ScanGel NEUTRAL Kort Kort

Transkript

1 ScanGel NEUTRAL Kort Kort NEUTRAL GEL Serumkontrol, irregulær antistofscreening, forligelighed IVD Alle de af Bio-Rad producerede og markedsførte produkter gennemgår fra modtagelse af råmateriale til markedsføring af slutproduktet i et komplet kvalitetssikringssystem. Hvert batch af slutproduktet gennemgår kvalitetskontrol og markedsføres kun, hvis det opfylder de fastsatte kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert batch opbevares af producenten. 73

2 I - ANVENDELSE AF OG PRINCIPPET FOR TESTEN Dette kort er udelukkende beregnet til professionel in vitro-diagnostik. Testen er designet til ABO serumkontrol, screening og identifikation af irregulære erythrocytbundne antistoffer samt forligelighedstest og kombinerer principperne for agglutination og gelfiltrering. Reaktionen opnås og aflæses efter centrifugering i specialdesignede mikrorør, der indeholder neutral gel. Erythrocytsuspensionen og plasma eller serum fordeles i mikrorørene, og mikrorørene centrifugeres efter en inkubationsperiode. Ikke- agglutinerede røde blodlegemer samles i bunden af mikrorøret, mens agglutinater forbliver i den øverste del af gelen, afhængigt af agglutinatets størrelse. Deres position i gelen er udtryk for reaktionens intensitet II - BESKRIVELSE AF REAGENSERNE Mikrorørene på ScanGel NEUTRAL-kortet indeholder en neutral gel. Reagenserne indeholder natriumazid (< 0,1%) som konserveringsmiddel. Produktkoden og antallet af kort pr.æske fremgår af etiketten på æsken. III - OPBEVARING HOLDBARHED Udløbsdatoen og opbevaringsbetingelserne fremgår af æsken. Opbevar kortene ved stuetemperatur (+15 C til +25 C). Kortene opbevares vertikalt og beskyttet for varmepåvikning i et rum med en relativt konstant temperatur og luftfugtighed. IV - ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Resultaternes pålidelighed afhænger af en korrekt implementering af følgende regler for god laboratoriepraksis : Anvend ikke reagenserne efter den udløbsdato, der er angivet på etiketten. Anvend ikke kort, hvor der er tegn på udtørring, bobler eller en beskadiget eller delvist fjernet forseglingsstrimmel. Det er vigtigt at udvise forsigtighed for at undgå kontaminering mellem mikrorørene især under under afpipetteringerne. Anvend en ny pipette til hver prøve og til hver erythrocytsuspension. Kontrollér, at pipetterne og andet udstyr fungerer korrekt, og kontrollér også deres nøjagtighed. Anvend handsker og sikkerhedsbriller under håndtering af reagenser og prøver. 74

3 Pipettér aldrig direkte med munden. Undgå stænk. I tilfælde af stænk, skal der rengøres med 12% hypoklorit i en 1:10-opløsning og tørres efter med absorberende papir. Det materiale, der anvendes til rengøringen, skal kasseres og placeres i beholderen til kontamineret affald. Forbrugsartikler og andre produkter, der har været i kontakt med prøver eller reagenser, som indeholder materiale af human oprindelse, må først kasseres efter dekontaminering. Datablade vedr. sikkerhed udleveres på forespørgsel. V - PRØVETAGNING OG BEHANDLING AF PRØVER Foretag en aseptisk blodprøvetagning i et rør med eller uden antikoagulans (EDTA, CPD). Udfør testen snarest muligt efter prøvetagningen. Prøver, der ikke kan analyseres straks, skal opbevares ved +2 C til +8 C og skal testes inden for 48 timer. Der må under ingen omstændigheder kunne ses hæmolyse. Undgå at opvarme prøvematerialet. VI - METODE Leveret udstyr ScanGel NEUTRAL-kort Nødvendigt, ikke leveret materiale Varmeskab : ScanGel Incubator IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi IH QC 4 x 6 ml Centrifuge : ScanGel Centrifuge Automatiske eller semiautomatiske pipetter Pipettespidser Engangsrør Beholder til affald, der er forbundet med biologisk risiko Hypoklorit Gummihandsker Sugende papir. Sikkerhedsbriller Kontroller En autokontrol (plasma eller serum og røde blodlegemer fra patienten) anbefales sideløbende med hver enkelt screeningtest og identifikation af irregulære antistoffer. En positiv kontrol (kendt serum, der indeholder mindst et antistof) og en negativ kontrol (kendt serum, der ikke indeholder nogen antistoffer). IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi. 75

