Til in vitro-diagnostik Til brug med BD MAX-systemet Dansk 4 U I

MAX MRSA XT 443461 Til in vitro-diagnostik P0205(01) Til brug med BD MAX-systemet 2016-06 Dansk 4 U I TILSIGTET BRUG BD MAX MRSA XT-analysen udført på BD MAX-systemet er en automatisk kvalitativ in vitro-diagnostisk test til direkte påvisning af methicillinresistente Staphylococcus aureus (MRSA) DNA fra næsepodninger hos patienter med risiko for næsekolonisering. Testen anvender polymerasekædereaktion (PCR) i realtid til opformering af MRSA DNA og fluorogene, mål-specifikke hybridiseringsprober til påvisning af det opformerede DNA. BD MAX MRSA XT-analysen er tiltænkt som en hjælp til at forhindre og kontrollere MRSAinfektioner i hospitalsmiljøer. Den er ikke beregnet til diagnosticering af MRSA-infektioner eller til overvågning af behandling af MRSA-infektioner. Et negativt resultat udelukker ikke kolonisering i næsen. Konkomitante dyrkninger er nødvendige for at regenerere organismer til epidemiologisk typebestemmelse eller til yderligere følsomhedstestning. RESUMÉ OG FORKLARING AF PROCEDUREN MRSA er en af hovedårsagerne til infektioner i hospitalsmiljøer. Hovedparten af smitteoverførsler i hospitalsmiljøer sker via sundhedspersonalets kontaminerede hænder eller som følge af smitte fra patienter med MRSA. MRSA kan forårsage infektion med kliniske manifestationer, der spænder fra pustler til sepsis og dødsfald, 1 men kan også findes i næsen eller på huden hos enkeltpersoner (asymptomatiske bærere). Behandling af MRSA-infektioner er blev en udfordring, idet MRSA ofte er resistent overfor en bred række af antimikrobielle midler. Methicillinresistente stammer af Staphylococcus aureus registreres ofte i sundhedsmiljøer og repræsenterer over 50 % af hospitalserhvervede Staphylococcus aureus-isolater på visse nordamerikanske hospitaler. Risikofaktorer for infektion med MRSA i sundhedsmiljøer inkluderer forlængede hospitalsophold, kontakt med patienter, der er inficeret eller koloniseret med MRSA, kolonisering med andre resistente organismer, såsom vancomycinresistent enterococci (VRE) og Clostridium difficile, eksponering for flere og/eller længerevarende behandlinger med bredspektret antibiotika, eksponering for høje MRSA-prævalensområder indenfor sundhedsmiljøet og forudgående MRSA-infektion eller nasal bæretilstand. Tidlig identifikation af patienter, som er næsebærere af MRSA, kan indgå i et effektivt program til forebyggelse af MRSA-infektion. For at påvise MRSA ved dyrkning kræves der isolering af rene kolonier efterfulgt af følsomhedstestning med oxacillin eller cefoxitin, påvisning af meca-genet eller påvisning af det penicillinbindende protein (PBP 2a), som er kodet af meca-genet. Dyrkningsprocessen tager mindst 24 timer, men der går i gennemsnit nærmere 48 timer, inden resultatet foreligger, og MRSA kan identificeres. I betragtning af den hastighed, hvormed MRSA-infektioner kan spredes især i hospitalsmiljøer, hvor bærerne ofte findes er muligheden for at få resultater fra MRSA-næsebærere på den samme dag, hvor prøven indsamles, en fordel for et program til forebyggelse af infektioner. Aktiv overvågning ved hjælp af molekylære test til hurtig påvisning af MRSA har vist sig effektivt at reducere overførslen af smitte i hospitalsmiljøer og forebygge infektion hos sårbare patienter. Unøjagtig påvisning kan føre til ukontrolleret overførsel af MRSA og ineffektiv anvendelse af sundhedsvæsenets ressourcer. 2 Med andre tilgængelige analysemetoder er op til 17,9 % af de positive MRSA-testresultater ukorrekte, fordi meca-genet er fraværende, som typisk kaldes dropout-mutanter. 3 Disse falske positive resultater kan føre til unødvendig og dyr isolering og behandling af patienter. 1 MRSA-stammer med det nyopdagede mecc-gen tegner sig for 3 4 % af alle nye MRSA-tilfælde, 4 men de kan ikke påvises ved hjælp af analyser, der ikke påviser det pågældende mecc-gen. 5 Manglende påvisning af mecc-genet kan føre til falske negative resultater, der kan bidrage til ukontrolleret overførsel af ikke-påviste MRSA-stammer. Analysens design er afgørende for nøjagtig påvisning af MRSA og for at sikre, at der anvendes hensigtsmæssige foranstaltninger til infektionskontrol. BD MAX MRSA XT-analysen anvender en udvidet kombination af primere og prober til at detektere nye stammer af MRSA, herunder stammer med meca- eller mecc-gener, og reducerer antallet af falske positive resultater som følge af meca- eller mecc-dropouts. 1

Et nasalt podningspræparat udtages og sendes til laboratoriet ved brug af den anbefalede type podepind (se afsnittet Nødvendigt udstyr og materialer, der ikke er vedlagt). Podepinden placeres i et BD MAX MRSA XT-prøvebufferrør. Prøvebufferrøret vortexblandes for at frigøre cellerne fra podepinden til bufferen. Prøvebufferrøret placeres i BD MAX-systemet, hvorefter følgende automatiske procedurer udføres: Bakteriecellerne lyseres, DNA ekstraheres på magnetiske perler og koncentreres, og derefter tilsættes en afmåling af den eluerede DNA til PCR-reagenser, som indeholder MRSA-specifikke primere, der bruges til at amplificere de genetiske mål, hvis de er til stede. Analysen omfatter også en prøvebearbejdningskontrol. Prøvebearbejdningskontrollen er til stede i ekstraktionsrøret og udsættes for ekstraktions-, koncentrations- og amplifikationstrinnene for at kunne overvåge for hæmmende stoffer og procesineffektivitet, som skyldes instrument- eller reagensfejl. Operatørindgriben er ikke nødvendig, så snart den kliniske prøve, en BD MAX Unitized Reagent Strip og BD MAX PCR-kassetten er sat i BD MAX-systemet. BD MAX-systemet automatiserer prøvelysis, DNA-ekstraktion og -koncentration, reagensrehydrering, nukleinsyre-amplifikation og påvisningen af målnukleinsyresekvensen vha. polymerasekædereaktion (PCR) i realtid. Amplificerede mål påvises med hydrolyseprober mærket med hæmmede fluoroforer. Amplificering, påvisning og tolkning af signaler udføres automatisk af BD MAX-systemet. PROCEDURENS PRINCIPPER BD MAX-systemet anvender en kombination af lytiske reagenser og ekstraktionsreagenser til at udføre cellelysering og DNA-ekstraktion. Efter enzymatisk cellelysering ved forhøjet temperatur indfanges de frigjorte nukleinsyrer af magnetiske affinitetsperler. Perlerne med de bundne nukleinsyrer vaskes, og nukleinsyrerne elueres