Bestillingsoplysninger AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 Tests P/N: Specimen Preparation Kit ART: US: 83315

Transkript

1 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeaetest NG TIL IN VITRO-DIAGNOSTIK. Bestillingsoplysninger AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 Tests P/N: Specimen Preparation Kit ART: US: AMPLICOR CT/NG CT/NG AMP 96 Tests P/N: Amplification Kit ART: US: COBAS AMPLICOR NG DK 100 Tests P/N: Neisseria gonorrhoeae ART: Detection Kit US: COBAS AMPLICOR DK 100 Tests P/N: Detection Reagents Kit ART: US: COBAS AMPLICOR WB 500 Tests P/N: Wash Buffer Kit ART: US: Nedenstående kit kan bruges til detektion af chlamydia trachomatis i prøver, der er amplificeret ved hjælp af AMPLICOR CT/NG Amplification Kit. Detektionen af chlamydia trachomatis er valgfrit for brugeren. COBAS AMPLICOR CT DK 100 Tests P/N: Chlamydia trachomatis ART: Detection Kit US: Nedenstående kit kan bruges til detektion af CT/NG-intern kontrol, der er amplificeret ved hjælp af AMPLICOR CT/NG Amplification Kit. Detektion af intern kontrol er valgfrit for brugeren ved test af urinprøver eller podeprøver, der er indsamlet i chlamydia-kulturtransportmedier. Detektion af intern kontrol er påkrævet ved test af podeprøver, der er indsamlet og transporteret ved hjælp af AMPLICOR STD Swab Specimen Collection og Transport Kit. COBAS AMPLICOR IC DK 100 Tests P/N: Internal Control Detection Kit ART: US: Nedenstående kit kan anvendes til indsamling og transport af intracervikale og uretrale podeprøver. AMPLICOR STD STD SWAB 50 Tests P/N: Swab Specimen Collection ART: and Transport Kit US: P/N: /2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 1/36

2 Tilsigtet brug COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae (NG)-testen er en kvalitativ in vitro-diagnosticering til bestemmelse af N. gonorrhoeae-dna i kliniske prøver på COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet. Testen anvender nukleinsyreamplifikationsmetoden PCR (Polymerase Chain Reaction) og nukleinsyrehybridisering til detektion af Neisseria gonorrhoeae i urogenitale prøver. Oversigt over og forklaring af testen Neisseria gonorrhoeae (gonococci) er årsagen til gonoré. N. gonorrhoeae er gram-negative diplokokker, cytochromoxidase-positive, ikke-motile og ikkesporedannende 1-3. N. gonorrhoeae er tæt beslægtet med N. meningitidis (meningococci), årsagen til én type bakteriel meningitis, mindre beslægtet med N. lactamica, et sjældent forekommende humant patogen. N. gonorrhoeae og N. meningitidis smitter kun mennesker. Der findes flere arter af Neisseria, som betragtes som en del af den normale flora hos mennesker, herunder N. cinerea, N. elongata, N. flavescens, N. mucosa, N. sicca og N. subflava 1,2. Blandt Neisseria gonorrhoeae-infektioner er gonoré den tredjemest almindelige seksuelt øverførte sygdomme (STD) med 62,2 millioner årlige gonorétilfælde på verdensplan 4. Hos mænd resulterer sygdommen normalt i anterior urethritis sammen med purulent exsudat. Hos kvinder forekommer sygdommen ofte i cervix, men vagina og uterus kan også være inficeret 2,5. Den præsumptive gonoré-diagnose er baseret på: Observation af gramnegative, intracellulære diplokokker i gram-farvede udstrygninger af udflåd fra urinrøret hos mænd og intracervikal sekretion fra kvinder, N. gonorrhoeaevækst fra urinrøret (mænd) eller endocervix på udvalgte kulturmedier efterfulgt af påvisning af normal dyrkningsmorfologi, positiv oxidaseaktivitet og normal gram-negativ diplokokmorfologi og/eller påvisning af N. gonorrhoeae med ikke-dyrkede laboratorietest. En endelig gonorédiagnose kræver isolation af neisseria gonorrhoeae fra eksponeringsstederne ved dyrkning (48-72 timers dyrkning på udvalgt medium), påvisning af normal dyrkningsmorfologi, positiv oxidasetest, normal gram-negativ morfologi og bekræftelse af N. gonorrhoeae-kulturisolater med specifikke identifikationsmetoder (syreproduktion fra kulhydrater, hurtige enzymtest, serologiske analyser, test for specifikke nukleinsyrer) 1-3,5-7. Dyrkning er påkrævet ved bestemmelse af antimikrobiel modtagelighed. 2/36 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

3 Neisseria gonorrhoeae Principper for proceduren COBAS AMPLICOR NG-testen er baseret på fire hovedprocesser: Prøveforberedelse, PCR-amplifikation 8,9 af target-dna ved hjælp af NG-specifikke komplementære biotinylerede primere, hybridisering af de amplificerede produkter til oligonukleotide prober, der er specifikke for target, samt detektion af de probebundne, amplificerede produkter ved kolorimetrisk bestemmelse. Udviklingen i en PCR-analyse omfatter identifikation af det bestemte område af target-dna, der skal amplificeres, og en syntese af to kort biotinylerede oligonukleotide primere, der er komplementære til de områder, der ligger ved siden af targetsekvensen. De biotinylerede primere bindes til det komplementære tilstødende område, og DNA-polymerasen udvider sekvensen i retningen 5' til 3' ved hjælp af overskydende deoxynukleosid trifosfater (dntp er) i reaktionsblandingen og danner derved en biotinyleret, komplementær DNA-sekvens, der kaldes et amplikon. En oligonukleotid probe, der er specifik for amplikonet, er bundet til en fast støtte (mikropartikler) og bruges til hybridisering (opfangning) af amplikonet. Detektionssystemet i analysen anvender et avidin/horseradish-peroxidasekonjugat (HRP), som bindes til det biotinylerede amplikon, der er opfanget af mikropartiklerne. Et brintoveriltesubstrat og tetramethylbenzidin (TMB)-kromofor bruges til at danne farve. COBAS AMPLICOR NG-testen er en multiplex-analyse, der tillader samtidig amplifikation af N. gonorrhoeae-target-dna, C. trachomatis-target-dna og CT/NG-intern kontrol-dna. Master Mix-reagenset indeholder to biotinylerede primere, der er specifikke for C. trachomatis, N. gonorrhoeae og CT/NG IC Detektionen af C. trachomatis-amplificeret DNA kan udføres, når brugeren vælger det. Detektionen af CT/NG-intern kontrol skal udføres ved test af podeprøver, der er indsamlet og transporteret ved hjælp af AMPLICOR STD Swab Specimen Collection og Transport Kit. Detektionen af CT/NG-intern kontrol kan udføres, når brugeren vælger det, ved test af urinprøver eller podeprøver, der er indsamlet og transporteret i chlamydia-kulturtransportmedier. Forberedelse af prøver PCR-amplifikation Urogenitale epitelceller, leukocytter og tilhørende N. gonorrhoeae-celler indsamles via podeprøver eller pelleteres fra urin. Prøverne behandles med en rensemiddelopløsning for at lysere cellerne og frigøre gonorroisk DNA. En anden rensemiddelopløsning tilføjes derefter for at forberede prøven til amplifikation. Valg af target Neisseria gonorrhoeae indeholder en højt konserveret DNA-sekvens (M Ngo PII) der, baseret på sekvenshomologi, tilsyneladende koder for en cytosin DNAmethyltranferase, som inhiberer nedbrydningen af kromosom-dna ved HaeIIIrestriktionsendonuclease. M Ngo PII-gensekvensen (ca basepar) forekommer i de forskellige N. gonorrhoeae-strenge, men forekommer ikke i de fleste andre, ikke-gonorroiske Neisseria-arter 10. AMPLICOR NG-testen bruger de biotinylerede primere SS01 og SS02 til at definere en sekvens på ca. 201 nukleotider inden for M Ngo PII-genet i N. gonorrhoeae. Targetamplifikation Behandlede prøver tilsættes amplifikationsblandingen i amplifikationsrørene (A-rør), hvor PCR-reaktionen foregår. Den cykliske varmebehandler i COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet opvarmer reaktionsblandingen for at denaturere den dobbeltstrengede DNA og eksponere de specifikke primertargetsekvenser i Neisseria gonorrhoeae M Ngo PII-genet. Når blandingen afkøler, bindes de biotinylerede primere SS01 og SS02 til den komplementære N. gonorrhoeae-dna-sekvens. 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 3/36

