OR!GINAL. Januar december Britta Nielsen, Bioanlytikerunderviser Lone Andresen, Specialist

Transkript

1 Klinisk-biokemisk afdeling OR!GINAL Valideringsrapport for P Orosomucoid; stofk. Rapport V 023/03 2 eksemplarer Valideringsperiode: Arbejdsgruppe: Udstyr: Ibrugtagningsdato Januar december 2005 Britta Nielsen, Bioanlytikerunderviser Lone Andresen, Specialist Cobas Integra 400 serienummer (l) og Cobas Integra 400 serienununer 37~2046 (2) Roche ais Industriholmen Hvidovre Cobas Integra 400 nr. 1: November 1999 Cobas Integra 400 nr. 2: December 2005 Godkendelse: (Underskrift, stempel og dato) Resume Adm. overlæge, dr. med. Steen Stencler Kljnisk~biokemisk afd. Amtssygehuset i Gentofte 2900 Hellerup tlf.: ~~~ 20-0C-Oc, Vi har i afdelingen vurderet vigtigheden af at validere korrektheden og den intennediære impræcision. Desuden har vi udført præcisionsprofil, som gør det muligt at estimere variationskoeficienter (CV) for prøver med varierende koncentration. Der er foretaget apparatursammenligning mellem de 2 Cobas Integra 400. Endvidere er der foretaget beregninger til bestemmelse afden relative kombinerede standardmåleusikkerhed. Det har ikke været muligt at fremskaffe prøver tillineartetsbestemmelse og validering afhele måleområdet. Oplysninger om metrologisk sporbarhed, måleinterval, detektionsgrænse, analytisk specificitet, robusthed, afsmitning og præanalytiske forhold indhentes hos producenten, da produktet er CEmærket (Jf."IVD-direktivet"). Disse oplysninger betragtes som valide. Resultaterne afovenstående dokumenterer, at laboratoriet anvender en analysemetode med en kvalitet, som opfylder kravene til analysen som er fastlagt, så de ud fra en lægelig vurdering (foretaget af Klinisk-biokemisk afdelings læger) vil opfylde rekvirenternes behov. V-Q2J-Q30roSOffiucuid SidelaflO

2 Klinisk-biokemisk afdeling Rapport V-023/03 Indholdsfortegnelse: ORiGiNAL Valideringsrapport for P-Orosomucoid;,tolk. 2 eksemplarer Analysedata 3 Plan for validering 3 Apparatursammenligning 3 Metrologisk sporbarhed 3 Korrekthed 4 MåleintetVal 4 Detektionsgrænse 4 Analytisk specificitet 4 Linearitet 4 Intermediær irnpræcision og præcisionsprofil 4 Robusthed 5 Afsmitning 5 Præanalytiske forhold 5 Referenceinterval og oprindelse 5 Relativ kombineret standard måleusikkerhed 6 Kvalitetsmål 6 Resultater 6 Apparatursammenligning 6 Metrologisk sporbarhed 6 Korrekthed 7 Måleinterval 7 Detektionsgrænse : 7 Analytisk specificitet 7 Intermediær impræcision 7 Præcisionsprofil 8 Robusthed 9 Afsmitning 9 Præanalytiske forhold 9 Relativ kombineret standard måleusikkerhed 9 Konklusion IO Referencer 10 Bilagsoversigt 10 v-02j-030rosomucuid Side 2 af IO

3 Klinisk-biokemisk afdeling ORIGINAL Valideringsrapport for P-Orosomucoid; stofk. Rapport V-OB/03 2 eksemplarer Analysedata Navn, IUPAC~kode og enhed NPU02948 P-Drosomucoid; stofk. Engelsk navn og enhed P-Orosomucoid; subst.c Vurdering afaktive processer/inflammationer, Indikation især i støttevæv (akut-fase protein). Kontrol afmb. Crohn. Apparatur Cobas Integra 400, serienr Cobas Inle",a 400, serienr: Analyseprincip Immunturbidimetri Kvalitetssikringskontroller Intern kvalitetskontrol: HK fra DEKS Præstationsprøvning: FHK-LHK fra Labqualily Plan for validering P-Orosomucuid analyseres på et fuldautomatisk analyseudstyr. Kassetten "Cobas Integra AAGP" indeholder et in vitro diagnostik reagenssystem, der er beregnet til Cobas Integra systemer til kvantitativ immunologisk bestemmelse afhuman orosomucuid i serum og plasma. Installeringen af Cobas Integra nr. 1 på Klinisk-biokemisk afdeling blev foretaget i november 1999, hvorfor de personer der har deltaget i valideringen er fortrolig med apparaturet. Cobas Integra nr. 2 er installeret i sommeren Nedenstående beskriver, hvilke oplysninger, der fås fra producenten og hvilke vi på Kliniskbiokemisk afdeling har valgt at validere. Apparatursammenligning Patientprøver vil blive analyseret både på Cohas lntegra 400 nr. l og 2. Der er derfor foretaget en apparatursanuneniigning ved hjælp afca. 30 patientprøver jævnt fordelt i måleområdet. Metrologisk sporbarhed Oplysningerne indhentes hos producenten. v-on-03 Orosomucuid Side 3 afio

4 Klinisk-biokemisk afdeling Ct;:-~1GINAL Valideringsrapport for P-Orosomucoid; stofk. Rapport V-023/03 2 eksemplarer Korrekthed Der er indkøbt certificeret referenceserum ERM-DA470. Det frysetørrede materiale er opløst efter vejledning og prøven er analyseret 9 gange over to dage. Værdien på det certificerede materiale er opgivet til 16,40 umol/l. (Se bilag 14.) Måleinterval Oplysninger indhentes hos producenten. Detektionsgrænse Oplysninger indhentes hos producenten. Analytisk specificitet Oplysninger indhentes hos producenten. Linearitet Vi undersøger ikke lineariteten, da det ikke har været muligt at fremskaffe en prøve med et indhold aforosomucuid. der ligger over fortyndingsgrænsen. Der foreligger ingen oplysninger fra producenten. Intermediær impræcision og præcisionsprofil Resultaterne til bestemmelse afintermediær præcision og præcisionsprofil er bestemt på frosne pools afpatientprøver og intern kontrol Til bestemmelse afintermediær præcision er den anvendte patientpool (ca. 36 IlmoVl ) og den interne kvalitetskontrol (ca. 16 Uffiol/l) analysetet 30 gange over flere dage. Til bestemmelse afpræcisionsprofil er patientpools analyseret som dobbeltbestemmelse 5 på hinanden følgende dage. Der foreligger forskellige niveauer i præcisionsprofilen for de to apparater, da målingerne er foretaget på forskellige tidspunkter. V Orosouwcuid Side 4 af 10