4 Fremgangsmåde Følg fremgangsmåden nøje. Alle reagenser skal have stuetemperatur, før de anvendes. Adskil serum eller plasma fra de røde blodlegemer i prøvematerialet ved centrifugering (2000 g x 2 minutter). Når blodet er tappet uden antikoagulans, skal prøven centrifugeres yderligere ved g i 10 minutter. 1. ABO serumkontrol Nødvendigt, ikke leveret materiale ReverScan A1, A2, B og O : Brugsklare testerythrocyter til ABO serumkontrol ReverScan A1, B x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O x 5 ml Metode Anvend erythrocytsuspensionerne ReverScan A1, A2, B eller O. 1. Mærk hvert kort eller del af kortet (afhængigt af antallet af erythrocytsuspensioner, der anvendes til prøven) med prøvens navn eller nummer. Mærk erythrocytsuspensionen, som skal overføres til hvert mikrorør. Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erytrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af hver erythrocytsuspension til brøndene på de relevante mikrorør. 3. Tilsæt 50 µl plasma eller serum i den brønd på mikrorørene, som svarer til prøven. 4. Inkuber ved stuetemperatur (+15 C C) i 15 minutter. 5. Centrifuger i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. 6. Aflæs reaktionerne. 2 - Screening af irregulære erythrocytbundne antistoffer med to-trins enzymteknik Nødvendigt, ikke leveret materiale Bio-Rad-papain Papain 2 ml ScanSol : Erytrocytsuspensionsmedium ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml ScanCell P, ScanPanel P : Brugsklare papainbehandlede erythrocytsuspensioner til screening og identifikation af irregulære erythrocytbundne antistoffer med to-trins enzymteknik ScanCell P 3 x 10 ml ScanPanel P 10 x 3 ml 76

5 a) Papainisering og forberedelse af erythrocytsuspensioner, når disse ikke er brugsklare (autokontrol) Vask de røde blodlegemer tre gange med isotonisk saltvand. Bland lige dele rekonstituerede papain og de koncentrerede røde blodlegemer. Bland. Inkuber i syv minutter ved 37 C i et vandbad. Det er afgørende at overholde tiden nøje for kontakten mellem de røde blodlegemer og papainet. Vask tre gange med isotonisk saltvand. Overfør 1 ml ScanSol til et mærket engangsrør. Tilsæt 10 µl af de vaskede, papainiserede røde blodlegemer. Bland. Erythrocytsuspensionen opbevares ved 2-8 C og kan anvendes indenfor én uge. b) Metode 1. Mærk hvert kort eller del af kortet (afhængigt af antallet af erythrocytsuspensioner der skal anvendes til prøven) med prøvens navn eller nummer. Mærk de erythrocytsuspensioner, som skal overføres til hvert mikrorør. Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erytrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af hver ScanCell P eller ScanPanel P- suspension eller den erythrocytsuspension, der er klargjort ifølge afsnit 2- a) til brøndene på de relevante mikrorør. 3. Tilsæt straks 25 µl plasma eller serum i de respektive brønde på mikrorørene, som svarer til den testede prøve. Intervallet mellem tilførsel af erythrocytsuspension og plasma eller serum må under ingen omstændighed overstige 10 minutter. 4. Inkuber ved 37 C i 15 minutter i en ScanGel Incubator. 5. Centrifuger i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. 6. Aflæs reaktionerne. 3 - Forligelighedstest A. To-trins enzymteknik Nødvendigt, ikke leveret materiale Bio-Rad-papain Papain 2 ml ScanSol : Eythrocytsuspensionsmedium ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml 77

