Maxwell CSC Blood DNA Kit

Transkript

1 TEKNISK VEJLEDNING Maxwell CSC Blood DNA Kit Brugsanvisning for produktet AS1321 Forsigtig: Håndter cartridges forsigtigt; kanterne af forseglingen kan være skarpe. BRUGSANVISNING FOR PRODUKTET AS Woods Hollow Rd. Madison, WI USA MDSS GmbH Schiffgraben Hannover, Germany Revideret 5/18 TM374

2 Maxwell CSC Blood DNA Kit Al teknisk litteratur er tilgængelig på: Du er velkommen til at besøge vores websted, hvor du kan verificere, at du anvender den nyeste version af denne tekniske vejledning. Kontakt teknisk service hos Promega via , hvis du har spørgsmål om brugen af dette system: 1. Beskrivelse Produktkomponenter, opbevaringsforhold og symboler Tilsigtet anvendelse af produktet Begrænsninger i brugen Inden du går i gang A. Forberedelse af fuldblodsprøver B. Forberedelse af Maxwell CSC cartridge Instrumentprocedure Post-oprensning Fejlfinding Reference Liste over ændringer Maxwell CSC Blood DNA Kit fås kun i bestemte lande. Dette produkt opfylder de grundlæggende krav i EU-direktiv 98/79/EF vedrørende medicinsk udstyr til in vitro diagnostik. 1. Beskrivelse Maxwell CSC Blood DNA Kit (a) benyttes sammen med Maxwell CSC instrumentet og er en nem metode til effektiv, automatisk oprensning af genomt DNA (gdna) fra humane blodprøver. Maxwell CSC instrumentet leveres med forprogrammerede oprensningsmetoder, og det er konstrueret til brug med de prædispenserede reagenscartridges og yderligere reagenser, der følger med sættet, hvilket maksimerer let betjening og bekvemmelighed. Instrumentet kan behandle op til 16 prøver på 40 minutter, og det oprensede DNA kan benyttes direkte i en lang række efterfølgende processer så som PCR. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

3 1. Beskrivelse (fortsat) Maxwell CSC Blood DNA Kit oprenser nukleinsyre ved hjælp af en ny paramagnetisk partikel, som giver en mobil fast fase, som optimerer prøvetagning, vask og oprensning af gdna. Denne partikel udnytter cellulose-baseret binding af nukleinsyrer og giver større bindingskapacitet og renere eluat end traditionel silika-baseret DNA-oprensning. Maxwell CSC instrumentet er et håndteringsinstrument for magnetisk partikel, der muliggør effektiv binding af gdna til den paramagnetiske partikel i den første brønd i en prædispenseret cartridge, og som fører prøven gennem cartridges brønde og omrører under behandlingen. Denne metode med magnetisk opsamling undgår normale problemer så som tilstoppede spidser eller partiel overføring af reagenser, som medfører en suboptimal rensningsproces, som det er tilfældet for andre udbredte, automatiserede systemer. 2. Produktkomponenter, opbevaringsforhold og symboler PRODUKT STØRRELSE KAT.# Maxwell CSC Blood DNA Kit 48 preps AS1321 Til in vitro diagnostik. Kun til professionel anvendelse. Tilstrækkelig til 48 automatiserede isoleringer fra 300 μl prøver af fuldblod. Maxwell CSC cartridges er kun beregnet til éngangsbrug. 15 C 30 C 6010TB 48 Indhold: 2 1 ml Proteinase K (PK) Solution 20 ml Lysis Buffer 48 Maxwell CSC Blood Cartridges 50 CSC/RSC Plungers 50 Elution Tubes (0.5ml) 20 ml Elution Buffer Opbevaringsforhold: Maxwell CSC Blood DNA Kit skal opbevares ved C. Sikkerhedsinformation: Reagenscartridges indeholder etanol og isopropanol. Disse stoffer er brændbare, skadelige og irriterende. Maxwell CSC cartridges er beregnet til brug med potentielt infektiøse stoffer. Brugerne skal bære korrekt beskyttelsesudstyr (f.eks. handsker og beskyttelsesbriller) under håndteringen af infektiøse stoffer. Brugerne skal overholde institutionens retningslinjer vedrørende håndtering og bortskaffelse af alle infektiøse stoffer, som anvendes med dette system. Forsigtig: Håndter cartridges forsigtigt; kanterne af forseglingen kan være skarpe. 2 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