4 Ved tilstedeværelsen af overskydende deoxynukleosid trifosfater (dntp er), herunder deoxyadenosin, deoxyguanosin, deoxycytocin og deoxyuridin (i stedet for deoxythymidin) trifosfater, forlænger den termostabile Thermus aquaticus DNA-polymerase (Taq-pol) de bundne primere langs targetskabelonen for at producere et dobbeltstrenget DNA-molekyle på 201 basepar, der kaldes et amplikon. COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet gentager automatisk denne proces et bestemt antal gange, hvor mængden af amplikon-dna fordobles for hver cyklus. AMPLICOR CT/NG Master Mix indeholder også et andet sæt biotinylerede primere, der co-amplificerer Chlamydia trachomatis (CT)-target- DNA i prøven og CT/NG-intern kontrol ved hjælp af en analog proces, som er beskrevet for Neisseria gonorrhoeae. Intern kontrol-amplifikation I enzymbaserede amplifikationprocesser, som f.eks. PCR, kan effektiviteten reduceres af de inhibitorer, der kan forekomme i den kliniske prøve. CT/NG-intern kontrol gør det muligt at identificere behandlede prøver, der indeholder stoffer, som kan give interferens med PCR-amplifikationen. CT/NG-intern kontrol er et ikkesmitsomt, rekombinant DNA-plasmid med primerbindingsområder, der er identiske med dem i C. trachomatis-targetsekvensen, en randomiseret intern sekvens, der har samme længde og basesammensætning som NG- og CT-targetsekvenserne, samt et unikt probebindingsområde, der adskiller sig fra targetamplikonet. Disse funktioner er valgt for at sikre en ensartet amplifikation af CT/NG-intern kontrol og CT/NGtarget-DNA. CT/NG-intern kontrolreagensen medfølger i AMPLICOR CT/NG Amplification Kit og tilsættes hver enkelt amplifikationsreaktion og co-amplificeres med target-dna fra den kliniske prøve. Det valgfri COBAS AMPLICOR Internal Control Detection Kit indeholder en IC-specifik oligonukleotid-opfangningsprobe, der kan bruges til at identificere et positivt IC-signal i reaktionsblandingen. CT/NG-intern kontrol er udviklet til at identificere prøver, der indeholder inhibitorer, som påvirker amplifikationen og detektionen af 20 eller flere kopier af N. gonorrhoeae-targetnukleinsyre som er bestemt ved Poisson-analyse. Detektionen af CT/NG-intern kontrol kan udføres, når brugeren vælger det, ved test af urinprøver eller podeprøver, der er indsamlet og transporteret i chlamydia-kulturtransportmedier. Detektion af CT/NG-intern kontrol er påkrævet ved test af podeprøver, der er indsamlet og transporteret ved hjælp af AMPLICOR STD Swab Specimen Collection and Transport Kit. Selektiv amplifikation Selektiv amplifikation af target-dna fra den kliniske prøve i COBAS AMPLICOR NG-testen opnås ved hjælp af AmpErase (uracil-n-glycosylase)- enzym og deoxyuridin trifosfat (dutp). AmpErase-enzym genkender og katalyserer nedbrydningen af DNA-strenge, der indeholder deoxyuridin 11, men ikke DNA-strenge, der indeholder deoxythymidin. Deoxyuridin findes ikke i naturligt forekommende DNA, men findes altid i amplikon på grund af, at deoxyuridin trifosfat bruges i stedet for deoxythymidin trifosfat som en af dntp erne i Master Mix-reagensen. Det er derfor kun amplikonet, der indeholder deoxyuridin. Deoxyuridin gør forurenende amplikon modtagelig for nedbrydning med AmpErase-enzym før amplifikationen af target-dna et. AmpErase-enzym, der findes i Master Mix-reagenset, katalyserer spaltningen af deoxyuridin-holdigt DNA ved deoxyuridin-resterne ved at åbne deoxyribosekæden ved positionen C1. Ved opvarmning i den første termiske cyklus ved basisk ph i Master Mix brækker amplikonets DNA-kæde ved positionen for deoxyuridin, og dermed kan DNA et ikke amplificeres. AmpErase-enzym er inaktivt ved temperaturer over 55 C, dvs. i de termiske cyklusser, og derfor ødelægges target-amplikonet ikke. Efter amplifikation denatureres resterende enzym ved at tilsætte denaturerings- 4/36 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

5 Neisseria gonorrhoeae opløsningen, hvilket forhindrer nedbrydningen af target-amplikoner. Det er påvist, at AmpErase-enzym i COBAS AMPLICOR NG-testen deaktiverer mindst 10 3 kopier af deoxyuridin-holdigt amplikon pr. PCR. Hybridiseringsreaktion Efter PCR-amplifikation tilsætter COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet automatisk denatureringsopløsning til hvert A-rør for at denaturere NG-amplikonet og CT/NG-intern kontrol-amplikonet kemisk. Derved dannes enkeltstrenget DNA. COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet overfører aliquoter af denatureret amplikon fra hvert A-rør til individuelle detektionskopper (D-kopper). En opløsning af magnetiske partikler, der er belagt med en oligonukleotid detektionsprobe for N. gonorrhoeae (eller intern kontrol, når brugeren vælger det), tilsættes de enkelte D-kopper. Det biotinmærkede NG og CT/NG-intern kontrol-amplikon hybridiseres til de targetspecifikke oligonukleotidprober, der er bundet til de magnetiske partikler. Hybridiseringen af amplikonet til den targetspecifikke probe forbedrer den samlede specificitet for testen. Detektionsreaktion Efter hybridiseringsreaktionen skyller COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet de magnetiske partikler i hver D-kop for at fjerne ubundet materiale og tilsætter derefter avidin/horseradish-peroxidasekonjugat. Avidin/horseradishperoxidasekonjugatet bindes til det biotin-mærkede amplikon, der er hybridiseret af den targetspecifikke oligonukleotid-detektionsprobe, der er bundet til de magnetiske partikler. COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet fjerner ubundet konjugat ved at skylle de magnetiske partikler og tilsætter derefter en substratopløsning, der indeholder brintoverilte og 3,3',5,5'-tetramethylbenzidin (TMB) i hver D-kop. Ved tilstedeværelsen af brintoverilte katalyserer den partikelbundne horseradish-peroxidase oxideringen af TMB for at danne et farvet kompleks for hvilket, der måles absorbans ved hjælp af COBAS AMPLICOR - analyseinstrumentet ved en bølgelængde på 660 nm. Reagenser AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 test P/N: Specimen Preparation Kit ART: AMPLICOR CT/NG prøveforberedelseskit US: CT/NG URINE WASH (CT/NG-urinvaskebuffer) Tris-HCl-buffer 300 mm NaCl < 0,1% rensemiddel 0,09% natriumazid CT/NG LYS (CT/NG-lysisreagens) Tris-HCl-buffer < 1% emulgator 0,09% natriumazid 1 x 50 ml 1 x 25 ml 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 5/36