5 Klinisk-biokemisk afdeling Valideringsrapport ror P-Orosomucoid; stofii.. Rapport V-OB/03 2 eksemplarer Niveauerne til bestemmelse af præcisionsprofil er følgende: Cobas integra 400 nr. I Prøvenurnmer. ca. mveau I "movi l. 2, , , ,0 Cobas integra 400 nr. 2 Prøvenummer. ca. niveau lumolll I. 14, , , , ,0 Til vurdering afeventuelle outliers beregnes Sdindled ud fra 20 bestemmelser udført på internt kontrolmateriale (niveau ca. 16 IlmoV1). Robusthed Oplysningerne indhentes hos producenten. Afsmitning Der foreligger ingen oplysninger fra producenten. Præanalytiske forhold Oplysningerne indhentes hos producenten. Referenceinterval og oprindelse Referenceintervallet stammer fra pjecen: "Referenceintervaller for de Klinisk-biokemiske afdelin~ ger i Storkøbenhavn" og Referenceintervaller for børn "Gentoftefolderen". V-Q2J-OJ Orosomucuid Side 5 af IO

6 Klinisk-biokemisk afdeling OFUG!NAL Valideringsrapport ror P Orosomucoid; stofk. Rapport V-023/03 2 eksemplarer Referenceintervallerne er følgende: RefereuceiDtervaIler Klin-biokem KBH flllloljl flllloljl Relativ kombineret standard måleusikkerhed. Analysens relative kombinerede standard måleusikkerhed bestemmes i henhold til vejledning 0026 "Beregning afusikkerhed". Kvalitetsmål Korrekthed, bias I % <10% Intermediær impræcision, CV I % <4% Relativ kombineret standard måleusikkerbed CV I % <5% Resultater Apparatursammenligning Der findes god overensstemmelse i analyseringen afde 30 patientprøver i hele måleområdet. Da der ikke har været analyseret prøver, der ligger i fortyndingsområdet har det ikke været muligt at kontrollere dette. (Se bilag 2). Metrologisk sporbarbed Metoden er standardiseret over for IFCCIBCRlCAP referencemateriale CRM 470 (RPPHS91/0619). (Se bilag I) v Orosomucuid Side 6 af IO

7 Klinisk-biokemisk afdeling C~r'3INAL Valideringsrapport for P-Orosomucoid; stofk. Rapport V-023/03 2 eksemplarer Korrekthed I nedenstående skema ses middeltal af de målte værdier og bias %. eobas In!e ;ra 400 nr. I Opgivet værdi 16,40,,",01/1 Middeltal (n-9) 16,67 ""'01/1 Bias % 1,63 % (Se bilag 3). Cobas In!e ;ra 400 nr. 2 Opgivet værdi 16,40,,",01/1 Middeltal (n-9) 17,51 umolll Bias % 6,78% (Se bilag 4) Begge apparater lever op til kravet for bias %, som er 10% Måleinterval Måleintervallet for Orosomucuid er fra producenten oplyst til ~mol/l. hvor Cobas lntegra foretager automatisk fortynding på prøver med en koncentration> IlO ~mov1. Prøver der ligger mellem 2 og 4 umolll bliver opkoneentrere!. (Se bilag I). Detektionsgrænse Producenten oplyser en detektionsgrænse på 0,825 ~olll beregnet på en O-prøve + 3 sd. Vi definerer detektionsgrænsen som en O-prøve + 5 sd. Herved bliver detektionsgrænsen 1,375 J.Ullol/1. (Se bilag I). Analytisk specificitet 1 meget sjældne tilfælde kan garnmopati, især type IgM (Waldenstroms malaoglobulinemi), give unøjagtige resultater. (Se bilag l). Intermediær impræcision Til vurdering af eventuelle outliers er beregnet Sdindled ud fra 20 bestemmelser udført på internt kontrolmateriale. Eventuelle outliers forekommer, hvis den absolutte afvigelse mellem en bestemmelse og middelværdien er >±5,5sd ind1ed. V-Q23-Q3 Orosomueuid Side7 aflo

8 Klinisk-biokemisk afdeling or-~r~inal Valideringsrapport for P Orosomucoid; stofk. Rapport V OB/03 2 eksemplarer sd ind1ed er beregnet til: Intern kvalitetskontrol Orosomucuid Cobas In!eora nr. 1 Cobas Inteora nr. 2 Mean :"molll) 16,2 16,4 sd ind1ro ("molll) 0,48 0,44 (Se bilag 5 og 6). Resultater for den intennediære impræcision ses i nedenstående skema: Cobas Inteciii400 nr. l Cobas InIe rra 400 nr 2 InternQC Patientprøve InlernQC Patientprøve Mean (JJll1ol/I) 16,4 35,3 16,2 36,4 sd (JJll1olll) 0,6 l, l 0,5 0,5 CV% 3,5 3,2 3, l 1,2 Poolet im ræcision Cobas nr. l og Cobas: rir. 2 InternOC Patientorøve Mean (JJll1olll) 16,3 359 Sd ("molll) 0,6 1,0 CV% 3,4 2,8 (Se bilag 7 og 8). CV% vurderes til at være acceptabelt. PræcisionsprofLI Ved analyseringen afpatientpools er der fundet følgende resultater: Cobas Inle.,.a nr. l Prøve nr. l Prøve nr. 2 Prøve nr.3 Prøve nr. 4 Mean I "mol/l. 2,7 14,5 46,7 80,3 CV/% 5,07 3,23 2,07 3,97 (Se btlag 9). Cobas Inle.,.a nr. 2 Prøve nr. l Prøve nr. 2 Prøve nr. 3 Prøve nr. 4 Prøve nr. 5 Mean! umolll. 14,5 26,0 36,5 44,4 94,2 CV/% 1,00 1,64 1,23 1,54 2, lo (Se bilag IO): Dette vurderes til at være acceptabelt. V Oro~omucuid Side 8 af IO