4 Supplerende information: Maxwell CSC Blood DNA Kit komponenterne er beregnet til og kvalitetskontrolleret til at fungere sammen. Det frarådes at blande kit-komponenter fra forskellige kits. Brug kun de komponenter, der findes i det pågældende kit. Symbolforklaring Symbol Forklaring Symbol Forklaring Medicinsk udstyr til in vitro diagnostik Repræsentant 15 C 30 C Opbevares ved C Woods Hollow Rd. Madison, WI USA Fabrikant Forsigtig Irriterende Karcinogen Indeholder tilstrækkeligt til n tests Conformité Européenne Advarsel. Biologisk betinget fare. Advarsel. Klemningsfare. Bestillingsnummer Lotnummer Må ikke genbruges Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

5 3. Tilsigtet anvendelse af produktet Maxwell CSC Blood DNA Kit er beregnet til brug sammen med Maxwell CSC instrumentet og Maxwell CSC Blood DNA oprensningsmetoden som et medicinsk udstyr til in vitro diagnostik (IVD) til at foretage automatisk isolation af genomt DNA fra prøver af humant fuldblod. Det oprensede DNA er egnet til brug i forstærker-baserede in vitro diagnoseprocedurer. Maxwell CSC Blood DNA Kit er beregnet til brug ved en temperatur på C. Brug uden for dette temperaturinterval kan medføre suboptimale resultater. Prøver af fuldblod i blodprøveglas, der indeholder EDRA, heparin eller natriumcitrat som antikoagulerende stof kan benyttes i Maxwell CSC Blood DNA Kit. Skema 1 viser de tidsrum, som prøverne kan opbevares i under forskellige forhold inden brugen i Maxwell CSC Blood DNA Kit. Maxwell CSC Blood DNA Kit er ikke beregnet til brug med prøver, der er indsamlet i andre typer af blodprøveglas eller er opbevaret under forhold, er ligger uden for det, der er angivet i skema 1. Opbevaringstemperatur for prøver Opbevaringstid inden oprensning C Op til 72 timer 2 10 C Op til 7 dage 80 C eller lavere Uendeligt Maxwell CSC Blood DNA Kit er ikke beregnet til brug som en del af en specifik diagnostisk test. Maxwell CSC Blood DNA Kit er kun beregnet til professionel brug. De diagnostiske resultater, som opnås ved brug af DNA, der er oprenset med dette system, skal fortolkes sammen med andre kliniske data eller laboratoriedata. 4 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

6 4. Begrænsninger i brugen Maxwell CSC Blood DNA Kit er ikke beregnet til brug med vævsprøver eller prøver af andre legemsvæsker end humant fuldblod eller størknede prøver af humant fuldblod. Maxwell CSC Blood DNA Kit er ikke beregnet til brug med ikke-humane prøver, herunder bakterie- og virusprøver, eller til oprensning af RNA. Maxwell CSC Blood DNA Kit præstationerne er evalueret ved at isolere DNA fra µl prøver af fuldblod med et antal hvide blodlegement (wbc) fra til wbc/ml og eluering af DNA i µl. Det er ikke beregnet til brug med prøver uden for dette interval. Præstationerne for Maxwell CSC Blood DNA Kit er evalueret for kompatibilitet med følgende potentielle inhibiterende faktorer for genomt DNA forstærkning: hæme, alkohol, IgG og guanidin. Andre stoffer er ikke evalueret. Brugeren er ansvarlig for etableringen af de ydelseskarakteristika, der er nødvendige for efterfølgende diagnostiske anvendelser. Der skal inkluderes kontroller i alle efterfølgende diagnostiske anvendelser, som gør brug af nukleinsyre, der er oprenset vha. Maxwell CSC Blood DNA Kit. 5. Inden du går i gang Materialer, som skal leveres af brugeren optional, roterende prøveglasmixer til flydende blodprøver vortex-mixer, bordmodel pipetter og pipettespidser til overføring af prøver til på forhånd fyldte reagenscartridges 1,5 2,0 ml prøveglas til inkubering af prøver (f.eks. Microtubes, 1,5 ml [Cat.# V1231]) varmeblok indstillet til 56 C (Bemærk: Varmeblokken skal være indstillet til 56 C. Varmeblokkens temperatur skal måles med et kalibreret termometer. Kontroller, at temperaturen er 56 C og nøjagtig inden for termometrets fejlmargin). Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

