Leveret reagens Kode K4004: Følgende materialer, tilstrækkeligt til 150 vævssnit baseret på 100 µl pr. snit, er indeholdt i kittet:

Transkript

1 Dako EnVision+ System-HRP (AEC) Til anvendelse sammen med primære museantistoffer Kode K ml Kode K ml Tilsigtet anvendelse Anvendes til in vitro diagnostik. Denne brugsvejledning vedrører Dako EnVision+ System- HRP (AEC) (Dako EnVision+ System, HRP). Dette kit er beregnet til brug sammen med primære antistoffer fra mus leveret af brugeren til kvalitativ identifikation af antigener ved lysmikroskopi i normale og patologiske paraffinindstøbte væv, kryostatvæv eller -cellepræparater. Væv behandlet med en række forskellige fiksativer inklusive ethanol, B-5, Bouins, zinkformalin og neutralbufferjusteret formalin kan anvendes. Se Generel brugsvejledning for immunhistokemisk farvning eller Detektionssystemets brugsvejledning for IHC-procedurer om: (1) Procedureprincip, (2) Nødvendige, men ikke leverede materialer, (3) Opbevaring, (4) Klargøring af prøve, (5) Farvningsprocedure, (6) Kvalitetskontrol, (7) Problemløsning, (8) Fortolkning af farvning, (9) Generelle begrænsninger. RESUMÉ og forklaring EnVision+ System, HRP er en totrins IHC-farvningsteknik. Systemet er baseret på en HRP-mærket polymer, som er konjugeret med sekundære antistoffer. Den mærkede polymer indeholder ikke avidin eller biotin. Derfor er uspecifik farvning resulterende fra endogen avidin-biotin-aktivitet i lever, nyre, lymfevæv og kryostatsnit elimineret eller betydeligt reduceret. Alle reagenser i EnVision+ System, HRP med AEC+ substrat er brugsklare. Dette system er ekstremt sensitivt, og som et resultat deraf er de optimale fortyndinger af det primære antistof op til 20 gange højere end de fortyndinger, der anvendes i de traditionelle PAP-teknikker og mange gange større end de, der anvendes i de traditionelle ABC- eller LSAB-metoder. Denne protokol tilbyder et system, der genererer et forstærket signal til påvisning af antigener til stede i lave koncentrationer eller til lavtiter primære antistoffer. Primære antistoffer produceret i mus reagerer godt med den mærkede polymer. Fortolkningen af hvilken som helt positiv farvning eller fravær af samme bør suppleres med morfologiske og histologiske studier sammen med passende kontroller. Procedureprincip Stop al endogen peroxidaseaktivitet ved inkubering af prøven i fem minutter med Dako s Peroxidase Block. Derefter inkuberes prøven med et passende karakteriseret og fortyndet primært museantistof efterfulgt af inkubation med den mærkede polymer under anvendelse af to inkubationer på hver 30 minutter i rækkefølge. Det skal bemærkes, at det for antistoffer, der kræver enzymfordøjelse eller målgenfinding, kan være nødvendigt at forlænge inkubationstiderne for det primære antistof og den mærkede polymer med 5 til 10 minutter. Farvningen fuldføres ved inkubation i 5 30 minutter med 3-amino-9-ethylcarbazol (AEC)+ substratkromogen, hvilket resulterer i et rødt præcipitat på stedet for antigenet. (AEC er et potentielt carcinogen, se afsnittet Forholdsregler). Leveret reagens Kode K4004: Følgende materialer, tilstrækkeligt til 150 vævssnit baseret på 100 µl pr. snit, er indeholdt i kittet: Flaske nr. Mængde Beskrivelse 1 1x15 ml Peroxidase Block 2 1x15 ml Mærket polymer 0,03% hydrogenperoxid indeholdende natriumazid. Peroxidasemærket polymer konjugeret til gede-antimuse-immunglobuliner i Tris-HCl-buffer indeholdende stabiliserende protein og et antimikrobielt middel. 3 1x15 ml AEC+ Substrate-Chromogen 3-amino-9-ethylcarbazol indeholdende hydrogenperoxid, stabilisatorer, forstærkere og et antimikrobielt middel. Holdes ved 2 8 C. ( ) P04044DK_01/K4004_K4005/ s. 1/6