9 Klinisk-biokemisk afdeling Ch!GINAI. Valideringsrapport for P-Orosomucoid; stock. Rapport V-023/03 2 eksemplarer Robusthed Temperaturen i instrumentet holdes på 37 ae ±O,3 ae. Hvis temperaturen bevæger sig uden for dette interval, giver systemet automatisk besked herom. I valideringsperioden er anvendt flere reagens- og kalibrator lot. nr. og prøverne er målt af flere bioanalytikere. Afsmitning Der foreligger ingen oplysninger fra producenten. Præanalytiske forhold Kun nedenstående prøvematerialer er testet og nmdet acceptable. Serum: Serum opsamlet ved hjælp afprøvetagningsrør, indeholdende gel eller trombin. Hvis prøven ikke er taget i gelglas skal serum omgående separeres fra koagelet og analyseres. Plasma: Li - Heparinplasrna Ved analysering afprøver i primærrør skal instruktionerne fra producenten afdisse rør følges. Holdbarhed: 3 dage ved 4-8 "C 6 måneder ved -20 "C uendeligt ved - 70 "C (Se bilag I). Relativ kombineret standard måleusikkerhed. Til beregning afrelativ kombineret standard måleusikkerhed anvendes den intennediære impræcision. Der er foretaget 30 på hinanden følgende målinger på prøvemateriale i to niveauer. Mean og CV % ses i nedenstående skema. Resultater poole! fra lutegra IntennooiærUtipræe,ision o log 2. o InternOC. Patientoool Mean (~mol/i) 16,3 35,9 CV/% 3,4 2,8 Relativ kombineret standard måleusikkerhed I % 4,3 3,9 (Se bilag 11 og 12). Dette vurderes til at være acceptabelt v-qn-q30rosomucuid Side 9 af IO

10 Klinisk-biokemisk afdeling Valideringsrapport for P-Orosomucoid; stofk. Rapport V-OB/03 2 eksemplarer Konklusion Resultaterne viser, at laboratoriet anvender en analysemetode med en kvalitet, som opfylder kravene til analysen som er fastlagt, så de ud fra en lægelig vurdering (foretaget af Klinisk-biokernisk afdelings læger) vil opfylde rekvirenternes behov. Referencer Roche Metodemanual: uj-acid Glycoprotein Orosomucuid AAGP Katalog: Standards, Standardization and Feasibility in Clinical Chernistry and Homogeneous Immunoassays from Roche Diagnostics. Bilagsoversigt l. Kit indlæg. 2. Apparatursammenligning. 3. Korrekthed Cobas Integra 400 nr. l 4. Korrekthed Cobas Integra 400 nr sd indled Cobas Integra 400 nr. l 6. sd indled Cobas Integra 400 nr Intermediær impræcision begge apparater poolet intern QC 8. Intermediær impræcision begge apparater patientprøve 9. Præcisionsprofil Cobas Integra 400 nr. l. 10. Præcisionsprofil Cobas Integra 400 nr. 2. ll. Måleusikkerhed. 12. Måleusikkerhed. 13. Metodeblad. 14. Certifikat for referenceserum. Dokumenthistorik Side I nunkt aue Ændrine / tilføielse RaoDorten er ændret, da der nu er to Cobas Inteza 400 V..(l2)..Q) Orosomucuid Side 10 af 10

