Leucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL. Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3

Transkript

1 Leucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3

2 Vejledende information Tilsigtet anvendelse Leucosep rørene er beregnet til anvendelse i forbindelse med indsamling og separation af mononukleære celler fra perifert blod (PBMC'er) fra fuldblod. Røret gør separationen af PBMC'er fra fuldblod lettere, når FICOLL-PAQUE* PLUS-proceduren benyttes inden anvendelse af disse celler i ELISPOT-analyser. Indledning I ELISPOT-teknikkerne benyttes T-celler i PBMC'er, som er blevet separeret fra fuldblod. En af metoderne til separation af disse celler kræver anvendelse af FICOLL-PAQUE PLUS. Denne procedure indeholder et antal trin, som skal udføres omhyggeligt for at sikre optimale resultater. Anvendelse af Leucosep rør nedsætter antallet af trin i proceduren, så den bliver mere robust, og tidsforbruget til separationsproceduren nedsættes. Metodens princip Leucosep rørene er udviklet med henblik på at opnå optimal separation af PBMC'er fra humant fuldblod ved hjælp af gradientcentrifugering. Leucosep rørene omfatter en porøs barriere i et transparent polypropylenrør. Denne biologisk inaktive barriere består af polyethylen af høj kvalitet. Leucosep røret eliminerer den tids- og arbejdskrævende lagdeling af prøvematerialet over FICOLL- PAQUE PLUS. Antikoaguleret fuldblod blandes med dyrkningsmediet og hældes derefter i Leucosep røret. Den porøse barriere forhindrer, at blodet blandes med separationsmediet (FICOLL- PAQUE PLUS). Under centrifugering separeres PBMC'erne fra uønskede erythrocytter på grund af deres forskellige densiteter, og PBMC'ern indsamles i grænsefladen over separationsmediet. Når separationen er færdig, forhindrer barrieren fornyet kontaminering af PBMC-laget, når det fjernes. Advarsler og forsigtighedsregler 1. Kun til diagnostisk anvendelse in vitro. 2. Må kun anvendes af faguddannet personale, som skal have modtaget undervisning i denne procedure. 3. Blodprøver skal anses for at være potentielt farlige. Der skal udvises forsigtighed i forbindelse med håndtering af materiale af human oprindelse. 4. Håndtering (anvendelse, opbevaring og bortskaffelse) af fuldblodsprøver og analysekomponenter skal ske i overensstemmelse med de procedurer, der er defineret i de relevante nationale retningslinjer eller bestemmelser for håndtering af biologisk risikomateriale. 5. Enhver afvigelse fra de anbefalede procedurer for pipettering og udvaskning eller fra centrifugeringstider og/eller -temperaturer kan forandre renheden i PBMC-isolationerne og påvirke de efterfølgende testresultater. 6. Der må ikke indsamles blod i Cell Preparation Tubes (CPT, Becton Dickinson) eller EDTAblodprøverør, da disse ikke er kompatible med Leucosep rørene. 7. Fuldblodsprøver må ikke sættes i køleskab eller nedfryses. Blodprøverne skal opbevares og transporteres til laboratoriet ved temperaturer på C eller C, hvis prøverne skal behandles med T-Cell Xtend -reagenset. 8. Blod må ikke opbevares i mere end 8 timer eller 32 timer, hvis det senere behandles med T-Cell Xtend -reagenset. 9. Brug kun engangsbeholdere til indsamling af venøse blodpræparater. 10. Må ikke anvendes efter udløbsdatoen. 11. Brug aseptiske teknikker i anvendelsen af dette produkt. 12. Leucosep rørene må ikke opbevares i direkte lys. 13. Produktet må ikke anvendes, hvis Leucosep rørene er beskadigede, eller hvis FICOLL- PAQUE PLUS er fordærvet, hvilket ses ved en udtalt gul farve eller partikelstoffer i den gennemsigtige opløsning. Leucosep indlægsseddel Side 2 af 6 PI-LT.615-DK-V3