vha. varme i elueringsbuffer. Elueret DNA neutraliseres med neutraliseringsbuffer og overføres til Master Mix-røret for at rehydrere PCR-reagenserne. Det rekonstituerede amplifikationsreagens dispenseres i BD MAX PCR-kassetten. Mikroventiler i BD MAX PCR-kassetten forsegles af systemet, inden PCR igangsættes, for at forhindre fordampning og amplikonkontaminering. De amplificerede DNA-mål påvises vha. hydrolyseprober (TaqMan), som er mærket med en fluorescerende reporterfarvestof (fluorofor) i den ene ende og med en quencherdel. Prober, der er mærket med forskellige fluoroforer, anvendes til at påvise en specifik amplikon i SCCmec MREJ (Right Extremity Junction) og generne for methicillin-resistens meca og mecc i tre forskellige optiske kanaler på BD MAX-systemet: MREJ-amplikoner (SCCmec Right-extremity Junction) påvises i 475/520-kanalen, generne for methicillin-resistens meca- og mecc-amplikoner påvises i 585/630-kanalen, og prøvebearbejdningskontrol-amplikoner påvises i 680/715-kanalen. Når proberne er i deres normale tilstand, hæmmes fluoroforen af fluorescensen pga. dens nærhed til quencheren. Ved tilstedeværelsen af mål-dna hybridiseres proberne dog til deres komplementære sekvenser og hydrolyseres af DNA-polymerasens 5' 3'-exonukleaseaktivitet, da den syntetiserer den nydannede streng langs DNA-skabelonen. Som følge heraf adskilles fluoroforerne fra quenchermolekylerne, og fluorescensen afgives. Mængden af fluorescens, der påvises i de tre optiske kanaler, som anvendes til BD MAX MRSA XT-analysen, er direkte proportional med mængden for den tilsvarende probe, som hydrolyseres. BD MAX-systemet måler disse signaler i slutningen af amplifikationscyklussen og tolker dataene for at levere et resultat. REAGENSER REF. Indhold Antal 443461 BD MAX MRSA XT Master Mix (C7) Tørret PCR Master Mix, der indeholder polymerase, nukleotider og specifikke molekylære prober og primere sammen med en prøvebearbejdningskontrolspecifik molekylærprobe. BD MAX MRSA XT Unitized Reagent Strip Unitized Reagent Strip indeholder alle reagenser i væskeform og engangspipettespidser, som er nødvendige for præparatbearbejdning og DNA-ekstraktion. BD MAX MRSA XT Extraction Tube (B8) Tørret ekstraktionsreagens, der indeholder DNA-magnetiske affinitetsperler, achrompeptidase og prøvebearbejdningskontrol. BD MAX MRSA XT Sample Buffer Tube (med 25 membranhætter) NØDVENDIGT UDSTYR OG MATERIALER, DER IKKE ER VEDLAGT BD BBL CultureSwab Liquid Stuart enkelt eller dobbelt podepind (BD-katalognummer 220099 eller 220109), Copan (Venturi) Transystem* Liquid Stuart enkelt eller dobbelt podepind (Copan, katalognummer 141C eller 139C) VWR Multi-Tube Vortexer (VWR-katalognummer 58816-115) NALGENE Cryogenic Vial Holder (VWR, katalognummer 66008-783) Engangshandsker, pudderfri Steril saks (valgfri) Steril gaze Stopur eller timer BD MAX PCR Cartridges (BD-katalognummer 437519) ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER BD MAX MRSA XT er beregnet til in vitro-diagnostik. Dette produkt kan kun bruges i BD MAX-systemet. Anvend ikke reagenser og/eller materialer, der er for gamle. Sættet må ikke bruges, hvis mærkaten, der forsegler den ydre emballage, er brudt ved modtagelse. Reagenser må ikke bruges, hvis de beskyttende poser er åbne eller defekte ved modtagelse. Anvend ikke reagenser, hvis tørremidlet ikke er til stede eller er brudt inden i reagensposerne. 2 24 test 24 test 24 test 24 test

Fjern ikke tørremidlet fra reagensposerne. De beskyttende poser med reagenser skal straks lukkes til med lynlåsen efter hver brug. Fjern eventuel overskydende luft i poserne, inden de lukkes. Beskyt reagenser mod varme og fugt. Længere tids eksponering over for fugt vil påvirke produktets ydelse. Reagenserne må ikke anvendes, hvis folien er blevet brudt eller beskadiget. Bland ikke reagenser fra forskellige poser og/eller sæt og/eller lotnumre. Hætter fra de forskellige reagenser må ikke ombyttes eller genbruges, da dette kan medføre kontaminering og kompromittere testresultaterne. Kontrollér Unitized Reagent Strips for korrekt væskefyldning (sørg for, at væsken befinder sig i bunden af rørene) (se figur 1). Kontrollér Unitized Reagent Strips for at sikre, at alle pipettespidser er til stede (se figur 1). Udvis forsigtighed, når der anvendes kemiske opløsninger, da læsbarheden for stregkoder på Master Mix- og ekstraktionsrør kan ændres. God laboratorieteknik er altafgørende for korrekt ydeevne for denne analyse. På grund af denne tests høje analytiske sensitivitet skal der udvises meget stor forsigtighed for at opretholde renheden for alle materialer og reagenser. Hvis der udføres andre PCR-test i det samme laboratorieområde, skal der udvises forsigtighed for at sikre, at denne BD MAX MRSA XT, de nødvendige reagenser til testning og BD MAX-systemet ikke kontamineres. Undgå altid mikrobiologisk kontaminering og deoxyribonucleasekontaminering (DNase) af reagenser. Der skal skiftes handsker, inden der håndteres reagenser og kassetter. For at undgå kontaminering af miljøet med amplikoner må BD MAX PCR-kassetter ikke adskilles efter brug. Forseglingerne af BD MAX PCR-patroner er udviklet for at forhindre kontaminering. Laboratoriet skal rutinemæssigt udføre miljømæssig overvågning med henblik på at minimere risikoen for krydskontaminering. BD MAX Microfluidic-kassetterne kan bruges i op til to kørsler. Udførelse af BD MAX MRSA XT uden for de anbefalede tidsrammer kan resultere i ugyldige resultater. Analyser, som ikke udføres inden for de specificerede tidsrammer, bør gentages. Yderligere kontroller kan testes i henhold til retningslinjer eller regler fra lokale eller offentlige myndigheder eller akkrediteringsorganisationer. Alle præparater skal altid håndteres som værende smittefarlige og i henhold til sikre laboratorieprocedurer, som f.eks. dem, der er beskrevet i CLSI Document M29 6 og i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. 