11 INTEGRA o1-acid Glycoproteln Orosomucold (AAGP) Ordrelnlonn..tlon COBAS lntegra' (I,,-Acid Glycoprotrin Serumproteins T Stand..,d Pucinonn' Prou.in Predpath' Protein NaCl Diluent 9' tests 5%0,5 ml 3:>: 1 ml 3x I ml 6x22ml Kot.ru System-IO 07 S091 3 Kat.nr System-ID KaLnr.l System-IO S 9 Katnr Systtm.ID Cl ut.n:r System_ID O Indikerer detlde ana1y"'iu.trument(..l, hvor kassetten hn anvendes lntegra "'".INTEGRAI INTEGRA 400 plus ;00 INTEGAA '''' Anvendelse KUlell,n COBAS INYEGRA <Ij-Acid GlycoprOI.in (MGP) lndeholder et in viua diagnostisk reage'lssf$lem, der er beregnet til COBA5 INTEGRA oyslemer til kvantitativ immunologisk oolemmtisc afhuma.nl OIOlomucoid l hulnult serum og plasma (test MGP, 0-191). Re.umo ' Orosomucoid, agsi kaldet (li-surt glykoprolein, er et surt protein, som prim",rt syntetiseres l leveren. Ocn høje grad af heterogenitet, Jom ses bjde i proteinets kulhydratindhold og aminosyresammen..ætning skyldes formenilig ekaiotenun af forsk<:liige funktionelle former af pro,"inet. Orosomucoido ~lologi.ske funktioner er ikke kendt i detaljer. Orosomueoids,ernmnivcauCt varierer med kon og alder. Der ~s forhojede niveauer ved akut og kroni.k inflammation. Niveauet.liget ved myokardicinfatkt, malignitet, IUlOimmune sygdomme. traumatiske forbrændinger, hæmalologlske anomalier, adipositas, nyresvigt samt efter indgift af enzymindu,erendela.gcrnidler. Niveauet aforosomueoid stiger ved kronisk leversygdom, nefrotisk syndrom. e",udativ ga;;troen,"ropati, ostrogenindgift og graviditet. Måling..f oro$omucoid et s..erug nyttig til at.kelne mellfil'l et alunfase respom (forhiljet orosomueoidniveau) og en østrogeneffekt (reduceret niveau), d.. begge proce..er forhuger.itigning i de fleste andre akud..e proleiner. Kombineret me<!. haptoglobin er orosomucoid et..f de b<.d.lte pro,"iner til påvisning afhæmolyse {anæmi}. Nive..uel for disse IO proteiner.itiger og falder nonnajt umtidigt; et forhøjel orosomucoldnive..u med normal haptoglobin tyder derfor på et a!rulfa.. respons med mild in vivo ha::molyse, Orosomueoid kan bindelipoft1e molekyler og b..iske lægemidler, som reb.lido,ain og propranolol, som ofte anvendes efter beh.. ndiing af myobrdjeinfarkt. Stigning i oro.omucoid efter et infarkt og dets evne til II binde stigende mængder aflægemidler medforer et misforf,old mellem den farmakologiske virkning og lægemidlets.erumniveau, hvilket der skal kompenseret for ved at jus,"rede do.i. af det administrerede lægemiddel. Anal)'1leprlnetp Immunturbidlmetrisk analy,.., Hum""l orosomucold danner en udfældning med et spuiflkt antiserum, som bestemmes turbidimetrisk ved 340 nm. Reae:enaer - albejd.oplanlnr;er RI Accdul.lor Polyethylenglycol {PEG} I fosf:ltbuffer stabiliselet med 0,09% nuriwnazid l fu.ske B (flydende). R2.. SR Anti-orosomucoid T antiserum (kanin).~eifikt for humant (ti-surt glykoprotein i fosfatbuffer s!<l.biliseret med 0,09% nalriwnuld i flaske C (flydende). Se venligst kasseneetiketten for reagenwpfyldningsmængder_ ForholdaregIer Ol adyal'sller Bemærk all. advarsler og forholdsregler, som er angivet i kapitel l, Indledning,.~delt punl:! 6 (natriumufd). Reae:enahllndterlne: J<lar til brug. Opbevarine: oa: holdbarhed Holdbarhed ve<!. 2 til8"c INTEGRA 400 l brug ve<!. IO til 15'C INTEGRA l brug ved S C Prøvetagning og -forberedalsa Kun de nedennævn," prøvematerialer er te.tet og fundet acceptabie. Serum, Serum opuml.. ved hjælp af standard prøvetagningsror, Serum skal omgående..pareres fra koagelel. Plasma: lj-heparin plasma. Analyser den friske prøve, eller opbevar den i høj.t 12 timer ved 4 C. Ved..nalysering af prøver i primærrør skal instruktionerne fra producenten..f disse rør folges, Prøver og kontroller forfottynde "tomatisk 1,21 (l+20) med Naa oplosning af instrumentet. Holdbarhed,' Se udløbsdatoen pli kul-cl"n Suget 8 "ger op til 12 timer ved 4-8'C 6 mlnede, ved -20'C uendeligt ved -70 C Centrifuger prøver indehoidende udfældninger før udførelse af analysen {lt.J'-r---

12 LVTEGRA SpeeiflC Proteins Levef(ld. meterleler Se venligst abnittct "RugCJUl:r. umjdsopløsninger" m.ll.!. rcagcjul:r. Nedvendl,e {men Ikke Inkluderede} materialer NaQ 9.0'16 (IO dobbelt koncentreret isototilik Naa) til automatisk prøveforlynding og Sol:rielle nandardfortyndinge._ Brug Naa Dilumt9'1li. kat.nr Sy.t..m.ID O, euer forbered 9.0"'" NaCl opløsningen med kommerdelt tilg..ngclige naniumldorldtablene. eller koncentreret NaCl. Naa opløsningen anbringes i den przdefinerede rackposition. Analyse Hvis analysen skal udføres optimalt, skalanvlmlngerne for det aktuelle analyrnnslrument følges. Se venligst den aktuel1l: brugermanual for spcdfilli analyseinstruktiollcr til instrumentel Ap~lIklltlon til lerum oe pl..me lntegra 400 teltdeftnltloner Milemctode Ab$.be~ningm>etode ReaktiollJmetode ReaktiollJretning Bølgcl..ngdc AlB CaJc. flutjio$t Typi.k milcomride med rean.aj.ysetltltl Typiik prorone effekt ICoftlrol af antigen exccsl Predilution futor POltdilution factor I'o.tconcmlration factor Eohod AfplpetterlnpJIOrametre Absorbans Endpoint D-RI-S-SR Stigende 340/652 run H. " " Pr..,," SO "" Totaivolumen tj! lntegra 700/800 tutdellnltlonll MilemClode AI>l.lH:regningm>etode Rcaktionsmetode Rcaktionsretn1n8 Bølgd...ngdc AIB Ca!c. liul/la$l Typisk ml1comrtde med rean.aj.yscring Typisk prorone effekt Kontrol af anligen UCCSl Predilution futor Po.tdilulion factor Po.lconcenU"ation f"clor Enhed 33/62 0, gll (16-«0 mg/dl) 0, J!l ( mg/dl) >13.3 gi1 (>1.330 mg/dl) Nej " 4 anbefales 2 :onbefales Vi 7.5 tj! ""," Ablorbaru Endpoint D R1-S SR Stigende 340/652 nm 44/95 0,16-4 gi1 ( mg/dl) O,QS 17,6 gf1 { mg/dl) >l i,2 gi! {> 1120 mg/dl) Nej "4 anlh:fales Z anbefales Vi AfplpetterlnC,pørametre " Prøve SR Totalvolumen KalIbrerin, Kalibrator Kai ib rering.sfortyndlngs ratio Kalibrering.metode Kalibrerlng.sbe5 temmel.., KaI ib rcrlngsint..rva! Refer""ccomride Patolog"k omridc KontrolInterval. KonlroJnrek.kefølIle Kontrol efter blibrering Hæmolysc icterul Lipæmi Reumlfaktorer Andre 7,5.,J," Serumproteins T Standard U.s, 1:6. 1:12. 1:24, 1:48, 1:96 udfercs automatisk afinstrumentet Logit/log 5 DobbcltbCSlemmclsc anbefales Hvert 101 indt...t den angivne lotspecifikke _rdi for o'ooomucoid for den ufortyndede blibrator, som er angivet i paltn1ngsindlægget til $crumprot..!ni T Stand..,d. Sporb..,hed: Denne metode er sto.ndardiscret over for IFCClBCRlCAP rcfercncemateriale CRM...70 (RPPHS 9i1(619) for 14 scrumproteincr.' Kval/t.tskontrol SerumproteiN T Control eller Prcdnonn Protein Prcdpath Protein 24 limer anbefales Brugerdefineret Anbefales Berc,nln, CQBAS INTEGRA S)"kmer beregner aulomatisk lnalytkonccntrationm i den cnkdle prøve. For yderligere infonnltion, se venligst kapitel 7. D..tunalylC, i brugermanualen (COBAS INTEGRA 700). eller Dllaanal)'IC p! online hjælp (COBAS INTEGRA 400/(00). Omregningsfaktor: gll x 100,. mg/dl Bell,..nsnlnger Interf.renl Kriterium; Genfinding inden for ± IO'lb afinltjal værdi. Serum, puuma Ingen signiflkent int..rferens. Ingen signifikant interferens. Ingen.igniflkmtlnterfcrens. Ingen signiflkant interferens. i megetlj..ldne li1f..lde kan gammopati. især type IgM (Waidenslrllml mal<roglobullnæmi). give unøjlgtige resultater_ Til diagnostiske formtlska.l r..ultaternc a1lid sammenholdes med patientens anamnese. kliniske undersøgelser 08 and'e r..ulluer... _. AAGP- ~ loo3 11,---V_2-OA- ~_

