ApodanNordic A/S Att. Heine Dalsgaard Legravsvej 63 2300 København S Teknologiparken Kongsvang Allé 29 DK-8000 Aarhus C Telefon 72 20 10 00 Telefax 72 20 10 19 info@teknologisk.dk www.teknologisk.dk Analyserapport nr. 558981.2 Opgave: Kvantitativ suspensionsprøvning til evaluering af virusdræbende aktivitet af kemiske desinfektionsmidler og antiseptiske midler til brug på det medicinske område efter DS/EN 14476 Prøvetagning ved: Rekvirenten Prøvemodtagelse: Juli 2013 Analyseperiode: 15. juli 2. september 2013 Bemærkninger: Resultaterne af analysen samt redegørelse for anvendt(e) metode(r) vedrører kun de(t) analyserede emne(r) eller de(n) til analyse udtagne delprøve(r). Analysen er udført i henhold til Teknologisk Instituts almindelige vilkår for rekvirerede opgaver. Analyserapporten må kun gengives i uddrag, hvis Kemisk og Mikrobiologisk Laboratorium skriftligt har godkendt uddraget. Kemisk og Mikrobiologisk Laboratorium, Aarhus Testen blev udført af Mikrolab GmbH, Norderoog 2, D-28259 Bremen. Helle Stendahl Andersen Konsulent 2013.09.27 Rapport nr.: 558921.2 Antal bilag: 1 Side 1 af 5
Konklusion Effektiviteten af væsken beregnet til imprægnering af desinfektionsklude til overfladedesinfektion, blev testet efter standard pren 14476:2011. Da poliovirus kun opnåede en effektivitet ved 97 % produktkoncentration, var det nødvendigt, at teste produktet i henhold til pren 14476 i stedet for EN 14476:2005+A1:2007. Testen skal påvise, at produktet, under forudsætning af de i standarden givne forhold, kan reducere virus med mindst en log 4. Testen blev udført under stimulerede forurenede forhold. Ved udførelse af pren14476:2011 vil produktet blive fortyndet ved tilsætning af bakteriesuspension og interfererende substans, så den testede koncentration er 97 % af den oprindelige koncentration. For test af adenovirus blev testen udført med en 80 % koncentration af det oprindelige produkt. Testen blev udført af Mikrolab GmbH, Norderoog 2, D-28259 Bremen. Produkt: ApoWipe Ethanol Desinfection Batch-nr.: L13/0157 Producent: ApodanNordic A/S Opbevaring: Produktets udseende: Desinfektionsvæsken blev opbevaret i mørke ved stuetemperatur Klar væske. Aktive stoffer: 75-85 % ethanol Eksperimentelle forhold Testorganismer: Poliovirus type 1, LSc-2ab Adenovirus, type 5, adenoid 75, ATCC VR-5 Murin norovirus (MNV), som et surrogat for human norovirus Kontakttid: 1 min. 5 min. Forsøgstemperatur: 20 C. 2013.09.27 Rapport nr.: 558921.2 Antal bilag: 1 Side 2 af 5
Titreringsmetode: Endpoint titrering i microtiterplader. Produktkoncentrationer Fortyndingsmedie: 97,0 % (brugskoncentration) 80,0 % (brugskoncentration) 50,0 % (ikke aktive område) 10,0 % (ikke aktive område) Hård vand Interfererende substans: 3,0 g/l bovin serum albumin + 3ml/L røde blodceller (simulerede forurenede forhold) Procedure benyttet til at stoppe virkningen af produktet var umiddelbar fortynding af test-opløsningen. Beregning af den infektive dosis for TCIS 50 er beregnet ved hjælp af Spaerman- Kärber metoden. Resultater Alle kontroller var opfyldte de fastsatte betingelser, se bilag 1. Testorganisme Kontakttid 97 % ethanol 80 % ethanol 50 % ethanol 10 % ethanol Poliovirus 1 min. 4,38 ±0,37 Ingen effekt Ikke testet Ingen effekt Adenovirus 1 min. Ikke testet 5,75 ±0,23 4,75 ±0,23 Ingen effekt Murin norovirus 1 min. 5,38 ±0,36 6,25 ±0,23 Ingen effekt Ingen effekt Tabel 1. Produktet skal kunne opnå en 4 log reduktion. Konklusion For alle tre virus-typer var en kontakttid på 1 minut nok til at opnå en reduktion på log 4 efter de i standarden angivne forhold. Det var kun muligt at reducere poliovirus, type 1 med log 4 med en 97 % opløsning af den færdige ethanol-blanding. For Adenovirus, type 5 var det muligt at opnå log 4 med både en 80 % opløsning og en 50 % opløsning. For murin norovirus var det muligt at opnå en log opnå log 4 med både en 97 % opløsning og en 80 % opløsning. ApoWipe Ethanol Desinfection kan benyttes til reducere hhv. poliovirus type 1, adenovirus type 5 og murin norovirus virus med log 4 under forurenede forhold og med en kontakttid på 1min. Se vedlagte ekspert udtalelse fra Hr. Dr. Jochen Steinman. (Bilag 2). 2013.09.27 Rapport nr.: 558921.2 Antal bilag: 1 Side 3 af 5
