PLATELIA HSV 1+2 IgM 96 TEST 72822

PLATELIA HSV 1+2 IgM 96 TEST 72822 KVALITATIV PÅVISNING AF IgM-ANTISTOFFER MOD HSV 1+2 I HUMANT SERUM ELLER PLASMA VED ENZYMIMMUNANALYSE 1. FORMÅL Platelia HSV 1+2 IgM er en immunanalyse, der anvender specifik antistofbinding til kvalitativ påvisning af IgM-antistoffer mod Herpes simplex virus i humant serum eller plasma. 2. KLINISK VÆRDI Herpes simplex virus (HSV) er et alment humant patogen, der forekommer i hele verden. Der er beskrevet to serologiske undertyper af HSV: HSV-1 og HSV-2. HSV-1 findes primært i forbindelse med infektion i tunge, mund, læber, svælg samt øjne, hvorimod HSV-2 primært findes i forbindelse med genital og neonatal infektion. Dog kan begge typer forårsage genitale infektioner, og HSV-1 anses stadig oftere som årsag til genitale symptomer. Herpes simplex virus overføres gennem direkte kontakt med sekret fra en smittet person, som på overførselstidspunktet ikke nødvendigvis udviser sygdomssymptomer. Faktum er, at størstedelen af genitale infektioner overføres i tilfælde, hvor der ikke udvises symptomer. Primær infektion med HSV kan ske i alle aldre og påvirke nyfødte, børn og voksne. Efter primær infektion vil HSV danne en livsvarig latent tilstand i sensoriske nerveganglier, hvilket medfører efterfølgende tilbagevenden af symptomer, når latent virus genaktiveres. Gravide, som får HSV type-1 eller type-2 under svangerskab, kan overføre virusset til barnet før fødselen eller under fødselen. Livmoderinfektioner forbindes med spontan abort eller for tidlig fødsel. Den største risiko for neonatal herpes er for spædbørn, hvor moderen smittes med genital infektion i det sidste trimester af graviditeten. Kongenital og neonatal HSV kan ske gennem moderens primære eller tilbagevendende, symptomatisk eller asymptomatisk, HSV-infektion og kan medføre hud-, øjen- eller mundinfektion samt skader på centralnervesystemet. Ved primær HSV-infektion ses IgM-antistoffer oftest mellem tredje og syvende dag efter symptomernes start. IgM-antistoftiter topper inden for fire til seks uger og falder oftest til et upåviseligt niveau efter to måneder. IgM-antistoffer mod HSV kan nogle gange findes i tilbagevendende infektioner. Dog er produktion og påvisning af anti-hsv-igm-antistoffer hos patienter med tilbagevendende infektioner mindre forudsigelig og kan være relateret til, hvor alvorlig infektionen er. IgG-antistoffer mod HSV forekommer ofte en eller to uger efter infektionsstart og forbliver på forskellige niveauer resten af livet. Ved tilstedeværelsen af anti-hsv IgGantistoffer kan der ikke skelnes mellem ny infektion og tidligere udsættelse (latent infektion eller reaktivering) for herpes simpel-virus. I sådanne situationer kan der findes residuel-igm, og sporing af anti-hsv IgMantistoffer er eventuelt ikke relevant. Sporingen af anti-hsv IgM-antistoffer er dog klinisk vigtig under en tidlig akut infektion, hvor anti-hsv IgG-antistoffer eventuelt ikke er tilstede endnu.(2) 3. PRINCIP Platelia HSV 1+2 IgM er en kvalitativ test til påvisning af IgM-antistoffer mod HSV 1+2 i humant serum eller plasma via enzymimmunanalyse med binding af IgM på den faste fase. Den faste fase (brønde i mikropladen) er belagt med anti-humane µ-kæde-antistoffer. En HSV-antigen mærket med peroxydase anvendes som konjugat. Testen omfatter følgende trin: Trin 1 Patientprøver, kalibrator og kontroller fortyndes 1/21 og fordeles derpå i brøndene på mikropladen. Der inkuberes i 1 time ved 37 C, hvorunder IgM-antistofferne i prøven binder sig til belægningen med anti-µantistoffer i mikropladebrøndene. Efter inkubation fjernes IgG og andre serumproteiner ved vask. 1

