage efter infektion (46). Resultaterne blev plottet som procent positive kulturer i forhold til log virusfortynding. Infektiøst virus-titer (ID-50) defineres som det reci-prokke af den fortynding, ved hvilken SO% af kulturerne er viruspositive (47). Naturligt isolerede T4 +-celler indbefatter phytohæmagglutinin (PHA)-stimulerede normale 20 perifere lymfocytter ( ) og T-celle-linjen CEM (o o). T4 + transficerede cellelinjer omfatter HSB2-T4 + T-celler (Å Å) og Raji-T4 + B- celler ( ). De T8 +-transficerede cellelinjer HSB2-T8 + og Raji-T8 + (0 0) tjente som kontroller ved disse undersøgelser. 25 Fig. 13 Dannelse af syncytier i T4 + HeLa-transformanter A. 2x10 5 enkeltlags HeLa-T4 + transformanter blev blandet med 2x10 4 AIDSvirusproducerende H9-celler og inkuberet ved 37 C. Iagttagelse af kulturerne efter 18 timer viste, at over 90% af kernerne i enkeltlagshinden var indeholdt i 30 syncytier. B. Monoklonalt anti-t4a-antistof (1:20) blev tilsat til de blandede kulturer på tidspunktet for podning. Iagttagelse af kulturerne efter 18 timer viste fuldstændigt fravær af cellefusion. 35

11 10 Kulturerne blev fotograferet ved 160 X forstørrelse. 5 Fig. 14 Flow-cytometrisk analyse af AIDS-virusbinding til transformerede T4 +-celler Søjle A. Celler (5x10 5) blev inkuberet sammen med fluorescein-konjugerede monoklonale anti-t4a ( ) eller anti-t8 (----) -antistoffer, vasket og analyseret 10 ved cyto-fluorometri. Søjle B. Celler (5x10 5) blev inkuberet med buffer (----) eller AIDS-virus ( ), vasket, inkuberet med fluorescein-konjugeret anti-aids-virusantistof og analyseret ved cytofluorometri. 15 Søjle C. Celler (5x10 5) blev inkuberet med buffer (----) eller med monoklonalt anti- T4A-antistof efterfulgt af AIDS-virus ( ) eller med monoklonalt anti-t8-antistof efterfulgt af AIDS-virus (-'-'). Efter vask blev der tilsat fluoresceinkonjugeret anti- AIDS-virus-antistof, og cellerne blev analyseret ved cytofluorometri. 20 Fluorescens-histogrammer (celletal i forhold til fluorescensintensitet) af hver cellelinje er opstillet horisontalt. Fig. 15 Northern blot-analyse af RNA afledt af menneske- og musehierne, 25 lvmfoide og myeloide celler A. Northern blot-analyse af humane RNA-prøver. 1 pg poly(a) + -RNA fra Raji (T4' B- cellelinje), U937 (T4 + monocytisk cellelinje) og Jurkat (T4 + T-cellelinje) og 5 pg poly(a) +-RNA fra cerebral cortex blev underkastet elektroforese gennem en 1% 30 agarose-formaldehydgel, blottet på Hybond (Amersham) og probet med en 32 P- mærket T4-cDNA-indsætning, pt4b (70). B. Northern blot-analyse af muse-rna-prøver. 5 pg poly(a) +-RNA fra 3T3-celler (fibroblastcellelinje), forhjerne og baghjerne og 20 pg totalt RNA fra thymocytter

12 11 blev underkastet elektroforese gennem en 1% agarose-formaldehydgel, overført til Hybond og probet med en 32P-mærket L3T4-cDNA-indsætning, pl3t4b. DETAUERET BESKRIVELSE AF OPFINDELSEN 5 Opfindelsen angår et enkeltstrenget nukleinsyremolekyle, der koder for et vandopløseligt polypeptid, som omfatter en del af et T4-glycoprotein. Det vandopløselige polypeptid, der kodes for af nukleinsyremolekylet, er i stand til specifikt at danne et kompleks med et kappeglycoprotein fra humant 10 immundefektvirus. I en specifik udførelsesform af opfindelsen er nukleinsyremolekylet mindst 90% homologt med et nukleinsyremolekyle, som koder for en amionsyresekvens, som udgør i det mindste en del af et T4-glycoprotein. Udtrykket "vandig opløsning" indbefatter i nærværende ansøgning, men er ikke begrænset til, detergentfrie vandige buffere og legernsvæsker såsom blod, plasma og serum. 15 Desuden betegner udtrykket "opløseligt T4" et fragment af et T4-glycoprotein, som er opløseligt i en vandig opløsning. I en yderligere udførelsesform af opfindelsen koder nukleinsyremolekylet for et vandopløseligt polypeptid, der i det mindste er en del af et humant T4-glycoprotein. 20 Opfindelsen angår også et nukleinsyremolekyle, som er komplementært til det ovenfor beskrevne enkeltstrengede nukleinsyremolekyle. Dette komplementære nukleinsyremolekyle kan være mærket med en detekterbar markør. Sådanne detekterbare markører er kendte inden for det tekniske område, som opfindelsen hører til, og indbefatter detekterbare enzymer, radiomærkede grupper, 25 fluorescerende grupper og kemiluminescerende grupper. Det enkeltstrengede nukleinsyremolekyle kan være et DNA-molekyle. I &) udførelsesform af opfindelsen omfatter DNA-molekylet en del af det genomiske DNAmolekyle, der er vist ved restriktionsenzymkortet i fig. 10. I en anden 30 udførelsesform af opfindelsen kan det enkeltstrengede nukleinsyremolekyle være et cdna-molekyle. I en anden udførelsesform af opfindelsen kan det enkeltstrengede nukleinsyremolekyle være et cdna. Dette cdna-molekyle kan omfatte en del af den i fig. 6 viste nukleinsyresekvens.

13 12 Den foreliggende opfindelse angår desuden et RNA-molekyle, der koder for et vandopløseligt polypeptid, som omfatter en del af et T4-glycoprotein. Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til detektion af et enkelt- 5 strenget nukleinsyremolekyle, som koder for et vandopløseligt polypeptid, som omfatter en del af et T4-glycoprotein. Denne fremgangsmåde omfatter, at enkeltstrengede nukleinsyremolekyler bringes i kontakt med et mærket, enkeltstrenget nukleinsyremolekyle, som er komplementært til et enkeltstrenget nukleinsyremolekyle, der koder for et vandopløseligt polypeptid som defineret 10 ovenfor, under betingelser, der tillader hybridisering af komplementære enkeltstrengede nukleinsyremolekyler. Hybridiserede nukleinsyremolekyler adskilles fra enkeltstrengede nukleinsyremolekyler for at detektere et enkeltstrenget nukleinsyremolekyle, der koder for et vandopløseligt polypeptid, som omfatter en del af et T4-glycoprotein. I &) udførelsesform af opfindelsen er det detekterede 15 enkeltstrengede molekyle et DNA-molekyle afledt af chromosomalt DNA. Det chromosomale DNA kan være afledt af lymfoide eller myeloide celler eller hjerneceller. Den lymfoide celle kan være en T-celle eller en B-celle. Desuden kan den myeloide celle være et granulocytsted eller en makrofag. 20 Den foreliggende opfindelse angår også et vandopløseligt polypeptid, der omfatter en del af et T4-glycoprotein. Det vandopløselige polypeptid er i stand til specifikt at danne et kompleks med et kappeglycoprotein fra humant immundefektvirus, og kodes for af det enkeltstrengede nukleinsyremolekyle som defineret ovenfor. I en anden udførelsesform af opfindelsen er det vandopløselige polypeptid mindst 9" 25 homologt med det vandopløselige polypeptid. Det vandopløselige polypeptid, der er i stand til specifikt at danne et kompleks med et kappeglycoprotein fra humant immundefektvirus, og som omfatter en del af et T4-glycoprotein, og som kodes for af det ovenfor definerede enkeltstrengede 30 nukleinsyremolekyle, er nyttigt som et terapeutisk middel til behandling af en patient, der er inficeret med et humant immundefektvirus, dvs. som profylakse mod AIDS. I en foretrukken udførelsesform af opfindelsen omfatter det vandopløselige polypeptid den i fig. 6 viste aminosyresekvens fra mindst aminosyre -23 til højst aminosyre Andre foretrukne udførelsesformer af opfindelsen 35 indbefatter aminosyresekvenser, der omfatter den i fig. 6 viste aminosyresekvens

