BBL Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) o BBL MacConkey II Aar - I Plate Rev. 12 Oktober 2015 KVALITETSKONTROLPROCEDURER (Valfrit) I II INDLEDNING Trypticase soja-aar med 5 % fåreblod anvendes til at dyrke kræsne oranismer o til anskueliørelse af hæmolytiske reaktioner. MacConkey II aar er et selektivt o differentierende medium til påvisnin af coliforme oranismer o enteriske patoener. FUNKTIONSTESTPROCEDURE A. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood 1. Inokulér repræsentative prøver med fortyndiner af de kulturer, der er anført herunder. a. Ved hjælp af en volumetrisk pipette eller linende metode afpipetteres 0,1 ml af en fortyndin, der iver 30 til 300 CFU til hver plade, o spredes-inokuleres med en steril lasspreder. b. Inkubér Staphylococcus o Escherichia stammer ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære, o Streptococcus stammer ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære suppleret med kuldioxid. 2. Undersø pladerne efter 18 til 24 h for vækst, kolonistørrelse o hæmolytiske reaktioner. 3. Forventede resultater CLSI kontroloranismer (ATCC stammer) *Streptococcus pyoenes... Vækst, betahæmolyse (19615) *Streptococcus pneumoniae... Vækst, alphahæmolyse (6305) *Staphylococcus aureus... Vækst (25923) *Escherichia coli...... Vækst (25922) *Anbefalet oranismestamme til bruerkvalitetskontrol. B. MacConkey II Aar 1. Inokulér repræsentative prøver med fortyndiner af de kulturer, der er anført herunder. a. Udstry isolerinspladerne med 18- til 24-h bouillonkultur fortyndet til 10-1. For Proteus mirabilis skal der laves to ekstra ti-anes fortyndiner inden udstrynin. b. Inkubér pladerne ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære. c. Inkludér Trypticase soja-aar med 5 % fåreblodsplader som nonselektive kontroller for alle oranismer. 2. Undersø pladerne efter 18 til 24 h for vækst, kolonistørrelse, pimenterin o selektivitet. 3. Forventede resultater CLSI kontroloranismer (ATCC stammer) *Escherichia coli...... Vækst, lyserøde kolonier (25922) *Proteus mirabilis...... Vækst, farveløse kolonier, hæmnin af sværmnin (delvis) (12453) *Salmonella enterica...... Vækst, farveløse kolonier subsp. enterica serotype Typhimurium (14028) *Enterococcus faecalis... Hæmnin (delvis) (29212) 1
Ekstra stammer anvendt Pseudomonas aeruinosa... Vækst, lyserøde til rønne kolonier ATCC 10145 Shiella dysenteriae...... Vækst, farveløse til lyserødee kolonier ATCC 9361 *Anbefalet oranismestamme til bruerkvalitetskontrol. III YDERLIGERE KVALITETSKONTROL 1. Undersø pladerne, som beskrevet under Produktnedbrydnin. 2. Undersø repræsentative plader visuelt for at sikre, at eventuelle eksisterende fysiske defekter ikke vil påvirke anvendelsen. 3. ph bestemmes potentiometrisk ved stuetemperatur for at overholde specifikationen om 7,3 ± 0,2 (TSA II) o 7,1 ± 0,2 (MacConkey II aar). 4. Bemærk pladernes fasthed under inokulerinsprocedurerne. 5. Inkubér ikke-inokulerede repræsentative plader ved 35 ± 2 C i 72 h, o undersø dem for mikrobiel kontaminerin. PRODUKTINFORMATION IV TILSIGTET BRUG Trypticase soja-aar med 5 % fåreblod anvendes til at dyrke kræsne mikrooranismer o til anskueliørelse af hæmolytiske reaktioner produceret af mane bakteriearter. MacConkey II aar er et selektivt o differentierende medium til påvisnin af coliforme oranismer o enteriske patoener. V RESUMÉ OG FORKLARING A. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood Den ernærinsmæssie sammensætnin af Trypticase soja-aar har jort det til et populært medium, både usuppleret o som en base for medier, der indeholder blod. Trypticase soja-aar med 5 % fåreblod anvendes i omfattende rad til opsamlin o dyrknin af kræsne mikrobielle arter, o til bestemmelse af hæmolytiske reaktioner, som er vitie differentierinseenskaber for bakterier, især Streptococcus-arter. B. MacConkey II Aar Der er aktuelt mane kulturmedier til rådihed for laboranter til isolerin, dyrknin o identifikation af enteriske bakterier. En af de første af disse blev udviklet af MacConkey o først beskrevet i et kort offentlijort notat. 