3 Medfølgende materialer Hver kasse indeholder: 50 Leucosep rør, der er forfyldte med FICOLL-PAQUE PLUS. CD med indlægsseddel og MSDS. Opbevaring og stabilitet Opbevares uåbnet ved 4-30 C indtil udløbsdatoen, der er angivet på pakken. Det åbnede produkt opbevares ved stuetemperatur (18-25 C) og skal anvendes inden for 12 uger efter åbning af den ydre pose eller inden udløbsdatoen på kassen (førstkommende af de to tidspunkter). Nødvendigt udstyr og materialer, som ikke medfølger 1. Hepariniserede blodprøverør. 2. AIM V - og RPMI-celledyrkningsmedie ml centrifugerør. 4. En centrifuge til fraktionering af PBMC'er, som yder mindst RCF (g) og kan holde prøverne på stuetemperatur (18-25 C). 5. Biologisk sikkerhedskabinet, klasse 2 (anbefales). 6. Pipetter og sterile pipettespidser. 7. ELISPOT kit. 8. T-Cell Xtend-reagens kan være nødvendigt, hvis der bruges prøver, som er mere end 8 timer gamle. Procedure Bemærk: Nedenstående trin bør udføres i overensstemmelse med principperne for god laboratoriepraksis. 1. Kontrollér, at det nødvendige antal Leucosep rør har stuetemperatur (18-25 C) inden anvendelse. 2. Hvis FICOLL-PAQUE PLUS har samlet sig over den porøse barriere (fritte), centrifugeres Leucosep rørene ved 350 xg i 1 minut for at flytte FICOLL-PAQUE PLUS ned under fritten. 3. Vend fuldblodsprøven om og fortynd derefter i forholdet 5 dele fuldblod til 3 dele AIM V- eller RPMI-celledyrkningsmedie i et 15 ml centrifugerør. Vend centrifugerøret om flere gange for at blande indholdet. 4. Hæld det fortyndede blod direkte ned i Leucosep røret og centrifugér ved xg i 10 minutter ved C uden bremse. 5. Afsug det uklare PBMC-lag og fyld op til ~10ml med AIM V eller RPMI i et 15 ml centrifugerør. Vend centrifugerøret om for at blande indholdet. 6. Centrifugér ved 600 xg i 7 minutter. Kassér supernatanten. 7. Resuspender cellepelleten med AIM V eller RPMI, fyld op til ~10 ml med AIM V eller RPMI og centrifugér ved 350 xg i yderligere 7 minutter. 8. Kassér supernatanten og resuspender cellepelleten i den mængde AIM V (ikke RPMI), som ELISPOT-analysen kræver. 9. Hvis der er behov for celler til antigenstimulering i en ELISPOT-analyse, fortyndes cellerne tilsvarende med AIM V (ikke RPMI). Begrænsninger 1. Som det er tilfældet med andre separationsmetoder, kan Leucosep rørene ændre andelen af nogle PBMC-undergrupper (fx T- og B-celler) i forhold til dem, der findes i usepareret fuldblod. Denne ændring menes at være forholdsvis ubetydelig i normale tilfælde. Leucosep indlægsseddel Side 3 af 6 PI-LT.615-DK-V3

