Wellcogen TM N. meningitidis B/ E. coli K1.

Transkript

1 Inden brug skal alle reagenser bringes til rumtemperatur (18-30 C) og blandes. Stil ubrugte reagenser tilbage i køleskabet efter brug. Wellcogen TM N. meningitidis B/ E. coli K1. ZL24/R tests 1 TILSIGTET BRUG Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 er en hurtig latextest til brug til kvalitativ påvisning af antigen fra Neisseria meningitidis (meningokok) gruppe B og Escherichia coli K1, der findes i kropsvæsker pga. infektion. Latexen kan desuden anvendes til påvisning af specifikt antigen i bloddyrkningssupernatanter samt til bestemmelse af meningokok gruppe B- eller E. coli K1-dyrkning. Meningokok gruppe B antigen og E. coli K1 antigen kan ikke skelnes fra hinanden immunologisk. 2 RESUME Cerebrospinalmeningitis og meningokokæmi er almindelige tegn på meningokoklidelse, som er endemisk i mange områder, og som forekommer epidemisk i hele verden 6,10. Tidlig diagnose er yderst vigtig 12 med henblik på valg af passende behandling. De inficerende organismer bærer gruppespecifikke polysakkaridoverfladeantigener. En del af disse afgives i den inficerede kropsvæske som f.eks. serum og cerebrospinalvæske (CSF) og udskilles i urinen 5,13. Antigenet i disse kropsvæsker kan påvises med sensitive immunologiske metoder, herunder counterimmunelektroforese og latexagglutination 5. En af de serologiske grupper af N. meningitidis, der hyppigst er forbundet med meningokokinfektioner, er gruppe B 1,7. Ca. 80 % E. coli meningitis hos nyfødte skyldes stammer, der bærer K1-antigen TESTPRINCIP Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1-reagenset består af polystyrenlatexpartikler, der er coatede med monoklonale antistoffer, som er specifikke for meningokok gruppe B antigen. Disse latexpartikler agglutinerer ved tilstedeværelse af tilstrækkeligt homologt antigen i enten kropsvæsker eller organismedyrkninger. E. coli s polysakkaride K1-antigen udviser strukturel 9 og immunologisk 4,8 identitet med meningokok gruppe B antigen, og Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 reagenset skelner ikke mellem dem. Reagenset kan derfor anvendes som en hjælp i diagnosticering af meningokokmeningitis samt E. coli meningitis hos nyfødte. Nogle kropsvæskeprøver forårsager ikke-specifik ansamling af latexpartikler, hvorfor der medfølger et kontrollatexpræparat til identificering af disse prøver. 4 SYMBOLFORKLARING Katalognummer Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik Indeholder tilstrækkeligt til <n> tests Se brugsanvisningen Opbevaringstemperatur Batchkode (partinummer) Anvendes senest (udløbsdato) Producent Tilsæt vand DA 5 KITTETS INDHOLD, KLARGØRING TIL BRUG OG OPBEVARING Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 kittet indeholder reagenser til 30 tests. Se også Forholdsregler, afsnit 6. Alle komponenter skal opbevares ved 2 til 8 C. Under disse forhold bevares de aktive indtil sættets udløbsdato. 