7 Benyt egnet beskyttelsestøj og engangshandsker ved håndtering af alle former for reagenser. Vask hænderne grundigt efter udførelse af testen. Udfør ikke pipettering med munden. Der må ikke ryges, drikkes, tygges eller spises inden for områder, hvor der behandles prøver eller analysekitreagenser. Bortskaf ubrugte reagenser og affald i overensstemmelse med lokale og/eller nationale regler. Se brugervejledningen til BD MAX-systemet 10 for yderligere advarsler, forholdsregler og procedurer. OPBEVARING OG STABILITET Indsamlede prøver skal opbevares ved en temperatur på mellem 2 C og 25 C under transport. Skal beskyttes mod frost eller for kraftig varme. Prøverne kan opbevares ved 25 ±2 C i maksimalt 48 timer eller ved 2 8 C i maksimalt 120 timer (5 dage) inden testning. BD MAX MRSA XT-analysereagenser og -komponenter er stabile ved 2 25 C inden den angivne udløbsdato. Anvend ikke komponenter, der er for gamle. BD MAX MRSA XT Master Mix- og -ekstraktionsrør leveres i forseglede poser. Produktet skal forsegles igen umiddelbart efter åbning for at beskytte det mod fugt. Reagensrør er stabile i op til 14 dage ved 2 25 C efter første åbning og genforsegling af posen. Ikke-rekonstituerede ekstraktions- og Master Mix-reagensrør er stabile i op til 5 timer ved 2 25 C efter fjernelse fra beskyttelsesposen. BRUGSANVISNING Præparatindsamling/-transport Brug en anbefalet podepind med transportanordning (se afsnittet Nødvendigt udstyr og materialer, der ikke er vedlagt) til at indsamle næsepræparater i henhold til instituttets og laboratoriets standardprocedurer og/eller følgende: 1. Fugt podepinden(e) med to dråber (ca. 50 µl) sterilt fysiologisk saltvand, eller brug den tør. 2. Før podepinden(e) forsigtigt ind i patientens næsebor (spidsen af podepinden skal indføres op til 2,5 cm fra næseborskanten). 3. Rul podepinden(e) 5 gange langs slimhinden inden i næseboret. 4. Før de(n) samme podepind(e) ind i det andet næsebor, og gentag trin 2 og 3. 5. Anbring podepinden(e) i transportrøret. 6. Sæt en mærkat på transportrøret. 7. Transportér podepinden(e) til laboratoriet i henhold til instituttets og laboratoriets standardprocedurer (se afsnittet Opbevaring og stabilitet). 3

Klargøring af præparater BEMÆRK: Der kræves ét (1) prøvebufferrør, én (1) membranhætte, ét (1) Master Mix- (C7), ét (1) ekstraktionsrør (B8) og én (1) Unitized Reagent Strip til hver prøve og hver ekstern kontrol, der skal testes. BEMÆRK: Ved dyrkning af kliniske prøver inden udførelse af en BD MAX MRSA XT-analyse henvises der til afsnittet Dyrkning af kliniske prøver. 1. Indsaml det antal prøvebufferrør (klar hætte), der svarer til antallet af prøver og eksterne kontroller, der skal køres. 2. Mærk hvert prøvebufferrør med den relevante patientidentifikation, og sørg for, at stregkoderne ikke skjules, overskrives eller mærkes. 3. Tag hætten af prøvebufferrøret. 4. Fjern podepinden fra prøvetransportrøret, og anbring podepinden i det tilsvarende prøvebufferrør. 5. Hold fast i podepinden tæt ved prøvebufferrørets kant (brug steril gaze til at mindske risikoen for kontaminering). Løft podepinden ca. én (1) cm fra bunden af prøvebufferrøret, og bøj strimlen mod rørets kant for at knække den. Alternativ metode: Brug en steril saks til at klippe strimlen over. 6. Luk prøvebufferrøret med en membranhætte. 7. Anbring prøvebufferrøret i en NALGENE Cryogenic Vial Holder, og vortexbland ved maksimal hastighed i ét (1) minut med Multi-Tube Vortexer. Der kan bearbejdes op til 24 prøve på én gang med Multi-Tube Vortexer. Betjening af BD MAX-systemet BEMÆRK: Der henvises til brugermanualen til BD MAX-systemet for detaljeret vejledning (se afsnittet Betjening). BEMÆRK: Test af BD MAX MRSA XT-analysen skal udføres umiddelbart efter vortexblanding ovenfor (se Klargøring af præparater, trin 7). Hvis det er nødvendigt at udføre testen igen, skal prøven(-erne) vortexblandes igen. 1. Tænd BD MAX-systemet (hvis det ikke allerede er sket), og log på ved at angive <user name> (<brugernavn>) og <password> (<adgangskode>). 2. Der skal skiftes handsker, inden der håndteres reagenser og kassetter. 3. Fjern det påkrævede antal Unitized Reagent Strips fra BD MAX MRSA XT-kittet. Bank forsigtigt hver Unitized Reagent Strip på en hård overflade for at sikre, at al væske befinder sig i bunden af rørene. 4. Fjern det nødvendige antal ekstraktionsrør og Master Mix-rør fra beskyttelsesposerne. Fjern eventuel overskydende luft, og luk poserne vha. lynlåsen. 5. For hvert præparat, der skal testes, skal der placeres én (1) Unitized Reagent Strip på BD MAX-systemstativet. Start med position 1 på stativ A, og fortsæt fortløbende. 6. Klik ét (1) ekstraktionsrør (hvid folie) i hver Unitized Reagent Strip i position 1, som det er vist på figur 1. 7. Klik ét (1) Master Mix-rør (grøn folie) i hver Unitized Reagent Strip i position 2, som det er vist på figur 1. Klik på-rør Affaldsbeholder Pipettespidser #1 #2 #3 Lysisrør Ekstraktionsrør MRSA XT Master Mix Elueringsbuffer Vaskebuffer Neutraliseringsbuffer Figur 1: Klik BD MAX MRSA XT-ekstraktionsrør og Master Mix-rør ind i Unitized Reagent Strips. 8. Klik på kørselsikonet, og indtast kittets lotnummer for BD MAX MRSA XT-analysen (så partiet kan spores) ved enten at scanne stregkoden med scanneren eller indtaste det manuelt. BEMÆRK: Gentag trin 8 for hver gang, der anvendes et nyt kitlotnummer. 9. Gå til Worklist (Arbejdsliste). Brug rullemenuen til at vælge <BD MAX MRSA XT 54>. 10. Angiv id for prøvebufferrøret, patient-id og accessionsnummer (hvis relevant) på arbejdslisten ved enten at scanne stregkoden med scanneren eller ved at indtaste oplysningerne manuelt. 11. Vælg det relevante kit-lotnummer (findes på den ydre emballage) på rullemenuen. 12. Gentag trin 9 til 11 for alle resterende prøvebufferrør. 13. Anbring prøvebufferrøret i BD MAX-systemstativ(er) svarende til de Unitized Reagent Strips, der blev samlet i trin 5 til 7. BEMÆRK: Anbring prøvebufferrørene i prøvestativ(er) med 1D-stregkodeetiketterne udad (det gør det lettere at scanne prøvebufferrørene, når prøverne logges på). 4

