PLATELIA HSV 1 IgG 96 TEST 72820. KVALITATIV PÅVISNING AF IgG-ANTISTOFFER MOD HSV 1 I HUMANT SERUM ELLER PLASMA VED ENZYMIMMUNANALYSE

PLATELIA HSV 1 IgG 96 TEST 72820 KVALITATIV PÅVISNING AF IgG-ANTISTOFFER MOD HSV 1 I HUMANT SERUM ELLER PLASMA VED ENZYMIMMUNANALYSE

1. TILSIGTET ANVENDELSE Platelia HSV IgG er en indirekte ELISA-immunanalyse til kvalitativ påvisning af IgG-antistoffer mod herpes simplex virus type 1 i humant serum eller plasma. 2. KLINISK VÆRDI Herpes simplex virus (HSV) er et alment humant patogen, der forekommer i hele verden. Der er beskrevet to serologiske undertyper af HSV: HSV-1 og HSV-2. HSV-1 findes primært i forbindelse med infektion i tunge, mund, læber, svælg samt øjne, hvorimod HSV-2 primært findes i forbindelse med genital og neonatal infektion. Dog kan begge typer forårsage genitale infektioner, og HSV-1 anses stadig oftere som årsag til genitale symptomer. Herpes simplex virus overføres gennem direkte kontakt med sekret fra en smittet person, som på overførselstidspunktet ikke nødvendigvis udviser sygdomssymptomer. Faktum er, at størstedelen af genitale infektioner overføres i tilfælde, hvor der ikke udvises symptomer. Primær infektion med HSV kan ske i alle aldre og påvirke nyfødte, børn og voksne. Efter primær infektion vil HSV danne en livsvarig latent tilstand i sensoriske nerveganglier, hvilket medfører efterfølgende tilbagevenden af symptomer, når latent virus genaktiveres. Gravide, som får HSV type-1 eller type-2 under svangerskab, kan overføre virusset til barnet før fødselen eller under fødselen. Livmoderinfektioner forbindes med spontan abort eller for tidlig fødsel. Den største risiko for neonatal herpes er for spædbørn, hvor moderen smittes med genital infektion i det sidste trimester af graviditeten. Kongenital og neonatal HSV kan ske gennem moderens primære eller tilbagevendende, symptomatisk eller asymptomatisk, HSV-infektion og kan medføre hud-, øjen- eller mundinfektion samt skader på centralnervesystemet. Ved primær HSV-infektion ses IgM-antistoffer oftest mellem tredje og syvende dag efter symptomernes start. IgM-antistoftiter topper inden for fire til seks uger og falder oftest til et upåviseligt niveau efter to måneder. IgM-antistoffer mod HSV kan nogle gange findes i tilbagevendende infektioner. Dog er produktion og påvisning af anti-hsv-igm-antistoffer hos patienter med tilbagevendende infektioner mindre forudsigelig og kan være relateret til, hvor alvorlig infektionen er. IgG-antistoffer mod HSV forekommer ofte en eller to uger efter infektionsstart og forbliver på forskellige niveauer resten af livet. En række serologiske procedurer er udviklet til at påvise antistoffer mod HSV. Disse inkluderer komplementfiksering, indirekte immunfluorescerende antistof, plaqueneutralisering samt ELISA. Sammenlignet med andre serologiske test kan ELISA være en meget specifik, sensitiv og pålidelig metode til påvisning af antistoffer mod HSV. Dog anvender størstedelen af disse serologiske metoder til vurdering af HSV-sero-status viralt lysat som antigener. 116