7 5.A. Forberedelse af fuldblodsprøver Behandlingskapacitet for fuldblodsprøver Det totale udbytte af genomt DNA fra fuldblodsprøver afhænger af prøvevolumen og antallet af hvide blodlegemer/ml. Hver enkel cartridge til Maxwell CSC Blood DNA Kit er beregnet til at oprense genomt DNA fra µl af fuldblod med et antal hvide blodlegemer på til wbc/ml fuldblod (værdi for en normal, sund voksen person; 1). Vi anbefaler at foretage en optælling af hvide blodlegemer for hver prøve inden oprensning af DNA for at sikre, at prøven ligger inden for dette interval. Prøver uden for dette interval vil muligvis ikke give optimale resultater. Bemærk: Dette kit er testet med prøver af humant fuldblod, der er indsamlet i prøveglas med EDTA, natriumcitral eller heparin. Virkningen af kemien kan ikke garanteres med andre typer af blodprøveglas. Blodprøverne kan være friske (opbevaret ved C i indtil 72 timer), kølede (opbevaret ved 2 10 C i indtil 7 dage) eller frosne (opbevaret ved 80 C eller derunder) inden DNA-oprensning. Frosne prøver skal optøs inden behandling. Alle blodprøver skal omrystes grundigt inden brugen. 1. Omryst alle blodprøver i mindst 5 minutter ved C. 2. Klargør og mærk inkubationsglas, der passer til varmeblokken, der er indstillet til 56 C. 3. Tilsæt 30 μl proteinase K (PK) opløsning til alle inkubationsglas. 4. Tilsæt flydende blod (mellem 50 µl og 300 μl) til alle inkubationsglas. Sørg for at undgå evt. størknet materiale ved overførsel af blod til inkubationsglassene. Systemet er ikke beregnet til brug med størknede prøver. Skift spidser mellem hver overførsel af blodprøver for at undgå krydskontaminering. 5. Tilsæt 300 μl lysisbuffer til alle inkubationsglas. Skift spidser mellem hver overførsel af lysisbuffer for at undgå krydskontaminering. 6. Kør alle glas i vortex-mixeren ved maksimal hastighed i 10 sekunder. 7. Inkuber alle glas i varmeblokken (indstillet til 56 C) i 20 minutter. Under inkuberingen forberedes cartridges som beskrevet i afsnit 5.B. 8. Kontroller hver enkelt lysat efter inkubering. Efter behandlingen med proteinase K skifter prøven farve fra rød til grønligt brun. Hvis prøven ikke skifter farve efter behandling med proteinase K, er det en indikation af, at behandlingen var ineffektiv, og at udbyttet og renheden af den følgende oprensning af DNA vil være påvirket. Hvis der ikke kan ses noget farveskift efter afslutningen af behandlingen med proteinase K, må prøverne ikke behandles yderligere. 9. Overfør hver enkel blodlysis-prøve fra inkubationsglasset til brønd nr. 1 i hver sin cartridge. (Brønd nr. 1 er den største brønd i cartridge). Skift spidser mellem hver overførsel for at undgå krydskontaminering. Bemærk: Maxwell CSC cartridges skal indeholde en synlig, sort kugle af mikropartikel-harpiks i brønd nr. 2 i cartridge. Hvis harpiksen ikke kan ses, rystes partiklerne ned i cartridge, inden forseglingen fjernes, for at løsne evt. harpiks, der klæber til forseglingen på cartridge. 6 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