14 13 fra mindst aminosyre +287 til højst aminosyre +374, fra mindst aminosyre +182 til højst aminosyre +286, fra mindst aminosyre +112 til højst aminosyre +181 og fra mindst aminosyre +1 til højst aminosyre Opfindelsen angår endvidere et farmaceutisk præparat, der er nyttigt som terapeutisk middel til behandling af en patient, som er inficeret med et humant immundefektvirus. Dette farmaceutiske præparat omfatter et vandopløseligt polypeptid ifølge den foreliggende opfindelse, hvilket polypeptid omfatter en del af et T4-glycoprotein, som er i stand til specifikt at danne et kompleks med et 10 kappeglycoprotein fra humant immundefektvirus, og som kodes for af det ovenfor definerede enkeltstrengede nukleinsyremolekyle, samt en farmaceutisk acceptabel bærer. Sådanne farmaceutisk acceptable bærere er kendte inden for det område, som opfindelsen hører til, og omfatter, men er ikke begrænset til, 0,01-0,1 M, fortrinsvis 0,05 M, phosphatbuffer eller 0,8% saltopløsning. 15 Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til behandling af en patient, der er inficeret med et humant immundefektvirus. Denne fremgangsmåde omfatter, at der til patienten administreres en effektiv mængde af et farmaceutisk præparat, der indeholder en farmaceutisk acceptabel bærer og det vandopløselige polypeptid, 20 således at humane immundefektvirus (også betegnet AIDS-virus), hvormed patienten er inficeret, bliver ude af stand til at inficere T4 + -celler. Den foreliggende opfindelse angår ligeledes et oprenset polypeptid, der kodes for et cdna-molekyle, der omfatter i det mindste en del af den i fig. 6 viste 25 nukleinsyre-sekvens. Opfindelsen angår tillige en vektor, der omfatter et cdna-molekyle, som i det mindste er en del af den i fig. 6 viste nukleinsyresekvens. I &I udførelsesform af opfindelsen er vektoren et plasmid. I en anden udførelsesform for opfindelsen er 30 vektoren et virus. Den foreliggende opfindelse angår også et vært-vektorsystem til fremstilling af et vandopløseligt polypeptid, som omfatter en del af et T4-glycoprotein. Dette værtvektorsystem omfatter et plasmid ifølge den foreliggende opfindelse i en hensigts- 35 mæssig vært. I &I udførelsesform af opfindelsen er den hensigtsmæssige vært en

15 14 bakteriecelle. I en anden udførelsesform af opfindelsen er bakteriecellen en Escherichia co/i-celle. I endnu en udførelsesform af opfindelsen er den hensigtsmæssige vært en eukaryot celle. I en yderligere udførelsesform af opfindelsen er den eukaryote celle en pattedyrcelle. I en yderligere udførelsesform af opfin- 5 deisen er den eukaryote celle en gærcelle. I endnu en udførelsesform af opfindelsen er den hensigtsmæssige vært en insektcelle. Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af et vandopløseligt polypeptid, som omfatter en del af et T4-glycoprotein, og som er i stand til 10 specifikt at danne et kompleks med et kappeglycoprotein fra et humant immundefektvirus. Denne fremgangsmåde omfatter, at et vært-vektorsystem ifølge den foreliggende opfindelse dyrkes under betingelser, der tillader produktion af det vandopløselige polypeptid, og at det resulterende vandopløselige polypeptid isoleres. Den foreliggende opfindelse angår endvidere vært-vektorsystemer og 15 fremgangsmåder til fremstilling af det vandopløselige polypeptid, hvor vektoren omfatter et cdna-molekyle ifølge den foreliggende opfindelse og et virus. Passende værter indbefatter, men er ikke begrænset til, bakterieceller, fx Escherichia coliceller, eukaryote celler, fx pattedyr- og gærceller, og insektceller. Et vandopløseligt polypeptid, som er en del af et T4-glycoprotein, kan fremstilles ved at dyrke et 20 vært-vektorsystem, der omfatter et virus og et cdna-molekyle ifølge den foreliggende opfindelse, under passende betingelser, der tillader produktion af en del af et T4-glycoprotein. Den resulterende del af et T4-glycoprotein kan isoleres fra vært-vektorsystemet ved kendte fremgangsmåder. 25 Den foreliggende opfindelse angår endvidere et stof, der er i stand til at danne et kompleks med det vandopløselige polypeptid som defineret ovenfor. I en udførelsesform af opfindelsen er antistoffet et monoklonalt antistof. I en yderligere udførelsesform af opfindelsen er det monoklonale antistof et humant monoklonalt antistof. 30 Opfindelsen angår også en vaccine, der kan anvendes til immunisering af en human patient mod et humant immundefektvirus. Denne vaccine omfatter et monoklonalt antistof ifølge den foreliggende opfindelse og en farmaceutisk acceptabel bærer. Ved til en human patient at administrere en effektiv immuniserende 35 mængde af en vaccine ifølge den foreliggende opfindelse kan man udløse

16 15 produktionen af antistoffer, som er i stand til at neutralisere humane immundefektvirus, hvorved patienten immuniseres mod et humant immundefektvirus. Opfindelsen angår tillige et antistof, der er i stand til specifikt at danne et kompleks 5 med et monoklonalt antistof ifølge den foreliggende opfindelse. I en udførelsesform af opfindelsen er antistoffet desuden i stand til at danne et specifikt kompleks med et kappeglycoprotein fra humant immundefektvirus. I en foretrukken udførelsesform af opfindelsen omfatter substansen et anti-idiotypisk T4- glycoprotein-antistof, der indeholder et "indre billede" af det T4-bindingsområde, 10 som er i stand til at genkende receptorbindingsdomænet af et kappeglycoprotein fra humant immundefektvirus. Opfindelsen angår også et farmaceutisk præparat, som omfatter et anti-idiotypisk T4-glycoprotein-antistof ifølge den foreliggende opfindelse og en farmaceutisk 15 acceptabel bærer. Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde til behandling af en patient, der er inficeret med et humant immundefektvirus, ved hvilken metode der til patienten administreres en effektiv mængde af et farmaceutisk præparat ifølge den foreliggende opfindelse, hvilket præparat omfatter et antiidiotypisk T4-glycoprotein-antistof og en farmaceutisk acceptabel bærer, således at 20 humane immundefektvirus, hvormed patienten er inficeret, bliver ude af stand til at inficere T4 +-celler. De forskellige profylakse- og immuniseringsfremgangsmåder for AIDS, der tilvejebringes ifølge den foreliggende opfindelse, er baseret på evnen hos de hidtil 25 ukendte peptider, antistoffer og DNA-molekyler, der er beskrevet i nærværende ansøgning, til at danne komplekser med, eller hybridisere til, specifikke molekyler og fremprovokere en immunlogisk respons, der er effektiv med hensyn til at neutralisere AIDS-viruset. Disse molekyler, fremgangsmåder til fremstilling deraf og fremgangsmåder til behandling af AIDS forklares nærmere under henvisning til 30 følgende eksperimenter og eksempler, som er anført som en belysning af opfindelsen og på ingen måde skal opfattes som en begrænsning af opfindelsens omfang, som er angivet i nedenstående patentkrav. 35

17 16 MATERIALER OG METODER Celler og antistoffer 5 Perifere blodleukocytter isoleret ved Ficoll-Hypaque-densitetsgradientcentrifugering blev fraktioneret i fåreerythrocyt-rosette-positive (E +) celler. T4 + og T8 + undergrupper inden for E + populationen blev isoleret ved positiv selektion af T8-bærende celler med anti-t8-antistof og humane erythrocytter konjugeret med affinitetsoprenset kanin-antimuse-igg (10). Cytofluorometrisk analyse af disse undergrupper 10 viste, at T4 + cellerne var >95% T4 + og <2% T8 +, mens T8 + cellerne var >95% T og <2% T4 Fro 2.2 T-cellelinjen (T3 -, T4 +, T8+, T11 +) stammede fra en voksen patient med udifferentieret akut leukæmi. ]urkat er T3 -, T4 +, T8 +, T11 -, RPMI 8402 er T3 -, T4 -, 15 TW, T11 +. OT-CLL er en kronisk lymfocytær leukæmi, som er T3 +, T4 +, T8 - og T cellelinjerne CEM og Molt 4 blev skaffet fra American Type Culture Collection. Alle leukæmiske T-cellelinjer blev kontinuerligt dyrket i RPMI medium indeholdende 5% føtalt kalveserum. Transformerede B-cellelinjer CB, CP58 og CP94 blev fremstillet som beskrevet tidligere (23). Affinitetsoprenset kanin-antimuse-igg blev konjugeret med humane erythrocytter ved chromchloridmetoden (24). (22). T4 25 Cotransforrnation af L-celler og NIH 3T3-celler L tk -aprt - museceller blev holdt i Dulbecco's modificerede Eagle's medium (DME) beriget med 10% kalveserum (Gibco) og 50 Figimi diaminopurin (DAP). L-celler blev udpladet med en tæthed på 5x10 4 celler pr. 10 cm skål 1 dag før transformation. Calciumphosphatpræcipitater blev fremstillet ved fremgangsmåden ifølge 30 Graham og van der Eb (25), modificeret af Wigler et al. (26) under anvendelse af 100 ng ptk og 20 lig højmolekylært T-celle- eller L-celle-DNA pr. skål. L-cellerne blev den følgende dag anbragt under selektion i DME med 10% kalveserum, 15 pg/ml hypoxanthin, 1 pg/ml aminopterin og 5 thymidin (HAT-medium (27)). Efter dages HAT-selektion blev tk +-transformanter screenet under 35 anvendelse af rosettedannelsesassayet.

