Dyreforsøgstilsynets Årsberetning

Transkript

1 Dyreforsøgstilsynets Årsberetning 2002

2 - 0 - INDHOLDSFORTEGNELSE Medlemmerne af Rådet for Dyreforsøg og ansatte i sekretariatet.. 1 Statistik over dyreforsøg i Dyreforsøgstilladelser meddelt i Adfærds-/stressundersøgelse. 18 Biologiske kontrolundersøgelser 19 Dermatologiske undersøgelser Ernærings-/stofskifteundersøgelser Farmakodynamiske og farmakokinetiske undersøgelser Fysiske påvirkninger.. 46 Immunologiske undersøgelser Infektionspatologiske undersøgelser. 58 Organfunktionsundersøgelser 62 Toksikologiske undersøgelser 75 Onkologiske undersøgelser 77 Blod-/vævs-/organdonering 80 Økotoksikologiske undersøgelser.. 82 Reproduktionsbiologiske undersøgelser 83 Tilladelser til undervisningsformål 84 Metodeafprøvning. 86 Andre undersøgelser. 89 Inspektionsvirksomhed 95 Offentlige forskrifter om dyreforsøg.. 97

3 - 1 - RÅDET FOR DYREFORSØG bestod i beretningsåret af: 1/ /5-02 landsdommer C.J. Kjærsgaard som formand, afløst den 1/6-02 af landsdommer John Lundum. 1/ /8-02 professor, dr.med. N.A. Thorn, afløst den 1/9-02 af professor, dr.med. Peter Bie, begge udpeget efter indstilling af Statens Sundhedsvidenskabelige Forskningsråd. Afdelingsleder, dr.med. H. M. Kerzel Andersen, udpeget efter indstilling af de store sygdomsbekæmpende foreninger. Dr.med. Finn W. Henriksen, udpeget efter indstilling af Sundhedsstyrelsen. 1/ /12-02 gårdejer Karsten Vig Jensen, genudpeget den 14/12-02 efter indstilling af Det Dyreetiske Råd. Gymnasielektor, cand.scient. Lene Lorentzen, udpeget efter indstilling af dyrebeskyttelsesforeninger. Dyrlæge, veterinærkonsulent Anett Weber, udpeget efter indstilling af dyrebeskyttelsesforeninger. Professor, dr.med.vet. Axel Kornerup Hansen, udpeget efter indstilling af Statens Jordbrugs- og Veterinærvidenskabelige Forskningsråd. Afdelingsleder, dyrlæge Jens Thing Mortensen, udpeget efter indstilling af Dansk Industri. Lektor, dyrlæge, Ph.D. Julie Fjeldborg, udpeget efter indstilling af dyrebeskyttelsesforeninger. Projektleder, cand.agro., Ph.D. Pernille Fraas Johnsen, udpeget efter indstilling af dyrebeskyttelsesforeninger.

4 - 2 - Suppleanter: Overlæge, dr.med. Liselotte Højgaard for Finn W. Henriksen. 1/ /8-02 professor, dr.med. Peter Bie for N.A. Thorn. Seniorforsker, cand.med.vet., Ph.D. Maria Vang Johansen for Axel Kornerup Hansen. Fagdirektør, dyrlæge Flemming Højelse for Jens Thing Mortensen. 1/8-02 afdelingslæge, dr.med. Vibeke Elisabeth Hjortdal for Peter Bie. Sekretariatet bestod af: Dyrlæge H. P. Olesen, kontorfuldmægtig Helle Wørmer og overassistent Elisabeth Jensen, afløst den 1/10-02 af overassistent Betina Scheef. Dyreforsøgstilsynets adresse er Slotsholmsgade 10, 1216 København K. Tlf /fax , [email protected], hjemmeside:

5 - 3 - DYREFORSØGSTILSYNET afgiver herved i overensstemmelse med dyreforsøgslovens 14 årsberetning for Denne årsberetning er i vidt omfang opbygget som de tidligere beretninger. Den indeholder dels statistiske oplysninger om antallet af dyr, der er anvendt til forsøg i beretningsåret, og dels en gengivelse af de tilladelser, der er meddelt i Med virkning fra den 1. januar 2003 har Dyreforsøgstilsynet løbende offentliggjort de afgørelser på Internettet, der er truffet af Rådet for Dyreforsøg vedrørende ansøgninger om tilladelse til at udføre dyreforsøg. Afgørelserne og de korresponderende ansøgninger offentliggøres på Dyreforsøgstilsynets hjemmeside: Som følge heraf vil årsberetningen for eftertiden blive udformet på en væsentligt anderledes måde end hidtil. Årsberetningen vil således fremover ikke indeholde en gengivelse af de afgørelser, der i årets løb er truffet vedrørende ansøgninger om tilladelse til at udføre dyreforsøg, da disse allerede er offentliggjort på Dyreforsøgstilsynets hjemmeside, hvortil interesserede henvises. Som nævnt ovenfor har Dyreforsøgstilsynet siden årets begyndelse lagt ansøgninger og tilladelser ud på Internettet. Samtidig hermed har Dyreforsøgstilsynet ændret sine arbejdsmetoder, således, at statistiske indberetninger om forbrug af forsøgsdyr og ansøgninger om tilladelse til dyreforsøg nu kan foregå elektronisk via Dyreforsøgstilsynets hjemmeside. Som følge heraf forventer Dyreforsøgstilsynet, at årsberetningerne fremover vil kunne afgives i foråret det følgende år, hvilket vil være noget tidligere end hidtil. Læseren gøres opmærksom på, at en oversigt over gældende love og bekendtgørelser med relation til dyreforsøg, der gennem årene har stået i årsberetningerne, fremover vil stå som links på Dyreforsøgstilsynets hjemmeside:

6 - 4 - DYREFORSØGSSTATISTIK 2002 Den danske statistik over dyreforsøg afgives hermed efter en opstilling, tabellerne 1-8, som er vedtaget mellem EU-landene med udgangspunkt i et samarbejde herom i Europarådet. Tabellerne 1 8 giver oplysninger om anvendelsen af dyrene, idet det er de overordnede praktiske formål, der er opdelte og angivet som overskrifter over de enkelte kolonner. Statistikken omfatter al aktivitet i beretningsåret, selv om der i vidt omfang er tale om, at forsøgene er udført i henhold til en tilladelse, der er udstedt i tidligere beretningsår. Samlet antal dyr anvendt til forsøgsformål i udvalgte år i perioden Tabel A Antal forsøgsdyr Antal forsøgsdyr excl. hovedsagelig fisk Andre hvirveldyr, hovedsageligt fisk Oversigt over samlet antal udvalgte dyrearter anvendt til laboratorieformål i udvalgte år i perioden Tabel B Hunde Katte Aber Grise Kaniner Mus Rotter

7 - 5 - KOMMENTARER TIL STATISTIKKEN ÅRET 2002 Der er i 2002 er anvendt dyr til forsøg i Danmark. Det er flere dyr end i Dette er en beskeden stigning på 3,6%, som formentlig skyldes tilfældige variationer og en almindelig aktivitetsstigning. Det skal bemærkes, at ca heraf er fisk. Et enkelt tal skal kommenteres, nemlig stigningen i forbruget af dyr anvendt til uddannelse og undervisning. I 2001 blev der anvendt dyr og i til dette formål. Det er en stigning på godt 69% i forhold til Stigningen er sket i forbruget af gnavere og kaniner. Det øgede forbrug skal ses i sammenhæng med, at Justitsministeriet i december 2001 udstedte en bekendtgørelse om kvalifikationskrav til personer, der beskæftiger sig med forsøgsdyr. De øgede uddannelseskrav, som fastsættes heri, og den kursusvirksomhed, som nødvendiggjordes som følge heraf, afspejler sig således i forbruget af forsøgsdyr. Dyreforsøgstilsynet har i forbindelse med indkaldelsen af de statistiske oplysninger for 2002 tillige anmodet om en angivelse af, hvilke og hvor mange af dyrene der var transgene/genmodificerede. Samlet blev det til mus og 20 rotter samt uden for statistikken mus, som er anvendt til in vitro-forsøg.

8 - 6 - Art Tabel 1: Antal benyttede dyr set i forhold til deres oprindelsessted i I alt Dyr fra registrerede opdrætterog leverandørvirksomheder i rapporteringslandet Dyr fra andre EFlande Dyr fra de af Europarådets medlemsstater, som samtidig er parter i ETS 123-konventionen (dog ikke EF-medlemsstater) Dyr af anden oprindelse Genbrugte dyr 1.a. Mus (Mus musculus) b. Rotter (Rattus norvegicus) c. Marsvin (Cavia porcellus) d. Hamstere (Mesocricetus ) e. Andre gnavere (other Rodentia) f. Kaniner (Oryctolagus cuniculus) g. Katte (Felis catus) h. Hunde (Canis familiaris) i. Fritter (Mustela putorius furo) j. Andre rovdyr (other Carnivora) k. Heste, æsler og krydsninger (Equidae) 55 1.l. Svin (Sus) m. Geder (Capra) n. Får (Ovis) o. Kvæg (Bos) p. Halvaber (Prosimia) q. Vestaber (Ceboidea) r. Østaber (Cercopithecoidea) s. Menneskeaber (Hominoidea) t. Andre pattedyr (other Mammalia) 10 1.u. Vagtler (Coturnix coturnix) v. Andre fugle (other Aves) w. Krybdyr (Reptilia) 34 1.x. Padder (Amphibia) y. Fisk (Pisces) I alt Note 1: Spalte 1.5 gælder kun de af Europarådets medlemsstater, som ved rapportperiodens begyndelse er parter i ETS 123-konventionen, som er Europarådets konvention af 18. Marts 1996 om beskyttelse af hvirveldyr til eksperimentelle og andre videnskabelige formål, se fodnoter til tabeller 5 og 6. Dyreforsøgstilsynets sekretariat besvarer om fornødent spørgsmål herom. Note 2: Kun de hvide rubrikker behøves udfyldt Note 3: Antallet af genbrugte dyr i spalte 1.7 lægges ikke til det samlede antal i spalte 1.2 Note 4: Efter bekendtgørelse nr. 332 af 18. Maj 1990, 2, stk. 1, nr. 2 anses dyr, der er avlet i en forsøgsinstitution også som hidhørende fra registrerede opdrætter- og leverandørvirksomheder. De medtages derfor i rubrik 1.3. Note 5: LEVERANDØRER af katte, hunde og alle slags aber anføres her:

9 - 7 - Tabel 2: Antal forsøgsdyr anvendt til angivne formål i Art Grundlæggende biologiske undersøgelser Forskning i og udvikling af produkter og artikler til medicinske, odontologiske og veterinærmedicinske formål (dog ikke toksikologiske og andre sikkerhedsvurderinger, som anføres i spalte 2.6) Fremstilling af og kvalitetskontrol med produkter og artikler til medicinske og odontologiske formål Fremstilling af og kvalitetskontrol med produkter og artikler til veterinærmedicinske formål Toksikologiske og andre sikkerhedsvurderinger (herunder sikkerhedsvurderinger af produkter og artikler til medicinske, odontologiske og veterinærmedicinske formål) Sygdomsdiagnosticering Uddannelse og undervisning 2.a. Mus b. Rotter c. Marsvin d. Hamstere e. Andre gnavere f. Kaniner g. Katte h. Hunde i. Fritter j. Andre rovdyr k. Heste, æsler og krydsninger l. Svin m. Geder n. Får o. Kvæg p. Halvaber q. Vestaber r. Østaber s. Menneskeaber t. Andre pattedyr u. Vagtler v. Andre fugle w. Krybdyr x. Padder y. Fisk I alt Andet I alt

10 - 8 - Tabel 3: Antal dyr anvendt til toksikologiske og andre sikkerhedsvurderinger i Art Produkter/stoffer eller artikler til medicinske, odontologiske og veterinærmedicinske formål Produkter- /stoffer, der benyttes eller hovedsagelig benyttes i landbruget Produkter- /stoffer, der benyttes eller hovedsagelig benyttes i industrien Produkter/stoffer, der benyttes eller hovedsagelig benyttes i husholdningen Produkter/stoffer, der benyttes eller hovedsagelig benyttes til kosmetik eller toiletartikler Produkter/stof-fer, der benyttes eller hovedsagelig benyttes som tilsætningsstof-fer til levnedsmidler Produkter/stoffer, der benyttes eller hovedsagelig benyttes som tilsætningsstoffer til dyrefoder Muligt eller faktisk miljøforurenende stoffer, som ikke forekommer i andre spalter Andre toksikologieller sikkerhedsvurderinger I alt 3.a. Mus b. Rotter c. Marsvin d. Hamstere e. Andre gnavere f. Kaniner g. Katte h. Hunde i. Fritter j. Andre rovdyr k. Heste, æsler og krydsninger l. Svin m. Geder n. Får o. Kvæg p. Halvaber q. Vestaber r. Østaber s. Menneskeaber t. Andre pattedyr u. Vagtler v. Andre fugle w. Krybdyr x. Padder y. Fisk I alt

11 - 9 - Tabel 4: Antal dyr anvendt til forsøg vedrørende sygdomme hos mennesker og dyr i Art Kardiovaskulære sygdomme hos mennesker Menneskelige nerveog sindslidelser Kræft hos mennesker (dog ikke vurdering af carcinogen risiko) Andre sygdomme hos mennesker Undersøgelser af særlige sygdomme hos dyr I alt 4.a. Mus b. Rotter c. Marsvin d. Hamstere e. Andre gnavere f. Kaniner g. Katte h. Hunde i. Fritter j. Andre rovdyr k Heste, æsler og krydsninger l. Svin m. Geder n. Får o. Kvæg p. Halvaber q. Vestaber r. Østaber s. Menneskeaber t. Andre pattedyr u. Vagtler v. Andre fugle w. Krybdyr x. Padder y. Fisk I alt

12 Tabel 5: Antal dyr anvendt i forbindelse med fremstilling og kvalitetskontrol af produkter og artikler til medicinske, odontologiske og veterinærmedicinske formål i Art EF-lovgivning, herunder den Den enkelte EF-medlemsstats Europarådets medlemsstaters Anden Kombinationer af europæiske farmakope lovgivning 1) lovgivning (uden for EF) 2) lovgivning 5.2/ 5.3/ 5.4/ 5.5 (forskrifter) Ingen forskrifter I alt 5.a. Mus b. Rotter c. Marsvin d. Hamstere e. Andre gnavere f. Kaniner g. Katte h. Hunde i. Fritter j. Andre rovdyr k. Heste, æsler og krydsninger l. Svin m. Geder n. Får o. Kvæg p. Halvaber q. Vestaber r. Østaber s. Menneskeaber t. Andre pattedyr u. Vagtler v. Andre fugle w. Krybdyr x. Padder y. Fisk Eksempler: I alt Frankrig foretager afprøvninger efter en særlig UK (eller FR) forskrift. Spalte henviser til den forskrift, ifølge hvilken afprøvningen skal udføres, UK foretager afprøvninger i overensstemmelse med EF s lovgivning. ikke til den instans, som har fastlagt tesmetoden, retningslinjerne eller protokollen Spanien foretager afprøvninger efter en ungarsk forskrift. Eksempel: Sverige foretager afprøvninger efter en særlig amerikansk forskrift. En test, som kræves ifølge fransk lovgivning og udføres i Belgien efter en ISO protokol Tyskland foretager afprøvninger efter en tjekkisk forskrift (som også er en EF-forskrift). skal anføres som national (FR) forskrift og opgives i spalte 5.2 i de tabeller, der indsendes af Belgien. Fodnoter: 1) EF s medlemsstater: Belgien, Danmark, Finland, Det Forenede Kongerige, Frankrig, Grækenland, Irland, Italien, Luxembourg, Nederlandene, Portugal, Spanien, Sverige, Tyskland og Østrig 2) Europarådets medlemsstater (uden for EF):Albanien, Andorra, Bulgarien, Cypern, Estland, Island, Den Tidligere Jugoslaviske Republik Makedonien, Kroatien, Letland, Liechtenstein, Litauen, Malta, Moldova, Norge, Polen, Rumænien, Rusland, San Marino, Schweiz, Slovakiet,Slovenien, Den Tjekkiske Republik, Tyrkiet, Ukraine. Note:

13 Tabel 6: Antal dyr anvendt til toksikologiske og andre sikkerhedsvurderinger i Den enkelte EF-medlemsstats EF-lovgivning, herunder den Europarådets medlemsstaters Anden Kombinationer af Ingen Art I alt lovgivning 1) europæiske farmakope (forskrifter) lovgivning (uden for EF) 2) lovgivning 6.2/ 6.3/ 6.4/ 6.5 forskrifter 6.a. Mus b. Rotter c. Marsvin d. Hamstere e. Andre gnavere f. Kaniner g. Katte h. Hunde i. Fritter j. Andre rovdyr k. Heste, æsler og krydsninger l. Svin m. Geder n. Får o. Kvæg p. Halvaber q. Vestaber r. Østaber s. Menneskeaber t. Andre pattedyr u. Vagtler v. Andre fugle w. Krybdyr x. Padder y. Fisk I alt Eksempler: Note: Frankrig foretager afprøvninger efter en særlig UK (eller FR)forskrift spalte henviser til den forskrift, ifølge hvilken afprøvningen skal udføres, UK foretager afprøvninger i overensstemmelse med EF s lovgivning ikke til den instans, som har fastlagt testmetoden, retningslinjerne eller protokollen Spanien foretager afprøvninger efter en ungarsk forskrift Eksempel: Sverige foretager afprøvninger efter en særlig amerikansk forskrift en test, som kræves ifølge fransk lovgivning og udføres i Belgien efter en ISO protokol Tyskland foretager afprøvninger efter en tjekkisk forskrift skal anføres som national (FR) forskrift og opgives i spalte 6.2 i de tabeller, der ind- Fodnoter: (som også er en EF-forskrift) sendes af Belgien. 1) EF s medlemsstater: Belgien, Danmark, Finland, Det Forenede Kongerige, Frankrig, Grækenland, Irland, Italien, Luxembourg, Nederlandene, Portugal, Spanien, Sverige, Tyskland og Østrig 2) Europarådets medlemsstater (uden for EF):Albanien, Andorra, Bulgarien, Cypern, Estland, Island, Den Tidligere Jugoslaviske Republik Makedonien, Kroatien, Letland, Liechtenstein, Litauen, Malta, Moldova, Norge, Polen,Rumænien, Rusland, San Marino, Schweiz, Slovakiet,Slovenien, Den Tjekkiske Republik, Tyrkiet, Ukraine

14 Tabel 7: Antal dyr anvendt til toksikologiske og andre sikkerhedsvurderinger i 2002 Art Akut og subakut toksicitetstest (herunder grænsetest) LD50, LC50 Andre letale metoder Ikke letale metoder til påvisning af kliniske tegn Reproduktionstoksicitet Hudirritation Hudsensibilisering Øjenirritation Subkronisk og kronisk toksicitet 7.a. Mus b. Rotter c. Marsvin d. Hamstere e. Andre gnavere f. Kaniner g. Katte h. Hunde i. Fritter j. Andre rovdyr k. Heste, æsler og krydsninger l. Svin m. Geder n. Får o. Kvæg p. Halvaber q. Vestaber r. Østaber s. Menneskeaber t. Andre pattedyr u. Vagtler v. Andre fugle w. Krybdyr x. Padder y. Fisk I alt Carcinogenicitet Udviklingstoksicitet Mutagenicitet Toksicitet for akvatiske hvirveldyr, som ikke er medtaget i andre spalter Andet I alt

15 Tabel 8: Antal dyr anvendt til toksikologiske og andre sikkerhedsvurderinger i a 8.b 8.c 8.d 8.e 8.f 8.g 8.h Produkt Produkter/stoffer eller artikler til medicinske, odontologiske og veterinærmedicinske formål Produkter/stoffer,der benyttes eller hovedsagelig benyttes i landbruget Produkter/stoffer der benyttes eller hovedsagelig benyttes i industrien Produkter/stoffer,der benyttes eller hovedsagelig benyttes i husholdningen Produkter/stoffer,der benyttes eller hovedsagelig benyttes mainly til kosmetik eller toiletartikler Produkter/stoffer,der benyttes eller hovedsagelig benyttes som tilsætningsstoffer til levnedsmidler Produkter/stoffer, der benyttes eller hovedsagelig benyttes som tilsætningsstoffer til dyrefoder Muligt eller faktisk miljøforurenende stoffer, som ikke forekommer i andre spalter Akut og subakut toksicitetstest (herunder grænsetest) LD50 LC50 Andre letale metoder Ikke letale metoder til påvisning af kliniske tegn Subkronisk og kronisk toksicitet Reproduktionstoksicitet Hudirritation Hudsensibilisering Øjenirritation Carcinogenicitet Udviklingstoksicitet Mutagenicitet Toksicitet for akvatiske hvirveldyr, som ikke er medtaget i andre spalter Andet I alt 8.j Andre toksikologi- eller sikkerhedsvurderinger I alt

16 DYREFORSØGSTILLADELSER I 2002 Indledende bemærkninger. På de efterfølgende sider gives en oversigt over den af Rådet for Dyreforsøg 2002 tilladte forsøgsaktivitet. Det sker i form af en ordret gengivelse af teksten i de udstedte dyreforsøgstilladelser for så vidt angår det angivne formål og selve forsøgsaktiviteten samt de særlige krav, betingelser, der måtte være stillet for at beskytte dyrene. Ved at gengive teksten ordret undgås de unøjagtigheder eller mangler, der ellers let ville komme, såfremt der blev valgt en redaktionel sammenskrivning. Både udførelsen af forsøgene og dyrenes behandling skal gennemføres under iagttagelse af bestemmelserne i Dyreforsøgsloven og de tilknyttede bekendtgørelser, herunder regler om smertebehandling/respektivt smerteforebyggelse. Der kan således i tilladelsernes tekst være tale om et supplement til lovens generelle regler. Dette er en følge af den vurdering af belastningen af dyrene, som Dyreforsøgstilsynet foretager under ansøgningens behandling, eller som man ved selvsyn skaffer sig konkret viden om ved inspektionerne. Ud over de her publicerede tilladelser kan formanden for Rådet eller den veterinære sekretær ifølge forretningsordenen træffe mindre vidtrækkende afgørelser. Det drejer sig blandt andet om mindre udvidelser af en løbende tilladelse, mindre forlængelser og andre tilføjelser som ikke ændrer afgørende ved tilladelsens oprindelige grundlag. Disse supplerende ændringer er ikke medtaget i årsberetningen. Supplerende tekster. For at bidrage til forståelsen og dermed også give grundlag for en vurdering af den belastning, som forsøgene medfører for dyrene, vil der indledningsvis blive givet en beskrivelse af det mere tekniske underlag for de nævnte tilladelser. Der findes foran hver af de valgte grupper af forsøgstyper en slags beskrivende oversigt, som forhåbentligt skulle lette adgangen til selve teksten i tilladelserne. Dette skulle medføre forbedret offentlig indsigt i det eksperimentelle arbejde, som Dyreforsøgsloven hjemler adgang til at udføre.