Trin 2 Konjugatet (HSV-antigen mærket med peroxydase) tilføjes til mikropladebrøndene. Der inkuberes i 1 time ved 37 C, hvorunder konjugatet binder sig til de specifikke IgM-antistoffer mod HSV, der er coatet på mikropladen. Efter endt inkubation fjernes det ubundne konjugat ved vask. Trin 3 Tilstedeværelsen af immunkomplekser (anti-humane µ-kæder/igm anti-hsv/hsv-antigen mærket med peroxydase) påvises ved tilsætning af et farveudviklende enzymsubstrat i hver brønd. Trin 4 Efter inkubation ved stuetemperatur (+18-30 C) standses enzymreaktionen ved tilsætning af 1Nsvovlsyreopløsning. Den aflæsning af optisk densitet, der opnås med et spektrofotometer indstillet til 450/620 nm, er proportional med mængden af IgM-antistoffer mod HSV i prøven. 4. PRODUKTOPLYSNINGER De leverede reagensmængder er afpasset, så de muliggør 96 test. Alle reagenser er udelukkende beregnet til in vitro-diagnosticering. Mærkning Reagenstype Præsentation R1 Microplate Mikroplade (brugsklar) 1 mikroplade 12 strimler med 8 aftagelige brønde, som er coatet med anti-humane µ-kæder R2 Concentrated Koncentreret vaskeopløsning (20x) 1 x 70 ml Washing Tris-NaCl-buffer (ph 7,4), 2 % Tween 20 Solution (20x) Konserveringsmiddel: < 1,5 % ProClin 300 R3 Negative Control Negativ kontrol 1 x 0,75 ml Humant serum negativt for IgM-antistoffer mod HSV og negativt for HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: < 1,5 % ProClin 300 R4 Calibrator Kalibrator 1 x 0,75 ml Humant serum reaktivt for IgM-antistoffer mod HSV og negativt for HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: < 1,5 % ProClin 300 R5 Positive Control Positiv kontrol 1 x 0,75 ml Humant serum reaktivt for IgM-antistoffer mod HSV og negativt for HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: < 1,5 % ProClin 300 R6 Conjugate Konjugat (brugsklar) 2 x 13 ml Virusantigenlysat og gg1 HSV-1-protein mærket med peroxydase Konserveringsmiddel: < 1,5 % ProClin 300 R7 Diluent Fortynder til prøver (brugsklar) 1 x 40 ml Tris-NaCl-buffer, mælk, fenolrød Konserveringsmiddel: < 1,5 % ProClin 300 R9 Chromogen TMB Kromogen (brugsklar) 3,3,5,5 tetramethylbenzidin (< 0,1 %), H 2 O 2 (<1 %) 1 x 28 ml R10 Stopping Solution Stopopløsning (brugsklar) 1N-svovlsyreopløsning 1 x 28 ml Pladeforsegling 4 Opbevaringsbetingelser og udløbsdato fremgår af æsken. 2

5. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Resultaternes pålidelighed afhænger af korrekt implementering af følgende regler for god laboratoriepraksis: Brug ikke reagenser efter udløbsdatoen. Undgå sammenblanding eller nogen form for forbindelse mellem reagenser fra forskellige partier i samme kørsel. BEMÆRK: Det gælder for vaskeopløsning (R2, etiketidentifikation: 20x, grøn), kromogen (R9, etiketidentifikation: TMB, turkisfarvet) og stopopløsning (R10, etiketidentifikation: 1N, rød), at det er muligt at anvende andre partier end de indeholdte i dette sæt under forudsætning af, at reagenserne er fuldstændig tilsvarende, og at samme parti anvendes i hele kørslen. BEMÆRK: Desuden kan vaskeopløsningen (R2 identificiret 20x med grøn skrift på etiketten) blandes med en af de to andre vaskeopløsninger indeholdt i de forskellige Bio-Rad reagenskit (R2 identificiret 10x med blå skrift eller 10x med orangefarvet skrift på etiketten), når de rekonstitueres korrekt og på betingelse af at der kun bruges én blanding til et bestemt testforløb. Vent 30 minutter før brug, så reagenserne kan stabilisere sig ved stuetemperatur (+18-30 C). Rekonstituér eller fortynd reagenserne forsigtigt for at undgå kontaminering. Undgå at udføre testen i nærheden af reaktive dampe (syre, alkaliske