Antistofindhold mod influenza hos en gruppe udvoksede flergangsvaccinerede danske heste JENS KRISTOFFERSEN 1 OG ANNE DORTHE SKØTTRUP BROE 2 1 DYRLÆGE, LIC.MED.VET. DJURSLANDS HESTEPRAKSIS APS. 2 DYRLÆGE, DJURSLANDS HESTEPRAKSIS APS. Sammendrag På baggrund af et forslag til ændring af Dansk Ride Forbunds regler vedrørende vaccinationsprocedurer for konkurrenceheste har Djurslands Hestepraksis gennemført en undersøgelse af antistofniveauet for influenza hos danske heste, der er basisvaccineret hhv. før og efter 1. januar 5. Undersøgelsen er baseret på 28 blodprøver fra 22 danske, udvoksede heste. Disse heste er vaccinerede med basisvaccination (2 vaccinationer foretaget med et interval 21-92 dage) og derefter vaccineret med mindst en årlig boostervaccination. Ud fra hver blodprøve blev antistofsvar for to relevante virusstammer, hhv. Clade 2. A/eq/Meath/7 og Clade 1. A/eq/SA/4/3 undersøgt ved et Single Radial Haemolysis Studie. For alle prøver med undtagelse af to blev der påvist et Single Radial Haemolysis (SHR)/mm 2 antistof-svar, der ligger over den anbefalede grænse (85 SHR/mm 2 ) for klinisk beskyttelse mod influenza - uanset om hesten er basisvaccineret før eller efter 1. januar 5. For seks heste blev parrede blodprøver udtaget. En prøve umiddelbart før sidste boostervaccination og en prøve udtaget en måned efter sidste boostervaccination. Her fandtes signifikant (p <,2) stigning i antistofniveauet mellem blodprøver udtaget før vaccination (12 måneder efter en årlig boostervaccination) sammenlignet med antistofniveauet i blodprøver udtaget en måned efter den årlige boostervaccination. Abstract Djurslands Hestepraksis has performed a study testing antibody levels against equine influenza in Danish horses, starting their vaccination program before or after 1 st January 5, as a consequence of a proposed change in Dansk Ride Forbunds vaccination procedures for horses participating in national competitions. In 28 blood samples collected from 22 Danish, adult horses vaccinated with 2 vaccinations (21-92 days interval) and hereafter at least one booster vaccination annually has been shown, that the horses has an average Single Haemolysis (SHR)/mm 2 antibody level higher than the limit (85 SHR/mm 2 ) known to offer clinical protection against equine influenza, regardless, if the vaccination program was started before or after 1 st January 5. Two out of 56 tests was below the limit known to offer clinical protection. There is a significant (p <.2) rise in antibody level one month after the yearly boostervaccination. 18 DVT 7 13
boostervaccination A/eq/Meath/7(mm 2 ) A/eq/SA/4/3(mm 2 ) Højeste værdi 1 år 167,1 132,86 Laveste værdi 1 år 87,67 75,31 Gennemsnit 1 år 133, 19, Højeste værdi 1 måned 236,71 196,41 Laveste værdi 1 måned 126,71 12, Gennemsnit 1 måned 165, 133, Højeste værdi 3 måneder 196,78 157,51 Laveste værdi 3 måneder 94,62 76,45 Gennemsnit 3 måneder 15, 114, Højeste værdi 6 måneder 217,9 166,87 Laveste værdi 6 måneder 127,9 Laveste værdi 6 måneder,59 Gennemsnit 6 måneder 164, 133 FOTO: COLOURBOX Indledning Danske heste, undtaget heste i væddeløbssporten, har traditionel været vaccinerede i henhold til Dansk Ride Forbunds (DRF) hidtil gældende regler, dvs. en basisvaccination bestående af to vaccinationer med 21 til 92 dages interval og herefter mindst 1 årlig boostervaccination. Denne vaccinationspraksis har i en del år ikke fulgt vaccineproducenternes anbefaling. For at bringe vaccinationsreglerne i overensstemmelse med vaccineproducenternes anbefaling og Det Internationale Ride Forbunds (FEI) regler foreslog DRF i efteråret 11 en ændring af