17 Det vil fremgå af ordlyden i mange af tilladelserne, at opdelingen i de valgte forsøgstyper, som genfindes i skemaerne for dyreforsøgsstatistikken i et vist omfang, beror på et skøn. En hel del af de undersøgelser eller prøvetagninger, som indgår, kunne lige så vel placeres under en af de andre hovedtyper. Teksten i tilladelserne indeholder indledningsvis en kort angivelse af formålet. Det efterfølges af de rent tekniske beskrivelser og afsluttes med de af Dyreforsøgstilsynet fastlagte rammer for indgrebenes karakter og udstrækning og de forholdsregler, derudover hvad der følger af lovgivningen - skal tages for at begrænse belastningen af dyrene. Dermed er der også angivet grænser for, hvor længe dyrene må udsættes for eller hvor længe forsøget eller det enkelte indgreb må vare. Det må erindres, at tilladelsens hele videnskabelige og tekniske baggrund ofte er at finde detaljeret beskrevet i det supplerende materiale, der har ledsaget selve ansøgningen, for eksempel i form af forsøgsprotokoludkast og metodebeskrivelser. Dette materiale, øger således Rådet for Dyreforsøgs indsigt i en større grad, og repræsenterer derfor en større viden, end det altid vil fremgå af tilladelsernes ordlyd. Ansøgningernes behandling. Gennemgangen af ansøgningsmaterialet sker først ved Dyreforsøgstilsynets veterinære sekretær, der eventuelt selv indhenter supplerende oplysninger, inden materialet forelægges Rådet for Dyreforsøg sammen med et udkast til en forsøgstilladelse. Rådets sammensætning giver grundlag for en bred belysning af det foreliggende materiale med en bedømmelse af den etiske og faglige baggrund for ansøgningen, ansøgerens kvalifikationer og forsøgslokaliteten. Desuden vurderes graden af den belastning som dyrene udsættes for, og virkningen af de foranstaltninger, som forsøgsudøveren skal iagttage til beskyttelse af dyrene. Dyreforsøgstilsynets behandling af ansøgninger resulterer i en del tilfælde i, at tilladelse kun gives til et begrænset antal dyr, fordi man ønsker at få en lejlighed til ved tilbagerapportering efter inspektion at vurdere belastningen og tilstrækkeligheden af de angivne tiltag til beskyttelse. Først derefter gives så en mere omfattende tilladelse, ofte indeholdende modifikationer foreslået på basis af iagttagelserne. Det er efter Dyreforsøgsloven et udgangspunkt, at dyreforsøg kun må udføres, når dyret er lokalt eller universelt bedøvet. Skønnes bedøvelse at være mere belastende for dyret end selve forsøget, kan den undlades. Hvis bedøvelse ikke er mulig, eller er bedøvelse uforenelig med forsøget, skal

18 der anvendes smertestillende midler eller anden lindrende foranstaltning med henblik på, at smerte, lidelse, angst eller varigt men begrænses mest muligt. Dyret må ikke opleve stærk smerte, anden intens lidelse eller intens angst. Hvis tilstanden af stærk smerte, anden intens lidelse eller intens angst må antages at bestå ved bedøvelsens eller den lindrende behandlings ophør, skal dyret aflives. Administrationen af disse bestemmelser er et væsentligt element i behandlingen af tilladelsessager. Ifølge Dyreforsøgsloven 1, stk. 3 kan Dyreforsøgstilsynet afslå at give tilladelse til et dyreforsøg, såfremt forsøget ikke skønnes at være til væsentlig gavn. I Dyreforsøgstilsynets vurderinger indgår derfor også en afvejning af nytten af forsøgene. Om forsøgsdyrs pasning og opstaldning gælder regler i en bekendtgørelse herom i forbindelse med internationale normer. I et mindre antal tilfælde kan den påtænkte aktivitet give anledning til selvstændig overvejelse af, hvorvidt opstaldningsforholdene, såsom burindretning, strøelse, foder og fodringsmåde bør skærpes for at tilgodese dyrenes behov i det konkrete tilfælde. Alternative metoder. Efter Dyreforsøgsloven må der ikke anvendes dyr til forsøg, hvortil anvendelse af celle-, vævs- eller organkulturer eller andre metoder må antages at være lige så velegnede. Dyreforsøgstilsynet har derfor opmærksomheden rettet mod dette forhold i forbindelse med behandlingen af ansøgningerne. Et ansøgt forsøg kan således afvises, hvis de ønskede iagttagelser eller produktioner kan opnås ved hjælp af såkaldte alternative metoder, for eksempel brug af cellekulturer. I forbindelse med visse forsøgstyper for eksempel hud- eller øjenirritationstest er det et krav, at ansøger forud ved brug af alternative metoder har dokumenteret, at det pågældende stof ikke besidder vævsbeskadigende egenskaber. Ligeledes skal cellebeskadigende eller giftige egenskaber ved et stof kendes, inden det for eksempel anvendes i behandlings- eller kontrolforsøg. Dyreforsøgstilsynet følger desuden udviklingen i den videnskabelige disciplin forsøgsdyrskundskab. Det samme er tilfældet for så vidt angår alternative metoder til erstatning for de myndighedskrævede sikkerhedsafprøvninger ved hjælp af dyr. Der har i de seneste årti været udført et stort arbejde i EU-sammenhæng vedrørende udvikling og validering af såkaldte alternative metoder. EU-institutionen ECVAM (European Center for Validation of Alternative Methods) udgiver jævnlig rapporter fra arbejdsgrupper og workshops, der opdaterer udviklingen inden for relevante metodeområder. Dyreforsøgstilsynet følger nøje dette arbejde

19 med henblik på i videst muligt omfang at implementere resultatet af ECVAM s bestræbelser i tilsynets daglige arbejde.

20 A. Adfærds-/stressundersøgelser Omfatter studiet af de dyrs reaktionsmønstre eller opførsel (adfærd), der ændres enten efter ydre påvirkninger eller efter behandling med stoffer, som påvirker funktioner i relevante organer, specielt centralnervesystemet. Er påvirkningerne stærke eller langvarige, kan de resultere i en afsporing af organismens reaktionsmønster - såkaldt stress. Tilstande eller påvirkninger, som udløser en eller flere stress-reaktioner, eller som ændrer dyrenes adfærd, benyttes også i en del af de farmakodynamiske undersøgelser, som er beskrevet samlet i tilladelserne under gruppe E og F. I gruppe A er samlet de få tilladelser, der specifikt har haft til formål at undersøge adfærds- og stressytringer enten ved varige indskrænkninger i dyrets fysiske udfoldelsesmuligheder, indvirkninger fra det omgivende miljø eller længere tids påvirkninger af stoffer med effekt på den hormonale balance eller centralnervesystemet. Ved de mere langvarige indgrebsforløb kan der være tale om en vis belastning af dyrene, men ikke nødvendigvis en tilstand, som kræver særlig behandling. Der tilvejebringes ved disse undersøgelser også oplysninger, der er værdifulde for forståelsen af og nytten ved dyrevelfærd i forbindelse med dyrs anvendelse i biomedicinske, farmakodynamiske og toksikologiske undersøgelser samt ved produktion af animalske produkter. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med det formål at studere edderfuglens adfærd og fysiologi implanteres datalogger intraperitonealt på bedøvede, indfangede, vildtlevende fugle. Dyrene mærkes og udsættes igen i det fri. Efter 1 år indfanges fuglene igen og bedøves, hvorefter dataloggerne fjernes. Efter afsluttet indgreb og opvågning af bedøvelsen sættes dyrene ud i naturen igen. Fuglene observeres dagligt i den første uge postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes indfangede, vildtlevende edderfugle (Somateria mollissima). Med det formål at afprøve en model til kvantitativ måling af dyrs motivationer til at udføre artsspecifikke adfærdsmønstre som metode til at vurdere dyrs velfærd trænes rotter til at trykke på pedal for at opnå vandbelønning. Dyrene får valg mellem smagskorrigeret og destilleret vand. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære denne forsøgsaktivitet, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion.

21 B. Biologiske kontrolundersøgelser Ethvert lægemiddel, der skal anvendes til dyr eller mennesker, skal forinden undersøges for ønskede eller uønskede virkninger. Til dette formål anvendes blandt andet dyreforsøg, der gennemføres efter omfattende afprøvninger på celler eller isolerede organer. De indgreb, der foretages med dette overordnede mål, er for en betragtelig del omtalt og placeret under gruppe E og F, selvom de for en dels vedkommende lige så godt kunne placeres i gruppe B. Der er derfor udvist et vist skøn, inden de nedenfor anførte tilladelser er placeret i denne gruppe. Biologiske kontrolundersøgelser gennemføres efter officielle forskrifter for at undersøge lægemidlers eller andre stoffers virkning på en eller flere funktioner, som bruges som et mål for deres styrke og effektivitet (f.eks. vacciner) eller for at sikre, at der ikke optræder uønskede generelle virkninger for eksempel på blodtrykket eller legemstemperaturen. Denne gruppe undersøgelser har også omfattet kontrol med sikkerheden ved anvendelse af biotekniske materialer, indgreb for udtagelse af blod, befrugtede eller ubefrugtede æg til genteknologiske undersøgelser samt operative indgreb med henblik på at fjerne hormonproducerende organer som forberedelse til den endelige undersøgelse eller for fremkaldelse af forøget blodtryk. De længerevarende (kroniske) forsøg af denne type giver i langt de fleste tilfælde kun anledning til ubetydelige gener for dyrene. Imidlertid vil der under de kortvarige (akutte) indgreb kunne optræde alvorligere gener, især hvis de afprøvede produkter viser sig at være behæftet med fejl. Der er i tilladelsen en angivet pligt til at bringe sådanne tilstande til ophør. Under denne hovedtype er der i beretningsåret ikke udstedt tilladelser. C. Dermatologiske undersøgelse. Omfatter studier af stoffernes optagelse gennem huden eller afprøvning af deres beskyttende effekt overfor skadelige påvirkninger eller deres eventuelle indflydelse på sygelige tilstande i huden. Undersøgelser af denne art kan indebære, at der udtages vævsprøver (biopsier) med henblik på opfølgning af reaktionerne under forløbet. Ethvert operativt indgreb vil blive udført i narkose eller lokalanæstesi, og eventuelle skader på huden som ledsages af smerte, vil være forlangt behandlet effektivt; i visse tilfælde også forebyggende. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg:

22 - 20-1a. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers helbredende effekt på hudsygdommen psoriasis implanteres hud fra psoriasispatient under bedøvelse til SCID-mus. Efter indheling behandles med testlægemiddel lokalt og/eller systemisk. Der skal gives smertelindrende behandling postoperativt. Dyrene observeres i op til 3 måneder, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 1b. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers helbredende effekt på hudsygdommen psoriasis induceres psoriasislignende tilstand i SCID-mus ved intravenøs injektion af hvide blodlegemer fra mus. Efter 3 til 5 ugers observation påbegyndes behandling med teststof oralt og/eller parenteralt. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået dog senest 6 uger efter behandlingens start. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne 1 a og b må anvendes mus. 2. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers helbredende effekt på hudinflammation induceres tilstanden i mus enten ved lokal applikation eller injektion af irritativt stof, ved fodring med magnesium- eller fedtsyrefattigt foder eller ved lokal bestråling med ultraviolet lys. Når tilstrækkelig hudreaktion er opnået, påbegyndes behandling med testlægemiddel ved lokal eller systemisk administration. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter og marsvin. 3. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers helbredende effekt på allergisk betinget hudbetændelse produceres antiserum i mus ved immunisering subkutant eller intraperitonealt med antigen tilsat ovalbumin eller aluminiumhydroxid. Efter ca. 2 uger bedøves musene og totaltappes/aflives. Andre mus bedøves og injiceres intradermalt med det fremstillede antiserum. Efter yderligere 1 til 3 døgn injiceres en opløsning af antigen og Evans Blue intravenøst. Dyrene aflives ½ time senere, og fordelingen af farvestof vurderes. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. D. Ernærings-/stofskifteundersøgelser Denne gruppe vedrører målinger af dyrenes energi- og/eller vækstprocesser og deres afhængighed af de stoffer eller påvirkninger, der ønskes undersøgt f.eks. forekomst af åreforkalkning og knogleskørhed. En del af disse undersøgelser var ikke omfattet af tilladelsespligt ifølge dyreforsøgsloven, før det såkaldte nålestikskriterium blev indført. Forsøgsindgrebene består i doseringer, prøveud-

23 tagninger og opsamlinger af prøver over kortere tid (timer) eller længere tid (dage). I nogle tilfælde forudsættes det, at dyrene holdes i såkaldte metabolismebure eller respirationskamre, hvis størrelse forud er fastlagt. De kan også i narkose have gennemgået forberedende operative indgreb, der er særskilt beskrevet. Dette giver de bedste betingelser for at opnå optimale forsøgsiagttagelser, men det medfører også, at selve håndteringen og prøveudtagningen derved bliver skånsom for dyrene. Studiernes formål kan være en fastlæggelse af de for velfærdet mest optimale fodringsvilkår. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med det formål at undersøge stofskiftet i forbindelse med overvægt og ved vægttab under samtidig behandling med teststof med fremmende eller hæmmende effekt på stofskiftet indgives teststof oralt eller parenteralt samt i nogle tilfælde intraduodenalt eller intracerebroventriculært i rotter, eventuelt ved hjælp af forud for forsøget under bedøvelse implanteret osmotisk minipumpe. I forbindelse med forsøgene anvendes foder med forskelligt indhold af energi og protein. Dyrene fodres med rationer, der maksimalt giver en overvægt til 150% eller et vægttab til 75% af normalvægten. Under forløbet udtages blodprøver ved orbitalpunktur på bedøvede dyr. I forbindelse med undersøgelsen indlægges under bedøvelse permanent-katetre i arterie og vene med henblik på infusion af isotopmærkede metabolitter og teststoffer samt blodprøveudtagning. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt ved behov. Under forsøgene holdes dyrene i op til 7 døgn i metabolismebure, dog undtagelsesvis i op til 15 døgn. Der foretages eventuelt helkropsscanning af dyrene under bedøvelse med henblik på at måle kropssammensætningen. Ved afslutningen af forsøgene bedøves dyrene, og der udtages blod- og vævsprøver til laboratorieundersøgelser. I nogle tilfælde frilægges muskulatur og nerver til bagbenene med henblik på stimulationsog kontraktionsundersøgelser. Dyrene aflives i bedøvelsen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge proteinstofskiftet i forbindelse med overvægt og ved vægttab under samtidig behandling med teststof med fremmende eller hæmmende effekt på stofskiftet indgives teststof oralt eller parenteralt til naturlige eller kastrerede grise, eventuelt ved hjælp af forud for forsøget under bedøvelse implanteret osmotisk minipumpe. I forbindelse med forsøgene anvendes foder med forskelligt indhold af energi og protein. Grisene fodres med rationer, der maksimalt giver en overvægt til 150% eller et vægttab til 75% af normalvægten. Under forløbet udtages blodprøver. I forbindelse med undersøgelsen indlægges under bedøvelse permanent-katetre i central arterie og vene, samt i v.portae, v.hepatica, ductus choledocus, ventrikel og duodenum med henblik på infusion af teststoffer, blodprøveudtagning og målinger. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt ved behov. Under forsøgene holdes dyrene i op til 7 døgn i metabolismebure, dog undtagelsesvis i op til 15 døgn. Der udtages blod-, urin- og vævsprøver til laboratorieundersøgelser. Der foretages eventuelt helkropsscanning af dyrene under bedøvelse med hen-

24 blik på at måle kropssammensætningen. Dyrene aflives i bedøvelsen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes grise. Med det formål at undersøge proteinstofskiftet i forbindelse med overvægt og ved vægttab under samtidig behandling med teststof med fremmende eller hæmmende effekt på stofskiftet indgives teststof oralt eller parenteralt til dyr, eventuelt ved hjælp af forud for forsøget under bedøvelse implanteret osmotisk minipumpe. I forbindelse med forsøgene anvendes foder med forskelligt indhold af energi og protein. Dyrene fodres med rationer, der maksimalt giver en overvægt til 150% eller et vægttab til 75% af normalvægten. Under forløbet udtages blodprøver ved orbitalpunktur på bedøvede dyr. Eventuelt foretages helkropsscanning på bedøvede mus. Under forsøgene holdes dyrene i op til 7 døgn i metabolismebure, dog undtagelsesvis i op til 15 døgn. Dyrene fastes eventuelt i op til 1 døgn forud for forsøgene. Dyrene aflives, så snart forsøgets formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge kvalitative forskelle på karvægssygdom ved kronisk nyresvigt og klassisk åreforkalkning, at afdække årsagen til den accelererede karvægssygdom ved kronisk nyresvigt samt udvikle forebyggende behandlingsmetoder mod karvægssygdom ved kronisk nyresvigt induceres tilstanden i bedøvede mus ved 5/6 nephrectomi udført i to tempi. Grupper af mus med kronisk nyresvigt behandles med AGE hæmmer (Advanced Glycation End-Products). Der udtages blodprøver under forløbet. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene aflives 20 uger efter nephrectomien, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge om niveauet af beta2 adrenoreceptorer (BAR) og BAR-protein i organismen kan påvirkes af fedtindholdet i kosten, fodres grupper af rotter med diæt med højt fedtindhold i op til 4 uger, hvorefter dyrene bedøves, og materiale udtages til videre undersøgelser. Dyrene aflives i bedøvelsen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge fedmes og fedmes følgesygdommes betydning for infarktudviklingen som følge af blodprop i hjertet fodres rotter med normal og fedtrig diæt. Der udtages blodprøver under forløbet. Efter afsluttet diætperiode bedøves rotterne og tilkobles respirator. Der udføres thoracotomi, og a. coronaria sinistra afklemmes temporært i 60 minutter. Efter yderligere 60 minutter aflives dyrene i bedøvelsen, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væ-

25 sentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge absorbtion, metabolisme og deponering af lipider indgives testlipider med sonde i rotter. Efter ca. 5 timers observation bedøves dyrene og totaltappes for blod, hvorefter de decapiteres. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge forskellige fedtstoffers indflydelse på metabolismen af chylomikroner indgives chylomikroner intravenøst til rotter. Forud for undersøgelserne indlægges under bedøvelse permanentkatetre i arterie og vene. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Efter infusion af chylomikron udtages op til 8 blodprøver over 5 timer, hvorefter dyrene aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge aldersbetingede forandringer i antioxidantforsvaret fodres marsvin med normal, antioxidantberiget eller -deficient diæt over længere tid. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. Ved sikre tegn på antioxidantdeficiens, i tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes marsvin. Med det formål at undersøge kostsammensætningens indflydelse på atherosclerose i normale og genmodificerede mus induceres tilstanden ved fodring af mus med diæt med højt kolesterol- og fedtindhold. Grupper af mus behandles enten med humant recombinant SP-D protein eller SD-D gen intravenøst en gang dagligt op til 5 gange. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, eller senest efter 35 dages observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. E. og F. Farmakodynamiske og farmakokinetiske undersøgelser Herved forstås undersøgelser, som skal klarlægge det enkelte lægemiddels virkemåde samt dets optagelse, fordeling, omsætning og udskillelse i den organisme det indgives til.

26 Disse indgreb har ofte som formål at opnå fremskridt indenfor sygdomsdiagnostik og -behandling eller at udvikle forbedrede forsøgsmodeller. De har omfattet mange forskellige dyrearter og har derved også givet oplysninger af værdi for fremtidig valg af den mest egnede dyreart for senere undersøgelser. Derved har de givne tilladelser også understøttet bestræbelserne i retning af reduktion både med hensyn til antal og art af de mere skadevoldende indgreb og bidraget til forbedring eller optimering af teknikker. Dette er også et af lovens overordnede krav, som således i vid udstrækning kommer de anvendte dyr til gode, eller der opnås en reduktion i deres antal. Disse to hovedgrupper kan på grund af ligheden i deres forsøgsteknik og omstændighederne i øvrigt behandles under et. Det vil fremgå af tilladelsernes tekst, at der også indgår målinger af dyrenes adfærd og endda specifikke målinger af deres organfunktioner. Undersøgelserne angår stoffer, der skal benyttes som lægemidler, idet der indgår et såkaldt myndighedskrav samt andre normer (e.g. Helsingfors-deklarationen), der angiver at alle stoffer som agtes anvendt på mennesker eller dyr, på forhånd skal være afprøvet for deres eventuelle gavnlige såvel som skadelige virkninger. Kravene til sådanne undersøgelser vil ofte være specificerede i offentlige forskrifter. Suppleret med oplysninger om den anvendte forsøgsteknik vil disse undersøgelser kunne gøres til genstand for en vidtgående vurdering af de undersøgte stoffers egenskaber og graden af ulempe for dyret. Undersøgelserne sker ofte efter forudgående in vitro undersøgelser, såkaldte alternative undersøgelser, og helst i dyrearter der omsætter stofferne på samme måde som mennesket. Derved har grisen i høj grad erstattet hunden, som ellers tidligere blev meget benyttet til sådanne undersøgelser. Administrationsmåden kan omfatte optagelse fra hud, luftvejene, slimhinder f.eks. i mund, næse, øjne og mave-tarmkanalen. Injektioner kan være subcutane (under huden), intramuskulære (i muskler), intraperitoneale (i bughulen) eller intravasculære (i blodbanen, i arterier eller vener). Udskillelse kan omfatte galde, fæces, urin, mælk eller udåndingsluft. Den kemiske omsætning undersøges tillige for at fastlægge organismens inaktiveringsprocesser og omfatter således også udskillelsen af nedbrydningsprodukter. Dyrene behandles enten akut, det vil sige oftest indenfor 6-8 timer eller kronisk, det vil sige over mere end ét døgn, i uger eller sjældne tilfælde måneder. Dyrene kan være forbehandlede f.eks. ved fremkaldelse af lokal betændelse, ændrede metaboliske, adfærdsmæssige eller nervøse funktioner overfor hvilke, teststofferne ønskes afprøvet. I andre tilfælde er undersøgelsen tilrettelagt som en afprøvning af stoffets forebyggende effekt. Det siger sig selv, at de patologiske eller unormale tilstande da vil være udviklet i en periode forud for den egentlige undersøgelse. Der vil derved kunne blive tale om en kombination af kroniske og/eller akutte tilstande. Tilladelserne er dog i alle tilfælde formuleret således, at den ansvarlige forsøgsleder skal afbryde forsøgene, så snart de ønskede

27 iagttagelser er gjort, og uden at dyrene udsættes for lidelser. Smerte og/eller lidelse har i alle tilfælde været forlangt forebygget eller behandlet med smertestillende midler, og de utilsigtede tilstande er forlangt bragt til ophør ved aflivning af dyrene uden hensyn til, om dette vil unyttiggøre forsøget. Den overordnede målsætning for de indgreb, der er placeret i disse to grupper, har været at få oplysninger om virkningen af eller skæbnen for de stoffer, der er undersøgt, således som de måtte fremkomme i dyrene efter anvendelse af kliniske doser, enten ved kortvarig eller længerevarende dosering. Det er derfor klart, at der i en del tilladelser indgår et element, der omfatter dyrenes forudgående eller ledsagende behandling. Nedenstående liste angiver de vigtigste tilstande, formål eller funktioner, som indgrebene har haft: Akutte tilstande Blodets og kredsløbsorganernes funktioner. Muskel-, lever- og nyrefunktioner. Centralnervesystemet og de perifere nerver via studier af adfærd, eller ved smerte- og krampefremkaldelse og afprøvninger med henblik på behandling eller forebyggelse af disse tilstande. Farmakologiske sideeffekter (undtagen specifikke toksikologiske). Styrkebestemmelse for specifikke virkninger ved dosis-respons målinger. Udskillelse af stoffet og/eller dets nedbrydningsprodukter eller dets nedbrydning i isolerede organer eller vævsceller udtaget fra dyr i anæstesi. Stoffets indflydelse på en eller flere indlærte eller medfødte funktioner eller evner. Kroniske tilstande Effekten på generelle organfunktioner såsom vækst, stofskifte og blodkoagulation.. Effekten på specifikke og i visse tilfælde isolerede organfunktioner. Effekten på sårheling, almene betændelsestilstande, allergier, eller sygdomskomplikationer f.eks. ved sukkersyge (diabetes). Stoffernes omsætning og ophobning i organismen samt sideeffekter på andre stofomsætninger for eksempel alkohol. Forberedelse til andre undersøgelser for eksempel indlæggelse af kateter, sonde, mikropumpe eller fjernelse af visse organer. Det skal påpeges, at man ved udførelsen af disse indgreb i intet tilfælde har tilstræbt at etablere en tilstand, hvor det er stoffernes skadelige virkning, der er ønsket undersøgt. Der er ikke opretholdt

28 en smertetilstand og optrådt akutte smerter, uden at disse er behandlet adækvat eller bragt til ophør ved aflivning. Det vil desuden fremgå af tilladelsernes tekst, at mange kunne være henført til gruppen "Organfunktioner" eller gruppen "Adfærd". Dette viser, hvor vanskeligt det kan være at katalogisere de dyreforsøg, hvori der indgår mange observationsparametre. Det beror derfor i nogle tilfælde på et skøn, under hvilken overskrift tilladelsen placeres. Under disse to hovedtyper er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med det formål at undersøge om aldosteron-hæmmere påvirker udviklingen af marginal parodontitis induceres tilstanden i rotter ved anbringelse af en silkeligatur omkring tandhalsen på molarer i overkæben eller ved injektion af lipopolysaccarid i gingiva omkring molarer i overkæben. Dyrene behandles med teststof oralt eller intraperitonealt. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal være bedøvede og smertebehandlede i nødvendigt omfang i forbindelse med indgrebene. For at undgå nedbidning af faste emner (strøelse) mellem tænder og tandkød må dyrene holdes på trådbund under forløbet, dog skal det i forbindelse med de indledende forsøg sideløbende undersøges, om miljøberigende foranstaltninger skjul af fast materiale kan introduceres i burene uden, at det interfererer med forsøgsresultaterne. Dyrene observeres i op til 4 uger, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at foretage farmakodynamiske og -kinetiske undersøgelser i forbindelse med udvikling af lægemidler til behandling af diabetes mellitus indlægges permanente katetre i kar på bedøvede dyr med henblik på infusion og prøveudtagning. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt efter behov. Teststof indgives oralt eller parenteralt. Dyrene fodres eventuelt med fedtrigt foder over længere tid med henblik på at udvikle en dyreeksperimentel model for fedme og type II diabetes. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise. Med det formål at fremskaffe diabetiske grise til farmakodynamiske og -kinetiske undersøgelser i forbindelse med udvikling af lægemidler til behandling af diabetes mellitus indlægges permanente katetre i kar på bedøvede dyr med henblik på infusion og prøveudtagning. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt efter behov. Dyrene får induceret diabetes mellitus ved intravenøs dosering af diabetogent stof, eventuelt i kombination med nikotinamid, og skal i de første 2 døgn herefter være under særlig intens overvågning. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise.