6 CT/NG DIL (CT/NG-prøvediluent) Tris-HCl-buffer 6 mm magnesiumklorid < 25% rensemiddel 0,05% natriumazid 2 x 50 ml AMPLICOR CT/NG CT/NG AMP 96 test P/N: Amplification Kit ART: AMPLICOR CT/NG amplifikationskit US: CT/NG MMX 3 x 1,8 ml (CT/NG Master Mix) Tris-HCl-buffer EDTA 100 mm KCl Glycerol < 0,01% AmpliTaq (Taq DNA-polymerase, mikrobiel) < 0,005% datp, dctp og dgtp < 0,016% dutp < 0,01% AmpErase (uracil-n-glycosylase)-enzym (mikrobiel) < 0,0004% SS01-, SS02-, CP24- og CP27-primere, biotinylerede 0,05% natriumazid CT/NG IC (CT/NG-intern kontrol) Tris-HCl-buffer < 0,001% ikke-smitsom, rekombinant plasmid-dna (mikrobiel) indeholdende CT-primerbindingssekvenser og et unikt probebindingsområde < 0,005% Poly ra RNA (syntetisk) EDTA Amaranth-farve 0,05% natriumazid NG (+) C [N. gonorrhoeae (+)-kontrol] Tris-HCl-buffer < 0,001% ikke-smitsomt, rekombinant plasmid-dna (syntetisk) indeholdende N. gonorrhoeae-sekvenser < 0,005% ikke-specifik DNA-carrier (fra pattedyr) < 0,5% rensemiddel EDTA 0,05% natriumazid CT (+) C [N. gonorrhoeae ( )-kontrol] Tris-HCl-buffer < 0,001% ikke-smitsomt, rekombinant plasmid-dna (syntetisk) indeholdende C. trachomatis-sekvenser < 0,005% ikke-specifik DNA-carrier (fra pattedyr) < 0,5% rensemiddel EDTA 0,05% natriumazid 3 x 0,1 ml 1 x 0,8 ml 1 x 0,8 ml 6/36 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

7 Neisseria gonorrhoeae COBAS AMPLICOR NG DK 100 test P/N: Neisseria gonorrhoeae ART: Detection Kit US: COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae detektionskit NG PS1 1 x 100 test (NG-probeopløsning 1) MES-buffer < 0,3% opløsning af Dynabeads (paramagnetiske partikler), der er belagt med N. gonorrhoeae-specifik oligonukleotidopfangningsprobe SS06T5 0,09% natriumazid NG4 (NG-probeopløsning 2) Natriumfosfatbuffer 37% natriumthiocyanat < 0,2% emulgator 1 x 100 test + Xn 37% (w/w) natriumthiocyanat Sundhedsskadelig COBAS AMPLICOR DK 100 test P/N: Detection Reagents Kit ART: COBAS AMPLICOR detektionsreagenskit US: DN4 (Denatureringsopløsning) 1,6% natriumhydroxid EDTA Thymolblå + Xi 1,6% (w/w) natriumhydroxid 1 x 100 test Lokalirriterende CN4 (Avidin/horseradish-peroxidasekonjugat) Tris-HCl-buffer < 0,001% Avidin/horseradish-peroxidasekonjugat Serumalbumin fra kvæg (fra pattedyr) Emulsit 25 (Dai-ichi Kogyo Seiyaku Co., Ltd.) 0,1% Phenol 1% ProClin 150-konserveringsmiddel SB3 (Substrat A) Citratopløsning 0,01% brintoverilte 0,1% ProClin 150-konserveringsmiddel 1 x 100 test 5 x 75 test 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 7/36

8 SB (Substrat B) 0,1% 3,3',5,5'-tetramethylbenzidin (TMB) 40% dimethylformamid (DMF) T 40% (w/w) dimethylformamid (DMF) 5 x 5 ml Giftig R: 61-20/21-36 Kan skade barnet under graviditeten. Farlig ved indånding og ved hudkontakt. Irriterer øjnene. S: Undgå enhver kontakt indhent særlige anvisninger før brug. Ved ulykkestilfælde eller ved ildebefindende er omgående lægebehandling nødvendig; vis etiketten, hvis det er muligt. COBAS AMPLICOR WB 500 test P/N: Wash Buffer ART: COBAS AMPLICOR vaskebuffer US: WB (10X-skyllekoncentrat) < 2% fosfatbuffer < 9% natriumklorid EDTA < 2% rensemiddel 0,5% ProClin 300-konserveringsmiddel Advarsler og forholdsregler Til in vitro-diagnostik. 2 x 250 test Udtrykket kopi refererer til 1 kopi af N. gonorrhoeae-targetnukleinsyre i denne metodemanual. Én (1) kopi svarer til den mindste mængde N. gonorrhoeaetargetnukleinsyre, der kan generere et positivt PCR-testresultat. Denne test er kun beregnet til intracervikal-, uretral- og urinprøver. Testen er ikke beregnet til hals-, rektal- eller andre prøvetyper, end dem der er angivet. Prøverne kan holde sig i den periode, der er angivet i afsnittet Indsamling, transport og opbevaring af prøver i dette produktindlæg. Test af prøver, der foretages hurtigst muligt efter indsamlingen, vil dog hjælpe med at sikre de mest nøjagtige testresultater. Flere varierende påvirkninger af opbevaringstider og variationer, der er forbundet med forsendelser af prøver, er ikke analyseret. Undgå at pipettere med munden. Der må ikke spises, drikkes eller ryges i laboratoriets arbejdsområder. Anvend engangsbeskyttelseshandsker, kitler og sikkerhedsbriller ved håndtering af prøver og reagenser. Vask hænderne grundigt efter at have håndteret prøver og reagenser. 8/36 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