vaccinationsreglerne gældende fra 1. januar 13. Vaccinationskravet for heste ved nationale stævner skulle ændres til en grundimmunisering (basisvaccineres som beskrevet ovenfor) og derefter en boostervaccination tidligst 5 måneder og senest 6 måneder og 21 dage efter 2. basisvaccination efterfulgt af mindst 1 årlig Figur Figur 1. Gennemsnitlige 1. Gennemsnitlige antistofindhold antistofindhold hos udvoksede hos udvoksede flergangsvaccinerede flergangsvaccinerede heste (22 heste/56 heste undersøgelser), (22 heste/56 korrekt vaccineret efter undersøgelser), DRFs hidtil gældende korrekt regler. vaccineret Den sorte efter gennemgående DRFs hidtil linje gældende viser grænsen regler. for Den klinisk sorte beskyttelse gennemgående (85 SHR/mm 2 ). linje viser grænsen for klinisk beskyttelse (85 SHR/mm2). 1 Gennemsnit Gennemsnit alle heste heste basisvacc. før 1/1 5 1 mdr 3 mdr 6 mdr 12 mdr efter 1/1 5 Tid efter booster vaccine før 1/1 5 Figur 2. Gennemsnitlige 1 mdr antistofindhold 3 mdr for A/eq/SA/4/3 6 mdr hos udvoksede 12 mdr flergangsvaccinerede heste, der er korrekt vaccineret efter DRFs hidtil gældende regler, opgjort Tid efter booster tidspunktet vaccine for basisvaccination hhv. efter og før 1. januar 5. Den sorte gennemgående linje viser den anbefalede grænse for klinisk beskyttelse (85 SHR/mm 2 ). Højeste og laveste værdi for heste basisvaccineret før 1. januar 5 166,87 og,59 SHR mm 2, efter 1/1 5 196,41 og 75,31 SHR mm 2. Figur 2. Gennemsnitlige antistofindhold for A/eq/SA/4/3 hos udvoksede flergangsvaccinerede Figur 2. heste, Gennemsnitlige der er korrekt antistofindhold vaccinerede for A/eq/SA/4/3 efter DRFs hos hidtil udvoksede gældende flergangsvaccinerede regler, opgjort heste, efter der tidspunktet er korrekt vaccineret for efter DRFs hidtil gældende regler, opgjort efter tidspunktet for basisvaccination hhv. efter og før 1. januar 5. Den sorte basisvaccination hhv. efter og før 1. januar 5. Den sorte gennemgående linje viser den anbefalede grænse for klinisk beskyttelse (85 SHR/mm2). Højeste og laveste værdi for heste basisvaccine- gennemgående linje viser den anbefalede grænse for klinisk beskyttelse (85 SHR/mm 2 ). Højeste og laveste værdi for heste basisvaccineret før 1. januar 5 166,87 og,59 SHR mm 2, efter 1/1 5 196,41 og 75,31 SHR mm 2. rede før 1. januar 5 166,87 og,59 SHR mm2, efter 1/1 5 196,41 og 75,31 SHR mm2. 1 1 1 Gennemsnit alle heste efter 1/1 5 Gennemsnit alle heste efter 1/1 5 før 1 Gennemsnit 1/1 5alle heste 1 1 mdr 3 mdr 6 mdr 12 mdr efter 1/1 5 Tid efter booster vaccine før 1/1 5 Figur 3. Gennemsnitlige antistofindhold for A/eq/Meath/7 hos udvoksede flergangsvaccinerede heste, korrekt 1 mdr vaccineret 3 efter mdr DRFs hidtil 6 mdr gældende 12 regler mdr opgjort efter tidspunktet for basisvaccination hhv. efter og før Tid 1. efter januar booster 5 vaccine Den sorte gennemgående linje viser den anbefalede grænse for klinisk beskyttelse (85 SHR/mm2). Højeste og laveste værdi for heste basisvaccineret før 1. januar 5 217,9 og 126,5 SHR mm2, efter 1/1 5 236,71 og 87,67 SHR mm2. > DVT 7 13 19
boostervaccination gældende fra den 1. januar 5. Kravet om vaccination med tilbagevirkende kraft blev dog opgivet i den endelige regelændring. Forslaget til regelændringen affødte følgende spørgsmål, som vi i nærværende undersøgelse ønsker besvaret: Er antistofsvaret på den årlige boostervaccination hos udvoksede heste, vaccineret efter DRFs tidligere krav for lavt i forhold til internationale undersøgelsers anbefalinger med henblik på opnåelse af klinisk beskyttelse mod influenzavirus, således at hestene bør starte vaccinationsprogrammet forfra? Har