1 Den eentlie rapport om MacConkey aar, som var en milepæl, blev offentlijort i 1905, o indeholder detaljerede beskrivelser af mediet o de opnåede bakterievækstmønstre. 2 Denne formel blev udtænkt vel vidende, at aldesalte udfældes af syrer, o visse enteriske mikrooranismer fermenterer lactose, hvor andre ikke er i stand til det. MacConkey aarformlen er blevet modificeret mane ane siden offentliørelsen af de tidliere rapporter. En samlin af kulturmedier, der blev offentlijort i 1930, beskriver ti modifikationer, som var blevet offentlijort op til det tidspunkt. 3 Nyere modifikationer omfatter bru af tilsætninsstoffer (dvs. kanamycin) o fjernelse af visse inredienser (dvs. krystalviolet, o neutralt rød). 4 MacConkey aar er anbefalet til bru med kliniske prøver, der formodentlit indeholder blandet mikrobiel flora, såsom urin, luftvejene o sår, fordi det tillader en indledende rupperin af enteriske o andre Gram-neative bakterier. 5,6 Den anvendes oså i den mikrobioloiske undersøelse af madvarer. 7 BBL MacConkey II aarformlen blev stillet til rådihed i 1983. Den blev specielt fremstillet til at forbedre hæmninen af sværmende Proteus arter, for at opnå mere definitiv differentierin af lactosefermenterere o nonfermenterere, o til at fremme bedre vækst af enteriske patoener. VI PROCEDURENS PRINCIPPER A. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood Kombinationen af casein o sojapeptoner i Trypticase soja-aar basen ør mediet meet ernærinsrit ved at forsyne det med oranisk nitroen, især aminosyrer o større sammenkædede peptider. Natriumkloridet opretholder osmotisk lievæt. Defibrineret fåreblod er det mest almindelit anvendte blod til berielse af aarbasismedier. 8 Hæmolytiske reaktioner af streptococci er korrekt, o vækst af Haemophilus hemolyticus, et nonpatoen, hvis hæmolytiske kolonier ikke kan skelnes fra de beta-hæmolytiske streptococci, er hæmmet. 2
Trypticase soja-aar med 5 % fåreblod (TSA II) iver mulihed for fremraende vækst o beta hæmolyse af Streptococcus pyoenes (Lancefield ruppe A) o iver oså mulihed for fremraende vækst o passende hæmolytiske reaktioner med andre kræsne oranismer. Det er velenet til anvendelse med bacitracinskiver med lave koncentrationer (0,04 enheder) (Taxo A) for tentativ identifikation af ruppe A streptococci (S. pyoenes). B. MacConkey II Aar MacConkey II aar er et selektivt o differentieret medium. Det er kun let selektivt, da koncentrationen af aldesalte, som hæmmer Gram-positive mikrooranismer, er lav i sammenlinin med andre enteriske plademedier. Krystalviolet er oså inkluderet i mediet for at hæmme væksten af Gram-positive bakterier, især enterococci o staphylococci. Differentierin af enteriske mikrooranismer opnås ved kombinationen af lactose o den neutralt røde indikator. Farveløse eller lyserøde til røde kolonier produceres afhænit af isolatets evne til at fermentere kulhydratet. VII REAGENSER Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) Ca. formel* pr. liter renset vand Pancreasfordøjet casein... 14,5 Papainfordøjet sojabønnemel... 5,0 Natriumklorid... 5,0 Aar... 14,0 Vækstfaktorer... 1,5 Defibrineret fåreblod...5 % * Justeret o/eller suppleret som påkrævet for at opfylde ydelseskriterier. MacConkey II Aar Ca. formel* pr. liter renset vand Pancreasfordøjet elatine... 17,0 Pancreasfordøjet casein... 1,5 Peptisk fordøjet dyrevæv... 1,5 Lactose... 10,0 Galdesalte... 1,5 Natriumklorid... 5,0 Neutral rødt... 0,03 Krystalviolet... 0,001 Aar...13,5 * Justeret o/eller suppleret som påkrævet for at opfylde ydelseskriterier. Advarsler o forholdsreler Til in vitro dianostik. Hvis der ses for krafti futihed, inverteres bunden over et forskudt lå, hvilket iver mulihed for lufttørrin for at forhindre dannelse af en forselin mellem toppen o bunden af pladen under inkubation. Patoene mikrooranismer, deriblandt hepatitisviruser o human immundefekt virus, kan forekomme i kliniske prøver. Standard forholdsreler 9-12 o institutionelle retninslinier bør føles ved håndterinen af alle materialer, der er kontamineret med blod o andre leemsvæsker. Efter bru skal præparerede plader, prøvebeholdere o andre kontaminerede materialer steriliseres ved autoklaverin, inden de kasseres. Opbevarin Opbevares ved modtaelse i mørke ved 2 8 C. Undå nedfrysnin o overopvarmnin. Må ikke åbnes før bru. Minimér udsættelse overfor lys. Klarjorte plader skal opbevares i deres oriinale omsla ved 2 til 8 C indtil lie inden anvendelse. Kan inokuleres op til udløbsdatoen, o inkuberes i den anbefalede inkubationstid. Lad mediet blive opvarmet til stuetemperatur inden inokulation. Produktnedbrydnin Pladerne må ikke anvendes, hvis de viser ten på mikrobiel kontaminerin, misfarvnin, udtørrin eller andre ten på nedbrydnin. 3