2 Code K4005: Følgende materialer, tilstrækkeligt til 1100 vævssnit baseret på 100 µl pr. snit, er indeholdt i kittet: Flaske nr. Mængde Beskrivelse 1 1x110 ml Peroxidase Block 2 1x110 ml Mærket polymer 0,03% hydrogenperoxid indeholdende natriumazid. Peroxidasemærket polymer konjugeret til gede-antimuse-immunglobuliner i Tris-HCl-buffer indeholdende stabiliserende protein og et antimikrobielt middel. 3 1x110 ml AEC+ Substrate-Chromogen 3-amino-9-ethylcarbazol indeholdende hydrogenperoxid, stabilisatorer, forstærkere og et antimikrobielt middel. Holdes ved 2 8 C. Nødvendige materialer, der ikke medfølger Absorberende papirlommetørklæderkontrolvæv, positivt og negativtkontrastfarve; vandbaseret, såsom Mayer s Hematoxylin eller Lillie s Modified Mayer s Hematoxylin(kode S3309) DækglasDestilleret vandethanol, absolut og 95%Lysmikroskop (20x 800x)Monteringsmedium, såsom Glycergel Mounting Medium (kode C0563) eller Faramount, Aqueous Mounting medium, Ready-to-use (kode S3025) eller ikkevandigt permanent monteringsmedium, Ultramont (kode S1964)Primære antistoffer og negativt kontrolreagensobjektglas, coatet med poly- L-lysin eller Silanized Slides (kode S3003)Farveskåle eller -badetimer (i stand til intervaller på 3 40 minutter) VaskeflaskerVaskebufferopløsningXylen, toluen eller xylen-erstatninger Nødvendige valgfri materialer, der ikke leveresammoniumhydroxid, 15 mol/l fortyndet til 0,037 mol/lpap Pen (kode S2002) Forholdsregler 1. Må kun anvendes af uddannet personale. 2. Produktet indeholder natriumazid (NaN 3), et kemikalie, der er yderst giftigt i ren form. Selvom koncentrationen i produktet ikke er klassificeret som farlig, kan ophobninger af NaN 3 reagere med bly og kobber og danne meget eksplosive metaloxider. Efter bortskaffelse skylles med rigelige mængder vand for at hindre ophobning af azid i afløb 1,2. 3. AEC+ Substrate-Chromogen er følsomt over for kontaminering med en række forskellige oxidationsmidler, såsom metaller, bakterier, støv og almindeligt anvendte laboratorieglasvarer. For at undgå kontaminering og for tidligt udløb skal det undgås, at AEC+ opløsningen eksponeres mod nogen mulig kontamineringskilde, og der må aldrig pipetteres direkte fra flasken. Hæld den nødvendige mængde over i en beholder og pipetter fra denne. Hæld ikke overskydende AEC+ opløsning tilbage i den oprindelige opbevaringsbeholder. 4. Anvend ikke reagenser, der er udløbet. Hvis reagenserne opbevares under andre betingelser end specificeret på produktindlægssedlen, skal betingelserne verificeres af brugeren. 5. Erstat ikke reagenser med reagenser fra et andet lot eller fra kit fra en anden producent. 6. Enzymer og substratkromogener kan påvirkes alvorligt, hvis de eksponeres mod kraftigt lys. Opbevar ikke kittets komponenter eller udfør ikke farvning i kraftigt lys, såsom direkte sollys. 7. Andre inkubationstider eller temperaturer end de specificerede kan give fejlagtige resultater; alle sådanne ændringer skal valideres af brugeren. 8. Som med alle produkter afledt ud fra biologiske kilder bør der iagttages korrekte håndteringsprocedurer. 9. Bær passende personligt beskyttelsesudstyr for at undgå, at materialet kommer i kontakt med øjne og hud. 10. Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokale og landsdækkende love og regler. 