På grund af betydelig krydsreaktivitet mellem HSV-1 og HSV-2 og den meget høje udbredelse af HSV-1-infektion er de virale lysatanalyser ikke med sikkerhed i stand til at skelne mellem HSV-1-infektioner og HSV-2-infektioner (2). For nylig er der udviklet HSV type-specifikke serologiske analyser, hvor de væsentlige forskelle mellem gg-1-protein for HSV-1 og gg-2 for HSV-2 udnyttes.(2) Platelia TM HSV 1 IgG-sættet bruger renset rekombinat, typespecifik gg-1- antigen immobiliseret på mikrobrønde for at sikre bedst mulig specificitet samt for korrekt at kunne skelne mellem HSV 1-infektion og HSV 2-infektion. 3. PRINCIP Platelia HSV 1 IgG er en kvalitativ test til påvisning af IgG-antistoffer mod HSV 1 i humant serum eller plasma ved hjælp af en indirekte ELISA-immunenzymmetode. Rekombinante gg-1-antigener bruges til coating af mikropladen. Et polyklonalt antistof mærket med peroxydase, som er specifikt for humane gammakæder (anti-igg), anvendes som konjugat. Testen omfatter følgende trin: Trin 1 Patientprøver og kontroller fortyndes i forholdet 1:21 og fordeles derpå i brøndene på mikropladen. Under denne inkubation med en varighed på 1 time ved 37 C, vil IgG-antistoffet mod HSV 1 i prøven binde sig til HSV 1-antigenet coated på mikropladebrøndene. Efter inkubation fjernes ubundne nonspecifikke antistoffer og andre serumproteiner ved vask. Trin 2 Konjugatet (peroxydasemærket, polyklonalt antistof, der er specifikt for humane gammakæder) tilsættes mikropladebrøndene. Under denne inkubation med en varighed på en time ved 37 C, vil det mærkede monoklonale antistof binde sig til serummet IgG bundet af HSV 1-antigenet. Efter endt inkubation fjernes det ubundne konjugat ved vask. Trin 3 Tilstedeværelsen af immunkomplekser (HSV 1-antigen, IgG-antistoffer mod HSV 1, anti-igg-konjugat) vises ved tilsætning af en enzymudviklingsopløsning til hver brønd. Trin 4 Efter inkubation ved stuetemperatur (+18-30 C) standses enzymreak-tionen ved tilsætning af 1N-svovlsyreopløsning. Den aflæsning af optisk densitet, der opnås med et spektrofotometer indstillet til 450/620 nm, er proportional med mængden af IgG-antistoffer mod HSV 1 i prøven. 117

4. PRODUKTOPLYSNINGER De leverede reagensmængder er afpasset, så de muliggør 96 test. Alle reagenser er udelukkende beregnet til in vitro-diagnosticering. Etiket Reagenstype Præsentation R1 Microplate Mikroplade (brugsklar): 12 strimler a 8 aftagelige brønde, coated med gg-1 rekombinant antigen. 1 R2 R3 Concentrated Koncentreret vaskeopløsning (20x) : Washing Tampon TRIS-NaCl (ph 7,4), 2 % Tween 20 Solution (20x) Konserveringsmiddel: < 1,5% ProClin 300 Negative Control Negativ kontrol : Negativt humant serum for IgG-antistoffer mod HSV 1, og negativt for HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: < 1,5% ProClin 300 R4 Calibrator Kalibrator : Humant serum reaktivt for IgG-antistoffer mod HSV 1, og negativt for HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: < 1,5% ProClin 300 R5 R6 Positive Control Conjugate (51x) Positiv kontrol : Humant serum reaktivt for IgG-antistoffer mod HSV 1, og negativt for HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: < 1,5% ProClin 300 Konjugat (51x) : Polyklonalt antistof fra geder mod humane gammakæder koblet til peroxydase fra peberrod Konserveringsmiddel: < 1,5% ProClin 300 R7 Diluent Fortynder til prøver og konjugat (brugsklart): Tris-NaCl (ph 7,7), serum fra kalvefoster, fenolrød Konserveringsmiddel: < 1,5% ProClin 300 1 x 70 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,7 ml 1 x 80 ml 118

R9 R10 Etiket Reagenstype Præsentation Chromogen Kromogen (brugsklar) : 1 x 28 ml TMB 3.3.5.5 tetramethylbenzidin (< 0.1%), H 2O 2 (<1%) Stopping Solution Stopopløsning (brugsklar) : 1 x 28 ml 1N-svovlsyreopløsning Pladeforsegling 4 Opbevaringsbetingelser og udløbsdato fremgår af æsken. 5. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Resultaternes pålidelighed afhænger af en korrekt implementering af følgende regler for god laboratoriepraksis: Brug ikke reagenser efter udløbsdatoen. Undgå sammenblanding eller nogen form for forbindelse mellem reagenser fra forskellige partier i samme kørsel. BEMÆRK: Det gælder for vaskeopløsning (R2, etiketidentifikation: 20x, grøn), kromogen (R9, etiketidentifikation: TMB, turkisfarvet) og stopopløsning (R10, etiketidentifikation: 1N, rød), at det er muligt at anvende andre partier end de indeholdte i dette sæt under forudsætning af, at reagenserne er fuldstændig tilsvarende, og at samme parti anvendes i hele kørslen. BEMÆRK: Desuden kan vaskeopløsningen (R2 identificiret 20x med grøn skrift på etiketten) blandes med en af de to andre vaskeopløsninger indeholdt i de forskellige Bio-Rad reagenskit (R2 identificiret 10x med blå skrift eller 10x med orangefarvet skrift på etiketten), når de rekonstitueres korrekt og på betingelse af at der kun bruges én blanding til et bestemt testforløb. Vent 30 minutter før brug, så reagenserne kan stabilisere sig ved stuetemperatur (+18-30 C). Rekonstituer eller fortynd reagenserne forsigtigt for at undgå kontaminering. Undgå at udføre testen i nærheden af reaktive dampe (syre, alkaliske dampe og aldehyddampe) eller støv, der kan påvirke konjugatets enzymaktivitet. Benyt engangsmateriale, eller hvis dette ikke er muligt, udstyr af glas, som er vasket grundigt og skyllet med demineraliseret vand. 119

