QXDx Universal Kit for AutoDG ddpcr System

Transkript

1 QXDx Universal Kit for AutoDG ddpcr System Brugervejledning DKrevB Maj 2018 UNITED STATES, Bio-Rad Laboratories, Inc., W. Las Positas Blvd, Pleasanton, CA FRANCE, Bio-Rad, 3 boulevard Raymond Poincaré, Marnes la Coquette

2 OVERSÆTTELSER Produktdokumentationen findes muligvis på yderligere sprog i elektronisk form. SYMBOLOVERSIGT Europæisk overensstemmelse Fabrikant Repræsentant i EU Lotnummer Udløbsdato Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik Temperaturbegrænsning Bestillingsnummer Se brugsanvisningen Antal tests Til brug med Serienummer Kun til anvendelse i overensstemmelse med forskrifterne Indeholder latex BIO-RAD TEKNISK SUPPORT Kontakt den tekniske supportafdeling hos Bio-Rad med henblik på hjælp og teknisk rådgivning. I USA er den tekniske supportafdeling åben mandag til fredag fra kl. 5:00 til kl. 17:00, PST (Pacific Standard Time). Telefon: Fax: LSG_TechServ_US@bio-rad.com (til amerikanske såvel som internationale kunder) Online teknisk support og kontaktoplysninger for hele verden findes på JURIDISKE BEMÆRKNINGER Ingen del af denne publikation må reproduceres eller overføres i nogen form eller på nogen måde, hverken elektronisk eller mekanisk, herunder fotokopi, optagelse eller ethvert informationsopbevarings- og -indhentningssystem uden skriftlig godkendelse fra Bio-Rad Laboratories. Bio-Rad forbeholder sig retten til at ændre sine produkter og tjenester til enhver tid. Denne brugervejledning kan blive ændret uden forudgående varsel. Selv om den er udarbejdet med henblik på at sikre nøjagtighed, påtager BioRad sig intet ansvar for fejl eller skader, som måtte opstå som en følge af anvendelsen eller brugen af oplysningerne i denne vejledning. Excel og Microsoft er varemærker, der tilhører Microsoft Corporation. FAM and VIC er varemærker, der tilhører Applera Corporation. TaqMan er et varemærke, der tilhører Roche Molecular Systems, Inc. ii DKrevB

3 Bio-Rads PCR-maskiner (thermal cyclers) og realtids-pcr-maskiner er omfattet af et eller flere af følgende amerikanske patenter eller disses udenlandske modstykker ejet af Eppendorf AG: Amerikanske patentnumre 6,767,512 og 7,074,367. Produktet og/eller dets brug er omfattet af patentkravene i amerikanske patenter og/eller anmeldte amerikanske og -ikke-amerikanske patentansøgninger, der ejes af eller er givet i licens til Bio-Rad Laboratories, Inc. Køb af produktet inkluderer en begrænset, ikke-overførbar ret under en sådan intellektuel ejendom til brug af produktet udelukkende til interne forsknings- og diagnostiske formål. Der gives ikke nogen ret til diagnostiske anvendelser. Der gives ikke nogen ret til brug af produktet til kommercielle anvendelser af nogen art, herunder, men ikke begrænset til, fremstilling, kvalitetskontrol eller kommercielle tjenester som f.eks. underleverandørtjenester eller betalte tjenester. Oplysninger om licens til sådanne formål kan fås fra Bio-Rad Laboratories. Det er køberens/ slutbrugerens ansvar at sikre anskaffelsen af eventuelle yderligere rettigheder, som måtte være påkrævet. SIKKERHED OG OVERHOLDELSE AF MYNDIGHEDSKRAV QXDx System er blevet testet og fundet at være i overensstemmelse med alle gældende krav i henhold til følgende sikkerheds- og elektromagnetiske standarder: 1. IEC :2010 (3. udg.), EN :2010 (3. udg). Sikkerhedskrav til elektrisk måle-, regulerings- og laboratorieudstyr Del 1: Generelle krav 2. EN :2006 (klasse A). Sikkerhedskrav til elektrisk måle-, regulerings- og laboratorieudstyr. EMC-krav, Del 1: Generelle krav 3. UL :2004, Laboratory equipment, Test & Measurement Equipment and Industrial Process Controls (Laboratorieudstyr, test- og måleudstyr og industrielle proceskontroller) 4. CAN/CSA 22.2 nr , Sikkerhedskrav til elektrisk måle-, regulerings- og laboratorieudstyr, Del I: Generelle krav Dette udstyr genererer, bruger og kan udstråle radiofrekvensenergi og kan, hvis det ikke installeres og bruges i overensstemmelse med denne brugervejledning, forårsage skadelig interferens med radiokommunikation. Drift af dette udstyr i et boligområde vil sandsynligvis forårsage skadelig interferens. I et sådant tilfælde skal brugeren korrigere denne interferens for egen regning. CE-mærket angiver, at fabrikanten garanterer, at produktet overholder de væsentlige krav i EU-direktivet om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik 98/79/EF. CSA-mærket angiver, at et produkt er blevet testet i henhold til canadiske og amerikanske standarder, og at det overholder kravene i disse, gældende standarder. Dette udstyr er blevet testet og fundet at overholde grænseværdierne for et Klasse A digitalt udstyr i henhold til Del 15 i FCC-reglerne. Disse grænseværdier er etableret med det formål at sikre en rimelig beskyttelse mod skadelig interferens, når udstyret bruges i et kommercielt miljø. Symbolet, der henviser til direktivet om affald af elektrisk og elektronisk udstyr, angiver, at slutbrugeren skal sende produktet til særskilt indsamling med henblik på nyttiggørelse og genbrug, når denne ønsker at bortskaffe det. Dette instrument er udelukkende beregnet til at blive anvendt af uddannet personale. Udstyret må ikke placeres på en sådan måde, at det vanskeliggør brugen af stikket i strømforsyningen. Dette stik udgør udstyrets hovedafbryderanordning. Der er ingen brugerservicerbare dele i udstyret DKrevB iii

