EnVision FLEX+, Mouse, High ph, (Link)

EnVision FLEX+, Mouse, High ph, (Link) Kode K8002 5. udgave Sættet indeholder reagenser til 400 600 analyser. Til Autostainer Link-instrumenter. Valgfri reagenser Kode Produktnavn Analyser K8004 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 200-430 K8005 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) 200-430 K8006 EnVision FLEX Antibody Diluent 400-600 K8007 EnVision FLEX Wash Buffer (20x) K8008 EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) 400-600 K8009 EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER), (Link) 130-200 K8021 EnVision FLEX+ Mouse (LINKER), (Link) 130-200 Andre muligheder: K8020 FLEX IHC Microscope Slides 500

Indhold/ Side _Toc223142415Tilsigtet anvendelse... 3 Resumé og forklaring... 3 Reagenser... 4 A. Medfølgende materialer... 4 B. Nødvendige materialer, der ikke medfølger... 4 C. Valgfri reagenser... 5 Forholdsregler... 6 Opbevaring... 7 Klargøring af reagens... 7 Indsamling og klargøring af prøver... 8 Procedure... 8 A. Forbehandlingsprocedure... 8 B. Farvningsprocedure... 10 Kvalitetskontrol... 10 Fortolkning af resultater... 10 Begrænsninger... 11 Symbolforklaring... 11

DANSK Tilsigtet anvendelse Anvendes til in vitro diagnostik. Dako EnVision FLEX+ detektionssystem er beregnet til brug ved immunhistokemi sammen med Autostainer Link-instrumenter. Systemet detekterer primære murine og kanin-antistoffer, og reaktionen visualiseres med EnVision FLEX DAB+ Chromogen. Hvis det bruges sammen med EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) eller EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) (kode 8009), kan der opnås signalforstærkning af henholdsvis primære murine antistoffer eller primære kanin-antistoffer. EnVision FLEX+ reagenser er beregnet til brug på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Resumé og forklaring Dako EnVision FLEX+ detektionssystem er designet til at være et fleksibelt system, der giver optimal farvning på Autostainer Link-instrumenter ved anvendelse af protokollen, der anbefales i denne indlægsseddel. Som en retningslinje, når EnVision FLEX+ Mouse (kode K8002) bruges, øges signalforstærkningen 4 5 gange, og når EnVision FLEX+ Rabbit (kode K8009, valgfri reagens) bruges, øges signalforstærkningen 2 3 gange. Inden farvning skal formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit underkastes afparaffinering og hydrering, efterfulgt af varmeinduceret epitop-retrieval (HIER) med anvendelse af den target retrieval-metode, som er angivet i indlægssedlen til det primære antistof. Læs også afsnittet Procedure med henblik på 3-i-1 klargøring af præparater. Kode K8002 indeholder EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x). Som et alternativ anbefales EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (kode K8004) eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kode K8005). Visse primære antistoffer kræver enzymatisk forbehandling af vævet i stedet for HIER for at opnå en optimal farvning. Endogen peroxidase skal blokeres med EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (SM801), som følger med sættet. På grund af en effektiv vaskeprocedure og stabiliserende proteiner i Dakoreagenserne er yderligere blokeringstrin med henblik på at reducere uspecifik baggrundsfarvning ikke påkrævet. Det anbefales at bruge EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (DM831), som følger med sættet eller kan købes som valgfri reagens (kode K8007). Sættet indeholder ikke primære antistoffer. Vi anbefaler brug af FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller Dako Concentrated Primary Antibodies. EnVision FLEX Antibody Diluent (kode K8006) anbefales til fortynding af Dako Concentrated Primary Antibodies. EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (DM824), der følger med sættet eller kan købes som valgfri reagens (kode K8021), kan erstattes med EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) (kode K8009), når der anvendes primære kaninantistoffer. EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) og EnVision FLEX+, Rabbit (LINKER) kan anvendes til en valgfri signalforstærkning af henholdsvis primære murine