Grundig afvaskning af mikropladen er et afgørende trin i proceduren: Udfør det anbefalede antal afvaskninger, og sørg for, at alle brønde bliver helt fyldt og derefter helt tømt. Ukorrekte afvaskninger kan medføre unøjagtige resultater. Undgå, at mikropladen tørrer mellem afvaskningerne og fordelingen af reagenset. Brug aldrig den samme beholder til at fordele konjugat- og udviklingsopløsning. Enzymreaktionen er meget følsom over for metaller eller metalioner. Undgå derfor, at metalelementer kommer i berøring med de forskellige opløsninger med konjugat eller kromogen. Kromogenopløsningen (R9) bør være farveløs. Hvis farven bliver blå, kan reagenset ikke anvendes og skal udskiftes. Brug en ny pipettespids til hver prøve. Kontrollér, at pipetterne og andet udstyr er i orden og fungerer korrekt. SUNDHEDS- OG SIKKERHEDSMÆSSIGE FORHOLDSREGLER Materiale af human oprindelse, der er brugt til fremstilling af reagenser, er blevet testet og fundet ikke-reaktivt over for hepatitis B-overfladeantigen (HBsAg), antistoffer mod hepatitis C-virus (anti-hcv) samt antistoffer mod HIV 1 og HIV 2. Eftersom ingen metode kan give fuld garanti for fravær af smitsomme stoffer, skal håndtere reagenser af human oprindelse og patientprøverne håndteres som potentielt smittefarlige. Alt materiale, herunder vaskeopløsninger, der kommer i direkte kontakt med prøver og reagenser, som indeholder materiale af human oprindelse, skal betragtes som potentielt smittefarligt. Brug engangshandsker ved håndtering af prøver og reagenser. Undgå at pipettere med munden. Undgå at spilde prøver eller opløsninger, der indeholder prøvemateriale. Hvis der spildes materiale, skal der renses efter med blegemiddel i en opløsning på 10 %. Ved spild af syre skal syren først neutraliseres med natriumbikarbonat. Derefter skal der foretages rengøring med blegemiddel i en 10 %-opløsning og aftørring med sugende papir. Det materiale, der anvendes til rengøringen, skal bortskaffes i en beholder til kontamineret affald. Patientprøver, reagenser med materiale af human oprindelse samt kontaminerede materialer og produkter skal dekontamineres før bortskaffelse: - enten ved nedsænkning i blegemiddel med en endelig koncentration på 5 % natriumhypoklorit i 30 minutter, - eller ved autoklavering ved 121 C i mindst to timer. 120