13 Speeitie Proteins INTEGRA Refereneelntervalle," 0,5 1,2 g/l Hvert laboratorium bør undersøge, om referenceintervallerne kan o, erf"rel Iii egne pa!ientgruppu, og om nødvendig! fa.tsætte egne referenccintervllller. Tnupeclflklte performance data 10 Repra:.entative performance dala pt COBAS INTEGRA analyseinstrumenter angives nedenfor. Resultaterne kan vuiere fra laboralorium lil laboratorium. Præcision Reproducerbarhed er fastsat ved hjælp af humane prøver og kontroller i en intern protokol (intra serid n = 20, lntcr seriel: n "' 20). Følgende ruultater blev opntet Middel CV intra serie! CV inter serid ( mg/dl) Niveau l 0,62 gll (62 mg/dl) 1,9% 2,~'l6 Nivnu 2 2,22 gll (222 mg/dl) 0,95% 1,5% Analytisk sensltmtet (nedre detektionegrænse) 0,033 gll (3,3 mgldl) Detelctionsgrænsen repræsenterer detlave&t målbare niveau, 10m kan U<elnes fra nul. Den betegne& som den vandi, der ligger tre atlndard.uvfge1ser over en nulprøve (nulprøve + 3 SD, intra-seriel præclsion, n = 30). Metod"s. mmenll,nln'''r OrosomueOidværdiu i humane serum og pia.maprøver fundetpl COBAS lntegra 700 (prøveforfortynding 1:21) med kaa.euen COBAS INTEGRA "1 Acid Glycoprotein blev sammenlignet med værdier fundel med reagenser tu oroaomucold pl COBAS INTEGRA 700 (prøveforfo,tynding Lil) og et kommercielt tilgængeligt a1tecnati"t automatiserer rystem (rurbidlmetrlsk bestemmelse), Prøver blev ml\t l dobbeltbestemmelse. Prøveantal (n)...,pr...nterer Illle benemmelser. Værdierne 11lomrldet 0,33 til 3,18 gil (33 ti! 318 mg/dl). Praveantl/ (n) Kon.koefficient Uno regression Passing Blblok COBAS INTEGRA 700 (r) 1,000 '" (r,l 0,999 Y" 1,02:+ 0,02 gll Y" 1,02: + om gll Alternativt system 0,9% '" 0,990 Y = 1,Q8x - 0,07 Sil Y = 1,01x O,M gll Relottenee, l. Grant GH, SUverman L\.l., Christenson RH. Amino aclds and proteins. In: Tieti NW, ed. fundamental. of Clinica1 Chemistry. 3rded. PhUadelphia: WB Saunders 1987: Sellmid K. (I1 Acid Glyeoprolein. In: Putnam FW, ed. The Plasma Proteins. 2nd ed. New Yorlc: Aeademie Press 1975: Schmidt K Human pluma O-l acid glycoprotein biochemicil properties, the illlllno acid sequence and the strucrure of the carbohydrate moiely, variants and polymorphism. In: Baununn P, ed. Alphal Acid Glyeoprotein: Genetie&, Biochemislry, Physiological Functions, and Pbannacology. New York AR Liss 1989:7-22. ~. Dente L. HUm.:ln O-\-acid glycoprolein genes. In: B.um_nn P, ed. Alphal Acid Glycoprotein: Gen.tie&, Biochemist'1', Phy.iolo8ical Funclions, and Pharmacology. New York: AR Liss 1989: Routledge PA. Clinica1 relevll\lce of aj"acid glycopfotein in h.ajth and di... In: Baumann P,.d. Alphal Acid Glycoproteln: Genelicl, Biochemistry, Physiological Funetlons, and PharmacoJogy. New York: AR Liss 1989: Kremer JMH, Wilting J. Janss.en LHM. Drug binding to hum.n Illpha 1 acjd glycoproleln in helllth and <lise... Pharrnacol Rev 1988:~0:1 ~7. 7. n.n NW, ed. Oinicil Guide to Labor.tory Te&t&. 3rd.d. Philadelphia, WB Saund :8_9. 8. Johnson AM. A new intematiorui reference prepar.tion for protem, in human senlm, Arch Patbol Lab M.d 1993:117: Schumann G, D.ti F. Vorliufige Referenw.:reiche filr H Proteine 1m Serum (fiir Erwacl1&ene) nach Su.ndardlsierung lmmunchemisclter Methaden unler Bezu8 au! du inler...tionllle Referenzmaterial CRM ~70. Lab Med 1995;19:401-~03. IO. Data forefind.. hoa Rocb. Diagnootic. v.",,~;,c tii,.j.l... oil"'"'"~i1"..'.. v,"..d...ijft<''p;..&<)... III ~"",. Dio-In..'"" GmbH. D oie298 M.nMflm C \ 2003.,11,-"2 DA JlAGp