dampe og aldehyddampe) eller støv, der kan påvirke konjugatets enzymaktivitet. Benyt engangsmateriale, eller hvis dette ikke er muligt, udstyr af glas, som er vasket grundigt og skyllet med deioniseret vand. Grundig vask af mikropladen er et afgørende trin i proceduren: Udfør det anbefalede antal vaske, og sørg for, at alle brønde bliver helt fyldt og derefter helt tømt. Ukorrekt vask kan føre til unøjagtige resultater. Undgå, at mikropladen bliver tør mellem vaskene og fordelingen af reagenserne. Benyt aldrig den samme beholder til at fordele konjugatet og enzymsubstratet. BEMÆRK: Eftersom konjugatet er særligt koncentreret i peroxydase, kan enhver kontakt med TMBopløsningen (en lille dråbe, spild) medføre en falsk positiv reaktion. Undgå at fordele konjugatet nær materialer (spidser, stativer), der skal anvendes til fordelingen af TMB-opløsningen. Enzymreaktionen er meget følsom over for metaller eller metalioner. Undgå derfor, at metalelementer kommer i berøring med de forskellige opløsninger med konjugat eller kromogen. Kromogenopløsningen (R9) bør være farveløs. Hvis farven bliver blå, kan reagenset ikke anvendes og skal udskiftes. Anvend en ny pipettespids til hver prøve. Kontrollér, at pipetterne og andet udstyr er i orden og fungerer korrekt. Sundheds- og sikkerhedsmæssige forholdsregler Materiale af human oprindelse, der er brugt til forberedelse af reagenser, er blevet testet og fundet ikkereaktivt over for hepatitis B-overfladeantigen (HBsAg), antistoffer mod hepatitis C-virus (anti-hcv) samt antistoffer mod HIV 1 og HIV 2. Eftersom ingen metode kan give fuld garanti for fravær af smitsomme stoffer, skal reagenser af human oprindelse og patientprøver håndteres som potentielt smittefarlige. Alt materiale, herunder vaskeopløsninger, der kommer i direkte kontakt med prøver og reagenser, som indeholder materiale af human oprindelse, skal betragtes som potentielt smittefarligt. Brug engangshandsker ved håndtering af prøver og reagenser. Undlad at pipettere med munden. Undgå at spilde prøver eller opløsninger, der indeholder prøve. Spildte materialer skal skylles af med blegemiddel i en opløsning på 10 %. Ved spild af syre skal syren først neutraliseres med natriumbikarbonat. Derefter skal der foretages rengøring med blegemiddel i en 10 %-opløsning og aftørring med sugende papir. Det materiale, der anvendes til rengøringen, skal bortskaffes i en beholder til kontamineret affald. Patientprøver, reagenser med materiale af human oprindelse samt kontaminerede materialer og produkter skal dekontamineres før bortskaffelse: - enten ved nedsænkning i blegemiddel med en endelig koncentration på 5 % natriumhypoklorit i 30 minutter - eller ved autoklavering ved 121 C i mindst to timer. ADVARSEL: Benyt ikke opløsninger, der indeholder natriumhypoklorit, i autoklaven. 3

Undgå, at reagenserne kommer i kontakt med huden eller slimhinderne. Dette gælder også for de reagenser, der anses for ufarlige. Kemiske og biologiske rester skal håndteres og bortskaffes i henhold til god laboratoriepraksis. Alle reagenser i sættet er udelukkende beregnet til in vitro-diagnosticering. Xi - Irritant Advarsel: Nogle af reagenserne indeholder ProClin 300 < 1,5 % R43: Kan give overfølsomhed ved kontakt med huden S28-37: Kommer stof på huden, vaskes straks med store mængder vand og sæbe. Brug egnede beskyttelseshandsker under arbejdet. 6. PRØVETAGNING, FORBEREDELSE OG OPBEVARING 1. Serum og plasma (EDTA, heparin eller citrat) anbefales som prøvetyper. 