ADVARSEL! Benyt ikke opløsninger, der indeholder natriumhypoklorit, i autoklaven. Undgå, at hud og slimhinder kommer i kontakt med kromogen- og stopopløsningen (fare for forgiftning, irritation eller forbrændinger). Kemiske og biologiske rester skal håndteres og bortskaffes i henhold til god laboratoriepraksis. Alle reagenser i sættet er udelukkende beregnet til in vitrodiagnosticering. Xi - Irriterende Advarsel! Nogle af reagenserne indeholder Proclin TM 300 < 1,5% R43: Kan fremkalde irritation ved hudkontakt. S28-37: Efter hudkontakt afvaskes stoffet straks med rigeligt vand og sæbe. Benyt egnede handsker. 6. PRØVETAGNING, FORBEREDELSE OG OPBEVARING 1. Serum og plasma (EDTA, heparin eller citrat) anbefales som prøvetyper. 2. Overhold følgende anbefalinger for håndtering, behandling og opbevaring af blodprøver: Tag alle blodprøver under overholdelse af de generelle forholdsregler vedrørende venepunktur. Lad serumprøverne koagulere fuldstændigt, før de centrifugeres. Sørg for, at rørene altid er lukkede. Adskil serummet eller plasmaet fra de koagulerede eller røde blodlegemer i et tæt tillukket opbevaringsrør efter centrifugeringen. Prøverne kan opbevares ved +2-8 C, hvis testen udføres inden for 7 dage. Hvis testen ikke udføres inden for 7 dage, eller hvis prøverne skal transporteres, skal de nedfryses til mindst -20 C. Prøver, der har været optøet mere end fem gange, må ikke anvendes. Tidligere nedfrosne prøver bør omrøres grundigt (Vortex) efter optøning, før testen udføres. 3. Prøver, der indeholder op til 90 g/l albumin eller 100 mg/l ukonjugeret bilirubin, lipæmiske prøver, der indeholder hvad der svarer til 36 g/l triolein (triglycerid), og hæmolyserede prøver, der indeholder op til 10 g/l hæmoglobin, påvirker ikke resultaterne. 4. Prøverne må ikke opvarmes. 7. ANALYSEPROCEDURE 7.1 NØDVENDIGE MATERIALER, DER IKKE MEDFØLGER Vortex-mixer. Mikropladelæser med filtre på 450 nm og 620 nm (*). Mikropladeinkubator termostatindstillet til 37±1 C (*). 121

Automatisk, halvautomatisk eller manuel mikropladevasker (*). Sterilt destilleret eller demineraliseret vand. Engangshandsker. Beskyttelsesbriller. Sugende papir. Automatiske eller halvautomatiske, justerbare eller forudindstillede pipetter eller multipipetter til måling og dispensering af 10-1000 µl samt 1, 2 og 10 ml. Måleglas med en volumen på 25 ml, 50 ml, 100 ml og 1000 ml. Natriumhypoklorit (blegemiddel) og natriumbikarbonat. Beholder til farligt biologisk affald. Engangsrør. (*) Kontakt vores tekniske afdeling for at få detaljerede oplysninger om det anbefalede udstyr. 7.2 REKONSTITUERING AF REAGENSER R1: Opbevar reagenset i 30 minutter ved stuetemperatur (+18-30 C), før posen åbnes. Tag transportbakken ud, læg straks ubrugte teststrimler tilbage i posen, og kontrollér, at posen indeholder tørremiddel. Forsegl omhyggeligt posen igen, og opbevar den ved +2-8 C. R2: Fortynd vaskeopløsningen R2 i destilleret vand i forholdet 1:20, fx 50 ml R2 og 950 ml destilleret vand, for at få den brugsklare vaskeopløsning. Klargør 350 ml fortyndet vaskeopløsning til én plade med 12 strimler, hvis der foretages manuel vask. R3, R4, R5: Fortynd med fortynder (R7) i forholdet 1:21 (eksempel: 15 µl R3 + 300 µl R7). R6+R7: Konjugatet (R6) er koncentreret 51 gange og skal homogeniseres før anvendelse. Fortynd konjugatet med fortynderen R7 i forholdet 1:51. Til én plade fortyndes 0,5 ml konjugat (R6) med 25 ml fortynder (R7). Del disse mængder med 5 for at få den volumen, der er påkrævet til 2 strimler. 7.3 OPBEVARING OG VALIDITET AF ÅBNE OG/ELLER REKONSTITUEREDE REAGENSER Sættet skal opbevares ved +2-8 C. Hvis opbevaring sker ved +2-8 C før åbning, kan hver komponent anvendes frem til udløbsdatoen, der fremgår af yderetiketten på sættet. R1: Efter åbning er strimlerne stabile i op til 8 uger, hvis de opbevares ved +2-8 C i den samme omhyggeligt lukkede pose (kontrollér, at der findes tørremiddel). 122