antistoffer og primære kanin-antistoffer. Som en retningslinje: EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) giver en signalforstærkning på 4 5 gange, og EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) giver en signalforstærkning på 2 3 gange. Dako EnVision FLEX /HRP Detection Reagent (SM802) i sættet består af en dextranbase, som er koblet til et stort antal peroxidasemolekyler (HRP) og sekundære antistofmolekyler. Der anvendes en unik kemi til koblingsreaktionen, som tillader binding af op til 100 HRP molekyler og op til 20 antistofmolekyler pr. base. Substratsystemet i sættet består af to komponenter: EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM827), en koncentreret diaminobenzidin-opløsning (DAB), og EnVision FLEX Substrate Buffer (SM803), der indeholder hydrogenperoxid. Inden anvendelse skal EnVision FLEX DAB+ Chromogen fortyndes i EnVision FLEX Substrate Buffer. Substratsystemet danner et tydeligt brunt slutprodukt på stedet for målantigenet. EnVision FLEX Hematoxylin (kode K8008) anbefales til kontrastfarvning. Reagenset giver en klar, blå kernefarvning. De farvede vævssnit kan monteres med vandbaseret eller organisk opløsningsmiddelbaseret monteringsmedie.

Reagenser A. Medfølgende materialer SM801 SM802 DM827 SM803 DM828 DM831 SM804 EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent 3 x 40 ml, brugsklar fosfatbuffer, der indeholder hydrogenperoxid, 15 mmol/l NaN 3 og vaskemiddel. EnVision FLEX/HRP 3 x 40 ml, brugsklar dextran koblet med peroxidasemolekyler og sekundære gedeantistofmolekyler mod kanin- og murine immunglobuliner. I bufferopløsning, der indeholder stabiliserende protein og konserveringsmiddel. EnVision FLEX DAB+ Chromogen 3 x 3 ml 3,3'-diaminobenzidin-tetrahydrochlorid i organisk opløsningsmiddel. Farven på dette reagens kan variere fra stærk violet til farveløs, uden at det har nogen indflydelse på sættets ydeevne. EnVision FLEX Substrate Buffer 12 x 20 ml bufferopløsning, indeholdende hydrogenperoxid og konserveringsmiddel. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 9 x 30 ml, 50x koncentreret tris/edta buffer, ph 9 EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 4 x 1 L, 20x koncentreret tris-bufferet saltvandsopløsning, indeholdende Tween 20, ph 7,6 (±0,1). EnVision FLEX+, Mouse (LINKER) 3 x 40 ml, brugsklar bufferopløsning indeholdende stabiliserende protein og antimikrobielt stof. B. Nødvendige materialer, der ikke medfølger Autostainer Link-instrument Dako PT Link Dako Proteinase K, Ready-to-Use (om nødvendigt) Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller korrekt fortyndede, koncentrerede, primære kanineller murine antistoffer fra Dako Dako FLEX Ready-to-Use Rabbit eller Mouse Universal Negative Control eller egnet negativ kontrolreagens til det primære antistof

Dako-instrumentredskaber Objektglas, f.eks. FLEX IHC Microscope Slides Generelle laboratoriereagenser til fjernelse af paraffin på paraffinindstøbte vævssnit Monteringsmedie (vandigt eller organisk opløsningsmiddelbaseret) og dækglas C. Valgfri reagenser K8004 DM828 K8005 DM829 K8006 DM830 K8007 DM831 K8008 SM806 K8009 SM805 K8021 SM804 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 3 x 30 ml, 50x koncentreret tris/edta buffer, ph 9 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) 3 x 30 ml, 50x koncentreret citratbuffer, ph 6,1 EnVision FLEX Antibody Diluent 120 ml, brugsklar tris-buffer, ph 7,2, indeholdende 15 mmol/l NaN 3 og protein. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 1 L, 20x koncentreret tris-bufferet saltvandsopløsning, indeholdende Tween 20, ph 7,6 (±0,1). EnVision FLEX Hematoxylin 3 x 45 ml, brugsklar vandig hæmatoxylinopløsning. EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) 40 ml, brugsklar bufferopløsning indeholdende stabiliserende protein og antimikrobielt stof. Indeholder reagenser til 130 200 analyser baseret på, at der bruges 200 300 µl per analyse. EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) 40 ml, brugsklar bufferopløsning indeholdende stabiliserende protein og antimikrobielt stof. Indeholder reagenser til 130 200 analyser baseret på, at der bruges 200 300 µl per analyse.