11. Sikkerhedsdataark udleveres til professionelle brugere efter anmodning. Fare AEC+ Substrate-Chromogen: 5-10% Polyethylene glycol, 1-5% N-methyl-2-pyrrolidon, 0.1-1% Eddikesyre, 0.1-1% 3-amino-9- ethyl carbazole H320 Forårsager øjenirritation. H350 Kan fremkalde kræft. P201 Indhent særlige anvisninger før brug. P202 Anvend ikke produktet, før alle advarsler er læst og forstået. P281 Anvend de påkrævede personlige værnemidler. P280 Bær øjen- eller ansigtsbeskyttelse. P264 Vask hænder grundigt efter brug. P308 + P313 VED eksponering eller mistanke om eksponering: Søg lægehjælp. P305 + P351 + P338 VED KONTAKT MED ØJNENE: Skyl forsigtigt med vand i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser, hvis dette kan gøres let. Fortsæt skylning. P337 + P313 Ved vedvarende øjenirritation: Søg lægehjælp. P405 Opbevares under lås. P501 Indholdet og beholderen bortskaffes i henhold til alle lokale, regionale, nationale og internationale regler. ( ) P04044DK_01/K4004_K4005/ s. 2/6

3 Fremstilling af reagens Det er bekvemt at fremstille følgende reagenser inden farvning VaskebufferopløsningTBST, 0,05 mol/l Tris Buffered Saline med Tween (kode S3006) er den anbefalede vaskebuffer til automatisk og manuel IHC-detektion. TBS, 0,05 mol/l Tris buffered Saline (kode S1968) og PBS, 0,02 mol/l Phosphate Buffered Saline (kode S3024) er ligeledes egnede vaskebufferopløsninger til manuel farvning. Vaskebufferopløsninger indeholdende natriumazid anbefales ikke. Natriumazid vil inaktivere peroxidase (HRP) resulterende i negativ farvning. Opbevar ubrugt buffer ved 2 8 C. Bortskaf bufferen, hvis den bliver grumset. Der kan anvendes destilleret vand til skylning af peroxidaseblokkeren, substratet og kontrastfarven. Primært antistofde brugsklare antistoffer i NP-Serien Plus er optimeret og anbefales til anvendelse sammen med Dako Plus high sensitivity detektionsystemer. Der kan ligeledes fås koncentrerede antistoffer fra Dako. Optimering af koncentrerede antistoffer af slutbrugeren er nødvendig. Fortyndinger bør fremstilles ved anvendelse af Antibody Diluent (kode S0809) eller et diluent indeholdende 0,05 mol/l Tris-HCl-buffer med 1% bovint serumalbumin (BSA). Dako N-Seriens brugsklare antistoffer er ikke optimeret til anvendelse sammen med Dako plus detektionssystemer. For de fleste primære antistoffer, der anvendes sammen med dette kit, er en inkubationstid på 30 minutter tilstrækkeligt. Negativt kontrolreagensved anvendelse af brugsklare Dako NP-Serie Plus antistoffer anbefales Universal Negative Control(s)+ som negativt kontrolreagens. Disse kontroller er optimeret til anvendelse sammen med enten brugsklare muse- (kode NP015) eller kanin- (kode NP001) NP-Serien Plus antistoffer. Ideelt indeholder et negativt kontrolreagens et antistof, der ikke udviser specifik reaktivitet med humane væv eller normalt/nonimmunt serum i samme matrix/opløsning som det fortyndede primære antistof. Det negative kontrolreagens bør tilhøre samme underklasse og dyreart som det primære antistof fortyndet til samme immunglobulin- eller proteinkoncentration som det fortyndede primære antistof ved anvendelse af det samme diluent. Inkubationstiden for det negative kontrolreagens bør svare til tiden for det primære antistof. Se Generel brugsvejledning for immunhistokemisk farvning for yderligere information om positive og negative kontroller. KontrastfarveDet farvede slutprodukt fra farvningsreaktionen er opløseligt i alkohol og bør kun anvendes med vandbaseret kontrastfarve, såsom Mayer s hæmatoxylin eller Lillie s Modified Mayer s Hematoxylin (kode S3309). Efter kontrastfarvning med hæmatoxylin skylles grundigt med destilleret vand, hvorefter objektglassene nedsænkes i et bad bestående af 0,037 mol/l ammoniak eller et lignende blegemiddel. 