6 a) Papainisering og forberedelse af donorerythrocytsupension(er) For hver donor : Vask de røde blodlegemer, der skal testes, tre gange med isotonisk saltvand. Bland lige dele rekonstituerede papain og de koncentrerede røde blodlegemer (donors røde blodlegemer). Bland. Inkuber i syv minutter ved 37 C i et vandbad. Det er afgørende, at overholde tiden nøje for kontakten mellem de røde blodlegemer og papainet. Vask tre gange med isotonisk saltvand. Overfør 1 ml ScanSol til et mærket engangsrør. Tilsæt 10 µl af de vaskede, papainiserede røde blodlegemer. Bland. Erytrocytsuspensionen er klar til brug. b) Metode 1. Mærk hvert kort eller del af kortet med modtagerens navn eller nummer og med det eller de tilsvarende donornumre. Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erytrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af hver erythrocytsuspension, der er klargjort ifølge afsnit 3-A a) i brøndene på de relevante mikrorør. 3. Tilsæt straks 25 µl af modtagerens plasma eller serum i brøndene på de relevante mikrorør. Intervallet mellem overførslen erythocytter og plasma eller serum må under ingen omstændigheder overstige 10 minutter. 4. Inkuber ved 37 C i 15 minutter i en ScanGel Incubator. 5. Centrifuger i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. 6. Aflæs reaktionerne. B. Et-trins enzymteknik Nødvendigt, ikke leveret materiale ScanLiss : Erytrocytsuspensionsmedium ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml ScanBrom : brugsklart bromelin til forligelighedstest ScanBrom 12 ml a) Forberedelse af donorerythrocytsuspension(er) For hver donor : Overfør 1 ml ScanLiss i et mærket engangsrør. Tilsæt 10 µl erythrocytkoncentrat (donors røde blodlegemer). Bland. Erytrocytsuspensionen er klar til brug. 78

7 b) Metode 1. Mærk hvert kort eller den aktuelle del af kortet med modtagerens navn eller nummer og med det eller de tilsvarende donornumre. Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erytrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af hver erythrocytsuspension, der er klargjort ifølge afsnit 3-B a) i brøndene på de relevante mikrorør. 3. Tilsæt straks 25 µl af modtagerens plasma eller serum i brøndene på de relevante mikrorør. Intervallet mellem overførslen af erythrocytter og plasma eller serum må under ingen omstændigheder overstige 10 minutter. 4. Tilsæt 25 µl ScanBrom i brøndene på de enkelte mikrorør. 5. Inkuber straks ved 37 C i 15 minutter i en ScanGel Incubator. 6. Centrifuger straks i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. Intervallet mellem afslutningen af inkubationen og starten på centrifugeringen må under ingen omstændigheder overstige 10 minutter. 7. Aflæs reaktionerne. VII RESULTATER OG FORTOLKNING Agglutinater (på overfladen af eller fordelt i gelen) eller hæmolyse i mikrorøret er lig med et positivt resultat, hvilket angiver, at den testede prøve indeholder et eller flere antistoffer, der korresponderer antigenerne i de testerythrocytterne. En kompakt klump af røde blodlegemer i bunden af mikrorøret og fravær af hæmolyse er lig med et negativt resultat, hvilket angiver, at den anvendte metode ikke i den testede prøve kunne påvise tilstedeværelsen af antistoffer, som korresponderer antigenerne i de testerythrocytterne. Resultaterne valideres kun, hvis de positive og negative kontroller giver de forventede resultater. 1 - ABO serumkontrol En fuldstændig ABO-blodtypebestemmelse kræver 2 komplementerende test: den direkte test udført med anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) reagenser og om nødvendigt med anti-abo3(ab) reagens og serumkontrol udført med testerytrocytter A1, B, og om nødvendigt med A2- og 0-testerythrocytter. Profilerne for de forventede resultater opnået med anti-abo1(a)-, anti-abo2(b)- og anti-abo3(ab)-reagenserne samt A1-, A2-, B- og O-erythrocytter og deres fortolkning vises i tabellen nedenfor : 79

8 GRUPPER ABO-SERUMTEST : REAGENS ABO-ERYTHROCYTTEST : REAGENSER MED RØDE BLODLEGEMER Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) A1 A2 B O A B AB O Resultaterne af den direkte test og serumkontrollen skal være overensstemmende. Enhver afvigelse mellem de to test skal afklares inden ABO-resultatet kan fastlægges. Når resultaterne mellem den direkte test og serumkontrollen afviger, skal der altid udføres komplementerende test med respektive kontroller. 2 - Screening af irregulære erythrocytbundne antistoffer med to-trins enzymteknik Et negativt resultat (ingen agglutination og ingen hæmolyse) i de enkelte mikrorør angiver, at den testede prøve ikke indeholder antistoffer, der korresponderer antigener, der findes på testerythrocytterne, og som kan påvises med den anvendte metode. Derimod indikerer et positivt resultat (agglutination og/eller hæmolyse) i mindst et af mikrorørene forekomst af et eller flere antistoffer i serum eller plasma. Antistofferne skal derefter identificeres. En positiv reaktion i mikrorøret til auto-kontrol kan indikere, at et autoantistof er til stede. Hvis mindst et erytrocytreagens foruden den positive auto-kontrol agglutinerer, bør kombinationen af autoantistof og alloantistof tages i betragtming. Det er kun de antistoffer, der korresponderer med det antigen, som findes på testerythrocytterne, der kan påvises. Antistoffets/antistoffernes specificitet kan identificeres ved sammenligning af de positive og negative reaktioner observeret med hver erythrocytsuspension i det anvendte panel med den masterliste, der følger med panelet. 3 - Forligelighedstest Et positivt resultat (agglutination og/eller hæmolyse) viser, at der er å uforligelighed mellem modtagerens serum eller plasma og donorens røde blodlegemer. 80