Forholdsregler 1. Må kun anvendes af uddannet personale. 2. EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) og EnVision FLEX+ Rabbit (LINKER) indeholder materiale af animalsk oprindelse, og det kan ikke udelukkes, at der er spor af humant materiale på grund af fremstillingsmetoderne. Som med alle produkter afledt fra biologiske kilder bør der iagttages korrekte håndteringsprocedurer. 3. EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX/HRP, EnVision FLEX Substrate Buffer, EnVision FLEX DAB+ Chromogen, EnVision FLEX Substrate Working Solution og EnVision FLEX Hematoxylin må ikke udsættes for stærkt lys under proceduren. 4. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) og EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) indeholder 5-<10% Nonoxinol: H319 H411 P280 P273 P264 P305 + P351 + P338 P337 + P313 P501 Advarsel Forårsager alvorlig øjenirritation. Giftig for vandlevende organismer, med langvarige virkninger. Bær øjen- eller ansigtsbeskyttelse. Undgå udledning til miljøet. Vask hænder grundigt efter brug. VED KONTAKT MED ØJNENE: Skyl forsigtigt med vand i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser, hvis dette kan gøres let. Fortsæt skylning. Ved vedvarende øjenirritation: Søg lægehjælp. Indholdet og beholderen bortskaffes i henhold til alle lokale, regionale, nationale og internationale regler. 5. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) indeholder 10-30% 2-Amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3- diol hydrochloride: H319 H315 P280 P264 P302 + P352 + P362-2 + P363 P332 + P313 P305 + P351 + P338 P337 + P313 Advarsel Forårsager alvorlig øjenirritation. Forårsager hudirritation. Bær beskyttelseshandsker. Bær øjen- eller ansigtsbeskyttelse. Vask hænder grundigt efter brug. VED KONTAKT MED HUDEN: Vask forsigtigt med rigeligt sæbe og vand. Alt tilsmudset tøj tages af. Tilsmudset tøj skal vaskes, før det kan anvendes igen. Ved hudirritation: Søg lægehjælp. VED KONTAKT MED ØJNENE: Skyl forsigtigt med vand i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser, hvis dette kan gøres let. Fortsæt skylning. Ved vedvarende øjenirritation: Søg lægehjælp. 6. Til EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent findes der et sikkerhedsdatablad, som kan rekvireres af professionelle brugere.