6 FORHOLDSREGLER Brugsanvisning Reaktionskort til engangsbrug (1 pakke) Blandepinde til engangsbrug (2 bundter) Engangspipetter (1 æske) Sort gummihætte (1) Testlatex Én dråbeflaske (brun hætte), der indeholder en 0,5 % suspension af polystyrenlatexpartikler i glycinbuffersaltvand, ph 8,2, og 0,05 % Bronidox som konserveringsmiddel. Latexpartiklerne er coatede med murint, monoklonalt antistof for N. meningitidis gruppe B antigen. Kontrollatex Én dråbeflaske (mørkeblå hætte), der indeholder en 0,5 % suspension af polystyrenlatexpartikler i glycinbuffersaltvand, ph 8,2, og 0,05 % Bronidox som konserveringsmiddel. Latexpartiklerne er coatede med murint, monoklonalt antistof for Bordetella bronchiseptica. Latexsuspensionerne leveres brugsfærdige og skal opbevares opretstående ved 2-8 C, til sættets udløbsdato. Ved længere tids opbevaring kan der opstå en vis ansamling eller udtørring af latex omkring flaskens hals. I disse tilfælde skal latexflasken rystes kraftigt i nogle sekunder, til suspensionen igen er normal. MÅ IKKE FRYSES. Polyvalent positiv kontrol Én flaske (rød hætte) med frysetørrede bakterieekstrakter, inklusive antigen fra en repræsentativ stamme af N. meningitidis gruppe B og/eller E. coli K1 antigen. Indeholder 0,01 % bronopol før rekonstituering og 0,004 % efter rekonstituering. Rekonstituer med 3,6 ml sterilt, destilleret vand. Efter tilsætning af vand hensættes flasken i nogle minutter og blandes derefter ved at vende flasken. Det rekonstituerede antigen opbevares ved 2 til 8 C i op til 6 måneder. Negativ kontrol En dråbeflaske (hvid hætte) med glycinbuffersaltvand, ph 8,2, med 0,05 % Bronidox som konserveringsmiddel. Reagenserne er kun til in vitro-diagnostik Må kun anvendes af uddannet personale. Bemærk: Dette produkt indeholder tør naturgummi. Se sikkerhedsdatabladet og produktmærkningen vedrørende oplysninger om potentielt farlige komponenter. OPLYSNINGER OM SUNDHED OG SIKKERHED 6.1 Ifølge principperne for god laboratoriepraksis anbefales det stærkt, at kropsvæsker behandles som potentielt smittefarlige og håndteres med alle nødvendige sikkerhedsforanstaltninger. 6.2 Ved håndtering af radiometrisk bloddyrkningsmedium skal grundreglerne for strålingssikkerhed følges. Reglerne omfatter: a) Radioaktivt materiale skal opbevares på et afmærket område i en godkendt beholder. b) Håndtering af radioaktivitet skal foregå i et afmærket område. c) Der må ikke udføres mundpipettering af radioaktivt materiale. d) Der må ikke spises, drikkes eller ryges i det afmærkede område. e) Hændernes skal vaskes grundigt efter anvendelse af radioaktivt materiale. f) Den lokale sikkerhedsrepræsentant skal rådspørges vedrørende regler for bortskaffelse. 1

2 6.3 Apparatur, der ikke er til engangsbrug, skal steriliseres efter brug med en passende procedure, men den foretrukne metode er autoklavering i 15 minutter ved 121 C. Udstyr til engangsbrug skal autoklaveres eller brændes. Spild af potentielt smittefarlige materialer skal straks fjernes med sugende papirservietter, og de kontaminerede områder skal aftørres med et standard bakterielt desinfektionsmiddel eller 70 % alkohol. Brug IKKE natriumhypochlorit. Materialer til rengøring af spild, herunder handsker, skal bortskaffes som biologisk farligt materiale. 6.4 Pipettér ikke med munden. Brug engangshandsker og øjenbeskyttelse ved håndtering af prøver og udførelse af assay. Vask hænderne grundigt, når arbejdet er færdigt. 6.5 Ved anvendelse i overensstemmelse med principperne for god laboratoriepraksis, god standard for arbejdshygiejne og vejledningerne i denne brugsanvisning betragtes de leverede reagenser ikke som helbredsfarlige. FORHOLDSREGLER I FORBINDELSE MED ANALYSEN 6.6 Produktet må ikke anvendes efter den anførte udløbsdato. 6.7 Latexreagenser skal bringes til rumtemperatur (18-30 C) før brug. Latexreagenser, der viser tegn på ansamlinger eller klumpethed før brug, kan have været frosset og må ikke bruges. 