14. Anbring det påkrævede antal BD MAX PCR-kassette(r) i BD MAX-systemet (se figur 2). Hver kassette passer til 2 kørsler med op til 12 prøver for i alt 24 prøver. BD MAX-systemet vælger automatisk positionen og rækken på PCR-kassetten for hver kørsel. BD MAX PCR-kassetter kan bruges flere gange, indtil alle baner er anvendt. For at maksimere brugen af BD MAX PCR-kassetter med 2.000 Sample Mode skal du vælge Run Wizard (Kørselsguide) under fanen Worklist (Arbejdsliste) for banetildelinger. Se brugervejledningen til BD MAX-systemet for at få flere oplysninger. Figur 2: Isæt BD MAX PCR-kassetter. 15. Sæt stativ(er) i BD MAX-systemet (se figur 3). Side A Side B Figur 3: Sæt stativ(er) i BD MAX-systemet. 16. Luk låget på BD MAX-systemet, og klik på <Start> for at starte bearbejdningen. 17. Når kørslen er færdig, skal resultaterne kontrolleres med det samme, eller prøvebufferrørene skal opbevares ved 2 8 C i op til 5 dage ELLER ved 25 ±2 C i maksimalt 48 timer, indtil resultaterne er kontrolleret. BEMÆRK: Hvis en membranhætte blev beskadiget under kørslen, skal den udskiftes med en ny, inden prøven stilles til opbevaring. BEMÆRK: Forberedte BD MAX MRSA XT-prøvebufferrør kan opbevares ved 2 8 C i maksimalt 120 timer (5 dage) ELLER ved 25 ±2 C i maksimalt 36 timer, efter at prøven er føjet til prøvebufferrøret. Når der opnås inkonklusive (IND), uafklarede (UNR) eller ufuldstændige (INC) resultater, eller når der opstår en ekstern kontrolfejl, skal der inden for denne tidsramme udføres en gentagen test fra det klargjorte prøvebufferrør (se afsnittet Gentagen testprocedure). KVALITETSKONTROL Kvalitetskontrolprocedurer overvåger udførelsen af analysen. Laboratorierne skal etablere antallet, typen og hyppigheden for testning af kontrolmaterialer i henhold til retningslinjerne eller kravene i de nationale, statslige eller lokale regler eller akkrediterede organisationer. For at finde en generel vejledning om kvalitetskontrol kan brugeren vælge at se CLSI MM3 og EP12. 8,9 1. Eksterne kontrolmaterialer leveres ikke af BD. Eksterne positive og negative kontroller anvendes ikke af BD MAX-systemsoftwaren med henblik på tolkning af prøvetestresultater. Eksterne kontroller behandles på samme måde som patientprøver. (Se tabellen i afsnittet Tolkning af resultater for at få oplysninger om tolkning af resultater for eksterne kontrolanalyser). 2. Én (1) ekstern positiv kontrol og én (1) ekstern negativ kontrol skal mindst køres dagligt, indtil der er opnået tilstrækkelig procesvalidering på BD MAX-systemet i hvert laboratoriemiljø. Nedsat hyppighed for kontroltestning skal ske i henhold til gældende lovgivning. 5

3. Den eksterne positive kontrol er beregnet til overvågning med henblik på alvorlige reagensfejl. Den eksterne negative kontrol er beregnet til påvisning af kontaminering af reagenser eller miljø (eller carry-over) fra målnukleinsyrer. 4. Kontrolstammer kan testes i hht. retningslinjer eller krav fra lokale eller offentlige myndigheder eller akkrediteringsorganisationer for at overvåge effektiviteten for hele den analytiske proces. 5. Diverse typer eksterne kontroller anbefales, for at brugeren kan vælge den mest relevante til vedkommendes kvalitetskontrolprogram for laboratoriet. a. Ekstern negativ kontrol: Kommercielt tilgængelige kontrolmaterialer (f.eks. en Staphylococcus epidermidis-stamme (ATCC 12228)) eller en tidligere karakteriseret prøve, som er påvist at være negativ. BD anbefaler, at den eksterne negative kontrol klargøres inden den eksterne positive kontrol for at reducere potentiel kontaminering pga. kontrolklargøring. b. Ekstern positiv kontrol: Kommercielt tilgængelige kontrolmaterialer (f.eks. MRSA-referencestamme (ATCC 43300)) eller en tidligere karakteriseret prøve, som er påvist at være positiv. I forbindelse med klargøring af eksterne kontrolsuspensioner anbefales det, skal isolater resuspenderes i en saltvandsopløsning til en klarhed på 0,5 McFarland (~1 x 10 8 CFU/mL). Udfør serielle fortyndinger med saltvand for at få en endelig suspension på ~1,0 X 10 4 CFU/mL. Dyp en podepind i den fortyndede bakteriesuspension, tryk overskydende væske af, og placer podepinden i det tilsvarende prøvebufferrør. Bearbejd og test som en prøve (se afsnittene Klargøring af prøver og Betjening af BD MAX-systemet). 6. Alle eksterne kontroller skal give de forventede resultater (positiv for ekstern positiv kontrol, negativ for ekstern negativ kontrol) og ingen mislykkede eksterne kontroller (uafklarede eller inkonklusive resultater). 7. En ekstern negativ kontrol, som viser et positivt testresultat, viser, at der er et problem med prøvehåndtering og/eller kontaminering. Gennemgå præparathåndteringsteknikken for at undgå sammenblanding og/eller kontaminering. En ekstern positiv kontrol, som viser et negativt testresultat, viser, at der er et problem med præparathåndtering/-klargøring. Gennemgå præparathåndterings-/klargøringsteknikken. 8. En ekstern negativ kontrol, som viser inkonklusive, uafklarede eller ufuldstændige testresultater, indikerer en fejl i reagenset eller BD MAX systemet. Kontrollér BD MAX-systemets skærm for eventuelle fejlmeddelelser. Der henvises afsnittet Oversigt over systemfejl i brugervejledningen til BD MAX-systemet 10 for tolkning af advarsels- og fejlkoder. Hvis problemet fortsætter, skal der anvendes reagenser fra en uåbnet pose eller et nyt analysekit. 9. Hvert ekstraktionsrør indeholder en prøvebearbejdningskontrol, som er et plasmid, der indeholder en syntetisk mål-dna-sekvens. Prøvebearbejdningskontrollen overvåger effektiviteten for DNA-opsamling, -vask og -eluering under prøvebearbejdningstrinnene samt effektiviteten for DNA-amplifikation og -påvisning under PCR-analyse. Hvis resultatet for prøvebearbejdningskontrollen ikke opfylder godkendelseskriterierne, rapporteres resultatet for præparatet som uafklaret. Eventuelle positive (POS) analyseresultater rapporteres dog, og ingen mål kaldes NEG. Et uafklaret resultat viser, at der er en prøverelateret hæmning eller reagensfejl. Gentag alle præparater, der rapporteres som uafklarede, i henhold til afsnittet Gentagen testprocedure. TOLKNING AF RESULTATER Resultaterne findes på fanen Results (Resultater) i vinduet Results (Resultater) på BD MAX-systemets skærm. BD MAX-systemsoftwaren tolker automatisk testresultaterne. Et testresultat kan angives som MRSA NEG (negativt), MRSA POS (positivt) eller MRSA UNR (uafklaret) på baggrund af amplifikationsstatussen for målet og for prøvebearbejdningskontrollen. Resultaterne IND (inkonklusiv) eller INC (ufuldstændig) skyldes en fejl i BD MAX-systemet. Resultaterne er baseret på følgende bestemmelsesalgoritme: Rapporteret analyseresultat MRSA POS MRSA NEG MRSA UNR IND INC Tabel 1: Tolkning af resultater for BD MAX MRSA XT Tolkning af resultat MRSA DNA påvist MRSA DNA ikke påvist Uafklaret hæmmende præparat eller reagensfejl ingen amplifikation af mål eller prøvebearbejdningskontrol