ApodanNordic A/S Att. Heine Dalsgaard Legravsvej 63 2300 København S Analyserapport nr. 558780.1 (inkl. resultater fra nr. 541824 og en in-house aftørringstest) Opgave: Kvantitativ non-porøs overfladeprøvning til evaluering af bakterie- og /eller svampedræbende aktivitet af kemiske desinfektionsmidler til brug i fødevareindustrien, hos forbrugere samt institutioner efter DS/EN 13697 Kvantitativ overfladeprøvning til evaluering af svampedræbende aktivitet af desinfektionskluden ApoWipe Ethanol Desinfection efter in-house metode. Prøvetagning ved: Rekvirenten Prøvemodtagelse: Maj 2013 Analyseperiode: 29. maj 6. oktober 2013 Bemærkninger: Resultaterne af analysen samt redegørelse for anvendt(e) metode(r) vedrører kun de(t) analyserede emne(r) eller de(n) til analyse udtagne delprøve(r). Analysen er udført i henhold til Teknologisk Instituts almindelige vilkår for rekvirerede opgaver. Analyserapporten må kun gengives i uddrag, hvis Kemisk og Mikrobiologisk Laboratorium skriftligt har godkendt uddraget. Kemisk og Mikrobiologisk Laboratorium, Aarhus Helle Stendahl Andersen Konsulent Birthe Momme Pedersen Laboratorietekniker
Effektiviteten af væsken fra desinfektionskluden ApoWipe Ethanol Desincfection til overfladedesinfektion, blev testet efter standard DS/EN13697 (1. udgave, 2001). Effektiviteten af desinfektionskluden ApoWipe Ethanol Desinfection blev ligeledes testet overfor skimmelsvampen Aspergillus niger ved aftørring efter en in-house test, da det ikke var muligt at reducere antallet af svampeceller for Aspergillus niger med log 3 ved henstand i henhold til DS/EN 13697. Testen skal vise, at produktet, under forudsætning af de i standarden givne forhold, kan reducere antallet af levende bakterieceller med mindst en log 4 og antallet af levende svampeceller med mindst en log 3. Testen blev udført under simulerede forurenede forhold (3,0g/L bovin serum albumin). Produkt: ApoWipe Ethanol Desinfection Producent: ApodanNordic A/S Opbevaring: Produktets udseende: Desinfektionskludene blev opbevaret ved stuetemperatur Klar væske. Aktive stoffer: 75-85 % ethanol Neutraliseringsmiddel Saponin 30 g/l Polysorbat 80 30 g/l Lecithin 3 g/l
Forsøgsbeskrivelse Bakterie- eller svampesuspension blev overført til en rustfri ståloverflade og tørret ved 37 C. Produktet blev herefter tilført til overfladen og fik lov til at virke i en bestemt tidsperiode. Den rustfri stålplade blev efterfølgende overført til et neutraliseringsmiddel, for at neutralisere effekten af produktet. Antallet af overlevende mikroorganismer blev kvantificeret og sammenlignet med en kontrolprøve, hvor produktet var erstattet med sterilt hanevand. For in-house metoden, blev en svampesuspension blev overført til en laminatplade, så koncentrationen var 1 10 5 celler/cm 2. Laminatpladen blev tørret ved stuetemperatur under laminart flow. Herefter blev laminatpladen aftørret med en ApoWipe Ethanol Desinfection. Efter 1 min. var al synlig ethanol fordampet fra laminatpladen, og et stykke på 2x2cm blev klippet ud med en steril saks. Laminatstykket blev efterfølgende overført til et neutraliseringsmiddel, for at neutralisere effekten af produktet. Antallet af overlevende mikroorganismer blev kvantificeret og sammenlignet med en kontrolprøve, hvor en ikke-imprægneret klud fra Apodan Nordic A/S blev vædet med sterilt hanevand. Eksperimentelle forhold Testorganismer: Pseudomonas aeruginosa, ATCC 15442 Staphylococcus aureus, ATCC 6538 Escherichia coli, ATCC 10536 Enterococcus hirae, ATCC 10541 Candida albicans, ATCC 10231 Aspergillus niger, ATCC 16404 Kontakttid for bakterie: Kontakttid for svampe: Kontakttid ved in-house metoden Forsøgstemperatur: 5 min. 15 min. 1 min. Stuetemperatur (20-22 C). Interfererende substans: 3,0 g/l bovin serum albumin (simulerede forurenede forhold) Testoverflade: Testoverflade ved in-house metoden: Rustfri ståloverflade (2 cm diameter, Grade 2 B 1.4301 (EN 10088-1), EN 10 088-2. Testoverfladerne var rengjort og steriliseret. Laminatplade fra Horn bordplader, 0,8mm. Tørretid: Den rustfri stålplade med svampesuspensionen blev tørret ved 37 C. Laminatpladen med svampesuspension blev tørret ved stuetemperatur ved laminart flow.