7. EnVision FLEX DAB+ Chromogen indeholder 1 5 % 3,3 -diaminobenzidin-tetrahydrochlorid og er mærket: Fare H350 H341 P201 P202 P280 P308 + P313 P405 P501 Kan fremkalde kræft. Mistænkt for at forårsage genetiske defekter. Indhent særlige anvisninger før brug. Anvend ikke produktet, før alle advarsler er læst og forstået. Brug egnede beskyttelseshandsker. Bær beskyttelse til øjne og ansigt. Brug særligt arbejdstøj. VED eksponering eller mistanke om eksponering: Søg lægehjælp. Opbevares under lås. Indholdet og beholderen bortskaffes i henhold til alle lokale, regionale, nationale og internationale regler. 8. EnVision FLEX Antibody Diluent (kode K8006) indeholder natriumazid (NaN 3 ), et kemikalie, der er yderst giftigt i ren form. Selvom koncentrationen i produktet ikke er klassificeret som farlig, kan natriumazid reagere med bly og kobber og danne meget eksplosive ophobninger af metalazider. Efter bortskaffelse skylles med rigelige mængder vand for at hindre ophobning af metalazid i afløb. 9. Brug egnet personligt beskyttelsesudstyr for at undgå kontakt med øjne og hud. 10. Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokale, nationale og EU-bestemmelser. Opbevaring Opbevar EnVision FLEX og EnVision FLEX+ reagenser ved 2 8 C. Opbevar EnVision FLEX Perioxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX/HRP og EnVision FLEX Substrate Buffer i mørke ved 2 8 C. Opbevar EnVision FLEX Hematoxylin (kode K8008) i mørke ved stuetemperatur. Må ikke anvendes efter den udløbsdato, der er trykt på flaskerne. Hvis reagenserne opbevares under andre betingelser end de specificerede, skal betingelserne verificeres af brugeren. Den klargjorte Substrate Working Solution skal opbevares i mørke ved 2 8 C og anvendes inden for 5 dage. Kontakt Dakos tekniske serviceafdeling, hvis der observeres uventet farvning, som ikke kan forklares med variationer i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et problem med produktet. Klargøring af reagens A.1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM828, kode K8004) Fortynd en passende mængde EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) i forholdet 1:50 med destilleret eller deioniseret vand til den planlagte farvning. Hvis Dako PT Link bruges til forbehandling, kan fortyndingen ske ved at tømme indholdet af flasken med Target Retrieval Solution (50x) over i Dako PT Link-karret og tilsætte destilleret eller deioniseret vand til den afmærkede linje (fyldelinjen). Ubrugt, fortyndet opløsning kan opbevares ved 2 8 C i en måned. Kassér opløsningen, hvis den er uklar. Når den fortyndede opløsning anvendes i PT Link til en 3-i-1 præparatklargøringsprocedure, kan den anvendes 3 gange inden for en 5 dages periode, hvis den opbevares ved stuetemperatur. A.2 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (DM829, kode K8005) Fortynd en passende mængde EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) i forholdet 1:50 med destilleret eller deioniseret vand til den planlagte farvning. Hvis Dako PT Link bruges til forbehandling, kan fortyndingen ske ved at tømme indholdet af flasken med Target Retrieval Solution (50x) over i Dako PT Link-karret og tilsætte destilleret eller deioniseret vand til den afmærkede linje (fyldelinjen). Ubrugt, fortyndet opløsning kan opbevares ved 2 8 C i en måned. Kassér opløsningen, hvis den er uklar. Når

