Kromosomer med genet: Genotype (= arveformel): RR Rr rr Fænotype (= fremtoning): Rød Rød Hvid

Transkript

1 Kromosomer med genet: R R R r r r Genotype (= arveformel): RR Rr rr Fænotype (= fremtoning): Rød Rød Hvid

2 P-generation: Kønsceller: RR rr Meiose R R r r Befrugtning F 1-generation: Meiose Rr Rr Kønsceller: R r R r RR Rr Rr rr F 2-generation: Genotyper: Fænotyper: RR Rød Rr Rød Rr Rød rr Hvid

3 DNA replikation 2 DNA transkription RNA translation Protein

4 3' Ori a DNA-helicase 3' b RNA-polymerase 3' c DNA-polymerase 3' d DNA-polymerase 3' e DNA-ligase 3'

5 A ori

6 B ori ori ori 3' 3' 3' 3' 3' +

7 3' Kontrolområde Promoter Operator a Strukturgen RNA-polymerase 3' b 3' c 3' d 3' 3' e RNA

8 Første base Mellemste base U C A G U UUU Phenylalanin UCU Serin UAU Tyrosin UGU Cystein U UUC Phe UCC Ser UAC Tyr UGC Cys C UUA Leucin UCA UAA Stop UGA Stop A UUG Leu UGG Tryptophan UCG UAG Trp G C CUU Leucin CCU Prolin CAU Histidin CGU Arginin U CUC Leu CCC Pro CAC His CGC Arg C CUA CCA CAA Glutamin CGA A CUG CCG CAG Glu CGG G A AUU Isoleucin ACU Threonin AAU Asparagin AGU Serin U AUC Iso ACC Thr AAC Asp AGC Ser C AUA ACA AAA Lysin AGA Arginin A AUG Methionin ACG AAG Lys AGG Arg G Met G GUU Valin GCU Alanin GAU Asparginsyre GGU Glycin U GUC Val GCC Ala GAC Asn GGC Gly C GUA GCA GAA Glutaminsyre GGA A GUG GCG GAG Gln GGG G Sidste base

9 P-site A-site Stor Lille mrna a b c

10 A C C 3'ende aminosyrebindingssted ende Variabel del Anticodon

11 H O H 2N-C-C OH = + + A C C Tryptophan Enzym trna (tryptophan) H O H 2N-C-C OH = H O H 2N-C-C O = + A C C A C C Kompleks Tryptophan -trna Enzym

12 A U G G C U C U C U U C U G C U A U U G A mrna + Stor Lille a Ribosomenhed A U G G C U C U C U U C U G C U A U U G A trna(met) b U A C U A C A U G G C U C U C U U C U G C U A U U G A trna(ala) c C G A U A C C G A A U G G C U C U C U U C U G C U A U U G A

13 Frie aminosyrer Peptidkæde P Kontrol O Strukturgen DNA

14 Strukturgen P Kontrol Exon Intron 0 Start E E I Exon DNA E I E Pore E E Kernemembran 3' Frie aminosyrer trna

15 Uden inducer: RNA polymerase I P O Z Y A DNA Repressorprotein a I P O Z Y A DNA Med inducer (lactose): I P O Z Y A DNA b Lactose I P O Z Y A DNA c I P O Z Y A DNA mrna

16 Uden corepressor: RNA polymerase R P O E D C B A Repressorprotein a R P O E D C B A b R Med corepressor (tryptophan): R P E D C B A RNA polymerase mrna P O E D C B A Repressorprotein c Tryptophan R P O E D C B A d R P O E D C B A

17 I + -Z + A + Y + I - -Z + A + Y + Vildtype Mutant Inducibel Konstitutiv

18 Transformation: Arvemasse a b c d Transduktion: a b c d Konjugation: a b c d

19 Replikation: -A-A-T-A-G-T-T-T-C-C-C-T- -T-T-A-T-C-A-A-A-G-G-G-A- Transkription: -A-A-U-A-G-U-U-U-C-C-C-U- Translation: -asp-ser-phe-pro- Vildtype -A-A-T-A-G-T-T-T-C-C-C-T- -T-T-A-T-C-A-A-A-G-G-G-A- -A-A-T-A-G-T-T-T-C-C-C-T- -T-T-A-C-C-A-A-A-G-G-G-A- -A-A-U-G-G-U-U-U-C-C-C-U- -asp-gly-phe-pro- Mutant

20 Vildtype Replikation med mutation: -C-A-T-T-C-G-A-G-A-T-G-C-G-T- -G-T-A-A-G-C-T-C-T-A-C-C-C-A- Normal replikation: Mutant A-G G A C T -C-A-T-T G-C-G-T- -G-T-A-A-C-G-C-A- -C-A-T-T-G-C-G-T- -G-T-A-A-C-G-C-A-