Produktkoncentrationer For DS/EN 13697 blev der testet på det ufortyndede produkt, som blev vredet ud af desinfektionskludene. For in-house metoden, blev der testet ved aftørring med desinfektionskluden ApoWipe Ethanol Desinfection Inkubation Alle bakterier blev inkuberet på trypton soja agar ved 37 C i 48 timer. Candida albicans blev inkuberet på malt ekstrakt agar ved 30 C i 48 timer. Aspergillus niger blev inkuberet på malt ekstrakt agar ved 30 C i 120 timer.
Resultater Alle kontroller var indenfor de fastlagte grænseværdier. For øvrige resultater, se bilag 1. Testorganisme Kontakttid Start koncentration Celler/ml Log reduktion ApoWipe Ethanol Desinfection Pseudomonas aeruginosa 5 min. 1,5 10 8 5,9 Staphylococcus aureus 5 min. 7,5 10 8 >6,4 Escherichia coli 5 min. 5,4 10 8 >6,5 Enterococcus hirae 5 min. 2,3 10 8 5,8 Candida albicans 15 min. 3,6 10 8 >6,2 Aspergillus niger 15 min. 3,4 10 7 2,3 Resultater for DS/EN 13697. Testorganisme Kontakttid Startkoncentration Celler/cm 2 Log reduktion ApoWipe EtOH Desinfection Log reduktion Vandkontrol Aspergillus niger 1 min. 5,70 10 5 3,3 4,8 Resultater fra in-house metode. Konklusion Det var muligt at reducere antallet af bakterieceller med en log 4, samt antallet af gærsvampen Candida albicans med log 3, med væske vredet ud af ApoWipe Ethanol desinfection, under de i standarden angivne forhold. Det var dog ikke muligt, at reducere antallet af levende filamentøse svampeceller fra Aspergillus niger med log 3, under de i standarden angivne forhold. In-house testen viser dog, at det er muligt, at reducere antallet af svampeceller for Aspergillus niger ved aftørring med log 3, under simulerede urene forhold, og med en kontakttid på 1min. OBS: Svampesuspensionen for Candida albicans var 10x højere end standarden DS/EN13697 forskriver. Da produktet ifølge DS/EN 13697 skal vise, at det kan reducere antallet af svampeceller med en log 3, og produktet herved viste, at det kan reducere antallet af svampeceller med > log 6,2, blev resultatet godkendt.
Bilag 1 Testorganisme Bakteriesuspension: N NT NC Vandkontrol Nc Forsøgsprocedure 1. Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442 Kontakttid 5min 10-6 :NoC; NoC 10-7 :16; 13 N: 6,9 10-4 :47; 60 10-5 :7; 7 NT: 6,0 10-4 :45; 45 10-5 :4; 4 Nc: 6,0 10-4 : 41; 37 10-5 : 5; 3 10-6 : 0; 0 Nd: 5,9 Nts: >300 10-0 :1; 0 Nd: 0,0 ME: 5,9 Staphylococcus aureus ATCC 6538 Kontakttid 5min 10-6 :>300;>300 10-7 :73; 77 N: 6,6 10-4 :147;145 10-5 :14;16 NT: 6,5 10-4 :168;200 10-5 :17;18 Nc: 6,6 10-4 : 173; 173 10-5 : 14; 26 10-6 : 0; 0 Nd: 6,5 Nts: 125 10-0 :0; 0 Nd: <0,1 ME: >6,4 Escherichia coli ATCC 10536 Kontakttid 5min 10-6 :>300;>300 10-7 :51;56 N: 7,4 10-4 :206;209 10-5 :20;23 Nc: 6,6 10-4 :213;214 10-5 :15;16 Nc: 6,6 10-4 :237 ;198 10-5 :25;20 10-6 :5 ;1 Nd: 6,6 Nts: 24 10-0 :0; 0 10-1 : 1; 0 Nd: <0,1 ME: >6,5 Enterococcus hirae ATCC 10541 Kontakttid 5min 10-6 :241;225 10-7 :22;31 N: 6,1 10-4 :111;97 10-5 :13; 7 NT: 6,3 10-4 :88;103 10-5 :7;16 Nc: 6,3 10-4 :117 ;111 10-5 :11 ;17 10-6 : 1; 0 Nd: 6,4 Nts: 7 10-0 :4; 2 10-1 : 1; 0 Nd: 0,6 ME: 5,8 Forklaring til resultater: N angiver antallet af log 10 af CFU pr. testoverflade, (N)c angiver log 10 af CFU pr. testoverflade for vandkontrollen, (N)d angiver denne størrelse for desinfektionstesten, (N)C angiver denne størrelse for neutraliseringskontrollen og (N)T angiver størrelsen for neutraliseringstesten. Nts er antallet af tilbageblivende CFU på den rustfri ståloverflade. ME er den dræbende effekt (ME=Nc-Nd) NoC: (Not countable): Ikke muligt at tælle kolonierne.