37 millimolær ammoniakvand fremstilles ved at blande 2,5 ml 15 mol/l (koncentreret) ammoniumhydroxid med 1 liter vand. Ubrugt 0,037 mol/l ammoniak kan opbevares ved stuetemperatur (20 25 C) i en tæt tillukket flaske i op til 12 måneder. Se producentens vejledning for andre kontrastfarvningsprocedurer. MonteringsmediumGlycergel Mounting Medium (kode C0563) eller Faramount, Aqueous Mounting Medium, Ready-to-use (kode S3025) anbefales til vandig montering. Glycergel skal opvarmes til mindst 50 C umiddelbart inden brug. Ikke-vandigt, permanent monteringsmedium (Ultramount, kode S1964) kan ligeledes anvendes. Opbevaring Reagenser fra EnVision+ System, HRP skal opbevares ved 2 8 C. Må ikke fryses. Må ikke anvendes efter udløbsdatoen angivet på reagensflasker og kittets etikette. Ændringer i udseendet af reagenser, såsom udfældninger, kan indikere ustabilitet eller nedbrydning. Alle sådanne reagenser skal kasseres. AEC+ Substrate-Chromogen-opløsning er ustabil ved temperaturer højere end 8 C. Anvendelse og opbevari ng af AEC+ Substrate- Chromogen-opløsning anbefales at være i temperaturområdet 2 8 C. Opløsningen kan anvendes straks efte r, at den er taget ud af køleskabet. Efter brug sættes den straks tilbage til 2 8 C. Der er ingen tydelige tegn på, at disse produkter er blevet nedbrudt. Derfor skal der analyseres positive og negative kontroller samtidigt med patientprøver. kontakt Teknisk Support ved Dako, hvis der observeres uventet farvning, der ikke kan forklares med variationer i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et problem med kittet. Klargøring af prøve Paraffinindstøbt væv Inden IHC-farvning, skal vævet være fikseret og bearbejdet. Fiksering forhindrer autolyse og forrådnelse af udskåret væv, bevarer antigenicitet, forstærker refraktionsindekset af vævskonstituenserne og øger celleelementernes resistens mod vævsbearbejdning. Vævsbearbejdning indbefatter dehydrering, fjernelse af dehydreringsmidler, infiltrering af indstøbningsmedium, indstøbning og sektionering af vævet. De mest almindelige fiksativer for IHC-vævspræparationer er omtalt i den generelle brugsvejledning for immunhistokemisk farvning. Dette er udelukkende vejledende. De optimale procedurer skal bestemmes og godkendes af brugeren. (For specifik information vedrørende vævsfiksering, se reference 3 og 4.) Farvningsprocedure Procedurebemærkninger Brugeren bør læse denne vejledning grundigt igennem og blive fortrolig med kittets indhold inden brug. For letheds skyld er der indlagt en sammenfatning af vejledningen i et plastiklamineret indlæg. Reagenserne og vejledningen leveret med dette kit er blevet designet til at give optimal virkning. Yderligere fortynding af kittets reagenser eller ændring af inkubationstider eller -temperaturer kan give fejlagtige resultater. ( ) P04044DK_01/K4004_K4005/ s. 3/6