4 , advarsler og forsigtighedsregler Kun til in vitro-diagnostisk brug. Kun til brug af sundhedspersonale. Dette testkit må kun håndteres af kvalificeret personale, der er uddannet i laboratorieprocedurer og som har kendskab til de potentielle risici. Bær passende arbejdsbeklædning, handsker og øjen-/ansigtsbeskyttelse, og håndtér kittets dele i henhold til god laboratoriepraksis. PPE-uddannelse (personlige værnemidler) Det anbefales at anvende handsker under håndteringen af olier og prøveplader. Kravene fra det amerikanske arbejdstilsyn (OSHA) til PPE findes i Code of Federal Regulations (CFR) 29 CFR (generelle krav); 29 CFR (håndbeskyttelse); 29 CFR (kriterier for personlige standardværnemidler). Handsker, hvis beskyttende virkning er nedsat, skal kasseres og erstattes med nye. Tag højde for kemikaliernes toksicitet og faktorer som eksponeringsvarigheden, opbevaringen og temperaturen, når det besluttes at genbruge handsker, der allerede har været eksponeret for kemikalier. Egenskaber, der kan sikre valg af de rette handsker til håndtering af maskiner, analyser, olier og rengøringsmidler: Butylhandsker er fremstillet af et syntetisk gummimateriale, som beskytter mod peroxid, flussyre, stærke baser, alkoholer, aldehyder og ketoner. Handsker af naturgummi (latex) er komfortable i brug og har fremragende trækstyrke, elasticitet og temperaturmodstandsdygtighed. Neoprenhandsker er fremstillet af syntetisk gummi og giver god fleksibilitet, bevægelighed for fingrene, høj densitet og modstandsdygtighed over for rifter. De beskytter mod alkoholer, organiske syrer og alkalier. Nitrilhandsker er fremstillet af copolymer og giver beskyttelse mod klorerede opløsningsmidler som f.eks. trichlorethylen og tetrachlorethen. De beskytter ved arbejde med olier, fedtstoffer, syrer og ætsende stoffer. iv DKrevB

5 Indhold Bio-Rad teknisk support... ii Juridiske bemærkninger... ii Sikkerhed og overholdelse af myndighedskrav...iii, advarsler og forsigtighedsregler... iv PPE-uddannelse (personlige værnemidler)... iv Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik...3 Tilsigtet brug...3 Procedurens principper...3 Reagenser og forbrugsvarer...4 Medfølgende materialer...4 Nødvendige materialer, som ikke medfølger...5 Opbevaring og stabilitet...6 Advarsler og forsigtighedsregler...6 Kvalitetskontrol...6 Prøveindsamling...6 Prøve- og reaktionsklargøring...6 DNA-fordøjelse...7 DNA-fordøjelse i ddpcr reaktionen...7 DNA-fordøjelse forud for ddpcr reaktionen...7 Procedure...8 Workflow...8 Reaktionsklargøring og -opsætning...8 Automatisk dannelse af dråbe...8 PCR-kørsel (thermal cycling)...9 Dataindhentning og -analyse DKrevB 1

