BRUGSANVISNING KLAR TIL BRUG PLADEMEDIER PA-254104.08 Rev.: April 2013 BD BBL CHROMagar Salmonella U.S. patentnr. 5,098,832, 5,194,374 TILSIGTET BRUG BBL CHROMagar Salmonella er et selektivt og differentielt medium til isolering og tentativ identifikation af Salmonella-arter fra kliniske fæcespræparater. BBL CHROMagar Salmonella er også godkendt af AOAC Research Institute under Performance Tested Methods programmet udelukkende til analyse af rå oksefars, rå kylling, rå fisk, salat og rigtige æg. ISO, USDA FSIS og FDA BAM metoder blev anvendt til testning af metodesammenligning. 1-3 BBL CHROMagar Salmonella blev fundet at svare til plademedierne anbefalet i ISO, FDA og USDA metoderne. PROCEDURENS PRINCIPPER OG FORKLARING Mikrobiologisk metode. Salmonella er til stede overalt i dyrepopulationer og er generelt isoleret fra tarmkanalen i dyr og mennesker. Den er en af de mest almindelige organismer forbundet med fødevarebårne sygdomme, som ofte stammer fra dyr. 4 Sygdomme forårsaget af Salmonella er blevet forbundet med fjerkræ, oksekød, chokolade, mejeri- og grøntsagsprodukter. 5 BBL CHROMagar Salmonella er beregnet til isolering og differentiering af Salmonella-arter. Tilsætning af chromogene substrater i mediet letter påvisning af Salmonella-arter fra anden flora. BBL CHROMagar Salmonella blev oprindeligt udviklet af A. Rambach, CHROMagar, Paris, Frankrig. BD har under en licensaftale optimeret denne formulering ved brug af navnebeskyttet åndelig ejendom anvendt ved fremstilling af BBL CHROMagar Salmonella præpareret plademedium ved brug af Difco CHROMagar Salmonella dehydreret kulturmediumformulering. I BBL CHROMagar Salmonella leverer specielt udvalgte peptoner næringsstofferne. Grampositive organismer hæmmes generelt som et resultat af den selektrive mediumbase. Tilsætning af et antisvampestof forhindrer væksten af Candida-arter, og andre antimikrobielle stoffer anvendes for at hæmme væksten af gram-negative, ikke-glucose fermenterende bakterier og Proteus-arter, som potentielt kunne udkonkurrere Salmonella-kolonier. En chromogen blanding er inkluderet i mediet. Pga. metaboliske forskelle i tilstedeværelsen af valgte chromogener fremkommer kolonier med Salmonella-arter mauve (rosa til lilla), hvorimod uønskede bakterier enten er hæmmede eller producerer blå-grønne eller farveløse kolonier. REAGENSER Formel** pr. liter oprenset vand Chromopepton 22,0 g Chromogen blanding 0,34 g Hæmmende stoffer 0,02 g Agar 15,0 g ph 7,7 +/- 0,2 **Justeret og/eller suppleret som påkrævet for at opfylde funktionsdata. *PRODUCENT-LEVEREDE PRØVER FOR DENNE TESTKITMODEL BLEV EVALUERET UAFHÆNGIGT AF AOAC RESEARCH INSTITUTE OG BLEV FUNDET AF FUNGERE I HENHOLD TIL PRODUCENTENS SPECIFIKATIONER, SOM ANGIVET I TESTKITTETS DESKRIPTIVE INDLÆGSSEDDEL. PRODUCENTEN BEKRÆFTER, AT DETTE KIT I ALLE HENSEENDER ER I OVERENSSTEMMELSE MED SPECIFIKATIONERNE, SOM OPRINDELIGT BLEV EVALUERET AF AOAC RESEARCH INSTITUTE, SOM ANGIVET I Performance Tested Methods sm CERTIFIKATNUMMER 020502 PA-254104.08 Side 1 af 7
FORHOLDSREGLER. Kun til professionel brug. Hvis der observeres overdreven fugtighed, inverteres bunden over det forskudte låg til lufttørring for at forhindre, at der dannes en forsegling mellem toppen og bunden af pladen under inkubation. Beskyt mod lys under tørring. Se OPBEVARING OG HOLDBARHED. Det anbefales, at brugeren inokulerer de repræsentative stammer, som normalt observeres på den aktuelle institution, for at blive bekendt med de forventede chromogene (farve) reaktioner produceret af Salmonella. Følgende stammer foreslås: Salmonella ser. Typhimurium, ATCC 14028; Salmonella ser. Dublin, ATCC 15480; Salmonella ser. Typhi, ATCC 19430 og Salmonella enterica subsp. arizonae, ATCC 12323. Patogene mikroorganismer, herunder hepatitisvira og humant immundefekt virus, kan forekomme i kliniske præparater. Standardforholdsregler 6-9 og institutionelle retningslinjer skal overholdes ved håndtering af alle emner, der er kontamineret med blod og andre legemsvæsker. Læs dokumentet GENEREL BRUGSANVISNING for detaljer og information om aseptisk håndtering, biologiske risici og bortskaffelse af det brugte produkt. OPBEVARING OG HOLDBARHED Pladerne opbevares efter modtagelse i mørke ved 2 8 C i deres originale hylsterindpakning, lige indtil de skal bruges. Undgå nedfrysning og overophedning. Pladerne kan inokuleres op til udløbsdatoen (se etiketten på pakken) og inkuberes i de anbefalede inkubationstider. Plader fra åbnede stabler med 10 plader kan bruges i en uge, når de opbevares i et rent område ved 2 8 C. Produktnedbrydning Pladerne må ikke anvendes, hvis de viser tegn på mikrobiel kontaminering, misfarvning, udtørring, brud eller andre tegn på nedbrydning. BRUGERKVALITETSKONTROL Undersøg pladerne for tegn på nedbrydning, som beskrevet i Produktnedbrydning. Undersøg funktionen ved at inokulere en repræsentativ prøve af plader med rene kulturer af stabile kontrolorganismer, der producerer kendte, ønskede reaktioner. Følgende teststammer anbefales: Stammer Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Salmonella Enteritidis ATCC 13076 Citrobacter freundii ATCC 8090 Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 33495 Proteus mirabilis ATCC 43071 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Ikke-inokuleret mediums udseende Vækstresultater Rimelig til kraftig vækst af lyse mauve til mauve (rosa til lilla) kolonier Vækst; mauve (=rosa til lilla) kolonier Rimelig til kraftig vækst af lyse blå-grønne til blå-grønne kolonier Hæmning delvis til fuldstændig; kolonier blå-grønne Hæmning delvis; kolonier blå-grønne Hæmning delvis til fuldstændig Hæmning delvis til fuldstændig; kolonier små, blå-grønne Hæmning (delvis til fuldstændig) Farveløs til lys ravgul, transparent Bemærk: Krav til kvalitetskontrol skal udføres i overensstemmelse med gældende lokale, statslige og/eller nationale regulativer eller akkrediteringskrav samt laboratoriets standardkvalitetskontrolprocedurer. PROCEDURE Vedlagte materialer BBL CHROMagar Salmonella (90 mm Stacker plader). Mikrobiologisk kontrolleret. Nødvendige materialer, der ikke er vedlagt Hjælpedyrkningsmedier, reagenser, kvalitetskontrolorganismer og andet laboratorieudstyr, som påkrævet af den specifikt anvendte laboratorieprocedure, såsom ISO 7218, USDA FSIS MLG, FDA BAM eller den aktuelt specifikke laboratorieprocedure. PA-254104.08 Side 2 af 7
Prøvetagning Se litteraturen for detaljer om prøve- eller præparattagning og håndteringsprocedurer. 1-5 Præparattyper Dette medium kan anvendes med kliniske fæcespræparater og en mængde fødevareprøver (rå oksefars, rå kylling, rå fisk, salag og rigtige æg). Testprocedure Overhold aseptisk teknik. Agaroverfladen skal være glat og fugtig, men uden overdreven fugt. Lad mediet opnå stuetemperatur inden inokulering. For kliniske præparater: Inokulér præparatet på en BBL CHROMagar Salmonella plade, snarest muligt efter modtagelse på laboratoriet, og udstryg for isolering. Hvis præparatet dyrkes fra en podepind, rulles podepinden forsigtigt over et lille område på overfladen ved kanten, stryg dernæst ud fra dette område med en løkke. Afhængig af lokale procedurer kan inokulering af yderligere medier for isolering af Salmonella og for påvisning af andre enteriske patogener være obligatorisk. Inkubér plader aerobisk ved 35 ± 2 C i en omvendt position (agar-siden opad) i 24 h. Hvis negativ efter 24 h, inkubér igen i endnu 24 h for at rapportere slutresultater. Når kolonifarven fremkommer, er det tilladt at eksponere BBL CHROMagar Salmonella for lys. Typiske kolonier af Salmonella bør gennemgå bekræftende biokemisk eller serelogisk testning. BBL CHROMagar Salmonella kan også anvendes til videredyrkning fra præ-berigelsesmedier, såsom Selenite bouillon eller Tetrathionate bouillon. For fødevareprøver: Følg prøveforberedelsesmetodologien, som angivet i USDA FSIS s Microbiology Laboratory Guidebook: Isolation and Identification of Salmonella from Meat, Poultry, and Egg Products, FDA BAM s kapitel om Salmonella, ISO-retningslinjer eller de procedureretningslinjer, der er passende for prøvetype og geografisk lokalitet. Inokulér den inkuberede berigelsesbouillonprøve på en BBL CHROMagar Salmonella plade. Stryg for isolering, inkubér plader aerobisk ved 35 ± 2 C i en omvendt position (agar-siden opad) i 24 h. Hvis negativ efter 24 h, inkubér igen i endnu 24 h for at rapportere slutresultater. Typiske kolonier af Salmonella, som vokser på BBL CHROMagar Salmonella, bør undergå bekræftelsestestning, som angivet i ISO, USDA FSIS og FDA BAM procedurer. 1-3 Resultater Efter korrekt inkubation aflæses pladerne imod en hvid baggrund. Salmonella Typhimurium og andre Salmonella-arter vil fremkomme som lyse mauve til mauve kolonier med undtagelse af Salmonella enterica-underarter arizonae og andre Salmonella-arter, som er positive for lactose og beta-glucosidase. De isolater vil fremkomme som blå-violette eller lilla kolonier. Citrobacter og andre coliformer vil fremkomme som lyse blå-grønne til blå-grønne kolonier. Visse organismer, som ikke hydrolyserer nogen af de chromogene forbindelser, kan fremkomme som farveløse kolonier. FUNKTIONSDATA OG PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER BBL CHROMagar Salmonella er et selektivt og differentielt medium til isolering og formodentlig identifikation af Salmonella-arter fra kliniske fæcespræparater og en mængde forskellige fødevareprøver Forventede resultater Salmonella-arter vil fremkomme som lyse mauve til mauve (=rosa til lilla) kolonier på dette medium med undtagelse af Salmonella-arter, der er positive for lactose og beta-glucosidase. De isolater vil fremkomme som blå-violette eller lilla kolonier. Følgende organismer blev isoleret på BBL CHROMagar Salmonella under interne og eksterne evalueringer af kliniske og industrielle prøver: Salmonella 8, (20):-:26 Salmonella ser. Javiana Salmonella enterica subsp. arizonae Salmonella ser. Johannesburg Salmonella enterica subsp. diarizonae Salmonella ser. Kentucky PA-254104.08 Side 3 af 7
Salmonella ser. Abony Salmonella ser. Adelaide Salmonella ser. Agona Salmonella ser. Anatum Salmonella ser. Bareilly Salmonella ser. Berta Salmonella ser. Brandenburg Salmonella ser. California Salmonella ser. Cerro Salmonella ser. Choleraesuis Salmonella ser. Cubana Salmonella ser. Derby Salmonella ser. DT 104 Salmonella ser. Dublin Salmonella ser. Enteritidis Salmonella ser. Essen Salmonella ser. Gallinarum Salmonella ser. Gaminara Salmonella ser. Hadar Salmonella ser. Hartford Salmonella ser. Heidelberg Salmonella ser. Illinois Salmonella ser. Infantis Salmonella ser. Iverness Salmonella ser. London Salmonella ser. Mbandaka Salmonella ser. Michigan Salmonella ser. Minnesota Salmonella ser. Montevideo Salmonella ser. Muenster Salmonella ser. Newport Salmonella ser. Oranienburg Salmonella ser. Panama Salmonella ser. Paratyphi A Salmonella ser. Paratyphi B Salmonella ser. Pomona Salmonella ser. Poona Salmonella ser. Potsdam Salmonella ser. Pullorum Salmonella ser. Rubislaw Salmonella ser. Schwarzengrund Salmonella ser. Senftenberg Salmonella ser. St. Paul Salmonella ser. Thompson Salmonella ser. Typhi Salmonella ser. Typhimurium Salmonella ser. Typhimurium (lactose-positiv) Salmonella ser. Weltevreden Funktionsdata 10 Klinisk testning: BBL CHROMagar Salmonella blev testet på et stort diagnostisk laboratorium. I alt 150 kendte negative fæcespræparater og 110 kendte positive fæcespræparater blev testet på BBL CHROMagar Salmonella og sammenlignet med effekten af XLD og Hektoen enteriske medier. Sensitivitet og specificitet for BBL CHROMagar Salmonella medium efter 18-24 h inkubation var 76 % og 99 %, henholdsvist, og var 90 % og 94 % efter 48 h inkubation, henholdsvist. Sensitivitet og specificitet steg til 99 % og 97 %, henholdsvist, med videredyrkning fra Selenite F bouillon. Komparative sensitivitets- og specificitetsresultater for XLD medium var 71 % og 97 % efter 18-24 h inkubation og 