29 Med det formål at foretage farmakodynamiske og -kinetiske undersøgelser i forbindelse med udvikling af lægemidler til behandling af diabetes mellitus indlægges permanente katetre i v.jugularis externa og v.portae på bedøvede grise med henblik på infusion og prøveudtagning. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt efter behov. Testlægemidlet indgives oralt eller parenteralt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise. Med det formål at undersøge fordelingen af lægemiddel fra blod til lymfe indlægges katetre i vena jugularis og lymfegang (Truncus intestinalis) på bedøvede grise med henblik på infusion og prøveudtagning. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt efter behov. I akutte forsøg gennemføres undersøgelsen med testlægemiddel på bedøvede dyr over 8 timer, hvorefter dyrene aflives i bedøvelsen. Ved kroniske forsøg observeres dyrene i op til 3 uger, og der gennemføres undersøgelse 1 gang om ugen med testlægemiddel. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers optagelse gennem lungerne indlægges permanent kateter i vene på bedøvede grise med henblik på infusion og prøveudtagning. Efterfølgende bedøves grisene igen og tracheal intuberes. Nebulisator med testlægemiddel kobles til tubus i 5 minutter. Subsidiært foretages tracheostomi i samme bedøvelse som ved kateteriseringen, og tracheostomi-tubus monteres. Nebulisator kobles til tubus i forbindelse med forsøgene. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt efter behov. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers optagelse gennem lungerne foretages tracheostomi og indlæggelse af tracheostomi-tubus på bedøvede hunde med henblik på senere tilkobling af nebulisator. Subsidiært trænes hunde til at respirere gennem maske, der i forsøgssituationen kan tilkobles nebulisator. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt efter behov. I forbindelse med forsøgene indlægges katetre i perifere vener med henblik på infusion og prøveudtagning. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes hunde. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på diabetes mellitus indgives testlægemiddel oralt eller parenteralt ved enkelt eller gentagen dosering til normale og diabetiske dyr. Ved enkelt dosering observeres dyrene fra 4 til 48 timer, og der udtages op til 10 blodprøver un-

30 der forløbet. Ved gentagen dosering observeres dyrene i op til 2 måneder, og der udtages serier på 10 blodprøver 1 gang om ugen under forløbet. Dyrene fodres eventuelt med fedtrig diæt med henblik på at inducere fedme. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på behandling og forebyggelse af diabetes mellitus indgives teststof oralt eller parenteralt i mus eller rotter. I forbindelse med undersøgelsen indlægges under bedøvelse permanente katetre i arterie og vene til infusion og prøveudtagning. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt efter behov. Eventuelt fodres dyrene med fedtrig diæt med henblik på at inducere fedme. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at fremskaffe diabetiske dyr til farmakodynamiske og kinetiske undersøgelser med henblik på senere anvendelse ved udvikling af lægemidler mod diabetes mellitus gøres dyr diabetiske ved intravenøs injektion af streptozotocin eller alloxan, eventuelt i kombination med nikotinamid. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge om et teststof med hæmmende effekt på leucocytters adhæsionsevne på endotheliale overflader kan forebygge udviklingen af kapillær okklusion ved diabetisk retinopathi, indgives teststof subcutant 3 gange ugentligt i 6 måneder til insulinbehandlede diabetiske BB-rotter. Der udtages blodprøver under forløbet til kontrol af blodsukkerkoncentrationen. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge forskellige psykofarmakas og andre neuroaktive stoffers effekt over for depression og angst indgives teststof oralt eller parenteralt i rotter. Eventuelt implanteres en osmotisk minipumpe subcutant med henblik på kontinuerlig dosering. I nogle tilfælde indlægges mikrodialyseprobe via guidekanyle til specifikt område i hjernen. Efterfølgende registreres effekten ved forskellige adfærdstests. Dyrene skal være bedøvede og behandles med smertestillende medicin i forbindelse med de operative indgreb. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter.

31 Med det formål at undersøge forskellige psykofarmakas farmakokinetiske effekt indgives teststof oralt eller parenteralt i rotter. Eventuelt implanteres en osmotisk minipumpe subcutant med henblik på kontinuerlig dosering. Forud for undersøgelserne indopereres katetre i kar og guidekanyle via craniotomi til specifikt område af hjernen til indføring af kateter eller dialyseprobe. Dyrene skal være bedøvede og smertebehandlede i forbindelse med de operative indgreb. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge psykofarmakas og andre neuroaktive stoffers farmakodynamiske effekt indgives teststof oralt eller parenteralt i rotter. Eventuelt implanteres en osmotisk minipumpe subcutant med henblik på kontinuerlig dosering. Forud for undersøgelserne indopereres katetre i kar og guidekanyle til specifikt område i hjernen. Eventuelt indlægges dialyseprobe i hjernen eller til andre organsystemer. Dyrene skal være bedøvede og smertebehandlede i forbindelse med de operative indgreb, og de skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på kroniske inflammationssygdomme indgives teststof oralt eller parenteralt ved enkelt eller gentagen dosering i mus eller rotter, som har fået induceret lokal inflammatorisk tilstand ved injektion subcutant i pote af en lille mængde irritant (carrageenin, zymosan, capsaicin, biologisk aktive proteiner eller lignende). I nogle tilfælde undersøges teststoffers effekt på angiogenesen. Til dette formål dannes en bindevævsmembran ved insufflation af små mængder luft (op til 3 ml. i mus og 8 ml. i rotter) subcutant på ryggen af bedøvede dyr, og irritant injiceres, efter at membranen er dannet på overfladen af denne. I andre dyr implanteres ligeledes under bedøvelse matrigel eller bomuldskugle med samme formål. Med henblik på at undersøge effekten på inflammationscellerekruttering injiceres irritant (casein eller thioglycol) intraperitonealt. Disse dyr observeres i 2 døgn, hvorefter de aflives, og celler fra peritoneum isoleres. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på kroniske inflammationssygdomme indgives teststof oralt eller parenteralt ved enkelt eller gentagen dosering i naturlige og genetisk modificerede mus, som har fået induceret arthritis ved intradermal injektion af en emulsion af collagen og Freunds complette adjuvans. Dyrene aflives, så snart forsøgets formål er opnået, senest ved score 10. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus.

32 Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på forskellige organfunktioner indlægges katetre under bedøvelse i kar, udførselsgange og/eller organer med henblik på infusion, prøveopsamling og målinger. Endvidere gennemføres iskæmi-reperfusionssstudier ved afklemning af tilførende kar til organer. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på skader efter hjerneiskæmi bedøves rotter, den ene a. carotis communis frilægges, og en stilet føres via karret til a. cerebri media med henblik på okklusion Efter 1-2 timer ophæves okklusionen, og dyrene observeres i op til 48 timer. Der skal gives smertestillende behandling ved behov. Efter endt observationstid bedøves dyrene igen og perfusionfikseres/aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at belyse forhold med betydning for udvikling og behandling af atherosclerose og trombedannelser undersøges tilstanden i genmodificerede mus, der spontant udvikler atherosclerose, eller i mus, som får tilstanden induceret ved fodring med fedtrig diæt. Teststof indgives dagligt oralt eller parenteralt. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge metylendioxymetamfetamins (MDMA) effekt på hjernens serotoninsystem behandles bedøvede fritter hver tredje uge med MDMA peroralt eller eventuelt intravenøst. Med henblik på bestemmelse af MDMA s halveringstid udtages en serie blodprøver. Dyrene bedøves og PET- og MR-scannes under forløbet. Der indlægges katetre i femoralkar i forbindelse med scanningerne. Der skal gives smertestillende behandling ved behov. Dyrene observeres i op til 6 måneder, hvorefter de igen bedøves og perfusionsfikseres/aflives. Materiale udtages herefter til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes fritter. Med det formål at undersøge teststoffer med effekt på receptorer og transport af proteiner i hjernen og andre organer indgives teststof oralt eller parenteralt. Forud herfor indlægges under bedøvelse katetre i kar og urinblære og/eller guidekanyle til specifikt område i hjernen med henblik på infusion, prøveopsamling og målinger. Med henblik på kontinuerlig administration af teststof indlægges subcutant under bedøvelse osmotisk minipumpe. Dyrene skal behandles med smertestillende medicin postoperativt. Dyrene aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale

33 udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. De kirurgiske indgreb skal foretages af en person med fornøden anæstesiologisk og kirurgisk indsigt og erfaring. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers farmakokinetiske effekt indgives testlægemiddel oralt, parenteralt eller eventuelt direkte i duodenum ved enkel eller gentagen dosering i op til 14 dage. Med henblik på infusion, prøveudtagninger og målinger kan der foretages følgende faciliterende indgreb i rotter under bedøvelse: a) Indlæggelse af permanente katetre i perifere kar. b) Indlæggelse af permanente katetre i v.v. renalis, portae og cava caudalis c) Indlæggelse af permanente katetre i ductus choledochus, cisterna chyli, duodenum og vesica urinaria. Dyrene skal behandles med smertestillende medicin postoperativt ved behov. Der udtages blodprøver under forløbet. Eventuelt anbringes dyrene i op til 1 uge i metabolismebure med henblik på opsamling af urin og fæces. I nogle tilfælde fastes og/eller tørstes dyrene i op til 24 timer forud for dosering. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge teststoffers evne til at påvirke dannelsen af specifikke proteiner indgives teststof oralt eller parenteralt i dyr ved enkelt eller gentagen dosering i op til 4 uger. Der udtages blodprøver under forløbet eller i tilslutning til aflivninger. Der indlægges under bedøvelse permanente katetre i kar med henblik på infusion, prøveudtagning og målinger. Eventuelt fastes og tørstes dyrene i op til 24 timer forud for doseringen. Med henblik på at undersøge teststoffer rettet mod protein injiceres dyrene subcutant med en lille mængde terpentin med henblik på at fremkalde akut fase-respons. Der skal behandles med smertestillende medicin postoperativt. Ved forsøgenes afslutning bedøves dyrene, og der udtages eventuelt vævsprøver, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge teststoffers effekt på konfliktadfærd indgives teststof oralt eller parenteralt i mus. Dyrene foderdepriveres forud for adfærdstesten. Der er fri adgang til vand under hele forløbet. Musene testes i open field angst-/konfliktmodel og aflives umiddelbart herefter. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus.

34 Med det formål at undersøge teststoffers effekt på kognitiv- og konfliktadfærd indgives teststof oralt eller parenteralt i rotter. Dyrene foderdepriveres ned til 85% af normalvægt og trænes i kognitionsmodeller i forbindelse med undersøgelserne. Dyrene har fri adgang til vand under hele forløbet. Dyrene observeres i op til 1 år, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge teststoffer for antipsykotisk effekt indgives teststof alene eller sammen med psykotomimetisk stof oralt eller parenteralt til dyr. Efterfølgende testes dyrene i Pre- Pulse Inhibition Test, f.eks. stimulation med lyd. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge teststoffers angsthæmmende effekt indgives teststof oralt eller parenteralt i dyr. Efterfølgende testes dyrene i Fear-potentiated-startle Test, f.eks. stimulation med lyd. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge forskellige psykofarmakas effekt over for depression og angst indgives teststof oralt eller parenteralt i rotter. Eventuelt implanteres en osmotisk minipumpe subcutant med henblik på kontinuerlig dosering. I nogle tilfælde indlægges mikrodialyseprobe via guidekanyle til specifikt område i hjernen. Efterfølgende registreres effekten ved forskellige adfærdstests. Dyrene skal være bedøvede og behandles med smertestillende medicin i forbindelse med de operative indgreb. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge psykofarmakas og andre neuroaktive stoffers farmakodynamiske effekt indgives teststof oralt eller parenteralt i rotter. Eventuelt implanteres en osmotisk minipumpe subcutant med henblik på kontinuerlig dosering. Forud for undersøgelserne indopereres katetre i kar og guidekanyle til dialyseprobe til specifikt område i hjernen. Eventuelt dialyseprobe/kateter til andre organsystemer. Dyrene skal være bedøvede og smertebehandlede i forbindelse med de operative indgreb, og de skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives.

35 Med det formål at undersøge forskellige psykofarmakas farmakokinetiske effekt indgives teststof oralt eller parenteralt i rotter. Eventuelt implanteres en osmotisk minipumpe subcutant med henblik på kontinuerlig dosering. Forud for undersøgelserne indopereres katetre i kar og guidekanyle via craniotomi til specifikt område af hjernen til indføring af kateter eller dialyseprobe. Dyrene skal være bedøvede og smertebehandlede i forbindelse med de operative indgreb. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge teststoffers hæmmende effekt på degenerative processer i knogle- og bruskvæv indgives teststof oralt eller subcutant dagligt i perioder på 4 til 12 uger til normale og under bedøvelse gonadektomerede mus og rotter. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Musene anbringes i metabolismebure i op til 1 døgn med henblik på opsamling af urin. Der indgives radioaktivt mærket sporstof med henblik på kvantificering af nydannet bruskvæv. Dyrene observeres i op til 24 uger, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge teststoffers hæmmende effekt på degenerative processer i knogle- og bruskvæv indgives teststof oralt eller subcutant dagligt i perioder fra 3 til 5 måneder til normale og genmodificerede mus. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Musene anbringes i metabolismebure i op til 1 døgn med henblik på opsamling af urin. Der indgives eventuelt radioaktivt mærket sporstof med henblik på kvantificering af nydannet bruskvæv. Dyrene observeres i op til 5 måneder, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge teststoffers hæmmende effekt på degenerative processer i knogle- og bruskvæv indgives teststof oralt eller parenteralt dagligt i perioder fra 3 til 6 uger til rotter, der under bedøvelse er påført en mindre læsion i den ene mediale menisk med henblik på induktion af akut osteoarthritis. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Dyrene observeres i op til 6 uger efter påbegyndt behandling, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge teststoffers hæmmende effekt på degenerative processer i knogle- og bruskvæv indgives teststof oralt eller parenteralt dagligt i perioder på 14 til 22 dage til mus og

36 rotter, der har fået induceret reumatoid arthritis. Med henblik på induktion af akut arthritis i dyrene injiceres bovin- eller rottecollagen type II opløst 1:1 i Freunds incomplette adjuvans (rotter)/com-plette adjuvans (mus) intradermalt i haleroden dag 0 og eventuelt dag 7 (rotter)/dag 16 eller 21 (mus). Med henblik på induktion af kronisk arthritis injiceres Pristane intradermalt i haleroden dag 0. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Musene anbringes i metabolismebure i op til 1 døgn med henblik på opsamling af urin. Der indgives radioaktivt mærket sporstof med henblik på kvantificering af nydannet bruskvæv. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, dog senest ved begyndende affectioner af forpoter (score 10). I tilfælde af betydelig belastning som følge af arthritis, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge patogenesen ved og afprøve teststoffer med effekt på dissemineret sclerose induceres encephalomyelitis i mus eller rotter ved at injicere forskellige nervevævssubstanser blandet 1:1 med Freunds incomplette adjuvans tilsat mycobakterium-komponent i mus eventuelt tillige pertussis toxin intraperitonealt. Teststof indgives oralt eller subcutant dagligt i op til 5 u-ger. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Dyrene observeres i op til 5 uger, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge teststoffers vækstfremmende hormoneffekt indgives teststof 2 gange dagligt til hypofysektomerede rotter. Dyrene observeres i op til 9 dage, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge om hypoxi opregulerer calcitonin gen-relaterede peptid-receptorer i koronararterier, eksponeres rotter for en ilttension på ca. halvdelen af atmosfærisk luft i op til 3 timer. Dyrene skal tilses jævnligt under forløbet. Dyrene aflives umiddelbart efter eksponeringen, og materiale udtages til in vitro forsøg. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge effekten af testantibiotikum på naturlig infektion i grise med Lavasonia intracellularis behandles grupper af dyr s med testantibiotikum og andre med placebo. Effekten observeres efterfølgende. Kontroldyrene skal aflives så tidligt i forløbet som muligt. I tilfælde af dehydrering, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives.

37 Hertil må anvendes grise. Med det formål at undersøge teststoffer med effekt på glucoseomsætningen og glucosekoncentrationen i blodet indgives teststof oralt, parenteralt, nasalt eller pulmonalt i grise. Ved forsøgenes start ilægges under bedøvelse permanent kateter i v. jugularis externa via ørevene med henblik på infusion og prøveudtagning. Dyrene fastes 24 timer forud for forsøgene. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise. Med det formål at undersøge teststoffers absorption fra subcutant depot indgives isotopmærket stof subcutant i grise, og absorptionen følges ved hjælp af gamma-tæller. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise. Med det formål at undersøge teststoffers/formuleringers eventuelle vævsbeskadigende effekt indgives teststoffer/formuleringer under bedøvelse dermalt eller subcutant i grise. Efter endt observationstid aflives dyrene, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise. a. Med det formål at undersøge de fysiologiske effekter af forskellige anæstesimidler bedøves dyr og monitoreres i kortere eller længere perioder ved udtagning af blodprøver, måling af blodtryk o. a. Dyrene aflives i bedøvelsen. b. Med det formål at undersøge og udvikle metoder til rygmarvsbedøvelse indlægges på sederet eller bedøvet dyr permanentkateter i rygmarvskanalen med henblik på applikation af testanæstesimiddel. Dyrene monitoreres med henblik på smerteopfattelse, puls og respiration i forbindelse med undersøgelserne. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkt a og b må anvendes mus, rotter og kaniner. a. Med det formål at undersøge teststoffers farmakodynamiske effekt indgives teststof parenteralt til bedøvede dyr. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene aflives i bedøvelsen.

38 b. Med det formål at undersøge teststoffers farmakodynamiske effekt indgives teststof oralt eller parenteralt til dyr. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal i nødvendigt omfang være bedøvede under dosering og behandles med smertestillende middel ved behov. Dyrenes skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne a og b må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge vækstfaktorers effekt på karudviklingen samt knogle- og bindevævsdannelse efter operative indgreb påføres bedøvede dyr standardiserede læsioner i enten hud, slimhinde, knoglevæv eller karvæg. Under forløbet administreres vækstfremmende eller hæmmende faktor lokalt som injektion eller kontinuerligt ved hjælp af osmotisk minipumpe, ved subcutan implantation af vækstfaktor-producerende tumorceller eller ved subcutant implanteret vævsmatrixsvamp imbiberet med vækstfremmende eller hæmmende faktor. Dyrene observeres i op til 2 uger. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter, kaniner, grise og geder. Med det formål at undersøge effekten af behandling med Gc-globulin ved akut leversvigt induceres tilstanden i rotter ved intraperitoneal indgift af acetaminophen. Der behandles 4 gange dagligt i 3 dage med Gc-globulin. Kontrolgruppen behandles med buffer. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene aflives efter 5 døgns observation, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære denne forsøgsaktivitet, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge NCAM-mimetikas normaliserende effekt på skizofreni induceres en skizofrenilignende tilstand i rotteunger ved under bedøvelse at påføre dyrene bilateral læsion i den centrale del af hippocampus ved hjælp af stereotaktisk teknik. Teststoffer indgives under bedøvelse i cisterna magna, ved intranasal application eller subcutant, eventuelt ved hjælp af under bedøvelse indlagt osmotisk minipumpe. I forbindelse med undersøgelserne gennemføres forskellige adfærdstests. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, dog senest efter 4 måneders observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives.