6 DKrevB

7 Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik. Fællesnavn: Dx Universal Kit for QXDx AutoDG System Navn: Delnr.: TILSIGTET BRUG QXDx Universal Kit for AutoDG ddpcr System (delnr.: ) er et sæt af ikke-analytspecifikke reagenser og forbrugsvarer, der er beregnet til anvendelse på QXDx Droplet Digital PCR System med henblik på at danne og læse dråber. Slutbrugeren er ansvarlig for tilvejebringelsen af den diagnostiske analyse, kontroller og kalibratorer. PROCEDURENS PRINCIPPER QXDx Universal Kit for AutoDG ddpcr System er et kit, der består af reagenser og forbrugsvarer, der er påkrævede for at køre et ddpcr reaktionsworkflow på QXDx systemet, med undtagelse af primere, probe(r) og skabelon. *Trin 0: Klargør/ ekstraher nukleinsyre Trin 1: Opsætning af reaktion Trin 2: Dannelse af dråbe Trin 3: PCR-kørsel (thermal cycling) Trin 4: Dråbeopsamling og -analyse *Trin 0 er påkrævet, hvis der er behov for at konvertere RNA til cdna. Dx Universal Kit er beregnet og pakket med henblik på at forenkle og muliggøre anvendelsen af QXDx AutoDG ddpcr System i åben tilstand. Dette gør det muligt for laboratoriet at udvikle en analyse uden behov for at skulle overveje hvilke almindelige forbrugsvarer, der er nødvendige for instrumentet og teknologien. Dermed kan laboratoriet fokusere mere på designet af deres primere, probe(r) og skabelonsekvenser. Kittet består af en QXDx AutoDG Consumable Pack, en QXDx AutoDG Supermix Pack og en QXDx Droplet Reader Oil Pack DKrevB 3

8 REAGENSER OG FORBRUGSVARER Medfølgende materialer Delnummer Del Antal QXDx Universal Kit for AutoDg ddpcr System 480 rxns BEMÆRK: Nedenstående bestillingsnumre ( , og ) er alle inkluderet i ddpcr Dx Universal Kit for QX200 System Delnummer Del Antal. Beskrivelse/levering QXDx AutoDG Consumable Pack 480 rxns N/A ddpcr plader med 96 brønde 3 x 5 15 plader med 96 brønde, der er klar til brug ddpcr perforerbar varmeforseglingsfolie 1 x 50 1 pose med 50 varmeforseglinger, der er klar til brug Olie til dråbedannelse til prober 1 x 50 ml 50 ml flasker med olie, der er klar til brug DG32 kassetter 1 x 15 1 pakke med 15 dråbedannelseskassetter, der er klar til brug AutoDG pipettespidser 1 x pakker med pipettespidser til brug med AutoDG Brugervejledning 1 Brugervejledning til AutoDG Delnummer Del Antal. Volume Rxns QXDx AutoDG Supermix Pack 5 1 ml 480 Supermix, der skal optøs til stuetemperatur før brug, til QX200 AutoDG System Delnummer Del Antal. Volume QXDx Droplet Reader Oil Pack 1 1 l 784 Droplet Reader-olie, der er klar til brug på QX200 AutoDG System DKrevB

9 Nødvendige materialer, som ikke medfølger QXDx Droplet Reader QuantaSoft Software Pladeholdere (2) USB 2.0-ledning Beskrivelse Bestillingsnr. QXDx AutoDG Dx Digital Droplet PCR System Strømforsyningsledning QXDx Automated Droplet Generator Kassetteholder Strømforsyningsledning Tilbehør til køleblok Olieudtømningsbeholder Ring til teknisk support Ring til teknisk support Ring til teknisk support Ring til teknisk support Ring til teknisk support Beskrivelse Pipetter 20 μl pipette til prøveindføring 50 μl pipette til dråbeoverføring 8-kanals, 200 μl pipette til olie Beskrivelse Pipettespids (med filter) Bestillingsnr. Rainin L-20 Rainin L8-50 Rainin L8-200 Bestillingsnr. Rainin GP-L10F GP-L200F Beskrivelse Required: Thermal Cyclers with Specifications equivalent to the following: Accuracy: +/- 0,2 C Uniformity: +/- 0,4 C well-to-well within 10 sec Adjustable ramp capability with required ramp rate: up to 2 C/sec Temperature range: C Beskrivelse Bestillingsnr. PX1 PCR-pladeforsegler DKrevB 5

