HTERT ANTISTOF TIL ICC PÅ URINCYTOLOGISKE PRÆPARATER

Transkript

1 HTERT ANTISTOF TIL ICC PÅ URINCYTOLOGISKE PRÆPARATER Cytologisk Årsmøde 1. marts 2019 Uddannelsesansvarlig bioanalytikerunderviser Marianne Schou Martiny Patologi, Aarhus Universitetshospital

2 URINVEJSCYTOLOGI Diagnostik, screening og kontrol Ladt urin, blære skyllevæske, kateter urine (ureter/pelvis) WHO 2004 klassifikation Papillom PUNLMP Low-grade urotelial tumor (LGUC) High Grade urotelial tumor (HGUC)

3 HTERT Telomerase er et enzym, der genskaber cellers telomerer. Telomerer udgør endestykkerne af cellers kromosomer, som bliver kortere hver gang cellerne deler sig. Dette medfører, at celler uden telomerase kun kan dele sig et endeligt antal gange. I kræftceller er telomerase blevet aktiveret ved en mutation, og da tumorsupressorerne i kræftceller ikke virker, kan celledelingen fortsætte uden at blive bragt under kontrol. htert (telomerase reverse transcriptase) er den katalyserende enhed af telomerase RNA komplekset Telomerase aktivitet i 85% af alle humane epiteliale cancere og i op til 90% af blære cancere

4

5 MATERIALE Ladt urin Blæreskylle væsker Ureter kateter urin Ingen tumorceller, Atypiske celler, LGUC, HGUC Alt materialet modtaget fikseret 1:1 i 58% etanol Opbevaret i ThinPrep PrecervCyt opløsning - methanolbaseret

6 KONTROL Intern kontrol Positiv: bakterier, lymfocytter og neutrofile granulocytter. Negativ: Modne pladeepitelcelle kerner Sienna kontrolglas negative pladeepitelceller og perifert blod med positive lymfocytter

7 KØRSEL 1 Cytospin på coatede glas fra forskellige patienter fremstillet af 4 dråber cellemateriale inklusiv et Sienna kontrolglas. Sprayfixeres straks efter centrifugering. HIER CC1 8 min. Antistoffortynding 1:10 og 1:20 i Dako antibody diluent 16 min. Til yderligere endogen blokering før detektion anvendes Dako antibody diluent.

8 KØRSEL 1 1:10 1:20

9 KØRSEL 2 Cytospin på coatede glas fra forskellige patienter fremstillet af 4 dråber cellemateriale inklusiv et Sienna kontrolglas. Sprayfixeres straks efter centrifugering. Antistoffortynding 1:10 i Ventana Discovery antibody diluent. Ekstra endogen blokering udføres efter antistofinkubation med Ventana Discovery antibody diluent.

10 KØRSEL 2

11 KØRSEL 3 ThinPrep præparation på coatede glas fremstilles fra forskellige patienter. Fixeres først i 96% etanol. Yderligere fixering 1:1 methanol+acetone 5 min 4% NBF formaldehyd 10 minutter Sættes i dest. vand. Antistoffortynding 1:20 Discovery AB diluent anvendes til yderligere endogen blokering. Dako HTX

12 KØRSEL 3 m. fix m. fix u. fix u. fix

13 KØRSEL 3

14 KØRSEL 4 ThinPrep præparation på coatede glas fremstilles fra forskellige patienter. Fixeres i 96% etanol. Med præ-fixering. Antistoffortynding 1:20 Discovery AB diluent til yderligere endogen blokering. Ventana Hæmatoxylin II

15 KØRSEL 4

16 Præ-fixering Foretages i cytologisk lab. efter ThinPrep Tyndtlagspræparation (T5000) 1:1 acetone & methanol 5 minutter 4% NBF formaldehyd 10 minutter Afleveres i dest. vand til immunlab.

17 HTERT IMMUNPROTOKOL

18 KONKLUSION Det er muligt med afdelingens sædvanlige præparationsprocedure for urinvejscytologiske prøver at anvende htert med en kraftig kernereaktion og begrænset baggrundsfarvning.

19 ANVENDELSE AF HTERT

20 ANVENDELSE AF HTERT URETER/PELVIS

21 ANVENDELSE AF HTERT ATYPISKE CELLER

22 Affarvning af SurePath PAP farvede glas Validering af antistoffet Dobbeltfarvning med CD45

23 BIOPSY POSITIVE CIS Specimen # DS Non-invasive highgrade papillary urothelial carcinoma arising in the background of low grade urothelial carcinoma Carcinoma in-site (CIS) (WHO classification) htert result: nuclear positive stain observed in abnormal cells confirming diagnosis

24 PERSPEKTIVERING Thyriodea FNA Benign kontra malign tumor Differentialdiagnostik

25 LITTERATUR Allison Derek B. et al. Evaluation of Sienna Cancer Diagnostics htert Antibody on 500 Consecutive Urinary Tract Specimens. Acta Cytologica June 6, Tak til Tanya Wadsholt Herrera Julio, Driftskoordinator, Immunlaboratoriet,AUH Minesh Lalla, SiennaCancer Diagnostics Gitte Skeldrup, Axlab Karsten Nielsen AUH