Inkonklusivt resultat, som skyldes en fejl i BD MAX-systemet (med advarsels- og fejlkoder a ) Ufuldstændig kørsel (med advarsels- og fejlkoder a ) a Der henvises til afsnittet Fejlfinding i brugervejledningen til BD MAX-systemet 10 vedrørende tolkning af advarsler og fejlkoder. MRSA POS (MRSA DNA påvist) Fluorescenssignal er påvist for både MREJ (Staphylococcus aureus-specifik) og meca- eller mecc-mål, og Prøvebearbejdningskontrollen ignoreres, da MRSA-målamplifikation tilsidesætter denne kontrol. MRSA NEG (MRSA DNA ikke påvist) Fluorescenssignal er ikke påvist af BD MAX MRSA XT-analysen for noget mål (meca-, mecc- og MREJ-mål), og fluorescenssignal er påvist for prøvebearbejdningskontrollen, eller Fluorescenssignal er kun påvist for meca- eller mecc-genet (meca- og mecc -generne er ikke unikke for Staphylococcus aureus-arter og kan findes i andre bakterieslægter (f.eks. S. epidermidis)) eller Fluorescenssignal er udelukkende detekteret for MREJ (bortfald af meca- eller mecc). MRSA UNR (Uafklaret resultat) Fluorescenssignal er ikke påvist for meca-, mecc- eller MREJ-mål, og Fluorescenssignal er ikke påvist for prøvebearbejdningskontrol (hæmmende prøve eller reagensfejl). 6

IND (Inkonklusivt resultat) BD MAX-systemfejl med advarsels- eller fejlkoder. Der henvises afsnittet Fejlfinding i brugervejledningen til BD MAX-systemet 10 for tolkning af advarsels- og fejlkoder. INC (Ufuldstændig kørsel) BD MAX-systemfejl med advarsels- eller fejlkoder. Der henvises afsnittet Fejlfinding i brugervejledningen til BD MAX-systemet 10 for tolkning af advarsels- og fejlkoder. GENTAGEN TESTPROCEDURE BEMÆRK: Mængden er tilstrækkelig til at udføre én gentagen test med prøvebufferrøret. For prøvebufferrør opbevaret ved 25 ±2 C skal testen gentages inden for 36 timer efter trinnet omtalt i afsnittet Klargøring af præparater herover. For prøvebufferrør, der opbevares ved 2 8 C, skal den gentagne test udføres inden for 120 timer (5 dage) efter de trin, der er beskrevet i afsnittet Klargøring af præparater ovenfor. BEMÆRK: Nye prøver kan testes i samme kørsel som gentagne prøver. Uafklaret resultat Uafklarede resultater kan opnås i tilfælde af, at et hæmmende stof eller en reagensfejl forhindrer korrekt amplifikation af mål eller prøvebearbejdningskontrol. En prøve(r) kan gentages fra deres tilsvarende prøvebufferrør inden for tidsrammerne, der er defineret ovenfor. Vortexbland de(n) relevante prøve(r) i ét (1) minut, og start forfra fra afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Inkonklusivt resultat Inkonklusive resultater kan forekomme, hvis der opstår en systemfejl. En prøve(r) kan gentages fra deres tilsvarende prøvebufferrør inden for tidsrammerne, der er defineret ovenfor. Vortexbland de(n) relevante prøve(r) i ét (1) minut, og start forfra fra afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Se brugervejledningen til BD MAX 10 vedrørende tolkning af advarsler eller fejlkoder (afsnittet Fejlfinding). Ufuldstændigt resultat Ufuldstændige resultater kan opstå, hvis der opstår en afsluttende advarsel eller fejlkode, eller hvis klargøringen af præparatet eller PCR nåede de forventede tidspunkter. De ufuldstændige resultater kan gælde for en kørsel eller en bane. En prøve(r) kan gentages fra deres tilsvarende prøvebufferrør inden for tidsrammerne, der er defineret ovenfor. Vortexbland de(n) relevante prøve(r) i ét (1) minut, og start forfra fra afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Der henvises til brugervejledningen til BD MAX-systemet 10 (afsnittet Fejlfinding ) for tolkning af meddelelser for advarsels- og fejlkoder. Ekstern kontrolfejl Eksterne kontroller skal resultere i de forventede resultater, når de testes. Hvis prøverne skal gentages pga. et forkert eksternt kontrolresultat, skal de gentages fra deres prøvebufferrør sammen med de friskt klargjorte eksterne kontroller inden for de tidsrammer, der er angivet ovenfor. Vortexbland prøven(-erne) i ét (1) minut, og genstart ved at følge vejledningen i afsnittet Betjening af BD MAX -systemet. DYRKNING AF KLINISKE PRØVER For at udføre antimikrobiel følsomhedsbestemmelse eller epidemiologisk typebestemmelse kan kliniske prøver dyrkes fra prøvetagningsanordningen (podepind), inden præparatklargøringsproceduren udføres (vha. en udstrygningsmetode), eller efter at præparatklargøringsproceduren er udført (vha. en berigelsesbouillonmetode). Podepinde kan opbevares umiddelbart efter afslutningen af den første PCR-kørsel ved 2 8 C i op til 36 timer i prøvebufferrørene inden dyrkning ved at følge hospitalets procedurer. PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Dette produkt er beregnet til brug ved analyse af nasale podningspræparater udtaget vha. de prøvetagnings- og transportanordninger, der er beskrevet i afsnittet Nødvendigt udstyr og materialer, der ikke er vedlagt. Udførelse af BD MAX MRSA XT-analyse ved hjælp af flydende Amies med enkelt eller dobbelt podepind er ikke klarlagt. Dette produkt må kun bruges sammen med BD MAX-systemet. Der kan dannes forkerte testresultater som følge af ukorrekt præparattagningsmetode, håndtering eller opbevaring, tekniske fejl, sammenblanding af præparater, eller fordi antallet af organismer i præparatet ligger under testens analytiske følsomhedsniveau. Det er nødvendigt omhyggeligt at overholde anvisningerne i indlægssedlen og i brugervejledningen 10 til BD MAX-systemet for at undgå fejlagtige resultater. Screening bestemmer kolonisationens status på et givent tidspunkt. Kolonisering kan variere afhængigt af patientens behandling (f.eks. dekolonisationsregime), patientens tilstand (f.eks. forbigående MRSA-kolonisering) eller eksponering for højrisikomiljøer (f.eks. kontakt med MRSA-bærere og/eller langvarigt hospitalsophold). Koloniseringsstatus skal overvåges i henhold til institutionens retningslinjer. Et positivt BD MAX MRSA XT-resultat er ikke nødvendigvis tegn på fejlbehæftet udryddelsesbehandling, da tilstedeværelsen af DNA kan være vedvarende. Et negativt resultat efter et tidligere positivt testresultat kan være tegn på vellykket udryddelsesbehandling eller kan opstå som følge af intermitterende kolonisering. Et positivt testresultat er ikke nødvendigvis ensbetydende med forekomsten af levedygtige organismer. Et positivt resultat viser, at MRSA DNA er til stede. BD MAX MRSA XT-analysen påviser samtidig meca- eller mecc-genet, der bæres i SCCmec-kassetten og en Staphylococcus aureus-specifik sekvens ved forbindelsesstedet mellem SCCmec-kassetten og orfx-genet (MREJ). BD MAX MRSA XT-analysen er beregnet til at påvise MREJ-genotyperne i, ii, iii, iv, v, vi, vii, ix, xiii, xiv og xxi, som repræsenterer størstedelen af meca- og mecc, som besidder MRSA-stammer (der tilhører forskellige SCCmec-/MREJ-typer), hvilket svarer til mere end 98 % af de stammer, som BD til dato har testet på verdensplan. Evnen for BD MAX MRSA XT-analysen til at detektere andre MREJ-genotyper er ukendt. 7