10 OPBEVARING OG STABILITET QXDx AutoDG Supermix er stabil ved -25 C til -15 C til den anførte udløbsdato, som er trykt på etiketterne. Så snart den er blevet optøet, kan supermix en opbevares ved 4 C i op til 2 uger. Gentagen nedfrysning og optøning af supermix en frarådes. QXDx AutoDG Consumable Pack er stabil ved 15 C til 30 C (stuetemperatur) til den anførte udløbsdato, som er trykt på etiketterne. QXDx Droplet Reader Oil Pack er stabil ved en konstant temperatur på 15 C til 30 C (stuetemperatur) til den anførte udløbsdato, som er trykt på etiketterne. Advarsler og forsigtighedsregler Dette produkt er udelukkende til laboratoriebrug Materialer, hvis udløbsdato er overskredet, må ikke anvendes Prøver skal altid håndteres i overensstemmelse med sikre laboratorieprocedurer som beskrevet i CLSI Document M29 1 Reagenserne skal beskyttes mod varme og fugt Der skal benyttes personlige værnemidler under håndteringen af alle reagenser. Vask hænderne grundigt efter udførelse af testen Bortskaf Kvalitetskontrol QXDx AutoDG Supermix for Probes (uden dutp) er fri for kontaminerende DNase og RNase. Der opretholdes en stringent kvalitetskontrol for at sikre konsekvente lot til lot-specifikationer. PRØVEINDSAMLING Prøverne skal indsamles og mærkes på korrekt vis Indsamlede prøver skal opbevares under de af brugeren validerede betingelser Bedste praksis er at indsamle fuldblodsprøver i henhold til den enkelte institutions standardteknikker. Der skal tages en blodprøve på mindst 5 ml i rør, der indeholder EDTA som antikoagulans Gå videre til prøve- og reaktionsklargøring PRØVE- OG REAKTIONSKLARGØRING Prøveekstraktion er påkrævet. Materialet til ddpcr-workflowet er ekstraheret DNA eller cdna. Applikationsspecifikke procedurer for ekstraktionsklargøring skal udvikles og valideres af brugeren. Almindelige metoder til prøveklargøring med henblik på ekstraktion af DNA fra fuldblod eller buffycoat er kompatible med ddpcr metoder Almindelige metoder til prøveklargøring med henblik på ekstraktion af DNA fra formalinfikserede, paraffinindstøbte (FFPE) væv er kompatible med ddpcr metoder Når der arbejdes med RNA, skal der anvendes almindelige prøveklargøringsmetoder til revers transkriptions- PCR på hver enkelt institution DKrevB

11 Anbefalinger for optimale resultater: Følg de generelle retningslinjer og anbefalinger i brugervejledningen til QXDx Automated Droplet Generator Koncentrationen af humant genomisk DNA skal være 30 pg-330 ng pr. 20 μl reaktionsfordøjet DNA-fordøjelse DNA-fragmentering ved hjælp af restriktionsfordøjelse forud for dråbedannelsen gør det muligt at opnå en optimal nøjagtighed ved at separere dobbelte genkopier, nedsætte prøvens viskositet og forbedre prøvernes adgang til skabelonen. Restriktionsfordøjelse forbedrer den generelle ydelse af digital PCR på tværs af alle applikationer. Anbefaling: Vælg en restriktionsendonuklease, der hverken klipper mål- eller referenceamplikonet og som ikke er følsomt over for methylering. Fire baseklippere og high fidelity-enzymer foretrækkes. Der kan anvendes to strategier til at udføre restriktionsfordøjelse af DNA-prøverne: Fordøjelse direkte i ddpcrreaktionen under opsætningen eller konventionel fordøjelse forud for ddpcr. DNA-fordøjelse i ddpcr reaktionen Effektiv fordøjelse af prøve-dna kan opnås ved direkte tilsætning af restriktionsenzymer til ddpcr-reaktionen Fortynd restriktionsenzymet med den anbefalede fortyndingsbuffer i henhold til producentens vejledning, og tilsæt 1 μl til ddpcr reaktionen Det anbefales at bruge cirka 2-5 enheder af restriktionsenzymet pr. 25 μl ddpcr reaktion Tilsætning af restriktionsenzymbuffer med højt saltindhold kan hæmme den digitale PCR og skal derfor undgås HaeIII, MseI, AluI, HindIIII og CviQI har vist sig at fungere godt i forbindelse med fordøjelse i ddpcr reaktioner DNA-fordøjelse forud for ddpcr reaktionen Fordøjelsen med restriktionsenzymer kan udføres som en separat reaktion forud for opsætningen af ddpcr reaktionen Brug 5-10 enzymenheder pr. mikrogram DNA og enzymenheder pr. mikrogram genomisk DNA Inkubér reaktionen i 1 t ved den temperatur, der anbefales for restriktionsenzymet Varmeinaktivering er ikke påkrævet, men kan overvejes, hvis der er behov for langvarig opbevaring. Varmeaktivering over 65 C skal undgås DNA-oprensning er ikke nødvendig efter restriktionsfordøjelse Anvend en fortynding på mindst 10 gange af den fordøjede opløsning for at reducere prøvens saltindhold med henblik på ddpcr reaktionen Fordøjet DNA skal opbevares ved -20 C eller derunder Klargør ddpcr reaktionsblandingen DKrevB 7