39 Med det formål at undersøge NCAM-mimetikas normaliserende effekt på skizofreni induceres en skizofrenilignende tilstand i rotteunger ved subcutan behandling af dyrene på postnatal dag 7, 9 og 11 med phencyclidin.teststoffer indgives under bedøvelse i cisterna magna eller subcutant, eventuelt ved hjælp af under bedøvelse indlagt osmotisk minipumpe. I forbindelse med undersøgelserne gennemføres forskellige adfærdstests. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, dog senest efter 4 måneders observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteterne i punkt 1 og 2, hvorfor De i god tid inden forsøgenes start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. I forbindelse med de stereotaktiske indgreb må der ved overlevelsesforsøg kun anvendes stumpe fiksationspinde i øregangen. Med det formål at undersøge lægemidler, der kan være migrænefremkaldende hos patienter, for effekt på hjertekarsystemet indlægges permanent-katetre i a.carotis communis og i v. jugularis externa på bedøvede rotter. Dyrene skal behandles med smertestillende medicin postoperativt. Efter ca. 1 uge anbringes dyrene i restrainer, og katetre forbindes henholdsvis til trykmåler og infusionspumpe. Testlægemiddel infunderes i klinisk relevante doser over 30 minutter. Dyrene observeres i op til 10 timer efter infusionens ophør, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge frigivelsen af tracerstof fra lipidbaserede drug delivery systemer efter parenteral administration indgives testformulering i kanin. Der udtages en serie blodprøver i de efterfølgende 3 døgn. Undersøgelsen gentages 3 gange med mindst 2 ugers mellemrum med forskellige formuleringer. Dyrene aflives efter sidste undersøgelse. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes kaniner. Med det formål at undersøge lipidholdige farmaceutiske formuleringers effekt på den portale biotilgængelighed og den lymfatiske transport af tungtopløselige lægemiddelstoffer efter oral eller intravenøs indgift samt at undersøge lipiders betydning for ændringer i lægemidlers systemiske metabolisme indlægges permanente katetre under bedøvelse i a. carotes communis, v. jugularis externa og mesenterial lymfegang med henblik på prøveopsamlinger og infusion. Dyrene skal behandles med smertestillende medicin postoperativt. Efter 1 døgn indgives testformulering, og blod- og lymfeprøver opsamles over de følgende 30 timer, hvorefter dyrene aflives. I tilfælde af

40 væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteterne, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. a. Med det formål at undersøge registrerede og potentielle lægemidlers farmakokinetik bedøves aber, og katetre indlægges i kar med henblik på prøveudtagning, infusion og målinger. Med henblik på monitorering af hjernens koncentration af lægemidler, sporstoffer eller endogene metabolitter anlægges i nogle tilfælde borehuller i kraniet til indføring af tryktransducer, mikrodialyseudstyr og lignende. Der indgives testlægemiddel parenteralt og udtages blod- og urinprøver samt eventuelt mikrodialysevæske. Endvidere gennemføres PET-, MR- eller SPECT-scanning. Dyrene aflives i bedøvelsen. b. Med det formål at undersøge registrerede og potentielle lægemidlers farmakokinetik indgives radioaktivt teststof og/eller sporstof oralt eller parenteralt i aber. I forbindelse med undersøgelserne udtages under bedøvelse venøse og arterielle blodprøver percutant eller via indlagte katetre. Der skal gives smertestillende behandling ved behov. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes vestaber (Ceboidea). Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge testlægemidlers fordeling i hjernen ingives radioaktivt mærket teststof og eventuelt receptormodulerende ligander oralt eller parenteralt i rotter. Intravenøs indgift foregår eventuelt via forud for forsøget under bedøvelse indlagt venekateter. Dyrene observeres i op til 12 timer, hvorefter de bedøves og perfusionsfikseres/aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge testfarmakas effekt på hjernens stofskifte, gennemblødning og/eller receptorforhold indgives radioaktivt mærket teststof oralt eller parenteralt en eller flere gange daglig i op til 12 uger. Eventuelt indgives teststof kontinuerligt ved hjælp af under bedøvelse implanteret osmotisk minipumpe. I nogle tilfælde indgives receptormodulerende ligander. Dyrene

41 skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge testfarmakas effekt på autoregulationen af hjernens blodcirkulation, stofskifte og recepterforhold indlægges på bedøvede rotter katetre i kar med henblik på infusion, prøveudtagning og målinger. Endvidere indlægges gennem borehul i kraniet et kateter i sinus confluens samt mikrodialysekateter eller måleprobe i hjernen. Ved hjælp af stereotaktisk udstyr indlægges guidekanyle til specifikt område af hjernen med henblik på læsion af hjernevæv med teststof eller farmakologisk aktive stoffer. Under forsøget reguleres blodtrykket farmakologisk ved regulering af CO2-tensionen eller ved reduktion af blodvolumen. Dyrene perfusionsfikseres/aflives i bedøvelsen. I forbindelse med de stereotaktiske indgreb må der ved overlevelsesforsøg kun anvendes stumpe fiksationspinde i øregangen. Med det formål at undersøge teststoffers farmakokinetik indgives teststof ved enkel eller gentagen dosering oralt eller parenteralt til dyr. I forbindelse med undersøgelserne indlægges katetre i arterie, vene, urinblæren og/eller duodenum/galdegang med henblik på infusioner, prøveudtagninger og målinger. På enkelte grupper af dyr indlægges katetre under bedøvelse i lymfe- og blodkar samt eventuelt duodenum med henblik på målinger, prøveudtagning og dosering. Disse dyr skal være bedøvede under hele forløbet og aflives i bedøvelsen. Dyrene skal være bedøvede i forbindelse med de invasive indgreb og behandles med smertestillende medicin ved behov. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene anbringes i perioder på op til 48 timer i metabolismebure med henblik på opsamling af prøver. I nogle tilfælde unddrages dyrene foder og/eller vand i op til 16 timer. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers optagelse og transport gennem lymfesystemet indgives teststof peroralt til rotter. Efter en time bedøves dyrene, og cisterna chyli kateteriseres. Lymfe opsamles herefter i op til 5 timer, hvorefter dyrene aflives i bedøvelsen. Med det formål at undersøge teststoffers effekt på operationel adfærd trænes mus heri ved at udsættes for mild elektrisk stimulation gennem drikkenippel. I forbindelse hermed unddrages musene vand i perioder på op til 24 timer. I nogle tilfælde unddrages dyrene vand i 2 x 24 timer adskilt med en periode på 30 minutter med fri adgang til vand. Ved gentagelse må dette kun ske en gang om ugen.teststof indgives oralt, parenteralt eller cerebroventrikulært før eller efter træningen i

42 operationel adfærd. I forbindelse hermed registreres dyrenes cognitive funktions-/angsttilstand. Dyrene skal være analgeserede/anæsteserede i fornødent omfang i forbindelse med dosering. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, dog senest efter 6 måneders observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære denne forsøgsaktivitet, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på inflammatoriske smerter induceres inflammation i rotter ved injektion af højst 2,5% formalin i overlæben. Dyrenes adfærdsmæssige respons vurderes efterfølgende. Teststof indgives oralt eller parenteralt forud for injektionen af formalin. Dyrene aflives senest 1 time herefter. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med henblik på undersøgelse af potentielt lægemiddels beskyttende effekt på hjerneskader i forbindelse med status epilepticus anbringes afledningselektroder på hjernen på bedøvede rotter. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Status epilepticus induceres efterfølgende ved subcutan injektion med kainsyre. Efter 2 timeres observation indgives teststof parenteralt, og dyrene observeres i yderligere 2 timer, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge fedtholdige farmaceutiske formuleringers betydning for absorption af lægemiddelstof til lymfe- og blodbaner indlægges på bedøvede rotter permanent kateter i truncus intestinalis og a. carotis communis med henblik på lymfeopsamling og blodprøveudtagning. Dyrene skal behandles med smertestillende lægemiddel postoperativt. Efter ca. 1 døgn indgives testformulering per os med sonde. Opsamling af lymfe foretages herefter over 12 timer og blodprøver over 24 timer, hvorefter dyrene aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge teststoffer med mulig effekt på Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) indopereres telemetrisk udstyr og permanent-kateter i rotter med henblik på måling af fysiologiske parametre og prøveudtagning. Dyrene udsættes for standardiserende stressfaktorer som socialt nederlag, fiksering, svømning eller visuel rovdyrkontakt en eller flere gange med henblik på at inducere PTSD. Efterfølgende behandles med teststof, og dyrene udsættes for mil-

43 dere stressfaktor. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers smertehæmmende effekt behandles rotter parenteralt med teststof, og effekten måles ved hjælp af mekanisk eller termisk smertestimulation. Dyrene må højst stimuleres op til 5 gange. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. a. Med det formål at undersøge farmakodynamiske og kinetiske egenskaber ved negativt ladede liposomer i normale og tumorbærende mus injiceres liposomformuleringen med mærkede fosforlipider intravenøst. Der udtages op til 4 blodprøver inden for 36 timer efter injektion, hvorefter dyrene aflives. De tumorbærende mus podes med tumorceller nogle uger forud for forsøget. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 gram svarende til en diameter på en kugleformet tumor på 12 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. b. Med det formål at undersøge testlipiders effekt på tumorvækst podes mus med tumorceller subcutant. Efter ca. 2 uger behandles dyrene med liposomformulering indeholdende antitumorlipid. Behandlingen gentages op til 6 gange med et døgns interval. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 gram svarende til en diameter på en kugleformet tumor på 12 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne a og b må anvendes mus. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteterne i punkterne a og b, hvorfor De i god tid inden forsøgenes start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at bestemme fordelingen af fedt i blod bedøves rotter, og v. portae og aorta abdominalis kateteriseres, hvorefter dyrene totaltappes. Med det formål at undersøge teststoffers smertehæmmende effekt påføres rotter allodyni i den ene bagpote ved under bedøvelse at lægge løse ligaturer omkring den ene n. ischiadicus eller ved par-

44 tiel ligering/overskæring af nerven eller grene herfra. Efterfølgende indgives teststof oralt eller parenteralt, og effekten måles enten med von Frey hår eller ved kulde/varme påvirkning. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære denne forsøgsaktivitet, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge teststoffers smertehæmmende effekt på inflammatorisk smerte injiceres inflammationsfremkaldende stof (Freunds complette adjuvans, Carrageenan) subcutant plantart uden for trædepuderne i den ene pote på rotter. Efterfølgende måles følsomheden i poten ved hjælp af von Frey hår eller varmepåvirkning. Teststof indgives oralt eller parenteralt. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge teststoffers hæmmende effekt på akut smerte fremkaldes moderat smerte ved subcutan injektion af smertefremkaldende stof (5% formalin, carrageean, capsaicin) dorsalt på bagpote. Testfarmakon indgives oralt eller parenteralt, og effekten iagttages. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge teststoffers effekt på knogle- og bruskstrukturer indgives teststof til normale og gonadectomerede marsvin, der spontant udvikler osteoarthrose. Teststof indgives dagligt oralt eller subcutant i op til 4 måneder. Der udtages blodprøver under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes marsvin. Med det formål at undersøge chalconers biotilgængelighed og farmakokinetik indgives testchalcon oralt eller intravenøst til mus i ikke-toksiske doser. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at udvikle nye lægemidler til forebyggelse og behandling af Alzheimers sygdom induceres en Alzheimer-lignende sygdom i rotter ved under bedøvelse i stereotaktisk opstilling at foretage 1 injektion beta-amyloid-peptid intracerebroventriculært i dyrene. Efterfølgende injiceres

45 teststof, ligeledes under bedøvelse, i dyrene i cisterna magna op til 3 gange med ca. 1 uges mellemrum. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene skal være under intensiveret opsyn under forløbet. Effekten af behandlingen vurderes ved hjælp af forskellige adfærdstests. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, dog senest efter 3 måneders observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. I forbindelse med de stereotaktiske indgreb må der ved overlevelsesforsøg kun anvendes stumpe fiksationspinde i øregangen. Med det formål at undersøge den hypothalamiske hypophysære adrenale akses (HPA-aksen) betydning for kroniske smerter og depression samt at afprøve teststoffer med effekt herpå induceres inflammation i bagpoterne på rotter ved intradermal injektion af en suspension af svækket mycobacterium butyricum i parafinolie. Dyrene observeres i op til 15 døgn, hvorefter de aflives. Dyrene behandles under forløbet med teststof. Dyrene skal gå på blødt strøelse. Effekten testes adfærdsmæssigt for mekanisk allodynia og termisk hyperalgesia. Dyrene skal observeres intensivt under forløbet. Ved vægttab på > 20% af normalvægten, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge teststoffer med potentiel hæmmende effekt på udviklingen af colitis indgives teststof op til 3 gange dagligt oralt eller parenteralt til genmodificerede mus, der spontant udvikler sygdommen. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge om farmaka, der nedsætter kropstemperaturen via hjernens temperaturregulatoriske center, kan beskytte hjernen mod iskæmisk neurodegeneration, foretages temporær eller permanent okklusion af den ene a. cerebri media på bedøvede rotter. Alternativt foretages temporær afklemning af begge aa. carotes communis med samtidig reduktion af det systemiske blodtryk til 60 mm Hg ved reduktion af blodvolumen fra kateter i a. femoralis. Det fjernede blod infunderes efter okklusionens ophævelse. Testfarmakon injiceres subcutant, intraperitonealt eller via permanentkateter intravenøst eller intraarterielt. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives.

46 Med det formål at undersøge effekten af hypotermi i hjernens temperaturregulerende center på eksperimentel allergisk encephalomyelites (EAE) induceres tilstanden i rotter ved subcutan injektion af dels myelin oligodendrocyt glycoprotein (MOG) og dels MOG sammen med myelin basic protein opløst i Freunds complette adjuvans (FCA) tilsat tuberculincarrier. FCA må kun bruges en gang og kun subcutant. Ved begyndende tegn på attack indledes det farmakologiske testkoncept for induktion af hypotermi. Dyrene skal overvåges intensivt i de perioder, hvor der kan forventes belastende neurologiske symptomer. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, dog senest efter 3 ugers observation. Ved forsøgets afslutning bedøves dyrene og perfusionsfikseres. Ved parese af forbenene eller ved vægttab på > 20% af dyrenes normalvægt, skal dyrene straks aflives. Det samme gælder ved væsentligt påvirket almentilstand og ved lidelsesvoldende komplikationer. Med det formål at udvikle lægemidler med profylaktisk og terapeutisk effekt på focal og global hjerneiskæmi induceres tilstanden i mus eller ørkenrotter. Focal iskæmi induceres i bedøvede mus ved elektrisk koagulation af den ene a.cerebri media. Global iskæmi induceres i ørkenrotter ved afklemning af begge aa.carotis communis i op til 10 minutter. Efterfølgende behandles med teststof (peptider) intraperitonealt, intranasalt eller under bedøvelse suboccipitalt. Der skal behandles med smertestillende medicin postoperativt. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og ørkenrotter. Med det formål at undersøge potentielle lægemidler med effekt på neurodegenerativ lidelse behandles konditionerede rotter med testlægemiddel. I fuld bedøvelse indsættes i stereotaktisk opstilling permanent-kanyle i den ene lateralventrikel med henblik på senere cerebroventriculær indgift af teststof, eller dura mater blotlægges med henblik på applikation af teststof på dura. I andre dyr appliceres teststof intranasalt. Dyrene gennemgår efterfølgende forskellige adfærdstests. Dyrene skal behandles med smertelindrende medicin postoperativt. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. I forbindelse med de stereotaktiske indgreb må der ved overlevelsesforsøg kun anvendes stumpe fiksationspinde i øregangen. Med det formål at undersøge teststoffers effekt på de cardiovasculære og respiratoriske systemer samt nyrefunktionen bedøves dyr og trachealintuberes via tracheotomi. Elektroder påmonteres

47 huden samt eventuelt ventrikelvæggen, og katetre indlægges i relevante kar med henblik på målinger, infusioner og prøveudtagning. Dyrene fastes eventuelt forud for undersøgelserne. Endvidere kan der være foretaget enkel eller gentagen dosering af testlægemiddel i op til 3 måneder før bedøvelsen. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes rotter, kaniner, katte, grise og hunde. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på kredsløbet på vågne, ustressede dyr, implanteres telemetritransducer subcutant eller intraperitonealt på bedøvet dyr. Efterfølgende indgives testlægemiddel ved enkel eller gentagen dosering oralt, nasalt eller parenteralt i op til 3 måneder. Elektrokardiogram, blodtryk, legemstemperatur samt motorisk aktivitet registreres telemetrisk. Der udtages eventuelt blodprøver under forløbet. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes mus, rotter, kaniner, grise og hunde. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på centralnervesystemet indgives testlægemiddel oralt, nasalt eller parenteralt ved enkel eller gentagen dosering i op til 3 måneder. Efterfølgende registreres dyrenes adfærd og autonome funktioner i buret og ved adfærdstests. I nogle forsøg fastes dyrene forud for undersøgelserne. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge teststoffers effekt på mavesækkens syreproduktion indlægges katetre i kar på bedøvet dyr med henblik på infusion og prøveudtagning. Der kan eventuelt være foretaget enkel eller gentagen oral, nasal eller parenteral dosering af lægemiddel før bedøvelsen. Dyrene fastes eventuelt forud for undersøgelserne. Dyrene aflives i bedøvelsen. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på mave-tarmpassagens hastighed indgives testlægemiddel oralt, nasalt eller parenteralt i op til 3 måneder. Efterfølgende indgives kulsuspension oralt. Dyrene aflives til forskellige tidspunkter herefter, og passagetiden måles. I nogle tilfælde fastes dyrene i forbindelse med undersøgelserne. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på åndedrætsfunktionen indgives testlægemiddel oralt, nasalt eller parenteralt i op til 3 måneder. Efterfølgende måles lungefunktionen ved plethysmografi. I nogle tilfælde fastes dyrene forud herfor. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives.

48 Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på nyrefunktionen anbringes rotter i metabolismebure med henblik på opsamling af urin og fæces. Der foretages enkel eller gentagen dosering af testlægemiddel oralt, nasalt eller parenteralt i op til 3 måneder forud for undersøgelserne. Dyrene fastes i nogle tilfælde i op til 24 timer i forbindelse med forsøgene. Eventuelt doseres vand eller saltvand i forbindelse med undersøgelserne. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers effekt på specifikke organer behandles dyr med testlægemiddel ved enkel eller gentagen oral, nasal eller parenteral dosering i op til 3 måneder. Efterfølgende bedøves dyrene, og organer udtages til videre analyse. Dyrene aflives i forbindelse med udtagning af organer. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter, kaniner, marsvn og hunde. G. Fysiske påvirkninger Omfatter situationer, hvor forsøgsdyr ved bestråling eller mekaniske eller termiske påvirkninger påføres vævsskader. Under denne hovedtype er der i beretningsåret ikke udstedt tilladelser. H. Immunologiske undersøgelser Den dyriske organisme søger at modvirke indtrængen af artsfremmede stoffer, bakterier eller virus, der indeholder såkaldte antigener. Dette kan ske ved dannelse af såkaldte antistoffer. Indsprøjtning af antigener benævnes immunisering. Antistofferne kan isoleres fra blodet og kan benyttes til diagnostiske eller behandlingsmæssige formål. De muliggør også teoretiske undersøgelser af selve immunresponset eller understøtter muligheden for at erstatte egentlige dyreforsøg med de såkaldte in vitro metoder i udforskningen af mange sygdomskomplekser. Immunologiske metoder indgår ligeledes ved afprøvning af vacciner og af stoffer, som benyttes til at eliminere eller understøtte immunresponset ved for eksempel allergi, infektioner samt betændelsesreaktioner eller i forbindelse med transplantation af organer eller væv.

49 Størstedelen af disse studier udføres på mus eller kaniner.efter en eller flere injektioner udtages blod, hvorfra antistofferne isoleres. Den stærkt stigende anvendelse af specifikke antistoffer i biomedicinske eller farmakologiske undersøgelser begrunder de mange tilladelser til disse indgreb. Såfremt der skal isoleres større mængder antistoffer (antisera), benyttes et begrænset antal af de større dyr. Da der er tale om injektioner af små mængder af antigenet, som i sig selv ikke besidder skadelige virkninger, belastes de anvendte dyr alene ved injektioner og udtagelse af blodprøverne. For at understøtte immunresponset kan injektionen af antigenet ledsages af en injektion med et hjælpestof (adjuvans). Hjælpestoffet kan give anledning til lokal vævsreaktion. Brugen af adjuvans er derfor specificeret i tilladelserne, således at det skadefremkaldende Freunds Complette Adjuvans kun må benyttes én gang og kun injiceres subkutant. De antistoffer, der fremkaldes vil i almindelighed være såkaldte polyklonale. For at fremstille de såkaldte monoklonale antistoffer, skal der anvendes en særlig teknik, som kræver almindelig immunisering af mus. Den videre fremstilling foregår i vævskulturer. Kun undtagelsesvis gives tilladelse til fremstilling af monoklonale antistoffer i mus, og kun hvis metoder med anvendelse af vævskulturer ikke kan anvendes hertil. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med det formål at undersøge immunologiske forhold i forbindelse med transplantation af retinale pigmentepithelceller og at optimere den kirurgiske teknik til transplantationen transplanteres allogene pigmentepithelceller eller genetisk modificerede retinale stamceller til øjets bagvæg på bedøvede dyr. Der skal gives smertestillende og anden understøttende behandling efter behov. Under forløbet bedøves grisene 1 til 5 gange med henblik på at vurdere resultatet af transplantationen. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise. Dyreforsøgstilsynet udbeder sig en rapport over resultatet af forsøget med retinale stamceller. Med det formål at fremskaffe antistoffer immuniseres dyr med antigen. I specielle tilfælde placeres antigen under bedøvelse direkte i milten (mus og kaniner).ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første subcutane immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Der tages blodprøver under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes mus, rotter, marsvin, hamstere, kaniner, geder og høns.

50 Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers immunogenicitet i gnavere injiceres testlægemiddel subcutant 3 gange dagligt i op til 8 uger i naturlige og genetisk modificerede mus samt i rotter. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første subcutane immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Der udtages blodprøver under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at skaffe serologiske data med henblik på at vurdere de serologiske profiler i svinebesætninger inficeret med ondartet lungesyge udtages blodprøver fra en række dyr i udvalgte besætninger. Hertil må anvendes grise. Med henblik på isolering af celler fra milten til fusion med myeloma celler til in vitro fremstilling af monoklonale antistoffer immuniseres mus subcutant med antigen og adjuvans - Al(OH)3 - op til 3 gange. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale udtages til laboratoriebrug. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge teststoffers effekt på immunsystemet målt på T- og B-celle aktiviteten immuniseres mus subcutant med peptid eller protein antigen. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans.teststof indgives oralt eller parenteralt i op til 10 dage, hvorefter dyrene aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at fremskaffe antistoffer til diagnostisk brug immuniseres kaniner subcutant med antigen. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes kaniner. Med det formål at undersøge i hvor høj grad naturligt forekommende MBL (Mannan Binding Lectin) kan modvirke infektioner, inokuleres normale og MBL-deficiente cytostaticum behandlede

51 mus med bakterier. En gruppe af MBL-deficiente mus behandles med MBL. Infektionens forløb vurderes ved kliniske iagttagelser og blodprøveanalyser. Der skal være øget overvågning i perioden, hvor dyrene kan forventes at blive syge. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge og afprøve effekten af en ny koppevaccine vaccineres mus 2 gange med vaccinen med 3 ugers mellemrum. Efter yderligere 2 ugers observation aflives dyrene. Serier af mus inokuleres med vaccinia virus 6 uger efter første vaccination. Disse dyr aflives 4 dage senere. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at karakterisere det protective immunrespons mod poxvirus overføres T-celler fra immuniseret donormus til ikke immuniseret recipientmus. Donordyr immuniseres subcutant med testvaccine. Recipientdyr behandles med isolerede T-celler intravenøst. Efterfølgende inokuleres intraperitonealt med vaccinia virus. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge det immunologiske respons af forskellige vacciner vaccineres mus subcutant eller intramuskulært med testvaccine dag 1 og dag 21. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Dyrene aflives efter 5 ugers observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. a. Med det formål at fremstille polyklonale antistoffer immuniseres dyr med antigen oralt eller parenteralt. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. b. Med det formål at fremstille specifikke antistoffer immuniseres dyr med antigen (DNA) ved hjælp af gen-kanon i huden. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. c. Med det formål at fremstille specifikke antistoffer immuniseres bedøvede mus eller rotter intravenøst med antigen DNA i Ringers opløsning i en mængde op til 10% af dyrets vægt. Eventuelt

52 gentages proceduren efter 2 ugers observation. Dyrene skal observeres intensivt indtil fuld opvågning og restitution. Der udtages blodprøver under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. d. Med det formål at fremstille specifikke antistoffer immuniseres bedøvede dyr med antigen - (DNA) i Ringers opløsning ved infusion i et enkelt organ eller dele heraf (nyre / lever). Dyrene skal observeres intensivt indtil fuld opvågning og restitution, og der skal gives smertelindrende behandling postoperativt. Der udtages blodprøver under forløbet, og dyrene skal være analgeseret, sederet og/eller anæsteret i nødvendigt omfang i forbindelse hermed. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne a d må anvendes mus, rotter, marsvin, kaniner og grise. Med det formål at undersøge betydningen af operationsstress på immunforsvaret udføres på bedøvede dyr standardiserede operative indgreb, eller stress påføres ved injektion med lipopolysaccharid. Der behandles eventuelt med immunmodulerende stof efterfølgende. I forbindelse med undersøgelsen injiceres radioaktivt mærkede normale celler eller tumorceller intravenøst, og der udtages blodprøver. Dyrene skal være bedøvede/sederede i nødvendigt omfang i forbindelse med blodprøveudtagning og injektioner. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 g (mus) og 4 g (rotter) svarende til en diameter på en kugleformet tumor på henholdsvis 12 mm og 20 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. Der må ikke forekomme ulcerationer i forbindelse med tumorer. Der skal gives smertestillende behandling ved behov. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter og grise. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten vedrørende injektion af tumorceller intravenøst i grise, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. 2. Med det formål at undersøge T-celle receptorer (TCR) og deres relation til endosomer transplanteres knoglemarvsceller, der er inficeret med genmodificeret retrovirus, til recipientmus. Donormus injiceres intravenøst med 5-flourouracil. Efter 5 dage aflives disse dyr, og knoglemarv udtages og inficeres med retrovirus. Recipientmus strålebehandles og injiceres intravenøst med retrovirus inficerede knoglemarvsceller. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, dog senest efter 12 ugers observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives.