BD MAX MRSA XT-analysen rapporterer ikke borderline oxacillinresistent Staphylococcus aureus (BORSA) som MRSA (den vil rapportere som NEG). Mekanismen for oxacillinresistens i BORSA-stammerskyldes en øget produktion af β-lactamaser, ikke meca- eller mecc-genet. BORSA-stammer er sjældne. Effektiviteten af BD MAX MRSA XT-analysen, når det gælder om at påvise modificeret Staphylococcus aureus (MOD-SA), kendes ikke, da disse stammer ikke er evalueret. Mekanismen for oxacillinresistens i MOD-SA-stammer skyldes ændringer i affiniteten for penicillinbindende proteiner for oxacillin. MOD-SA stammer er sjældne. BD MAX MRSA XT-analysen vil generere falske positive MRSA-resultater ved test af et co-koloniseret nasalt præparat, der inholder både et methicillinresistant coagulase-negativt Staphylococcus (MRCoNS) og en tom kassette med methicillinfølsom SA-variant. Co-kolonisering med MRCoNS og en tom kassette med methicillinfølsom SA er sjældent. Som med alle PCR-baserede in vitro-diagnostiske test kan ekstremt lave målniveauer under LoD for analysen påvises, men resultaterne er muligvis ikke reproducerbare. Tobramycin kan påvirke BD MAX MRSA XT-analysen (se afsnittet Interfererende stoffer for at få yderligere oplysninger). Falsk negative resultater kan opstå pga. tab af nukleinsyre fra utilstrækkelig indsamling, transport eller opbevaring af præparaterne, eller de kan skyldes utilstrækkelig bakteriecellelysering. Prøvebearbejdningskontrollen er føjet til testen for at bidrage til identifikationen af præparater, som indeholder hæmmere af PCR-amplifikation og som en kontrol af reagensintegritet samt af analysesystemet som helhed. Prøvebearbejdningskontrollen viser ikke, om der er opstået tab af nukleinsyre pga. utilstrækkelig indsamling, transport eller opbevaring af prøverne, eller om bakterieceller er tilstrækkeligt lyseret. I en blandet dyrkning er påvisningen af MRSA variabel, når der forekommer meget høje koncentrationer af MRSE. Konkurrence fra MRSE blev observeret ved et MRSA:MRSE-forhold på 1: 1 X 10 2. I en blandet dyrkning er påvisningen af MRSA variable, når der forekommer meget høje koncentrationer af MSSA. Konkurrence fra MSSA blev observeret ved et MRSA:MSSA-forhold på 1: 1 X 10 3. BD MAX MRSA XT-analyseresultater vil undertiden være uafklarede pga. en ugyldig prøvebearbejdningskontrol eller inkonklusive eller ufuldstændige pga. instrumentfejl og derfor kræve gentaget testning, hvilket kan medføre forsinkelser, inden de endelige resultater foreligger. Mutationer eller polymorfismer i primerregioner eller probebindende regioner kan påvirke påvisning af nye eller ukendte MRSA'er og medføre et falsk negativt resultat med BD MAX MRSA XT-analysen. Som med alle in vitro-diagnostiske tests er positive og negative værdier stærkt afhængige af prævalens. Effektiviteten af BD MAX MRSA XT-analysen kan variere afhængigt af den testede prævalens og population. BD MAX MRSA XT-analysen kræver brug af tre (3) optiske kanaler fra BD MAX-systemet: 475/520-kanalen, 585/630-kanalen og 680/715-kanalen. Effektiviteten af den sidste optiske kanal er ikke undersøgt i forbindelse med denne analyse. FORVENTEDE VÆRDIER I den kliniske undersøgelse med BD MAX MRSA XT-analysen blev der opnået i alt 2.391 rapporterbare resultater fra prøver, der var i overensstemmelse med præparat- og PCR-niveauerne, fra 3 geografisk forskellige forsøgscentre, og de blev sammenlignet med direkte og beriget dyrkning. Studiepopulationen blev grupperet i indlagte og ikke-indlagte patientkategorier. Antallet og procentdelen af positive tilfælde bestemt ved hjælp af BD MAX MRSA XT-analysen fremgår af tabellen nedenfor i tabel 2. Tabel 2: Opsummering af overensstemmende inklusion i klinisk undersøgelse efter patientgruppe Gruppe Antal præparater i alt a Antal MRSA-positive Procent MRSA-positive Hospitalsindlagte patienter Ambulante patienter 1.681 172 10,2 % (172/1.681) 710 28 3,9 % (28/710) I alt a 2.391 200 8,4 % (200/2.391) a Samlet antal prøver baseret på overensstemmende PCR-resultater. FUNKTIONSDATA Klinisk funktion De kliniske funktionsdata for BD MAX MRSA XT-analysen blev fastlagt i en prospektiv multi-center forskningsundersøgelse. Tre (3) forsøgscentre deltog i undersøgelsen. For at blive inkluderet i undersøgelsen skulle patienterne være egnede til MRSA-testning i henhold til institutionens retningslinjer. Kravene til egnethed for screening i henhold til forsøgscentrets politikker omfattede, men var ikke begrænset til: patienter, der er indlagt i det pågældende sundhedssystem; patienter, der er indlagt på intensivafdeling; patienter, der er overført til intensivafdeling; patienter til præ-elektiv kirurgi og patienter, der indlægges fra plejeinstitutioner. Præparater fra patienter, der tidligere har været inkluderet i undersøgelsen, blev ekskluderet. Den komparative referencemetode bestod af direkte dyrkning suppleret med beriget dyrkning. Beriget dyrkningsanalyse blev udført for alle prøver, som var negative for MRSA ved direkte dyrkning. Formodet Staphylococcus aureus-kolonier observeret på selektivt (Staphylococcus aureus) kromogent medium blev videredyrket på blodagar (BA). Identifikation blev bekræftet med agglutinationstest, mens methicillin-resistens blev bekræftet med Cefoxitindiskdiffusionstest (30 μg). Berigelse i Trypticasesojabouillon med 6,5 % NaCl (TSB 6,5 % NaCl) blev udført, hvis MRSA ikke blev bekræftet af den første direkte dyrkningsmetode. Uklar TSB 6,5 % NaCl-bouillon blev brugt til inokulering af yderligere kromogent medium og BA-plader. MRSA-bekræftelse blev udført, som det er beskrevet ovenfor. Resultater opnået med BD MAX MRSA XT-analysen sammenlignet med referencemetoden I alt 2.451 præparater indgik i undersøgelsen. Af disse blev 94 præparater betragtet som ikke-overensstemmende i henhold til protokolkriterierne, og seks (6) fuldt overensstemmende præparater gav endelige, ikke-rapporterbare PCR-resultater. I alt 2.351 præparatresultater blev anvendt til at bestemme den kliniske effektivitet af BD MAX MRSA XT-analysen sammenlignet med referencemetoden (tabel 3). 8