18 17 NIH 3T3-museceller blev holdt i DME beriget med 10% nyfødt kalveserum (Gibco). NIH 3T3-celler blev udpladet med en tæthed på 5x10 4 celler pr. 10 cm skål 2 dage før transformation. Et calciumphosphatpræcipitat blev anbragt på 5 cellerne under anvendelse af 10 pg bærer-dna og enten 10 ig T4-pMV6tk/neo eller 10 pg T4-pVcos7 og 500 ng psv2neo. Efter 2 dage blev cellerne anbragt under selektion i DME med 10% kalveserum og 500 pg/ml G418 (Geneticin ; Gibco). Rosettedannelsesassays blev udført på overlevende kolonier 1 uge efter vækst i selektivt medium. 10 Rosettedannelsesassay Efter &I skylning med phosphatbufret saltopløsning (PBS) blev pladerne inkuberet med 2,5 ml af det oprensede monoklonale antistof OKT 4A (1 mg/ml) fortyndet 15 1:500 i PBS indeholdende 5% føtalt kalveserum i 45 minutter ved stuetemperatur. Frit antistof blev fjernet fra pladerne ved 3 nænsomme skylninger i PBS. 6 ml humane erythrocytter konjugeret med oprenset kanin-antimuse-igg-antistof (2 0/0 vol/vol stamsuspension, fortyndet 1:10 i PBS/5 0/0 føtalt kalveserum) blev tilsat, og pladerne henstod ved stuetemperatur. Efter 45 minutter blev frie erythrocytter 20 nænsomt suget op, og PBS blev tilsat før undersøgelse for rosettepositive kloner. Cytofluorometrisk analyse Adhærerende celler blev fjernet med 0,005 M EDTA i PBS og vasket &I gang med 25 PBS indeholdende 1% bovint serumalbumin (BSA) og 0,01 /0 natriumazid (cytovask). Celler (5x10 6) i 0,1 ml blev sat til rør med hensigtsmæssige fortyndinger af OKT 4, OKT 8 eller kontrolantistoffer. Celle/antistofblandingen blev inkuberet i 45 minutter ved 4 C og derefter vasket to gange i cytovask. Fluoroscein-isothiocyanat- (FITC)-konjugeret gede-antimuse-igg + A + M (Cappel) blev sat til cellerne og 30 inkuberet i 1 time ved 4 C. Cellerne blev derpå vasket 3 gange i cytovask og resuspenderet i 0,5 ml PBS med 0,01% natriumazid. Cellerne blev analyseret på en Becton Dickinson FACS IV Cell Sorter, og dataene blev lagret og plottet under anvendelse af en VAX 11/780-computer (Digital Equipment Co.). 35

19 18 RNA- og DNA-isolering Totalt RNA blev isoleret fra cellerne ved homogenisering i 4 M guadiniumthiocyanat efterfulgt af ultracentrifugering gennem en 5,7 M CsCl-pude (28). 5 Poly(A) +-selektion blev foretaget ved oligo(dt)-cellulosechromatografi (Type 3, Collaborative Research) (29). Højmolekylært genomisk DNA blev fremstillet som beskrevet af Wigler et al. (26). cdna- og genombiblioteker 10 Dobbeltstrenget cdna blev syntetiseret ud fra poly(a) + -RNA fra perifere humane T- celler (20). Efter behandling med EcoRI-methylase og T4 DNA-polymerase blev det dobbeltstrengede cdna klonet i EcoRI-stedet på Xgt10 (30) under anvendelse af EcoRI-linkere. Charon 4 humant genombibliotek blev venligt stillet til rådighed af 15 Dr. Tom Maniatis (Narvard University) (31). Syntese af en subtraheret cdna-probe 32P-mærket cdna blev syntetiseret ud fra poly(a) + -RNA fra den primære transfor- 20 mant, LTD-4, som beskrevet af Davis et al. (32). Efter sammenføjning af cdna'et med et overskud af utransformeret L-celle poly(a) +-RNA (Rot = 3000) blev enkeltstrengede sekvenser, som var rige på humane cdna'er, isoleret ved hydroxyapatitchromatografi (32). Før filterhybridisering blev den subtraherede cdna-probe koncentreret med sek.butanol og afsaltet på en G-50 Sephadex-søjle ækvilibreret i TE. 25 Screening af cdna- og genombiblioteker Biblioteket af perifere humane T-celler blev udpladet på E. coli C600/HFL, og det humane genombibliotek blev udpladet på E. coli LE392. Screening af duplikat-filtre 30 blev udført ved en standardprocedure (33), hvor hybridiseringen blev udført i 50% formamid og 5x SSC ved 42 C. Ved screeningen af cdna-biblioteket blev 6x10 4 cpm subtraheret probe påført pr. 137 mm nitrocellulosefilter. Filtre fra genombiblioteket blev hybridiseret til en nick-translateret (34) cdna-indsætning. Vaskningerne blev udført ved 68 C med en afsluttende vask i 0,2x SSC. Autoradio- 35 grafi blev udført ved -70 C i nærværelse af forstærkningsskærme i 1-2 dage.

20 19 DNA-sekventering Restriktionsfragmenter fra pt4b blev subklonet i M13-vektorerne mpl8 og mpl9 (35). Sekventeringsreaktioner blev udført under anvendelse af dideoxykædeter- 5 minationsteknikken (36). Sekventeringsstrategien er vist i fig. 3B. Southern og northern blot-hybridiseringer Celle-DNA'er med høj molekylvægt blev spaltet med 5 enheder 10 restriktionsnuklease pr. pg DNA ifølge leverandørens forskrifter (Boehringer Mannheim). Prøver (10 lig) blev underkastet elektroforese på en 0,8% agarosegel. DNA-fragmenter blev over-ført til GeneScreen (New England Nuclear; (37)) og hybridiseret som beskrevet af Church og Gilbert (38). 15 RNA blev kørt på en 0,8% agarose-formaldehydgel (39) og overført til GeneScreen. Northern-hybridisering blev udført ifølge de af leverandøren givne forskrifter. Både Southern og northern blots blev hybridiseret til nick-translaterede prober. Syntese og in vivo-translation af SP6 RNA 20 Det... kb lange T4-cDNA blev subklonet i EcoRI-stedet på psp65 (Promega Biotec) og lineariseret med HindIII. Transkription af lineariseret plasmid-dna (1 pg) med SP6-polymerase i fraværelse af radiomærkede nukleotider blev udført som beskrevet (40) bortset fra, at GpppG og umærket CTP blev sat til transkriptionsbuf- 25 feren. 1/10 af reaktionsblandingen blev translateret i et hvedekimsystem (Bethesda Research Laboratories) indeholdende L-( 32S]-methionin (Amersham) og 1 pmol's-adenosylmethionin. In vitro-translationsprodukterne blev underkastet SDS-polyacrylamidelektroforese under reducerende betingelser som beskrevet nedenfor. 30 Cellemærkning, lectinchromatografi og immunudfældning Celler blev dyrket i 12 dage i methioninfrit DME-medium indeholdende 10% dialyseret kalveserum og 1 mci L-j 32S)-methionin (Amersham) som beskrevet tidligere 35 (41). Cellerne blev solubiliseret i 10 mm Tris (ph 7,4), 150 mm NaCI (TBS)

21 20 indeholdende 0,5% Nonidet P-40 (Shell) og 0,2 mm phenylmethylsulfonylfluorid (Sigma). Lysaterne blev centrifugeret i 1 time ved x g, og supernatanterne blev underkastet linselectinchromatografi (Pharmacia) ved fremgangsmåderne ifølge Hedo et al. (42). Eluater blev præabsorberet &I gang med en 5 blanding af kontrol-museascites og protein A-Sepharose (Pharmacia) i 1 time ved 4 C og to gange med protein A-Sepharose alene i 1 time ved 4 C. Af hver supernatant blev 2,5x10 4 cpm derefter blandet med 10 pil monoklonalt antistof (ca. 1 mg/ml) og protein A-Sepharose og inkuberet på en drejeskive natten over ved 4 C. Kuglerne blev derefter vasket 4 gange med koldt TBS indeholdende 0,5% NP og 0,2% SDS og blev resuspenderet i elektroforeseprøvebuffer. Gelelektroforese SDS-polyacrylamidgelelektroforese blev udført ved proceduren ifølge Laemmli (43). 15 Immunpræcipitaterne og in vitro-translationsprodukterne blev opløst i prøvebuffer med eller uden 2-mercaptoethanol og blev derefter sat på 10 0/0 polyacrylamidgeler. Autoradiografi blev udført på Kodak XAR-5-film i nærværelse af forstærkningsskærme (DuPont Chemical Company). 20 Cotransformation og rosettedannelsesassay Muse k -2-celler (44) blev holdt i Dulbecco's modificerede Eagle's medium (DME) beriget med 10% kalveserum (CS) (Gibco). tv-2-celler blev udpladet med en tæthed på 5x10 $ celler pr. 10 cm skål 2 dage før transformation. Calciumphosphat- 25 præcipitater blev fremstillet ved metoden ifølge Graham og van der Eb (25), modificeret af Wigler et al. (27). Præcipitater blev tilført cellerne under anvendelse af 10 pg bærer-dna og enten 10 pg T4-pMV7 eller 10 pg T8-pMV7. Efter 2 dage blev cellerne anbragt under selektionsbetingelser i DME/10% CS og 500 pg/ml G418 (Geneticin ; Gibco). 30 Rosettedannelsesassays for at identificere T4 +- eller T8 +-kolonier blev udført på overlevende kolonier 1 uge efter vækst i selektivt medium. Efter &I skylning med phosphatbufret saltopløsning (PBS) blev pladerne inkuberet med 2,5 ml af det oprensede monoklonale antistof OKT 4A eller OKT 8 (1 mg/ml; Ortho) fortyndet