14 Klinisk-biokemisk afdeling ORIGINAL ApparatUfsammenligning Orosomucoid N 80 o 50 o o ~ 40 ~ 30 u O o o o o N N I n - 30 Y~ 0, ,9757 \i ~ ~ Cobu Inlegra 400 nr. I y y-x -Lineær (y) l Differensplot (y-x som funktion af x),, c-c..-' , o ~~~~- ---_ t_ :.: ,;.;.;';. - 0~~-~--"--~, ~--~--~--_1... ~.:.:.::o "Oo.~.o -1.. '::' 0 o.!'::!,..., " :: I... n - 30-t _ " , L- -"-'~ ' I, So/rvæ IOo/rvæ oso/rva: -IOo/rvæI Konklusion: Den observeredeforskel mellem resultater fra de to Integro 400 er afden ledende overlæge vurderet som uden klinisk betydning OroSOffillcoid ApparatursammenligninglGrafer Bilag 2 Side 1af I

15 Klinisk-biokemisk afdeling Amtssygehuset I Gentofte ORIGINAL' Korrekthed bestemt v.hj.a. certificeret reference materiale Analyse: P-Orosomucuid Milt på: Cobas Integrø nr. 1 Certificeret værdi: Nr. Dato Værdi I ,1 2 16,8 3 16, ,1 5 16,0 6 16,8 7 17,3 8 16,2 9 18,0 Middel ~molll 16,67 BIAS! % 1,63 Bilag)

16 Klinisk biokemisk afdeling Amts5Yaehuset i Gentofte ORIGINAL Korrekthed bestemt v.hj.a. certificeret reference materiale Analyse: P-OrosoHuu:uid Målt på: C"høs /flregra -100 nr, 1 JlmolA Certificeret \'ærdi: 16,4 N,. Dato Værdi l ,4 2 17,4 3 17, ,9 6 17, ,3 8 17,6 9 17,6 Middel / ~molll 17,5] BIAS/ % 6,78 Bilag 4

17 Analyse: sdindled p- Orosomucuid Målt nå: Cobas JnUgra 400 nr. l pmola Bestemmelse D... Værdi I 16,2 2 16,7 3 16,3, 15,4 5 15,I 6 16, l 7 16,0 S 16,4 9 15,7 IO 16,5 II 16, , ,5 l' 16, , ,4 IS 17, , , l II Middelværdi LJmolll 16,24 sdjødlod "møla 0,48 5,5 * Sdlndlod "m.vi 2,64 Bilag S

18 ORIGINAL Analyse: sdindled P-Orosomuculd Målt nå: Cobøs ln/~gra 400 nr 2 JlmolA Bestemmelse nr. Værdi l 16,0 2 16,3 3 15,9 17,1 5 16, 6 IS,9 7 16,1 8 16,5 9 16,4 IO 16,3 Il 16, , ,1 l' 16, , , , , ,' Middelværdi 11molll 16,41 II sdjndl<d "m.1ii 0,44 5,5 Sdindled "mølll 2,44 Bilag 6

19 Klinisk biokemisk afdeling Amtssygehuset i Gentofte ORIGINAL Total impræcision bestemt v.bj.a. Intern kvalitetskontrol (Analyse: ~OrosomllCIIld Milt pi: Cobas ItUegro 400 ",. l og II'. 1 Apparat-I Apparat-2 Nr, Værdi Nr, Værdi I 16,7 I 16,0 2 16,7 2 16,3 3 16,8 3 15,9 4 17,3 4 17,1 5 16,6 5 16,0 6 17,2 6 15,9 7 16,7 7 16,1 8 16,7 8 16,5 9 16,2 9 16,4 IO 16,3 IO 16,3 \I 16,3 \I 16, , , , , , , , , , , , , , , , , , ,_ 21 16, , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,6 Middel I p.movl 16,27 sd / "molll 0,55 CV/% 3,35 Bilag 7

20 Klinisk biokemisk afdeling Amtssygehuset i Gentofte ORIGINAL Total impræcision bestemt v.hj.a. Patientprøve Analyse: Reagens lot nr.: Kalibrator lot nr.: Målt på: p-orosomucllld Se logbogen St!logbogen Cobas JntegrtJ 400 nr. l og nr. l Apparat-l Apparat-2 N,. Værdi N,. Værdi I 36,6 I 35,8 2 35,9 2 36,3 3 35, , ,2 5 35,8 6 35,7 6 36,1 7 36,4 7 36,3 8 35,9 8 36,1 9 35,4 9 36,1 IO 35, ,2 Il 35,6 Il 36, , , , , , , , , , , , l 17 36, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,1 28 J7, , , , ,6 Middel/ /UDolII 35,86 sd / "movi 1,01 cv/% 2,81 Bilag g