53 Med det formål at undersøge T-celle receptorers (TCR) nedregulering og den konstante TCRcyklings betydning for differentiering af thymocytter til T-celler behandles drægtige mus intravenøst med progesteron sent i drægtigheden. Mus og forstre aflives, hvorefter thymus udtages fra fostrene til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 4. Med det formål at undersøge T-celle turnover i mus indgives bromodeoxyuridine via drikkevandet i forskellige perioder. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 5. Med det formål at undersøge T-celle receptorers nedregulering og den konstante TCR-cyklings betydning for T-cellens evne til at aktivere B-celler immuniseres mus med antigen.ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 6. Med det formål at undersøge sammenhængen mellem TCR nedregulering/cykling og evnen til at reagere på allergener udsættes mus i 3 dage for forskellige allergener. På 5.-dagen injiceres intravenøst med mærket thymidin. Efter yderligere 5 timer aflives dyrene, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 7. Med det formål at undersøge effekten af TCR-nedregulering og manglende TCR-cykling på afstødning af allogent transplantat, foretages under bedøvelse allogene hudtransplantationer med mindst 2 ugers mellemrum på mus. Der skal gives smertestillende medicin postoperativt. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 8. Med det formål at undersøge TCR-regulering og manglende TCR-cyklings rolle for immunsystemets evne til at bekæmpe infektioner inokuleres forskellige grupper af mus subcutant med enten Leismania eller Listeria monocytogenes. Andre mus inokuleres intravenøst med Lymphocytic Choriomeningetis Virus, intranasalt med Influenzavirus eller intraperitonealt med superantigen. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. Ved belastende påvirkning af infektion, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives.

54 Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten i punkt 8, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Til punkterne 2-8 må anvendes mus. 1a. Med det formål at undersøge molekylære mekanismer involveret i regulationen af immunsystemet induceres inflammatorisk respons ved intraperitoneal injektion af bakterie cellevægsprotein eller lipopolysaccarid (LPS)i naturlige og genmodificerede mus. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 1b. Med det formål at undersøge molekylære mekanismer involveret i regulationen af immunsystemet induceres inflammatorisk respons ved intraperitoneal injektion af høj dosis lipopolysaccarid (LPS) i naturlige og genmodificerede mus. Dyrene skal observeres intensivt og aflives senest efter en uges observation, hvorefter materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne 1a og b må anvendes mus. 2a. Med det formål at undersøge molekylære mekanismer involveret i regulationen af immunsystemet sensibiliseres mus ved epicutan application af 2, 4, 6 trinitrochlorobenzene, flourosceinisothio-cyanate, oxalozone eller 2, 4 dinitrofluorobenzene. Efter 4-10 dage appliceres det responderende agens på dyrenes højre øre, og reaktionen vurderes. Dyrene aflives umiddelbart efter målingen af resultat. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 2b. Med det formål at undersøge mekanismer involveret i immunsystemets regulation immuniseres mus intraperitonealt eller intravenøst med T-celleafhængig eller T-celleuafhængig antigen. Der udtages blodprøver før og med 7 dages intervaller i en periode på 3 uger efter immuniseringen. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 2c. Med det formål at undersøge mekanismer involveret i immunsystemets regulation behandles genmodificerede mus med immunmodulerende stof. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne 2a, b og c må anvendes mus.

55 - 53-3a. Med det formål at undersøge mekanismer involveret i immunsystemets regulation og funktion herunder T-celle effektor-funktioner inokuleres naturlige, genmodificerede eller immunsupprimerede mus intradermalt i bagpote eller i øret med parasitter (f.eks. Leishmania major), og reaktionen følges i op til 7 uger. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, dog senest efter 7 ugers observation, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af ulcerationer på inokulationsstedet, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 3b. Med det formål at undersøge mekanismer involveret i immunsystemets regulation og funktion herunder T-celle effektefunktioner inokuleres naturlige, genmodficerde eller immunsupprimerede mus med virus oralt, intraperitonealt eller intravenøst. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 3c. Med det formål at undersøge mekanismer involveret i immunsystemets regulation og funktion herunder T-celle effektfunktioner inokuleres naturlige, genmodificerede eller immunsupprimerede mus med mykobakterier intravenøst. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne 3a, b og c må anvendes mus. 4a. Med det formål at undersøge mekanismer involveret i regulation af immunsystemet i relation til viral induceret tumorer injiceres murine leukæmivirus intraperitonealt, intravenøst eller under bedøvelse intrathymisk i naturlige, genmodificerede eller immunsupprimerede mus. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 gram svarende til en diameter på en kugleformet tumor på 12 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 4b. Med det formål at undersøge mekanismer involveret i regulation af immunsystemet i relation til kemisk induktion af tumor injiceres tumorfremkaldende stof intravenøst i eller appliceres på naturlige, genmodificerede eller immunsupprimerede mus. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 gram svarende til en diameter på en kugleformet tumor på 12 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives.

56 Til punkterne 4a og b må anvendes mus. 5. Med det formål at undersøge celledød og cellerekonstitution i thymus injiceres anti-cd3 antistof eller superantigener intraperitonealt i naturlige, genmodificerede, immunsupprimerede eller - bestrålede mus. Efterfølgende indgives 5-bromo-2-deoxyuridine intraperitonealt eller via drikkevandet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. 6. Med det formål at undersøge processer i forbindelse med graft- versus- hostreaktioner og deres varighed injiceres forskellige xeno-, allo- eller syngene celler subcutant, intraperitonealt eller intravenøst i mus. Under forløbet behandles med immunregulerende stof. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteterne i punkterne 1, 3 og 5, hvorfor De i god tid inden forsøgenes start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge om man kan reducere det inflammatoriske respons ved sepsis, induceres tilstanden i bedøvede grise ved intravenøs indgift af LPS (lipopolysakkarid). Under bedøvelse indlægges katetre i arterier og vener samt urinblæren med henblik på infusion af LPS, insulin og glucose samt prøveudtagning og målinger. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes grise. a. Med det formål at undersøge immunsystemets reaktion på allergen ekstrakter og proteiner i forbindelse med adjuvans (aluminiumhydroxid) indgives testallergen oralt, parenteralt eller ved inhalation i mus og rotter. Eventuelt indgives testallergen subcutant sammen med FCA (Freunds Complette Adjuvans). FCA må kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til in vitro undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. b. Med det formål at undersøge immunsystemets reaktion på allergen ekstrakter og proteiner i forbindelse med adjuvans (aluminiumhydroxid) indgives testallergen oralt, parenteralt eller ved inhalation i mus. Eventuelt indgives testallergen subcutant sammen med FCA (Freunds Complette Adjuvans). FCA må kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterføl-

57 gende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Der udtages blodprøver under forløbet. Efter at sensibilisering er opnået, indgives Evans Blue intravenøst. Efter ca. 10 minutter bedøves musene, og vandig allergenopløsning injiceres intradermalt. Efter yderligere 10 minutter aflives dyrene i bedøvelsen, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. c. Med det formål at undersøge immunsystemets reaktion på allergener indgives isolerede humane leukocytter intraperitonealt til SCID-mus. Herefter påbegyndes immunisering af musene med testallergen sammen med adjuvans. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til in vitro undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne a, b og c må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge lungefunktionen hos mus og rotter efter at dyrene er sensibiliseret med allergenekstrakt eller protein, anbringes dyrene i en Whole Body Plethysmograph i op til 24 timer med henblik på måling af lungefunktionen. I forbindelse hermed udsættes dyrene for stigende doser af metacholin. I tilfælde af betydelig lungepåvirkning af metacholin, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge fysiologiske, immunologiske og mikrobiologiske forhold i tarmkanalen hos diende og nyligt fravænnede husdyr fodres grupper af dyr med forskelligt diætfoder eller behandles med antibiotika, probiotika eller naturligt forekommende hormoner. I forbindelse med forsøgene indlægges katetre i vener med henblik på infusion og prøveudtagning. Diætfoder indgives eventuelt med temporær eller permanent oesophagus-sonde. Dyrene skal være sederede, analgeserede, anæsteserede i nødvendigt omfang i forbindelse med de invasive procedurer. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væ-sentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes grise, lam og kalve. De kirurgiske indgreb skal foretages af en person med fornøden anæstesiologisk og kirurgisk indsigt og erfaring.

58 Ved bedøvelse af dyr bør barbiturater ikke anvendes i forbindelse med overlevelsesforsøg. Valg af bedøvelsesmiddel skal ske i samråd med den tilsynsførende dyrlæge. Med det formål at fremstille velkarakteriserede antistoffer overfor mikroorganismer til brug ved undersøgelser af antigener, toksiner eller som infektionspatogenetiske markører samt til opstilling af diagnostiske tester immuniseres dyr intrakutant, subcutant, intravenøst eller intraperitonealt med antigen (mikroorganisme, materiale fra mikroorganismer eller syntetiske antigener). Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. I nogle tilfælde kombineres immuniseringen med kortvarig immunsuppresion af dyrene (cortison, cyclophosphamid). Ved tapning af blod fra hjertet skal dyrene være bedøvede og aflives i samme bedøvelse. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter og kaniner. Med det formål at undersøge sammenhængen mellem kondition og immunforsvar samt parasitbelastningen hos natugler immuniseres dyrene intramuskulært med antigen (SBL vaccine). Der udtages blodprøver under forløbet til undersøgelse for immunrespons og blodparasitter. Endvidere gennemføres en skintest til måling af T-lymfocyt celle-medieret immunrespons ved subcutan injektion af phytohaemagglutinin. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes indfangede, vildtlevende natugler. Med henblik på immunologiske undersøgelser immuniseres dyr med antigen. Efter 10 dage aflives dyrene, og materiale udtages til in vitro undersøgelser. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første subcutane immunisering. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge grundlæggende forhold ved udvikling af autoimmune sygdomme og at afprøve nye behandlingsformer induceres rheumatoid arthritis i transgene og normale mus ved intradermal injektion af små mængder testantigen blandet med Freunds complette adjuvans. Der må immuniseres 2 gange med 40 dages mellemrum. Med henblik på behandling af tilstanden indgives teststof oralt eller parenteralt før, sammen med eller efter antigenindgiften. Der skal være skærpet overvågning med udviklingen af arthritissymptomer. Ved væsentlig påvirkning af dyrenes førlighed som følge af arthritis, ved væsentligt påvirket almentilstand, ved vægttab eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives.

59 Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge grundlæggende forhold ved udvikling af autoimmune sygdomme og at afprøve nye behandlingsformer induceres dissemineret sklerose i transgene og normale mus ved immunisering intradermalt med testantigen sammen med Freunds complette adjuvans (FCA). Med henblik på behandling af tilstanden indgives teststof oralt eller parenteralt før, sammen med eller efter indgiften af antigen og FCA. Dyrene skal observeres intensivt specielt i perioder med sygdomsudbrud.ved væsentligt påvirket almentilstand, ved vægttab eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med henblik på immunologiske undersøgelser immuniseres mus med antigen. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Der udtages blodprøver under forløbet. Musene fodres med forskellige diæter. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, eller senest efter 12 ugers observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at fremstille polyklonale antistoffer immuniseres kaniner subcutant med antigen. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Der udtages blodprøver en gang om måneden under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes kaniner. Med det formål at fremstille diagnostiske sera og afprøve vacciner immuniseres/vaccineres dyr med antigen/vaccine. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første subcutane immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Efterfølgende udtages blodprøver til serologiske undersøgelser. Vaccinationers effektivitet vurderes tillige ved at udsætte kontroldyr og vaccinerede dyr for korresponderende patogen. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, med mindre deres tilstand er fuldstændigt normaliseret. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, marsvin, kaniner, mink og ræve.

60 Med det formål at fremstille antistoffer immuniseres mus med specifikt antigen intradermalt eller subcutant. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Der udtages blodprøver under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at fremskaffe polyklonale antistoffer immuniseres kaniner subcutant med antigen. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første subcutane immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Dyrene skal aflives af eller efter instruktion af en dyrlæge. Hertil må anvendes kaniner. Med det formål at undersøge antistofudviklingen efter vaccination med forskellige vaccineformuleringer og doser, vaccineres dyr subcutant, intradermalt, intraperitonealt, intravenøst, intramuskulært eller mucosalt. Ved brug af adjuvans må Freunds complette adjuvans kun anvendes subcutant og kun ved den første subcutane immunisering. Ved efterfølgende immuniseringer må anvendes Freunds incomplette adjuvans eller tilsvarende adjuvans. Der udtages blodprøver under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter, marsvin og kaniner. I. Infektionspatologiske undersøgelser Disse undersøgelser tager sigte på at klarlægge smitteveje eller mikroorganismers eller parasitters sygdomsfremkaldende virkninger på den samlede organisme og/eller de enkelte organer. Desuden indgår kontrol med eventuelle smitteveje, forebyggelse og behandling af infektioner herunder også udvikling og produktion af vacciner og immunsera. Tilladelser inden for denne kategori er hovedsagelig givet for at supplere viden om kendte infektioner med yderligere oplysninger om de pågældende mikroorganismer samt i enkelte tilfælde for at muliggøre dyrkning af bestemte mikroorganismer. For at opnå et eller flere af disse mål er det ofte nødvendigt at fremkalde symptomgivende infektionstilstande hos dyrene, men betingelserne i tilladelser af denne art forudsætter, at der anvendes lavest mulig infektionsdosis, og at undersøgelsen afsluttes tidligt i forløbet enten ved tilstrækkelig effektiv behandling eller ved aflivning af dyrene. Det vil sige, at dyrets spontane død som følge af tilstanden er fastholdt som en absolut undtagelse. Undersøgelserne har i deres forløb en

61 del tilfælles med de toksikologiske afprøvninger, hvorfor der også kan indgå krav om, at orienterende inspektioner er en forudsætning for eventuel fortsættelse af undersøgelserne i den fastlagte form. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: a. Med det formål at undersøge faktorer hos bakterier af slægterne Salmonella, Campylobacter, Actinobacillus, Brachyspira og Pasteurella, der er betydende for fremkaldelse af patologiske læsioner ved infektioner, inokuleres dyr oralt eller intraperitonealt med en suspension af den udvalgte bakterieslægt. Dyrene skal overvåges intensiveret med tilsyn mindst hver 8. time i belastende faser. Dyrene aflives senest efter 10 dages observation, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. b. Med det formål at undersøge faktorer hos bakterier af slægterne Salmonella, Campylobacter, Actinobacillus, Brachyspira og Pasteurella, der er betydende for patologiske fænomener i tarmkanalen, anlægges på bedøvede dyr en række tarm-loops. Efterfølgende injiceres en suspension af udvalgte bakterier i loops. Efter 4 timers observation aflives dyrene i bedøvelsen, og materiale udtages til videre undersøgelser. c. Med det formål at fremskaffe makrofager til laboratoriebrug injiceres sephadex intraperitonealt i mus eller kyllinger. Efter 3 4 døgn aflives dyrene, og makrofagerne isoleres fra peritonealcaviteten. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne a, b og c må anvendes mus, høns/kyllinger og grise. Med det formål at undersøge effekten af forskellige bioaktive proteiner på forløb og elimination af mikroorganismer injiceres testprotein eller DNA kodet for testprotein i mus eller rotter. Efterfølgende injiceres en suspension med mikroorganismer intravenøst i dyrene. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Dyrene skal observeres intensivt under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge patientmateriale for tilstedeværelse af animalske vira inokuleres dyr oralt eller parenteralt med aktuelt materiale. Der udtages blodprøver under forløbet. Ved sikre kliniske symptomer på den sygdom, som måtte følge af materialet, skal dyrene straks aflives. Der

62 udtages blodprøver under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter, marsvin, kaniner, grise og mink. Med det formål at undersøge patogenese og patofysiologiske forhold samt udvikle behandlingsprincipper i forbindelse med meningitis bedøves kaniner, og en kanyle indføres i cisterna magna ved hjælp af stereotaktisk apparatur med henblik på injektion af infektiøst agens, prøveudtagning og måling. Dyrene skal være bedøvede under hele forløbet og aflives i bedøvelsen senest efter 24 timers observation. Det stereotaktiske apparatur fikseres ved hjælp af 2 skruer, der 1 døgn tidligere under bedøvelse er fastgjort i cranieknogler. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene aflives i forbindelse med den endelige bedøvelse. Hertil må anvendes kaniner. Med det formål at undersøge overførsel af antibiotikaresistens mellem bakterier behandles mus med streptomycin i drikkevandet med henblik på at udrydde den aerobe bakterieflora fra tarmen. Efterfølgende inokuleres musene pr. os med bakterier, som overfører og/eller modtager resistensplasmider. Bakterier fra fæcesprøver undersøges herefter for resistensegenskaber. Dyrene observeres i op til 3 uger. Eventuelt behandles de i kortere perioder med antibiotika oralt eller parenteralt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge bakteriers virulens, sygdomsforløb og behandlingsmuligheder ved pneumoni bedøves mus og inokuleres nasalt med testbakterier. Eventuelt behandles musene med immunsuppressivt stof forud for inokulationen. Der behandles med teststof oralt eller parenteralt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge patoanatomiske forhold og behandlingseffekt ved otites media bedøves rotter og inokuleres i auris media ved penetration af tympani bulla (mellemørebulla) med kanyle. Testlægemiddel indgives oralt eller parenteralt. Der tages eventuelt blodprøver og udføres otomikroskopi under forløbet. Ved behandlingsforsøgene observeres dyrene i op til 1 uge. Ved undersøgelse af patoanatomiske forhold observeres dyrene i op til 6 måneder. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 1. Med det formål at undersøge potentielle lægemidler med anti-infektiv effekt påføres dyr infektion ved inokulation med aktuel mikroorganisme (bakterier eller svampe). Inokulationen foretages oralt, subcutant, intramuskulært, intravenøst, intravesicalt eller intratrachealt. Teststof indgives

63 oralt eller parenteralt. Dyrene skal være analgeserede eller bedøvede i nødvendigt omfang i forbindelse med inokulationen. Efterfølgende observeres dyrenes kliniske tilstand og adfærd nøje. Der skal være intensiveret overvågning af dyrene i belastende faser. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. Ved væsentlig påvirkning som følge af infektionen, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 2. Med det formål at undersøge potentielle lægemidler med anti-infektiv effekt påføres dyr infektion ved intraperitoneal inokulation med aktuel mikroorganisme (bakterier eller svampe). Teststof indgives oralt eller parenteralt. Efterfølgende observeres dyrenes kliniske tilstand og adfærd nøje. Der skal være intensiveret overvågning af dyrene i belastende faser. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. Ved væsentlig påvirkning som følge af infektionen, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 3. Med det formål at undersøge potentielle lægemidler med anti-infektiv effekt påføres dyr infektion (meningitis) ved inokulation under bedøvelse med aktuel mikroorganisme (bakterier eller svampe) i subarachnoidalrummet via cisterna magna.teststof indgives oralt eller parenteralt. Efterfølgende observeres dyrenes kliniske tilstand og adfærd nøje. Der skal være intensiveret overvågning af dyrene i belastende faser. Der udtages blodprøver under forløbet. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. Ved væsentlig påvirkning som følge af infektionen, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten i punkt 3, hvorfor De i god tid inden for- søgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Til punkterne 1, 2 og 3 må anvendes mus og rotter. Med henblik på fremstilling af antigen fra toxoplasma og andre protozoer til immunologiske og serologiske undersøgelser inokuleres mus med Toxoplasma gondii eller andre protozoer peroralt eller intraperitonealt. Dyrene observeres i op til 6 måneder, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. Ved vægttab på > en 20% af dyrenes normalvægt, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge mikroorganismers patogenicitet inokuleres dyr oralt, parenteralt eller ved kontakt med syge dyr. Der udtages eventuelt biopsi fra colon under forløbet. Dyrene skal i nødvendigt omfang være bedøvede i forbindelse med inokulation og biopsitagning. Ved

64 sikre tegn på infektion, væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes mus, marsvin, kaniner, mink og ræve. Med det formål at undersøge infektionspatologiske mekanismer i forbindelse med infektion med enterobacteriaceae i grise, herunder specielt salmonella-typer, indføres bakterierne i afsnørede tarmafsnit. Grisene bedøves, og der foretages en række afsnøringer af tarmafsnit, hvorefter bakterier, farmaka, hæmmere, buffer og lignende injiceres i tarmlumen. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes grise. Med det formål at undersøge patogenese og patofysiologiske forhold samt at udvikle behandlingsprincipper i forbindelse med pneumococ-meningitis bedøves rotter og inokuleres i cisterna magna. Der udtages cerebrospinalvæske under bedøvelse 2 gange under forløbet. Dyrene følges intensivt og skal have smertestillende og anden understøttende behandling ved behov. Trediedagen iværksættes behandling med antibiotikum. Efter ca. 1 uges observation bedøves dyrene og perfusionsfikseres/ aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. J. Organfunktionsundersøgelser En meget omfattende gruppe af tilladelser med beskrivelse af mange metodologiske forhold, som vanskeligt kan sammenfattes kort. Det er allerede nævnt, at undersøgelser af organfunktioner indgår i andre tilladelser samlet under andre forsøgstyper, hvorfor disse også har de nedenanførte fællestræk. Forsøgene kan i mange tilfælde kun gennemføres ved at isolere det enkelte organ og anbringe det i et selvstændigt, kunstigt aktiveret kredsløb med blod eller anden væske. Herved vil organerne ikke længere indgå som enheder i det samspil mellem forskellige organsystemer, som er karakteristisk for den dyriske organisme, når den fungerer som en helhed. Der bliver dog gennem disse isolerede organstudier opnået megen indsigt, der kan afgøre og forbedre forløbet af forsøg med den intakte organisme. Tilladelserne vil i stor udstrækning kun omfatte selve udtagelsen af organet på dybt bedøvede og eventuelt forbehandlede dyr. Forudsætningen er imidlertid, at dyret lever under selve organudtagelsen. Tilladelser til studier af organfunktioner med organerne placeret i deres normale sammenhæng har til formål at bibringe viden om normale eller patologiske organfunktioner, eller om de påvirknin-

65 ger, som patienter med organsygdomme kan blive udsat for, eller undersøge forhold vedrørende organernes normale funktioner og den rolle, som en afsporing af en eller flere funktioner spiller i udviklingen af nærmere angivne sygdomme. Desuden er tilladelser givet til undersøgelse af transplanterede organers indheling, funktion og skæbne. Tilladelserne har også omfattet indgreb til belysning af kirurgiske metoder til regulering af knogleregenerationen i tilfælde, hvor der samtidig er tale om vævstab. Endelig omfatter disse tilladelser specielle undersøgelser af organfunktioners påvirkning af fodring og ernæring. Det siger sig selv, at langt størstedelen af de anvendte dyr ikke oplever smerte, idet de forud og under indgrebene er dybt anæsteserede, ligesom forsøgene afsluttes indenfor højst 8 timer, hvorefter dyrene aflives ved en overdosis af anæstesimidlet. Alle tilladelser til indgreb, hvor dyrenes tilstand kan indebære en risiko for indtræden af smerte under undersøgelsens forløb, pålægger den ansvarlige en pligt til effektiv smertebehandling subsidiært aflivning af de pågældende dyr, såfremt der indtræffer lidelsesvoldende tilstande uanset om formålet er opfyldt. Der skal desuden henvises til artiklen i årsberetningen for 1999 side 116 om klausuler i dyreforsøgstilladelser, hvori der gives retningslinier for, hvorledes der skal drages omsorg for en rettidig afslutning af forsøgene. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med det formål at undersøge og udvikle en forensisk metode til ud fra blodprøver at indicere voldeligt halstraume foretages standardiseret strangulation eller afklemning af kar til bagben på bedøvede rotter. Der udtages blodprøver under forløbet. En gruppe dyr observeres i op til 1 uge, hvorefter de bedøves og aflives. De øvrige dyr aflives i bedøvelsen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med henblik på vurdering af metoder til bevaring/genetablering af normale metaboliske forhold i hjertet efter induceret hjertestop med extracorporal circulation gennemføres en række indgreb og måleprocedurer på bedøvede grise. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes grise. Med det formål at etablere en dyreeksperimentel model til undersøgelse af psoriasis transplanteres human psoriasishud til ryggen af immundeficiente mus. Efter endt indheling afprøves forskellige behandlinger mod psoriasis. Dyrene observeres i op til 3 måneder, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus.

