Experimentiel design Planlægning af forsøg
The 3 R s Replacement F.eks. in vitro eksperimenter Refinement F.eks. Anaestesi og smertelindring Reduction Forskningsmål Kontrol over faktorernes indvirken på forsøget Eksperimentielt design og statistik
Replacement Relative replacement Dyr med kun lille eller ingen belastning Absolute replacement Slet ingen dyr
Eksempel på relative replacement En forsker søger Forsøgsdyrstilsynet om tilladelse til: Forsøg på nyfødte rotter Dyrene må ikke være vaginal født Der udføres kejsersnit på moderen Ungerne lægges til diegivning hos moderen Alternativ: Ungerne udtages ved kejsersnit af en aflivet moder Lægges til en fostermoder!!!
Eksempel på absolute replacement Dyrkning af hybridomceller i primede Balb/c mus Ascites Monoklonale antistoffer Alternativ: Dyrkning af hybridomceller i cellefabrik.
Refinement Forsøg på at nedsætte antallet af eller reducere graden af ikke-humane procedurer på dyr i forsøg Dette gøres ved: Uddannelse Anæstesi og smertelindring
Eksempel på refinement Akut toksikologi Traditionel test - LD50 Den akutte giftighed defineres ved den dosis som slår halvdelen af test dyrerne ihjel Herefter klassificeres stoffet som Ugiftigt Giftigt Meget giftigt
Eksempel på refinement Akut toksikologi Alternativ test - Fast dosis test Den akkutte giftighed defineres ud fr at dyrerne får en fast ikke-effektiv dosis, hvorefter dyrerne aflives og obduceres Patologiske forandringer fundet ved obduktionen afgør om stoffet er Ugiftigt Giftigt Meget giftigt
Reduction Reduktion i antallet af dyr brugt uden tab af information Variationen af forsøget som er problemet Ydre faktorer Indre faktorer
Ydre faktorer Lys og lyde Foder Klimaet Opstaldningen Håndteringen Strøelse OSV.
Indre faktorer Genetikken Køn Alder Biologiske rytmer
Summeopgave - 5 min. I har fundet et stof som I tror vil forhindre afstødning af et transplanteret hjerte fra donor til modtager og I vil teste dette i et dyreforsøg. I dette eksperiment tages hjertet fra donor og sættes ind i modtager (uden denne hjerte fjernes). Følgende rottestammer er til rådighed: udavl Wistar og Sprague-Dawley; indavlaci, F344 og Lew. Hvordan vil I designe forsøget og hvilken rottestamme vil I bruge som donor og/eller modtager???
Problemer med genetisk heterogenecitet Donor Elefant Beagle Høne Hest Løve Kanin Modtager Mus Ged Gris Frø Hamster Kat
Et bedre design Donor Elefant Beagle Høne Hest Løve Kanin Modtager Elefant Beagle Høne Hest Løve Kanin
Et endnu bedre design Donor F344 WAG Lew BDIX Modtager WAG F344 BDIX Lew
Ud- eller indavlede dyr Indavlede dyr: F.eks. BDIX/OrlIco Udavlede dyr: F.eks. Han:Wistar
Indavlede stammer Avlet >20 generationer ved søster x bror krydsninger Isogenetiske Homozygotiske Identificerbare Meget følsomme International anerkendt
Billeder af geler
Spontane tumorer BN Blærekræft 35% Testikelkræft 0% Brystkræft 0% F344 Blærekræft 0% Testikelkræft 85% Brystkræft 23%
Udavlede dyr Meget anvendt Fordele: Billige Nemme at anskaffe Avler godt Ulemper Ukendt genetik Følsom for genetiske ændringer ( Fænotypisk forskellige Ikke histokompatible
Dårlig eksperimentielt design Gennemgang af 48 forsøg in 33 artikler 33% af dyreforsøgene bruger 2x for mange dyr!!! Ofte anvendes for få behandlinger Grupperinger er sjældent brugt 67% er ikke statistisk korrekt analyseret
Hvad er et videnskabeligt forsøg Opstille og teste hypoteser Eksperimentielt design sikrer at de bedst mulige forhold for forsøget er tilstede
Hypoteser Hypoteser er den vigtigeste del af studiet Det ultimative formål med et studie er at acceptere eller afvise en given hypotese Statistiske analyser
Hvad er en (dyre)model? Figur på tavlen
Dyremodeller Fidelity model Discriminations model
Hvad er eksperimentielt design Have klare formål med studiet Have godt kendskab til litteraturen Brugen af den rigtige model Have erfaring Bruge de rigtige statistiske analyser
Erfaringer For at opnå erfaringer indenfor området er det ofte en god ide at udføre pilot forsøg
Statistiske metoder
Hypotese: Man ved fra litteraturen at folk som spiser gulerødder har mindre risiko for at udvikle kræft Man har for nyligt fundet frem til et stof A fra gulerødder, som menes at have en gavnlig effekt over kræft i tyktarmen
Gruppearbejde Hypotese: Et stof A fra gulerødder menes at have en gavnlig effekt over kræft i tyktarmen Opstil eksperimentielt design for et sådant forsøg til at test stof A og/eller gulerødders helbredsgavnlige effekter i en dyremodel!