21 Klinisk-biokemisk afdeling Amtssygehuset i Gentofte C71!GINAL 19-Q PræcisionsprofJl (,.movi) Analyse: Orosomucoid Målt på: Cobas lntegra 400 nr. 1 I Prøve I Prøve 2 Prøve 3 Prøve 4 I l. best 2,7 14,0 46,8 77,3 2. best 2,6 14, ,4 3. bcst 2,8 14,5 45,8 79,1 4. hest 2,6 14,9 48,0 84,0 5. best 2,9 14,9 47,6 80,3 6. hest 2,6 14,1 47,2 81,4 7. hest 2,7 15,1 45,2 75,7 8. best 2,7 14, I 45,8 75,7 9. best 2,' 15,2 47,4 83,6 IO. best 2,6 14,5 47,2 83,2 Middel 2,66 14,53 46,67 80,27 CV% 5,07 3,23 2,07 3,97 Referenceinterval (!loloiii) Nedre grænse Il Øvre grænse 29 6,00 5,00 4,00 ~3 00 ;;., U v \ \, "'- ~... / / 2,00 1,00 0,00 0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 Koncentration 70,00 80,00 90,00 --Referenceinlerval Bilag 9

22 Klinisk biokemisk afdeling Amtssygehuset i Gentofte ORIGINAL PræcisionsprofJI (J1moVI) Analyse: P-Orosomucuid Milt på: Cobas Inlegra 400 nr. 2 Prøve 1 Prov,2 Prove 3 Prøve 4 Prøve 5 I. hest 14,7 25,6 35,8 43,8 92, 2. hest 14, ,3 44,0 91, 3. best 14,5 25,9 36,3 44,S 9S, 4. best ,1 44,6 94,5 5. besl 14,5 26,S ,9 96,S 6. besi 14,4 26,3 36,4 43,9 94,8 7. hest 14, ,4 43,6 94, 8. best 14,4 25,6 36,4 45,2 91, 9. hest 14,2 25, ,8 9S, IO. hest 14, ,4 45,7 96, IMiddel 14,49 26,3 36,45 44,40 94,2 VI" 1, Referenceinterval (j.1molll) Nedre graense II Ø>.'l'C gncose 29 2,50 2,00 1,50 ~ G 1,00 X ~ ~ V"" X.-x 0, ,00 o Koncentration i--referenceinfervaj - Poly. (Profil) I, Bilag IO

23 Klinisk biokemisk afdeling for NPU02948 P-Orosomucoid; stolk. målt på Cobas lutegr. 400 Biologisk variation (CVw) 11,l, - Bidrag til måleusikkerhed., Analytisk (CVIntermediær imnræcisionl 3,35." - ~ ~ ~.c ~ =... =... -(.<il = Kalibratoil (k-værdi=2) (CVkalibralOr) 2,5 Præanalvtisk 3 ) (CV Tæanal 1isk) l, l Total måleusikkerhed ) ,3 CVtotal + CVkalibfator + CVpræanalyt6k De relative usikkerhedsbidrag - niveau 16,3 JlmoUl 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 Biologisk D Kalibrator Analytisk D Præanalytisk 10,0 % 12,0 Referencer: 1) Ricos C, Alvarez V, Caya F, Garcfa-Lario JV, Hemandez A, Kimenez CV, Minehinela J, Perich C. Simon M. Current databases an biological variation: pros, eons and progress. Scand J Clin Lab Invest 1999; 59: ) Traceability and uncertainty Cobas Integra - Serumprotein-T-Standard Roche 3) Gerdes, U: Blodprøvetagning som kilde til præanalytisk variation. Klinisk biokemi i Norden 15(4); 203; Præanalytisk varians for P-Albumin anvendt Side 1afl

24 Klinisk-biokemisk afdeling I,..,rliGINAL Måleusikkerhed for NPU02948 P-Orosomueoid; stolk. målt på Cobas Integra 400, '" ~ ~.c ~ ~ "'''' Biologisk variationi) (CVw) I Il, l Bidrag til måleusikkerhed ~~ Analytisk (CVIntermediær im"~ision 2,81 ='" -<.;; = Kalibrator2 ) (k værdi=2) (CVkaJibrator) 2,5 Præanalvtisk 3 ) (CVDræanalVlisk) l.1 Total måleusikkerhed ~CVI~tal + CV;aJibrator + CV:ræanaJy1i;k 3,9 De relative usikkerhedsbidrag - niveau 35,9 Jlmol/l ,0 6,0 8,0 Biologisk D Kalibrator Analytisk O Præanalytisk 10,0 % 12,0 Referencer: 1) Ricos C, Alvarez V, Caya F, Garcfa-Lario JV, Hernåndez A, Kimenez CV, Minchinela J, Perich C, Simon M. Current databases on biologieal variation: pres, eons and progress. Seand J Clin Lab lnvest 1999; 59: ) Traceability and uncertainty Cobas Integra - Serumprotein-T-Standard Roehe 3) Gerdes, U: Blodprøvetagning som kilde til præanalytisk variation. Klinisk biokemi i Norden 15(4); 203; Præanalytisk varians for P-Albumin anvendt Side l af I

25 Klinisk-biokemisk afdeling Dato: dd-mm-år 0::::'---/ Prod. Kval. NPU02948 P-Orosomucoid; sjofk. Gi{;} ~i~~~~s., DANAK Metodeblad nr. M-057/03 <.{::;r. SYSTEM Rsgnr 100\ 3 eksemplarer Udarbejdet af: Taget i brug: 9/ Revision: Rum nr.: Britta Nielsen Erstatter: 3/ /12008 Indikation Tidspunkt for prøvetagning Forberedelse af patient Prøvetagning og minimumsmængde Prøvehåndtering og forsendelse Præanalytiske fejlkilder Rekvisition i lee Referenceinterval Resultatvurdering Referencer Vurdering af aktive processeriinflammationer, især i støttevæv (akut.fase protein). Kontrol afmb. Crohn. Hele døgnet Ingen Glas med gul prop, indeholdende gel. Minimumsmængden er 2 ml. Alternativt kan benyttes: Glas med rød prop uden tilsætning. Glas med grøn prop indeholdende Na-Heoarin 68 lu. Hvis prøven ikke er taget i et gelglas bør serum separeres hurtigst mulil>1 fra blodkoage!. Ingen På side 2 ved afkrydsning udfor "Orosomucoid". II - 29 ~mol/l Forhøjede værdier ses ved: Aktive processer, hvor stigningen ses inden for de første l - 2 døgn. Desuden kan stigning ses efter behandling med kortikosteroider. Nedsatte værdier ses ved: Sygdomme med proteintab såsom nefrotisk syndrom samt tannsygdomme uden samtidig inflammation. Desuden ved levercirrose Dl2:a. nedsat svntese. Jørgen Lyngbye: Dansk Laboratorie Medicin. En Håndbog. Nyt Nordisk Forlag Arnold Busck NS 200I. ROCHE Metode Manual: al-acid Glycoprotein V2 DA. M-057 Orosomucoid Bilag 13 Side l af2