12 PROCEDURE Workflow *Trin 0: Klargør/ ekstraher nukleinsyre Trin 1: Opsætning af reaktion Trin 2: Automatisk dannelse af dråbe Trin 3: PCR-kørsel (thermal cycling) Trin 4: Dråbeaflæsning, dataindhentning og -analyse *Trin 0 er påkrævet, hvis der er behov for at konvertere RNA til cdna. Reaktionsklargøring og -opsætning 1. Optø alle supermix-komponenter, primere og prober til stuetemperatur. Bland indholdet i røret grundigt med vortex-blander for at sikre homogenitet, da der kan dannes en koncentrationsgradient under opbevaring ved -20 C. Centrifugér kortvarigt for at samle indholdet i bunden af røret. 2. Klargør prøverne ved den ønskede koncentration før opsætning af reaktionsblandingen. 3. Klargør reaktionsblandingen i henhold til det nødvendige antal reaktioner. 4. Saml alle påkrævede komponenter med undtagelse af prøven. Dispensér ens alikvoter i hvert reaktionsrør, og tilsæt prøven til hvert reaktionsrør som det afsluttende trin. 5. Bland indholdet i røret grundigt med vortex-blander. Centrifugér kortvarigt for at sikre, at alle komponenterne befinder sig i bunden af reaktionsrøret. Lad reaktionsrøret hvile ved stuetemperatur i cirka 3 minutter. Del Volumen pr. reaktion (μl) Slutkoncentration ddpcr Supermix for Probes (uden dutp) 12,5 1x 20 x målprimere/-probe (FAM) 1, nm/250 nm 20 x referenceprimere/-probe (HEX/VIC) 1, nm/250 nm Fortyndet restriktionsenzym (se DNA-fordøjelse) 1,00 Variabel Prøve Variabel Op til 330 ng* RNase- og DNase-frit vand Variabel - Samlet volumen 25 - Tabel 1: * Prøvekoncentrationer > 66 ng pr. reaktion og visse applikationer kan nødvendiggøre restriktionsfordøjelse for optimal måldetektion. Hvis fordøjelse ikke er påkrævet, klargøres ddpcr-reaktionsblandingen uden det fortyndede restriktionsenzym. Efter afslutning af reaktionsklargøringen og opsætningen gås der videre til trin 2 i workflowet Dannelse af dråbe. Automatisk dannelse af dråbe Der henvises til brugervejledningen til QXDx AutoDG System (REF ) for en detaljeret grafisk opsætnings- og brugsvejledning. BEMÆRK: Alle 8 brønde i hver enkelt kolonne i DG32 dråbedannelseskassetten skal indeholde prøve eller ingen skabelonkontrol. Automated Droplet Generator, IVD klargør dråber til op til 96 prøver ad gangen. Dråbedannelsen tager ~45 minutter for en plade med 96 brønde DKrevB