Sammenlignet med referencemetoden (direkte/beriget dyrkning) identificerede BD MAX MRSA XT-analysen 93,1 % af de MRSApositive præparater og 97,8 % af de MRSA-negative præparater (tabel 4). Resultatet af dette for den testede population var en negativ prædikativ værdi (NPV) på 99,5 % og en positiv prædikativ værdi (PPV) på 75,4 %. Tabel 3: Resultater opnået for MRSA med BD MAX MRSA XT-analysen sammenlignet med referencemetoden Alle steder BD MAX MRSA XTanalyse Referencemetode MRSA Positiv Negativ I alt Positiv 149 48 a 197 Negativ 11 a 2.143 2.154 I alt 160 2.191 2.351 Sensitivitet: 93,1 % (149/160) (95 % CI: 88,1 %, 96,1 %) Specificitet: 97,8 % (2.143/2.191) (95 % CI: 97,1 %, 98,3 %) PPV: 75,4 % (95 % CI: 70,0 %, 80,5 %) NPV: 99,5 % (95 % CI: 99,1 %, 99,7 %) a Prøver med uoverensstemmende resultater mellem referencemetoden og BD MAX MRSA XT-analysen blev undersøgt yderligere. 11 af 48 falsk positive BD MAX MRSA XT-præparater blev ligeledes fundet at være MRSA POS efter gentagelse af referencemetoden. 5 af 11 falsk negative BD MAX MRSA XT-præparater blev ligeledes fundet at være MRSA NEG efter gentagelse af referencemetoden. Tabel 4: Ydeevne fra sted til sted opnået for MRSA med BD MAX MRSA XT-analysen sammenlignet med referencemetoden Kliniske steder Prævalens a Sensitivitet (95 % CI) b Specificitet (95 % CI) b Sted 1 4,3 % (41/960) Sted 2 5,8 % (38/650) Sted 3 10,6 % (81/765) Samlet 6,7 % (160/2.375 c ) a Prævalens udelukkende baseret på referencemetoden b Konfidensinterval c 2375 præparater stemte overens med referencemetoden 92,7 % (38/41) (80,6 %, 97,5 %) 86,8 % (33/38) (72,7 %, 94,2 %) 96,3 % (78/81) (89,7 %, 98,7 %) 93,1 % (149/160) (88,1 %, 96,1 %) 99,0 % (908/917) (98,1 %, 99,5 %) 98,6 % (583/591) (97,4 %, 99,3 %) 95,5 % (652/683) (93,6 %, 96,8 %) 97,8 % (2.143/2.193) (97,1 %, 98,3 %) Resultater opnået med BD MAX MRSA XT-analysen sammenlignet med direkte dyrkning I alt 2.451 præparater indgik i undersøgelsen. Af disse blev 54 nasale podningspræparater fundet uoverensstemmende i henhold til protokolkriterierne, og otte (8) fuldt overensstemmende præparater gav endelige ikke-rapporterbare PCR-resultater. I alt 2.389 præparatresultater blev anvendt til at bestemme den positive og negative procentvise overensstemmelse for BD MAX MRSA XT-analysen sammenlignet med direkte dyrkning (tabel 5). Sammenlignet med direkte dyrkning identificerede BD MAX MRSA XT-analysen 96,5 % af de MRSA-positive præparater og 97,2 % af de MRSA-negative præparater (tabel 6). Tabel 5: Resultater opnået for MRSA med BD MAX MRSA XT-analysen sammenlignet med direkte dyrkning Alle steder Direkte dyrkning Positiv Negativ I alt Positiv 137 63 200 BD MAX MRSA XT-analyse Negativ 5 2.184 2.189 I alt 142 2.247 2.389 Positiv procentvis overensstemmelse: 96,5 % (137/142) (95 % CI: 92,0 %, 98,5 %) Negativ procentvis overensstemmelse: 97,2 % (2.184/2.247) (95 % CI: 96,4 %, 97,8 %) Tabel 6: Ydeevne opnået fra sted til sted for MRSA med BD MAX MRSA XT-analysen sammenlignet med direkte dyrkning Kliniske steder Sted 1 Sted 2 Sted 3 Samlet a Konfidensinterval Positiv procentvis overensstemmelse med 95 % CI a 100 % (35/35) (90,1 %, 100 %) 93,5 % (29/31) (79,3 %, 98,2 %) 96,1 % (73/76) (89,0 %, 98,6 %) 96,5 % (137/142) (92,0 %, 98,5 %) 9 Negativ procentvis overensstemmelse med 95 % CI a 98,7 % (911/923) (97,7 %, 99,3 %) 98,0 % (586/598) (96,5 %, 98,8 %) 94,6 % (687/726) (92,7 %, 96,0 %) 97,2 % (2.184/2.247) (96,4 %, 97,8 %)

Af 2.399 nasale podningspræparater, som var overensstemmende på prøve- og PCR-niveau, og som blev testet med BD MAX MRSA XT-analysen, blev 18 (0,8 %) rapporteret som værende uafklarede efter den første test. Den uafklarede forekomst efter gentaget testning er 0,1 % (2/2.396) (se tabel 7 (ét præparat blev ikke testet igen)). Tabel 7: Uafklarede forekomster Uafklarede forekomster efter første test 0,8 % (18/2.399) a (95 % CI: 0,5 %, 1,2 %) Uafklarede forekomster efter gentagelse 0,1 % (2/2.396) (95 % CI: 0 %, 0,3 %) a Samlet antal prøver baseret på overensstemmende præparater og BD MAX MRSA XT-analyseresultater Ud Af 2.399 nasale præparater, som blev testet med BD MAX MRSA XT-analysen, blev 14 (0,6 %) efter første test rapporteret som inkonklusive. Ingen resultater forblev inkonklusive efter gentagelse (to prøver blev ikke testet igen). Otte (8) (0,3 %) blev rapporteret som ufuldstændige efter første testning. Ingen resultater forblev ufuldstændige efter gentagelse (en prøve blev ikke testet igen). Tomme kassettevarianter For at et præparat kan identificeres som MRSA-positiv med BD MAX MRSA XT-analysen, skal et positivt resultat tilvejebringes for både MREJ og meca eller mecc. Et præparat, der bærer MREJ, men hverken meca- eller mecc-genet, er MRSA-negativt, da det er methicillinfølsomt. Denne situation opstår, når meca- eller mecc-genet fjernes fra SCCmec-kassetten, men fragmentet i den højre ekstremitet (MREJ) forbliver, hvilket giver et positivt MREJ-resultat. Denne præparattype henvises nogle gange til som tom kassettevariant. Evnen til at detektere meca- og mecc-genet gør det muligt for BD MAX MRSA XT-analysen på korrekt vis at skelne og identificere denne variant som MRSA NEG. Blandt de 2.351 kvalificerede præparater, inkluderet i bestemmelse af klinisk ydeevne, passede i alt 10 på profilen for tom kassette med et positivt MREJ-resultat uden påvisning af meca- eller mecc-gen. Disse 10 prøver blev fundet at være ægte negative (TN) MRSA-prøver i forhold til referencemetoden. Analytisk sensitivitet Den analytiske sensitivitet (påvisningsgrænse eller LoD) af BD MAX MRSA XT-analysen blev fastlagt på følgende måde: Positive prøver blev klargjort med iblødsatte podepinde i en lang række forskellige MRSA-bakterielle suspensioner, der blev klargjort og kvantificeret fra dyrkninger. De testede stammer omfattede 11 MRSA-stammer, der repræsenterede 11 MREJ-genotyper (i, ii, iii, iv, v, vi, vii, ix, xiii, xiv