66 Med det formål at etablere en dyreeksperimentel model til undersøgelse af psoriasis transplanteres human psoriasishud til ryggen af immundeficiente mus. Efter endt indheling afprøves forskellige behandlinger mod psoriasis. Dyrene observeres i op til 3 måneder, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge en række blodparametre hos fisk under optimale og ændrede miljøforhold (ilttension, temperatur, miljøkontaminanter og lignende) udtages blodprøver til laboratorieanalyser. Fiskene akklimatiseres til det aktuelle miljø forud for prøveudtagningen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes fisk. Med det formål at undersøge forskellige regulatoriske fysiologiske mekanismer hos lavere hvirveldyr (fisk) udsættes dyrene for relevante ændringer i det omgivende miljø. Der indlægges permanent kateter på dyrene i den dorsale aorta og i relation til gæller eller i urinblæren med henblik på prøveudtagning og målinger. Fiskene skal være bedøvede i forbindelse med kateterindlæggelsen. Dyrene observeres i op til 1 uge, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes fisk. a. Med henblik på at fremskaffe rotter til forsøg uden påvirkning af egne kønshormoner bedøves og kastreres dyrene. b. Med det formål at undersøge hjernens evne til regeneration i forbindelse med hjernetraume påføres naturlige og kastrerede rotter hjernetraume ved overskæring af nervefibre i hjernen ved hjælp af stereotaktisk teknik. I forbindelse med de stereotaktiske indgreb må der ved overlevelsesforsøg kun anvendes stumpe fiksationspinde i øregangene. Efterfølgende behandles grupper af kastrerede og hjernelæderede rotter dagligt i op til 14 dage med testosteron. Dyrene skal være bedøvede i forbindelse med de kirurgiske indgreb og efterfølgende behandles med smertelindrende medicin. Dyrene observeres i op til 50 dage, hvorefter de bedøves og perfusionsfikseres/aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne a og b må anvendes rotter. Med det formål at foretage forsøg med dyr uden indflydelse af dets egne specifikke hormoner foretages adrenalectomi på mus og rotter. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt.

67 Dyrene skal have fri adgang til saltvand under hele forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at foretage forsøg med dyr uden indflydelse af dets egne specifikke hormoner foretages gonadectomi på mus og rotter. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge aminoglycosidet kanamycins skadelige effekt på det vestibulære apparat indgives stoffet subcutant i mus 2 gange dagligt i 15 dage. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene observeres i op til 27 uger, hvorefter de bedøves og perfusionsfikseres/aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge dihydroxybenzoats beskyttende effekt mod skader på det vestibulære apparats hårceller behandles mus med kanamycin med henblik på at inducere skader på hårcellerne. Sideløbende behandles med dihydroxybenzoat. Begge stoffer indgives 2 gange dagligt i 15 dage. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene observeres i op til 27 uger, hvorefter de bedøves og perfusionsfikseres/aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge aminoglycosidet kanamycins skadelige effekt på det vestibulære apparats hårceller i voksne mus indgives stoffet subcutant 2 gange dagligt i 15 dage. Dyrene observeres herefter i op til 3 uger, hvorefter de bedøves og perfusionsfikseres/aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge aminoglycosidet kanamycins skadelige effekt på det vestibulære apparats hårceller i museunger indgives stoffet subcutant og 1 time senere bumetanid, ligeledes subcutant. En uge efter behandlingen bedøves dyrene og perfusionsfikseres/aflives. Der udtages eventuelt blodprøver under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus.

68 Med det formål at undersøge og kvantificere fysiologiske ændringer ved revascularisering af en region i hjertet retrograd via det venøse system foretages en række indgreb på bedøvede grise med henblik på monitorering af organet samt anlæggelse af anastomose mellem v. thoracica og v. coronaria. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes grise. Med det formål at forbedre behandling og teknik ved rekonstruktion af dybe galdeveje foretages overskæring og rekonstruktion ved kirurgisk indgreb på bedøvede grise. Indgrebenes effekt vurderes ved forskellige undersøgelsesmetoder ultralyd, røntgen, PET-scanning, MR-scanning, HIDA-scintigrafi o. lign. Dyrene aflives enten i bedøvelsen eller efter en observationstid. Der skal gives smertestillende og anden lindrende behandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten, hvor det drejer sig om overlevelsesforsøg, hvorfor De i god tid inden disse forsøgs start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge skeletmuskulaturens funktion frilægges den ene n. ischiadicus på bedøvede mus eller rotter, og elektroder fastgøres herpå med henblik på elektrisk nervestimulation. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge skeletmuskulaturens funktion trænes mus eller rotter på løbebånd i perioder på op til 2 timer og for rotter tillige ved svømning i op til 2 timer. Eventuelt fastgøres lodder svarende højst til 3% af dyrenes vægt til rotterne under svømningen. Dyrene må ikke under løbe- og svømmetræningen vise tegn på udmattelse. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære denne forsøgsaktivitet, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge organfunktioner målt ved helkropsrespons behandles rotter med insulin intraperitonealt/-venøst eller med glucoseopløsning intraperitonealt. Blodglucosekoncentrationen måles efterfølgende. Andre dyr (rotter og mus) behandles intraperitonealt/-venøst med 5- aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside (AICAR). Blodglucosekoncentrationen måles efter-

69 følgende. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge det lokale respons i skeletmuskulatur isoleres bagben på bedøvede mus og rotter med henblik på perfusion. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge det endoteliale NO-systems betydning for udvikling af polycystiske nyrer behandles normale rotter og rotter med disposition for polycystisk nyresygdom med farmaka, der blokerer det endoteliale NO-system. Under forløbet udtages blodprøver, og blodtryk måles med non-invasiv metode. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at udvikle og validere metoder til vurdering af leverens metaboliske funktion og gennemblødning, herunder at udvikle en non-invasiv metode ved hjælp af PET-scanning, indlægges katetre i perifer vene og arterie på bedøvede grise. Endvidere indlægges katetre i vena portae, og flowprober anbringes omkring vena portae og a. hepatica. Der foretages flowmålinger og PET-scanning samt indgift af tracere og udtages leverbiopsier under forløbet. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes grise. Med det formål at etablere en dyreeksperimentel model til undersøgelse af nerveimpuls og stimulation af hjertet frilægges hjertets nerver på bedøvede dyr. Der gennemføres en række måleog stimulationsprocedurer. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes kaniner og grise. Med det formål at undersøge motions betydning for hjertets og skeletmuskulaturens funktion trænes rotter på løbebånd i op til 2 timer dagligt, 5 dage om ugen i op til 8 uger. Dyrene skal under løbetræningen være under konstant observation og må ikke vise tegn på udmattelse. Efter endt træningsprogram bedøves rotterne, og der gennemføres forskellige fysiologiske målinger, hvorefter de aflives i bedøvelsen, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge skeletmuskulaturens normo- og patofysiologiske metaboliske funktion ved indførelse af plasmid DNA i muskulaturen indgives plasmid DNA i muskulaturen på bedøvede rotter, enten ved injektion, ved elektroporation eller ved genegun-metoden. Dyrene observeres i op til 2 måneder, hvorefter de bedøves igen, og der foretages intravital mikroskopi, even-

70 tuelt efter infusion af testsubstanser eller elektrisk stimulation af muskulaturen. Dyrene aflives i bedøvelsen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge eksistensen og funktionen af hormoner i skeletmuskulaturen indsprøjtes ekstrakt fra muskelvæv intravaskulært i bedøvede mus eller rotter eller i vågne dyr, der nogle dage forud herfor under bedøvelse har fået indlagt kateter i arterie eller vene. Der udtages blodprøver i op til 4 timer, hvorefter dyrene aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. a. Med det formål at følge reguleringen af resistin og resistinlignende stoffer induceres inflammation på mus ved intraperitoneal injektion af ovalbumin. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Efter 2 ugers observation bedøves dyrene, og der foretages lungeskylning. Dyrene aflives i bedøvelsen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. b. Med det formål at følge reguleringen af resistin og resistinlignende stoffer samt at følge glucosekoncentrationen i blodet injiceres recombinante proteiner intraperitonealt i mus. Efterfølgende udtages blodprøver. Efter ca. 2 uger bedøves dyrene, og der foretages lungeskylning. Dyrene aflives i bedøvelsen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne a og b må anvendes mus. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteterne i punkt a og b, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge cellulære fænomener i forbindelse med regeneration af skeletmuskulatur, herunder aktivering af myogene stamceller, induceres myogen reaktion i bedøvede dyr ved enten overskæring af mm. semitendinosus, ved fryselæsion af mm. gluteus superficialis, ved kemisk læsion af mm. gluteus superficialis eller mm. tibialis cranialis eller ved generel muskelbelastning ved løb på løbebånd. Dyrene må ikke under løbetræningen vise tegn på udmattelse. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. I nogle tilfælde injiceres myogene stamceller intravenøst. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene observeres i op til 12 uger, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter.

71 Med det formål at undersøge hjernens blodgennemstrømning, stofskifte og receptorforhold under normale og patofysiologiske forhold ved akut bakteriel meningitis indlægges under bedøvelse kateter i cisterna magna på rotter. Der skal gives smertelindrende behandling postoperativt. Efter nogle få dage induceres meningitis ved injektion af bakterier i cisternen. Efterfølgende skal der gennemføres intensiveret tilsyn med dyrene, og i kritiske faser mindst hver 8. time, jfr. justitsministeriets bekendtgørelse nr. 333 af 18. maj En del af dyrene vil blive behandlet med antibiotikum i forbindelse med undersøgelsen. Efter at infektionen er etableret, bedøves dyrene igen, og katetre indlægges i arterie og vene med henblik på infusion af farmaka, blod, elektrolytter og/eller toksiner, samt udtagning af blodprøver og målinger. Endvidere indlægges gennem borehul i kraniet et kateter i sinus confluens samt mikrodialysekateter eller måleprobe i hjernen. Ved hjælp af stereotaktisk udstyr indlægges guidekanyle til specifikt område af hjernen med henblik på læsion af hjernevæv med toksiske eller farmakologisk aktive stoffer. Under forsøget reguleres blodtrykket farmakologiskt, ved regulering af CO2-tensionen eller ved reduktion af blodvolumen. Dyrene perfusionsfikseres/aflives i denne bedøvelse. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge hjernens stofskifte, blodtilførsel og receptorforhold hos diabetiske dyr induceres tilstanden i rotter ved injektion af streptozotosin. Efter at diabetes er etableret, bedøves dyrene, og katetre indlægges i arterie og vene med henblik på infusion af farmaka, blod, elektrolytter og/eller toksiner, samt udtagning af blodprøver og målinger. Endvidere indlægges gennem borehul i kraniet et kateter i sinus confluens samt mikrodialysekateter eller måleprobe i hjernen. Ved hjælp af stereotaktisk udstyr indlægges guidekanyle til specifikt område af hjernen med henblik på læsion af hjernevæv med toksiske eller farmakologisk aktive stoffer. Under forsøget reguleres blodtrykket farmakologisk ved regulering af CO2-tensionen eller ved reduktion af blodvolumen. Dyrene perfusionsfikseres/aflives i denne bedøvelse. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge hjernens stofskifte, gennemblødning og receptorforhold ved eksperimentel subaraknoidalblødning eller ved andre former for forøget intrakranielt tryk indlægges under bedøvelse permanent kateter i cisterna magna på rotter med henblik på infusion af blod i subaraknoidalrummet, eller der indlægges et ballonkateter intraventrikulært med henblik på at opnå intrakranial trykforøgelse. Der skal gives smertelindrende behandling postoperativt. Efter nogle få døgn bedøves dyrene, og katetre indlægges i arterie og vene med henblik på infusion af farmaka, blod, elektrolytter og/eller toksiner, samt udtagning af blodprøver og målinger. Endvidere indlægges gennem borehul i kraniet et kateter i sinus confluens samt mikrodialysekateter

72 eller måleprobe i hjernen. Ved hjælp af stereotaktisk udstyr indlægges guidekanyle til specifikt område af hjernen med henblik på læsion af hjernevæv med toksiske eller farmakologisk aktive stoffer. Under forsøget reguleres blodtrykket farmakologisk ved regulering af CO2-tensionen eller ved reduktion af blodvolumen. Dyrene perfusionsfikseres/aflives i denne bedøvelse. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge hjernens stofskifte, gennemblødning og receptorforhold ved leversvigt induceres tilstanden i rotter ved oral eller parenteral indgift af levertoksisk stof (galactosamin) eller ved i bedøvelse at etablere portacavalanastomose. Der skal gives smertelindrende behandling postoperativt. Efter at leverinsufficiens er etableret, bedøves dyrene igen, og katetre indlægges i arterie og vene med henblik på infusion af farmaka, blod, elektrolytter og/eller toksiner, samt udtagning af blodprøver og målinger. Endvidere indlægges gennem borehul i kraniet et kateter i sinus confluens samt mikrodialysekateter eller måleprobe i hjernen. Ved hjælp af stereotaktisk udstyr indlægges guidekanyle til specifikt område af hjernen med henblik på læsion af hjernevæv med toksiske eller farmakologisk aktive stoffer. Under forsøget reguleres blodtrykket farmakologisk ved regulering af CO2-tensionen eller ved reduktion af blodvolumen. Dyrene perfusionsfikseres/aflives i denne bedøvelse. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge hjernens stofskifte, gennemblødning og recepterforhold under faste fastes rotter i op til 48 timer. Herefter bedøves dyrene, og katetre indlægges i arterie og vene med henblik på infusion af farmaka, blod, elektrolytter og/eller toksiner, samt udtagning af blodprøver og målinger. Endvidere indlægges gennem borehul i kraniet et kateter i sinus confluens samt mikrodialysekateter eller måleprobe i hjernen. Ved hjælp af stereotaktisk udstyr indlægges guidekanyle til specifikt område af hjernen med henblik på læsion af hjernevæv med toksiske eller farmakologisk aktive stoffer. Under forsøget reguleres blodtrykket farmakologisk ved regulering af CO2- tensionen eller ved reduktion af blodvolumen. Dyrene perfusionsfikseres/aflives i denne bedøvelse. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge relationer mellem neurotransmittersystemer og nervebaners projektion i hjernen injiceres tracer, neuroaktivt stof eller neurotoksiner ved hjælp af stereotaktisk teknik i specifikt hjerneområde på bedøvede rotter. I nogle tilfælde behandles dyrene forud for undersøgelsen med neuroaktive stoffer parenteralt eller i hjernen via guidekanyle, der ligeledes er indlagt med stereotaktisk teknik. I andre tilfælde behandles dyrene med farmakon i op til 12 uger oralt

73 eller par-enteralt, eventuelt med under bedøvelse implanteret osmotisk minipumpe. Behandlingen gentages eventuelt efter 1 til 2 måneder. Dyrene bedøves og perfusionsfikseres/aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge nyrens, herunder det juxtaglomerulære apparats rolle i organismens salt- og vandomsætning indlægges under bedøvelse kateter i aorta med henblik på perfusion. I nogle tilfælde unddrages rotterne vand i op til 48 timer forud for bedøvelsen. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes mus, rotter og kaniner. Med det formål at undersøge muskelcellers membranegenskaber og ionsammensætning efter elektrostimulation (elektroporation) bedøves rotter, og det ene bagben udsættes for elektrisk stimulation. Der udtages blodprøver før og under forløbet. Dyrene holdes bedøvede i op til 4 timer, hvorefter de aflives i bedøvelsen. I nogle få tilfælde lades dyrene vågne op af bedøvelsen og observeres i op til 3 uger. Der skal gives smertestillende behandling ved behov. I forbindelse med aflivningen udtages materiale til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge skader i muskulatur som følge af intens brug induceres muskelcelleskader i bedøvede rotter ved gentagen elektrostimulation af udvalgte muskler. Der udtages blodprøver før og under forløbet. Dyrene holdes bedøvede i op til 4 timer, hvorefter de aflives i bedøvelsen. I nogle få tilfælde lades dyrene vågne op af bedøvelsen og observeres i op til 3 uger. Der skal gives smertestillende behandling ved behov. I forbindelse med aflivningen udtages materiale til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at stimulere receptorer i hjertet til dannelse af atrial natriuretic peptide (ANP) foretages underbinding af gren fra venstre koronararterie på bedøvede rotter med henblik på induktion af hjerteinsufficiens. Der skal behandles med smertelindrende medicin postoperativt. Dyrene observeres i op til 3 uger, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge hvilken rolle mælkekirtlers blodgennemstrømning og forsyning med enkelte næringsstoffer spiller ved reguleringen af mælkesyntesen og mælkens sammensætning,

74 samt hvilken rolle lokalt dannende vasoaktive stoffer spiller for reguleringen af blodgennemstrømning, og hvorledes den metaboliske tilpasning til laktation afhænger af hormonel regulering under drægtighed og gennem laktationen, udføres faciliterende indgreb på dyrene under lokal eller universel bedøvelse med henblik på undersøgelserne: a. Indlæggelse af katetre i v. jugularis externa, a. carotis communis, v. epigastrica cranialis superficialis og a. pudenda externa. b. Med henblik på percutan udtagning af arterielle blodprøver og målinger lægges den midterste del af a. carotis communis og den ene v. epigastrica cranialis superficialis ud under huden på får og geder ved operativt indgreb. c. Udtagelse af små biopsier fra mælkekirtel og/eller muskulatur. d. Indoperering af vomfistel i køer. I forbindelse med forsøgene behandles grupper af dyr med vasoaktive hormoner og/eller metabolitter i fysiologiske doser. Dyrene skal i forbindelse med indgrebene være analgeserede/anæsteserede i fornødent omfang og gives smertestillende behandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes geder eller får og køer. De kirurgiske indgreb skal foretages af en dyrlæge med fornøden anæstesiologisk og kirurgisk indsigt og erfaring. 1. Med det formål at supplere in vitro studier af osteoblasters differentieringspotentialer med in vivo undersøgelser implanteres osteoblaster i normale og gonadectomerede mus subkutant sammen med hydroxyapatitpulver intraperitonealt i diffusionskammer eller subcapsulært i nyrerne. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene observeres i op til 8 uger, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. 2. Med det formål at supplere in vitro studier af osteoblasters differentieringspotentialer med in vivo undersøgelser etableres på bedøvede mus en standardiseret defekt i kranieknoglen eller tibia. Defekterne dækkes med hydroxyapatitpulver iblandet osteoblaster. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene observeres i op til 8 uger, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære denne forsøgsaktivitet, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion.

75 Med det formål at supplere in vitro studier af osteoblasters differentieringspotentialer med in vivo undersøgelser injiceres mærkede osteoblaster i museblastocyster, hvorefter blastocysterne implanteres i recipientmus. Disse dyr aflives efter ca. 2 uger, og fostrene udtages til videre undersøgelser. Musene skal være bedøvede i forbindelse med de invasive indgreb. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne 1, 2 og 3 må anvendes mus. Med det formål at undersøge sygelige tilstande relateret til kronisk uræmi, herunder specielt calcium-, fosfat-, D-vitamin- og parathyreoideahormonomsætningen, induceres uræmi i bedøvede rotter ved 5/6 nephrectomi udført i to tempi. Under forløbet fodres dyrene med normal diæt eller diæt med højt fosfatindhold. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene skal overvåges intensivt postoperativt. Dyrene observeres i op til 20 uger, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. Der udtages blodprøver under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge sygelige tilstande relateret til kronisk uræmi og at undersøge reversibiliteten heraf, induceres tilstanden i bedøvede rotter ved 5/6 nephrectomi udført i to tempi. Under forløbet fodres dyrene med normal diæt og diæt med højt fosfatindhold. Efter ugers observation bedøves dyrene igen og gennemgår isogen nyretransplantation. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene skal overvåges intensivt postoperativt. Efter yderligere 10 til 20 ugers observation aflives rotterne, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at afprøve immunosuppressive behandlingsregimer ved nyretransplantation foretages allotransplantation mellem DA-rotter og Lewis-rotter. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Den immunosuppressive behandling indgives oralt eller intraperitonealt 1 gang dagligt. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal overvåges intensivt postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge gammel parathyreoidismes hormonsekretion i relation til calciumog fosfatomsætningen i normale og uræmiske rotter foretages under bedøvelse parathyreoidectomi. På en del af dyrene foretages der nogle uger forud herfor under bedøvelse 5/6 nephrectomi. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Der udtages blodprøver under forløbet.