21 THE-FAT-CAT-ATE-THE-RAT deletion: THE-FTC-ATA-TET-HER-AT insertion: THE-FIA-TCA-TAT-ETH-ERA-T

22 Mutagen Virkemåde Mutationstype Stråling: UV-lys (254nm) Ioniserende stråling: Røntgen- eller radioaktiv stråling Baseanaloger: 5-bromuracil 2-aminopurin Dannelse af thymin-dimérer. Dannelse af frie radikaler, der bryder DNA-kædens rygrad. Opfattes som T, men kan baseparre med G. Opfattes som A, men kan baseparre med G. A-T G-C A-T G-C Stoffer der reagerer kemisk med DNA: Nitrit (HNO 2 ) Deaminerer A og G. A-T G-C Ethyl-methan-sulfonat Adderer methyl til G, der så G-C A-T kan baseparre med T. Sennepsgasser Krydsbinder DNA-strenge. Deletioner Interkalative forbindelser: Ethidiumbromid, acridinorange Fladt molekyle der indsættes mellem to basepar. Insertioner (frame-shift)

23 DNA-streng Replikation: + 5-bromuracil (= 5B) -A-G-A-G-C-T-T-C-C-G-T- + Replikation: -A-G-A-G-C-T-T-C-C-G-T- -T-C5B-C-G-A-A-G-G-C-A- -T-C5B-C-G-A-A-G-G-C-A- -A-G-A-G-C-T-T-C-C-G-T- -T-C5B-C-G-A-A-G-G-C-A- -A-G-G-G-C-T-T-C-C-G-T DNA-streng med punktmutation

24 Høj temperatur Højt ph Denaturering Temperatursænkning Normal ph Renaturering

25 a) EcoRI: -NNNGAATTCNNN- -NNNCTTAAGNNN- -NNNG -NNNCTTAA- + -AATTCNNN GNNN b) PstI: -NNNCTGCAGNNN- -NNNGACGTCNNN- -NNNCTGCA- -NNNG- 3' + 3' GNNN -ACGTCNNN c) ScaI: -NNNAGTACTNNN- -NNNTCATGANNN- -NNNAGT -NNNTCA- + -ACTNNN -TGANNN

26 -G... -C-T-T-A + A-A-T-C... G- (a) -G A-A-T-T-C C-T-T-A-A G- (b) -G-A-A-T-T-C C-T-T-A-A-G-

27 DNA-polymerase 3' 3' -ATTGC -TAACGGTTATACGTGCCTAGA- -ATTGCCAATATGCACGGATCT -TAACGGTTATACGTGCCTAGA

28 a Amp-R puc19 c lac- Z 2686 lac- Z Polylinker Amp-R puc19 Polylinker Donor-DNA Ori Ori Polylinker b -GAATTCGAGGTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTT-3' EcoRI PstI HindIII

29 a mrna Protein b mrna Protein β-galactosidase

30 d a Envelope-rester (= celledebris) e b f c 1 g Celler med DNA RNA Protein c 2 + h d Renset og opkoncentreret DNA

31 Nick SC OC L a b c

32 Kromosomalt DNA Plasmid i supercoilet tilstand Pellet består af: Kromosomalt DNA og cellerester Plasmid DNA

33 Silica partikler Prøvepåsætning Vandtilsætning Affald Renset og opkoncentreret DNA a b c d

34

35 M P 1 P 2 Prøvepåsætningssted Vandringsretning

36 Template Target 3' a g b c 1. cyklus Efter at processen har gennemgået 30 cykler vil der være d h 1 30 ca { e cyklus 3. cyklus f i

37 Restriktionsenzymer Uskåret DNA Skåret DNA

38 -TAAGCATTAAGC- -ATTCGTAATTCGmRNA: mrna/dna: Enkeltstrenget DNA: a) b) -UAAGCAUUAAGC- -UAAGCAUUAAGC- -ATTCGTAATTCG- -ATTCGTAATTCG- Dobbeltstrenget DNA: c)

39 Vektor-DNA (puc19) Donor-DNA a) Skæring med restriktionsenzym b) Ligering c) Transformation d) Screening +AMP +JPTG +X-gal

40 Prøve Probe med sekvensen xxx a) Denaturering v. 95 ºC d) Probefremstilling b) Blotting på nylonmembran e) Enzym Denaturering af probe v. 95 ºC c) Præhybridisering f) Hybridisering f) g) Stringens-vask h) Detektion

41 { a) xxxxxx 3' + xxxxxx + DNA-polymerase Primer DNA-molekyle + datp * dctp * dgtp * dttp * heraf er mindst et mærket med et radioaktivt atom b) A-rør + ddatp * C-rør + ddctp * G-rør + ddgtp * T-rør + ddttp * c) xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * A C G T d) e) A C G T A G A T G C T G A G C C

42 a) H O O HO-P-O-P-O-P-O-CH 2 O - O - O O 4' 1' H H H H 3' 2' OH H base (A, C, G eller T) b) O O O HO-P-O-P-O-P-O-CH 2 O - O - O ' H H 3' H manglende OH-gruppe O base (A, C, G eller T) 1' H H 2' H

43 xxxxxxx 3' + xxxxxxx + DNA-polymerase Primer DNA-molekyle + datp * dctp * dgtp * dttp * + ddatp * ddctp * ddgtp * ddttp * a) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * b) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * c) ATAGCCGA