6.8 Det er vigtigt at holde dråbeflasker lodret under brug, og at dråben dannes ved dysens spids. Hvis dysen bliver våd, dannes et forkert volumen ved enden og ikke ved spidsen. Hvis dette sker, skal dysen aftørres, før der gås videre. 6.9 De reagenser, der leveres med hvert kit, er matchet i funktion og må ikke anvendes sammen med reagenser fra et kit med et andet partinummer Rør ikke ved reaktionsområderne på kortene Mekaniske rotatorer kan anvendes i dette assay. Følgende karakteristika er fundet tilfredsstillende: a) Flatbed-rotatorer, der kører ved 100 til 150 o/m og med en orbitaldiameter på 3,0 til 3,4 cm. Kortet skal tages af rotatoren og vippes kort før aflæsning. b) Orbitalrotatorer, der kører med 25 o/m med en rotationsvinkel på ca. 9 til 10,5 grader eller med 18 o/m og en rotationsvinkel på 16 til 17,5 grader Undgå mikrobiel forurening af reagenserne, da det kan give forkerte resultater. 7 INDSAMLING OG OPBEVARING AF PRØVER 7.1 Kropsvæskeprøver (f.eks. cerebrospinalvæske, serum, urin) skal testes snarest muligt efter indsamling. Hvis væsken ikke kan testes straks, kan den opbevares til næste dag ved 2 til 8 C eller frossen ved 15 til 25 C i længere perioder. Hvis der kræves bakteriologiske analyser af prøven, skal disse opsættes før udførelse af latextesten for at undgå forurening af prøven. 7.2 Bloddyrkninger kan testes efter 18 til 24 timers inkubation ved 37 C og/eller så snart der konstateres bakteriel vækst. 7.3 Pladekulturer. Isolerede kolonier, der dyrkes på et beriget agarmedie (f.eks. blod-, chokoladeagar) kan testes efter inkubation ved 37 C til næste dag. En gram-farvning skal udføres som hjælp til fortolkning af latextestens resultat. 8 TESTPROCEDURE MEDFØLGENDE NØDVENDIGE MATERIALER Se Kittets indhold, afsnit 5. NØDVENDIGE MATERIALER, DER IKKE MEDFØLGER Vandbad med kogende vand Laboratoriecentrifuge eller membranfiltre (0,45 µm) Rotator (valgfri se Forholdsregler, afsnit 6) KLARGØRING AF KLINISKE PRØVER 8.1 Kropsvæskeprøver skal opvarmes 3 før test med Wellcogen TM proceduren for at minimere ikke-specifikke reaktioner. Følgende procedurer anbefales: a) Til cerebrospinalvæske og urin opvarmes prøven i 5 minutter i et kogende vandbad. Afkøl prøven til rumtemperatur (18-30 C), og centrifuger eller membranfiltrer (0,45 µm) før test. For en maksimal sensitivitet kan urinprøverne koncentreres op til 25 gange i en Minicon B-15 koncentrator. Centrifuger eller membranfiltrer som beskrevet ovenfor før test. b) Til serum tilsættes 3 dele 0,1 M dinatriumethylendiamintetraacetat (EDTA) ph 7,4 pr. 1 del serum, opvarm prøven i 5 minutter i et kogende vandbad, afkøl til rumtemperatur (18 til 30 C), og centrifuger eller membranfiltrer som beskrevet herover. En egnet EDTA-opløsning (10 ml) kan leveres (kode-nr. ZL29/R ). 8.2 Bloddyrkninger. Centrifuger en prøve på 1 til 2 ml for at granulere de røde blodlegemer, for eksempel ved 1000 g, i 5 til 10 minutter. Udfør latextesten på supernatanten. I tilfælde af en ikke-specifik reaktion med en bloddyrkningssupernatant (se Tolkning af resultater, afsnit 10), skal prøven opvarmes i 5 minutter i et kogende vandbad. Afkøl til rumtemperatur (18 til 30 C), og centrifuger og gentag testen. 8.3 Pladekulturer. Test direkte fra plade. PROCEDURE Det anbefales at læse afsnittet Forholdsregler, afsnit 6, omhyggeligt, før testen udføres. BEMÆRK: Hvis der kun er en lille mængde testprøve til rådighed, skal den anvendes med testlatex først, og hvis der opnås et positivt resultat, skal prøven testes med kontrollatex. Hvis der er tilstrækkelig prøve til rådighed, skal den testes samtidigt med både test- og kontrollatex. a, b) Kropsvæskeprøver og bloddyrkningssupernatanter: Trin 1 Klargør prøven som beskrevet under Klargøring af kliniske prøver, afsnit 8. Trin 2 Ryst latexreagenserne. Trin 3 For hver testprøve placeres 1 dråbe testlatex 1 dråbe i én cirkel på et reaktionskort og 1 dråbe kontrollatex i en separat cirkel. Sørg for, at dråbeflaskerne holdes lodret, så de afgiver en nøjagtig mængde i dråben. (Se Forholdsregler, afsnit 6.) Trin 4 Brug en engangspipette til at dispensere 1 dråbe 1 dråbe (ca. 40 µl) prøve ved siden af hver dråbe latex. Trin 5 Bland indholdet af hver cirkel med en blandepind, og bred det ud, så det dækker hele cirklen. Brug en separat pind til hver cirkel, og kasser den, så den bliver bortskaffet på sikker vis efter brug. Trin 6 Vip kortet langsomt, og observer for agglutination 3 min i 3 minutter, mens kortet holdes i normal læseafstand (25 til 35 cm) fra øjnene. Brug ikke forstørrelsesglas. Mekanisk rotation (3 minutter) kan benyttes (se Forholdsregler, afsnit 6). De fremkomne mønstre er skarpe og kan genkendes under alle normale belysningsforhold. Trin 7 Kasser det brugte reaktionskort, så det bliver bortskaffet c) Pladekulturer Trin 1 Ryst latexreagenserne. Trin 2 For hver dyrkning, der skal testes, placeres 1 dråbe 1 dråbe testlatex i én cirkel på et reaktionskort og 1 dråbe kontrollatex i en separat cirkel. Bemærk: Det er vigtigt at bruge kontrollatex til dyrkninger af mistænkt E. coli. Trin 3 Tag noget af prøvedyrkningen op ved at berøre prøve den med den flade ende af en blandepind. Som en af retningslinje skal der opsamles en vækstmængde, vækst der omtrent svarer til 1 stor koloni. Trin 4 Emulger dyrkningsprøven i dråben af testlatex ved at gnubbe med blandepindens flade ende. Gnub grundigt, men ikke så kraftigt, at det beskadiger kortets overflade. Spred latexen, så den dækker så meget af cirklen som muligt. Bortskaf blandepinden på en sikker måde. Trin 5 Brug en anden blandepind til at emulgere en tilsvarende dyrkningsprøve i kontrollatexen. Trin 6 Vip kortet langsomt, og observer for agglutination 20 sek i 20 sekunder, mens kortet holdes i normal læseafstand (25 til 35 cm) fra øjnene. Brug ikke forstørrelsesglas. De fremkomne mønstre er skarpe og kan genkendes under alle normale belysningsforhold. Trin 7 Kasser det brugte reaktionskort, så det bliver bortskaffet 9 KVALITETSKONTROL Følgende procedurer skal i starten udføres med hver forsendelse af testkit og med hver kørsel af testprøver. I praksis kan en kørsel defineres som en testperiode på op til 24 timer. Enhver afvigelse fra de forventede resultater angiver, at der kan være et problem med reagenserne, som skal løses før videre brug med kliniske prøver. 2

3 VISUEL KONTROL Latexsuspensionerne skal altid inspiceres for ansamlinger, når de dryppes på reaktionskortet. Hvis der er tegn på sammenklumpning før tilsætningen af testprøven, må suspensionen ikke bruges. Ved længere tids opbevaring kan der opstå en vis ansamling eller udtørring omkring flaskens hals. Hvis dette bemærkes, skal latexflasken rystes kraftigt i nogle sekunder, til suspensionen igen er normal. PROCEDURE FOR POSITIV KONTROL Testens reaktivitet kan bekræftes ved at tilsætte polyvalent positiv kontrol til en reaktionscirkel, hvori testprøven ikke har agglutineret testlatexen efter 3 minutters rotation. Trin 1 Brug en engangspipette til at påføre 1 dråbe 1 dråbe positiv kontrol til cirklen med testlatex og prøve. Trin 2 Bland med en blandepind, og kasser den, så den bliver bortskaffet Trin 3 Vip kortet manuelt eller med en rotator i yderligere 3 min 3 minutter. Efter dette tidsrum skal definit agglutination være synlig i testlatexen. Trin 4 Kasser det brugte reaktionskort, så det bliver bortskaffet PROCEDURE FOR NEGATIV KONTROL Hvis mindst en testprøve i en kørsel giver et negativt resultat med testog kontrollatex (eller kun testlatex, hvor der ikke er anvendt kontrollatex), udgør dette en gyldig negativ kontrol for reagenserne og videre test er ikke nødvendig. Hvis en testprøve giver agglutination med testlatexen og ingen agglutination med kontrollatexen, skal testlatexen testes enten med den negative kontrol eller med uinokuleret bloddyrkningsmedium, afhængigt af hvad der er bedst egnet (se herunder). Trin 1 Placer 1 dråbe testlatex i én cirkel på et 1 dråbe reaktionskort. Trin 2 Dispenser 1 dråbe negativ kontrol eller uinokuleret 1 dråbe bloddyrkningsmedium ved siden af testlatexen. Trin 3 Bland med en blandepind, og kasser den, så den bliver bortskaffet Trin 4 Vip kortet manuelt eller med en rotator i yderligere 3 min 3 minutter. Efter dette tidsrum må der ikke være markant agglutination i test latexen. Trin 5 Kasser det brugte reaktionskort, så det bliver bortskaffet Til tests med kropsvæskeprøver skal den negative kontrol, der følger med kittet, anvendes. Til test med bloddyrkninger skal der anvendes en prøve med uinokuleret bloddyrkningsmedium fra samme kilde som prøven som en negativ kontrol. Det er vigtigt at teste uinokulerede medier, da falsk positive kan forekomme med visse sammensætninger af bloddyrkningsmedier. BEMÆRK: 1. Tidligere analyserede positive og negative prøver, der er delt op i alikvoter og opbevaret ved 15 til 20 C eller derunder, kan anvendes som henholdsvis positive og negative kontroller, hvis det ønskes. Den positive kontrol kan også anvendes i stedet for testprøven. 2. For koloniidentifikation kan test- og kontrollatexreagensernes funktion bekræftes ved hjælp af friske bakteriereferencestammer, der dyrkes til næste dag, efter den metode, der er beskrevet i Testprocedure (c). Egnede referencestammer er: ATCC N. meningitidis gruppe B (positiv reaktivitet) ATCC E. coli type K1 (positiv reaktivitet) ATCC N. meningitidis gruppe A (negativ reaktivitet) ATCC og ATCC skal give agglutination med testlatex og ingen signifikant agglutination i kontrollatex. ATCC skal ikke give nogen signifikant agglutination med hverken test- eller kontrollatex. 10 RESULTATER AFLÆSNING AF RESULTATER En positiv reaktion angives ved udviklingen af et agglutineret mønster inden for 3 minutter (20 sekunder for kolonitests) efter blanding af latexen med testprøven med tydelig synlig sammenklumpning af latexpartiklerne (figur 1). Hastigheden, hvormed agglutinationen bliver synlig, og dens kvalitet afhænger af antigenets styrke og varierer fra store klumper, der fremkommer efter få sekunders blanding, til små klumper, der udvikles ret langsomt. I dyrkningsidentifikation er de fleste positive reaktioner næsten øjeblikkelige. 3 Figur 1 Figur 2 I en negativ reaktion agglutinerer latexen ikke, og det mælkeagtige udseende forbliver helt uændret i hele testen (figur 2). Bemærk dog, at svage spor af granulering kan detekteres i negative mønstre afhængigt af, hvor skarp brugerens iagttagelsesevne er. I dyrkningsidentifikation kan visse stammer give en trådagtig ophobning af latex med en mælkeagtig baggrund. Dette skal tolkes som en negativ reaktion. Latexpartiklerne er ikke de samme som partiklerne anvendt i andre Wellcogen TM kits og giver finere agglutination. TOLKNING AF RESULTATER Positivt resultat Tydelig agglutination af testlatexen sammen med manglende agglutination af kontrollatexen angiver forekomst af meningokok gruppe B eller E. coli K1 antigen i kropsvæsken eller bloddyrkningen eller bekræfter dyrkningens identitet. Som en generel regel angiver et positivt resultat med en neonatal prøve en E. coli K1 infektion. Hos ældre patienter er meningokok gruppe B mere sandsynlig. Negativt resultat Med en kropsvæske eller bloddyrkningssupernatant betyder manglende agglutination i begge reagenser, at der ikke er påviselig meningokok gruppe B eller E. coli K1 antigen i testvæsken det udelukker ikke muligheden for meningokok- eller E. coli infektion, og hvis symptomerne fortsætter, kan det være ønskeligt at udføre testen på efterfølgende eller alternative prøver eller efter koncentration af urinprøven. I en dyrkning angiver manglende agglutination i begge reagenser, at det sandsynligvis ikke drejer sig om N. meningitidis gruppe B eller E. coli K1. Resultater der ikke kan tolkes Synlig agglutination af kontrollatexen angiver, uanset om den er stærkere eller svagere end testlatexen, en ikke-specifik reaktion. I de fleste tilfælde kan ikke-specifikke reaktioner med kropsvæsker elimineres ved opvarmning og centrifugering eller membranfiltrering af prøven (se Klargøring af kliniske prøver, afsnit 8). Hvis en ikke-specifik reaktion forekommer med en bloddyrkningssupernatant, opvarmes prøven i 5 minutter i et kogende vandbad. Afkøl til rumtemperatur (18 til 30 C), centrifuger og gentag testen. BEMÆRK: Tests udført direkte på kliniske prøver er beregnet til screeningsformål og skal supplere, ikke erstatte, dyrkningsprocedurerne. Resultaterne skal anvendes sammen med andre data, f.eks. symptomer, resultater af andre tests, kliniske indtryk mm. 11 TESTENS BEGRÆNSNINGER 11.1 Et positivt resultat i testen afhænger af tilstedeværelsen af et påviseligt niveau af antigen i kropsvæsken eller bloddyrkningsmediet Der er kun få kliniske data til rådighed for påvisning af antigen i urin eller serum ved hjælp af dette reagens Foruden E. coli K1, der allerede er omtalt, er der rapporteret om andre ikke-relaterede bakterier, der besidder de samme antigener, 2 og, som med ethvert immunologisk testsystem, kan risikoen for krydsreaktioner i latextesten ikke udelukkes E. coli dyrkninger, der bærer andre K-antigener end K1, er specielt tilbøjelige til at give ikke-specifikke reaktioner. 12 FORVENTEDE RESULTATER Prøver, der indeholder et påviseligt niveau af N. meningitidis B/E. coli K1 antigen, giver en agglutinationsreaktion med testlatexen. 13 TESTENS EFFEKTIVITET I kliniske studier udført i 12 laboratorier blev kropsvæskeprøver (friske og opbevaret nedfrosset) og bloddyrkningssupernatanter testet. Både traditionelle og radiometriske dyrkningsteknikker blev anvendt i bloddyrkningsstudierne.

4 SENSITIVITET Sensitiviteten af Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 blev fastslået ud fra tests af prøver, der var fundet dyrkningspositive for de homologe organismer, eller for hvilken der var anden evidens for infektion (klinisk diagnose plus positivt resultat for en anden antigentest). Tabel 1 viser antallet af hver enkelt frisk prøvetype testet med latex sammen med antallet af opnåede positive resultater. Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 s sensitivitet for påvisning af bakterielt antigen i frisk spinalvæske fra patienter inficeret med N. meningitidis gruppe B var 64 % (7/11). Der blev også udført tests af opbevarede (frosne) prøver fra patienter med N. meningitidis gruppe B infektion. Resultaterne viste, at antigenet var forringet i de fleste prøver efter opbevaringen. Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 testen påviste antigen i 9 ud af 18 af de testede opbevarede prøver. De samme 9 prøver blev påvist med andre antigen-tests (counterimmunelektroforese/latex), der blev udført samtidigt. Én ekstra prøve gav en ikke-specifik reaktion med Wellcogen TM latex og et positivt resultat med counterimmunelektroforese. Antigen blev påvist i 4/6 opbevarede spinalvæskeprøver fra patienter med infektioner forårsaget af E. coli K1. De to prøver, der var negative med Wellcogen TM latex, reagerede heller ikke med counterimmunelektroforese. Der er indtil videre kun begrænsede serum- og urinprøvedata til rådighed (tabel 1). Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 påviste antigen i 5/7 bloddyrkninger, hvorfra N. meningitidis gruppe B blev isoleret (tabel 1). Et andet studie, der anvendte Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1, viste tilsvarende resultater 14. SPECIFICITET Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 s specificitet blev evalueret med 138 kropsvæskeprøver (friske og frosne) og 461 bloddyrkningsprøver fra patienter med bakteriel eller aseptisk meningitis og andre ikke-relaterede tilstande. De organismer, der blev isoleret fra de inficerede prøver, var Haemophilus influenzae type b, Streptococcus pneumoniae, N. meningitidis gruppe A, C, W135, E. coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Staphylococcus epidermidis, beta-hæmolytisk streptokok gruppe A + streptokok gruppe B og Streptococcus sanguis. Specificiteten af Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 i tests af kropsvæsker og bloddyrkningssupernatanter var henholdsvis 100 % (138/138) og 99 % (458/461) (tabel 1). De bakterier, der blev isoleret fra de 3 positive bloddyrkninger, var: en beta-hæmolytisk streptokok gruppe A (aerobiske og anaerobiske dyrkninger fra samme patient) og en koagulase negativ stafylokok. Én spinalvæskeprøve fra en patient med en N. meningitidis gruppe C infektion gav en ikke-specifik reaktion. Identifikation af pladekulturer N. meningitidis og E. coli dyrkninger dyrket på et beriget agarmedie blev testet i hospitalslaboratorier og udviklingslaboratoriet. Alle N. meningitidis gruppe B og E. coli K1 dyrkninger blev korrekt identificeret. Der var ingen krydsreaktioner med andre grupper af N. meningitidis eller andre E. coli K antigener (tabel 2). En høj andel af de E. coli dyrkninger med andre K-antigener, der blev testet, gav ikkespecifikke reaktioner (tabel 2). Tabel 1 Resultater af kliniske studier af Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 Sensitivitet a Specificitet b Prøve Ant. testet Ant. positive Ant. testet Ant. positive Spinalvæske: N. meningitidis B E. coli K1 c Serum: N. meningitidis B Urin: N. meningitidis B Bloddyrkning: N. meningitidis B d a Prøver, der blev fundet dyrkningspositive eller positive med en anden antigentest plus klinisk diagnose. b Prøver, der var negative for N. meningitidis B/E. coli K1 med dyrkning og alternativ antigentest. c Prøver opbevaret frosne. Alle andre prøver er testet i frisk tilstand. d Aerobiske og anaerobiske dyrkninger (beta-hæmolytisk strep A) for samme patient. Koagulase negativ stafylokok. 