22 21 1:500 i PBS indeholdende 5% føtalt kalveserum (FCS) i 45 minutter ved stuetemperatur. Frit antistof blev fjernet fra pladerne ved tre nænsomme skylninger i PBS. 6 ml humane erythrocytter konjugeret med oprenset kanin-antimuse-igg-antistof (2% vol/vol stamsuspension fortyndet 1:10 i PBS/5% FCS) blev tilsat, og pladerne 5 henstod ved stuetemperatur. Efter 45 minutter blev frie erythrocytter nænsomt suget op, og PBS blev tilsat før undersøgelse. T4 + og T8 + p-2-kloner blev oprenset ved koloniisolering og karakteriseret ved flow-cytometri og Northern blot-analyse. Fremstilling af og infektion med rekombinant retrovirus 10 Der blev isoleret T4 + -og T8 +-y-2-kloner, som producerer rekombinant stamretrovi-rus i titere på 10 5 cfu/ml. Stam-virus blev fremstillet ved tilsætning af 10 ml frisk DME/10% CS til et næsten konfluent monolag af T4 +-eller T8+ -y- 2- klonerne. Efter 24 timer blev mediet fjernet og filtreret gennem et 0,45 lim filter 15 (Millipore). Til infektion blev 5x10 5 celler inkuberet med 2 ml viral supernatant (eller en fortynding) i nærværelse af 8 pg/ml polybren (Aldrich). Efter 3 timer blev der tilsat 8 ml frisk medium. 3 dage efter infektionen blev cellerne på ny podet i DME/10% CS indeholdende 500 pig/ml G418, dyrket i 2 uger, analyseret for G418` kolonier og screenet for overflade T4- eller T8-ekspression under anvendelse af in 20 situ-rosette-dannelsesproceduren eller flow-cytometri. y-2-kultursupernatanter blev anvendt til at inficere muse-y-am-celler som beskreet ovenfor. Adhærerende T4 + -eller T8 + -transformanter blev oprenset ved in siturosettedannelsesassayet efterfulgt af koloniisolering; ikke-adhærente T4 + -eller 25 T8 +-transformanter blev oprenset ved fluorescensaktiveret cellesortering (FACS). Ikke-adhærerende humane lymfoide cellelinjer (HSB2, RPMI - T-celler; Raji - B- celler)og adhærerende epitelceller (HeLa) blev inficeret ved samdyrkning med T y-am-kloner (forbehandlet med 10 pg/ml mitomycin-c i 2 timer; Sigma) -eller T8 og blev oprenset. 30 Cellelinjer blev selekteret for G418-resistens ved en koncentration på 1,5 mg/ml undtagen HeLa-celler, som kræver 1 mg/ml, og fibroblaster, som kræver 0,5 g/ml. Alle cellekulturer, der producerede rekombinante amfotrofe virus (w -AM), blev holdt under P3-indeslutningsbetingelser. 35

23 22 AIDS-virus Prototype-LAV-stammen HTLV-III/LAV blev skaffet fra J.-C. Cherman (Institut Pasteur, Paris; (45)). Virusinokula, der blev anvendt ved disse undersøgelser, var 5 fra den 2. til 5. passage af virus i nærværende ansøgers laboratorium. Inokula er kultursupernatanter fra HTLV-III/LAV-inficerede, phytohæmagglutinin-(pha)- stimulerede perifere lymfocytter, som blev høstet ved sekventiel centrifugering (300 x g i 7 minutter efterfulgt af 1500 x g i 20 minutter) og blev opbevaret i flydende nitrogen. Til bindingsundersøgelser blev virus koncentreret fra kultur- 10 superatanter og høstet som beskrevet ovenfor ved ultracentrifugering ved x g i 90 minutter over en 15% pude af Renograffin (E.R. Squibb) i 0,01 M Tris, 0,15 M NaCI, 1 mm EDTA, ph 8,0. Anti-HTLV-III/ LAV-reagenser 15 Serum med høje niveauer af antistof mod HTLV-III/LAV blev vundet fra en homoseksuel mand med kronisk lymfadenopati, og dets specificitet er blevet beskrevet ved immunfluorescens (46), western blot-analyse (47) og radioimmunudfældning (48). Portioner af IgG-fraktionen blev koblet med fluorescein-isothiocyanat (FITC; 20 FITC:protein-forhold på 10,7 Etg/ml), peberrodsperoxidase (HPO; type VI; Sigma) og agarose som beskrevet (47, 49, 50, 51). Konjugater af IgG fra et ikke-immunt serum blev fremstillet parallelt. 25 Omvendt transkriptase-assay Magnesiumafhængig, partikelformig omvendt transkriptase (RT)-aktivitet blev målt med en skabelon-primer af (A),,(dT)12-18 (eller (da),(dt) som negativ kontrol) i nærværelse af 7,5 mm Mg 2+ (52). 30 Immunfluorescens-detektion af cytoplasmisk AIDS-virus Dyrkede celler (1x10 5 i 0,1 ml) blev centrifugeret over på objektglas (Shandon Cytocentrifuge), fikseret i 95% ethanol og 5% eddikesyre ved -20 C i 30 minutter og rehydreret med tre 10 minutters udskiftninger af PBS (0,01 M PO4, 0,15 M NaCI, 35 ph 8,0). Objektglassene blev eksponeret på en 1:500 fortynding af FITC-anti-

24 23 HTLV-III/LAV (191,49/m1) i 30 minutter ved stuetemperatur. Objektglassene blev derefter vasket (tre udskiftninger, 10 minutter hver) og under et dækglas tilsat 50% glycerol i PBS. Objektglassene blev undersøgt under et epiillumineret Leitz Orthoplan-mikroskop ved 630x forstørrelse. Under disse betingelser er FITC-anti- 5 HTLV-III/LAV-reagenset specifikt over for HTLV-III/LAV. Uinficerede PHA-stimulerede celler, Epstein Barr (EB)-virusinficerede B-cellelinjer, en adenovirusinficeret cellelinje, flere T-cellelinjer og HTLV-I- og HTLV-II-inficerede cellelinjer blev ikke farvet. 10 AIDS-virus-immunassay (antigenbindingsassay) Dette er et sandwich-immunassay, som er beskrevet i detaljer (47). Kort fortalt sættes kultursupernatant til mikrotiterpladebrønde belagt med anti-htlv-iii/lav- IgG. Efter at pladerne er vasket, detekteres bundet virusantigen med HPO-anti- 15 HTLV-III/LAV. Dette assay, som er mindst lige så følsomt som RT-assayet, er negativt med kultursupernatanter fra PHA-stimulerede lymfocytter fra flere donorer, EB-virusinficerede B-cellelinjer, flere T-cellelinjer, polyklonale og klonede IL-2- afhængige T-cellelinjer, den myeloide linje K562 samt cellelinjer, der indeholder HTLV-I eller HTLV-II. OD 490-grænsen for at kunne skelne en positiv fra en negativ 20 supernatant blev bestemt for hvert forsøg ud fra gennemsnittet plus 2 SD af mindst 10 gentagne bestemmelser på kontrolsupernatanter (uinficeret cellekultur) høstet på samme tid. AIDS-virusinfektivitetsassay (ID -50) 25 Mikrokulturassayet for titrering af infektiøst HTLV-III/LAV er beskrevet i detaljer (47). Kort fortalt inokuleres PHA-stimulerede lymfocytter eller cellelinjer (2x10 6 celler/ml) med 10 ganges serie-fortyndinger af virusinokulum og inkuberes i 18 timer ved 37 C. Cellerne blev derpå vasket og udpladet i mikrokultur (10-20 kul- 30 turer pr. fortynding: lx10 5 celler pr. kultur i 0,25 ml medium). Hver 4. dag blev supernatant fjernet og erstattet med frisk medium. Supernatanter blev derefter analyseret for virusantigen ved antigen-bindingsassayet som beskrevet ovenfor. Infektiøst virustiter (ID-50) defineres som det reciprokke af den fortynding, ved hvilken 50% af kulturerne er positive for virus (47). 35

En forsker har lavet et cdna insert vha PCR og har anvendt det følgende primer sæt, som producerer hele den åbne læseramme af cdna et:

En forsker har lavet et cdna insert vha PCR og har anvendt det følgende primer sæt, som producerer hele den åbne læseramme af cdna et: F2011-Opgave 1. En forsker har lavet et cdna insert vha PCR og har anvendt det følgende primer sæt, som producerer hele den åbne læseramme af cdna et: Forward primer: 5 CC ATG GGT ATG AAG CTT TGC AGC CTT

Læs mere

Spm. A: Hvad viser data i Figur 1?

Spm. A: Hvad viser data i Figur 1? Opgave 1 Leptin er et plasma proteinhormon der primært produceres af og secerneres fra fedtceller (adipocytter). Leptin, der er kodet af ob (obecity) genet, er 16 kda stort. Leptins fysiologiske funktion

Læs mere

Forårseksamen Titel på kursus: Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering

Forårseksamen Titel på kursus: Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering Studienummer: 1/10 Forårseksamen 2014 Titel på kursus: Det hæmatologiske system og immunsystemet Uddannelse: Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering Semester: 2. semester Eksamensdato:

Læs mere

CYP7A1 (0,1 nm) CYP7A1 (0nM) UBIC (0,1 nm)

CYP7A1 (0,1 nm) CYP7A1 (0nM) UBIC (0,1 nm) Opgave 1 Leveren spiller en central rolle i lipid metabolismen og i opretholdelse af lipid homeostasen i hele kroppen. Lipidmetabolismen er fejlreguleret hos blandt andet svært overvægtige personer samt

Læs mere

Biologien bag epidemien

Biologien bag epidemien Biologien bag epidemien Af Niels Kristiansen, biologilærer, Grindsted Gymnasium Sygdomme kan smitte på mange måder. Enten via virus, bakterier eller parasitter. I det følgende vil vi koncentrere os om

Læs mere

(19) DANMARK (11) DK 176078 B1 +tb (12) PATENTSKRIFT

(19) DANMARK (11) DK 176078 B1 +tb (12) PATENTSKRIFT (19) DANMARK (11) DK 176078 B1 +tb (12) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1. 8: C 12 N 7/00 (2006.01) C 12 N 15/00 (2006.01) G 01 N 33/569 (2006.01) (21) Patentansøgning nr: PA 1990

Læs mere

Besvarelse af opgaverne til den Spm.A: efter TGA TCA Spm. B:

Besvarelse af opgaverne til den Spm.A: efter TGA TCA Spm. B: Besvarelse af opgaverne til den 20-9-06 Spm.A: Her vil vi gerne sætte et relativt lille stykke DNA (FLAG) sammen med et relativt stort stykke (PRB1). Det lille stykke er for lille til at vi kan PCR amplificere

Læs mere

datp, dctp, dgtp, dttp, [α 32 P]-dCTP urinstofholdig polyacrylamid gel røntgen film

datp, dctp, dgtp, dttp, [α 32 P]-dCTP urinstofholdig polyacrylamid gel røntgen film Opgave 1 Denne opgave omhandler osteoblast differentiering. Osteoblast celler er involveret i opbygning af knoglevæv. Osteoblast celler dannes ud fra såkaldte calvarial celler. For at forstå det molekylære

Læs mere

Re- eksamen 2012 Med korte, vejledende svar

Re- eksamen 2012 Med korte, vejledende svar Studienummer: 1 Re- eksamen 2012 Med korte, vejledende svar Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering

Læs mere

(19) DANMARK (12) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen. (57) Sammendrag: (11) DK 175318 B1

(19) DANMARK (12) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen. (57) Sammendrag: (11) DK 175318 B1 (19) DANMARK (11) DK 175318 B1 (12) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: A 61 K 39/17 C 12 N 7/00 (21) Patentansøgning nr: PA 1989 03471 (22) Indleveringsdag: 1989-07-13 (24) Løbedag:

Læs mere

Løsninger til opgaverne den Spm. A: Spm. B Spm. C:

Løsninger til opgaverne den Spm. A: Spm. B Spm. C: Løsninger til opgaverne den 12-9-07 Spm. A: Her er vi i en situation at det eneste der kendes til vores receptor er, at den kan binde en ligand, som vi har til rådighed i en radioaktiv mærket version.

Læs mere

Besvarelse til opgave 1 januar 1999 Spm. A: Spm. B:

Besvarelse til opgave 1 januar 1999 Spm. A: Spm. B: Besvarelse til opgave 1 januar 1999 Spm. A: Vi må lave et genomisk bibliotek i en lambdafag, cosmid, BAC eller YAC plasmid. Til dette vil vi skære det genomiske DNA partielt med Sau3A, så vi får stykker

Læs mere

Dette er en kladde til et genoptryk af Eksperimentel Genteknologi fra 1991. Ideer, rettelser og forslag modtages gerne. Kh Claudia.

Dette er en kladde til et genoptryk af Eksperimentel Genteknologi fra 1991. Ideer, rettelser og forslag modtages gerne. Kh Claudia. Transformation af E.coli K 12 Version 3. marts 2009 (C) Claudia Girnth-Diamba og Bjørn Fahnøe Dette er en kladde til et genoptryk af Eksperimentel Genteknologi fra 1991. Ideer, rettelser og forslag modtages

Læs mere

Sommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar

Sommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar 1 Sommereksamen 2012 Med korte, vejledende svar Titel på kursus: Uddannelse: Semester: ksamensdato: Tid: Bedømmelsesform Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin

Læs mere

Eksamen i Modul 2.2, Det hæmatologiske system og immunforsvaret MEDIS, AAU, 2. semester, juni 2010

Eksamen i Modul 2.2, Det hæmatologiske system og immunforsvaret MEDIS, AAU, 2. semester, juni 2010 MedIS, AAU. Det hæmatologiske system og immunforsvaret, 7. Juni 2010 1 Navn: Studienummer: Eksamen i Modul 2.2, Det hæmatologiske system og immunforsvaret MEDIS, AAU, 2. semester, juni 2010 Dette eksamenssæt

Læs mere

(19) DANMARK d2) (12) PATENTSKRIFT

(19) DANMARK d2) (12) PATENTSKRIFT (19) DANMARK d2) (12) PATENTSKRIFT (11) DK 175065 B1 Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.CI 7.: A 61 K 39/02 (21) Patentansøgning nr: PA 1988 05200 (22) Indleveringsdag: 1988-09-16 (24) Løbedag: 1988-09-16

Læs mere

Studienummer: MeDIS Exam 2015. Husk at opgive studienummer ikke navn og cpr.nr. på alle ark, der skal medtages i bedømmelsen

Studienummer: MeDIS Exam 2015. Husk at opgive studienummer ikke navn og cpr.nr. på alle ark, der skal medtages i bedømmelsen MeDIS Exam 2015 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Videregående biokemi og medicinudvikling Bachelor i Medis 5. semester Eksamensdato: 26-01-2015 Tid: kl. 09.00-11.00 Bedømmelsesform 7-trin Vigtige

Læs mere

Reeksamen Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering

Reeksamen Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering 1 Reeksamen 2015 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering 2. semester Eksamensdato: 10. august

Læs mere

Øvelse med tarmkræftceller i kultur.

Øvelse med tarmkræftceller i kultur. Øvelse med tarmkræftceller i kultur. Baggrund Hver 3. dansker bliver ramt af kræft, inden de er blevet 75 år. Tyktarmskræft er den 3. hyppigste kræftform hos både mænd og kvinder, hvor henholdsvis 7.3

Læs mere

PCR (Polymerase Chain Reaction): Opkopiering af DNA

PCR (Polymerase Chain Reaction): Opkopiering af DNA PCR (Polymerase Chain Reaction): Opkopiering af DNA PCR til at opkopiere bestemte DNA-sekvenser i en prøve er nu en af genteknologiens absolut vigtigste værktøjer. Peter Rugbjerg, Biotech Academy PCR (Polymerase

Læs mere

Biologi opgave Opsamling: Cellebiologi (Bioanalytiker modul3)

Biologi opgave Opsamling: Cellebiologi (Bioanalytiker modul3) 1 Delphine Bonneau Biologi opgave Opsamling: Cellebiologi 1-6 Pelle har spist en kæmpe stor kage, og efterfølgende stiger hans blodsukker. Derfor sender kroppen besked til de endokrine kirtler i bugspytkirtlen

Læs mere

Appendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning. Faktor mellem total antal celler og antal celler der ønskes udsås:

Appendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning. Faktor mellem total antal celler og antal celler der ønskes udsås: Appendix Appendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning Fortyndingsfaktor: Efter trypsinering og centrifugering af celler fra cellestokken, opblandes cellerne i 1 ml medie. For at lave en

Læs mere

Immunisering af høns med antigen i sprayform?

Immunisering af høns med antigen i sprayform? Immunisering af høns med antigen i sprayform? undersøgelse af en smertefri metode til produktion af antistoffer i æg. Af Aiko Sho Nielsen Forskere fra Afdeling for Eksperimentel Medicin på Københavns Universitet

Læs mere

Bioteknologi A. Studentereksamen. Af opgaverne 1 og 2 skal begge opgaver besvares. Af opgaverne 3 og 4 skal en og kun en af opgaverne besvares.

Bioteknologi A. Studentereksamen. Af opgaverne 1 og 2 skal begge opgaver besvares. Af opgaverne 3 og 4 skal en og kun en af opgaverne besvares. Bioteknologi A Studentereksamen Af opgaverne 1 og 2 skal begge opgaver besvares. Af opgaverne 3 og 4 skal en og kun en af opgaverne besvares. frs111-btk/a-31052011 Tirsdag den 31. maj 2011 kl. 9.00-14.00

Læs mere

PATENTSKRIFT. (74) Fuldmægtig: LINGPAT V/OLE JAGTBOE, Letlandsgade 3, 2.mf., 1723 København V, Danmark

PATENTSKRIFT. (74) Fuldmægtig: LINGPAT V/OLE JAGTBOE, Letlandsgade 3, 2.mf., 1723 København V, Danmark (19) DANMARK " Patent-og Varemærkestyrelsen (12) PATENTSKRIFT (10) (51) lnt.ci.: F 16 H 41104 (2006.01) (21) Ansøgningsnummer: PA 2013 00499 (22) Indleveringsdato: 2013-09-04 (24) Løbedag: 2013-09-04 (41)

Læs mere

Figur 1: Strukturelt kort over plasmiderne pyeast og pmamal anvendt til undersøgelse af

Figur 1: Strukturelt kort over plasmiderne pyeast og pmamal anvendt til undersøgelse af Opgave 2 juni 1999 DNA rekombination er vigtig for eukaryote celler i forbindelse med meiosen. Samtidig er rekombination mellem fremmed DNA og endogen DNA essentiel i fremstillingen af transgene organismer

Læs mere

(19) DANMARK (12) PATENTSKRIFT. Ci2 (11) DK 175668 B1. Patent- og Varemærkestyrelsen

(19) DANMARK (12) PATENTSKRIFT. Ci2 (11) DK 175668 B1. Patent- og Varemærkestyrelsen (19) DANMARK (11) DK 175668 B1 Ci2 (12) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: A 61 K 39/21 A 61 K 39/395 C 07 K 1/00 C 07 K 14/155 C 12 P 21/00 (21) Patentansøgning nr: PA 1989 02843

Læs mere

Løsninger til opgaverne den Opgave 2 januar 2003 Spm. 1:

Løsninger til opgaverne den Opgave 2 januar 2003 Spm. 1: Løsninger til opgaverne den 6-9-06 Opgave 2 januar 2003 Spm. 1: Fidusen er her at vi kender den primære struktur af glukoamylasen fra tre forskellige svampe, en ascomycet, en basidiomycet og en zygomycet.