78 % og 95 % efter 48 h inkubation. Sensitivitets- og specificitetsresultater for Hektoen enterisk medium var 71 % og 94 % efter 18-24 h og 79 % og 93 % efter 48 h inkubation. Landbrugsfødevaretestning: USDA og FDA metoder BBL CHROMagar Salmonella blev evalueret for genindvindingen af Salmonella i rå kylling, rå oksefars, rå fisk, salat og rigtige æg på interne og AOAC-godkendte eksterne laboratorier. Rå kylling og oksefars blev behandlet i henhold til USDA FSIS referencemetoder. Rå fisk, salat og rigtige æg blev behandlet i henhold til FDA BAM procedurer. BBL CHROMagar Salmonella blev sammenlignet med referencemetodemedierne for selektiv genindvinding af Salmonella. I alt 16 positive kulturer blev indsamlet fra rå kylling, 17 fra rå oksefars, 18 fra rå fisk og salat og 11 fra rigtige æg. BBL CHROMagar Salmonella producerede sammenlignelige resultater med referencemetoderne på alle matricer, hvilket resulterede i en metodeoverensstemmelse på 100 %. Tyve spiked rå kyllingeprøver blev testet i henhold til USDA FSIS referencemetoden. Kylling blev udsået med et lavt inokulumsniveau på 8 CFU/25 g og et højt inokulumsniveau på CFU/25 g prøve. BBL CHROMagar Salmonella genindvandt 100 % (20/20) af det lave og høje spiked niveau af Salmonella. Ved inokulumsniveauer på under 1 CFU/25 g blev fraktionel genindvinding opnået. Naturlig kontamineret kylling blev testet. Genindvinding af Salmonella var 100 %, og det mest sandsynlige nummer (MPN)/g var 0,23. PA-254104.08 Side 4 af 7
Ethundredeogatten (118) Salmonella isolater af fødevarebåren oprindelse, som inkluderede forskellige serotyper, blev dyrket i lactosebouillon i 24 h og blev derefter videredyrket til Tetrathionate bouillon i 24 h. Tetrathionate bouilloner blev videredyrket til BBL CHROMagar Salmonella og inkuberet ved 35 C. Hvis mauve kolonier ikke blev genindvundet efter 24 h, blev plader inkuberet i endnu 24 h. BBL CHROMagar Salmonella genindvandt 111 isolater. Fire stammer blev hæmmet med Tetrathionate bouillon og blev ikke genindvundet på BBL CHROMagar Salmonella eller på en ikke-selektiv kontrolplade. Andre isolater af de samme serotyper som de fire negativer producerede typiske kolonier, så manglen på positiv reaktion var stamme- og ikke serotype-specifik. Samlet sensitivitet for BBL CHROMagar Salmonella var 94 % (111 af 118 isolater). Femogtres (65) isolater af ikke-salmonella blev dyrket i hjerne-hjerte-infusionsbouillon ved 35 C i 24 h og videredyrket til BBL CHROMagar Salmonella ved 35 C i 24 h. Negative plader blev inkuberet i samlet 48 h. Enogtres (61) af de 65 isolater viste ikke mauve farvning på BBL CHROMagar Salmonella for en specificitet på 94 %. De fire ikke-salmonella stammer, som viste mauve farvning, blev inokuleret til Tetrathionate bouillon (anbefalet berigelsesbouillon for USDA og FDA metoder). Efter 24 h inkubation blev Tetrathionate bouilloner videredyrket til BBL CHROMagar Salmonella. Efter 48 h inkubation voksede én stamme mauve kolonier, og tre stammer var hæmmede. Baseret på anvendelsen af berigelse med Tetrathionate bouillon var den samlede specificitet for BBL CHROMagar Salmonella i denne undersøgelse 98 %. ISO metode BBL CHROMagar Salmonella blev sammenlignet med referencemetodemedierne for den selektive genindvinding af Salmonella i rå kylling, rå oksefars, rå fisk, salat og rigtige æg. Alle matricer blev behandlet i henhold til ISO dyrkningsmetoden. I alt 16 positive kulturer blev indsamlet fra rå kylling, 17 fra rå oksefars, 9 fra rå fisk, 19 fra salat og rigtige æg. BBL CHROMagar Salmonella producerede sammenlignelige resultater med referencemetoderne på alle matricer, hvilket resulterede i en metodeoverensstemmelse på 100 %. Tyve (20) prøver fra rå oksefars, rå fisk, salat og rigtige æg blev spiked med et lavt inokulumsniveau af Salmonella og analyseret i henhold til ISO dyrkningsproceduren. Tyve (20) prøver fra naturlig kontamineret rå kylling blev analyseret i henhold til ISO dyrkningsproceduren. BBL CHROMagar