2. Bemærk følgende anbefalinger for håndtering, behandling og opbevaring af blodprøver: Tag alle blodprøver under overholdelse af de generelle forholdsregler vedrørende venepunktur. Lad serumprøver koagulere fuldstændigt, før de centrifugeres. Sørg for, at glassene altid holdes lukkede. Adskil serummet eller plasmaet fra koaglet eller de røde blodlegemer i et tæt tillukket opbevaringsglas efter centrifugeringen. Prøverne kan opbevares ved +2-8 C, hvis testen udføres inden for 7 dage. Hvis testen ikke udføres inden for 7 dage, eller hvis prøverne skal transporteres, skal de nedfryses til mindst -20 C. Prøver, der har været optøet mere end fem gange, må ikke anvendes. Tidligere nedfrosne prøver bør omrøres grundigt (Vortex) efter optøning, før testen udføres. 3. Prøver, der indeholder op til 90 g/l albumin eller 100 mg/l ukonjugeret bilirubin, lipæmiske prøver, der indeholder, hvad der svarer til 36 g/l triolein (triglycerid), og hæmolyserede prøver, der indeholder op til 10 g/l hæmoglobin, påvirker ikke resultaterne. 4. Prøverne må ikke opvarmes. 7. ANALYSEPROCEDURE 7.1 Påkrævede materialer, der ikke medfølger Vortex-mixer. Mikropladelæser med filtre på 450 nm og 620 nm (*). Mikropladeinkubator, termostatindstillet til 37±1 C (*). Automatisk, halvautomatisk eller manuel mikropladevasker (*). Sterilt destilleret eller deioniseret vand. Engangshandsker. Beskyttelsesbriller. Sugende papir. Automatiske eller halvautomatiske, justerbare eller forudindstillede pipetter eller multipipetter til udmåling og dispensering af 10 1000 µl samt 1, 2 og 10 ml. Måleglas med en volumen på 25 ml, 50 ml, 100 ml og 1000 ml. Natriumhypoklorit (blegemiddel) og natriumbikarbonat. Beholder til biologisk farligt affald. Engangsreagensglas. (*) Kontakt vores tekniske afdeling for at få detaljerede oplysninger om det anbefalede udstyr. 7.2 Rekonstituering af reagenser R1: Lad mikropladen henstå ved stuetemperatur i 30 minutter (+18-30 C), før posen åbnes. Tag transportbakken ud, læg straks ubrugte teststrimler tilbage i posen, og kontrollér, at posen indeholder tørremiddel. Forsegl posen omhyggeligt, og opbevar den ved +2 8 C. R2: Fortynd vaskeopløsningen R2 i destilleret vand i forholdet 1:20, fx 50 ml R2 og 950 ml destilleret vand, for at få den brugsklare vaskeopløsning. Klargør 350 ml fortyndet vaskeopløsning til én plade med 12 strimler, hvis der foretages manuel vask. R3, R4, R5: Fortynd reagenserne i forholdet 1:21 med fortynderen R7 (fx 15 µl kalibrator eller kontrol + 300 µl R7). 4

7.3 Opbevaring og validitet af åbne og/eller rekonstituerede reagenser Sættet skal opbevares ved +2-8 C. Hvis opbevaring sker ved +2-8 C før åbning, kan hver komponent anvendes frem til udløbsdatoen, der fremgår af yderetiketten på sættet. R1: Efter åbning er strimlerne stabile i op til 8 uger, hvis de opbevares ved +2-8 C i den samme omhyggeligt lukkede pose (kontrollér, at posen indeholder tørremiddel). R2: Efter fortynding kan vaskeopløsningen gemmes i 2 uger ved +2 30 C. Når den koncentrerede vaskeopløsning opbevares ved +2 30 C, er den stabil indtil udløbsdatoen på etiketten, forudsat der ikke forekommer kontamination. R3, R4, R5, R6, R7: Efter åbning og uden kontamination er reagenserne stabile i op til 8 uger ved opbevaring ved +2-8 C. R9: Efter åbning og uden kontamination er reagenset stabilt i op til 8 uger ved opbevaring ved +2-8 C. R10: Efter åbning og uden kontamination er reagenset stabilt indtil den angivne udløbsdato på etiketten ved opbevaring ved +2-8 C. 7.4 Procedure Følg analyseproceduren og reglerne for god laboratoriepraksis nøje. Lad reagenserne stabilisere sig ved stuetemperatur (+18-30 C), før de anvendes. Anvendelse af aftagelige brønde kræver særlig opmærksomhed under håndtering. Benyt kalibrator og kontroller ved hver kørsel for at validere analyseresultaterne. 