Læs mere

Cellekernen (Nucleus) Sebastian Frische Anatomisk Institut

Cellekernen (Nucleus) Sebastian Frische Anatomisk Institut Cellekernen (Nucleus) Sebastian Frische Anatomisk Institut Cellekernen Cellekernens overordnede struktur kernemembranen/nucleolemma kromatin nucleolus Cellecyklus faser i cellecyklus faser i mitosen Størrelse:

Læs mere

Kapitel 1 Genteknologi (1/6)

Kapitel 1 Genteknologi (1/6) Kapitel 1 Genteknologi (1/6) Transformation FOTO: SØREN LUNDBERG FORMÅL At isolere plasmider fra plasmidbærende bakterier og overføre dem til andre bakterier. TEORI Transformation er den teknik, hvor generne

Læs mere

PATENTSKRIFT B 62 H 5/20 (2006.01) (74) Fuldmægtig: UNGPAT V/OLE JAGTBOE, Letlandsgade 3, 2.mf., 1723 København V, Danmark

PATENTSKRIFT B 62 H 5/20 (2006.01) (74) Fuldmægtig: UNGPAT V/OLE JAGTBOE, Letlandsgade 3, 2.mf., 1723 København V, Danmark (19) DANMARK m Patent- og Varemærkestyrelsen (12) PATENTSKRIFT (1 O) (51) lnt.ci. : B 62 J 3100 (2006.01) B 62 H 5/20 (2006.01) (21) Ansøgningsnummer: PA 2012 00122 (22) lndleveringsdato: 2012-02-15 (24)

Læs mere

Skriftlig reeksamen august 2017

Skriftlig reeksamen august 2017 Studienummer: 1/10 Skriftlig reeksamen august 2017 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet Medicin og medicin med industriel specialisering 2. semester Eksamensdato:

Læs mere

DK 177720 B1 PATENTSKRIFT (19) (10) (12) (51) Int.Cl.: E 05 C 19/00 (2006.01) (21) Ansøgningsnummer: PA 2012 00594. (22) Indleveringsdato: 2012-10-02

DK 177720 B1 PATENTSKRIFT (19) (10) (12) (51) Int.Cl.: E 05 C 19/00 (2006.01) (21) Ansøgningsnummer: PA 2012 00594. (22) Indleveringsdato: 2012-10-02 (19) () (12) PATENTSKRIFT (1) Int.Cl.: E 0 C 19/00 (200.01) (21) Ansøgningsnummer: PA 2012 0094 (22) Indleveringsdato: 2012--02 (24) Løbedag: 2012--02 (41) Alm. tilgængelig: 2014-04-03 (4) Patentets meddelelse

Læs mere

KOMMISSIONENS FORORDNING (EU) / af

KOMMISSIONENS FORORDNING (EU) / af EUROPA- KOMMISSIONEN Bruxelles, den 29.5.2018 C(2018) 3193 final KOMMISSIONENS FORORDNING (EU) / af 29.5.2018 om ændring af forordning (EF) nr. 847/2000 for så vidt angår definitionen af udtrykket "lignende

Læs mere

PATENTSKRIFT. Fuldmægtig: UNGPAT V/OLE JAGTBOE, Letlandsgade 3, 2.mf., 1723 København V, Danmark

PATENTSKRIFT. Fuldmægtig: UNGPAT V/OLE JAGTBOE, Letlandsgade 3, 2.mf., 1723 København V, Danmark (19) DANMARK m (12) PATENTSKRIFT - Patent- og Varemærkestyrelsen (1 O) (51) (21) (22) (24) lnt.ci. : E 03 F 5/10 (2006.01) Ansøgningsnummer: PA 2011 00706 lndleveringsdato: 2011-09-16 Løbedag: 2011-09-16

Læs mere

ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort

ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort GELER INDEHOLDENDE MONOKLONALE REAGENSER AF MURIN ELLER HUMAN OPRINDELSE ABO1, ABO2, RH1, KEL1 Ag BESTEMMELSE IVD Alle de af Bio-Rad producerede

Læs mere

Re- eksamen 2014. Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering. kl. 09.00-11.

Re- eksamen 2014. Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering. kl. 09.00-11. 1/10 Re- eksamen 2014 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Eksamensdato: Tid: Bedømmelsesform Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering

Læs mere

Banan DNA 1/6. Formål: Formålet med øvelsen er at give eleverne mulighed for at se DNA strenge med det blotte øje.

Banan DNA 1/6. Formål: Formålet med øvelsen er at give eleverne mulighed for at se DNA strenge med det blotte øje. Banan DNA Formål: Formålet med øvelsen er at give eleverne mulighed for at se DNA strenge med det blotte øje. Baggrundsviden: Om vi er mennesker, dyr eller planter, så har alle organismer DNA i deres celler.

Læs mere

(19) DANMARK DK 169749 B1. Patentdi rektoratet C 07 K 15/04 C 12 N 15/62 C 12 N 15/70. (12) PATENTSKRIFT (il) 169749 B1

(19) DANMARK DK 169749 B1. Patentdi rektoratet C 07 K 15/04 C 12 N 15/62 C 12 N 15/70. (12) PATENTSKRIFT (il) 169749 B1 (19) DANMARK (12) PATENTSKRIFT (il) 169749 B1 Patentdi rektoratet TAASTRUP (21) Patentansøgning nr.: 2308/90 (22) Indleveringsdag: 24 sep 1990 (24) Løbedag: 11 apr 1989 (41) Alm. tilgængelig: 24 sep 1990

Læs mere

Bioteknologi A. Gymnasiale uddannelser. Vejledende opgavesæt 1. Mandag den 31. maj 2010 kl. 9.40-14.40. 5 timers skriftlig prøve

Bioteknologi A. Gymnasiale uddannelser. Vejledende opgavesæt 1. Mandag den 31. maj 2010 kl. 9.40-14.40. 5 timers skriftlig prøve Vejledende opgavesæt 1 Bioteknologi A Gymnasiale uddannelser 5 timers skriftlig prøve Vejledende opgavesæt 1 Mandag den 31. maj 2010 kl. 9.40-14.40 Side 1 af 8 sider pgave 1. Genmodificeret ris Vitamin

Læs mere

Restriktionsenzymer findes Genkendelsessekvens

Restriktionsenzymer findes Genkendelsessekvens Restriktionsenzymer Skanning Restriktionsenzymer findes i bakterier (forsvarsmekanisme) IKKE i eukaryote celler 3-5 - 5-3 - Restriktionsenzyme Genkendelsessekvens Palindromisk Otto, Anna, radar Madam I

Læs mere

Regnskovens hemmeligheder

Regnskovens hemmeligheder Center for Undervisningsmidler, afdeling København Regnskovens hemmeligheder Øvelsesvejledning Formål Et gen for et kræfthelbredende protein er blevet fundet i nogle mystiske blade i regnskoven. Forskere

Læs mere

Reeksamen 2013. Det hæmatologiske system og immunsystemet. Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering. kl. 09.00-11.

Reeksamen 2013. Det hæmatologiske system og immunsystemet. Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering. kl. 09.00-11. 1/10 Reeksamen 2013 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Eksamensdato: Tid: Bedømmelsesform Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA sekvens,

Læs mere

PATENT 109646 Int. Cl. A 61 k 3/62 Kl. 30h 6

PATENT 109646 Int. Cl. A 61 k 3/62 Kl. 30h 6 PATENT 109646 Int. Cl. A 61 k 3/62 Kl. 30h 6 Ansøgning nr. 26 43 /65 Indleveret den 25.ma j 19 65 Fremlagt den 18. d e c emb er 19 6 7 DANMARK DIREKTORATET FOR PATENT-OG VAREMÆRKEVÆSENET KØBENHAVN Patentbeskrivelsen

Læs mere

(19) DANMARK (12) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen (11) DK 174910 B1 G 01 N 33/543

(19) DANMARK (12) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen (11) DK 174910 B1 G 01 N 33/543 (19) DANMARK (11) DK 174910 B1 (12) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: C 07 K 14/155 C 07 K 7/06 C 07 K 7/08 C 12 P 21/02 (21) Patentansøgning nr: PA 1986 02849 (22) Indleveringsdag:

Læs mere

Opgave 1 Listeria. mørkviolette bakteriekolonier, se figur 1a. og b. 1. Angiv reaktionstypen for reaktion. 1 vist i figur 1b.

Opgave 1 Listeria. mørkviolette bakteriekolonier, se figur 1a. og b. 1. Angiv reaktionstypen for reaktion. 1 vist i figur 1b. Opgave 1 Listeria Bakterien Listeria monocytogenes kan være sygdomsfremkaldende for personer, der i forvejen er svækkede. For at identificere Listeria kan man anvende indikative agarplader. Her udnyttes

Læs mere

Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve

Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve Til isolering af genomisk DNA fra indsamlingssætserierne Oragene - og ORAcollect. Du kan finde flere sprog og protokoller på vores webside

Læs mere

BIOLOGI A-NIVEAU NY ORDNING. Tirsdag den 19. august 2008. Kl. 09.00 14.00 STX082-BIA STUDENTEREKSAMEN AUGUST 2008

BIOLOGI A-NIVEAU NY ORDNING. Tirsdag den 19. august 2008. Kl. 09.00 14.00 STX082-BIA STUDENTEREKSAMEN AUGUST 2008 STUDENTEREKSAMEN AUGUST 2008 BIOLOGI A-NIVEAU Tirsdag den 19. august 2008 NY ORDNING Kl. 09.00 14.00 Af opgaverne 1, 2, 3 og 4 skal tre og kun tre af opgaverne besvares STX082-BIA Undervisningsministeriet

Læs mere

GAPDH PCR modul Manual

GAPDH PCR modul Manual GAPDH PCR modul Manual Katalog nr. 166-5010EDU explorer.bio-rad.com Kopiering kun tilladt til undervisningsbrug Bemærk: Kittet indeholder temperaturfølsomme dele. Åbn derfor straks kassen og læg de pågældende

Læs mere

Forårseksamen Med korte, vejledende svar

Forårseksamen Med korte, vejledende svar Studienummer: 1/10 Forårseksamen 2014 Med korte, vejledende svar (Heri angives de facts, der skal nævnes i besvarelserne, men ikke de uddybende forklaringer, tegninger etc., der i nogle af opgaverne også

Læs mere

Reeksamen Det hæmatologiske system og immunsystemet. Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering

Reeksamen Det hæmatologiske system og immunsystemet. Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering Studienummer: 1/10 Reeksamen 2013 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering 2. semester Eksamensdato:

Læs mere

Sommereksamen 2013 Med korte, vejledende svar

Sommereksamen 2013 Med korte, vejledende svar 1/10 Sommereksamen 2013 Med korte, vejledende svar Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Eksamensdato: Tid: Bedømmelsesform Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin

Læs mere

Skriftlig eksamen april 2017

Skriftlig eksamen april 2017 Studienummer: 1/10 Skriftlig eksamen april 2017 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet Medicin og medicin med industriel specialisering 2. semester Eksamensdato:

Læs mere

Skriftlig eksamen juni 2018

Skriftlig eksamen juni 2018 Studienummer: 1/11 Skriftlig eksamen juni 2018 Titel på kursus: Immunsystemet (ny studieordning, 2017) Uddannelse: Semester: Medicin og medicin med industriel specialisering 2. semester Eksamensdato: 18.

Læs mere

Biologi A. Studentereksamen. Af opgaverne 1, 2, 3 og 4 skal tre og kun tre af opgaverne besvares

Biologi A. Studentereksamen. Af opgaverne 1, 2, 3 og 4 skal tre og kun tre af opgaverne besvares Biologi A Studentereksamen Af opgaverne 1, 2, 3 og 4 skal tre og kun tre af opgaverne besvares 2stx111-BIO/A-27052011 Fredag den 27. maj 2011 kl. 9.00-14.00 Side 1 af 8 sider Opgave 1. Pig City På figur

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Side 1 af 8 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA

Læs mere

(19) DANMARK (11) DK 173592 B1 Cb (12) PATENTSKRIFT

(19) DANMARK (11) DK 173592 B1 Cb (12) PATENTSKRIFT (19) DANMARK (11) DK 173592 B1 Cb (12) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: C 12 N 15/85 C 12 N 15/33 (21) Patentansøgning nr: PA 1982 03869 (22) Indleveringsdag: 1982-08-30 (24)

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Forsøgsvejledning Navn: Side 1 af 7 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA

Læs mere

Analyser/metoder til undersøgelse af immundefekter

Analyser/metoder til undersøgelse af immundefekter Analyser/metoder til undersøgelse af immundefekter Læge J. Magnus Bernth Jensen Klinisk Immunologisk afdeling Hvilke analyser til hvilke patienter??? Hvilke patienter bør undersøges? Infektioner er almindelige

Læs mere

Dansk resumé for begyndere

Dansk resumé for begyndere Dansk resumé for begyndere Dansk resumé for begyndere Dette afsnit introducerer bakteriel genregulation for enhver uden forudgående kendskab til dette emne. Alle nødvendige, videnskabelige betegnelser

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Side 1 af 8 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA-sekvens,

Læs mere

Leucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL. Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3

Leucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL. Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3 Leucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3 Vejledende information Tilsigtet anvendelse Leucosep rørene er beregnet til anvendelse i forbindelse med indsamling

Læs mere

DNA origami øvelse DNA origami øvelse

DNA origami øvelse DNA origami øvelse DNA origami øvelse Introduktion I denne øvelse bruger vi DNA origami teknikken til at samle en tavle af DNA med dimensioner på 70 nm x 100 nm. Tavlen dannes af et langt enkeltstrenget DNA molekyle, der

Læs mere

Skriftlig eksamen juni 2018

Skriftlig eksamen juni 2018 Studienummer: 1/10 Skriftlig eksamen juni 2018 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet (gl. studieordning) Medicin og medicin med industriel specialisering 2. semester

Læs mere

DNA origami øvelse. Introduktion. DNA origami øvelse 3 timer 2018

DNA origami øvelse. Introduktion. DNA origami øvelse 3 timer 2018 DNA origami øvelse Introduktion I denne øvelse bruger vi DNA origami teknikken til at samle en tavle af DNA med dimensioner på 70 nm x 100 nm. Tavlen dannes af et langt enkeltstrenget DNA molekyle, der

Læs mere

DNA origami øvelse 2013. DNA origami øvelse

DNA origami øvelse 2013. DNA origami øvelse DNA origami øvelse Introduktion I denne øvelse bruger vi DNA origami teknikken til at samle en tavle af DNA med dimensioner på 70 nm x 100 nm. Tavlen dannes af et langt enkeltstrenget DNA molekyle, der

Læs mere

Humanbiologi - Lymfesystemet og Immunologi

Humanbiologi - Lymfesystemet og Immunologi Humanbiologi - Lymfesystemet og Immunologi Lymfekarrets vægge er tyndere end venernes og har ligesom dem også klapper. Der er fælles indløb til vena cava superior, hvor den øvre indløbsgren drænerer koppens

Læs mere

27611 Eksamen Sommer 2008

27611 Eksamen Sommer 2008 27611 Eksamen Sommer 2008 Dette sæt indeholder 10 opgaver. En online version af opgavesættet vil være tilgængeligt fra kursets lektionsplan under selve eksamen ( juni 2008 klokken 15:00-19:00). DNA/Protein

Læs mere

Immunologi- det store overblik. Dyrlæge Rikke Søgaard Teknisk rådgiver, Merial Norden A/S

Immunologi- det store overblik. Dyrlæge Rikke Søgaard Teknisk rådgiver, Merial Norden A/S Immunologi- det store overblik Dyrlæge Rikke Søgaard Teknisk rådgiver, Merial Norden A/S Hvem er jeg Rikke Søgaard Uddannet dyrlæge i 1998 Ansat 5 år i praksis både blandet og svinepraksis Ansat 5 år på

Læs mere

Leucocyt-forstyrrelser

Leucocyt-forstyrrelser Leucocyt-forstyrrelser Udarbejdet af KLM med inspiration fra Kako S4 pensum fra bogen Hæmatologi af H. Karle Granulocytsygdomme Lymfocytsygdomme Leukæmier M-proteinæmi Analyser Referenceområde [LKC]: 3.0

Læs mere

Elevguide Forsøg I: Tjekliste Materialer pr. gruppe.

Elevguide Forsøg I: Tjekliste Materialer pr. gruppe. Elevguide Forsøg I: Opsporing af sygdomsudbrud en sygdoms smitteveje. I dette forsøg skal I prøve at kortlægge smittevejene for koppe-virus. For at stoppe sygdommens fremmarch mest muligt, ønsker man at

Læs mere

BIOLOGI HØJT NIVEAU. Tirsdag den 15. maj 2001 kl. 9.00-14.00

BIOLOGI HØJT NIVEAU. Tirsdag den 15. maj 2001 kl. 9.00-14.00 STUDENTEREKSAMEN MAJ 2001 2001-6-1 BIOLOGI HØJT NIVEAU Tirsdag den 15. maj 2001 kl. 9.00-14.00 Af de store opgaver 1 og 2 må kun den ene besvares. Af de små opgaver 3, 4, 5, 6 og 7 må kun to besvares.

Læs mere

PATENTSKRIFT. (73) Patenthaver: Førstehjælp.com v/berthel Funch, Annexgårdsparken 11, Kr Værløse, 3500 Værløse, Danmark

PATENTSKRIFT. (73) Patenthaver: Førstehjælp.com v/berthel Funch, Annexgårdsparken 11, Kr Værløse, 3500 Værløse, Danmark (19) DANMARK m Patent-og Varemærkestyrelsen (12) PATENTSKRIFT (10) (51) lnt.ci. : A 61 N 1139 (2006.01) (21) Ansøgningsnummer: PA 2015 00436 (22) Indleveringsdato: 2015-07-31 (24) Løbedag: 2015-07-31 (41)

Læs mere

ELISA metoden, til bestemmelse af den genetiske profil i høns.

ELISA metoden, til bestemmelse af den genetiske profil i høns. ELISA metoden, til bestemmelse af den genetiske profil i høns. 1 Formål: Formålet med denne øvelse er at demonstrere brugen af antistoffer i diagnostisk eller forskningsøjemed. Dvs. til at undersøge om

Læs mere

Danmarks Tekniske Universitet

Danmarks Tekniske Universitet Side 1 of 14 Danmarks Tekniske Universitet Skriftlig prøve, den 21/1-2013 Kursus navn: Kursus nr. 27633 Introduktion til Bioinformatik Tilladte hjælpemidler: Alle "Vægtning" Angivet ved de individuelle

Læs mere

Vor ref.: DK11573. Nordtronic Holding ApS Aalborgvej 86 9300 Sæby. Indbygningslampe

Vor ref.: DK11573. Nordtronic Holding ApS Aalborgvej 86 9300 Sæby. Indbygningslampe Vor ref.: DK1173 Ansøger: Nordtronic Holding ApS Aalborgvej 86 90 Sæby Indbygningslampe 1 Indbygningslampe. Frembringelsen angår en indbygningslampe til montering i bygningselementer såsom lofter, hvor

Læs mere

Analyserapport nr

Analyserapport nr ApodanNordic A/S Att. Heine Dalsgaard Legravsvej 63 2300 København S Teknologiparken Kongsvang Allé 29 DK-8000 Aarhus C Telefon 72 20 10 00 Telefax 72 20 10 19 info@teknologisk.dk www.teknologisk.dk Analyserapport

Læs mere

Elevvejledning pglo transformation

Elevvejledning pglo transformation Introduktion til transformation Elevvejledning pglo transformation I denne øvelse skal du lære fremgangsmåden ved genetisk transformation. Husk på, at et gen er et stykke DNA, der indeholder informationer

Læs mere

Udarbejdet af Anna-Alexandra Grube Hoppe

Udarbejdet af Anna-Alexandra Grube Hoppe METODER - BIOKEMI For medicinstuderende - Panuminstituttet UDARBEJDET AF ANNA-ALEXANDRA GRUBE HOPPE RESTRIKTIONSENZYM ANALYSE (E: 329-330) Restriktionsenzym analyse er en metode, der bruges til at kortlægge

Læs mere

August Krogh Building Copenhagen University. Universitetsparken 13 2100 Copenhagen OE PAPedersen@aki.ku.dk

August Krogh Building Copenhagen University. Universitetsparken 13 2100 Copenhagen OE PAPedersen@aki.ku.dk Per Amstrup Pedersen Institute of Molecular Biology August Krogh Building Copenhagen University Universitetsparken 13 2100 Copenhagen OE PAPedersen@aki.ku.dk En genteknologisk værktøjskasse. Version 2007

Læs mere

ELISA Immuno Explorer TM Kit

ELISA Immuno Explorer TM Kit - 1 - ELISA Immuno Explorer TM Kit Katalog nummer 166-2400EDU Til læreren Dette kit er lavet for at lette og illustrere immunologiundervisningen og kan give en øget forståelse af antigen-antistof interaktionen,

Læs mere

Test dit eget DNA med PCR

Test dit eget DNA med PCR Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Side 1 af 8 Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA-sekvens,

Læs mere

Reeksamen Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering

Reeksamen Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering Studienummer: 1 Reeksamen 2016 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering 2. semester Eksamensdato:

Læs mere

Formål At analysere for myosin i muskelvæv fra fisk ved brug af western blotting

Formål At analysere for myosin i muskelvæv fra fisk ved brug af western blotting Center for Undervisningsmidler, afdeling København Western blotting Øvelsesvejledning Formål At analysere for myosin i muskelvæv fra fisk ved brug af western blotting Teori Proteomik er studiet af celleproteiners

Læs mere

Materialeliste: Ready-to-loadTM DNA prøver til elektroforese. Medfølgende reagenser og tilbehør. Egne materialer

Materialeliste: Ready-to-loadTM DNA prøver til elektroforese. Medfølgende reagenser og tilbehør. Egne materialer Elevvejledning 1 Materialeliste: Ready-to-loadTM DNA prøver til elektroforese A B C D E F Plasmid DNA (uskåret) Plasmid skåret med Bgl I Plasmid skåret med Eco RI Lambda DNA (uskåret) Lambda DNA skåret

Læs mere

Dansk Selskab for Medicinsk Genetik s (DSMG) politik vedrørende klinisk anvendelse af genomisk sekventering

Dansk Selskab for Medicinsk Genetik s (DSMG) politik vedrørende klinisk anvendelse af genomisk sekventering Dansk Selskab for Medicinsk Genetik s (DSMG) politik vedrørende klinisk anvendelse af genomisk sekventering De sidste 10 års store fremskridt indenfor gensekventeringsteknologi har gjort det muligt at

Læs mere

11. juli 2005 PRODUKTRESUMÉ. for. Gammanorm, injektionsvæske, opløsning 0. D.SP.NR. 9322. 1. LÆGEMIDLETS NAVN Gammanorm

11. juli 2005 PRODUKTRESUMÉ. for. Gammanorm, injektionsvæske, opløsning 0. D.SP.NR. 9322. 1. LÆGEMIDLETS NAVN Gammanorm 11. juli 2005 PRODUKTRESUMÉ for Gammanorm, injektionsvæske, opløsning 0. D.SP.NR. 9322 1. LÆGEMIDLETS NAVN Gammanorm 2. KVALITATIV OG KVANTITATIV SAMMENSÆTNING Normalt immunglobulin, humant 165 mg/ml Hjælpestoffer

Læs mere

BIOLOGI HØJT NIVEAU. Mandag den 9. august 2004 kl

BIOLOGI HØJT NIVEAU. Mandag den 9. august 2004 kl STUDENTEREKSAMEN AUGUST 2004 2004-6-2 BIOLOGI HØJT NIVEAU Mandag den 9. august 2004 kl. 9.00-14.00 Af de store opgaver 1 og 2 må kun den ene besvares. Af de små opgaver 3, 4, 5 og 6 må kun to besvares.

Læs mere

Colostrum FAQ. Hyppig stillede spørgsmål vedr. Colostrum

Colostrum FAQ. Hyppig stillede spørgsmål vedr. Colostrum Colostrum FAQ Hyppig stillede spørgsmål vedr. Colostrum 1 Indhold 1. Hvad er Colostrum?... 3 2. Fra hvilket dyr udvindes Colostrum?... 3 3. Hvad sker der med kalvene?... 3 4. Hvorfor er Colostrum fra køer

Læs mere

Biotechnology Explorer

Biotechnology Explorer Biotechnology Explorer Oprensning af genomisk DNA fra plantemateriale Manual Katalog nr. 166-5005EDU explorer.bio-rad.com Oversat og bearbejdet af Birgit Sandermann Justesen, Nærum Gymnasium, februar 2009

Læs mere

Spm. B: Hvad viser data i Figur 2?

Spm. B: Hvad viser data i Figur 2? Opgave 1 Kernereceptorer (nuclear receptors) udgør en familie af ligandaktiverede transkriptionsfaktorer, der regulerer transkription af en række gener, som respons på tilstedeværelse af f.eks.lipofile

Læs mere

artus EBV QS-RGQ-kit Ydelsesegenskaber Maj 2012 Sample & Assay Technologies Analysefølsomhed plasma artus EBV QS-RGQ-kit, Version 1,

artus EBV QS-RGQ-kit Ydelsesegenskaber Maj 2012 Sample & Assay Technologies Analysefølsomhed plasma artus EBV QS-RGQ-kit, Version 1, artus EBV QS-RGQ-kit Ydelsesegenskaber artus EBV QS-RGQ-kit, Version 1, 4501363 Kontroller, om der er nye revisioner med elektronisk mærkning på www.qiagen.com/products/artusebvpcrkitce.aspx inden udførelse

Læs mere

Opgave 1. EPO og bloddoping

Opgave 1. EPO og bloddoping Side 1 af 8 sider Opgave 1. EPO og bloddoping Nogle sportsfolk snyder ved at få tilført hormonet erythropoietin, EPO, eller røde blodceller (bloddoping) før en konkurrence, fordi det øger præstationsevnen.

Læs mere

(19) DANMARK (12) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen (11) DK 175379 B1

(19) DANMARK (12) PATENTSKRIFT. Patent- og Varemærkestyrelsen (11) DK 175379 B1 (19) DANMARK (11) DK 175379 B1 (12) PATENTSKRIFT Patent- og Varemærkestyrelsen (51) Int.C1 7.: A 61 K 39/225 // A 61 P 31/12 (21) Patentansøgning nr: PA 1988 05341 (22) indleveringsdag: 1988-09-26 (24)

Læs mere

BRUGSMODELSKRIFT. Registreret brugsmodel uden prøvning B 65 D ( )

BRUGSMODELSKRIFT. Registreret brugsmodel uden prøvning B 65 D ( ) 19) DAMARK 10) m Patent-og Varemærkestyrelsen 12) BRUGSMODELSKRIFT Registreret brugsmodel uden prøvning 51) lnt.ci. : B 65 D 51124 2006.01) B 65 D 39100 2006.01) 21) Ansøgningsnummer: BA 2016 00010 22)

Læs mere

Reeksamen 2015. Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering. kl. 09.00-11.

Reeksamen 2015. Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering. kl. 09.00-11. 1 Reeksamen 2015 Titel på kursus: Uddannelse: Semester: Eksamensdato: Tid: Bedømmelsesform Det hæmatologiske system og immunsystemet Bacheloruddannelsen i Medicin/Medicin med industriel specialisering

Læs mere

PATENTSKRIFT A 47 G 7100 ( ) (74) Fuldmægtig: LINGPAT V/OLE JAGTBOE, Letlandsgade 3, 2.mf., 1723 København V, Danmark

PATENTSKRIFT A 47 G 7100 ( ) (74) Fuldmægtig: LINGPAT V/OLE JAGTBOE, Letlandsgade 3, 2.mf., 1723 København V, Danmark (19) DANMARK d.t> V Patent- og Varemærkestyrelsen (12) PATENTSKRIFT (10) (51) lnt.ci. : B 65 D 85150 (2006.01) A 47 G 7100 (2006.01) (21 ) Ansøgningsnummer: PA 2014 00700 (22) Indleveringsdato: 2014-12-02

Læs mere

Protokol for genetisk bestemmelse af ABO blodtyper

Protokol for genetisk bestemmelse af ABO blodtyper Page1 Udarbejdet i samarbejde mellem: Kåre Lehmann, Annabeth Høgh Petersen, Anne Rusborg Nygaard og Jørn M. Clausen Page2 VIGTIGT: SKIFT PIPETTE SPIDSER/TIPS EFTER HVER GANG!! Så undgår du at forurene

Læs mere