VIII PRØVEINDSAMLING OG -HÅNDTERING Der er blevet foreslået mane forskellie slas podepinde o beholdere til indsamlin af prøver. Prøverne skal taes, inden der beyndes på antimikrobiel behandlin. Der skal søres for hurti afleverin til laboratoriet. Forskellie opbevarinsmedier eller transportsystemer, såsom BBL prøvetanin o transportprodukter, kan komme på tale for at forlæne mikrooranismernes chancer for overlevelse, når der forventes en sinifikant forsinkelse mellem prøvetanin o dyrknin. Der henvises til passende litteratur for detaljer om prøveindsamlin o -håndterinsmetoder. 13,14 Laboratoriet skal være udstyret med tilstrækkeli klinisk information til at lade mikrobioloen væle det bedst enede medium o metoder. IX PROCEDURE Vedlat materiale Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) o MacConkey II Aar (I Plate) Nødvendie materialer der ikke er vedlat: Hjælpekulturmedier, reaenser, kvalitetskontroloranismer o laboratorieudstyr, som påkrævet til proceduren. Testprocedure Anvend aseptiske teknikker. Aaroverfladen bør være lat o futi, men ikke for våd. Udstry prøven så hurtit som mulit, efter at den er modtaet i laboratoriet. Udstryninspladen anvendes primært til at isolere rene kulturer fra prøver, der indeholder blandet flora. Alternativt, hvis materialet skal dyrkes direkte fra en podepind, rulles podepinden over et lille område på overfladen af kanten. Herefter kan der udstryes fra dette inokulerede område. Inkubér plader, beskyttet mod lys, ved 35 ± 2 C i 18 til 24 h. Luftvejsprøver skal inkuberes i en aerob atmosfære suppleret med kuldioxid. Andre prøver skal inkuberes anaerobt uden tilsat CO 2. Bruerkvalitetskontrol Se Kvalitetskontrolprocedurer. Hvert medieparti er blevet testet ved hjælp af passende kvalitetskontroloranismer, o denne testnin opfylder produktspecifikationerne o CLSI-standarderne, hvor det er relevant. Kvalitetskontroltestnin skal som altid udføres i overensstemmelse med ældende lokale eller nationale reulativer, akkrediterinskrav o/eller laboratoriets standardkvalitetskontrolprocedurer. X RESULTATER Efter inkubation vil de fleste plader vise et område med sammenhænende vækst. Fordi udstryninsmetoden i virkeliheden er en fortyndins teknik, deponeres der et formindsket antal mikrooranismer på de udstrøne områder. Derfor bør ét eller flere af disse områder udvise isolerede kolonier af de oranismer, der er indeholdt i prøven. Desuden kan vækst af hver oranisme måles semikvantitativt på basis af vækst i hvert af de udstrøne områder. Typiske resultater på Trypticase soja-aar med 5 % fåreblod er som føler: 1. Hæmolytiske streptococci kan være ennemsitie eller uiennemsitie, rålie, små (1 mm), eller store matte o mucoide (2 til 4 mm) kolonier, omivet af en hæmolytisk zone. Der bør udføres ramfarvnin o undersøelse for at kontrollere de makroskopiske fund. (Andre oranismer, som kan forårsae hæmolyse, omfatter Listeria, forskellie corynebacteria, hæmolytiske staphylococci, Escherichia coli o Pseudomonas.) Ved rapporterin kan det være til hjælp for klinikeren at anslå en mændebestemmelse af kolonier af hæmolytiske streptococci. 2. Pneumococci er normalt meet flade, latte, ennemsitie, rålie o noen ane mucoide kolonier omivet af en smal zone af røn (alpha) hæmolyse. 3. Staphylococci er uiennemsitie, hvide til uld-ule kolonier med eller uden betahæmolytiske zoner. 4. Listeria. Der produceres små beta hæmolytiske zoner. De kan kendes på deres stavform i farvniner, o på motilitet ved stuetemperatur. 5. Andre oranismer repræsenterer minimal flora, o klinisk sinifikante isolater kan oså forventes at vokse på denne nonselektive formel. 4