4 Kvalitetskontrol Interne test har ikke vist noget signifikant fald i PBMC-ydelserne ved en sammenligning af FICOLL- PAQUE PLUS med Leucosep rør. Celleoptællingsmetoder bør udvikles og valideres som en del af det enkelte laboratoriums kvalitetskontrol for at sikre, at et tilstrækkeligt antal PBMC'er er indsamlet til det relevante prøvesystem. Desuden bør kvalitetskontrollen omfatte anvendelse af positive og negative kontroller, som er udviklet for at sikre, at T-cellernes ydeevne inden for det relevante prøvesystem er som forventet. Funktionsdata Opbevaret blod, hvor T-Cell Xtend-reagens er anvendt Der blev indsamlet to 6 ml blodprøver fra 46 donorer. Den ene prøve fra hver donor blev bearbejdet inden for 8 timer efter venepunktur ved hjælp af manuel lagdeling med FICOLL*. Den anden prøve blev bearbejdet med et Leucosep rør efter timers opbevaring med anvendelse af T-Cell Xtend-reagenset. Ved begge metoder blev der indsamlet et tilstrækkeligt antal celler til, at prøverne kunne køres i en ELISPOT-analyse, og cellerne fra alle prøver var funktionelle i analysen. Frisk blod Der blev indsamlet to 6 ml blodprøver fra 52 donorer. Begge prøver fra hver donor blev bearbejdet inden for 8 timer efter venepunktur. Den første prøve blev bearbejdet ved hjælp af manuel lagdeling med FICOLL. Den anden prøve blev bearbejdet med anvendelse af et Leucosep rør. Ved begge metoder blev der indsamlet et tilstrækkeligt antal celler til, at prøverne kunne køres i en ELISPOT-analyse, og cellerne fra alle prøver var funktionelle i analysen. Vejledning til fejlfinding ved indsamling og separation af PBMC'er til ELISPOT Problem Mulig årsag Mulig løsning Lav cellemængde Leukopeni Tilføj yderligere et blodprøverør Forkert blodindsamling Blodprøverøret har ikke stuetemperatur (18-25 C) Opbevaring af blodet er ikke sket ved den påkrævede temperatur Der er brugt andre mængder eller fortyndinger end de anbefalede CPT og blodprøverør, der indeholder EDTA, er ikke kompatible med Leucosep rør Lad blodprøverøret opnå stuetemperatur Kontrollér, at blodet transporteres ved C eller C, hvis T-Cell Xtend-reagenset anvendes Kontrollér, at instruktionerne er fulgt korrekt Leucosep indlægsseddel Side 4 af 6 PI-LT.615-DK-V3

5 Kontaminering med røde blodlegemer Intet afgrænset eller udtalt mononukleært lag Opbevaring af blodet er ikke sket ved den påkrævede temperatur Blodprøverøret har ikke stuetemperatur (18-25 C) Blodet er ikke fortyndet Blodprøven er vendt om inden i Leucosep røret Forkert centrifugering Prøveseparation ikke fuldendt Prøveseparation ikke fuldendt Centrifugen er ikke kalibreret korrekt Kontrollér, at blodet transporteres ved C eller C, hvis T-Cell Xtend-reagenset anvendes Lad blodprøverøret opnå stuetemperatur Kontrollér, at blodet er fortyndet i overensstemmelse med proceduren Kontrollér, at Leucosep røret står oprejst inden centrifugering Kontrollér, at instruktionerne til centrifugering er fulgt Kontrollér, at centrifugen kan nedkøle ved C Kontrollér, at centrifugebremsen er slukket Forøg centrifugeringstrinet med 10 min. Forøg centrifugeringstrinet med 10 min. Få centrifugen kalibreret Forkert centrifugering Hyperlipidæmi Ugyldige resultater Ugyldige resultater kan skyldes flere forskellige problemer med forkert håndtering af prøven Kontrollér, at instruktionerne til centrifugering er fulgt Indsaml fastende blodprøve Se ovenstående afsnit Leucosep indlægsseddel Side 5 af 6 PI-LT.615-DK-V3

6 Symbolforklaring» Anvendes før/udløbsdato (år-måned-dag) 3 Lotnummer 4 Katalognummer Bemærk: læs brugsanvisningen Ó Producent i Tilstrækkelig til n test 1 Anordning til diagnostik in vitro j Temperaturbegrænsning/opbevares mellem ² Læs brugsanvisningen T-Cell Xtend og Oxford Immunotecs logo er varemærker tilhørende Oxford Immunotec Limited. AIM V er et varemærke tilhørende Invitrogen. CPT er et varemærke tilhørende Becton Dickinson. * FICOLL og FICOLL-PAQUE er varemærker tilhørende GE-selskaberne. Brug af T-Cell Xtend-reagenset er beskyttet under følgende patenter samt anmeldte patenter: EP ; US13/253,598, CN , AU , JP , IN2165/DELNP/2009, CA Oxford Immunotec Limited, Alle rettigheder forbeholdes. Producent: Oxford Immunotec Ltd 94C Innovation Drive, Milton Park, Abingdon Oxfordshire, OX14 4RZ, Storbritannien +44(0) Leucosep indlægsseddel Side 6 af 6 PI-LT.615-DK-V3