4 Flaske 1 og flaske 2 bør ækvilibreres til stuetemperatur (20 25 C) inden immunofarvning. Ligeledes b ør alle inkubationer foregå ved stuetemperatur. For letheds skyld kan AEC+ substratet anvendes umiddelbart efter, at det er taget ud af køleskabet, og det behøver ikke at have stuetemperatur inden brug. Efter brug sættes det tilbage til 2 8 C. Opbevaring ved en te mperatur over 8 C påvirker i alvorlig grad stabiliteten af AEC+ substratkromogenet. Lad ikke vævssnit tørre ud under farvningsproceduren. Udtørrede vævssnit kan udvise forøget uspecifik farvning. Tildæk præparater eksponeret mod træk. Hvis der anvendes forlængede inkubationstider, skal vævet placeres i fugtige omgivelser. Sensitiviteten af EnVision+ System, HRP kan øges yderligere ved at forlænge inkubationstiderne i Trin 2 og 3 med 5 10 minutter. Farvningsprotokol TRIN 1 TRIN 2 TRIN 3 TRIN 4 TRIN 5 TRIN 6 BLOKERING AF PEROXIDASE Bank overskydende buffer af. Anvend en fnugfri klud (såsom Kimwipe eller et stykke gaze) til forsigtigt at tørre af rundt om prøven for at fjerne al resterende væske og for at holde reagenset inden for det foreskrevne område. Tilsæt tilstrækkeligt Peroxidase Block fra flaske 1 til at dække prøven. Inkuber 5 (±1) minutter. Skyl forsigtigt med destilleret vand eller bufferopløsning fra en vaskeflaske (lad ikke væskestrømmen ramme vævet direkte) og placer objektglasset i et friskt bufferbad. PRIMÆRT ANTISTOF ELLER NEGATIVT KONTROLREAGENS Bank overskydende buffer af og tør objektglassene af som beskrevet ovenfor. Tilsæt tilstrækkeligt, optimalt fortyndet primært antistof eller negativt kontrolreagens til at dække prøven. Inkuber 30 (±1) minutter. Skyl forsigtigt med bufferopløsning fra en vaskeflaske (lad ikke væskestrømmen ramme vævet direkte) og placer objektglasset i et friskt bufferbad. Hvis farvningsproceduren skal afbrydes, kan objektglassene opbevares i et bufferbad efter inkubation med det primære antistof (trin 2) i op til en time ved stuetemperatur (20 25 C), uden at det påvirker farvningen. PEROXIDASEMÆRKET POLYMER Bank overskydende buffer af og tør objektglassene af som beskrevet ovenfor. Tilsæt tilstrækkeligt, mærket polymer fra flaske 2 til at dække prøven. Inkuber 30 (±1) minutter. Skyl objektglassene som i trin 2. SUBSTRATKROMOGEN Tør objektglassene af som beskrevet ovenfor. Tilsæt tilstrækkeligt brugsklart AEC+ substratkromogenopløsning fra flaske 3 til at dække prøven. Inkuber i 5 30 minutter. Skyl forsigtigt med destilleret vand fra en vaskeflaske (hæld ikke direkte ned på vævet). Opsaml substratkromogenaffald i en beholder til biologisk farligt affald og bortskaf det korrekt. KONTRASTFARVNING MED HÆMATOXYLIN (valgfrit) Nedsænk objektglassene i et bad med vandigt hæmatoxylin (kode S3309). Inkubationstiden afhænger af styrken af det anvendte hæmatoxylin. Skyl forsigtigt i et bad med destilleret vand. Dyp objektglassene 10 gange i et bad bestående af 0,037 mol/l ammoniak eller et lignende blegemiddel. Skyl objektglassene i et bad med deioniseret vand i 2 5 minutter. MONTERING Prøverne kan monteres og dækkes med dækglas ved anvendelse af et vandbaseret medium, såsom Glycergel Mounting Medium (kode C0563) eller Faramount (kode S3025) eller et ikke-vandigt, permanent monteringsmedium, Ultramount (kode S1964). Bemærk: AEC-reaktionsproduktet er opløseligt i organiske opløsningsmidler og er derfor ikke kompatibelt med permanente monteringsmedier baseret på toluen eller xylen. Bemærk: Objektglassene kan eksamineres, når det passer i tidsplanen. Imidlertid kan der opstå en vis falmning, hvis objektglassene udsættes for kraftigt lys over en periode på en uges tid. For at minimere falmning skal objektglassene opbevares mørkt ved stuetemperatur (20 25 C). Kvalitetskontrol Forskelle i