og xxi) svarende til 5 SCCmec-typer (I, II, III, IV og XI). Podepindene blev elueret i simuleret nasal matrix. Hver MRSA-stamme blev testet i replikater på 24 pr. koncentration af 2 forskellige operatører vha. 3 forskellige produktionslotnumre af BD MAX MRSA XT-analysen. Den analytiske sensitivitet (LoD), der er defineret som den laveste koncentration, hvor mindst 95 % af alle replikater er testet positive, varierede fra 71 til 454 CFU/podepind (tabel 8) for påvisningen af MRSA-stammer. Tabel 8: Påvisningsgrænsen for MRSA-genotyper for BD MAX MRSA XT-analysen MRSA-stamme MREJ-genotype SCCmec-type a LoD-koncentration (CFU/podepind (95 % Cl b )) 1 Type i I 91 (55, 150) 2 Type ii II 110 (68, 176) 3 Type iii III 181 (102, 322) 4 Type iv III 81 (48, 136) 5 Type v IV 128 (74, 224) 6 Type vi ND c 454 (246, 839) 7 Type vii II 269 (134, 538) 8 Type ix ND c 199 (111, 356) 9 Type xiii ND c 71 (41, 121) 10 Type xiv ND c 96 (57, 163) 11 Type xxi d XI 108 (64, 183) a SCCmec-type korrelerer ikke med MREJ-typen, da disse er to forskellige metoder til typebestemmelse. b Cl: Konfidensintervaller c ND = ikke fastslået d mecc-indeholdende MRSA-stammer (og kendt som meca LGA251 -stamme) Analytisk inklusivitet Der blev foretaget en analytisk inklusivitetsundersøgelse vha. flere forskellige MRSA-stammer, hvor der blev taget hensyn til den geografiske oprindelse, MREJ-genotype (vildtype og mutant), SCCmec-type, PFGE-type (Pulsed-Field Gel Electrophoresis), midlertidig mangfoldighed og følsomhedsmønster. Syvoghalvfjerds (77) MRSA-stammer fra 27 lande blev testet i denne undersøgelse, herunder stammer fra offentlige indsamlinger og fra velkarakteriserede kliniske isolater, herunder vancomycinresistente Staphylococcus aureus (VRSA) og vancomycin-intermediære Staphylococcus aureus-stammer (VISA). BD MAX MRSA XT-analysen påviste alle MREJ-typerne i, ii, iii, iv, v, vi, vii, ix, xiii, xiv og xxi ved test med lav bakteriel belastning (2 3 x LoD). BD MAX MRSA XT-analysen påviste alle MRSA SCCmec-typerne I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII og XI samt MRSA PFGE-typerne USA 100 til 800, 1.000 og 1.100 ved 2 3 x LoD. Alle MRSA-stammer, der viste yderligere resistens over for vancomycin (VRSA og VISA), blev også påvist. 10

Evaluering af veldefineret panel med anfægtede stammer En yderligere analytisk undersøgelse blev udført for at evaluere den analytiske effektivitet af BD MAX MRSA XT-analysen vha. et veldefineret panel med anfægtede stammer. Sytten (17) ud af 17 MRSA-stammer med høje og lave minimalt hæmmende koncentrationer (MIC'er) for oxacillin, herunder PFGE-typerne USA 100 til 800, 1.000, PFGE-typerne IV/IBERIAN og mecc-variant (Staphylococcus aureus-stamme LGA251, der indeholder meca), som blev testet ved en koncentration på 2 3 x LoD, viste MRSA POS-resultater. Fire (4) ud af 4 BORSA-stammer (borderline-resistent Staphylococcus aureus), som blev testet ved 10 6 CFU/podepind, viste MRSA, NEG-resultater. Fem (5) ud af 5 MSSA-stammer, som blev testet ved 10 6 CFU/podepind, viste MRSA NEG-resultater. En (1) ud af 1 methicillin-resistent Staphylococcus epidermidis-stamme (MRSE), som blev testet ved 10 6 CFU/podepind, viste et MRSA NEG-resultat. Analytisk specificitet BD MAX XT-analysen blev udført på prøver med høje niveauer af ikke-målorganismer ved brug af BD MAX-systemet for at demonstrere analysens specificitet med henblik på påvisning af MRSA. Syvoghalvtreds (57) ud af 57 stammer af diverse ikke-stafylokokarter, som blev testet ved en koncentration på mindst 10 6 CFU/mL (bortset fra Cryptococcus neoformans, som blev testet ved 3 x 10 5 CFU/podepind), viste MRSA NEG-resultater. Femogfyrre (45) koagulase-negative stafylokokstammer (CoNS) og koagulase-positive stafylokokstammer (CoPS), som repræsenterer 28 arter, blev testet ved en koncentration på 0,5 McFarland med BD MAX XT-analysen. Femogfyrre (45) ud af 45 stammer, som blev testet, viste MRSA NEG-resultater. Femogtres (65) MSSA-stammer (herunder 15 tomme kassetter af MSSA-stammevarianter), som blev testet ved høje koncentrationer ( 10 6 CFU/podepind), viste MRSA NEG-resultater. Sytten (17) vira, der repræsenterede 12 forskellige virusarter, blev testet ved 10 5 PFU/mL. Alle 17 virusser viste MRSA NEG-resultater. Interfererende stoffer Niogtyve (29) mikroorganismer og kemiske stoffer, der kan anvendes i næseborskanten eller findes i nasale podningspræparater, blev evalueret for potentiel interferens med BD MAX MRSA XT-analysen (tabel 9). MRSA-negative og MRSA-positive prøver ved 2 3 x LoD blev testet med den største mængde af hvert stof eller mikroorganisme, som med stor sandsynlighed findes på prøvestedet eller i nasale podningspræparater. Resultaterne påviste ingen rapporterbar interferens med mikroorganismer eller kemiske substanser, bortset fra Tobramycin, som viste interferens med BD MAX MRSA XT-analysen, når der blev testet ved en koncentration på 4,5 x 10-3 g/podepind. Tabel 9: Endogene og eksogene substanser testet med BD MAX MRSA XT-analysen Stof Resultat a Stof Resultat Mucin fra bovine submaksillære kirtler NI Rhinocort Aqua* NI Dexamethason-natriumphosphatopløsning til øjnene Zicam* No-Drip Liquid Nasal NI USP, 0,1 % dexamethason-phosphatækvivalent Gel* Extreme Congestion Relief NI Chloraseptic* NI Fluticasonpropionat NI Taro-Mupirocin, mupirocin-salve USP, 2 % NI Luffeel* NI Long Lasting Dristan* Nasal Mist NI Staphylococcus epidermidis NI Neo-Synephrine* NI Micrococcus luteus NI Equate* Nasal Spray Decongestant NI Enterococcus faecium NI Beconase AQ* NI Enterococcus faecalis NI Nasal flunisolidopløsning USP, 0,025 % NI Escherichia coli NI Nasacort* AQ NI Corynebacterium flavescens NI Nasonex* NI Moraxella catarrhalis NI Relenza* NI Staphylococcus hominis subsp hominis NI Tobramycin I Haemophilus influenzae NI Blod NI Streptococcus pneumoniae NI Flumist* a NI: Ingen rapporterbar interferens med BD MAX MRSA XT-analysen. I: Rapporterbar interferens med BD MAX MRSA XT-analysen. NI Mikrobiel kompetitiv inhibitorisk virkning Potentiel mikrobiel inhibitorisk virkning blev vurderet med en stigende koncentration af MRSE eller MSSA og spiket sammen med en lav koncentration (1 2 x LoD) af MRSA. Resultater påviste konkurrence fra: MRSE ved et MRSA:MRSE-forhold på 1: 1 X 10 2 MSSA ved et MRSA:MSSA-forhold på 1: 1 X 10 3 11