1. Opret en præcis fordelings- og identifikationsplan for kalibrator, kontroller og patientprøver. 2. Forbered den fortyndede vaskeopløsning (R2) (se afsnit 7.2). 3. Tag transportbakken og strimlerne (R1) ud af beskyttelsesposen (se afsnit 7.2). 4. Fortynd kalibratoren og kontrollerne (R3, R4 og R5) og patientprøverne (S1, S2 ) i individuelt identificerede glas med fortynder (R7) i forholdet 1:21: 15 µl prøve og 300 µl fortynder. Bland de fortyndede prøver i Vortex-mixeren. 5. Følg den nedenfor angivne rækkefølge nøje, og tilfør hver brønd 200 µl fortyndet kalibrator, kontrol og patientprøve: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A R3 S5 S13 B R4 S6 C R4 S7 D R5 S8 E S1 S9 F S2 S10 G S3 S11 H S4 S12 6. Dæk mikropladen med selvklæbende pladeforsegling, som presses fast ned mod pladen, så den slutter helt til overalt. Inkubér straks mikropladen i et termostatkontrolleret vandbad eller et varmeskab ved 37 ± 1 C i 1 time ± 5 minutter. 7. Fjern den selvklæbende pladeforsegling efter første inkubationsperiode. Sug indholdet af alle brønde op i en beholder til biologisk farligt affald (en beholder med natriumhypoklorit). Vask mikropladen 5 gange med 350 µl vaskeopløsning (R2). Vend mikropladen på hovedet, og dup den forsigtigt mod sugepapiret for at fjerne resterende væske. 8. Fordel straks 200 μl konjugat-arbejdsopløsning (R6) i alle brøndene (Advarsler: se afsnit 5) 9. Dæk mikropladen med selvklæbende pladeforsegling, som presses fast ned mod pladen, så den slutter helt til overalt. Inkubér straks mikropladen i et termostatkontrolleret vandbad eller et varmeskab ved 37 ± 1 C i 1 time ± 5 minutter. 10. Fjern den selvklæbende pladeforsegling efter anden inkubationsperiode. Sug indholdet af alle brønde op i en beholder til biologisk farligt affald (en beholder med natriumhypoklorit). Vask mikropladen 5 gange med 350 µl vaskeopløsning (R2). Vend mikropladen på hovedet, og dup den forsigtigt mod sugepapiret for at fjerne resterende væske. 11. Fordel hurtigt og i mørke 200 µl kromogenopløsning (R9) i hver brønd. Lad reaktionen foregå i mørke i 30 ± 5 minutter ved stuetemperatur (+18-30 C). Benyt ikke selvklæbende pladeforsegling til denne inkubation. 5

12. Stands enzymreaktionen ved at tilsætte 100 µl stopopløsning (R10) i hver brønd. Benyt samme rækkefølge og fordelingshastighed som for enzymsubstratet. 13. Tør undersiden af pladen omhyggeligt af. Aflæs den optiske densitet ved 450/620 nm ved hjælp af en mikropladelæser inden for 30 minutter efter standsning af reaktionen. Strimlerne skal opbevares i mørke før aflæsning. 14. Kontrollér, at der er overensstemmelse mellem aflæsningen og fordelingsplanen for pladen og prøverne, før resultaterne rapporteres. 8 BEREGNING OG FORTOLKNING AF RESULTATER 8.1 Beregning af cut-off-værdi (CO) Cut-off-værdien (CO) svarer til middelværdien af de optiske densiteter (OD) for cut-off-kontrolduplikaterne (R4): CO = gennemsnit af OD for R4. 8.2 Beregning af prøveforhold Prøveresultatet udtrykkes i forhold ved brug af følgende formel: 8.3 Kvalitetskontrol Prøveforhold = Prøves OD/CO Medtag kalibratoren og kontrollerne for hver mikroplade og for hver kørsel, og analysér de opnåede resultater. Nedenstående kriterier skal opfyldes ved validering af analysen: Værdier for optisk densitet: - CO 0,200-0,80 x CO < OD R4 gent. 1 < 1,20 x CO - 0,80 x CO < OD R4 gent. 2 < 1,20 x CO (Den enkelte OD for hver gentagelse af cut-off-kontrollen (R4) må ikke afvige mere end 20 % fra ODværdien). Optisk densitetsforhold: - Forhold R3 (OD R3 / CO) 0,50 - Forhold R5 (OD R5 / CO) 1,50 Hvis kriterierne for kvalitetskontrollen ikke er opfyldt, skal testkørslen gentages. 