9 VIII - YDEEVNE 1 - ABO serumkontrol ReverScan (A1, A2, B, 0) erythrocytsuspensioner er evalueret på et panel af 1132 prøver. Hvert resultat er blevet sammenlignet med resultater, der er opnået med glasplade-, mikrotiterplade- eller gelfiltreringsteknikker. Ud af alle testede prøver gav 1130 prøver de forventede resultater, mens 2 viste uoverensstemmelse med én af de parallelle metoder. Afvigelsen blev bekræftet efter sammenligning med den direkte ABO-test. Uanset den testede prøve viste de røde blodlegemer fra ReverScan, der blev anvendt til ScanGel NEUTRAL kortene, en god reproducerbarhed i både interne og krydskontrollerede test. 2 - Screening af irregulære erythrocytbundne antistoffer med to-trins enzymteknik Den specifikke ydeevne blev evalueret på prøver (1.783 patienter og 734 donorer) og viste en god balance mellem sensitivitet og specificitet. Hvert resultat er sammenlignet med resultater, der er opnået med immunbindingsteknik. 3,8% af tilfældigt valgte prøver, blev fundet positive ved screening for irregulære antistoffer (positive screeninger, hvor en eller flere allo- og/eller autoantistoffer blev identificeret). Specificiteten for en tilfældigt udvalgt patientpopulation var 98,8 %. Nogle antigener som f.eks. MNS1 (M), MNS2 (N), MNS3 (S), FY1 (Fy a ), FY2 (Fy b ) og XG1 (Xg a ) ændres eller ødelægges, når erythrocytterne behandles med med proteolytiske enzymer. Enzymteknikken kan således ikke anvendes som eneste teknik ved screening af irregulære erythrocytbundne antistoffer. Reproducerbarheden for applikationen blev testet og viste god ydeevne i både interne og krydskontrollerede test. 3 - Forligelighedstest Evalueringen af ydeevnen gav overensstemmende resultater med det reagens, der blev anvendt som reference. Hvert resultat er sammenlignet med de resultater, der er opnået med gelfiltreringsteknikker. Nogle uforligeligheder blev ikke kun belyst med denne test, men blev imidlertid belyst med den indirekte antiglobulintest i ScanGel-teknikken. Desuden ødelægges eller ændres nogle antigener som f.eks. MNS1 (M), MNS2 (N), MNS3 (S), FY1 (Fy a ), FY2 (Fy b ) og XG1 (Xg a ), når erythrocytterne behandles med proteolytiske enzymer. Enzymteknikken kan således ikke anvendes som eneste teknik ved udførelse af en forligelighedstest. 81

10 Reproducerbarheden for applikationen blev testet og viste god ydeevne i både interne og krydskontrollerede test. GRÆNSER Abnorme resultater kan være forårsaget af : bakteriel eller kemisk kontaminering af serum, plasma, de røde blodlegemer eller udstyret. patientmedicinering eller sygdom, der fremkalder en krydsreaktion. en anderledes behandling af de røde blodlegemer end den anbefalede. ufuldstændig resuspension af røde blodlegemer. anvendelse af et andet erythrocytsuspensionsmedium end det anbefalede. hæmolyse af prøven eller testerytrocytter. tilstedeværelse af fibrin (kompakt cellekoncentrat i bunden af mikrorøret sammen med et fint, lyserødt bånd øverst i gelen, der opstår som følge af røde blodlegemer, der tilbageholdes af fibrinresterne). en degradering af bromalinets eller papainets enzymatisk aktivitet ved enzymteknikken (manglende overholdelse af anvisningerne for konservering). kontaminering fra mikrorør til mikrorør. anvendelse af andre procedurer end de ovenfor beskrevne. Under licens fra DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Schweiz 82

11 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2007 Fax.: Code: