Diagnostik af urinvejsinfektioner

Transkript

1 Diagnostik af urinvejsinfektioner Kirsten Paulsen Afsnitsledende bioanalytiker og laboratoriefaglig konsulent Klinisk Mikrobiologi Aalborg Universitetshospital Kirsten Paulsen, november 2015

2 Facts om UVI Årsag til 2 5 % af alle henvendelser i almen praksis Forårsages af: E. coli Enterokokker Klebsiella, Proteus og andre Gram negative stave Staphylococcus saprophyticus Forårsages ved at tarmens bakterier koloniserer blæren

3 Diagnostik af urinvejsinfektioner Stiks Mikroskopi Dyrkning Resistensbestemmelse

4 Overvejelser inden undersøgelse af urin Hvorfor er prøven taget? Symptomer? Hvornår, hvor og hvordan er prøven taget? Hvordan er prøven opbevaret?

5 Prøvetagning Midtstråleprincippet: For at undgå tilblanding af bakterier fra urethralåbningen: patenten lader en portion urin i toiletkummen for at skylle urethra. Herefter lader patienten atter vandet, og der opsamles ml urin i et rent engangsbæger. Urin skal have stået i blæren i mindst 2 timer.

6 Opbevaring og forsendelse Opbevaring af ukonserveret urin skal ske på køl Forsendelse: Borsyreglas (skal sås ud indenfor 48 timer) tilstræbe 10 ml urin Borsyre: tillader overlevelse af bakterier hindrer vækst af bakterier reelle bakterietal ved dyrkning

7 E. coli - væksthastighed

8 E. coli - væksthastighed Straks efter prøvetagning Efter 3 timer Efter 6 timer

9 Dyrkning og resistensbestemmelse af urin i Almen Praksis

10 Dyrkning Kromogen agarplade CPSE, ID Flexicult m.fl. Dipslide Uricult Uricult Trio Flexicult Urinkit til D+R

11 Kvalitetskrav til dyrkning på urin Vækstgrad, dvs. antal bakterier pr. ml urin > 10 5 Florasammensætning Renkultur Blandingskultur (Dominans af en enkelt organisme)

12 Kromogen agarplade Agarplade, der er tilsat substrater (f.eks. aminosyrer), der muliggør påvisning af bestemte enzymer farveudvikling F.eks: β galaktosidase β glucoronidase β glucosidase deaminase Bestemme arten af bakterier Identifikation af E. coli, enterokokker, Proteus og KESC Renkultur / blandingskultur

13 Kromogen agarplade Kvantitativ udsåning med 10 μl engangsøse Beregne vækstgraden 10 µl urin antal kolonier Antal bakterier / ml 0 < 10 2 /ml /ml /ml ca.100 ca.10 4 /ml /ml kol. ca.1000 ca.10 5 /ml

14 Dipslide Rektangulær plade beklædt på begge sider med 2 3 forskellige dyrkningsmedier: Cled agar: Tillader vækst af de fleste typer bakterier MacConkey agar: Tillader vækst af Gram negative stave og i mindre grad enterokokker E. coli agar: E. coli vokser med sorte kolonier mens andre bakterier vokser med farveløse kolonier Tilsås ved at dyppe sliden to gange i urinen eller med pipette således begge flader er helt tildækket

15 Aflæsning af dipslide Bedømme vækstgraden Spredt vækst svarer til bakterier pr. ml urin Sammenflydende eller næsten sammenflydende vækst svarer til bakterier pr. ml urin Renkultur eller blandingskultur Ved Uricult trio E. coli / ikke E. coli

16 Aflæsning af dipslide CLED-siden (grøn/gul) Ingen vækst Negativ + vækst (kan både være kokker og stave) MacConkey-siden Ingen vækst Kokker + vækst Stave

17 Dipslide - begrænsninger Vanskeligt at se blandet flora Tolkning af sammenflydende vækst af ikke laktose forgærende bakterier, kan fejltolkes som negativ

18 Flexicult Den fortæller Aase om senere

19 Dyrkning om fredagen? Kromogen agarplade eller dipslide: Tilså som vanligt Lad agarplade/dipslide stå på bordet indtil mandag Hvis vækst på agarplade/dipslide mandag aflæs Ingen vækst mandag inkuber agarplade/dipslide til tirsdag

20 Resistensbestemmelse metoder i almen praksis Agarplade med disks / tabletter agardiffusion Flexicult

21 Resistensbestemmelse bør aldrig stå alene men altid ledsages af dyrkning ikke muligt at vurdere vækstgrad (antal CFU/ml) ikke muligt at vurdere florasammensætning renkultur / blanding tilblanding fra hud og slimhinder ikke muligt at vurdere art

22 Agardiffusion Resistensplade Mueller Hinton agar Antibiotikadepot (tablet / disk) Disks fra Oxoid Opbevares på køl Holdbarhed i 1 uge Neosensitabs fra Rosco Opbevares ved stuetemperatur Holdbarhed i 12 mdr.

23 Fremgangsmåde Pladen tilsås med vatpind i to retninger Tablet / disks anbringes Pladen inkuberes straks ved C Aflæses efter timer

24 Inokulum Semikonfluerende Konfluerende (tæt vækst)

25 Aflæsning Bakterietætheden vurderes Ingen vækst Tynd vækst Semikonfluerende Konfluerende Resistensbestemmelsen må ikke aflæses Renkultur / blandingskultur? Bakterieart (Gram positiv / Gram negativ)

26 Aflæsning Zonediameteren måles Lineal/skabelon Aflæses fra bagsiden mod sort baggrund med belysning rettet mod pladen Resultatet tolkes Resistent (R) Sensitiv (S)

27 Resistensbestemmelse fredag? NEJ!

28 Fejlkilder Medie /agarplade opbevaring Inokulum udsåning Antibiotika koncentration (disk fra Oxoid) opbevaring Temperatur på varmeskab Tid fra udsåning til pladen stilles i varmen

29 Fejlkilder og faldgruber For tynd vækst Sværmende Proteus Aflæsning af sulfametizol og trimetoprim Gærsvampe Flere bakterier i samme prøve

30 Inokulums betydning Eneste forskel er inokulum

31 Sværmende Proteus

32 Fejlkilder og faldgruber Gærsvamp

33 Fejlkilder og faldgruber Klebsiella og tilblanding

34 Kvalitetskrav til resistensbestemmelse Vurdere om den undersøgte bakterie er følsom (S) eller resistent (R)

35 Dyrkning og resistensbestemmelse i almen praksis Uddannet personale Søge oplysning vedr. materialer og deres anvendelsesområder Deltage i kvalitetskontrolprøver