Salmonella blev tilsat batteriet af referencemedier for hver fødevarematrix, som blev testet. Metodeoverensstemmelsen for BBL CHROMagar Salmonella og de andre referencemedier, som blev testet, var 100 %. De lave inokulumsniveauer var fra 0,0036 til 0,23 MPN/g. Ethundredesyvogtyve (127) Salmonella isolater af fødevarebåren oprindelse blev dyrket i bufret peptonvand i 18 h og derefter videredyrket til Rappaport-Vassiliades med soja (RVS) medium i 24 h. RVS bouilloner blev videredyrket til BBL CHROMagar Salmonella og inkuberet ved 35 C i 24 h. Hvis mauve kolonier ikke blev genindvundet efter 24 h, blev plader inkuberet i endnu 24 h. BBL CHROMagar Salmonella genindvandt 123 isolater. Genindvinding af de 4 stammer, som ikke voksede på BBL CHROMagar Salmonella, var dårlig på de ikke-selektive kontrolmedier. Samlet sensitivitet for BBL CHROMagar Salmonella var 96,8 % (123 af 127 isolater). Procedurens begrænsninger Stammer af Aeromonas hydrophila, Hafnia alvei, Pseudomonas aeruginosa, P. putida, Stenotrophomonas maltophilia, Acinobacter-arter eller Candida-arter vil til tider muligvis ikke være helt hæmmet, og kolonier kan vise lys mauve til mauve pigmentering. Bekræftelsestest, som bruger mauve eller lilla som en indikatorfarvereaktion, kan være vanskelige at tolke pga. den faktiske kolonifarve. Sjældne stammer af følgende organismer: S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Typhimurium, S. Choleraesuis, S. Minnesota, S. enterica subsp. arizonae og S. Pullorum vil muligvis ikke vokse PA-254104.08 Side 5 af 7
eller kan have reduceret vækst på dette medium. Dette er stamme-specifikt, og størstedelen af stammerne testet fra hver af disse serotyper blev genindvundet. BBL CHROMagar Salmonella er ikke bestemt til isolering af andre tarmpatogener end Salmonella. Ved testning af visse prøver kan en lilla misfarvning af mediet uden påviselig kolonivækst muligvis observeres. Dette regnes for et negativt resultat. Mindsk eksponering af BBL CHROMagar Salmonella for lys før og under inkubation, da lys kan ødelægge chromogenerne. Opbevar plader inden i den originale hylsterindpakning og papkasse gennem hele opbevaringsperioden. Inkubation i CO 2 anbefales ikke. LITTERATUR 1. Rose, Bonnie E. 2001. Isolation and identification of Salmonella from meat, poultry and egg products. In: Microbiology laboratory guidebook, 3 rd ed., Food Safety and Inspection Service, U.S. Department of Agriculture, Washington, D.C. 2. U.S. Food and Drug Administration. 2003. Bacteriological analytical manual (online), AOAC International, Gaithersburg, MD. 3. International Organization for Standards (ISO). Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp., 4 th Edition, ISO 6579:2002. 4. Bopp, Brenner, Fields, Wells and Strockbine. 2003. Escherichia, Shigella, and Salmonella. In Murray, Baron, Jorgensen, Pfaller, and Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. D Aoust, Mauer and Bailey. 2001. Salmonella species. In: Doyle, Beuchat and Montville (ed.), Food microbiology: fundamentals and frontiers, 2 nd ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2 nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 7. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 8. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4 th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 9. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 10. Data i arkiv, BD Diagnostic Systems. EMBALLERING/BESTILLING BBL CHROMagar Salmonella REF 254104 Plademedier klar til brug, cpu 20 YDERLIGERE OPLYSNINGER Kontakt den lokale BD repræsentant angående yderligere oplysninger. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ PA-254104.08 Side 6 af 7
AOAC is a trademark and Performance Tested is a service mark of AOAC International. CHROMagar is a trademark of Dr. A. Rambach. Difco is a trademark of Difco Laboratories, subsidiary of Becton, Dickinson and Company. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 2013 BD PA-254104.08 Side 7 af 7