8 5.B. Forberedelse af Maxwell CSC cartridge 1. Skift handsker inden håndtering af Maxwell CSC cartridges, CSC/RSC plungers og elueringsrør. Cartridges placeres på Maxwell CSC bakken uden for instrumentet, og bakken med cartridges og prøverne føres derpå ind i instrumentet til oprensning. Placer de cartridges, der skal benyttes, i Maxwell CSC bakken (fig. 2). Placer hver enkelt cartridge i bakken med brønd nr. 1 (den største brønd i cartridge) længst væk fra elueringsrørene. Tryk cartridge ned og klik den fast. Kontroller, at begge ender af cartridge er helt på plads i bakken. Træk forsigtigt forseglingen tilbage, således at hele forseglingen fjernes fra toppen af cartridge. Sørg for at fjerne al forseglingstape og eventuelt tilbageværende klæbemiddel, inden cartridges anbringes i bakken. Forsigtig: Cartridges skal håndteres forsigtigt. Kanterne af forseglingen kan være skarpe. 2. Anbring én plunger i brønd nr. 8 i hver cartridge. 3. Placer et tomt elueringsrør på elueringsrørpladsen for hver enkelt cartridge i Maxwell CSC bakken. Bemærk: Der må kun bruges de elueringsrør, der følger med Maxwell CSC Blood DNA Kit. Andre elueringsrør er muligvis ikke kompatible med Maxwell CSC instrumentet og kan påvirke DNA oprensningen. 4. Tilsæt µl elueringsbuffer til bunden af hvert elueringsrør. Bemærk: Der må kun bruges den elueringsbuffer, der følger med Maxwell CSC Blood DNA Kit. Brug af andre elueringsbuffere kan evt. påvirke DNA oprensningen. Bemærkninger om forberedelse af Maxwell CSC cartridge 1. Anbring cartridges centralt på bakken, hvis du behandler færre end 16 prøver. 2. Tør spild af prøver eller reagens på Maxwell CSC bakken af som angivet i Maxwell CSC Instrument Manual. Anvend ikke blegemiddel på instrumentets dele. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

9 10784TA Bindingsbuffer Buffer 2. Paramagnetiske Paramagnetic Cellulose cellulosepartikler Particles Bemærk: Note: If particles Hvis partiklerne are not visible i brønd in 2 ikke Well kan 2, shake ses, omrystes down the cartridge, inden forseglingen to dislodge particles fjernes, that for at may løsne have evt. partikler, adhered to der the klæber seal material til forseglingen. before removing the seal. 3. Vaskebuffer Vaskebuffer Wash Buffer Vask Wash Buffer Vask Wash Tom Wash Tom Empty 8. Empty VoBrugertilsætning Well Content User Adds: til brønde: Lyseret Lysed whole fuldblodsprøve blood sample CSC/RSC CSC/RSC Plunger Plunger Fig. 1. Maxwell CSC cartridge Denne illustration viser indholdet i en cartridge. En prøve af lyseret fuldblod tilføres brønd nr. 1, og der placeres en plunger i brønd nr. 8. Fig. 2. Opsætning og konfiguration af Maxwell CSC bakke. Der tilføres elueringsbuffer til elueringsrørene som angivet. 8 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