R2: Efter fortynding kan vaskeopløsningen gemmes i 2 uger ved +2 30 C. Når den koncentrerede vaskeopløsning opbevares ved +2 30 C, er den stabil indtil udløbsdatoen på etiketten, forudsat der ikke forekommer kontamination. R3, R4, R5, R6, R7: Efter åbning og uden kontamination er reagenserne stabile i op til 8 uger ved opbevaring ved +2-8 C. R6+R7: Efter fortynding er konjungatopløsningen stabil i 8 timer ved stuetemperatur (+18-30 C) eller i 24 timer ved +2-8 C. R9: Efter åbning og uden kontamination er reagenset stabilt i op til 8 uger ved opbevaring ved +2-8 C. R10: Efter åbning og uden kontamination er reagenset stabilt indtil udløbsdatoen på etiketten ved opbevaring ved +2-8 C. 7.4 PROCEDURE Følg analyseproceduren og reglerne for god laboratoriepraksis nøje. Lad reagenserne stabilisere sig ved stuetemperatur (+18-30 C), før de anvendes. Anvendelsen af aftagelige brønde kræver en særlig opmærksomhed under håndtering. Benyt negative og positive kontroller samt cut-off-kontroller ved hver kørsel for at validere analyseresultaterne. 1. Opret en præcis fordelings- og identifikationsplan for kontroller og patientprøver. 2. Klargør den fortyndede vaskeopløsning (R2) (se afsnit 7.2). 3. Tag transportbakken og strimlerne (R1) ud af beskyttelsesposen (se afsnit 7.2). 4. Fortynd kontrollerne R3 og R5, kalibrator R4 samt patientprøverne (S1, S2 ) med fortynder (R7) for at opnå en 1:21-fortynding: 15 µl prøve og 300 µl fortynder (R7). Bland de fortyndede prøver i Vortex-mixeren. 5. Følg den anviste rækkefølge herunder, hæld 200 µl fortyndet kontroller, kalibrator og patientprøver i hver brønd: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A R3 S5 S13 B R4 S6 C R4 S7 D R5 S8 E S1 S9 F S2 S10 G S3 S11 H S4 S12 123

6. Dæk mikropladen med selvklæbende pladeforsegling, som presses fast ned mod pladen, så den slutter helt til overalt. Inkuber øjeblikkeligt mikropladerne i et termostatstyret vandbad eller i en tør inkubator i 1 time ± 5 minutter ved 37 C ± 1 C. 7. Fjern den selvklæbende pladeforsegling efter første inkubationsperiode. Sug indholdet af alle brønde op i en beholder til biologisk farligt affald (en beholder med natriumhypoklorit). Vask mikropladen 5 gange med 350 µl vaskeopløsning (R2). Vend mikropladen på hovedet, og dup den forsigtigt mod det sugende papir for at fjerne resterende væske. 8. Klargør konjugat-arbejdsopløsningen (R6+R7) (se afsnit 7.2). Fordel straks 200 µl konjugatopløsning (R6+R7) i alle brøndene. Opløsningen skal rystes forsigtigt før brug. 9. Dæk mikropladen med selvklæbende pladeforsegling, som presses fast ned mod pladen, så den slutter helt til overalt. Inkuber øjeblikkeligt mikropladerne i et termostatstyret vandbad eller i en tør inkubator i 1 time ± 5 minutter ved 37 C ± 1 C. 10. Fjern den selvklæbende pladeforsegling efter anden inkubationsperiode. Sug indholdet af alle brønde op i en beholder til biologisk farligt affald (en beholder med natriumhypoklorit). Vask mikropladen 5 gange med 350 µl vaskeopløsning (R2). Vend mikropladen på hovedet, og dup den forsigtigt mod det sugende papir for at fjerne resterende væske. 11. Fordel hurtigt og i mørke 200 µl kromogenopløsning (R9) i hver brønd. Lad reaktionen foregå i mørke i 30 ± 5 minutter ved stuetemperatur (+18-30 C). Benyt ikke selvklæbende pladeforsegling til denne inkubation. 12. Stands enzymreaktionen ved at tilsætte 100 µl stopopløsning (R10) til hver brønd. Benyt samme rækkefølge og fordelingshastighed som for udviklingsopløsningen. 13. Tør undersiden af pladen omhyggeligt af. Aflæs den optiske densitet ved 450/620 nm ved hjælp af en mikropladelæser inden for 30 minutter efter standsning af reaktionen. Strimlerne skal opbevares i mørke før aflæsning. 14. Kontrollér, at der er overensstemmelse mellem aflæsningen, fordelingsplanen for pladen og prøverne, før resultaterne rapporteres. 8. BEREGNING OG FORTOLKNING AF RESULTATER 8.1 BEREGNING AF CUT-OFF-VÆRDI (CO) Cut-off-værdien (CO) svarer til middelværdien for de optiske densiteter (OD) for kalibratorduplikaterne (R4): CO = middelværdi af OD for R4. 124