13 Når dråbedannelsen er afsluttet i den automatiske dråbedanner, tages pladen med de 96 brønde ud foran på AutoDG systemet, hvorefter pladen med dråberne forsegles med en PX1 PCR-pladeforsegler. Følg instruktionerne for PX1 PCR-pladeforsegleren: Indstil pladeforseglerens temperatur til 180 C og tiden til 5 sek. (Dette er ikke standardindstillingen) Berør pilen for at åbne bakkedøren på PX1. Placér supportblokken på bakken med siden med de 96 brønde opad. Placér pladen med 96 brønde på supportblokken, og sørg for, at alle pladens brønde justeres i forhold til blokken Dæk pladen med 96 brønde med ét ark perforerbar forseglingsfolie. (Den gule etiket på posen med Bio-Rad varmeforseglingsfolien identificerer forseglingssiden). Forsøg ikke at placere rammen over den foliedækkede plade. Rammen er kun til brug med andre forseglinger Tryk på knappen Seal (Forsegl), så snart pladen med 96 brønde er placeret sikkert på supportblokken og dækket med den perforerbare forseglingsfolie. Bakken lukker, og varmeforseglingen går i gang Når varmeforseglingen er gennemført, åbner PX1-døren automatisk. Tag pladen af blokken med henblik på PCR-kørsel (thermal cycling). Tag blokken ud af PX1-forseglingsapparatet Kontrollér, at alle brøndene på pladen er forseglet. Brøndenes fordybninger skal være synlige på folien. Så snart den er forseglet, er pladen klar til PCR-kørsel (thermal cycling) PCR-kørsel (thermal cycling) Så snart pladen med 96 brønde, der indeholder dråberne, er blevet forseglet, placeres den i PCR-maskinen (thermal cycler) men henblik på PCR-amplifikation. Trin Temperatur ( C) Enzymaktivering min. Tid Ændringshastighed Antal cyklusser Denaturering sek. 40 Hærdning/forlængelse 60 1 min. 2 C/sek. 40 Enzymdeaktivering min. 1 Hold (valgfrit) 4 Uendelig 1 Tabel 2: Kørselsbetingelse for Thermal Cycler* * Brug et opvarmet låg, der indstilles til 105 C, og indstil prøvevolumen til 40 μl. * Betingelserne for PCR-kørsel (thermal cycling) kan ændres i henhold til kravene for den enkelte analyse. Advarsel: Hvis der anvendes en anden ændringshastighed, kan det påvirke PCR-amplifikationen og resultaterne. Dataindhentning og -analyse 1. Efter PCR-kørsel (thermal cycling) placeres pladen med 96 brønde i QXDx Droplet Reader. 2. Åbn QX200 softwaren (QuantaSoft ) for at indstille et nyt pladelayout i henhold til det specifikke forsøgsdesign. 3. Der henvises til vejledningen til QX200 Dx Droplet Reader (REF ) for detaljerede instruktioner DKrevB 9

14 4. Angiv følgende oplysninger i softwaren: Prøvens navn Forsøgstype Supermix-type: ddpcr Supermix for Probes (uden dutp) Målnavne Måltype(r) (Ch1 for FAM og Ch2 for HEX/VIC) 5. Vælg Apply (Anvend) for at indstille pladelayoutet, og klik på OK for at afslutte. 6. Vælg derefter RUN (Kør) for at igangsætte dråbeaflæsningsprocessen (dataindhentning). 7. Så snart dataindhentningen er gennemført, analyseres og gennemgås resultatet. 8. Det rapporterede resultat er kopier/μl af den endelige 1x ddpcr reaktion DKrevB