9 Neisseria gonorrhoeae Undgå bakteriekontaminering af reagenser, når der fjernes aliquoter fra reagensflaskerne. Det anbefales at bruge sterile engangspipetter og pipettespidser. Reagenser fra forskellige lot eller fra forskellige flasker fra det samme lot må ikke blandes sammen. Reagenser og affald skal bortskaffes i overensstemmelse med nationale, regionale og lokale bestemmelser. Et kit må ikke anvendes efter udløbsdatoen. Du kan rekvirere MSDS er (Material Safety Data Sheets) hos din lokale Rocheforhandler. Arbejdsgangen i laboratoriet skal være envejs, idet der startes i preamplifikationsområdet og fortsættes i post-amplifikationsområdet (amplifikation/ detektion). Pre-amplifikationsaktiviteterne skal starte med klargøring af reagenser og fortsætte med klargøring af prøver. Beholdninger og udstyr skal være specielt beregnet til pre-amplifikationsaktiviteten og må ikke bruges til andre aktiviteter eller flyttes mellem områder. Der skal bæres handsker i hvert enkelt område, og de skal skiftes, før området forlades. Udstyr og beholdninger, der bruges til forberedelse af reagenser, må ikke bruges til forberedelse af prøver eller til pipettering eller behandling af amplificeret DNA eller andre target-dna-kilder. Beholdninger og udstyr til post-amplifikation skal altid bibeholdes i post-amplifikationsområdet. Prøver skal håndteres som smittefarligt materiale i overensstemmelse med laboratoriesikkerhedsprocedurer som dem, der er beskrevet i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 12 og i CLSI-dokument M29-A3 13. Rengør grundigt og desinficer alle arbejdsflader med en nyfremstillet 0,5% natriumhypochlorit-opløsning i demineraliseret eller destilleret vand. Almindelig tilgængeligt flydende blegemiddel til husholdningsbrug indeholder typisk natriumhypochlorid med en koncentration på 5,25%. En 1:10 fortynding af blegemidlet giver en 0,5% natriumhypochlorit-opløsning. COBAS AMPLICOR NG-testen kan reagerer med N. subflava og N. cinerea. Disse organismer kan være almindelige komponenter i den normale halsflora. Undgå kontaminering af prøvebehandlingsreagenser, amplifikationsreagenser og patientprøver med respiratoriske aerosoler. Prøver, der er modtaget i laboratoriet med vatpinden bibeholdt i AMPLICOR STM, kan ikke godkendes til test. Disse prøver skal kasseres, og der skal indsamles en ny prøve. Prøver, der er indsamlet og transporteret ved hjælp af AMPLICOR STD Swab Specimen Collection and Transport Kit kan muligvis inbibere PCR. Der skal udføres detektion af CT/NG-intern kontrol ved test af disse prøver. Podeprøver, der transporteres i kulturtransportmedier til Chlamydia, skal opbevares i transportrøret som visuel bekræftelse af prøvepodningen. COBAS AMPLICOR NG-testen blev evalueret med prøver, transporteret med podeprøven opbevaret i kulturtransportmedie (CTM)-røret til Chlamydia. CTM-prøver, der transporteres uden podeprøver, er ikke evalueret og anbefales ikke til denne test. Opbevaring af urinprøver ved stuetemperatur i mere end 24 timer kan resultere i forringelse af prøverne. Urinprøver, der er opbevaret i mere end 24 timer ved stuetemperatur, må ikke bruges til test. 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 9/36

10 CT/NG URINE WASH, CT/NG LYS, CT/NG DIL, CT/NG MMX, CT/NG IC, NG (+) C, CT (+) C, NG PS1 og IC PS1 indeholder natriumazid. Natriumazid kan reagere med bly- og kobberinstallationer og danne højeksplosive metalazider. Når natriumazid-holdige opløsninger hældes ud i laboratorievasken, skal afløbet skylles med store mængder vand for at undgå ophobning af azider. Brug beskyttelsesbriller, kitler og engangshandsker ved håndtering af DN4, CN4, SB3, SB og arbejdssubstrat (blandet SB3- og SB-reagens). Undgå, at hud, øjne og slimhinder kommer i kontakt med disse materialer. Hvis der opstår kontakt, skal du straks skylle med store mængder vand. Der kan opstå ætsninger, hvis det ikke behandles. Hvis disse reagenser spildes, skal du fortynde med vand, før de tørres op. Undgå kontakt mellem hud eller slimhinder og SB eller arbejdssubstratet. Hvis der opstår hudkontakt, skal du straks skylle med store mængder vand. SB og arbejdssubstratet indeholder dimethylformamid, der er rapporteret som giftigt ved høje orale doser og kan virke fosterskadende. Undgå hudkontakt, indånding af dampe samt indtagelse. Hvis der opstår hudkontakt, skal du vaske grundigt med vand og sæbe samt straks søge læge. Der skal bruges rør med skruelåg til klargøring af prøver og kontroller for at undgå stænk og potentiel krydskontaminering af prøver. Brug ikke rør med snaplukning. Krav til opbevaring og håndtering Reagenser må ikke nedfryses. CT/NG LYS opbevare ved 2-25 C. CT/NG URINE WASH og CT/NG DIL opbevares ved 2-8 C. Hvis der dannes bundfald i disse reagenser under opbevaringen, skal de opvarmes til den omgivende temperatur og blandes grundigt før brug. Reagenserne kan holde sig til den angivne udløbsdato. CT/NG MMX og CT/NG IC opbevares ved 2-8 C. Reagenserne kan holde sig til den angivne udløbsdato. Arbejds-Master Mix (forberedes ved tilsætning af CT/NG IC til CT/NG MMX) skal opbevares ved 2-8 C og kan holde sig i 4 uger. NG (+) C og CT (+) C opbevares ved 2-8 C. Reagenserne kan holde sig til den angivne udløbsdato. NG PS1 og NG4 opbevares ved 2-8 C. Reagenserne kan holde sig til den angivne udløbsdato. Når først NG PS1 og NG4 er blandet, kan arbejdsreagensen holde sig i 30 dage ved 2-8 C. Arbejdsreagensen kan anvendes i højst 6 instrumentcyklusser (12 timer pr. cyklus) og skal opbevares ved 2-8 C mellem instrumentcyklusser. DN4 opbevares ved 2-25 C. DN4 kan holde sig indtil den angivne udløbsdato. Efter åbning kan DN4 holde sig i 30 dage ved 2-8 C eller indtil udløbsdatoen afhængig af, hvad der indtræder først. DN4 kan anvendes i højest 6 instrumentcyklusser (12 timer pr. cyklus) og skal opbevares ved 2-8 C mellem instrumentcyklusser. CN4 opbevares ved 2-8 C. CN4 kan holde sig indtil den angivne udløbsdato. Efter åbning kan CN4-reagens holde sig i 30 dage ved 2-8 C eller indtil udløbsdatoen afhængig af, hvad der indtræder først. CN4 kan anvendes i højest 6 instrumentcyklusser (12 timer pr. cyklus) og skal opbevares ved 2-8 C mellem instrumentcyklusser. 10/36 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

11 Neisseria gonorrhoeae SB3 og SB opbevares ved 2-8 C. Uåbnet kan disse reagenser holde sig indtil de angivne udløbsdatoer. Der skal forberedes arbejdssubstrat hver dag ved blanding af SB3 med SB. Arbejdssubstratet kan holde sig i 16 timer på COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet. Udsæt ikke SB3, SB eller arbejdssubstrat for metaller, oxideringsmidler eller direkte lys. WB opbevares ved 2-30 C. WB kan holde sig indtil den angivne udløbsdato. Undersøg WB, og opvarm ved C for at opløse evt. bundfald igen, hvis det er nødvendigt. Arbejdsvaskebuffer (1X), der er forberedt ved 1:10 fortynding af WB med destilleret eller demineraliseret vand, skal opbevares ved 2-25 C i COBAS AMPLICOR -vaskebufferreservoiret og kan holde sig i 2 uger fra forberedelsesdatoen. Detektionsreagenser, der ikke er helt opbrugt, skal opbevares ved 2-8 C mellem instrumentkørsler. Kontroller udløbsdatoen på åbnede reagenser eller arbejdsreagenser, før de indsættes i COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet. Medfølgende materialer AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP P/N: Specimen Preparation Kit ART: AMPLICOR CT/NG prøveforberedelseskit US: CT/NG URINE WASH (CT/NG-urinvaskebuffer) CT/NG LYS (CT/NG-lysisreagens) CT/NG DIL (CT/NG-prøvediluent) AMPLICOR CT/NG CT/NG AMP P/N: Amplification Kit ART: AMPLICOR CT/NG amplifikationskit US: CT/NG MMX (CT/NG Master Mix) CT/NG IC (CT/NG-intern kontrol) NG (+) C [N. gonorrhoeae (+)-kontrol] CT (+) C [C. trachomatis (+)-kontrol] COBAS AMPLICOR NG DK P/N: Neisseria gonorrhoeae ART: Detection Kit US: COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae detektionskit NG PS1 (NG-probeopløsning 1) NG4 (NG-probeopløsning 2) 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 11/36

12 COBAS AMPLICOR DK P/N: Detection Reagents Kit ART: COBAS AMPLICOR detektionsreagenskit US: DN4 (Denatureringsopløsning) CN4 (Avidin/horseradish-peroxidasekonjugat) SB3 (Substrat A) SB (Substrat B) COBAS AMPLICOR WB P/N: Wash Buffer ART: COBAS AMPLICOR vaskebuffer US: WB (10X-skyllekoncentrat) Nødvendige, men ikke medfølgende materialer Indsamling af prøver Intracervikale og uretrale podeprøver: Brug kun vatpinde med dacron-, rayoneller kalciumalginatspidser med skafter af plastik eller ikke-aluminium. Brug kun 2SP- eller SPG Culture Transport Media, Bartels ChlamTrans Chlamydial Transport Medium (Trinity Biotech Plc.), M4 MicroTest Culture Transport System eller M4RT MicroTest Culture Transport System (Remel, Inc.) Urinindsamlingskopper af polypropylen uden konserveringsmidler M4RT MicroTest Culture Transport System Female (x100) (Remel, Inc.) M4RT MicroTest Culture Transport System Male (x100) (Remel, Inc.) Pre-amplifikation Reagensforberedelsesområde COBAS AMPLICOR -A-ring monteret med 12 A-rør Holder til COBAS AMPLICOR -A-ring Eppendorf Multipette -pipette med 1,25 ml Combitip -reservoir (steril, enkeltpakket) Pipetter (100 μl kapacitet)* med aerosolfilter eller stempelspidser Engangshandsker, uden pulver Pre-amplifikation Prøve- og kontrolforberedelsesområdet 2,0 ml polypropylen-rør med skruelåg, sterile, ikke-silikoniseret, konisk (Sarstedt eller tilsvarende)** Glasrack (Sarstedt eller tilsvarende) Sterile overførselspipetter med målestreger Pipetter (kapacitet 50 μl, 100 μl, 200 μl, 250 μl, 500 μl og 1000 μl)* med aerosolfilter eller stempelspidser Mikrocentrifuge (maks. RCF x g, min. RCF x g), Eppendorf 5415C, HERMLE Z230M eller tilsvarende 12/36 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

13 Neisseria gonorrhoeae Forlængede aerosolbarrierespidser (Matrix 7055 eller tilsvarende) til brug med prøver, der transporteres i 2SP- eller SPG Culture Transport Media, Bartels ChlamTrans Chlamydial Transport Medium (Trinity Biotech Plc.), M4 MicroTest Culture Transport System eller M4RT MicroTest Culture Transport System (Remel, Inc.) 37 C ± 2 C varmeblok Vortex-mixer Trækpapir Engangshandsker, uden pulver Post-amplifikation Amplifikations-/detektionsområde COBAS AMPLICOR -analyseinstrument og printer Brugerhåndbog til COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet Valgfrit: AMPLILINK-software Valgfrit: Datastation til AMPLILINK-softwaren, med printer Valgfrit: Brugerhåndbog til AMPLILINK-software, version 2.4 Series til brug med COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet (til brug med AMPLILINK-software, v2.41) eller applikationsmanualen til AMPLILINKsoftware, version 3.2 Series til brug med COBAS AmpliPrep-instrumentet, COBAS TaqMan -analyseinstrumentet, COBAS TaqMan 48-analyseinstrumentet og COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet (til brug med AMPLILINK-software, v3.2 Series) Metodemanual til COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae-testen Rack med D-kopper Destilleret eller demineraliseret vand 5 ml serologiske pipetter Cylinder med målestreger (min. 1 liter) Vortex-mixer Engangshandsker, uden pulver * Pipetter må højst afvige 3% fra den angivne volumen. Der skal anvendes aerosolfilter eller stempelspidser, hvor det er angivet, for at undgå krydskontaminering af prøver og amplikoner. ** Der skal bruges rør med skruelåg til klargøring af prøver og kontroller for at undgå stænk og potentiel krydskontaminering af prøver og kontroller. Brug ikke rør med snaplukning. Indsamling, transport og opbevaring af prøver Alle prøver skal håndteres som potentielt smittefarlige. De eneste acceptable prøver er: 1. Urinprøver (fra mænd og kvinder), der transporteres i rene polypropylenbeholdere uden konserveringsmidler. Brug ikke urinprøver, der er indsamlet i beholdere, som indeholder konserveringsmidler. 2. Intracervikale og uretrale podeprøver, der er indsamlet ved hjælp af AMPLICOR STD Swab Specimen Collection and Transport Kit. Der skal udføres detektion af CT/NG-intern kontrol ved test af podeprøver, der er transporteret ved hjælp af AMPLICOR STD Swab Specimen Collection og Transport Kit. 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 13/36

14 3. Intracervikale og uretrale podeprøver, der er indsamlet og transporteret i: 2SP- eller SPG Culture Transport Media, Bartels ChlamTrans Chlamydial Transport Medium (Trinity Biotech Plc.), M4 MicroTest Culture Transport System eller M4RT MicroTest Culture Transport System (Remel, Inc.). Medielot skal være godkendt til brug i hvert laboratorium (se afsnittet Kvalitetskontrol for at få yderligere oplysninger). Følg instruktionerne om korrekt prøveindsamling nedenfor for at opnå pålidelige testresultater. Testen er ikke beregnet til hals-, rektal- eller andre prøvetyper, end dem der er angivet. For at sikre levering af prøver til testlaboratoriet i høj kvalitet, skal urinprøver og urogenitale podeprøver transporteres til laboratoriet så hurtigt som muligt. Prøver bør kun transporteres under kontrollerede temperaturforhold. Indsamling af prøver Urinprøver Patienten må ikke have urineret de sidste 2 timer. 1. Indsaml ml af første del af urinen (første del af strømmen) i en ren polypropylenbeholder uden konserveringsmidler. 2. Forsegl prøvebeholderen, og påsæt en etiket med de relevante oplysninger. Prøven kan transporteres til testlaboratoriet ved stuetemperatur (18 30 C). Podeprøver indsamlet i AMPLICOR Specimen Transport Medium (STM) 1. Fjern mucus fra exocervix med en af de medfølgende store vatpinde, og kasser den. 2. Indfør den anden store vatpind i den intracervikale kanal, indtil spidsen af vatpinden ikke længere kan ses. 3. Rotér i 3 5 sekunder, træk vatpinden ud, og undgå kontakt med de vaginale overflader. 4. Placer podeprøven i AMPLICOR STM-røret, og ryst eller omrør vatpinden kraftigt i væsken i 15 sekunder. Der kan forekomme inhibering af PCR, hvis vatpinden forbliver i kontakt med STM i mere end 15 sekunder. 5. Fjern væsken fra vatpinden ved at presse vatpinden mod rørets sider. Eventuel overskydende mucus i prøven skal på dette tidspunkt fjernes ved hjælp af vatpinden. Fjern eventuel resterende væske fra mucus ved at presse vatpinden mod siden af røret. Fjern vatpinden og eventuel resterende mucus på den, og kasser den. Sæt låg på røret. 6. Forsegl prøvebeholderen, og påsæt en etiket med de relevante oplysninger. Følg laboratoriets procedurer for transport. Opbevar prøverne ved stuetemperatur, før de transporteres til laboratoriet. Podeprøver indsamlet i kulturtransportmedier (CTM) 1. Intracervikale og uretrale podeprøver fra mænd kan indsamles og transporteres i 1-3 ml 2SP- eller SPG Culture Transport Media, Bartels ChlamTrans Chlamydial Transport Medium (Trinity Biotech Plc.), M4 MicroTest Culture Transport System eller M4RT MicroTest Culture Transport System (Remel, Inc.). Brug de anbefalede metoder til prøvetagning af podeprøver efter fjernelse af cervikal mucus /36 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

15 Neisseria gonorrhoeae 2. Brug kun vatpinde med dacron-, rayon- eller kalciumalginatspidser med skafter af plastik eller ikke-aluminium. Brug ikke prøvevatpinde med træeller aluminimumsskafter. 3. Efterlad vatpindene i kulturtransportmediet. Forsegl prøvebeholderen, og påsæt en etiket med de relevante oplysninger. Følg laboratoriets procedurer for indsamling og transport. Nedkøl podeprøverne, hvis transporten til laboratoriet sker mere end én time efter prøveindsamlingen. Transport af prøver Urinprøver 1. Urinprøver kan transporteres til testlaboratoriet ved C. Urinprøver kan holde sig i 24 timer ved stuetemperatur. Urinprøver, der ikke skal behandles i løbet af 24 timer efter indsamlingen, skal opbevares ved 2 8 C og skal behandles inden 7 dage efter indsamlingen. Urinprøver, der ikke skal behandles inden 7 dage efter prøveindsamlingen, kan opbevares ved 20 C eller lavere og skal testes inden 30 dage efter indsamlingen. 2. Urinprøver, der kræver forsendelse til testcentre uden for laboratoriet, skal sendes med dag-til-dag-levering med garanti for ankomst inden 24 timer. Forsendelsen kan ske ved stuetemperatur (18 30 C). Hvis urinprøverne sendes ved stuetemperatur, skal de opbevares ved 2 8 C indtil forsendelsestidspunktet for at sikre, at opbevaringsperioden ved stuetemperatur ikke overstiger 24 timer. Transport af prøver skal foregå i overensstemmelse med nationale, regionale og lokale bestemmelser for transport af ætiologiske stoffer 14. Podeprøver indsamlet i AMPLICOR Specimen Transport Medium (STM) 1. Transporter prøverne til testlaboratoriet ved stuetemperatur. Podeprøver kan holde sig i 10 dage ved C. Efter modtagelsen på testlaboratoriet skal podeprøverne opbevares ved stuetemperatur og behandles inden 10 dage efter indsamlingen. 2. Podeprøver, der kræver forsendelse til testcentre uden for laboratoriet, skal opbevares ved stuetemperatur indtil forsendelsestidspunktet. De skal sendes ved C og skal ankomme til testlaboratoriet, så de kan blive behandlet inden 10 dage efter indsamlingen. Transport af prøver skal foregå i overensstemmelse med nationale, regionale og lokale bestemmelser for transport af ætiologiske stoffer 14. Podeprøver indsamlet i kulturtransportmedier (CTM) 1. Nedkøl podeprøverne, hvis transporten til laboratoriet eller prøvebehandlingen forsinkes i mere end én time efter prøveindsamlingen. Podeprøver, der kræver forsendelse til testcentre uden for laboratoriet, skal sendes hurtigst muligt efter indsamlingen i overensstemmelse med laboratoriets procedurer for transport af chlamydia-dyrkningsprøver. 2. Podeprøver, der ikke skal testes umiddelbart efter ankomst til testlaboratoriet, skal opbevares ved 2 8 C og skal behandles inden 7 dage. Podeprøver, der ikke kan behandles inden 7 dage efter prøveindsamlingen, skal opbevares ved 20 C eller koldere og skal testes inden 30 dage efter indsamlingen. 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 15/36

16 Opbevaring af prøver Rutinemæssig nedfrysning eller længerevarende opbevaring af prøver kan påvirke funktionsevnen. Urinprøver 1. Urinprøver, der ikke skal behandles i løbet af 24 timer efter indsamlingen, skal opbevares ved 2 8 C og skal behandles inden 7 dage efter indsamlingen. Urinprøver, der ikke kan behandles inden 7 dage efter indsamlingen kan opbevares ved 20 C eller koldere i op til 30 dage. Brugsvejledning Podeprøver indsamlet i AMPLICOR Specimen Transport Medium (STM) 1. Podeprøver kan holde sig i 10 dage ved stuetemperatur. Podeprøver skal opbevares ved stuetemperatur og behandles inden 10 dage efter indsamlingen. 2. Podeprøver skal opbevares ved stuetemperatur indtil forsendelsestidspunktet. De skal sendes ved stuetemperatur og skal ankomme til testlaboratoriet, så de kan blive behandlet inden 10 dage efter indsamlingen. Podeprøver indsamlet i kulturtransportmedier (CTM) 1. Podeprøver, der ikke skal testes umiddelbart efter ankomst til testlaboratoriet, skal opbevares ved 2 8 C og skal behandles inden 7 dage. Podeprøver, der ikke kan behandles inden 7 dage efter prøveindsamlingen, skal opbevares ved 20 C eller koldere og skal testes inden 30 dage efter indsamlingen. Detaljerede oplysninger om betjening, udskrivning af resultater samt fortolkning af markeringer og kommentarer findes i (1) brugerhåndbogen til COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet og (2) ved brug af AMPLILINKsoftware, v2.41: Brugerhåndbogen til AMPLILINK-software, version 2.4 Series til brug med COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet eller ved brug af AMPLILINK-software, v3.2 Series: Applikationsmanualen til AMPLILINKsoftware, version 3.2 Series til brug med COBAS AmpliPrep-instrumentet, COBAS TaqMan -analyseinstrumentet, COBAS TaqMan 48-analyseinstrumentet og COBAS AMPLICOR -analyseinstrumentet. Alle reagenser skal have den omgivende temperatur før brug. Brug pipetter med aerosolfilter eller stempelspidser, når dette er angivet. Vær yderst forsigtig med at sikre selektiv amplifikation. Urin- og podeprøver skal have den omgivende temperatur før brug. Brug pipetter med aerosolfilter eller stempelspidser, når dette er angivet. Vær yderst forsigtig med at sikre selektiv amplifikation. Inhiberingen af PCR kan reduceres ved at opbevare de behandlede prøver natten over ved 2 8 C, før prøven tilsættes arbejds-master Mix 21. Der skal bruges rør med skruelåg til forberedelse af prøver og kontroller for at undgå stænk og potentiel krydskontaminering af prøver. Brug ikke rør med snaplukning. 16/36 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

17 Neisseria gonorrhoeae Kørselsstørrelse Hvert kit indeholder reagenser til otte kørsler af 12 test, der kan udføres separat eller samtidigt. Hver testkørsel skal inkludere mindst én kopi af COBAS AMPLICOR N. gonorrhoeae (+)-kontrollen og én kopi af COBAS AMPLICOR C. trachomatis (+)-kontrollen (se afsnittet Kvalitetskontrol ). CT (+)-kontrollen fungerer som NG ( )-kontrollen for COBAS AMPLICOR NG-testen. Prøveforberedelsesreagenserne er pakket til udførelse af 100 test. NG (+)- og CT (+)-kontrollerne leveres i enkeltstående flasker med tilstrækkeligt materiale til forberedelse af 8 sæt behandlede kontroller. CT/NG Master Mix og CT/NG-intern kontrol leveres i tre flasker, der hver indeholder tilstrækkeligt materiale til at foretage en kørsel med op til 32 test, inklusive prøver og kontroller. Den mest effektiv brug af reagenser, prøver og kontroller fås ved at behandle dem i batches, der kan ganges med 12. Arbejdsgang Reagensforberedelse COBAS AMPLICOR NG-testen kan udføres i løbet af én dag eller over to dage. Hvis testen skal udføres på en enkelt arbejdsdag, skal du følge instruktionerne under Reagensforberedelse, Prøveforberedelse, Kontrolforberedelse, Amplifikation og Detektion i rækkefølge.. Testen kan udføres i løbet af 2 dage ved at starte med prøveforberedelse dag 1 efterfulgt af Reagensforberedelse, Kontrolforberedelse, Amplifikation og Detektion dag 2. Som alternativ kan der foretages Reagensforberedelse, Prøveforberedelse og Kontrolforberedelse samt tilsætning af de forberedte prøver og kontroller til Master Mix dag 1 efterfulgt af Amplifikation og Detektion dag 2. Udført i: Pre-amplifikation Reagensforberedelsesområdet 1. Fastlæg det relevante antal A-ringe, der skal bruges til testen af patientprøver og kontroller. Placer A-ringen(e) i A-ring-holderen eller -holderne. Selvom der ikke foretages detektion af CT/NG-intern kontrol, skal der tilsættes CT/NG IC til Master Mix. 2. Forbered arbejds-master Mix ved at tilsætte 100 μl CT/NG IC til ét rør med CT/NG MMX. Det er ikke nødvendigt at måle Master Mix-volumen. Tilsæt 100 μl CT/NG IC til hele flasken med CT/NG MMX. Sæt låg på røret, og bland godt ved at vende røret gange. Bland ikke arbejds-master Mix i en vortex-mixer. Den lyserøde farve i CT/NG IC bruges som visuel bekræftelse af, at CT/NG IC er blevet tilsat til CT/NG MMX. Kasser det resterende CT/NG IC. Bland godt ved at vende røret gange. Arbejds- Master Mix skal opbevares ved 2 8 C og anvendes højst 4 uger efter forberedelsen. 3. Tilsæt 50 μl arbejds-master Mix i hvert A-rør med en repetitionspipette eller en pipette med aerosolfilter- eller stempelspids. Luk ikke A-rør-lågene endnu. 4. Placer den eller de A-ring(e), der indeholder arbejds-master Mix, i en genlukkelig plastikpose, og luk posen omhyggeligt. Flyt A-ringen eller -ringene til Pre-amplifikation-prøveforberedelsesområdet. Opbevar A-ringen/ -ringene med arbejds-master Mix ved 2 8 C i pre-amplifikationprøveforberedelsesområdet, indtil forberedelsen af prøver og kontroller er fuldført. Arbejds-Master Mix kan holde sig i 48 timer ved 2 8 C i A-rør, forseglet i plastikposen. 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 17/36

18 Forberedelse af prøver Udført i: Pre-amplifikation Prøveforberedelsesområdet Urinprøver 1. Sæt en etiket på et 2,0 ml rør med skruelåg til hver patientprøve. Brug ikke rør med snaplukning. 2. Tilsæt 500 μl CT/NG URINE WASH til hver af de mærkede rør. 3. Bland urinen grundigt (3 10 sekunder) i en vortex-mixer. Hvis der bruges frosne prøver, skal prøverne optøs til stuetemperatur, før de blandes i en vortex-mixer (mængder på mere end 2 ml skal optøs natten over ved 2 8 C). Fortsæt behandlingen, selv om der forekommer bundfald. Fjern forsigtigt lågene fra beholderne med urinprøve. Undgå at kontaminere handskerne med urin fra låget. Hvis handskerne kontamineres, skal de udskiftes med nye, før der fortsættes til næste prøve. 4. Tilsæt 500 μl af hver patienturinprøve til det relevant mærkede rør med CT/NG URINE WASH. Brug en ny aerosolfilterspids til hver prøve. Sæt låg på rørene, og bland grundigt i en vortex-mixer. 5. Inkubér ved 37 C i 15 minutter. 6. Centrifuger ved x g i 5 minutter. 7. Hæld supernatanten ud, og tryk hvert rør af med et separat ark trækpapir. 8. Ved hjælp af en pipette med ny aerosolfilterspids til hver prøve tilsættes 250 μl CT/NG LYS til hvert rør. Sæt låg på rørene, og bland grundigt i en vortex-mixer. 9. Inkubér rørene i 15 minutter ved stuetemperatur. 10. Ved hjælp af en pipette med ny aerosolfilterspids til hver prøve tilsættes 250 μl CT/NG DIL til hvert rør. Sæt låg på rørene, og bland grundigt i en vortex-mixer. 11. Centrifuger rørene i 10 minutter ved x g. 12. Behandlede prøver kan opbevares ved stuetemperatur i op til 2 timer, før der overføres aliquoter til A-rørene med arbejds-master Mix. De behandlede prøver skal opbevares ved 2 8 C, hvis der ikke tilsættes aliquoter til A-rørene inden 2 timer. Behandlede prøver, der opbevares ved 2 8 C, skal testes inden 7 dage. 13. Hvis de behandlede prøver blev opbevaret ved 2 8 C, skal de opvarmes til stuetemperatur og blandes godt i en vortex-mixer, før de amplificeres. Centrifuger de behandlede prøver i 10 minutter ved x g, efter de er blandet i vortex-mixeren. 14. Overfør ved hjælp af en pipette med aerosolfilterspids 50 μl af supernatanten til det relevante A-rør. Brug en ny aerosolfilterspids til hver prøve. Undgå at forstyrre pelleten (pelleten er muligvis ikke synlig). Noter patientprøvernes position på kortet over A-ringen. Sæt låg på A-rørene. 15. Resten af de behandlede prøver opbevares ved 2 8 C, hvis testen skal køres igen. Omkørsel af testen skal udføres inden 7 dage efter prøvebehandlingen. 18/36 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

19 Neisseria gonorrhoeae Podeprøver Podeprøver transporteret i AMPLICOR Specimen Transport Medium (STM) Der skal udføres detektion af CT/NG-intern kontrol ved test af disse prøver. 1. Kontroller AMPLICOR STM-prøvetransportrøret. Hvis en prøve er transporteret i et rør med en vatpind, skal prøven kasseres, og der skal indsamles en ny prøve. 2. Pipettér 1 ml CT/NG DIL til hvert transportrør ved hjælp af en separat, steril pipette til hvert rør.. 3. Sæt låg på røret. Bland i 5 10 sekunder i en vortex-mixer. 4. Inkubér ved stuetemperatur i 10 minutter. 5. Behandlede prøver kan opbevares ved stuetemperatur i op til 2 timer, før der overføres aliquoter til A-rørene med arbejds-master Mix. De behandlede prøver skal opbevares ved 2 8 C, hvis der ikke tilsættes aliquoter til A-rørene inden 2 timer. Behandlede prøver, der opbevares ved 2 8 C, skal testes inden 4 dage. 6. Hvis de behandlede prøver er opbevaret ved 2 8 C, skal de opvarmes til stuetemperatur og blandes godt i en vortex-mixer, før de amplificeres. 7. Overfør ved hjælp af en mikropipette med aerosolfilterspids 50 μl af hver behandlet prøve til det relevante A-rør. Noter patientprøvernes position på kortet over A-ringen. Sæt låg på rørene. 8. Resten af de behandlede prøver opbevares ved 2 8 C, hvis testen skal køres igen. Omkørsel af testen skal udføres inden 4 dage efter prøvebehandlingen. Podeprøver transporteret i kulturtransportmedier COBAS AMPLICOR NG-testen er godkendt til brug med 2SP- eller SPG Culture Transport Media, Bartels ChlamTrans Chlamydial Transport Medium (Trinity Biotech Plc.), M4 MicroTest Culture Transport System eller M4RT MicroTest Culture Transport System (Remel, Inc.). Brug af alternative transportmedier skal evalueres af laboratoriet. 1. Kontroller, at kulturtransportmediet indeholder en vatpind. Der er ikke udviklet specifikationer for funktionsevnen af denne test for prøver uden vatpinde. 2. Sæt en etiket på et 2,0 ml rør med skruelåg til hver patientprøve. Brug ikke rør med snaplukning. 3. Tilsæt 100 μl CT/NG LYS til de relevant mærkede 2,0 ml polypropylenrør. 4. Bland prøverne grundigt i en vortex-mixer. Hvis prøverne blev opbevaret nedfrosset, skal de optøs til stuetemperatur, før de blandes. Fjern forsigtigt lågene fra prøverørene. Undgå at kontaminere handskerne. Hvis handskerne kontamineres, skal de udskiftes med nye, før der fortsættes til næste prøve. 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 19/36

20 5. Tilsæt ved hjælp af en pipette med aerosolfilterspids 100 μl godt blandet prøve til det relevante rør med CT/NG LYS. Brug en ny aerosolfilterspids til hver prøve. Sæt låg på rørene, og bland grundigt i en vortex-mixer. 6. Inkubér ved stuetemperatur i 10 minutter. 7. Ved hjælp af en pipette med ny aerosolfilterspids til hver prøve tilsættes 200 μl CT/NG DIL til hvert rør. Sæt låg på rørene, og bland grundigt i en vortex-mixer. 8. Inkubér ved stuetemperatur i 10 minutter. 9. Behandlede prøver kan opbevares ved stuetemperatur i op til 2 timer, før der overføres aliquoter til A-rørene med arbejds-master Mix. De behandlede prøver skal opbevares ved 2 8 C, hvis der ikke tilsættes aliquoter til A-rørene inden 2 timer. Behandlede prøver, der opbevares ved 2 8 C, skal testes inden 7 dage. 10. Hvis de behandlede prøver blev opbevaret ved 2 8 C, skal de opvarmes til stuetemperatur og blandes godt i en vortex-mixer, før de amplificeres. 11. Overfør ved hjælp af en pipette med aerosolfilterspids 50 μl af hver behandlet prøve til det relevante A-rør. Brug en ny aerosolfilterspids til hver prøve. Noter patientprøvernes position på kortet over A-ringen. Sæt låg på A-rørene. 12. Resten af de behandlede prøver opbevares ved 2 8 C, hvis testen skal køres igen. Omkørsel af testen skal udføres inden 7 dage efter prøvebehandlingen. Forberedelse af kontroller Udført i: Pre-amplifikation Prøve- og kontrolforberedelsesområdet Der skal forberedes nye arbejdskontroller til hver dag, testen udføres. Arbejdskontroller kan anvendes til at forberede flere behandlede kontroller i løbet af dagen, men de skal kasseres ved dagens slutning. NG (+)-kontrollen fungerer som den positive kontrol for NG-testen. CT (+)- kontrollen fungerer som den negative kontrol for NG-testen. Del A. Arbejdskontroller: Hvis der både testes pode- og urinprøver, skal der forberedes ét sæt kontroller til hver prøvetype. Forbered følgende NG (+)- og NG ( )-arbejdskontroller. A1. Brug en steril pipettespids til at tilsætte 1 ml CT/NG DIL til hver af de to 2,0 ml polypropylen-rør med skruelåg. Mærk det ene rør med NG (+)- arbejdskontrol og det andet rør med NG ( )-arbejdskontrol. A2. Bland NG (+) C og CT (+) C i 5 sekunder i en vortex-mixer ved maksimal hastighed. Fjern forsigtigt lågene fra rørene. Undgå at kontaminere handskerne. Hvis handskerne kontamineres, skal de udskiftes med nye, før der fortsættes. A3. Tilsæt ved hjælp af en pipette med ny aerosolfilterspids 100 μl NG (+) C til røret med etiketten NG (+)-arbejdskontrol. 20/36 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 2/2009, Revision 5.0

21 Neisseria gonorrhoeae A4. Tilsæt ved hjælp af en pipette med ny aerosolfilterspids 100 μl CT (+) C til røret med etiketten NG ( ) -arbejdskontrol. A5. Sæt låg på rørene, og bland grundigt i en vortex-mixer. Opbevar kontrollen ved stuetemperatur, og kasser den ved arbejdsdagens ophør. Del B. Urinprøver og AMPLICOR STMpodeprøver: Forbered følgende behandlede NG (+)- og NG ( )-kontroller. B1. Brug en steril pipettespids til at tilsætte 250 μl CT/NG LYS til hver af de to 2,0 ml polypropylen-rør med skruelåg. Mærk det ene rør med Behandlet NG (+)-kontrol og det andet rør med Behandlet NG ( )-kontrol. B2. Tilsæt ved hjælp af en pipette med ny aerosolfilterspids 250 μl NG (+)- arbejdskontrol til røret med etiketten Behandlet NG (+)-kontrol. B3. Tilsæt ved hjælp af en pipette med ny aerosolfilterspids 250 μl NG ( )- arbejdskontrol til røret med etiketten Behandlet NG ( )-kontrol. B4. Sæt låg på rørene, og bland grundigt i en vortex-mixer. Inkubér ved stuetemperatur i 10 minutter. Opbevar kontrollen ved stuetemperatur, og kasser den ved arbejdsdagens ophør. B5. Overfør ved hjælp af en pipette med aerosolfilterspids 50 μl af hver behandlet kontrol til det relevante A-rør. Sæt låg på A-rørene, og noter positionen af de behandlede prøver og kontroller på kortet over A-ringen. B6. Flyt de forberedte prøver (patientprøver og kontroller) i A-ringene til postamplifikationsområdet. Disse PCR-forberedte prøver kan opbevares ved 2-8 C i op til 16 timer. Del C. CTM-podeprøver: Forbered følgende behandlede NG (+)- og NG ( )-kontroller. C1. Brug en steril pipettespids til at tilsætte 100 μl CT/NG LYS til hver af de to 2,0 ml polypropylen-rør med skruelåg. Mærk det ene rør med Behandlet NG (+)-kontrol og det andet rør med Behandlet NG ( )-kontrol. C2. Brug en steril pipettespids til at tilsætte 100 μl kulturtransportmedium til hvert rør med CT/NG LYS. C3. Sæt låg på rørene, og bland grundigt i en vortex-mixer. C4. Tilsæt ved hjælp af en pipette med ny aerosolfilterspids 200 μl NG (+)- arbejdskontrol til røret med etiketten Behandlet NG (+)-kontrol. C5. Tilsæt ved hjælp af en pipette med ny aerosolfilterspids 200 μl NG ( )- arbejdskontrol til røret med etiketten Behandlet NG ( )-kontrol. C6. Sæt låg på rørene, og bland grundigt i en vortex-mixer. Inkubér ved stuetemperatur i 10 minutter. Opbevar kontrollen ved stuetemperatur, og kasser den ved arbejdsdagens ophør. C7. Overfør ved hjælp af en pipette med aerosolfilterspids 50 μl af hver behandlet kontrol til det relevante A-rør. Sæt låg på A-rørene, og noter positionen af de behandlede prøver og kontroller på kortet over A-ringen. 2/2009, Revision 5.0 COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeae Test 21/36