Typisk kolonimorfoloi på MacConkey II aar er som føler: E. coli... Lyserød til rosa-rødt (kan være omivet af en zone med udfældet alde) Enterobacter/Klebsiella... Mucoid, lyserød Proteus... Farveløs sværmnin i områder med isolerede kolonier er hæmmet Salmonella... Farveløs Shiella... Farveløs Pseudomonas... Ureelmæssi, farveløs til lyserød Gram-positive bakterier... Inen til let vækst XI PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Det er blevet rapporteret, at visse Enterobacteriaceae o Pseudomonas aeruinosa er hæmmet på MacConkey aar ved inkuberin i en CO 2 -beriet atmosfære. 15 Ikke alle E. coli stammer fermenterer lactose. Visse dianostiske tests kan udføres med den primære plade. Men det anbefales at brue en ren kultur til biokemiske tests o andre identifikationsprocedurer. Der henvises til passende litteratur for detaljeret information o anbefalede procedurer. 5,16-19 Et enkelt medium er sjældent tilstrækkelit til at påvise alle potentielt sinifikante oranismer i en prøve. Det skal huskes, at oranismer, der enerelt er følsomme overfor det antimikrobielle middel i et selektivt medium, kan blive helt eller delvist hæmmet afhænit af midlets koncentration, eenskaberne ved den mikrobielle stamme o antallet af oranismer i inokulum. Oranismer, der enerelt er resistente overfor det antimikrobielle middel, bør ikke blive hæmmet. Dyrknin af prøver, der vokser på selektive medier, bør derfor blive sammenlinet med prøver, der dyrkes på nonselektive medier for at opnå yderliere information o for at sikre restitution af potentielle patoener. XII FUNKTIONSDATA Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood Trypticase soja-aar med 5 % fåreblod blev brut som kontrol i en undersøelse med bouillonberiet kultur (Todd Hewitt) o optisk immunoanalysemetode til at dianosticere hæmolytisk streptococinfektion. Femhundredeoto (502) prøver blev testet. TSA med 5 % fåreblod har en følsomhed o specificitet på henholdsvis 92,5 % o 99,4 %. 20 Nuyen et al. anvendte Trypticase soja-aar med 5% fåreblod som uldstandard til påvisnin af ruppe B Streptococcus fra de nedre urinveje på ravide kvinder. 21 I en anden undersøelse enisolerede Rossmann et al. med held Lautropia mirabilis på Trypticase soja-aar med 5 % fåreblod fra mundhulerne på børn inficeret med human immundefekt virus. 22 Ud af de 85 evaluerede børn i denne undersøelse testede 35 (41,4 %) positive for L. mirabilis. Isenber et al. brute Trypticase sojaaar med 5 % fåreblod som en kontrol ved evaluerin af Enterococcus fra et selektivt medium under undersøelse. 23 Der blev brut tohundredehalvtreds (250) ruppe D streptococcal stammer isoleret fra klinisk materiale o 8 stammer fra the National Communicable Disease Center (Atlanta, Ga.). MacConkey II Aar Inden friivnin testes alle MacConkey II aar lots for funktionseenskaber. Repræsentative prøver af lot'et udstryes-inokuleres med følende kulturer: Escherichia coli (ATCC 25922), Protein mirabilis (ATCC 12453), Pseudomonas aeruinosa (ATCC 10145), Salmonella Typhimurium (ATCC 14028), Shiella dysenteriae (ATCC 9361) o Enterococcus faecalis (ATCC). Inokulum for E. faecalis er fortyndet til at ive 10 4 til 10 5 kolonidannende enheder (CFU) per plade. Inokulum for alle andre oranismer fortyndes til at ive 10 3 til 10 4 CFU/plade. Efter inokulerin inkuberes pladerne ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære. Efter 18 til 24 h inkubation er kolonier af E. coli rosa-røde o kan være omivet af udfældet aldesalt. P. mirabilis udviser middel til krafti vækst af farveløse kolonier, o sværmnin af kolonier er hæmmet. P. aeruinosa har områder med sammenflydende vækst, som kan udvise røn til ul-røn pimenterin, mens individuelle kolonier viser lyserød til røn pimenterin. Salmonella Typhimurium udviser middel til krafti vækst af farveløse kolonier. S. dysenteriae udviser vækst af farveløse til lyserøde kolonier. E. faecalis er helt til delvist hæmmet (middel vækst), o kolonierne kan være farvede lyserøde. XIII BESTILLING Kat. nr. Beskrivelse 221290 BD BBL Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II), o MacConkey II Aar I Plate, pakn. med 20 plader 221291 BD BBL Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II), o MacConkey II Aar I Plate, pakn. med 200 plader 5
