BD BBL Mycoslide. BRUGSANVISNING KLAR TIL BRUG DYPPEOBJEKTGLASMEDIER DA Rev.: Juni 2003

Transkript

1 DA BRUGSANVISNING KLAR TIL BRUG DYPPEOBJEKTGLASMEDIER DA Rev.: Juni 2003 BD BBL Mycoslide TILSIGTET BRUG BBL Mycoslide er et treside dyppeobjektglas, der indeholder medier til påvisning af fungi, inklusive gærarter, fra urin, spyt, svælgskylninger, fæcespræparater og en mængde forskellige præparater. PROCEDURENS PRINCIPPER OG FORKLARING Mikrobiologisk metode. Trådfungi og gærarter er hyppige patogener, der forårsager mange typer af lokale og systemiske infektioner i immunokompentente og immunokompromitterede personer. 1 Ét af de hyppigste svampepatogener er Candida albicans. I immunokompromitterede patienter forårsager C. albicans og det nyligt diskuterede C. dubliniensis hyppigt lokaliserede og systemiske infektioner. De tre hovedområder i kroppen, som er påvirket af lokale infektioner, er luftvejene, genitourinvejen og tarmkanalen. Kvantitativ bestemmelse af gærarterne isoleret fra disse kropsområder er vigtig, da de kan være til stede i små mængder i normal flora, men i yderst øgede mængder under infektioner. 1-5 BBL Mycoslide består af en tresidet agarbærer dækket med to svampemedier og et medium til påvisningen af bakterierne, som er til stede i præparatet. Hele agarbæreren dyppes i flydende præparater eller inokuleres ved at udstryge præparater fra podepinde. Efter inkubation kan isolaterne tælles og bruges til yderligere differentierings- og identifikationstest og til følsomhedstestning. Medium 1 er maltagar til påvisningen af alle typer af fungi, inklusive mug og gær. Maltekstrakt indeholder alle nødvendige næringsstoffer til at understøtte væksten af fungi. Den lave ph af mediet resulterer i en delvis til fuldstændig hæmning af kontaminerende bakterier, men tolereres godt af fungi. Dette medium anvendes til kvantitativ bestemmelse af svampepatogener. Medium 2 er maltagar suppleret med cycloheximid, hvilket er en hæmmer af saprofytiske mugarter og visse gærarter. De fleste patogene fungi, inklusive Candida albicans, hæmmes ikke på dette medium. Cryptococcus neoformans og visse Candida-arter andre end C. albicans, som også kan spille en rolle som smittefarlige stoffer, hæmmes af cycloheximid. Medium 3 er CLED (Cystin-lactose-elektrolyt-fattig)-agar, et differentielt kulturmedium, til brug ved isolering og optælling af bakerier i urin. Det kan også bruges til isolering af bakterier fra andre arter, hvis de ikke er for kræsne. På BBL Mycoslide anvendes mediet hovedsagligt til at bestemme medfølgende bakteriel flora. BBL Mycoslide anvendes til påvisningen, isoleringen og optællingen af fungi fra en mængde forskellige kropsområder og præparattyper. Det kan ligeledes anvendes som et transportmedium fra lægepraksissen til analytiske laboratorier. REAGENSER Formler* pr. liter renset vand BBL Mycoslide Medium 1: Maltagar Medium 2: Maltagar med Medium 3: CLED agar cycloheximid Maltekstrakt 30,0 g Maltekstrakt 30,0 g Gelatinpepton 4,0 g Agar 15,0 Agar 15,0 Caseinpepton 4,0 ph 4,1 +/- 0,2 Cycloheximid 1,0 Okseekstrakt 3,0 ph 4,1 +/- 0,2 Lactose 10,0 L-cystin 0,128 Bromthymolblåt 0,02 Agar 15,0 ph 7,3 +/- 0,3

2 *Justeret og/eller suppleret som påkrævet for at opfylde funktionskriterier. FORHOLDSREGLER. Kun til professionel brug. Dyppeobjektglas må ikke anvendes, hvis de viser tegn på mikrobiel kontaminering, misfarvning, udtørring, brud eller andre tegn på nedbrydning. Overhold aseptiske teknikker og beskyttelsesforholdsregler mht. sundhedsfarer under hele proceduren. Læs dokumentet GENEREL BRUGSANVISNING for procedurer om aseptisk håndtering, biologiske farer og bortskaffelse af brugte produkter. Når BBL Mycoslide anvendes som et transportmedium fra en lægepraksis til et diagnostisk laboratorium, skal lokale regler mht. fragt af smittefarlige præparater overholdes. OPBEVARING OG HOLDBARHED BBL Mycoslide opbevares efter modtagelse i mørke ved 15 til 20 C i den originale pakke indtil umiddelbart inden ibrugtagning. Undgå nedfrysning, overophedning, udtørring og temperatursvingninger. Objektglassene kan inokuleres indtil udløbsdatoen (se etiketten på pakken) og inkuberes i de anbefalede inkubationstider. Uåbnede objektglas fra åbnede pakker kan anvendes indtil udløbsdatoen, så længe de opbevares rent ved C. Efter åbning skal objektglassene anvendes øjeblikkeligt. BRUGERKVALITETSKONTROL Forbered suspensioner, som stemmer overens med McFarland standard 0,5, af stammerne nævnt nedenfor. Forbered et rør for hver organisme (bredt nok til at tillade indsættelse af en BBL Mycoslide agarbærer) med 20 til 25 ml sterilt saltvand og tilsæt 1 ml af ovennævnte suspension af stammen. Åbn et BBL Mycoslide, fjern agarbæreren, dyp det hurtigt i teststammesuspensionen og fortsæt som angivet under Testprocedure for flydende præparater. Inkubér i 2 til 5 dage ved 35 ± 2 C. Efterse agaroverflader for vækst, som beskrevet under Resultater og tolkning. Stammer Medium 1 Maltagar Medium 2 Maltagar med cycloheximid Medium 3 CLED agar Candida albicans Vækst Vækst Vækst ATCC Aspergillus niger Vækst Hæmning delvis til Vækst ATCC fuldstændig E. coli Hæmning delvis til Hæmning delvis til Vækst ATCC Pseudomonas aeruginosa Hæmning delvis til Hæmning delvis til Vækst ATCC Enterococcus faecalis Hæmning delvis til Hæmning delvis til Vækst ATCC Staphylococcus aureus Hæmning delvis til Hæmning delvis til Vækst ATCC Ikke-inokuleret Svagt ravgul Svagt ravgul Grønlig-gul PROCEDURE Vedlagte materialer BBL Mycoslide. Mikrobiologisk kontrolleret. Materialer, der ikke er vedlagt Hjælpekulturmedier, reagenser og laboratorieudstyr som beskrevet. Præparattyper BBL Mycoslide er egnet til isoleringen og optællingen af fungi fra urin (midtstråle- eller kateterurin eller urin indsamlet via suprapubisk blærepunktur), spyt, svælgskylninger, fæces og DA

3 en mængde andre præparater (f.eks. vaginale podninger). Anvend ikke til påvisning af bakterielle infektioner. Prøveindsamling og klargøring Overhold aseptisk teknik ved indsamling af præparater. Brug standardprocedurer ved indsamling. 1,6 Urin skal være frisk eller højst 2 h gammel. Urinpræparater kan som et alternativ opbevares i køleskab (højst 24 h) for at undgå overflod af smittefarlige stoffer eller kontaminanter inden inokulering. Spyt: Én del friskt ophostet eller induceret spyt tilsættes én del 0,25 % trypsinopløsning og rystes med sterile glasbeads i 45 minutter ved 37 C. Spyttet kan som et alternativ homogeniseres i en Stomacher i 1 minut. Hvis kun en lille mængde spyt er tilgængelig, kan det anvendes uden forbehandling. Svælgskylninger: Centrifugér væsken i 10 minutter ved 2000 x g. Kassér den flydende fase, opsaml bundfaldet i 5 ml trypsinopløsning (0,25 %) eller sterilt saltvand og ryst med sterile glasbeads i 15 minutter ved 37 C. Fæcespræparater, friske eller køleskabsopbevarede i højst 48 h. Homogenisér 1 g fæces i 100 ml 0,25 % trypsinopløsning eller sterilt saltvand med sterile glasbeads i 15 minutter ved 37 C. Podepinde: Indsaml præparatet (f.eks. fra svælget eller vagina) på en podepind og anvend direkte uden forbehandling, som beskrevet nedenfor. Hvis der forekommer en forsinkelse mellem indsamling og inokulering, skal podepinden transporteres i egnede transportmedier. 1,6 Testprocedure 1. Efterse agaroverfladerne visuelt med BBL Mycoslide røret lukket. Kassér objektglassene med medieskrumpning eller kontaminering. 2. Mærk røret med patientnavn, præparatnummer og inokuleringsdato. 3. Skrå låget af og fjern objektglasset fra plastrøret uden at røre ved agaroverfladerne. Inokulering med flydende præparater (f.eks. urin eller svælgskylninger): 1. Dyp hurtigt objektglasset tre gange i flydende præparater (f.eks. urin eller forbehandlet spyt, svælgskylninger, osv.), således at agarlagene er helt inokuleret med væsken. Objektglasset må ikke efterlades i væsken i mere end 10 sekunder, da det kan vaske ingredienserne af medierne og/eller løsne gelen fra plastbæreren. 2. Hvis kun en lille mængde præparat er tilgængelig, skal det indsamles med en steril pipette eller sprøjte, og de tre medier skal skylles fuldstændigt. 3. Lad ekstra materiale dryppe af ved at holde spidsen af objektglasset op mod rørets inderste kant. 4. De sidste dråber kan fjernes fra spidsen af objektglasset med en serviet. Returnér forsigtigt objektglasset til plastrøret og luk det helt. 5. Inkubér objektglasset i 48 h ved 30 ± 2 C eller send det videre til et speciallaboratorium efter inokulering. Længere inkubation kan være nødvendig for væksten af trådfungi, f.eks. fra infektioner i de nedre luftveje. Inokulering med præparater på podepinde: Udstryg forsigtigt podepinden på de tre kulturmedier på objektglasset. Resultater og tolkning Efter inkubation fjernes objektglasset forsigtigt fra røret for tolkning. Overhold aseptiske teknikker under hele inspektionsproceduren. Det anbefales, at anvende kirurgiske handsker under inspektion. Agaroverfladerne må ikke berøres. Medium 1 (Maltagar): Dette medium tillader påvisning af den samlede tælling af alle fungi. Trådfungi producerer normalt kolonier med en grov overflade (aerial mycelium). Kolonierne er ofte pigmenterede (sorte, grå, blå-grønne, gullige og andet). Gærarter producerer hvide til cremefarvede, skinnende til matte kolonier, som normalt har en glat overflade og ligner bakterielle kolonier. Yderligere test er nødvendige for fuldstændig identifikation af patogenerne. 1 Ved kvantitativ bestemmelse sammenlignes den faktiske vækst på objektglasset med referencebillederne i Tolkningsguiden i slutningen af dette dokument. I tilfælde af voldsom DA

4 vækst og et stort antal kolonier 10 5 ), kan agaroverfladerne være helt dækket med en sammflydende plæne af vækst. Der henvises til tabellen og litteraturen for information om den kliniske signifikans af patogentællinger for præparaterne fra forskellige kropsområder: 1-5 Præparattype Antal gærkolonier Normal 1) Tvivlsom 2) Klinisk signifikant Midtstråle- eller kateterurin 10 3 /ml /ml >10 5 /ml Urin opsamlet via suprapubisk Forekomsten af fungi er klinisk signifikant blærepunktur Spyt 10 3 /ml /ml >10 5 /ml Svælgskylninger >10 4 Fæces 10 3 /g /g >10 5 /g 3) Vaginale præparater Forekomsten af fungi er klinisk signifikant 1) Lave tællinger kan være signifikante hos forbehandlede patienter eller hos patienter med kroniske infektioner. 2) Genevaluér om muligt. 3) Behandling af patienter med høje gærtællinger i fæces skal evalueres omhyggeligt. Høje gærtællinger i fæces forekommer ofte hos patienter, som blev forbehandlet med antibakterielle antimikrobielle stoffer. Efter fuldførsel af den antibakterielle behandling, mindskes gærtællingen sædvanligvis igen til normal. Hos immunokompromitterede patienter kan lave tællinger endog angive en infektion. 1,3 Medium 2 (maltagar med cycloheximid): Dette medium sikrer undertrykkelsen af de trådfungi, der er følsomme over for cycloheximid (f.eks. mug såsom Aspergillus). Visse gærarter hæmmes også af dette additiv. Cycloheximid-resistens er en vigtig karakteristik for differentieringen af fungi: Organismer 1) Klinisk signifikans og hyppighed Cycloheximid-resistens Candida albicans Vigtigt patogen, ofte C. dubliniensis Findes ofte i HIV-patienter C. guilliermondii Sjældent, lav C. kefyr (= C. pseudotropicalis) Sjældent, lav Andre arter Sjældent Cycloheximid-følsom Candida tropicalis Sjældent, lav C. krusei Relativt ofte, kendt patogen C. parapsilosis Sjældent, kendt patogen Candida (Torulopsis) glabrata Relativt ofte, kendt patogen Cryptococcus neoformans Sjældent; vigtigt patogen Aspergillus, Penicillium og andre fungi Aspergillus kan producere infektioner i de nedre luftveje eller andre infektioner. Disse fungi kan også forekomme som kontaminanter. 1) Bemærk, at væksten eller hæmningen på dette medium ikke er begrænset til arterne opført i denne tabel. De nævnte organismer forekommer ret ofte i kliniske præparater. Der henvises til litteraturen for yderligere information. 1,7 Medium 3 (CLED agar) anvendes til kvantitativ bestemmelse af den bakterielle tælling, som er til stede i præparatet. Den bakterielle tælling kan være vigtig ved bedømmelsen af forholdet mellem bakteriel- og fungivækst, f.eks. i fæces. Bemærk at yderligere test, såsom biokemiske og/eller mikroskopiske procedurer, er nødvendige for fuldstændig identifikation af patogenerne, som er isoleret på dette dyppeobjektglas. 1 De fleste af disse metoder er kun tilgængelige på diagnostiske laboratorier og kan normalt ikke foretages på lægepraksissen. Alle dyppeobjektglas med tvivlsomme eller klart positive resultater skal derfor sendes til et analytisk laboratorium, der foretager mykologiske test. DA

5 Efter brug og inden bortskaffelse skal alle brugte rør og andre kontaminerede materialer autoklaveres eller brændes. Se dokumentet GENEREL BRUGSANVISNING for detaljer. FUNKTIONSDATA OG PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER BBL Mycoslide anvendes til påvisningen, isoleringen og optællingen af fungi, inklusive gærarter, fra urin, spyt, svælgskylninger, fæcespræparater og en mængde andre præparater. Medierne indeholdt på dette dyppeobjektglas er almindeligt anvendte standardmedier til isoleringen af de 1, 8-10 respektive fungale og bakterielle grupper. Væksten af bakterier på fungale kulturmedier (medium 1 og 2) på dette dyppeobjektglas er til tider ikke helt undertrykt. I tilfælde, hvor der er tvivl, bør en methylenblå- eller gram-farvning fra tvivlsomme kolonier foretages. De mindst kræsne bakterielle arter vil vokse på medium 3 (CLED agar). Dette medium understøtter dog ikke vækstorganismerne, såsom patogene Neisseria-arter, Haemophilus-arter og andre. Beta-hæmolytiske streptokokker vokser ikke godt på dette medium. Blodagar eller chokoladeagar skal derfor inkluderes, hvis der er mistanke om en bakteriel infektion med sådanne organismer. På BBL Mycoslide anvendes CLED agar hovedsagligt til at bestemme medfølgende bakteriel flora. Det anbefales at anvende andre systemer eller medier for nøjagtig diagnose af bakterielle infektioner. BBL Urotube systemer bør anvendes til diagnosticering af bakterielle infektioner fra urinpræparater. Præparater til påvisningen af bakterielle infektioner fra andre kropsområder skal behandles på pladekulturmedier, som er passende for præparatet. Antallet af arter, som kan vokse på medierne på dette dyppeobjektglas, er stort og er ikke begrænset til dem nævnt i sektionen Resultater og tolkning. Passende identifikation af mange organismer kan kun foretages på analytiske laboratorier. Objektglas bør derfor sendes til sådanne laboratorier efter inokulering eller efter inokulering og inkubation. BBL Mycoslide er beregnet til brug ved primær isolering og tælling. For yderligere test, og især hvis blandede kulturer forekommer på medierne i dette system, skal videredyrkninger på passende plademedier foretages for at anskaffe rene kulturer, som er obligatoriske for fuldstændig identifikation og følsomhedstestning. 1 Dyppeobjektglas må ikke anvendes til foretagelse af diskfølsomhedstest. LITTERATUR 1. Fromtling, R.A. (section editor) Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Halle, E., et al Genitalinfektionen Teil I und II. In: Mauch, H., Lüttiken, R., and S. Gatermann (eds.): MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 10 and 11. Urban & Fischer, Munich, Germany. 3. Kist, M., et al Infektionen des Darmes. In: Mauch, H., Lüttiken, R., and S. Gatermann (eds.): MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 9. Urban & Fischer, Munich, Germany. 4. Podbielski, A., et al Infektionen des Mundes und der oberen Atemwege. In: Mauch, H. and R. Lüttiken (eds.): MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol.13. Urban & Fischer, Munich, Germany. 5. Mauch, H., et al Infektionen der tiefen Atemwege Teil II. In: Mauch, H., Lüttiken, R., and S. Gatermann (eds.): MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 8. Urban & Fischer, Munich, Germany. 6. Sutton, D.A Specimen collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Hazen, K.C New and emerging yeast pathogens. Clin. Microbiol. Rev. 8: MacFaddin, J. D Media for isolation-cultivation-identification- maintenance of medical bacteria, vol. 1, p Williams & Wilkins, Baltimore, MD. 9. Larone, D.H. 1995: Medically important fungi - a guide to identification. 3rd edition. ASM Press, Washington. 10. Atlas, R.M Handbook of Microbiological media. CRC Press, Boca Raton, FL. DA

6 EMBALLERING/BESTILLING BBL Mycoslide Kat. nr objektglas YDERLIGERE OPLYSNINGER Kontakt den lokale BD repræsentant angående yderligere oplysninger. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: , Fax: [email protected] BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès Le Pont de Claix/France Tel: Fax: BD, BD logo and BBL are trademarks of Becton, Dickinson and Company. Urotube and Mycoslide are trademarks of Becton Dickinson GmbH. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection Becton, Dickinson and Company TOLKNINGSGUIDE (maltgagar, medium 1) Til kvantitativ bestemmelse af celletællinger (se sektionen Resultater og tolkning for klinisk vigtige tællinger) DA