8.4 Fortolkning af resultater Prøveforhold Resultat Fortolkning Forhold < 0,90 Negativ 0,90 forhold < 1,10 Tvivlsom Forhold 1,10 Positiv Prøven betragtes som ikke-reaktiv for tilstedeværelse af IgM-antistoffer mod HSV-1 og HSV-2. Prøven betragtes som tvivlsom for tilstedeværelse af IgM-antistoffer mod HSV-1 og/eller HSV-2. Resultatet skal bekræftes ved ny test af en anden prøve. Prøven betragtes som positiv for tilstedeværelse af IgM-antistoffer mod HSV-1 og/eller HSV-2. 8.5 Hjælp til fejlfinding Reaktioner, der ikke kan valideres eller gentages, skyldes ofte: Utilstrækkelig vask af mikroplader. Kontamination af negative prøver med serum eller plasma med en høj antistoftiter. Kontamination af enzymsubstratet med kemiske oxidationsmidler (blegemiddel, metalioner osv.) Kontamination af stopopløsning. 6

9 YDEEVNE Platelia HSV 1+2 IgM blev evalueret på 2 forskellige centre på i alt 595 prøver. Resulterne med Platelia HSV 1+2 IgM blev sammenlignet med resultaterne indhentet med en anden kommerciel EIA analyse. 9.1 Prevalens Bestemmelsen af prevalensen af IgM antistoffer til Herpes Simplex Virus i humant serum blev vurderet ved hjælp af et panel med 89 prøver fra gravide kvinder. Resultaterne er følgende: 66 negative, 7 tvivlsom og 16 positive sera. Prevalensen ved brug af Platelia HSV 1+2 IgM analysen er således bestemt til 18,0% (16/89). 9.2 Specificitet Specificiteten blev vurderet på i alt 480 prøver: på center 1, et panel på 233 prøver fra bloddonorer, gravide kvinder, HSV-serologirekvireringer og kommerciel panel (BBI (A) ). på center 2, et panel på 247 prøver fra hospitalsindlagte patienter. På begge centre blev prøverne valgt på grundlag af negative resultater opnået med en kommerciel EIA analyse og anset som reference. Antal prøver Negativ Tvivlsom (1) Positiv Specificitet Center 1 N = 233 180 22 31 85,3% (180/211) [79,8%-99,8%] Center 2 N = 247 207 11 29 87,7% (207/236) [82,8%-91,6%] I alt N = 480 387 33 60 86,6% (387/447) [83,0%-89,6%] (1) tvivlsomme resultater blev ikke medtaget i beregningen af specificitet [IC 95%]: 95% tillidsinterval. (A) : BBI blandet titer HSV panel Det skal bemærkes, at der blandt de 60 sera, der blev fundet positive med Platelia HSV 1+2 IgM, også var 47 positive med Platelia HSV 1 IgG og/eller Platelia HSV 2 IgG. Derudover blev et BBI-panels serum fundet positivt med Platelia HSV 1+2 IgM-analyse og negativt med det kommercialiserede IgM EIA og Platelia HSV 1 IgG & Platelia HSV 2 IgG blev fundet positiv med 6 forskellige IgM-analyser. 9.3 Sensitivitet Sensitiviteten blev vurderet på i alt 87 prøver: på center 1, et panel på 71 prøver fra bloddonorer, gravide kvinder, HSV-serologirekvireringer og kommerciel panel (BBI (A) ). på center 2, et panel på 16 prøver fra hospitalsindlagte patienter. På begge centre blev prøverne valgt på grundlag af positive resultater opnået med en kommerciel EIA analyse og anset som reference. Antal prøver Negativ Tvivlsom (1) Positiv Sensivitet Center 1 N = 71 5 0 66 93,0% (66/71) [84,3%-97,7%] Center 2 N = 16 2 1 13 86,7% (13/15) [59,5%-98,3%] I alt N = 87 7 1 79 91,9% (79/86) [84,0%-96,7%] (1) tvivlsomme resultater blev ikke medtaget i beregningen af sensitivitet 7