76 Dyrene skal overvåges intensivt postoperativt. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, dog senest efter en observationstid på ca. 10 uger. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge gammel parathyreoidismes funktion hos normale og uræmiske rotter foretages under bedøvelse stimulation/suppression af kirtlen ved induktion af hypo- eller hypocalcæmi intravenøs behandling med henholdsvis ethylenediamintetraacetic acid (EDTA) eller calcium. På en del af dyrene foretages nogle uger forud for behandlingen 5/6 nephrectomi i to tempi med henblik på at undersøge uræmi. Dyrene aflives i bedøvelsen. For de nephrectominerede dyr gælder, at de skal overvåges intensivt postoperativt, og at de ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer straks skal aflives. a. Med det formål at undersøge mekanismer for aldringsprocesser, herunder ændrede forhold mellem oxidant og antioxidant (oxidativt stress), behandles drægtige rotter med vitaminer og lignende stoffer via foderet eller med 2-nitropropan intraperitonealt. Efterfølgende aflives dyrene, og væv udtages fra fostre og moderdyr til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. b. Med det formål at undersøge mekanismer for aldringsprocesser, herunder oxidativt stress, foretages under bedøvelse 70% hepatektomi på rotter. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Efter 2 3 døgns observation aflives dyrene, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne a og b må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge transport og udskillelse af bikarbonat over tarmepitelet hos fisk samt undersøge, hvilken betydning den har for salt- og vandbalance, indlægges permanent-kateter på bedøvede fisk i halearterie eller dorsal aorta samt cranialt og caudalt i tarmen med henblik på prøveudtagning og perfusion. I forbindelse med undersøgelserne foretages ændringer af akvarievandets salinitet og perfusionvæskens sammensætning. Endvidere behandles fiskene med forskellige stoffer som angiotensin II, natriuretisk peptid, guanylin eller lignende. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, dog senest efter 4 døgns observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes indfangne skrubber (platichthys flesus) og opdrættede regnbueørreder (oncorhynchus mykiss).

77 Med det formål at øge forståelsen af psykiatriske sygdommes neurale grundlag og at udvikle behandlingsmetoder induceres tilstanden i rotter. Induktionen af psykiatrisk tilstand opnås enten ved stereotaktisk destruktion af specifikt hjerneområde eller ved implantation af elektroder/kanyler i bestemte hjernestrukturer på bedøvet dyr med henblik på stimulation og injektion. Alternativt etableres tilstandene ved manipulation af dyrenes opvækst- eller livsbetingelser, f.eks. maternal separation, kronisk mild stress. Efterfølgende behandles med neuroaktivt stof, eventuelt under anvendelse af under bedøvelse indopereret permanent venekateter eller osmotisk minipumpe. Effekten vurderes gennem simple adfærdstests. Eventuelt indlægges mikrodialyseprober i hjernen med henblik på metaboliske analyser. Der skal gives smertestillende behandling i forbindelse med de kirurgiske indgreb. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. K. Toksikologiske undersøgelser Egentlige toksikologiske afprøvninger gennemføres for størstedelen som følge af samfundets sikkerhedskrav til alle de substanser, der gennem anvendelse som lægemiddel eller i produktionen af varer af forskellig art, på arbejdspladsen, i føden eller ved deres blotte eksistens muligvis kan påvirke mennesker, dyr eller miljøet uhensigtsmæssigt. Der foreligger derfor såkaldte myndighedskrav, der nøje foreskriver fremgangsmåden ved undersøgelserne. En giftvirkning, der sætter hurtigt ind, betegnes som "akut" og kan oftest fremkaldes ved en enkelt indgift af teststoffet direkte i blodbanen. Den giftvirkning, der kan optræde efter længere tids påvirkning, benævnes som "kronisk". På baggrund af udviklingen i vor cellebiologiske og -toksikologiske viden vil nogle af disse giftvirkninger kunne afsløres ved studier på væv eller celler. Når mennesker eller dyr udsættes for stoffers skadelige virkninger, er det imidlertid samspillet mellem de mange organfunktioner, som afgør skadens omfang og natur. Dette begrunder nødvendigheden af anvendelsen af dyr for at opnå oplysninger om den almene sikkerhed ved stoffers anvendelse i hjem, på arbejdspladsen eller som lægemidler og samtidigt få den viden, der er nyttig ved behandling af forgiftninger. Giftvirkningens mekanismer og de organfunktioner, der skades, registreres officielt og internationalt, og derved kan undersøgelsernes resultat også medvirke til, at den totale anvendelse af dyr begrænses, idet man nu forsøger at anerkende nationale undersøgelser internationalt. For at afprøve et stofs umiddelbare giftvirkning er det for længst erkendt, at forløbet af undersøgelsen ikke nødvendigvis skal ende med dyrets død. For at få de krævede oplysninger om sikkerhed eller risici har Dyreforsøgstilsynet i de seneste år søgt fremmet, at OECD-vejledningens såkaldte "Fast dosis test" (Fixed dose method) anvendes som officiel afprøvning for akut giftvirkning i stedet for den omdiskuterede LD50 test. Herved er antallet af forsøgsdyr reduceret væsentligt i forhold til tidligere krav. Belastningen, som dyrene udsættes for, er som oftest ringe, idet mange stoffer viser

78 sig at være ugiftige inden for det dosisinterval, som foreskrives. Giftvirkningen kan også alene udløses lokalt, hvorfor stoffernes lokale effekt på hud og slimhinder samt i åndedræts- eller fordøjelsesorganer er genstand for særlige undersøgelser. Idet de anvendte undersøgelser kan kræve hyppige doseringer, og forløbet kan gå over lang tid, er der udvist speciel opmærksomhed ved disse tilladelser. Dette gælder også den såkaldte øjenirritationstest, som efter offentlige forskrifter og krav skal gennemføres ved nogle afprøvninger på få dyr (kaniner). Ifølge forskriften fortsættes prøven ikke såfremt det første dyr udviser reaktioner. Stoffer, der ved forudgående undersøgelser har vist en vævsbeskadigende virkning, må ikke gennemgå denne øjentest. Under denne hovedtype hører også afprøvning af stoffernes kræftfremkaldende egenskaber og mulige påvirkninger af arveanlægget i cellerne (mutagene effekt). Dette indgår som et nødvendigt supplement til afprøvningen i cellekulturer, idet et negativt udfald af denne ikke giver fuld sikkerhed for, at stofferne ikke kan fremkalde svulster efter længere tids indgift til dyr eller mennesker. Desuden skal stoffernes eventuelle skadelige effekt på reproduktion, fertilitet eller fostre afprøves. Ved disse undersøgelser må det intakte dyr nødvendigvis påvirkes af stoffet over længere tid, men afprøvningerne medfører ingen skade eller ubehag for det voksne moderdyr, idet doserne nødvendigvis er lave og utoksiske. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers toksikologiske effekt indgives teststof oralt eller parenteralt ved enkel eller gentagen dosering i dyr. Doseringen skal tilrettelægges således, at dosis trinvis øges til det nødvendige niveau. Der indlægges, under bedøvelse, katetre i arterie og vene med henblik på infusion, prøveudtagning og målinger. Der udtages blodprøver under forløbet. Eventuelt fastes og/eller tørstes dyrene i op til 24 timer forud for doseringen. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge Gc-globulins toksiske effekt ved intravenøs indgift i rotter injiceres 8,5 mg/kg 4 gange med 1 døgns mellemrum. Kontrolgruppen indgives kun buffer. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene aflives efter 4 døgns observation, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge teststoffers toksikologiske effekt indgives teststof enten med enkel eller gentagen dosering i op til 2 uger oralt eller parenteralt. I forbindelse med undersøgelsen ind-

79 lægges eventuelt permanente katetre i arterie og vene på bedøvede dyr med henblik på infusioner, prøveudtagninger og målinger. Der skal gives smertestillende behandling ved behov. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene anbringes eventuelt i perioder på op til 24 timer i metabolismebure. I nogle tilfælde unddrages dyrene foder og/eller vand i op til 16 timer. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers toksicitet indgives som engangsdosis efter fast dosis metoden teststof til dyr oralt, parenteralt eller dermalt. Dyrene observeres i op til 2 uger, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers toksicitet indgives som gentagen dosering i op til 1 år teststof til dyr oralt, parenteralt, nasalt, pulmonalt eller dermalt. Dyrene observeres i 13 uger efter sidste dosering, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter, grise og hunde. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers lokalirriterende effekt indgives ved enkelt eller gentagen dosering teststof til dyr oralt, subcutant, intramuskulært, intravenøst eller appliceres dermalt. Dyrene observeres i op til 100 dage, hvorefter de aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes kaniner og grise. Med det formål at undersøge D-vitamin analogers effekt på calciumniveauet i organismen indgives teststof oralt eller parenteralt til rotter dagligt i 7 dage. Dyrene opstaldes under hele forsøget, 7 døgn, i metabolismebure med henblik på urinopsamling. Ved forsøgenes afslutning bedøves dyrene, og der udtages blodprøver. Herefter aflives de i bedøvelsen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. L. Onkologiske undersøgelser De omfatter flere typer indgreb nemlig fremkaldelse af tumorvækst ved podning med tumorceller direkte ind i væv eller organer, transplantation af hele tumorer på det forud normale dyr, forsøgsopstillinger med administration af tumorfremkaldende stoffer til normale dyr eller behandling med forventet væksthæmmende stoffer til dyr med kræft.

80 Dette giver muligheden for både at undersøge de nærmere mekanismer ved tumorinduktion og - vækst og ved spredningen (metastasering) af tumorer i dyret. Organismens egne reaktioner kan dermed inddrages i undersøgelsen af stoffer, der hæmmer tumorcellernes vækst, hvorfor dyreforsøg er et nødvendigt supplement til de alternative in vitro undersøgelser. Formålet kan også være, at der kun ved podning på dyr kan fremskaffes tilstrækkelige mængder af specielle tumorceller til in vitro studier for helt specifikt at undersøge teststoffernes evne til at hæmme cellernes vækst eller væsentlige cellefunktioner, før stoffernes værdi i behandlingsøjemed kan bedømmes og derfra motivere, at de benyttes i afsluttende undersøgelser på dyr. Specifikke undersøgelser på dyr er i vid udstrækning en forudsætning for både gennemførelse af rationel samfundsorienteret forebyggelse og for effektiv behandling af anvendelsen af tumorfremkaldende stoffer og for effektiv behandling af cancer patienter. Væksten af tumorvævet er afhængig af blodforsyningen, hvorfor nydannelse af blodkar (angiogenesen) indgår i nogle af de tilladte undersøgelser. Ved angivelser i tilladelserne af den maksimale tumorvækst søger man at sikre sig mod uønskede virkninger og fysiske belastninger. Påvirkningen af almentilstanden følges gennem kontrol med ædelyst, vægttab, adfærd og dyrenes udseende. Dyrene aflives, når foresøgets formål er opnået eller såfremt huden over tumor ulcereres eller tumor nekrotiseres. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med det formål at undersøge dyrkede cellers cancerogene egenskaber og metastaseringsegenskaber injiceres celler subcutant eller intravenøst i naturlige eller genetisk modificerede mus, som eventuelt er gonadektomerede. Ved vækst af primær tumor på op til 1 gram bedøves musene, og tumor ekstirperes. Den enkelte tumors vægt må ikke overstige 1 gram svarende til en diameter på en kugleformet tumor på 12 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af musenes normalvægt. Ved sikre symptomer på metastaser skal musene aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge biokemiske og cellebiologiske mekanismer involveret i neo-angiogenesen og vævsdannelsen ved sårheling påføres naturlige og genetisk modificerede mus under bedøvelse et 10 mm langt sår gennem huden på ryggen. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene observeres i op til 3 uger, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus.

81 Med det formål at undersøge metabolismen for Mts1 protein foretages partiel hepatectomi (maksimalt 20%) på bedøvede, 6 uger gamle, naturlige og genetisk modificerede mus. Tre dage senere injiceres 100 µl opløsning af C14-mærkede aminosyrer intraperitonealt. Efter yderligere 24 timer aflives dyrene, og væv udtages til nærmere undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at udvikle lægemidler baseret på LNA antisense teknologi (Locked Nucleid Acid) med hæmmende effekt på cancersygdomme transplanteres tumorceller/-væv subcutant i mus. Testlægemiddel indgives oralt eller parenteralt under forløbet. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 gram svarende til en diameter på en kugleformet tumor på 12 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. Der må ikke forekomme ulcerationer i forbindelse med tumorer. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at udvikle behandlingsstrategier mod tumorvækst transplanteres tumorceller eller væv til sederede eller bedøvede immundeficiente eller immunsupprimerede dyr. Der behandles med teststof eller genterapi under forløbet. Der skal gives smertestillende behandling ved behov. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 g (mus) og 4 g (rotter) svarende til en diameter på en kugleformet tumor på henholdsvis 12 mm og 20 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. Der må ikke forekomme ulcerationer i forbindelse med tumorer. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter og grise. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten vedrørende grise, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at undersøge humane tumorers metastaseringsmønster efter solid transplantation til immundefekte mus, herunder adhæsionsmolekylers betydning for spredning af tumor til lungerne, transplanteres små stykker tumorvæv subcutant på bedøvede mus. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 g svarende til en diameter på en kugleformet tumor på 12 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. Der må ikke forekomme ulcerationer i forbindelse med tumorer. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, dog senest efter 4 måneders observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus.

82 Med det formål at afprøve antiangiogene faktorers effekt på endothelcellers vækst indopereres små diffusionskamre eller små stykker tumorvæv subcutant på bedøvede immundefekte mus. Under forløbet behandles med angiogenesefremmende eller hæmmende stof. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 g svarende til en diameter på en kugleformet tumor på 12 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. Der må ikke forekomme ulcerationer i forbindelse med tumorer. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, dog senest efter 4 måneders observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge chaperoneproteiners evne til at øge optagelsen af tumorantigener i antigenpræsenterende celler samt at undersøge disse cellers evne til efterfølgende at mediere tumorspecifikt immunrespons med afstødning eller hæmmet vækst til følge injiceres murine fibrosarcomceller subcutant i immundefekte mus. Dyrene immuniseres intramuskulært eller intraperitonealt med chaparoneprotein i neutral buffer før og/eller under den tumorbærende periode. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 g svarende til en diameter på en kugleformet tumor på 12 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. Der må ikke forekomme ulcerationer i forbindelse med tumorer. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, dog senest efter 3 måneders observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge potentielle lægemidlers hæmmende eller fremmende effekt på tumorvækst implanteres tumorceller eller tumorvæv subcutant i normale eller gonadectomerede mus. Teststof indgives oralt eller parenteralt, eventuelt sammen med østrogen. Dyrene observeres i op til 6 måneder, hvorefter de aflives. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 gram svarende til en diameter på en kugleformet tumor på 12 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvægt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. M. Blod-/vævs-/organdonering Såfremt dyr først aflives ved anerkendte metoder før udtagelse af forskellige materialer er disse indgreb ikke at betragte som dyreforsøg i henhold til Dyreforsøgsloven. Sker udtagelsen derimod på det levende dyr, kræver det specificeret tilladelse, hvoraf det følger, hvilken form for smertebeskyttelse og/eller bedøvelse, der skal anvendes. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg:

83 Med det formål at fremskaffe frøæg til in vitro undersøgelser af rekombinante proteiners fysiologiske funktion og udtryk udtages æg fra ovarierne på bedøvede frøer. Der gives smertestillende behandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes frøer (Xenopus laevis). Med det formål at fremskaffe frøæg til in vitro forsøg bedøves frøer, og ægceller udtages via 7 mm lang laparotomi. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes frøer (Xenopus Laevis). Med det formål at fremskaffe blod til blodpræparater og sera til analytiske, diagnostiske og serologiske formål tappes dyr under bedøvelse totalt for blod. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter, gerbils, hamstere og kaniner. Med det formål at fremskaffe macrophager til in vitro undersøgelser behandles mus intraperitonealt med NIH-thioglycolat. Dyrene aflives 3 døgn senere, og macrophager høstes ved skylning af bughulen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at undersøge den genetiske variation i og mellem forskellige bestande af løvfrøer udtages biopsi fra halen på løvfrøhaletudser med henblik på bestemmelse af DNA-profil. Haletudserne indfanges fra forskellige habitater og slippes fri umiddelbart efter prøveudtagningen. Hertil må anvendes haletudser (Hyla arborea). Med det formål at fremskaffe blod til fremstilling af blodprodukter udtages blod fra dyr. Ved totaltapning skal dyrene være bedøvede. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter, marsvin, hamstere, kaniner, grise og hunde. Med det formål at fremskaffe væv/organer til in vitro undersøgelser bedøves dyr med henblik på perfusion og vævsudtagning. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at fremskaffe blod til transfusions- og laboratoriebrug bedøves rotter og totaltappes.

84 Med det formål at fremskaffe materiale til etablering af cellekulturer og organotypiske vævskulturer udtages materiale fra fostre og op til 20 dage gamle rotteunger. Fostrene udtages under bedøvelse fra drægtige rotter ved kejsersnit og decapiteres. Moderdyrene aflives i bedøvelsen. I nogle tilfælde behandles moderdyret eller afkom med neuroaktivt stof forud for aflivningen. Dette administreres oralt eller parenteralt, eventuelt kontinuerligt ved hjælp af under bedøvelse subcutant implanteret osmotisk minipumpe. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes drægtige rotter + afkom. Med det formål at fremstille angiotensinogenrigt plasma til laboratoriebrug behandles dyr subcutant med østrogen i 3 dage. Herefter bedøves dyrene, og nyrerne eksstirperes. Efter et døgn bedøves dyrene igen og afblødes. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes rotter og får. Med det formål at fremskaffe blod til undersøgelse af normalværdier for en række blodbårne parametre i vågne, ustressede SPF-grise udtages blodprøver dels percutant fra perifer vene og dels via forud herfor under bedøvelse indlagt permanent kateter fra central vene. Der skal gives smertehindrende behandling postoperativt ved behov. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes grise. Med henblik på at fremskaffe organer til transplantation bedøves rotter, og de ønskede organer isoleres. Dyrene aflives i bedøvelsen. N. Økotoksikologiske undersøgelser Der vil i de foregående afsnit være undersøgelser, der kunne henføres til denne gruppe. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med det formål at undersøge hasselmusens biologi specielt i relation til dens forekomst og habitatkrav foretages øretatovering og udtagning af biopsi på bedøvede hasselmus. Dyrene udsættes i naturen umiddelbart efter opvågning. Hertil må anvendes vildtlevende, indfangede hasselmus.

85 O. Reproduktionsbiologiske undersøgelser Denne opdeling for anvendelsen af forsøgsdyr er begrundet i den øgede anvendelse af egentlige in vitro undersøgelser baseret på organ- eller vævsmateriale udtaget fra enten normale dyr eller dyr, som forinden har været behandlet på forskellig vis. Det er typisk for disse undersøgelser, at de befatter sig med isolerede mekanismer, som i sig selv ikke belaster dyret, idet der ikke sker funktionsødelæggende påvirkninger. Muligheden for direkte påvirkning af det genetiske materiale i ægcellen udløser et behov for at isolere æg til studier og senere placering i såkaldte rugemødre. Interessen for de vilkår og påvirkninger, som er selve reproduktionen, er en naturlig følge af arbejdet med de genetisk modificerede embryoner. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med det formål at fremskaffe æg/embryoner til in vitro manipulering (fertilisation, inkubering, biopsering, frysning, kloning) og transplantation til recipient behandles kvæg med hormonpræparater med henblik på superovulation og/eller brunst-synkronisering. Syv dage efter brunsten/insemi-nationen, foretages under rygmarvsbedøvelse udskylninger af æg/embryoner fra donor. Der foretages endvidere transplantation af in vitro manipulerede embryoner til recipienter, der eventuelt er hormonbehandlede. Med henblik på at iagttage effekten af in vitro indgreb på æg/embryoner lades de drægtige dyr fuldføre drægtigheden og føde fostrene. Afkommet må holdes i live igennem længere tid med henblik på at vurdere dets udvikling. Der udtages blodprøver under forløbet. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes kvæg. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten, som indebærer overførsel af klonede embryoner til recipientdyr, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Dyreforsøgstilsynet gør opmærksom på, at de eventuelt fødte, klonede kalve er en del af forsøget og således er under dyreforsøgsloven, indtil de aflives, eller andet aftales med Dyreforsøgstilsynet. Dyrenes trivsel skal følges nøje, og Dyreforsøgstilsynet anmoder om rapport over forsøgets forløb. Det bedes meddelt Dyreforsøgstilsynet, hvor kalvene fødes, og hvortil de eventuelt måtte flyttes. Under hensyn til at denne tilladelse som anført er meddelt i medfør af dyreforsøgsloven, tilføjes, at det ligger uden for Dyreforsøgstilsynets opgave at tage stilling til, om kloning hvad enten det

86 sker ved indføring af arvemateriale fra kropsceller eller ved deling af befrugtede ægceller er forenelig med eventuelle andre regelsæt. Med det formål at fremstille sterile hanmus og rotter foretages vasektomi bilateralt på bedøvede dyr. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med henblik på embryotransfer overføres embryoner via laparotomi til uterus på bedøvede mus og rotter. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. De kirurgiske indgreb skal foretages i samarbejde med den til virksomheden knyttede forsøgsdyrs-dyrlæge. Med henblik på produktion og opsamling af oocyter og embryoner fra grise behandles dyrene med injektion af choriongonadotropin. Oocyter og embryoner opsamles, efter at dyrene er aflivet. Hertil må anvendes grise. Med det formål at udvikle en non invasiv teknik til overførsel af embryoner til recipientsøer indføres et kateter per viam naturalem til cavum uteri til overførsel af tracerstof eller embryoner. Som kontrol overføres embryoner via laparatomi til uterus på bedøvede dyr. Eventuelt behandles søerne forud for procedurerne med choriongonadotropin. Der skal gives smertebehandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes grise. Ved bedøvelse af dyr bør barbiturater ikke anvendes i forbindelse med overlevelsesforsøg. Valg af bedøvelsesmiddel skal ske i samråd med den tilsynsførende dyrlæge. P. Tilladelser til undervisningsformål Med udviklingen af de kirurgiske teknikker (f.eks. kikkertkirurgi og karkirurgi) og betydningen af den kirurgiske træning af læger, har grisen vist sig at være et velegnet forsøgsdyr. Desuden må det påpeges, at uddannelseskravene til de personer, som udfører dyreforsøg og de dermed forbundne tekniske indgreb, også er øget, og kun kan tilfredsstilles gennem opøvelser under vejledning af erfarne personer, som således må tildeles tilladelser i fornødent omfang. Det skal betones, at Dyreforsøgslovens krav om nyttevirkningen af et dyreforsøg til fulde efterkommes. Det bør i denne for-

87 bindelse tilføjes, at Dyreforsøgstilsynets dyrlæge deltager som underviser på mange af de kurser, der gennemføres for personer der skal beskæftige sig med dyreforsøg. Deltagelse i disse kurser er blandt andet en forudsætning for den personlige tildeling af en dyreforsøgstilladelse. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med henblik på undervisning af studenter i respirationsfysiologiske forhold hos fisk placeres permanent kateter i relation til gællerne med henblik på målinger på forskellige fisketyper. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes fisk. Med det formål at afprøve nyt kirurgisk og diagnostisk udstyr og at oplære læger og studerende i basale og specielle kirurgiske teknikker gennemføres indgreb på bedøvede grise. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes grise. a. Med henblik på undervisning af kursister og studerende i forsøgsdyrskundskab udføres en række manipulationer med og indgreb på dyr (håndtering, udtagning af vævsprøver, injektionsteknikker, anæstesier, mindre kirurgiske indgreb, aflivningsteknikker o.a.). Ved de kirurgiske indgreb skal dyrene være universelt bedøvede og aflives i samme bedøvelse. I det omfang smertevoldende indgreb har karakter af demonstrationer, skal der altid anvendes universelt bedøvede dyr, og disse skal altid aflives inden bedøvelsens ophør. b. Med henblik på oplæring i basale og specielle kirurgiske teknikker gennemføres indgreb på bedøvede dyr. Dyrene aflives i bedøvelsen. Til punkterne a og b må anvendes mus, rotter, marsvin, hamstere, kaniner, grise, får, geder, hunde, frøer og fisk. Med det formål at opøve personalets færdigheder i eksperimentelle indgreb udføres en række indgreb på rotter (udtagning af vævs- og blodprøver, injektionsteknikker, anæstesier, kirurgiske indgreb, aflivningsteknikker og lignende). Aktiviteterne skal i fornødent omfang foregå på aflivede eller totaltbedøvede dyr og i øvrigt under iagttagelse af reglerne om bedøvelse i lovens 7. Med henblik på undervisning af studerende i anvendt farmakologi, herunder specielt leverens omsætning af bedøvelsesmidler, forbehandles rotter med cimetidin eller fenemal for at påvirke leverens enzymkapacitet. Efterfølgende bedøves ubehandlede og behandlede rotter af de studerende

88 med hexobarbital, og effekten registreres. Der udtages blodprøver under bedøvelsen. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Q. Metodeafprøvning Under denne kategori rubriceres dyreforsøg, hvor man udvikler nye operationsteknikker, nye behandlingsmetoder eller etablerer dyremodeller for sygdomme hos mennesker og dyr. Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: Med det formål at undersøge og evaluere det regenerative respons i forbindelse med nye behandlingsmetoder af traumatiske ledbruskskader induceres små bruskskader enten i det ene eller i begge knæled på bedøvede geder. Med henblik på behandling udtages under bedøvelse 2 uger før behandlingsindgrebet celler/væv fra ledbrusk, ribbensbrusk og knoglemarv. Dyrene skal behandles med smertelindrende medicin postoperativt (Romefen vet.). Det opererede knæled immobiliseres eventuelt postoperativt i op til 2 uger. Dyrene observeres i op til 2 år, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Hertil må anvendes geder. Dyreforsøgstilsynet ønsker at overvære forsøgsaktiviteten, hvorfor De i god tid inden forsøgets start bedes underrette tilsynet herom med henblik på inspektion. Med det formål at afprøve en metode til behandling af defekter i ledbrusk udtages under bedøvelse biopsi fra menisk i det ene knæled, og en defekt i brusken kreeres samtidig. Bruskcellerne dyrkes in vitro i tredimensional skabelon. Efter ca. 3 uger indopereres skabelonen med de dyrkede celler i den tidligere inducerede bruskdefekt. Dyrene skal smertebehandles postoperativt, enten 3 x pr. døgn med buprenorphin eller 2 x pr. døgn med NSAID, f.eks. Romefen. Dyrene observeres i op til 6 måneder, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes kaniner. Med det formål at undersøge sammenhængen mellem volumenmålinger af strukturer i centralnervesystemet ved magnetisk resonansskanning (MRI) og de makroskopisk-anatomiske fund bedøves grise og MR-skannes. Dyrene aflives i bedøvelsen, og materiale udtages til videre undersøgelser. Hertil må anvendes grise.