udvoksede heste vaccinerede efter DRFs tidligere krav et gennemsnitligt antistofindhold mod influenza, der ligger over den anbefalede grænse for klinisk beskyttelse på 85 SHR/mm 2 (1,2,6), uanset om hestene er basisvaccinerede før eller efter den 1. januar 5? Materiale og metoder Djurslands Hestepraksis (DH) udtog i december 11 og januar 12 28 blodprøver fra 22 udvoksede danske heste med henblik på antistofmåling mod hesteinfluenza. Hestene var blandede racer med en gennemsnitsalder på 12,8 år (6 til 27 år), fordelt på 6 hopper og 16 vallakker. Hestene var opstaldet på 11 forskellige adresser. Hos 6 heste er der udtaget prøver hhv. umiddelbart før og 1 måned efter den årlige boostervaccination, hvoraf 4 heste er basisvaccineret før den 1. januar 5 og 2 heste efter 1. januar 5. Alle heste er vaccinerede med en basisvaccination (2 vaccinationer med 21 til 92 dages interval) og derefter med en boostervaccination mindst 1 gang årligt. Otte heste er basisvaccinerede før 1. januar 5, gennemsnitsalder 14,6 år (9 til 27 år) og 14 heste efter 1. januar 5, gennemsnitsalder 1, år (6 til 21 år). Alle heste er tilfældigt udvalgte ud fra vores journalsystem, idet vi på en bestemt dag har konstateret, hvilke heste der den pågældende dag opfylder udvalgskriterierne: Udvoksede heste, korrekt vaccinerede efter DRFs tidligere regler. Syv prøver er udtaget på årsdagen for den år- lige boostervaccination, 7 prøver en måned efter den årlige boostervaccination, 8 prøver tre måneder efter den årlige boostervaccination og 6 prøver seks måneder efter den årlige boostervaccination. Alle heste er ved sidste vaccination Tid efter årlig boostervaccination A/eq/Meath/7(mm2) A/eq/SA/4/3(mm2) Højeste værdi 1 år 167,1 132,86 Laveste værdi 1 år 87,67 75,31 Gennemsnit 1 år 133, 19, Højeste værdi 1 måned 236,71 196,41 Laveste værdi 1 måned 126,71 12, Gennemsnit 1 måned 165, 133, Højeste værdi 3 måneder 196,78 157,51 Laveste værdi 3 måneder 94,62 76,45 Gennemsnit 3 måneder 15, 114, Højeste værdi 6 måneder 217,9 166,87 Laveste værdi 6 måneder 127,9 Laveste værdi 6 måneder,59 Gennemsnit 6 måneder 164, 133 Lab No: Horse ID: Sample Date forud for prøveudtagningen vaccinerede med samme godkendte vaccine (Proteq- Flu-TE, Merial Norden A/S). Vacciner anvendt forud for denne vaccination er ikke registreret. Prøverne blev samme dag, som de er Tabel 1. Gennemsnitligt SHR antistofindhold pr. mm2 i 28 blodprøver udtaget fra 22 heste med angivelse af højeste og laveste værdi mod begge influenza virusstammer hos hver gruppe. Ved prøverne udtaget 1 år, 1 måned og 3 måneder efter sidste boostervaccination er højeste og laveste værdier for begge virusstammer hos samme heste. Ved prøverne udtaget 6 måneder efter sidste vaccination fandtes laveste værdi for A/eq/SA/4/3 hos to forskellige heste. Tabel 2. SHR antistofniveau hos 6 heste testet hhv. netop inden og 1 måned efter den årlige boostervaccination. Time post Vacc A/eq/ Meath/7(mm2) A/eq/ SA/4/3(mm2) 12V4538 Komet 12-12-11 1 year 126,5 15,75 12V4548 Komet 11-1-12 1 month 146,45 115,88 12V4539 Gala 12-12-11 1 year 144,1 116,45 12V4549 Gala 11-1-12 1 month 147,98 117,79 12V45 Jolly Jumper 14-12-11 1 year 134,9 16,61 12V4545 Jolly Jumper 13-1-12 1 month 196,95 151,11 12V4541 Calypso 14-12-11 1 year 129,21 12,11 12V4546 Calypso 13-1-12 1 month 153,74 114,89 12V4543 Mickey 18-12-11 1 year 143,81,5 12V455 Mickey 22-1-12 1 month 147,31 132,46 12V4544 Mads 18-12-11 1 year 87,67 75,31 12V4551 Mads 22-1-12 1 month 236,71 196,41 DVT 7 13
