BRUGSANVISNING PLADEMEDIER KLAR TIL BRUG PA-254060.06 Rev.: Sep 2011 BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) TILSIGTET BRUG BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) og BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) er ikke-selektive medier til isolering og og dyrkning af kræsne mikroorganismer, specielt Neisseria- og Haemophilus-arter, fra forskellige kliniske prøver. PROCEDURENS PRINCIPPER OG FORKLARING Mikrobiologisk metode. Carpenter og Morton har beskrevet et forbedret medium til isolering af gonokokker i 24 timer. 1 Effektiviteten af dette medium, GC Agar suppleret med hæmoglobin og gærekstrakt, blev demonstreret i en undersøgelse af tolv medier, der anvendtes til isolering af denne organisme. 2 Senere blev der lavet flere forbedringer af mediet. 3-5 Næringsstoffer i BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) kommer fra GC II basen, som indeholder kasein samt udvalgte kødpeptoner som kvælstofkilder, fosfater til at vedligeholde ph samt majsstivelse til at neutralisere toksiske fedtsyrer, der kan være til stede i agaren. Hæmoglobin giver X-faktoren (hemin). BD IsoVitaleX Enrichment er et defineret supplement, som giver V-faktor (nikotinamidadenin-dinukleotid, NAD), der er nødvendig for Haemophilus-arter, samt vitaminer, aminosyrer, koenzymer, glukose, jernioner og andre faktorer, der forbedrer væksten af patogene Neisseria og andre kræsne organismer. Pyridoxal og specifikke vækstfaktorer er blevet tilsat for at forbedre væksten af grampositive bakterier, og pyroxidal er blevet tilsat for at støtte væksten af Granulicatella- og Abiotrophia-arterne (= næringsmæssige varianter af streptokokker). 6-9 Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) er et alternativt medium til isolering af kræsne organismer fra kliniske prøver. 7 indeholder proteose peptoner, leverfordøjelse og gærekstrat som kilder til kvælstof og vitaminer. Natriumklorid bevarer den osmotiske stabilitet. Opvarmet (varmedenatureret) hesteblod giver både X-faktor (heme) og siden det ikke indeholder NADase V-faktor (nikotinamid-adenindinukleotid, NAD), som er nødvendige for væksten af Haemophilus influenzae og giver yderligere næringsstoffer. REAGENSER Formler* pr. liter renset vand BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) Pankreatisk fordøjelse af 7,5 g Proteose pepton nr. 3 15,0 g kasein Udvalgt kødpepton 7,5 Leverfordøjelse 2,5 Majsstivelse 1,0 Gærekstrakt 5,0 Dikaliumfosfat 4,0 Natriumklorid 5,0 Monokaliumfosfat 1,0 Hesteblod (opvarmet) 7 % Natriumklorid 5,0 ph 7,4± 0,2 Agar 12,0 Hæmoglobin 10,0 IsoVitaleX Enrichment 12,0 ml Pyridoxal 0,01 g Vækstfaktorer 0,5 ph 7,2 ± 0,2 * Justeret og/eller suppleret som påkrævet for at leve op til funktionskriterier. PA-254060.06-1 -
BD IsoVitalex Enrichment indeholder følgende vækstfaktorer (formel* pr. liter renset vand): B 12 vitamin 0,01 g L-glutamin 10,0 Adenin 1,0 Guaninhydroklorid 0,03 p-aminobenzoesyre 0,013 Nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD) 0,25 Thiaminpyrofosfat 0,1 Jernnitrat 0,02 Thiaminhydroklorid 0,003 Cysteinhydroklorid 25,9 L-cystein 1,1 Glukose 100,0 * Justeret og/eller suppleret som påkrævet for at leve op til funktionskriterier. FORHOLDSREGLER. Kun til professionel brug. Pladerne må ikke anvendes, hvis de viser tegn på mikrobiel kontaminering, misfarvning, udtørring, brud eller andre tegn på forringelse. Læs dokumentet GENEREL BRUGSANVISNING for procedurer om aseptisk håndtering, biologisk risiko og bortskaffelse af det brugte produkt. OPBEVARING OG HOLDBARHED Pladerne opbevares efter modtagelse i mørke ved 2 8 C i deres originale hylsterindpakning, lige indtil de skal bruges. Undgå nedfrysning og overophedning. Pladerne kan inokuleres op til udløbsdatoen (se etiketten på pakken) og inkuberes i de anbefalede inkubationstider. Plader fra åbnede stabler med 10 plader kan bruges i en uge, når de opbevares i et rent område ved 2 8 C. BRUGERKVALITETSKONTROL Repræsentative prøver inokuleres med følgende stammer (yderligere oplysninger findes i dokumentet GENEREL BRUGSANVISNING). Pladerne inkuberes ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære suppleret med kuldioxid. Aflæs pladerne efter 18-24 og efter 42-48 timers inkubation. Stammer* Haemophilus influenzae ATCC 10211 Neisseria gonorrhoeae ATCC 43069 Neisseria meningitidis ATCC 13090 Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Ikke-inokuleret BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) og Udmærket til fortræffelig vækst Chokoladebrun, opak, kan være lettere uhomogen. * BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) kan yderligere testes med Granulicatella (Abiotrophia) adiacens DSM 9848 for at vise vækst af næringsmæssige varianter af streptokokker. 8,9 PROCEDURE Vedlagte materialer BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) eller BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), begge leveret i 90 mm Stacker plates. Mikrobiologisk kontrolleret. Materialer, der ikke er vedlagt Hjælpedyrkningsmedier, reagenser og laboratorieudstyr som påkrævet. PA-254060.06-2 -
Prøvetyper Disse medier kan principielt bruges til alle typer prøver fra infektioner, der menes at indeholde kræsne organismer, særligt men ikke kun til prøver fra primært sterile kropsområder (f.eks. cerebrospinalvæske, abscesser). De anvendes hovedsageligt til den ikke-selektive isolering af Neisseria, Haemophilus og andre bakterier, der måske ikke vokser på rutinemæssigt anvendte blodagarmedier, såsom Columbia Agar with 5% Sheep Blood. BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) kan desuden anvendes til isolering af Abiotrophia- og Globicatella-arter (= næringsmæssige varianter af streptokokker). 8,9 Mediet anvendes også som subkulturmedium fra blodkulturer. (se også FUNKTIONSDATA OG PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER). Prøveopsamling og -transport Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus og andre kræsne organismer er følsomme for ugunstige miljømæssige tilstande. Derfor skal de rette transportmedier bruges til alle prøver. Prøverne skal sendes til laboratoriet så hurtigt som muligt og må ikke være over 24 timer gamle, også selvom der anvendes transportmedier. Den optimale transporttemperatur er 20 25 C. Må ikke afkøles. 10,11 Testprocedure Udstryg prøven på BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) eller BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) så snart som muligt, efter den modtages i laboratoriet. Udstrygningspladen anvendes primært til at isolere rene kulturer fra prøver, der indeholder blandet flora. Hvis materialet dyrkes direkte fra en vatpind, kan vatpinden rulles over et lille område på overfladen ved kanten. Derefter udstryges fra dette inokulerede område. Hvis prøven er opsamlet fra et kropsområde med normal flora, skal den også inokuleres på et passende selektivt medium afhængig af det patogene stof, der skal isoleres. For Neisseria gonorrhoeae, skal en BD Martin-Lewis Agar, modified eller BD GC-Lect Agar plade inkluderes, og for Haemophilus, skal en BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin plade inkluderes. Pladerne inkuberes ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære suppleret med kuldioxid. Aflæs pladerne efter 18-24 og efter 42-48 timers inkubation. Resultater Typisk kolonimorfologi er som følger: Organismer BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) og Haemophilus influenzae Små (1 mm), fugtige, perleagtige med en karakteristisk "muse"-lugt Neisseria gonorrhoeae Små, grålig-hvide til farveløse, slimede Neisseria meningitidis Mellemstore til store, blå-grå, slimede Streptococcus pneumoniae Små, flade eller større slimede, grønlige kolonier, mellemstore omgivende kolonier kan være grønlige Granulicatella (Abiotrophia) Små grå-grønlige kolonier, mellemstore omgivende kolonier adiacens* kan være grønlige FUNKTIONSDATA OG PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) og BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) er berigede, ikke-selektive medier, på hvilke kræsne og ikke-kræsne bakterier, inklusive normal flora, vil vokse. Derfor anbefales det at inokulere prøverne fra kropsområder, der indeholder normal flora, på passende selektive medier. Termen "kræsne bakterier" er relateret til bakterier, der ikke vokser eller ikke vokser godt på normalt anvendte medier til primær isolering indeholdende fåreblod, f.eks. Haemophilus, patogen Neisseria samt flere andre organismer. Se referencematerialet 8,9,11,12 for yderligere oplysninger om de typer prøver, der skal inokuleres på disse medier, og de typer organismer til hvilke disse medier anvendes til isolering. Antallet og typerne af de bakterielle arter, der forekommer som smittefarlige, er meget store. Derfor bør disse mediers egnethed testes for sjældent isolerede eller nyligt beskrevne PA-254060.06-3 -
mikroorganismer inden rutinemæssig brug, ved at brugeren dyrker rene kulturer af den givne organisme. er ikke blevet testet for at støtte væksten af Abiotrophia-arter og andre næringsmæssige varianter af streptokokker. Se referencematerialet for en diskussion af næringsmæssige varianter af streptokokker. 6,8,9,13 LITTERATUR 1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton. 1947. An improved medium for isolation of the gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27:58-60. 2. Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R. Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer. 1949. Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33:164-176. 3. Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen. 1988. Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeys ville, Md. 4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer. 1967. Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82:361-363. 5. Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi. 1974. Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28:688-690. 6. Ruoff, L.R. 2003. Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Anonymous. 1998. DIFCO Manual, 11 th edition. DIFCO Laboratories, Division of Becton Dickinson and Co. Sparks, MD, USA. 8. Reimer, L.G., and L.B. Reller. 1981. Growth of nutritionally variant streptococci on common laboratory and 10 commercial blood culture media. J. Clin. Microbiol. 14:329-332. 9. Collins, M.D., and P.A. Lawson. 2000. The genus Abiotrophia (Kawamura et al.) is not monophyletic: proposal of Granulicatella gen. nov., Granulicatella adiacens comb. nov., Granulicatella elegans comb. nov. and Granulicatella balaenopterae comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: 365-369. 10. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Forbes, B.A., and P.A. Granato. 1995. Processing specimens for bacteria. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Ruoff, K.L. 2003. Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. EMBALLERING/BESTILLING BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Kat. nr. 254060 Plademedier klar til brug, 20 plader Kat. nr. 254089 Plademedier klar til brug, 120 plader Kat. nr. 257011 Plademedier klar til brug, 20 plader Kat. nr. 257456 Plademedier klar til brug, 120 plader PA-254060.06-4 -
YTTERLIGARE INFORMATION Kontakta närmaste BD-representant för ytterligare information. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. 2011 BD PA-254060.06-5 -