89 Med det formål i en dyreeksperimentel model at afprøve et nyt behandlingsprincip over for hyperaktiv urinblære fastlægges grisens normale væskeindtag, miktionsfrekvens og urinvolumen. Efterfølgende behandles dyrene ved gentagen dosering oralt eller intravenøst med calciumkanalåbnere, og målingerne gentages. Dyrene anbringes i forbindelse hermed i metabolismebure. I tilfælde af væsentlig påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal tilstanden straks afhjælpes, eller dyrene aflives. Efter endt observationstid bedøves dyrene, og nerver til urinblæren frilægges, katetre indlægges i kar og urinblære med henblik på stimulering, infusion, prøveudtagning og målinger. Calciumkanalblokkere indgives under forløbet. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes grise. Med det formål at undersøge, om tynde nervefibre selektivt kan aktiveres med specialimpulser, frilægges n. ischiadicus på bedøvede rotter. I forbindelse med undersøgelsen indlægges katetre i trachea og i halskar med henblik på ventilation, infusion, prøveudtagning og målinger. Elektroder placeres på den frilagte og overskårede nerve med henblik på stimulation og målinger. Dyrene aflives i bedøvelsen. Med det formål at udvikle en teknik til in vivo overførsel af DNA i celler med henblik på genterapi injiceres DNA under tryk systemisk eller lokalt i organer på bedøvede dyr. I tilfælde, hvor leveren er måleorgan, foretages i nogle tilfælde partiel hepatektomi med henblik på at fremme celledelingen. Eventuelt indgives farmakologisk aktive stoffer under forløbet for at påvirke optagelsen af DNA. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter, marsvin, kaniner og grise. Med det formål at undersøge biologiske processer i forbindelse med indvækst og afstødning af transplantater transplanteres celler, væv eller organer i dyr. Der anvendes hovedsagelig immundeficiente mus eller rotter. Normale dyr immunsupprimeres farmakologisk eller ved bestråling. Eventuelt behandles under forløbet med genterapi. Der udtages blodprøver i forbindelse med undersøgelserne. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter og grise. a. Med det formål at validere og raffinere magnetisk resonans (MR) metoder og at anvende disse til at karakterisere fysiologiske og patofysiologiske processer foretages på bedøvede dyr invasiv afbrydelse af blodforsyningen til et organ eller organområder i forbindelse med MR-scanning. I

90 forbindelse med scanningen gennemføres terapeutiske strategier, herunder administration af farmaka samt elektroporation. Dyrene aflives i bedøvelsen. b. Med det formål at validere og raffinere magnetisk resonans (MR) metoder og at anvende disse til at karakterisere fysiologiske og patofysiologiske processer i normale og tumorbærende dyr gennemføres under bedøvelse MR-scanning op til 8 gange over 8 uger. I forbindelse med scanningen gennemføres terapeutiske strategier, herunder administration af farmaka samt elektroporation. Ved tumorvækst må den enkelte tumors vægt ikke overstige 1 g (mus) og 4 g (rotter) svarende til en diameter på en kugleformet tumor på henholdsvis 12 mm og 20 mm. Den samlede tumormasse må ikke overstige 10% af dyrenes normalvært. Der må ikke forekomme ulcerationer i forbindelse med tumorer. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, dog senest efter 8 ugers observation. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Til punkterne a og b må anvendes mus eller rotter. Med det formål at undersøge den fysiologiske betydning af ekspressionen af T-celle receptorer (TCR) og cyklingsmekanismerne mellem T-celler og endosomer gennemføres en række reproduktionsbiologiske indgreb med henblik på fremstilling af genmodificerede mus med forskellige mutationer i deres TCR med henblik på anvendelse til immunologiske undersøgelser. a. Med det formål at fremstille sterile hanmus underbindes sædlederne på bedøvet dyr. b. Med det formål at isolere befrugtede æg fra mus induceres superovulation ved behandling med hormoner. Dyrene aflives, før de befrugtede æg udtages. c. Med det formål at fremstille transgene mus indlægges genmodificerede embryoner i uterus via laparotomi på bedøvede mus. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. Med det formål at opnå selektiv signalopsamling fra perifer nerve og at begrænse den elektriske støj påmonteres en elektrode på n. tibialis med henblik på signalopsamling og stimulation på bedøvede og spinalblokerede kaniner. Ved forsøgenes afslutning udtages n. phrenicus og n. vagus til in vitro tests. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes kaniner. Med henblik på undersøgelse af marsvins reproduktionsforhold og fysiologi med videre udtages lø-bende blodprøver, vaginal smear, sæd samt måling af legemstemperaturer og ultralydsscanning af ovarier, testes, uterus og bækkenet. Hertil må anvendes indfangede (bifangst) marsvin.

91 Med det formål at afprøve nye former for behandling af akut lungeinsufficiens med hjertelungemaskine anlægges ligatur omkring truncus pulmonalis på bedøvede grise. Endvidere indlægges katetre i v. cava og aorta samt i a. carotis communis og v. jugularis externa med henblik på tilslutning til kunstig lunge, pumpe samt udtagning af blodprøver og målinger. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes grise. Med det formål at undersøge teststoffers effekt på tarmens heling efter resektion reseceres et lille stykke af colon på bedøvede rotter. Under forløbet udtages blodprøver og indgives teststof oralt eller parenteralt i op til 9 dage. Der skal gives smertelindrende behandling postoperativt. Dyrene aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge den stimulerende effekt af Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) og Bone Morphogenic Protein 2 (BMP-2) på knogleheling med henblik på at forebygge dannelsen af pseudoarthrose foretages på bedøvet kanin osteotomi på det ene tibia med efterfølgende intern skinnefiksering. Periost og endost excideres proximalt og distalt for osteotomien og VEGF / BMP-2 holdig gel placeres mellem knogleenderne. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene observeres i op til en måned, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes kaniner. Med det formål at undersøge metabolske ændringer i nyrerne i forbindelse med arteriel, venøs og ureteral obstruktion samt ved CO2-pneumoperitoneum indlægges mikrodialyseprober i nyrerne på bedøvede grise. Der anlægges tillige temporær ligatur på a. og v. renalis samt ureter på den ene nyre. Endvidere etableres CO2-pneumoperitoneum til intraabdominalt tryk på 15 mm Hg. Grisene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes grise. Med det formål at etablere en optimal elektrisk stimulation af colon descendens med henblik på induktion af funktionel contraktion anlægges elektroder i tarmvæggen på bedøvede grise. I forbindelse med undersøgelserne indgives specifikke blokkere i lokal arterie. Dyrene aflives i bedøvelsen. Hertil må anvendes grise. R. Andre

92 Under denne hovedtype er der i beretningsåret givet følgende tilladelser til forsøg: a. Med henblik på at fremskaffe mus til forsøg uden påvirkning af egne kønshormoner eller thymus foretages under bedøvelse gonadectomi eller thymectomi. Der skal gives smertestillende behandling ved behov. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus. b. Med det formål at forbedre biokompatibiliteten for materialer til ortopædkirurgisk brug afprøves materialekombinationer ved følgende kirurgiske indgreb i dyr: Testmateriale/celler implanteres subcutant på ryggen i mus eller på låret i mus og rotter. Testmateriale/celler appliceres på theca cranii. Induktion af standardiseret brud på en rørknogle i bagbenet på mus, rotter og kaniner. Testmateriale/celler anbringes i forbindelse med brudstedet. Bruddet immobiliseres ved ekstern fiksering. Testmateriale/celler appliceres i knoglecavitet udboret i craniet, eller celler injiceres intraarterielt eller venøst på mus eller rotter. Dyrene skal være bedøvede i forbindelse med de kirurgiske indgreb og behandles postoperativt med smertestillende medicin. Dyrene aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus, rotter og kaniner. De kirurgiske indgreb skal foretages af en person med fornøden anæstesiologisk og kirurgisk indsigt og erfaring. Med det formål at fremstille C-fiber denerverede mus og rotter til brug i andre forsøg med henblik på at undersøge samspillet mellem inflammation og nervesystemets C-fibre behandles nyfødte unger med capsaicin subcutant. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med henblik på at fremstille forsøgsdyr (mus og rotter), som er uden påvirkning af egne hormoner, foretages under bedøvelse bilateral adrenalectomi. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene skal i hele det postoperative forløb have fri adgang til saltvand. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus eller rotter.

93 Med det formål at fremskaffe diabetiske mus og rotter til anvendelse ved afprøvninger af teststoffer indgives streptozotocin (mus, rotter) eller alloxan (rotter) intravenøst. Ved belastende diabetes skal dyrene behandles eller aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at udvikle og afprøve nye lægemidler med effekt på diabetes og obesitas indgives testlægemiddel oralt eller parenteralt til bedøvede dyr. Der udtages blodprøver og eventuelt biopsier under forløbet. Efter en undersøgelsestid på op til 6 timer perfusionsfikseres/aflives dyrene i bedøvelsen. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at udvikle og afprøve nye lægemidlers effekt på diabetes og følgesygdomme indgives testlægemiddel 1 til 2 gange dagligt i op til 4 uger i normale, fede eller diabetiske mus eller rotter. Eventuelt indlægges kateter i kar eller osmotisk minipumpe subcutant under bedøvelse med henblik på infusion. Der udtages i bedøvelse blodprøver og eventuelt biopsier under forløbet. Efter endt observationstid bedøves dyrene og perfusionsfikseres/aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at udvikle lægemidler med effekt på helingen af sår specielt hos diabetiske patienter induceres et standardiseret sår på ryggen af mus eller rotter. Sårlængden må for musenes vedkommende maksimalt være 10 mm, for rotternes vedkommende 20 mm. Dyrene skal smertebehandles postoperativt. Dyrene behandles herefter oralt eller parenteralt dagligt i op til 3 uger eller til fuld opheling. Efter endt observationstid bedøves dyrene og perfusionsfikseres/aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter. Med det formål at udvikle og afprøve nye lægemidlers effekt på regeneration af pancreasvæv, herunder specielt de insulinproducerende celler, foretages under bedøvelse partiel pancreatectomi på op til 40% af pancreasvævet. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Efterfølgende behandles med teststof oralt eller parenteralt 1 til 2 gange dagligt i op til 3 uger. Der foretages oral glucosetolerancetest under forløbet. Efter endt observationstid bedøves dyrene og perfusionsfikseres/aflives. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes mus og rotter.

94 Med det formål at afprøve den stimulerende effekt af vævsfaktorer eller stamceller i kombination med knogletransplantat eller syntetisk knoglesubstitut på knoglevækst indlægges materialet i inducerede knogledefekter på kaniner. I universel bedøvelse udføres knogledefekter bilateralt i ulnae, og det valgte graftmateriale ilægges defekterne. Der osteosynteres med metalskinner for at sikre knoglernes stabilitet. Stamceller høstes under bedøvelse ved aspiration fra ossa iliaca. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene observeres i op til 12 uger, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes kaniner. Med det formål at afprøve den stimulerende effekt af vævsfaktorer eller stamceller i kombination med knogletransplantat eller syntetisk knoglesubstitut på knoglevækst indlægges materialet i inducerede knogledefekter på grise eller anvendes til induktion i forbindelse med posterolateral dese. I universel bedøvelse frilægges columna vertebralis på to niveauer, og graftmateriale placeres mellem processi transversi. Endvidere udbores en cylinder på 8 mm i hver ramus mandibulae og erstattes med graftmateriale. Der skal gives smertestillende behandling postoperativt. Dyrene observeres i op til 24 uger, hvorefter de aflives, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Hertil må anvendes grise. Denne tilladelse, der gives i medfør af dyreforsøgslovens 3, stk. 1, 3. punktum, med varighed i 5 år, har følgende omfang og vilkår: a) Tilladelsen kan finde anvendelse i den indledende fase af nye projekter og ikke ud over 1 år for hvert projekts vedkommende. Når der måtte blive truffet beslutning om at videreføre det pågældende projekt i en permanent form, dog senest efter 1 år, vil det være nødvendigt, at der af en seniorforsker søges opnået tilladelse efter sædvanlige retningslinier. 1-års-fristen regnes fra første indgreb på dyr omfattet af dyreforsøgsloven. b) Senest 1 måned før der bliver tale om at foretage indgreb på dyr som led i projektet, skal der foretages indberetning til Dyreforsøgstilsynet på ansøgningsskema del C med angivelse af det tidligste tidspunkt, på hvilket der agtes gjort brug af tilladelsen. Indberetningen skal indeholde oplysning om, hvilke personer der deltager i projektet, samt en redegørelse for, at bestemmelserne i lovens 6, stk. 1 og 2, om valg af dyreart og fremgangsmåde er iagttaget. Ved bedøvelse af dyr bør barbiturater ikke anvendes i forbindelse med overlevelsesforsøg. Med det formål at afprøve autolog fibrinogen som vævslim i forbindelse med neurokirurgiske indgreb foretages på bedøvede rotter laminektomi svarende til T13, og 3 x 4 mm af dura mater

95 ekscideres, således at medulla spinalis segment L4 tilligemed lidt af nabosegmenterne blotlægges. Tranexamsyre eller transexamsyre/fibrinklæber appliceres over defekten. De neurologiske reaktioner vurderes efterfølgende i op til 24 timer. Ved stærke neurologiske symptomer, ved væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. De kirurgiske indgreb skal foretages af en person med fornøden anæstesiologisk og kirurgisk indsigt og erfaring. Med det formål at undersøge knogleanabole teststoffers effekt på knogleheling anlægges standardiseret brud på det ene skinneben på bedøvede rotter. Frakturen stabiliseres med Kirschner tråd. Der skal behandles med smertelindrende medicin postoperativt. Teststof indgives oralt eller parenteralt. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgets formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge anabole teststoffers effekt på sårheling hos immunsupprimerede og diabetiske rotter anlægges under bedøvelse end-to-end anastomose på tarmen samt tillige 2 mindre incisioner gennem ryghuden. Dyrene behandles i op til 6 uger med glucocorticoid eller gøres diabetiske med en injektion af streptozotocin intravenøst. Teststof gives dagligt oralt eller parenteralt i op til 6 uger. Dyrene skal behandles med smertestillende medicin i forbindelse med de kirurgiske indgreb. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge knogleanabole stoffers effekt på heling af kraniedefekter anlægges trepanation bilateralt på parietalknoglerne på rotter. Trepanationerne med membran og overliggende væv lukkes. Der skal behandles med smertelindrende medicin postoperativt. Teststof indgives oralt eller parenteralt i op til 8 uger. Nydannelse af knoglevæv mærkes med fluorochromer. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart forsøgenes formål er opnået, og materiale udtages til videre undersøgelser. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives. Med det formål at undersøge knogleanabole stoffers effekt på osteoporotiske knogler induceres osteoporose i rotter ved daglig behandling med glucocorticoid eller ved ovariektomi under bedøvelse. Teststof indgives oralt eller parenteralt i op til 3 måneder. Der skal gives smeretestillende behandling postoperativt. Der udtages blodprøver under forløbet. Dyrene skal aflives, så snart

96 forsøgenes formål er opnået. I tilfælde af væsentligt påvirket almentilstand eller ved lidelsesvoldende komplikationer skal dyrene straks aflives.

97 INSPEKTIONSVIRKSOMHED Af dyreforsøgslovens 11, stk. 1, fremgår, at Rådet og personer, som Rådet har bemyndiget hertil, til enhver tid uden retskendelse mod behørig legitimation har adgang til forsøgslokaler og andre lokaler, hvor forsøgsdyr anbringes, med henblik på at tilvejebringe oplysninger til brug for tilsynet. Inspektioner foretages oftest af den veterinære sekretær alene. Når forholdene tilsiger dette, sker det sammen med et eller flere af Rådets medlemmer, for eksempel når rådsmedlemmer har særlig ekspertise eller ønsker ved selvsyn at orientere sig om forholdene. I ganske enkelte tilfælde, en til to gange om året, deltager det samlede Råd. Inspektionen rettes da typisk mod et større antal tilladelsesindehavere på samme institution eller i virksomhed og kan have et seminarlignende præg, herunder med deltagelse af assisterende personale på institutionen eller virksomheden. Beslutning om afholdelse af inspektioner træffes i de fleste tilfælde på rådsmøderne, men opstår der pludselig behov for at foretage inspektion, træffes afgørelsen af Rådets formand eller af den veterinære sekretær. Inspektioner foretages i nogen grad efter turnus, hvorved et stort antal forsøgssteder bliver inspiceret jævnligt, dog således at store virksomheder og institutioner med omfattende forsøgsaktivitet besøges hyppigere end de mindre steder. Inspektioner omfatter også de virksomheder, der opdrætter og sælger dyr til forsøg. Inspektionerne foretages som hovedregel på initiativ af Rådet som led i den almindelige rutine, men kan også, hvis en henvendelse må skønnes at være seriøs, være initieret af henvendelser fra personer, som mener, at der foregår ulovlig eller på anden måde kritisabel aktivitet. Det sidstnævnte forekommer sjældent. Inspektioner kan være anmeldte eller uanmeldte. Efter forretningsordenens 4, stk. 2, skal der ved afgørelsen af, hvilken form der vælges, lægges vægt på, hvad der bedst tjener formålet med inspektionen. Når ikke alle inspektioner foretages uanmeldt, må dette ses på baggrund af, at man ved uanmeldt inspektion ikke har nogen sikkerhed for, at der er dyreforsøg i gang, eller for at de(n) person(er), der det pågældende sted har dyreforsøgstilladelse, er tilstede. Man får således ofte ved uanmeldte besøg kun lejlighed til at inspicere staldfaciliteterne og tale med personalet der.

98 Ved anmeldte inspektioner kan det - foruden inspektion af staldfaciliteterne - opnås, at Dyreforsøgstilsynet kan overvære forsøg, der har tilsynets særlige interesse, ligesom drøftelser med forsøgsudøverne om forsøgsaktiviteten kan finde sted. Disse kontakter er meget værdifulde for Dyreforsøgstilsynets arbejde. På forsøgsstederne er man også ofte interesseret i at få Dyreforsøgstilsynets faglige vurdering og dettes mening om eventuelle justeringer, hvilket normalt bliver mødt med stor forståelse. På tilsvarende måde har veltilrettelagte inspektioner forud for påtænkte større om- /udbygninger af forsøgsfaciliteter eller før organisatoriske ændringer vist sig nyttige, herunder når en institution har ønsket efter dyreforsøgslovens 2, stk. 2, at flytte dele af ansvaret fra tilladelsens indehaver til institutionen eller virksomheden. I 2002 var der 387 personer, som havde tilladelse til at foretage dyreforsøg. I beretningsåret har der været tale om i alt 49 besøg i form af inspektioner (lovens 11) og demonstrationer (lovens 1, stk. 4) på institutioner og i virksomheder med ca. 250 tilladelsesindehavere. 18 af inspektionerne var uanmeldte. I de fleste tilfælde er flere tilladelsesindehaveres aktiviteter blevet inspiceret ved samme besøg.

99 OFFENTLIGE FORSKRIFTER OM DYREFORSØG 1. Dyreværnsloven, jfr. lov nr. 386 af 6. juni 1991, som senest ændret ved lov nr. 433 af 31. maj Lov om dyreforsøg, jfr. Lovbekendtgørelse nr. 726 af 9. september 1993, som ændret ved lov nr af 20. december 1995 og lov nr. 433 af 31. maj Justitsministeriets bekendtgørelse nr af 12. december 2001 om kvalifikationskrav til personer, der beskæftiger sig med forsøgsdyr. 4. Justitsministeriets bekendtgørelse nr. 739 af 6. december 1988 om føring af journal over og indberetning om dyreforsøg 5. Justitsministeriets bekendtgørelse nr. 332 af 18. maj 1990 om fremskaffelse af dyr til forsøg, som ændret ved bekendtgørelse nr. 27 af 22. januar Justitsministeriets bekendtgørelse nr. 333 af 18. maj 1990 om forsøgsdyrs pasning og opstaldning og om udryddelsestruede og vildtlevende dyr til forsøg m.v. som ændret ved bekendtgørelse nr. 245 af 1. april Justitsministeriets bekendtgørelse nr. 208 af 17. juni 1964 om transport af dyr, som senest ændret ved bekendtgørelse nr. 810 af 29. oktober Justitsministeriets bekendtgørelse nr. 201 af 16. april 1993 om beskyttelse af dyr under transport, som seneste ændret ved bekendtgørelse nr. 810 af 29. oktober Justitsministeriets bekendtgørelse nr. 715 af 1. august 1994 om betaling af gebyr for tilladelse til dyreforsøg 10. Justitsministeriets bekendtgørelse nr. 716 af 1. august 1994 om forretningsorden for Rådet for Dyreforsøg 11. EF-direktiv af 24. november 1986 om indbyrdes tilnærmelse af medlemsstaternes love og administrative bestemmelser om beskyttelse af dyr, der anvendes til forsøg og andre videnskabelige formål 12. Europarådskonventionen af 18. marts 1986 om beskyttelse af hvirveldyr til eksperimentelle og andre videnskabelige formål Forskrifterne kan hentes på Dyreforsøgstilsynets hjemmeside på adressen: