Antibiotikapåvisning i mælk. Berte Asmussen og Tove Asmussen

Transkript

1 Antibiotikapåvisning i mælk Berte Asmussen og Tove Asmussen

2 Agenda Overblik over metoder til test for antibiotika i rå mælk Organisering af kontrollen med rå mælk i Europa Krav til antibiotikatest i Danmark Eksempler på test setup i andre lande Fremtidige udfordringer?

3 Opdeling af analysemetoder på basis af anvendelse ANVENDELSES - STED ANALYS E - TID MÅLEPRINCIPPER OG METDODE FØLSOMHED kvalitativ(screening) eller kvantitativ(konfirmation) På gård Mælketankbil Op til 10 min Receptor eller lateral flow immuno assys, sticks, Lav (pos eller neg ) Uafhængige betalingslaboratorier 2,5-3 t Mikrobiologisk vækst giver ph eller farve indikator ændring. Mikro titer plader. Medium til høj( kvantitativ ved test af fortyndningsrækker) Uafhængige betalingslaboratorierl evnedsmiddelkontrollaboratorier Ikke relevant LC-MS(Liquid Chromatography - Mass Spectrometry Høj, både kvantitativ og kvalitativ

4 Eksempler på instrumenter, der anvendes i Europa MRL ppb SNAP DUO Betastar ST Lateral flow assay 5 min 10 min DL ppb DL ppb Delvotest BR Brilliantblack Reduction test BRT Inhibitor Test DSM AiM Microbiological Microbiological method method DL ppb DL ppb Delvotest T Break Plate Microbiologic al method 3.25 h DL ppb Delvotest SP NT DA COPAN Milk Test as read by Delvotest Microbiological Accelerator method 3 h 3 h DL ppb DL ppb Trisensor Lateral Flow MCR 3 Chromatogra ELISA phy 6 min 6 min working dipstick range µg/l LC MS MALDI TOF DL ppb ANTIBIOTIC CLASS ANTIBIOTIC Penicillins Amoxicillin <2 3-4 (2.9) (NEG) POS Ampicillin (2.0) (NEG) POS Penicillin G/ Benzylpenicillin Cloxacillin Oxacillin Tetracyclines Oxytetracycline Chlortetracycline Tetracycline Doxycycline Sulfonamides Sulfamethazine Sulfathiazole Sulfadimethoxine Sulfadiazine Macrolides Tilmicosin Tylmycosin Tylosin Erythromycin > Aminoglycosidedases Neomycin Neomycin B 100 Gentamycin Kanamycin A 100, B 30 DH/Streptomycin >1000 < Spectinomycin >300 Cephalosporines Cephapirin Ceftiofur (pure) Cefoperazone Cefalexin 100 n.d. > > Cefquinome 20 <

5 Organisering/Regulering af kontrollen med rå mælk i EU EU regulativ no. 853/2004: Sætter minimum krav til rå mælkskvaliteten hvert medlemsland indretter deres eget kontrol system BRANCHE KODER: DK, UK, NO og SE Understøtter primært kunde- og industriens krav eller NATIONAL LOVGIVNING: GE(MilchGüteVerordnung) og BE Detaljeret og mere stive regulativer, hvis målsætning er at beskytte såvel mælkeproducenterne som forbrugerene

6 Belgien godkendelse af instrumenter Alle screening metoder skal testes imod specificerede kriterier 85 % af β-lactamerne (penicillins and céfalosporines) skal kunne påvises i mindst 95% af tilfældene på MRL niveau Instrumentet må max 5% negative resultater på positive prøver. Instrumenterne godkendes til: Screening på betalings laboratorier Verificering på betalingslaboratorier Screening af mælketankbiler Melle Gembloux Lier Battice

7 Tyskland - godkendelse af en methode Kun BRT (Brillant-schwarz Reductions Test)-methoden er godkendt, bruges både til screening og verificering, ofte vha retest af fortyndningsserier. Beskrives detailjeret i 64 in Amtliche Samlung von Untersuchungsverfahren. Et nyt godkendelse-system, der skal åbne op for flere metoder, er under forberedelse.

8 Eksempler på instrumenter, der anvendes i Europa MRL ppb SNAP DUO Betastar ST Lateral flow assay 5 min 10 min DL ppb DL ppb Delvotest BR Brilliantblack Reduction test BRT Inhibitor Test DSM AiM Microbiological Microbiological method method DL ppb DL ppb Delvotest T Break Plate Microbiologic al method 3.25 h DL ppb Delvotest SP NT DA COPAN Milk Test as read by Delvotest Microbiological Accelerator method 3 h 3 h DL ppb DL ppb Trisensor Lateral Flow MCR 3 Chromatogra ELISA phy 6 min 6 min working dipstick range µg/l LC MS MALDI TOF DL ppb ANTIBIOTIC CLASS ANTIBIOTIC Penicillins Amoxicillin <2 3-4 (2.9) (NEG) POS Ampicillin (2.0) (NEG) POS Penicillin G/ Benzylpenicillin Cloxacillin Oxacillin Tetracyclines Oxytetracycline Chlortetracycline Tetracycline Doxycycline Sulfonamides Sulfamethazine Sulfathiazole Sulfadimethoxine Sulfadiazine Macrolides Tilmicosin Tylmycosin Tylosin Erythromycin > Aminoglycosidedases Neomycin Neomycin B 100 Gentamycin Kanamycin A 100, B 30 DH/Streptomycin >1000 < Spectinomycin >300 Cephalosporines Cephapirin Ceftiofur (pure) Cefoperazone Cefalexin 100 n.d. > > Cefquinome 20 <

9 MRL, maximum residue level eksempel: 4 ppb for benzylpenicillin MRL er baseret på ADI (acceptable daily intake) MDI (mean daily intake Sikkerhedsfaktor (typisk 100) MRL = ADI x W / MDI x 100

10 EU hygiejne direktivet: MRLs (in bovine milk) of antibiotics from Annex I of Council Regulation 2377/90/EC Eksempler MRL er defineret på dyreniveau!!

11 4 ppb, how much is that? One part per billion (ppb) denotes one part per 1,000,000,000 parts, one part in 10 9, 1/1,000,000,000 * 100% = % (or 1% = 10,000,000 ppb) and a value of This is equivalent to one drop of water diluted into 250 chemical drums (50 m 3 ), or about three seconds out of a century.

12 Status, antibiotika i mælk: Ikke giftigt i traditionel forstand! MRL tager højde for allergi og sikrer ost og surmælksprodukter af høj kvalitet! EU hygiejne direktiv sikrer gode og sunde mælkeprodukter MEN er det stadig godt nok? Stigende udfordringer med resistente bakterier Mere og mere følsomme analysemetoder. Stigende offentligt fokus. Men vi skal huske. Store omkostninger ved positive fund Naturlige inhibitorer er en (sjælden) mulighed! At have fuld kontrol over al logistikken omkring prøverne.

13 Udfordringen! Vi ønsker ikke antibiotika i vores mælk! Vi vil gerne udnytte fordelene ved forbedrede analysemetoder! Rutine metoder ned til ppb for benzylpenicillin kan snart blive virkelighed! Men Naturlige inhibitorer kan få øget indflydelse ved lavere niveauer! Logistikken omkring prøverne får øget betydning Hvilke procedurer anvendes i andre lande?

14 Procedurer i Danmark Test på alle tankbiler ved aflæsning Ugentlig test af en tilfældig tankmælksprøve med Delvotest T Efter konfirmering med Delvotest T, udføres LC MS analyse for bestemmelse af den specifikke agent Fradrag i mælkeprisen hvis prøven findes positiv.

15 Inhibitor test, rå mælk, i Norge Alle tankbiler: Testes med SNAP Betalactame ST ved ankomst til mejeriet. Resultatet skal være negativt. (MRL s anvendes ikke). Der udføres organoleptisk test. Ingen off flavor accepteres. Der analyseres for totakim. Skal være under IBC/ml (= CFU/ml) Hvis alle tre parametre er indenfor grænserne kan der læsses af i silo tank Hvis ikke testes prøver fra hver deltank. Besætningsprøver (som altid udtages på gården) anvendes til at finde den skyldige. Der udføres ikke rutinemæssigt inhibitor test på tankmælk!

16 Inhibitor test, rå mælk, i Belgien Alle tankbiler testes inden aflæsning ved mejeri Prøver fra alle afhentninger testes med Delvotest T og automatisk aflæsning Positive prøver konfirmeres med andre (godkendte) metoder indtil den specifikke inhibitor er fundet. Fradragsskema: Benzylpenizillin, hvis over 4 ppb, 100% penalization point Benzylpenizillin, mellem 3-4 ppb, 0 100% penalization point Andre typer antibiotika, 100% penalization fra DL af mindst gode metode Leverandør informeres om alle prøver med tegn på positivt fund.

17 Inhibitor test i rå mælk in Bayern Næsten alle tankbiler testes inden aflæsning. Diverse hurtig tests (ofte defineret af kunden) anvendes Hver besætning testes ugentligt BRT metoden (Brilliant Schwartz Test) og instrumental aflæsning Positive resultater konfirmeres med fortyndinger og det undersøges om betalactam og/eller andre inhibitorer er tilstede. Cut off grænse for fødevarer er 4 ppb (for pen G) (EU hygiene dir. MGvO) Cut off grænse for betaling generelt i Bayern er 4ppb (for pen G) For alle positive prøver kvalificeres og kvantificeres resultater med MCR 3 methoden, eller med LC MS. I Bayern har de udviklet BRT metoden så den kan køre på tre sensitivitets niveauer!

18 Inhibitor Testing in Milk Payment in the Netherlands (all individual supplier samples) Delvotest T heating 10 min 80 C Delvotest T Plate method* - - P** O** + Plate method with comparison of inhibition zone against zone with 2,1 µg/kg benzylpenicillin and group identification. Penalty of about 0,40/kg when inhibition zone is exceeding (P = ß-lactam, O = other) NB: Tankbiler testes inden aflæsning ** Since 1 April 2015 all penalty cases are analysed with LC-MS/MS to check whether an EU MRL is exceeded. If so, the dairy reports to the Netherlands Food and Consumer Product Safety Authority

19 Take Home Messages! Analysemetoderne bliver bedre og bedre Omkostningerne er høje ved positive fund! Der er behov for (yderligere) omhu når man sænker grænserne for fradrag! Vil test på gårdniveau blive relevant i fremtiden? % 0,16 0,12 0,08 0,04 0,00 % penalized individual collections in NL