10 6. Instrumentprocedure Se Maxwell CSC Instrument Operating Manual for mere detaljerede informationer. 1. Tænd for Maxwell CSC instrumentet og tablet-pcen. Instrumentets brugerinterface starter automatisk, og instrumentet gennemfører en selvkontrol og sætter alle bevægelige dele tilbage til udgangspositionen. 2. Vælg Start på hjem-skærmbilledet. 3. Scan eller indtast metode-stregkoden på Maxwell CSC Blood DNA Kit mærkaten for automatisk at vælge den metode, der skal køre (fig. 3). Bemærk: Maxwell CSC Blood DNA Kit metode-stregkoden kræves for at køre DNA oprensning på Maxwell CSC instrumentet. Kittets mærkat indeholder to stregkoder. Metode-stregkoden er vist i fig TA Fig. 3. Kit-mærkat, der viser den metode-stregkode, der skal scannes. Den røde ramme angiver den metode-stregkode på mærkaten, der skal scannes for at starte en oprensningsprocedure. 4. Vælg de positioner i cartridges, der skal behandles (se Maxwell CSC Instrument Operating Manual), og indscan eller indtast manuelt de nødvendige informationer til sporing af prøverne. 5. Verificer, at prøverne er påfyldt brønd nr. 1 i cartridges, at cartridges er indført i instrumentet, at elueringsrør med μl elueringsbuffer er isat, og at plungers er placeret i brønd nr. 8. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

11 6. Instrumentprocedure (fortsat) 6. Placer Maxwell CSC bakken med de forberedte cartridges på Maxwell CSC instrumentets platform. Kontroller, at bakken er anbragt således i Maxwell CSC instrumentet, at elueringsrørene er tættest på døren. Bakken kan kun være i instrumentet, når den vendes på denne måde. Kontroller at du har vendt bakken korrekt, hvis du har svært ved at anbringe bakken på platformen. Kontroller, at bakken står vandret på instrumentets platform. Bemærk: Hold Maxwell CSC bakken i siderne for at undgå at cartridges flytter sig fra deres plads i bakken. 7. Bekræft, at alle anførte forberedelser er udført, og tryk på Start for at lukke instrumentets dør og starte processen. Advarsel: Klemningsfare. 8. Maxwell CSC instrumentet starter oprensningsproceduren med det samme. Skærmen viser de udførte trin og den omtrentlige tid, der er tilbage af processen. Bemærk: Hvis processen standses, inden den er afsluttet, vasker instrumentet partiklerne af plungers og skubber plungers ned i brønd nr. 8 i cartridge. Prøverne går tabt. Forsøg ikke at oprense prøver igen, for hvilke instrumentproceduren blev afbrudt. 9. Når den automatiske oprensning er udført, vil tablet-pc-skærmen vise en meddelelse om, at metoden er afsluttet. Afslutning af processen 10. Følg skærminstruktionerne efter afslutning af metoden for at åbne døren. Kontroller, at plungers befinder sig i brønd nr. 8 i cartridges, når processen er afsluttet. Tag bakken ud af instrumentet, og tag de eluerede prøver ud af bakken. Hvis ikke alle plungers er fjernet fra plunger bar: følg informationerne på skærmen for at foretage Clean-Up-proceduren for en afbrudt proces, eller vælg Clean-Up proceduren fra indstillings-skærmbilledet for en korrekt afsluttet proces for at fjerne de resterende plungers. 11. Tag Maxwell CSC bakken ud af instrumentet straks efter afslutningen af processen for at forhindre fordampning af eluaterne. Tag elueringsrørene med DNA ud, og luk glassene. Bemærk: Efter den automatiske oprensningsprocedure kan Maxwell CSC bakken være varm. Tag fat i bakkens sider, når den fjernes fra instrumentets platform. Sørg for at fjerne prøverne fra instrumentet, inden der køres UV-sanitering, for at undgå at beskadige den oprensede nukelinsyre. 12. Fjern cartridges og plungers fra Maxwell CSC bakken. Bortskaf dem som farligt affald i henhold til din institutions procedurer. Maxwell CSC cartridges, CSC/RSC plungers og elueringsrør må ikke genbruges. 10 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

