Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3. Kode M3653. Tilsigtet anvendelse

Transkript

1 Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3 Kode M3653 Tilsigtet anvendelse Synonymer for antigen Resumé og forklaring Til in vitro-diagnostisk brug. Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, er beregnet til brug ved immunhistokemi. Dette antistof mærker PD-L1 i normalt og neoplastisk væv. Den kliniske fortolkning af enhver farvning eller mangel på samme skal suppleres med morfologiske undersøgelser med anvendelse af korrekte kontroller og evalueres i relation til patientens kliniske forhistorie og andre diagnostiske analyser udført af en certificeret patolog. Dette antistof er beregnet til at blive anvendt efter den primære diagnose af tumor er foretaget ved konventionel histopatologi ved hjælp af ikke-immunologiske farvninger. Programmed Death-Ligand 1 (1). Binding af PD-1-liganderne, PD-L1 og PD-L2, til PD-1-receptoren, der findes på T-celler, hæmmer T-celleproliferation og cytokinproduktion (2). Opregulering af PD-1-ligander forekommer i visse tumorer, og signalering gennem denne pathway kan bidrage til at hæmme tumorernes immunovervågning af aktive T-celler (3). Blokering af PD-1-interaktion med PD-L1 og PD-L2 udløser PD-1-pathway-medieret hæmning af immunresponsen, herunder anti-tumor-immunresponsen (4). Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining eller detektionssystemets vejledning for IHC-procedurer. Medfølgende reagens Immunogen Specificitet Forholdsregler Opbevaring Klargøring af præparater Farvningsprocedure Monoklonalt museantistof leveret i flydende form i 0,05 mol/l Tris-HCl, 0,015 mol/l natriumazid, 1% bovint serumalbumin, ph 7,2. Klon: 22C3 (5). Isotype: IgG1. Murin IgG-koncentration mg/l: Se etiketten på flasken. Proteinkoncentrationen kan variere mellem forskellige lots, uden at dette har betydning for den optimale fortynding. Titreringen af hvert enkelt lot sammenlignes og justeres i henhold til et referencelot for at sikre en konsistent immunhistokemisk farvning fra lot til lot. Humant ekstracellulært domæne af PD-L1 (Phe19-Thr239) fusioneret til et humant IgG1-fragment (katalognr. for R&D-systemer: 156-B7-100) (5) I Western blotting af rekombinant humant PD-L1-protein mærker Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3 et bånd svarende til ~40 kda (5). 1. Må kun anvendes af uddannet personale. 2. Dette produkt indeholder natriumazid (NaN 3), et kemikalie, som er meget giftigt i ren form. Selvom koncentrationen i produktet ikke er klassificeret som farlig, kan natriumazid reagere med bly og kobber og danne meget eksplosive ophobninger af metalazider. Efter bortskaffelse skylles med rigelige mængder vand for at hindre ophobning af metalazid i afløb. 3. Som med alle produkter, der er afledt fra biologiske kilder, bør der iagttages korrekte håndteringsprocedurer. 4. Brug passende personlige værnemidler for at undgå, at materialet kommer i kontakt med øjne og hud. 5. Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokal, national og EU-retlig lovgivning. Opbevares ved 2-8 C. Må ikke anvendes efter den ud løbsdato, der er trykt på hætteglasset. Hvis reagenserne opbevares under andre forhold end de specificerede, skal forholdene verificeres af brugeren. Der er ingen synlige tegn på, at produktet kan være ustabilt. Der bør derfor køres positive og negative kontroller samtidigt med patientpræparater. Kontakt teknisk support hos Dako, hvis der observeres uventet farvning, som ikke kan forklares med variationer i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et problem med antistoffet. Paraffinsnit: Antistoffet kan anvendes til mærkning af formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Vævsprøverne skal skæres i snit med en tykkelse på cirka 4 µm. Forbehandling: Se EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kode K8005) for at få vejledning i, hvordan objektglas skal forbehandles. Ovenstående er kun ment som en vejledning. De optimale forhold kan variere afhængigt af præparattypen og klargøringsmetoden og skal valideres af hvert enkelt laboratorium. Den kliniske præstation af dette antistof bør fastslås af brugeren, når det anvendes med andre manuelle farvningssystemer eller automatiserede platforme. Fortynding: Den anbefalede fortynding af Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, kode M3653, er 1:50. Fortynd antistoffet i Dako Antibody Diluent med Background-Reducing Components (kode S3022). Inkuber forbehandlede vævssnit i 30 minutter ved stuetemperatur. ( ) P04435DK_01/M3653/ s. 1/5