8.2 BEREGNING AF PRØVEFORHOLD Prøveresultatet udtrykkes i forhold ved hjælp af følgende formel: Prøveforhold = Prøve OD/CO 8.3 KVALITETSKONTROL Medtag alle kontrollerne for hver mikroplade og for hver kørsel, og analysér de opnåede resultater. Nedenstående kriterier skal opfyldes ved validering af analysen: Værdier for optisk densitet: - CO 0,300-0,80 x CO < OD R4 replikat 1 < 1,20 x CO - 0,80 x CO < OD R4 replikat 2 < 1,20 x CO (Individuel OD for hvert kalibratorduplikat (R4) må ikke afvige mere end 20 % fra CO-værdien). Optisk densitetsforhold: - Forhold R3 (OD R3 / CO) 0,50 - Forhold R5 (OD R5 / CO) 1,80 Hvis kriterierne for kvalitetskontrollen ikke er opfyldt, skal testkørslen gentages. 8.4 FORTOLKNING AF RESULTATER Prøves forhold Resultat Fortolkning Forhold < 0,90 Negativ Prøven betragtes som ikke-reaktiv for tilstedeværelse af IgG-antistoffer mod HSV 1. 0,90 Forhold < 1,10 Tvivlsom Prøven betragtes som tvivlsom for tilstedeværelse af IgG-antistoffer mod HSV 1. Resultatet skal bekræftes ved ny test af en anden prøve udtaget mindst 4 til 12 uger efter den første. Forhold 1,10 Positiv Prøven betragtes som reaktiv for tilstedeværelse af IgGantistoffer mod HSV 1. Hvis der er mistanke om en infektion, kan supplerende serologiske test som påvisning af IgM anti-hsv-antistoffer være nyttige til bekræftelse af diagnosen. Speciel opmærsomhed må tages til de andre elementer i diagnosen, hvis resultater ligger tæt på det grå område. 8.5 HJÆLP TIL FEJLFINDING Reaktioner, der ikke kan valideres eller bekræftes ved gentagelse, skyldes ofte: Utilstrækkelig afvaskning af mikroplader. Kontamination af negative prøver med serum eller plasma med høj antistoftiter. 125

Kontamination af udviklingsopløsning med kemiske oxideringsmidler (blegemiddel, metalioner osv.) Kontamination af stopopløsning. 9. YDEEVNE Platelia HSV 1 IgG blev evalueret på 2 forskellige centre på i alt 726 friske eller frosne prøver. Resulterne med Platelia HSV 1 IgG blev sammenlignet med resultaterne indhentet med en anden kommerciel EIA analyse. 9.1 PREVALENS Bestemmelsen af prevalensen af IgG antistoffer til Herpes Simplex Virus af type 1 i humant serum blev vurderet ved hjælp af et panel med 180 prøver fra gravide kvinder. Resultaterne er følgende: 37 negative, en tvivlsom og 142 positive sera. Prevalensen ved brug af Platelia HSV 1 IgG analysen er således bestemt til 78.8% (142/180). 9.2 SPECIFICITET Specificiteten blev vurderet på i alt 303 prøver: på center 1, et panel på 156 prøver fra bloddonorer, gravide kvinder og kommercielle paneler (CDC (A) /BBI (B) ). På center 2, et panel på 147 prøver fra hospitalsindlagte patienter. På begge centre blev prøverne valgt på grundlag af negative resultater opnået med en kommerciel EIA analyse og anset som reference. Antal prøver Negativ Tvivlsom (1) Positiv Specificitet Center 1 N = 156 154 1 1 Center 2 N = 147 146 0 1 I alt N = 303 300 1 2 99,4% (154/155) [96,5%-100%] 99,3% (146/147) [96,3%-100%] 99,3% (300/302) [97,6%-99,9%] (1) tvivlsomme resultater blev ikke medtaget i beregningen af specificitet IC 95%: 95% tillidsinterval. (A): Center for Disease Control, (B) BBI blandet titer HSV panel 126

9.3 SENSITIVITET Sensitiviteten blev vurderet på i alt 423 prøver: på center 1, et panel på 270 prøver fra bloddonorer, gravide kvinder og kommercielle paneler (CDC (A) /BBI (B) ). på center 2, et panel på 153 prøver fra hospitalsindlagte patienter. På begge centre blev prøverne valgt på grundlag af positive resultater opnået med en kommerciel EIA analyse og anset som reference. Antal prøver Negativ Tvivlsom (1) Positiv Sensivitet Center 1 N = 270 2 3 265 Center 2 N = 153 3 0 150 I alt N = 423 5 3 415 99,3% (265/267) [97,3%-99,9%] 98,0% (150/153) [94,4%-99,6%] 98,8% (415/420) [97,2%-99,6%] (1) tvivlsomme resultater blev ikke medtaget i beregningen af sensitivitet 9.4 PRÆCISION Præcision intra-analyse (gentagelighed): For at evaluere gentageligheden intra-analyse blev en negativ, en tvivlsom og en positiv prøve testet 30 gange i en samme serie. Ratioen (Prøve OD / CO) blev bestemt for hver prøve. Middel ratio, standard afvigelse (SD) og variationskoefficient (%CV) for hver af de tre prøver er anført i skemaet nedenfor: N=30 Negativ prøve Tvivlsom prøve Lav positiv prøve Ratio (Prøve OD / Cut-Off værdi) Middel 0,72 1,05 1,36 SD 0,08 0,06 0,08 % CV 10,58% 5,33% 5,91% 127

Præcision inter-analyse (gentagelighed): For at evaluere gentageligheden inter-analyse blev en negativ og tre positive prøver (lav, middel, høj positiv) testet dobbelt i to serier per dag over en 20 dages periode. Ratioen (Prøve OD / CO) blev bestemt for hver prøve. Middel ratio, standard afvigelse (SD) og variationskoefficient (%CV) for hver af de fire prøver er anført i skemaet nedenfor: N=80 Negativ prøve Lav positiv prøve Middel positiv prøve Høj positiv prøve Ratio (Prøve OD / Cut-Off value) Middel 0,24 1,69 2,67 3,64 SD 0,03 0,17 0,30 0,29 % CV 12,1% 10,3% 11,1% 7,9% 9.5 REAKTIVITET PÅ TVÆRS 110 prøver med egenskaber, der potentielt kunne føre til non specifikke reaktioner, blev testet med Platelia HSV 1 IgG analysen. Resultaterne er vist i følgende skema: Panel Antal prøver Tvivlsom (1) Positiv Bekræftelse af positive resultater ved reference serologi VZV 10 0 7 7/7 CMV 10 0 6 6/6 EBV 10 0 7 7/7 Reumatisk faktor 13 0 8 8/8 Heterofile antistoffer (HAMA) Antinukleære antistoffer (ANA) 20 0 13 13/13 7 0 4 4/4 HHV 6 10 0 9 9/9 128

Panel Antal prøver Tvivlsom (1) Positiv Bekræftelse af positive resultater ved reference serologi HIV 10 0 8 8/8 Fåresyge 10 0 6 6/6 Mæslinger 10 0 6 6/6 I ALT 110 1 74 74/74 (1) tvivlsomme resultater blev ikke medtaget i beregningen af reaktivitet på tværs. Alle de positive resultater med Platelia HSV 1 IgG analysen blev bekræftet positive med det kommercialiserede EIA kit. 10. PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Diagnosen infektion med herpes simplex virus kan kun stilles på grundlag af en kombination af kliniske og biologiske data. Resultatet af en enkelt test til påvisning af IgG anti-hsv-antistoffer er ikke tilstrækkeligt bevis for diagnosen infektion med herpes simplex virus. 11. PRODUCENTENS KVALITETSKONTROL Alle producerede reagenser fremstilles i overensstemmelse med vores kvalitetssikringssystem, lige fra modtagelsen af råmaterialer til markedsføringen af slutproduktet. Hvert parti gennemgår kvalitetskontrol og frigives kun til salg, hvis det opfylder de foruddefinerede kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert parti opbevares hos Bio-Rad. 129

12. REFERENCES 1. Centers for Disease Control and Prevention. Sexually transmitted diseases treatment guidelines 2002. MMWR 2002:51 (No. RR-6). 2. Arvin, A, C Prober. Herpes Simplex Viruses. 876-883. In Murray, P, E Baron, M Pfaller, F Tenover, and R Yolkenet (eds.). Manual of Clinical Microbiology. 6th Ed. ASM, Washington, D.C.

130

131

Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 02/2008 Fax.: +33 (0) 1 47 41 91 33 code: 881028