udtaget, centrifugeret, serum separeret og frosset i almindelig fryser (minus 18- grader) mærket med hestens navn, dato for sidste årlige vaccination og dato for prøveudtagelsen. Efter indsamling af samtlige prøver blev de frosne prøver pakket i tøris og fremsendt til undersøgelse hos Virology Unit, The Irish Equine Center, Kildare, Ireland. Prøverne blev efter laboratoriets anvisning undersøgt for SHR-antistoffer mod to relevante virusstammer, hhv. Clade 2, A/eq/Meath/7 og Clade 1, A/eg/South Africa/4/3, ved en Single Radial Haemolysis (3,4). For hver af de seks heste, hvor der er udtaget to prøver; en umiddelbart før sidste boostervaccination, og en prøveudtaget en måned efter sidste boostervaccination, er forskellen i antistofniveauet for de to prøver undersøgt. Da prøverne er parrede og ikke normalfordelte, anvendes en ikke-parametrisk test (Wilcoxon test) og p-værdi <,5 blev antaget som signifikant. Ændring i antistofmåling (mm2) 5 15 A.eq.Meath.7 A.eq.SA.4.3 Figur 4. Ændringerne i antistofniveauerne udtaget inden vaccination (12 måneder efter en årlig boostervaccination), og en måned efter boostervaccination for begge typer af antistof er vist for de seks heste, og hver af de to antistoftyper. Den fede linje angiver medianen af data, og boksen angiver hhv. 25 % og 75 % fraktilerne. Resultater Gennemsnit af antistofneaeuerne over for de to virusstammer er vist i tabel 1 og figur 1. Det fremgår ligeledes, at det gennemsnitlige SHR antistof pr. mm 2 er over den anbefalede grænse for klinisk beskyttelse i alle 4 grupper. To ud af 56 prøver fra 22 heste lå dog under den anbefalede græse for klinisk beskyttelse (hhv. 75,31 og 76,45 SHR/mm 2, begge for virusstammen A/qe/SA/4/3). Gennemsnittet af antistofniveauerne over for de to virusstammer opgjort efter tidspunktet for basisvaccinationen hhv. før og efter 1. januar 5 er vist i figur 2 og 3. Det fremgår af de to figurer, at det gennemsnitlige SHR antistof pr. mm 2 er over den anbefalede grænse for klinisk beskyttelse i alle 4 grupper mod begge de influenzastammer, der er testet for, uanset om de er basisvaccinerede før eller efter 1. januar 5. Ændringerne i antistofniveauerne er vist i tabel 2 samt figur 4 for de seks heste. Der er en signifikant (p <,2) stigning i antistofniveauet, fra inden vaccina- tion (12 måneder efter en årlig boostervaccination) til antistofindholdet en måned efter den årlige boostervaccination, for begge virusstammer. Diskussion Tidligere studier har vist, at der er en god korrelation mellem SHR-antistofindholdet og beskyttelse mod influenza (5). Såvel eksperimentelle undersøgelser som kliniske observationer viser, at heste med et SHR-antistofniveau på 85 mm 2 er klinisk beskyttede (1,2,6) mod influenza, og at heste med et SHR antistofniveau på 15 mm 2 er virologisk beskyttede (1,2,6) mod influenza. Højere antistofindhold kan være nødvendig, hvis hestene er vaccineret med en vaccine, der ikke er opdateret med epidemiologisk, relevante stammer (1). Såfremt denne undersøgelse er repræsentativ for den udvoksede vaccinerede danske hestebestand, vaccineret efter DRFs tidligere vaccinationsregler, tyder resultaterne på, at udvoksede flergangsvaccinerede danske heste er klinisk beskyttede mod influenza. En antagelse, der bestyrkes af, at der ikke er registreret en influenzaepidemi i Danmark siden 1979 - et år før DRFs hidtidige regler for influenzavaccination af heste trådte i kraft i 19. Resultaterne er sammenlignet med resultater fra to irske undersøgelser (8,9). Laboratorieundersøgelserne er i alle tre undersøgelser udført på samme laboratorium. Vaccination af heste kan medføre bivirkninger, der kan afholde hestene fra at deltage i konkurrencer i kortere eller længere tid. Både af hensyn til hestevelfærd og af økonomiske grunde bør hestene ikke vaccineres hyppigere end nødvendigt. Der er i denne undersøgelse kun testet for én af de i Danmark godkendte influenzavacciner. I en irsk undersøgelse (9) konkluderes der, at der ikke er signifikant forskel på antistofsvaret mellem de forskellige vaccineproducenters vaccine. Det antages derfor, at det samme er gældende under danske forhold. > DVT 7 13 21