2 Negativ kontrol: Det anbefalede negative kontrolreagens er Dako Negative Control, Mouse IgG1 (kode X0931), fortyndet til den samme IgG1-koncentration som det primære antistof. Medmindre holdbarheden af det fortyndede antistof og den negative kontrol er fastlagt for den aktuelle farvningsprocedure, skal disse reagenser fortyndes umiddelbart inden brug. Der skal udføres positive og negative kontroller samtidigt med patientpræparaterne. Visualisering: Det anbefalede EnVision FLEX HRP-visualiseringssystem anvender 30-minutters inkubation ved stuetemperatur. Inkubationstiden for EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (kode K8021/K8022) er 30 minutter ved stuetemperatur. Følg den procedure, der følger med det eller de valgte visualiseringssystemer. Bemærk: Brug EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kode K8005), til HIER. Inkubationstiden for DAB Enhancer (S ) er 5 minutter ved stuetemperatur. Kontrastfarvning: Den anbefalede kontrastfarvning er EnVision FLEX Hematoxylin (kode K8008/K8018). For at opnå de bedste resultater anbefales det at anvende et ikke-vandbaseret, permanent monteringsmedie. Kontroller: Der skal køres positive og negative kontrolvæv samtidigt ved hjælp af den samme protokol som patientprøverne. Det positive kontrolvæv skal omfatte tonsil, og cellerne/strukturerne skal vise reaktionsmønstre som beskrevet for dette væv i afsnittet "Resultatkendetegn". Fortolkning af farvning Resultatkendetegn Det cellulære farvningsmønster er membranøst. Normalt væv: Plasmamembranfarvning blev observeret på immunceller og celler af epiteloprindelse. Cytoplasmisk farvning blev observeret i nogle celletyper, men blev ikke registreret som positiv farvning. Tabel 1 indeholder en oversigt over immunreaktivitet for PD-L1 på det anbefalede panel af normalt væv. Alle væv blev formalinfikseret og paraffinindstøbt samt farvet med Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 i henhold til vejledningen i indlægssedlen. Der blev ikke observeret uventede resultater i de testede celle- eller vævstyper. Den observerede farvning stemte overens med data fra litteraturen med hensyn til PD-L1 IHC-ekspression i normale væv (1, 2). Tabel 1: Resumé af reaktivitet for normalt væv for Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 Vævstype Positive vævselementer Vævstype Positive (antal analyserede) (antal analyserede) vævselementer Binyre (3) 0/3 Muskel, hjerte (3) 0/3 Bryst (3) 0/3 Muskel, skelet (3) 0/3 Cerebellum (3) 0/3 Nerve, perifer (3) 0/3 Cerebrum (3) 0/3 Nyre (3) 1/3 cylinderepitel Cervix (3) 1/3 epitelceller Oesophagus (3) 0/3 Colon (3) 1/3 Lymfocytter Ovarie (3) 0/3 1/3 Makrofager Pancreas (3) 0/3 Hud (3) 0/3 Parathyroidea (3) 1/3 Kirtelepitel Hypofysen (3) 1/3 Anterior hypofyse Prostata (2) 2/2 epitel 1/3 Posterior hypofyse Spytkirtel (3) 0/3 Knoglemarv (3) 3/3 Megakaryocytter Testis (3) 0/3 Lever (3) 1/3 Makrofager Thymus (3) 3/3 Medulla 1/3 hepatocytter Thyroidea (3) 0/3 Lunge (3) 3/3 Makrofager Tonsil (3) 3/3 kryptepitel Mavesæk (3) 2/3 Lymfocytter 2/3 makrofager 1/3 funduskirtler Tyndtarm (3) 0/3 Mesotelceller (2) 0/2 Uterus (3) 0/3 Milt (3) 2/3 Makrofager Unormalt væv: Plasmamembranfarvning blev observeret på immunceller og celler af epiteloprindelse. Cytoplasmisk farvning blev observeret i nogle celletyper, men blev ikke registreret som positiv farvning. Tabel 2 indeholder en oversigt over immunreaktivitet for PD-L1 på et panel af neoplastisk væv. Alle væv blev formalinfikseret og paraffinindstøbt samt farvet med Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 i henhold til vejledningen i indlægssedlen. Der blev ikke observeret uventede resultater i de testede tumorpræparater. Den observerede farvning stemte overens med data fra litteraturen med hensyn til PD-L1 IHC-ekspression i neoplastiske væv (1-4). ( ) P04435DK_01/M3653/ s. 2/5