den fortyndede opløsning anvendes i PT Link til en 3-i-1 præparatklargøringsprocedure, kan den anvendes 3 gange inden for en 5 dages periode, hvis den opbevares ved stuetemperatur. A.3 EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (DM831, kode K8007) Fortynd en passende mængde EnVision FLEX Wash Buffer (20x) i forholdet 1:20 med destilleret eller deioniseret vand til den planlagte farvning. Fortynd ved at tilsætte den koncentrerede vaskebuffer til en på forhånd afmålt mængde destilleret eller deioniseret vand for at minimere skumdannelse. Omrør forsigtigt, indtil den fortyndede opløsning fremstår homogen. Ubrugt, fortyndet opløsning kan opbevares ved 2 8 C i en måned. Kassér opløsningen, hvis den er uklar. Når den fortyndede opløsning anvendes i PT Link til en 3-i-1 præparatklargøringsprocedure, kan den anvendes 3 gange inden for en 5 dages periode, hvis den opbevares ved stuetemperatur. A.4 EnVision FLEX Substrate Working Solution EnVision FLEX Substrate Working Solution, der indeholder DAB, klargøres ved at blande det grundigt med 1 dråbe EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM827) pr. 1 ml EnVision FLEX Substrate Buffer (SM803). EnVision FLEX Substrate Working Solution skal anvendes inden for 5 dage (opbevares mørkt ved 2 8 C). Indsamling og klargøring af prøver Prøverne kan være formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Fikseringstiderne afhænger af det anvendte fiksativ og vævstype/-tykkelse. For eksempel skal vævsblokke med en tykkelse på 3 4 mm fikseres i neutral bufferet formalin i 18 24 timer. Den optimale tykkelse for paraffinindstøbte snit er ca. 4 µm. Præparaterne skal monteres på objektglas, f.eks. FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020). Snittene skal monteres på objektglassene så fladt og med så få folder som muligt. For mange folder vil påvirke farvningsresultaterne. BEMÆRK: Objektglassene skal have en bredde, der passer til Autostainer Link-instrumentet. Se brugervejledningen til de enkelte Dako-instrumenter vedr. en definition af brugbare objektglas. Paraffinsnit skal monteres fra et forvarmet vandbad med destilleret eller deioniseret vand. Vandbadet må ikke indeholde additiver (f.eks. gelatine, poly-l-lysin osv.). Snittene skal tørres ved opvarmning, generelt ved en temperatur, der ikke overstiger 60 C, i op til 60 minutter. Det er vigtigt at fjerne vandet under snittene inden ovntørringen for at sikre, at snittene hæfter godt på objektglassene. Procedure Autostainer Link-instrumenter anvender teknikker, der er baseret på forskellige principper, for at opnå et optimalt farvningsresultat. Inden der køres protokoller på et Autostainer Link-instrument, skal brugervejledningen til det anvendte Dako-instrument læses grundigt igennem. For at sikre sig reproducerbar epitop-retrieval anbefales det, at objektglasholderen altid fyldes helt op med objektglas. Dermed sikres den samme opvarmning af snittene i hver kørsel. A. Forbehandlingsprocedure Anbefalet 3-i-1 præparatklargøringsprocedure ved hjælp af PT Link: Afparaffinering, rehydrering og varmeinduceret epitop-retrieval (HIER) kan udføres på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit ved hjælp af 3-i-1 proceduren: 1. Klargør en arbejdsopløsning ved at fortynde den koncentrerede EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x) i forholdet 1:50 med destilleret eller deioniseret vand. 2. Fyld PT Link-karrene op med en tilstrækkelig mængde (1,5 L) arbejdsopløsning til at dække vævssnittene. 3. Indstil PT Link til at forvarme opløsningen til 65 C. 4. Nedsænk de monterede, formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit i den forvarmede EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbejdsopløsning) i PT Link-karrene og inkuber i 20 40 minutter ved 97 C. Den optimale inkubationst id skal fastsættes af brugeren.