telse mod influenza, uanset om hesten er basisvaccineret før eller efter 1. januar 5. Dog fandtes i to ud af de i alt 56 antistofmålinger, at antistofniveauet lå under den anbefalede grænse for klinisk beskyttelse. Ligeledes fandtes signifikant (p <,2) stigning i antistofniveauet i blodprøver udtaget umiddelbart inden vaccination (12 måneder efter en årlig boostervaccination) sammenlignet med antistofniveauet i blodprøver udtaget en måned efter den årlige boostervaccination hos udvoksede danske heste, vaccinerede efter DRFs tidligere krav. Litteraturliste Newton JR, Lakhani KH, Wood JL, Baker DJ. Risk factors for equine influenza serum antibody titres in young thoroughbred racehorses given an inactivated vaccine. Prev Vet Med ;46(2):129 41. Mumford JA, et al. Antigenicity and immunogenicity of equine influenza vaccines containing a Carbomer adjuvant. Epidemiol infect 1994;112(2):421-37. Heldens JG, Van de Wouw JC, Van Loon AA. An updated equine influenza vaccine and an equine influenza herpesvirus combination vaccine containing an immunostim adjuvant provoke equal antibody levels in young foals throughout the primary vaccination course. Vet J 2;164(3):288 91. Paillot R. Grimmett h. Elton D. Daly JM. Protection, systemic IFNgamma and antibody responses induced by an ISCOM-based vac- Konklusion I denne undersøgelse er antistofniveauet for influenzavirusstammerne A/eq/Meath/7 og A/eq/SA/4/3 undersøgt. Der er i 28 blodprøver fra 22 danske, udvoksede heste, vaccinerede efter DRFs tidligere krav, påvist et gennemsnitligt antistofsvar, der ligger over den anbefalede grænse (85 SHR/mm 2 ) for klinisk beskytcine aginst a recent equine influenza virus in its natural host. Vet Res 8;39(3):21. Rimmelzwaan GF, Nieuwkoop N, Brandenburg A, Sutter G, Beyer WE,Maher D, et al. A randomized, double blind study in young healthy adults comparing cell mediated and humoral immune responses induced by influenza ISCOM vaccines and conventional vaccines. Vaccine ;19(December (9 1)):11 7. Edlund Toulemonde C, Daly J, Sindle T, Guigal PM, Audonnet JC, Minke JM.Efficacy of a recombinant equine influenza vaccine against challenge with an American lineage H3N8 influenza virus responsible for the 3 outbreak in the United Kingdom. Vet Rec 5;156(12):367 71. Gildea S, Arkins S, Cullinane A. Management and environmental factors involved in Equine Influenza outbreaks in Ireland from 7 to 1. Equine Vet J 1. DOI: 1.1111/j.42-336.1.333x. Gildea S, Arkins S, Walsh C, Cullinane A. A comparison of antibody responses to commercial equine influenza vaccines following annual booster vaccination of National Hunt Horses a randomised blind study. Vaccine 11;29(22):3917 22. Gildea S. Arkins S. Walsh C. Cullinane A., A comparison of antibody responses to commercial equine influenza vaccines following primary vaccination of Thoroughbred weanlings A randomised blind study. Vaccine 29 (11) 9214 9223 Cullinane A. Weld J, Osborne M, Nelly M, McBride C. Field studies on equine influenza vaccination regimes in Thoroughbred foals and yearlings. Vet J 1; 161:174 185. Har du brug for inspiration, information og værktøjer til karriereudvikling - klik ind på www.karrierenavigation.dk Husk at skrive DDD i»organisationsfeltet«22 DVT 7 13