XIV LITTERATUR 1. MacConkey, A.T. 1900. Note on a new medium for the rowth and differentiation of the Bacillus coli communis and the Bacillus typhi abdominalis. The Lancet, Part II:20. 2. MacConkey, A. 1905. Lactose-fermentin bacteria in faeces. J. Hy. 5:333-379. 3. Levine, M., and H.W. Schoenlein. 1930. A compilation of culture media for the cultivation of microoranisms. The Williams & Wilkins Company, Baltimore. 4. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2002. Bailey & Scott's dianostic microbioloy, 11th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 6. Farmer, J.J., III. 1999. Enterobacteriaceae: introduction and identification, p. 442-458. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbioloy, 7th ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 7. Downes and Ito. 2001. Compendium of methods for the microbioloical examination of foods, 4th ed. American Public Health Association, Washinton, D.C. 8. Vera, H.D., and D.A. Power. 1980. Culture media, p. 969. In E.H. Lennette, A. Balows, W.J. Hausler, Jr., and J.P. Truant (ed.), Manual of clinical microbioloy, 3rd ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 9. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 10. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 11. U.S. Department of Health and Human Services. 2007. Biosafety in microbioloical and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 5th ed. U.S. Government Printin Office, Washinton, D.C. 12. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to bioloical aents at work (seventh individual directive within the meanin of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 13. Isenber, H.D., F.D. Schoenknecht, and A. von Graevenitz. 1979. Cumitech 9, Collection and processin of bacterioloical specimens. Coordinatin ed., S.J. Rubin. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 14. Miller, J.M. and H.T. Holmes. 1999. Specimen collection, transport, and storae, p.33-63. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbioloy, 7th ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 15. Mazura-Reetz, G., T.R. Neblett, and J.M. Galperin. 1979. MacConkey aar: CO 2 vs. ambient incubation, abstr. C 179, p. 339. Abstr. 79th Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1979. 16. Koneman, E.W., S.D. Allen, W.M. Janda, P.C. Schreckenberer, and W.C. Winn, Jr. 1997. Color atlas and textbook of dianostic microbioloy, 5th ed. J.B. Lippincott Company, Philadelphia. 17. MacFaddin, J.F. 2000. Biochemical tests for identification of medical bacteria, 3rd ed. Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore. 18. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbioloy, 8th ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 19. Holt, J.G., N.R. Krie, P.H.A. Sneath, J.T. Staley, and S.T. Williams (ed.). 1994. Berey's Manual of determinative bacterioloy, 9th ed. Williams & Wilkins, Baltimore. 20. Fries, S.M. 1995. Dianosis of roup A streptococcal pharynitis in a private clinic: comparative evaluation of an optical immunoassay method and culture. J. Pediatr. 126:933-936. 21. Nuyen, T.M., et al. 1998. Detection of roup B Streptococcus: comparison of an optical immunoassay with direct platin and brothenhanced culture methods. J. Matern. Fetal. Med. 7:172-176. 22. Rossmann, S.N. et.al. 1998. Isolation of Lautropia mirabilis from oral cavities of human immunodeficiency virus-infected children. J. Clin. Microbiol. 36:1756-1760. 23. Isenber, H.D., D. Goldber, and J. Sampson, 1970. Laboratory studies with a selective medium. Appl. Microbiol. 20:433-436. BD Dianostics Teknisk service o support: skal De kontakte den lokale BD repræsentant eller besø www.bd.com/ds. Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD 21152 USA Benex Limited Pottery Road, Dun Laohaire Co. Dublin, Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Loo, and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 2015 BD 6