Det skal bemærkes, at der blandt de 7 sera, der blev fundet negative med Platelia HSV 1+2 IgM, var 3 positive med Platelia HSV 1 IgG (72820) og/eller Platelia HSV 2 IgG (72821). 9.4 Serokonverteringer Blandt et panel bestående af 33 patienter, der repræsenterede en serokonvertering, blev der samtidig fundet 22 positive eller tvivlsomme med Platelia HSV 1+2 IgM-analyse og den anden kommercialiserede IgM EIA-analyse. 7 blev først detekteret med Platelia HSV 1+2 IgM-analyse, 3 blev fundet positive kun med den anden kommercialiserede IgM EIA-analyse, og et serum blev ikke detekteret af nogle af analyserne. 9.5 Præcision Præcision inden for kørsel (repetérbarhed): Med henblik på at evaluere repetérbarheden inden for analysen blev tre positive prøver og en negativ prøve testet 30 gange i løbet af den samme kørsel. Forholdet (prøvens OD/CO) blev bestemt for hver prøve. Middelforholdet, standardafvigelsen (SD) og variationskoefficienten (% CV) for hver af de fire prøver er vist i tabellen nedenfor: Præcision inden for kørsel (repetérbarhed) N=30 Negativ prøve Lav positiv prøve Høj positiv prøve Forhold (prøvens OD/cut-off-værdi) Middel 0.32 2.22 4.06 SD 0.01 0.20 0.10 % CV 2.8 % 9.0% 2.4% Præcision mellem kørsler (reproducérbarhed): Med henblik på at evaluere reproducérbarheden mellem kørsler blev hver af de fire prøver (en negativ og tre positive prøver) testet i dobbelttest i to kørsler om dagen over en periode på 20 dage. Forholdet (prøvens OD/CO) blev bestemt for hver prøve. Middelforholdet, standardafvigelsen (SD) og variationskoefficienten (% CV) for hver af de fire prøver er vist i tabellen nedenfor: Præcision mellem kørsler (reproducérbarhed) N=80 Negativ prøve Lav positiv prøve Positiv prøve Høj positiv prøve Forhold (prøvens OD/cut-off-værdi) Middel 0.40 1.63 3.48 6.68 SD 0.09 0.12 0.22 0.43 % CV 21.9 7.6 6.3 6.4 8

9.6 Krydsreaktivitet 129 prøver med egenskaber, der potentielt kunne føre til non specifikke reaktioner, blev testet med Platelia HSV 1+2 IgM analysen. Resultaterne er vist i følgende skema: Panel Antal prøver Positiv prøver HIV 10 0 CMV IgM 9 0 Rub IgM 10 0 EBV IgM 10 0 Toxo IgM 9 1 Chlamydia trachomatis 10 3 VZV IgM 19 4 Mæslinger IgM 10 0 Antinukleære antistoffer (ANA) 10 0 Fåresyge IgM 10 3 Reumatisk faktor 10 2 HHV6 9 0 HPV 3 2 Bemærk: tvivlsomme resultater blev ikke medtaget i beregningen af reaktivitet på tværs. Alle de positive resultater med Platelia HSV 1+2 IgM-analysen var negative med den kommercialiserede IgM EIA-analyse. Alle de sera, der blev fundet positive med Platelia HSV 1+2 IgM-analysen, var positive i HSV 1 og/eller 2 IgG-serologi og indikerede en HSV-infektiøs status undtagen for 2 VZV-prøver. 10 PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Resultatet af en enkelt titreringstest af anti-hsv IgM-antistoffer udgør ikke tilstrækkeligt bevis for diagnosen af en ny infektion af herpes simpel virus, eftersom HSV IgM også kan være tilstede i tilbagevendende HSVinfektioner (2). I betragtning af den antigeniske homologi af herpesfamiliens virus, bør potentielle krydsreaktioner med andre medlemmer af denne familie ikke ekskluderes. 11 PRODUCENTENS KVALITETSKONTROL Alle producerede reagenser fremstilles i henhold til vores kvalitetssikringssystem, lige fra modtagelsen af råmaterialer til markedsføringen af slutproduktet. Hvert parti gennemgår kvalitetskontrol og frigives kun til salg, hvis det opfylder de foruddefinerede kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert parti opbevares hos Bio-Rad. 9

12 REFERENCER 1. Centers for Disease Control and Prevention. Sexually transmitted diseases treatment guidelines 2002. MMWR 2002:51 (No. RR-6). 2. R. Morrow and D. Friedrich, Clin. Microbiol. Infect, 2006, 12 : 463-469. Performance of a novel test for IgM and IgG antibodies in subjects with culture-documented genital herpes simplex virus-1 or -2 infection. Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 881009 Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33 03/2008 10