26 Klinisk-biokemisk afdeling. JINAL Dato; dd-mm-år -=;---'/ Prod. Kval. M_lod_blad nr. M-057/03 NPU02948 P-Orosomucoid; stolk. -":':\ ""ITm..Jo. D,A "AK { 'SO,> STYRINGS 'W' 1""\J 'I '""\.-..."" ""Ilt r' SYSTEM R- el nr. ''''' 3 eksemplarer Rekvisition af supplerende undersøgelser Registrering af prøvetager Opbevaring af prøvemateriale efter analvserim! Udføres Svartider Analyseprincip Apparatur Relativ måleusikkerhed Sporbarhed på kalibrator Detektionsgrænse MAIeinterval Ringegrænse Bemærkninger Hvis der ønskes udført supplerende undersøgelser på prøven, kan dette ske ved telefonisk henvendelse til Klinisk-biokemisk afdeling. Alle prøver, der er udtaget afklinisk-biokemisk afdelings personale, registres i laboratorie-edb-systemet med navnet på prøvetager. Prøver, der ikke er udtaget afklinisk-biokemisk afdelings personale, vil blive registreret i laboratorie-edb-systemet som "taget afafdelingen". Ønskes yderligere sporbarhed til I prøvetager, skal dette registreres i oatientens iournal. Prøvematerialet opbevares, således at analyse-egnethed sikres under hele analyseganl!en. Hele døgnet Rutine: Haste: Samme dag. Kan ikke rekvireres som haste. Orosomucoid danner med et specifikt antistof et precipitat, som måles turbidimetrisk ved 340 run. COBAS INTEGRA 400 fra Roehe 4,3 % (kone. - 16,3 ful1ol/i). 3,9 % (kone. ~ 35,9 ~mol/i). Kalibratoren (Serurnprotein-T-Standard) er sporbar til reference materiale CRM 470 (CRM = Certified Reference Material, Eurooean). 1,38 ful1ol/ I--unol/l (automatisk fortyndinglopkoncentrering) Ingen Ingen M-0570r0s0mucoid Bilag Il Side 2 af2

27 Vedrørende molekylvægt for haptoglobin Med henvisning til Tietz nclinical Guide to Laborytory Tests" 3rd Edition er der tre almindelige fænotyper af haptoglobin Hp l-l, Hp 2-1 og 2-2. Hp 1 1 findes i plasma som monomerer med en molekylvægt på omkring og 2 2 findes som polymerer med varierende men langt højere molekylvægt. Molvægte Type l-l: Type 2-1: plus polymerer Type 2-2: > (multiple polymerer) Såfremt man benytter /lmol/l som enhed for sine analyseresultater, er det selvfølgelig afgørende, hvilken molekylvægt man benytter til sine beregninger. Som det fremgår afmetodebladet til haptoglobin (under punktet beregning), har vi hos Roche valgt at benytte molvægten for fænotype l-l på til vores beregninger. Her i Danmark er der flere, som vælger at benytte en molekylevægt på , som altså knytter sig til fænotype 2-1. Den molekylvægt, som man ønsker at benytte, bør selvfølgelig være relateret til det anvendte referenceområde.

28 , _ ~.._,- CERTIFICATE OF ANALYSIS ERM DA470 HUMAN SERUM Proteins in the reconstltuted material Certified value 1 Uncertainty 2 g1l gll TRANSTHYRETIN IT RI \8/ ALBUMIN ALBI 39.7 '0' ~0.8 a, ACID GLYCOPROTEIN (AIAG) ") '20000 o. ' a, ANTITRYPSIN IAlAT ")'A'. <~,~" ~..v1.011 CERULOPLASMIN ICERI 'Ol I a MACROGLOBULlN A2M\ 1.64,< 0.05 HAPTOGLOBIN IHPT '"";lhu < (O &.009 TRANSFERRIN (TF) 2.45 JO, 'd~ S14<, to"..iii 0.06 COMPLEMENT C3e C3el COMPLEMENT C4 IC4\ 'o, C-REACTIVE PROTEIN CRP IC )c IWtJ_.,,, IMMUNOGLOBULlN G flag 9.68 'o, 0.10 IMMUNOGLOBULIN A la 1.96,< 0.04 IMMUNOGLOBULlN M f1am 'o, a 1 ANTICHYMOTRYPSIN (ACT '0' When tha material is reconslituted aceording to tha specified procedure (see next page). The valul!ls are the unwelghted means af 3-14 accepted mean values, independently obtained by 3-14 laboratories, by catibration against the materials specified in (4) below. Values transferred from:,., = Pure Proteins M = USNRP C 'o, = 1st Intl. Std. erp 85/506 'o) = highly purified and recombinant AeT (2) The certifred uncertainty is the half-width af the 95 % confidence interval of the mean defined in 1). k-factors were chosen according to the t-distribution depending of the number of accepted sets af results.. ThlS certificate IS valid until , tilis vahdity may be extended as further evldence af stability becomes avajlable. The minimum amount af sample to be used is 500 ijl. Accepted as an ER~, Geal. May 2004 // Signed: ~= Prof. Dr. Hendrik Emons Unit for Reference Materials EC-DG JRC-1RMM Retieseweg Geel, Se1gium PIog