4 Tabel 2 Identifikation af kulturer ved hjælp af Wellcogen TM N. meningitidis B/E. coli K1 Dyrkning a + N. meningitidis gruppe A 0 16 N. meningitidis gruppe B 10 0 N. meningitidis gruppe C 0 18 N. meningitidis gruppe 29E 0 8 N. meningitidis gruppe W N. meningitidis gruppe X 0 4 N. meningitidis gruppe Y 0 5 N. meningitidis gruppe Z 0 3 E. coli K1 7 0 E. coli andre antigener 0 13 b a b Kulturer identificeret ved slide agglutination. Yderligere 10 kulturer gav ikke-specifikke reaktioner. 14 BIBLIOGRAFI 1 Band, J.D., Chamberland, M.E., et al (1983). Trends in meningococcal disease in the United States, J. Infect. Dis., 148, Bøvre, K., Bryn, K., et al (1983). Surface polysaccharide of Moraxella non-liquefaciens identical to Neisseria meningitidis group B capsular polysaccharide. A chemical and immunological investigation. NIPH Annals, 6, Doskeland, S.O. and Berdal, B.P. (1980). Bacterial antigen detection in body fluids: methods for rapid antigen concentration and reduction of nonspecific reactions. J. Clin. Microbiol., 11, Fallon, R.J. and McIllmurray, M.B. (1976). Escherichia coli K1. Lancet, i, Feigin, R.D., Wong, M., et al (1976). Countercurrent immunoelectrophoresis of urine as well as of CSF and blood for diagnosis of bacterial meningitis. J. Pediatr., 89, Galazka, A. (1982). Meningococcal disease and its control with meningococcal polysaccharide vaccines. Bull, W.H.O., 60, 1. 7 Jones, D.M. and Eldridge, J. (1981). Meningococcal disease in England and Wales a change in the serotype pattern. J. Infect., 3, Kasper, D.L., Winkelhake, J.L., et al (1973). Immunochemical similarity between polysaccharide antigens of Escherichia coli 07:K1(L):NM and group B Neisseria meningitidis. J. Immunol., 110, Lifely, M.R., Gilbert, A.S., et al (1981). Sialic acid polysaccharide antigens of Neisseria meningitidis and Escherichia coli: esterification between adjacent residues. Carbohyd. Res., 94, Peltola, H. (1983). Meningococcal disease: still with us. Rev. Infect. Dis., 5, Sarff, L.D., McCracken, G.H., et al (1975). The Lancet Saturday 17 May Epidemiology of Escherichia coli K1 in healthy and diseased newborns. Lancet, i, Slack, J. (1982). Deaths from meningococcal infection in England and Wales in J. Royal Coll. Phys. London, 16, Stevens, P., Young, L.S., et al (1983). Correlation of E. coli K-1 bacteremia and capsular polysaccharide antigenemia in acute and chronic infection. Diagn. Microbiol. Infect. Dis., 1, Williams, R.G. and Hart, C.A. (1988). Rapid identification of bacterial antigen in blood cultures and cerebrospinal fluid. J. Clin. Path., 41, 691.

5 Bronidox er et registreret handelsnavn, der tilhører Cognis UK Ltd. Minicon er et varemærke, der tilhører Millipore Corporation. Fremstillet af: Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West, Crossways Dartford, Kent, DA2 6PT UK Fremstillet for: Oxoid Ltd Wade Road Basingstoke, Hants, RG24 8PW UK Kontakt den lokale distributør vedrørende teknisk assistance. Brugsanvisning X7712-DA, revideret den 4. maj, 2011 Trykt i UK 5