Bilag 1 Testorganisme Svampesuspension: N NT NC Vandkontrol Nc Forsøgsprocedure 1. Forsøgsprocedure 2. Candida albicans ATCC 10231 Kontakttid 15min 10-5 :>300; >300 10-6 :>360;>300 N: 7,3 10-4 :175;172 NT: 6,5 10-4 :177;189 Nc: 6,3 10-4 : 95;99 10-5 : 15;11 Nd: >300 Nts: 6,3 10-0 :0; 0 Nd: <0,1 ME: >6,2 Aspergillus niger ATCC 16404 Kontakttid 15min 10-5 :>300; >300 10-6 :35; 32 N: 6,2 10-3 :107; 105 10-4 :15; 12 NT: 5,3 10-3 :109; 107 10-4 :22; 20 Nc: 5,3 10-3 :87; 110 10-4 : 18; 16 10-5 : 2; 2 Nd: 5,3 Nts: 14 10-0 :>300; >300 10-1 : 29; 41 10-2 : 11; 9 Nd: 2,9 Nts: 3 ME: 2,5 10-0 :>300; >300 10-1 : 84; 75 10-2 : 17; 16 Nd: 3,2 Nts: 3 ME: 2,1 Forklaring til resultater: N angiver antallet af log 10 af CFU pr. testoverflade, (N)c angiver log 10 af CFU pr. testoverflade for vandkontrollen, (N)d angiver denne størrelse for desinfektionstesten, (N)C angiver denne størrelse for neutraliseringskontrollen og (N)T angiver størrelsen for neutraliseringstesten. Nts er antallet af tilbageblivende CFU på den rustfri ståloverflade. ME er den dræbende effekt (ME=Nc-Nd) NoC: (Not countable): Ikke muligt at tælle kolonierne.
Bilag 1: Testorganisme Aspergillus niger ATCC 16404 Kontakttid 1min Test af metode Spredning af svampesuspension 10-3 :81*; 61* 10-4 :19;12 10-5 :2; 0 N: 5,49 *svære at tælle NT 10-3 :>200;>200 10-4 :30; 32 NT: 5,43 NC 10-3 :120;132 10-4 :18; 16 NT: 5,79 Vandkontrol Nc 10-0 : 2; 3 10-3 : 0; 0 Nd: 0,70 ME: 4,79 Forsøgsprocedure 10-0 :93; 89 10-1 : 8; 17 10-2 : 2; 1 Nd: 2,26 Nts: 3 ME: 3,23 Aspergillus niger ATCC 16404 Kontakttid 1min 10-3 :92*; 72* 10-4 :19;7 10-5 :3; 0 N: 5,41 *svære at tælle 10-3 :>200;>200 10-4 :30; 32 NT: 5,43 10-3 :120;132 10-4 :18; 16 NT: 5,79 10-0 : 1; 4 10-3 : 0; 0 Nd: 0,70 ME: 4,72 10-0 :44; 48 10-1 : 6; 4 Nd: 1,96 Nts: 3 ME: 3,45 Forklaring til resultater: N angiver antallet af log 10 af CFU pr. testoverflade, (N)c angiver log 10 af CFU pr. testoverflade for vandkontrollen, (N)d angiver denne størrelse for desinfektionstesten, (N)C angiver denne størrelse for neutraliseringskontrollen og (N)T angiver størrelsen for neutraliseringstesten. Nts er antallet af tilbageblivende CFU på den rustfri ståloverflade. ME er den dræbende effekt (ME=Nc-Nd) NoC: (Not countable): Ikke muligt at tælle kolonierne. Hver test blev udført som dobbeltbestemmelse, hvor det angivne resultat er et gennemsnit.