12 7. Post-oprensning Verificer, at udbyttet og renheden af de oprensede DNA prøver opfylder de krav, der stilles af de efterfølgende diagnoseprocedurer, inden de benyttes i de pågældende procedurer. 8. Fejlfinding Kontakt venligst det lokale Promega-filialkontor eller -distributør, hvis du har spørgsmål, som ikke behandles her. Kontaktinformation kan findes på: techserv@promega.com Symptomer Koncentrationen er lavere end forventet En 300 µl prøve af fuldblod indeholdende til hvide blodlegemer/ml bør give et udbytte på >80 ng/µl genomt DNA i et elueringsvolumen på 50 µl (som målt ved absorbering ved 260 nm). Renheden er lavere end forventet En 300 µl prøve af fuldblod indholdende til hvide blodlegemer/ml elueret i et volumen på 50 µl bør producere gdna med et A 260 /A 280 forhold (renheden målt ved absorption ved 260 nm divideret med absorption ved 280 nm) på 1,7 eller derover, og et A 260 /A 230 forhold (renheden målt ved absorption ved 260 nm divideret med absorption ved 230nm) på 1,5 eller derover. Årsager og kommentarer Blod, der har gennemgået flere nedfrysnings-optøningscykler, kan have beskadiget DNA. Brug prøver, der er taget og opbevaret under de forhold, der er anført i afsnit 3. Fuldblodsprøven havde et lavt indhold af hvide blodlegemer. Udbyttet af genomt DNA fra blodprøver afhænger af antallet af hvide blodlegemer i prøven. Der er ikke tilsat proteinase K opløsning, der er tilsat en utilstrækkelig mængde proteinase K opløsning, eller proteinase K er ikke omrystet effektivt med blodprøven inden tilsætningen af lysisbuffer. Lysis og udbytte afhænger af fuldstændig udtrækning med proteinase K. Hvis der ikke er tilsat proteinase K i afsnit 3A, trin 3, vil den resulterende blodprøve være rød. Proteinase K-behandlede prøver bliver grønligt-brune, hvilket kan benyttes som en visuel indikation af, at der er tilsat proteinase K til prøven. Fuldblodsprøven er ikke omrystet før behandling. Sørg for at omryste fuldblodsprøver inden behandling for at sikre at de hvide blodlegemer er fordelt. Der er ikke tilsat proteinase K opløsning, der er tilsat en utilstrækkelig mængde proteinase K opløsning, eller proteinase K er ikke omrystet effektivt med blodprøven inden tilsætningen af lysisbuffer. Lysis og renhed afhænger af fuldstændig udtrækning med proteinase K. Hvis der ikke er tilsat proteinase K i afsnit 3A, trin 3, vil den resulterende blodprøve være rød. Proteinase K-behandlede prøver bliver grønligt-brune, hvilket kan benyttes som en visuel kontrol af, at der er tilsat proteinase K. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18

13 9. Reference 1. Henry, J.B. (2001) Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 20th ed.,w.b. Saunders Company, Liste over ændringer Der er foretaget følgende ændringer i version 5/18 af dette dokument: 1. Opdateret til at indeholde kravene i EU IVD direktiv (98/79/EF). (a) U.S. Pat. No. 6,855,499, European Pat. No , Japanese Pat. No og andre patenter. 2012, 2014, 2015, 2018 Promega Corporation. Alle rettigheder forbeholdes. Maxwell er et registreret varemærke tilhørende Promega Corporation. Produkterne kan være dækket af anmeldte eller udstedte patenter eller kan have visse begrænsninger. Du er velkommen til at besøge vores hjemmeside for yderligere information. Alle priser og specifikationer kan ændres uden forudgående varsel. Produktfordringer kan ændres. Kontakt teknisk service hos Promega eller gå ind i Promegas online-katalog for at få de mest aktuelle informationer om Promega-produkterne. 12 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI USA Toll Free in USA Fax TM374 Revideret 5/18