behandlingen af væv og i de tekniske procedurer i brugerens laboratorium kan frembringe betydeligt varierende resultater og nødvendiggøre regelmæssig udførelse af kontroller i laboratoriet ud over følgende procedurer. Se retningslinier for kvalitetskontrol i College of American Pathologists (CAP) Certification Program for Immunohistochemistry og reference 5 til 7 for yderligere information. Se specifikationskortet for alle anvendte primære antistoffer for detaljer vedrørende sensitivitet og immunoreaktivitet. Se Generel brugsvejledning for immunhistokemisk farvning for yderligere information om positive og negative kontroller. Fortolkning af farvning Se Generel brugsvejledning for immunhistokemisk farvning for retningslinier vedrørende fortolkning. ( ) P04044DK_01/K4004_K4005/ s. 4/6

5 Begrænsninger Vævsfarvning er afhængig af korrekt håndtering og behandling af vævet inden farvning. Forkert fiksering, optøning, vask, tørring, opvarmning, sektionering eller kontaminering med andre væv eller væsker kan frembringe artefakter, indfangning af antistof eller falsk negative resultater. Anvendelse af gamle eller ikke-bufferjusterede fiksativer, eller eksponering af vævet mod for kraftig varme (mere end 60 C) under bearbejdningen, kan resultere i nedsat farvningsintensitet. Endogen peroxidase- eller pseudoperoxidaseaktivitet kan findes i hæmoproteiner, såsom hæmoglobin, myoglobin, cytochrom og katalase såvel som i eosinofile. 8,9 Denne aktivitet kan inhiberes ved inkubation af prøverne med Peroxidase Block Bottle #1 fra EnVision+ System, HRP i fem minutter inden tilsætning af det primære antistof. Udstrygninger af blod og knoglemarv og frossent væv kan ligeledes behandles med dette reagens. Denne procedure fjerner dog ikke det rødbrune pigment fra hæmoproteiner. Alternativt kan der anvendes en opløsning af methanol-hydrogenperoxid. Nogle antigener denatureres ved denne procedure. Væv fra personer inficeret med hepatitis B virus og indeholdende hepatitis B overfladeantigen (HBsAg) kan udvise uspecifik farvning med peberrodsperoxidase. 10 Normale/nonimmune sera fra samme animalske kilde som de sekundære antisera anvendt i blokeringstrinet kan forårsage falsk negative eller falsk positive resultater på grund af autoantistoffer eller naturlige antistoffer. Reagenserne leveret i dette kit er fortyndet optimalt. Yderligere fortynding kan resultere i tab af antigendetektion. Fejlfinding Problem Mulig årsag Foreslået løsning 1. Ingen farvning af nogen objektglas. 1a. Reagenserne anvendes ikke i korrekt rækkefølge. 1a. Gennemgå anvendelsen af reagenserne. 2. Svag farvning af alle objektglas. 3. Kraftig aggrundsfarvning på alle objektglas. 1b. Natriumazid. 2a. Snittene indeholder for meget opløsning efter vaskebad. 2b. Objektglassene er ikke inkuberet længe nok med antistoffer eller substrat. 3a. Prøverne indeholder høj endogen peroxidaseaktivitet. 3b. Paraffinen er ikke helt fjernet. 3c. Objektglassene er ikke ordentligt skyllede. 3d. Substratreaktion hurtigere end normalt f.eks. pga. for høj rumtemperatur. 3e. Snittene er tørret ud under farvningen. 3f. Uspecifik binding af reagenser til vævssnit. 3g. For koncentreret antistof. 1b. Anvend en frisk, azidfri buffer. 2a. Bank forsigtigt overskydende opløsning af, inden der tørres rundt om snittet. 2b. Gennemgå de anbefalede inkubationstider. 3a. Anvend længere inkubationstid med peroxidase block, flaske 1. 