3 Tabel 2: Resumé af neoplastisk vævsreaktivitet for Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 Tumortype Adenokarcinom Placering Appendix Bryst, DCIS 0/2 Bryst, invasiv duktal 0/7 Bryst, invasiv duktal, metastatisk til lymfeknude PD-L1-positiv/total N=159 Cervix, endocervikal type Colon 0/5 Colon, metastatisk til lever Colon, mucinøs Galdeblære 1/5 GI, metastatisk til lunge Hoved og hals, hårde gane Lunge 1/4 Mave 0/6 Mavesæk, mucinøs Oesophagus Ovarie Ovarie, endometrioid Ovarie, mucinøs Ovarie, serøs Pancreas 0/2 Pancreas, duktal 0/3 Prostata 0/5 Rectum 0/4 Spytkirtel/parotis 0/2 Thyroidea, follikulær Thyroidea, follikulær-papillær Thyroidea, papillær 0/3 Tyndtarm 0/2 Uterus, clear cell Uterus, endometrium 0/3 Adrenokortikalt karcinom Adrenal Astrocytom Cerebrum 0/3 Basalcellekarcinom Hud Chondrosarkom Knogle Chordom Bækkenhule Embryonalt karcinom Testikel Ependymom Hjerne Glioblastom Hjerne Hepatoblastom Lever Hepatocellulært karcinom Lever 0/5 Interstitialom Colon Rectum Tyndtarm Karcinom Nasofaryngeal, NPC Leiomoysarkom Lymfom Blære Bløddele, brystvæg Anaplastisk storcellet Lymfeknude Diffus B-celle Lymfeknude 0/4 ( ) P04435DK_01/M3653/ s. 3/5

4 Hodgkin Lymfeknude 2/2 Non-Hodgkin Lymfeknude 1/1 Medulloblastom Hjerne Medullært karcinom Thyroidea Melanoma Næsehule Rectum Meningiom Hjerne 0/2 Mesotheliom Peritoneum Neuroblastom Retroperitoneum Neurofibrom Bløddele, nedre ryg Osteosarkom Knogle 0/2 Pheochromocytom Adrenal Pladecellekarcinom Primitiv neuroektodermal tumor (PNET) Renalt cellekarcinom Cervix 2/5 Hoved og hals 0/2 Hud 0/2 Lunge 1/2 Oesophagus 0/7 Pladecellekarcinom i oesophagus metasteret til lymfeknude Uterus Retroperitoneum Clear cell Nyre 0/6 Papillær Nyre Rhabdomyosarkom Bløddele, embryonal Prostata Retroperitoneum Seminom Testikel 0/2 Signetringcellekarcinom Colon Signetringcellekarcinom i colon metasteret til ovarie Småcellet karcinom Lunge Spermatocytisk seminom Testikel 0/2 Synovialt sarkom Bækkenhule Thymom Mediastinum 1/1 Transitionalt cellekarcinom Blære 0/6 Nyre Øcelletumor Pancreas Referencer 1. Okazaki T, Honjo T. PD-1 and PD-1 ligands: from discovery to clinical application. International Immunol 2007(19); 7: Brown JA, Dorfman DM, Ma F-R, Sullivan EL, Munoz O, Wood CR, et al. Blockade of Programmed Death-1 Ligands on Dendritic Cells Enhances T Cell Activation and Cytokine Production. J Immunol 2003;170: Cooper WA, Tran T, Vilain RE, Madore J, Seliger CI, Kohonen-Cornish M, et al. PD-L1 expression is a favorable prognostic factor in early stage non-small cell carcinoma. Lung Cancer 2015; 89: Chen B, Chapuy B, Ouyang J et al. PD-L1 Expression Is Characteristic of a Subset of Aggressive B-cell Lymphomas and Virus-Associated Malignancies. Clin Cancer Res 2013; 19: Ellison AR. Technical Report: Characterization of monoclonal mouse anti-pd-l1 antibody clone 22C3. D29539/rev01/C22282, 2015 ( ) P04435DK_01/M3653/ s. 4/5

5 Udgave 03/16 ( ) P04435DK_01/M3653/ s. 5/5