15 Noter: DKrevB 11

16 Bio-Rad Laboratories, Inc. For further information, please contact the Bio-Rad office nearest you or visit our website at Clinical Diagnostics Group 4000 Alfred Nobel Drive Hercules, California Telephone (510) FAX (510) Australia, Bio-Rad Laboratories Pty. Ltd., Level 5, 446 Victoria Road, Gladesville NSW 2111 Phone Telefax Austria, Bio-Rad Laboratories Ges.m.b.H., Hummelgasse 88/3-6, A-1130 Vienna Phone Telefax Belgium, Bio-Rad Laboratories N.V., Winninglaan 3, BE-9140 Temse Phone +32 (3) Telefax +32 (3) Brazil, Bio-Rad Laboratórios Brasil Ltda, Rua Alfredo Albano da Costa, 100, Lagoa Santa - MG, CEP: Phone +55 (31) Telefax +55 (31) Canada, Bio-Rad Laboratories, Ltd., 2403 Guénette Street, Montréal, Québec H4R 2E9 Phone Telefax China, Bio-Rad Laboratories Shanghai Ltd., 3rd Floor, #18 Dong Fang Road, Bldg E, Poly Plaza, Pudong, Shanghai, PRC Phone Telefax Czech Republic, Bio-Rad spol. s r.o., Nad ostrovem 1119/7, Prague 4 Phone Telefax Denmark, Bio-Rad Laboratories, Symbion Science Park, Fruebjergvej 3, DK-2100 Copenhagen East Phone Telefax Finland, Bio-Rad Laboratories, Linnanherrankuja 16, FIN Helsinki Phone Telefax France, Bio-Rad, 3 boulevard Raymond Poincaré, Marnes-la-Coquette Phone Telefax Germany, Bio-Rad Laboratories GmbH, Heidemannstrasse 164, D Munich Phone +49 (0) Telefax +49 (0) Greece, Bio-Rad Laboratories M E.P.E, 2-4 Mesogeion Street, Fourth Floor Athens Phone Telefax Hong Kong, Bio-Rad Pacific Ltd., Unit 1101, 11/F DCH Commercial Centre, 25 Westlands Road, Quarry Bay Phone Telefax Hungary, Bio-Rad Hungary Ltd., H-1082 Budapest, Futo Street 47-53, Hungary Phone Telefax India, Bio-Rad Laboratories (India) Pvt. Ltd., Bio-Rad House, 86-87, Udyog Vihar Phase IV, Gurgaon, Haryana Phone Telefax Israel, Bio-Rad Laboratories Ltd., 14 Homa Street, New Industrial Area, Rishon Le Zion Phone Telefax Italy, Bio-Rad Laboratories S.r.l., Via Cellini 18/A, Segrate, Milan Phone Telefax Japan, Bio-Rad Laboratories K.K., Tennoz Central Tower 20F, Higashi-Shinagawa, Shinagawa-ku, Tokyo Phone Telefax Korea, Bio-Rad Korea Ltd., 10th Floor, Hyunjuk Building, , Gangnam-gu, Seoul Phone Telefax Mexico, Bio-Rad, S.A., Avenida Eugenia 197, Piso 10-A, Col. Narvarte, C.P Mexico, D.F. Phone +52 (55) Telefax +52 (55) The Netherlands, Bio-Rad Laboratories B.V., Postbus 222, 3900 AE Veenendaal Phone Telefax New Zealand, Bio-Rad New Zealand, 189 Bush Road Unit B, Albany, Auckland Phone Telefax Norway, Bio-Rad Laboratories, Nydalsveien 33, 0484 Oslo Phone Telefax +46(0) Poland, Bio-Rad Polska Sp. z o.o., Nakielska Str. 3, Warsaw Phone Telefax Portugal, Bio-Rad Laboratories, Lda., Edificio Prime, Ave. Quinta Grande, 53 Fracção 3B Alfragide Amadora Phone Telefax Russia, Bio-Rad Laboratorii, , Russian Federation, Moscow, Varshavskoe sh., 9, Bldg., 1B Phone Telefax Singapore, Bio-Rad Laboratories (Singapore) Pte. Ltd., 27 International Business Park, #01-02 Singapore Phone Telefax South Africa, Bio-Rad Laboratories (Pty) Ltd., 34 Bolton Road, Parkwood, Johannesburg 2193 Phone Telefax Spain, Bio-Rad Laboratories, S.A., C/ Caléndula, 95, Edificio M. Miniparc II, El Soto de la Moraleja, Madrid Phone Telefax Sweden, Bio-Rad Laboratories A.B., Box 1097, Solna Strandväg 3, SE , Solna Phone Telefax Switzerland, Bio-Rad Laboratories AG, Pra Rond 23, CH-1785 Cressier Phone +41 (0) /06 Telefax +41 (0) Taiwan, Bio-Rad Laboratories Taiwan Ltd., 14F-B, No. 126 Nan-King East Road, Sec. 4, Taipei, Taiwan R.O.C. Phone Telefax Thailand, Bio-Rad Laboratories Ltd., 1st & 2nd Floor, Lumpini I Bldg., 239/2 Rajdamri Road., Lumpini, Pathumwan, Bangkok Phone Telefax United Kingdom, Bio-Rad Laboratories Ltd., Bio-Rad House, Maxted Road, Hemel Hempstead, Herts HP2 7DX Phone +44 (0) Telefax +44 (0)