3b. Anvend friske xylen- eller toluen-bade. Hvis der farves mange objektglas samtidigt, bør det andet xylenbad indeholde friskt xylen. 3c. Anvend friske opløsninger i buffer- bade og vaskeflasker. 3d. Anvend kortere inkubationstid med substrat-kromogenopløsning. 3e. Anvend et fugtighedskammer. Tør kun tre-fire objektglas af ad gangen, inden der tilsættes reagens. 3f. Anvend en blokeringsopløsning indeholdende et irrelevant protein. 3g. Anvend en højere fortynding af antistoffet. BEMÆRK: Hvis problemet ikke kan henvises til nogen af ovennævnte årsager, eller hvis de foreslåede løsninger ikke fjerner problemet, ring venligst til teknisk support hos Dako for yderligere assistance. Yderligere information om farvningsteknikker og fremstilling af prøver kan findes i Handbook - Immunochemical Staining Methods 4 (kan fås fra Dako), Atlas of Immunohistology 11 og Immunoperoxidase Techniques, A Practical Approach to Tumor Diagnosis. 12 Referencer 1. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. Procedures for the decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides. DHHS (NIOSH) Publ. No , Current 13. August 16, Center for Disease Control Manual Guide Safety Management, No. CDC-22, Atlanta, GA. Decontamination of laboratory sink drains to remove azide salts. April 30, Kiernan JA. Histological and histochemical methods: Theory and practice. New York: Pergamon Press 1981; Naish SJ (ed). Handbook immunochemical staining methods. Carpinteria: Dako Elias JM, et al. Special report: Quality control in immunohistochemistry. Amer J Clin Pathol 1989; 92: National Committee for Clinical Laboratory Standards. Internal quality control testing: principles and definitions; approved guideline. Villanova, PA 1991; Order code C24 A:4 ( ) P04044DK_01/K4004_K4005/ s. 5/6

6 7. Herman GE and Elfont EA. The taming of immunohistochemistry: The new era of quality control. Biotech & Histochem 1991; 66: Escribano LM, et al. Endogenous peroxidase activity in human cutaneous and adenoidal mast cells. J Histochem Cytochem 1987; 35: Elias JM. Immunohistopathology: A practical approach to diagnosis. Chicago: Amer Soc of Clin Pathol Press 1990; Omata M, et al. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen: A possible source of error in immunohistochemistry. Amer J Pathol 1980; 73: Tubbs RR, et al. Atlas of immunohistology. Chicago: Amer Soc Clin Pathol Press Nadji M and Morales AR. Immunoperoxidase techniques, a practical approach to tumor diagnosis. Chicago: Amer Soc Clin Pathol Press 1986 Yderligere referencer Cartun RW. Immunohistochemistry of infectious diseases. J Histotechnol 1995; 18(3):195 Heras A, et al. Enhanced labelled-polymer system for immunohistochemistry. XVth Eur Cong Pathol. Copenhagen, Denmark 1995; Sept 3 8 Bisgaard K and Pluzek K-P. Use of polymer conjugates in immunohistochemistry: A comparative study of a traditional staining method to a staining method utilizing polymer conjugates. Abstract. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol and 12th World Cong Acad Environ Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct Pileri SA, et al. EnVision Plus: A new powerful tool for diagnosis and research. Symposium. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol and 12th World Cong Acad Environ Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct Bisgaard K. EnVision Plus Introduction to a new technology. Abstract. Dako Symposium. XXI Intl Cong Intl Acad Pathol. Budapest, Hungary 1996; Oct Edition 07/15 ( ) P04044DK_01/K4004_K4005/ s. 6/6