Bilag 1: Validering af metoden a. Test af cytotoksisk effekt Test af en mulig morfologisk ændring af værtscellerne eller påvirkning af væksten, forårsaget af produktet. Produktet må ikke udvise en cytotoksisk effekt overfor værtscellerne. Titrering af skal vise, at det er muligt at kunne bestemme en 4 log reduktion. Ved titrering var den maksimale påviselige log reduktion 5,75, og det er derfor muligt at bestemme en 4 log reduktion. Det ufortyndede produkt (80,0 %) viste ingen cytotoksitet i en 1:10- fortynding, hvilket giver mulighed for at kunne bestemme en 4 log reduktion. Ved titrering var den maksimale påviselige log reduktion 4,50 og 5,00, og det er derfor muligt at bestemme en 4 log reduktion. Det ufortyndede produkt (97,0 %) viste cytotoksitet i en 1:10-fortynding, hvilket giver mulighed for at kunne bestemme en 4 log reduktion. Murin norovirus Ved titrering var den maksimale påviselige log reduktion 5,38, og 6,25, og det er derfor muligt at bestemme en 4 log reduktion. Det ufortyndede produkt (97,0 %) viste ingen cytotoksitet i en 1:10- fortynding, hvilket giver mulighed for at kunne bestemme en 4 log reduktion. b.sensitivitet af værtscellerne overfor virus Et volumen af den laveste ikke toksiske produktkoncentration, blev blandet med en dobbelt koncentration af cellesuspension, som efter 1 times henstand ved 37 C blev centrifugeret og re-suspenderet i vækstmedium. Der blev samtidig lavet en kontrol, hvor produktet blev udskiftet med PBS. Til sidst blev der lavet en titrering af virussuspensionen med både forhandlet (produkt) og ikke forbehandlet celler. (PBS) A549 celler viste en acceptable forskel på < 1 log 10 i virus titer (iht. pren 5.7). 7,63 ±0,25 (PBS) versus 7,13 ±0,37 (desinfektionsmiddel 80 %, 1:10 (PBS) BGM celler viste en acceptable forskel på < 1 log 10 i virus titer (iht. pren 5.7). 2013.09.27 Rapport nr.: 558921.2 Antal bilag: 1 Side 4 af 5
8,25 ±0,44 (PBS) versus 8,13 ±0,45 (desinfektionsmiddel 97 %, 1:100 (PBS) RAW 264,7 celler viste en acceptable forskel på < 1 log 10 i virus titer (iht. pren 5.7). 7,63 ±0,41 (PBS) versus 7,50 ±0,35 (desinfektionsmiddel 97 %, 1:10 c. Kontrol af neutralisering af desinfektionsmiddels aktivitet Hvis kontrolprøven for neutralisering af desinfektionsmiddels aktivitet er effektiv, må der ikke kunne observeres en nedgang i aktivitet i virus titer. Kontrollen viste ingen nedgang i aktivitet i virus titer. (7,50±0,46 versus 7,25±0,33). Kontrollen viste ingen nedgang i aktivitet i virus titer. (7,13±0,37 versus 7,50±0,46). Kontrollen viste ingen nedgang i aktivitet i virus titer efter 30min. (6,63±0,53 versus 6,88±0,51). d. Reference kontrol til inaktivering af virus Som reference kontrol til validering af metodens egnethed til inaktivering af virus, blev 0,7 % formaldehyd benyttet. Kontakttider var på 5, 15, 30 og 60 min. Derudover blev graden af cytotoksitet af formaldehyd bestemt ved fortyndinger op til 10-5. Metodens egnethed vurderes ved at beregne log reduktionen for virussuspensionen ved inaktivering med 0,7 % formaldehyd til forskellige tider. Log 10 virus kontrol Log 10 Ref. kontrol til inaktivering med 0,7 % formaldehyd Cytotoksitet med 0,7 % formaldehyd er 4,50. efter 30 min. 3,00 ±0,25 (bør være mellem 3,0-5,0): OK efter 60 min. 3,00 ±0,25 (bør være mellem 3,5-5,5): For lav Værdien 3,5 blev ikke opnået efter 60 min., da startkoncentrationen for virus titer (7,50) var for lav til at opnå en reduktion på 3,50. For at kunne opnå en log reduktion på 3,5, med en cytotoksitet på 4,50, burde startkoncentrationen for virus titer have været 8,00, (4,50+3,50 = 8,00). På trods af denne for lave reduktion efter 60 min., anses testen for at være valid. efter 30 min. 1,13 ±0,59 (bør være mellem 0,5-2,5): OK efter 60 min. 2,38 ±0,56 (bør være mellem 2,0-4,5): OK Se resultat under pkt. d) 2013.09.27 Rapport nr.: 558921.2 Antal bilag: 1 Side 5 af 5