5. Lad snittene afkøle i PT Link til 65 C. 6. Fjern hvert Autostainer-glasstativ med objektglas fra PT Link-karret og dyp straks objektglassene i et glas/kar (f.eks. PT Link Rinse Station, kode PT109) med fortyndet EnVision FLEX Wash Buffer (20x) ved stuetemperatur. 7. Lad objektglassene stå i 1 5 minutter ved stuetemperatur i den fortyndede EnVision FLEX Wash Buffer (20x). 8. Anbring objektglassene på et Autostainer Link-instrument og gå videre med farvning. Snittene må ikke tørre ud under behandlingen eller under den immunhistokemiske farvningsprocedure. 9. Efter farvningen anbefales det at udføre dehydrering, rensning og permanent montering. BEMÆRK: Når den fortyndede target retrieval-opløsning og den fortyndede vaskebuffer anvendes i PT Link til 3-i-1 præparatklargøringsproceduren, kan de anvendes 3 gange inden for en 5 dages periode, hvis de opbevares ved stuetemperatur. HIER procedure ved hjælp af PT Link: Efter afparaffinering og hydrering til buffer (vand) skal vævssnittene underkastes varmeinduceret epitop-retrieval (HIER): 1. Klargør en arbejdsopløsning ved at fortynde den koncentrerede EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x) i forholdet 1:50 med destilleret eller deioniseret vand. 2. Fyld PT Link-karrene op med en tilstrækkelig mængde (1,5 L) arbejdsopløsning til at dække vævssnittene. 3. Indstil PT Link til at forvarme opløsningen til 65 C. 4. Vævssnittene, der er monteret på objektglassene, skal afparaffineres og rehydreres manuelt. For bedre vævsadhæsion anbefales det at anvende belagte eller silaniserede objektglas. 5. Nedsænk vævssnittene, som har stuetemperatur, i den forvarmede EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbejdsopløsning) og inkuber i 20 40 minutter ved 97 C. Den optimale inkubationstid skal fastsættes af brugeren. 6. Lad snittene afkøle i PT Link til 65 C. 7. Fjern hvert glasstativ fra PT Link-karret og dyp straks objektglassene i et glas/kar (f.eks. PT Link Rinse Station, kode PT109) med fortyndet EnVision FLEX Wash Buffer (20x) ved stuetemperatur. 8. Lad objektglassene stå i 1 5 minutter ved stuetemperatur i den fortyndede EnVision FLEX Wash Buffer (20x). 9. Anbring objektglassene på et Autostainer Link-instrument og gå videre med farvning. Snittene må ikke tørre ud under behandlingen eller under den immunhistokemiske farvningsprocedure. 10. Efter farvningen skal objektglassene monteres ved hjælp af et vandigt eller permanent monteringsmedie. BEMÆRK: Når den fortyndede target retrieval-opløsning og den fortyndede vaskebuffer anvendes i PT Link til HIER-proceduren, kan de anvendes 3 gange inden for en 5 dages periode, hvis de opbevares ved stuetemperatur. HIER-procedure med Coplin-skåle: Efter afparaffinering og hydrering til buffer (vand) skal vævssnittene underkastes varmeinduceret epitop-retrieval (HIER): 1. Anbring farvningsskålene, der indeholder fortyndet EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x), i vandbad. 2. Opvarm vandbad og skålene fyldt med EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbejdsopløsning) til 95 99 C. Sæt låg på skålene for at stabilisere temperaturen og undgå fordampning. 3. Dyp snittene, der har stuetemperatur, i den forvarmede EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbejdsopløsning) i farvningsskålene. 4. Opvarm igen vandbadet og EnVision FLEX Target Retrieval Solution til 95 99 C. Inkuber i 20 (±1) minutter ved 95 99 C. 5. Tag hele skålen med objektglassene op af vandbadet. Lad objektglassene køle af i EnVision FLEX Target Retrieval Solution i 20 (±1) minutter ved stuetemperatur.

6. Dekanter EnVision FLEX Target Retrieval Solution og skyl snittene med fortyndet EnVision FLEX Wash Buffer (20x) i 1 5 minutter ved stuetemperatur. 7. Placer stativet med de skyllede snit på et Autostainer Link-instrument. Begynd straks den forudprogrammerede farvning. BEMÆRK: Når den fortyndede target retrieval-opløsning og den fortyndede vaskebuffer anvendes i Coplin-skåle til HIER-proceduren, kan de kun anvendes 1 gang (engangsbrug). Nogle få epitoper tåler ikke HIER, og nogle kræver enzymatisk forbehandling. Se indlægssedlen til hvert enkelt Dako primært antistof. Snittene må ikke tørre ud under behandlingen eller under den efterfølgende immunhistokemiske farvningsprocedure. Det tilrådes at anvende FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020), så vævssnittene hænger bedre fast på objektglassene. B. Farvningsprocedure Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies kan anvendes sammen med Dako EnVision FLEX+ detektionssystem på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Indlægssedlen i det koncentrerede primære antistof indeholder en fortyndingsvejledning til Dako koncentrerede, primære antistoffer. De koncentrerede, primære antistoffer skal fortyndes i EnVision FLEX Antibody Diluent (DM830, kode K8006). Farvningstrinnene og de anbefalede inkubationstider er forprogrammerede i Autostainer Link-softwaren som følgende systemprotokoller til visualisering: FLEX og FLEX 2x5 DAB (FLEX-protokoller) FLEX+ Mouse og FLEX+ Mouse 2x5 DAB (FLEX+ Mouse (LINKER) protokoller) FLEX+ Rabbit og FLEX+ Rabbit 2x5 DAB (FLEX+ Rabbit (LINKER) protokoller) Den anbefalede reagensapplikationsmængde er 1 x 200 µl eller 2 x 150 µl per objektglas. Hvis protokollerne ikke er til rådighed på det anvendte Autostainer Link-instrument, bedes du kontakte Dakos tekniske serviceafdeling. De optimale inkubationstider for det primære antistof og EnVision FLEX/HRP er afhængige af det anvendte primære antistof. Se indlægssedlen til hvert enkelt Dako primært antistof. Brugeren skal kontrollere den anvendte protokol. Prøverne skal monteres, når farvningsproceduren er fuldført. Det anbefales at udføre dehydrering, rensning og permanent montering, når objektglassene er blevet behandlet med 3-i-1 præparatklargøringsproceduren. Objektglas behandlet med HIER-proceduren kan monteres ved hjælp af et vandigt eller permanent monteringsmedie. Monteringsmedier, som f.eks. Dako Glycergel Mounting Medium, kode C0563, eller Faramount Aqueous Mounting Medium, kode S3025, anbefales til vandbaseret montering. Kvalitetskontrol Hver farvekørsel skal omfatte et kendt positivt kontrolpræparat for at sikre en korrekt ydeevne af alle de anvendte reagenser. Hvis det positive kontrolpræparat ikke udviser en positiv farvning, skal mærkningen af prøvepræparaterne betragtes som ugyldige. Der skal anvendes et negativt kontrolreagens sammen med hvert præparat for at identificere en eventuel uspecifik farvning. Hvis uspecifik farvning ikke kan adskilles tydeligt fra den specifikke farvning, skal mærkningen af prøvepræparatet betragtes som ugyldig. Fortolkning af resultater Den diaminobenzidin-indeholdende substratarbejdsopløsning danner en brun farve på stedet for målantigenet, som genkendes af det primære antistof. Den brune farve skal kunne ses på det positive kontrolpræparat på det forventede sted for målantigenet. Hvis der er uspecifik farvning, vil dette kunne ses som en ret diffus, brun farvning på de objektglas, der er behandlet med det negative kontrolreagens. Kernerne farves blå med hæmatoxylin-kontrastfarven.

Begrænsninger 1. Kun til automatiseret anvendelse på Autostainer Link-instrumenter. Ved udførelse af manuelle farvninger skal den optimale procedure bestemmes og verificeres af brugeren, medmindre andet er angivet i indlægssedlen til det pågældende Dako primære antistof. 2. Kun til anvendelse på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Ved brug af frosne snit eller celleudstrygninger skal den optimale procedure bestemmes og verificeres af brugeren, medmindre andet er angivet i indlægssedlen til det pågældende Dako primære antistof. Ændringer af proceduren kan påvirke antallet af analyser, som kan udføres med sættet. Symbolforklaring Katalognummer Temperaturbegrænsning Lotnummer GHS-farepiktogram (se afsnittet om forholdsregler) Medicinsk udstyr til in vitro diagnostik Opbevares morkt Anvendes senest GHS-farepiktogram (se afsnittet om forholdsregler) Se brugsanvisningen Indeholder til <n> analyser Producent Dako EnVision systemerne er omfattet af det amerikanske patent 5,543,332 og det europæiske patent 594,772. Produceret af: Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark Tlf. +45 44 85 95 00 Fax +45 44 85 95 95