BACTEC S.I.R.E. Drug Kit

Transkript

1 BACTEC S.I.R.E. Drug Kit PP118JAA 2007/06 Dansk TILSIGTET BRUG BACTEC S.I.R.E. Drug Kit indeholder antimikrobielle midler til brug med BACTEC 12B medium ved testning af Mycobacterium tuberculosis. Primære brug er med BACTEC 460TB-instrumentet. BACTEC S.I.R.E. Drugs (streptomycin, isoniazid, rifampin og ethambutol) er anbefalet som tilsætningsstoffer til BACTEC 12B dyrkningsmedium for kvalitativ følsomhedstestning af M. tuberculosis ud fra kultur. RESUMÉ OG FORKLARING BACTEC metoden til undersøgelse af mycobacteriers medikamentfølsomhed er baseret på samme basisprincip, der anvendes ved konventionelle metoder, bortset fra, at der anvendes et flydende medium, og i stedet for at tælle kolonier efter ca. 3 uger, overvåges væksten radiometrisk, og resultaterne kan rapporteres i løbet af 4 til 12 dage. BACTEC medikamentfølsomhed afgøres ved at følge en modificeret version af den konventionelle proportionsmetode. 1 Den kritiske proportion for resistens antages at være 1 % for alle antituberkulosemedikamenter. Det betyder, at hvis 1 % eller mere af testens mykobakterielle population er resistent, betragtes kulturen som værende modstandsdygtig til laboratorieformål. Resistens afgøres ved at sammenligne væksthastigheden i kontrolglasset og 12B medieglasset, der indeholder testmedikamentet. PROCEDURENS PRINCIPPER Princippet bag BACTEC radiometriske følsomhedsanalyse for mycobacterier er identisk med den, der anvendes til den primære isolationsmetode. Når mycobacterier vokser i 7H12 medium, der indeholder 14 C-mærket substrat, bruger de substratet og producerer 14 CO 2. Mængden af påvist 14 CO 2 afspejler hastigheden og mængden af vækst, der foregår i hætteglasset, og udtrykkes i Growth Index (vækstindeks) (GI) enheder. Når der tilsættes et antituberkulosemedikament til mediet, blokeres væksten, hvis testorganismerne er følsomme. Denne blokering kan mærkes af enten et fald eller en meget lille stigning af den daglige GI i sammenligning med kontrollen. Men hvis organismerne er modstandsdygtige, forekommer der lille eller ingen blokering. For at fastlægge 1 % proportionen af resistens er det bakterielle inokulum, der anvendes i kontrolglasset, en fortynding på 100 gange mindre end det, der anvendes til glasset med medikamentet. Medikament- og kontrolglassene testes dagligt efter inokulationen. Stigningshastigheden af GI, eller mængden af ændring i forhold til den forrige dag, kaldet delta (Δ) GI, sammenlignes mellem kontrolglasset og medikamentglasset. Hvis den daglige GI stigning i medikamentglasset er lig med eller større end i kontrolglasset, anses testorganismerne for at være resistente overfor medikamentet. I en følsom population vil den daglige GI stigning være højere for kontrollen end for medikamentet. For eksempel, hvis 1 % af den mycobacterielle population er resistent overfor isoniazid (INH), vil 99 % af organismerne blive hæmmet af INH, og kun 1 % vil vokse i medikamentglasset. Vækstraten i medikamentglasset vil være identisk med vækstraten i kontrolglasset, i hvilken det oprindelige bakterie-inokulum kun var 1/100 af det i medikamentglasset. REAGENSER BACTEC S.I.R.E. medikamentglas indeholder følgende aktive ingredienser inden behandlingen: Frysetørrede antimikrobielle midler, hvert hætteglas: Streptomycin...1,2 mg Isoniazid...0,02 mg Rifampin...0,4 mg Ethambutol...1,5 mg Advarsler Til in vitro diagnostik. Dette produkt indeholder tørt naturgummi. Patogene mikroorganismer, herunder hepatitis virus og HIV, kan forekomme i kliniske prøver. Standard forholdsregler 2-5 og institutionelle retningslinier skal overholdes ved håndtering af alle materialer, der er kontamineret med blod eller andre legemsvæsker. Inden brug skal hvert glas kontrolleres for tegn på beskadigelse, nedbrydning eller kontaminering. Hvis et dyrkningsglas viser tegn på kontaminering MÅ DET IKKE BRUGES. Hætteglas, som viser tegn på beskadigelse, bør kasseres. I sjældne tilfælde kan glasflaskerne være revnet, og halsen kan gå i stykker, når hætten fjernes eller under håndtering. Inden prøvetagning fra positive 12B medium kulturglas til udsåning eller farvning, osv., er det nødvendigt at udslippe gas, som kan dannes pga. mikrobiel metabolisme. Der skal altid anvendes aseptiske teknikker og etablerede forholdsregler mod mikrobielle farer. Procedurer skal udføres i et egnet biologisk sikkerhedsskab i et rum med passende ventilationssystem, som anbefalet af CDC. 6 Benyt passende beskyttelseskittel, maske og handsker, mens der håndteres præparater og kulturer af potentielle patogener. Følg CDC- og OSHA-anbefalingerne. For at minimere risikoen for lækage under inokuleringen skal der bruges sprøjter med permanent fastmonterede kanyler eller fastgjorte Luer-Lok-spidser.

2 Medikamentkoncentrationen, der anvendes til den konventionelle følsomhedstestning, kan variere fra laboratorium til laboratorium. Det er meget vigtigt at vælge en ækvivalent koncentration af et testmedikament til BACTEC følsomhedstestning, hvis resultaterne, der opnås med de to metoder, skal sammenlignes. Tilsætning af den nøjagtige mængde af et testmedikament i dyrkningsmediet er et kritisk punkt i følsomhedstestningen. Opbevaring BACTEC S.I.R.E. medikamentglas bør opbevares køligt (2 8 C) og tørt væk fra direkte sollys. Efter rekonstituering kan de opbevares i op til 3 dage ved 2 8 C eller nedfrosne ved -20 C eller koldere i op til seks måneder. Nedfrys i små alikvotter. Må ikke fryses og optøs gentagne gange. Udløbsdatoen gælder den uåbnede flaske med det frysetørrede produkt, når denne opbevares som anbefalet. PRØVEINDSAMLING Der anvendes isolerede, rene, aktivt voksende kulturer til følsomhedstestningen. Der henvises til indlægssedlen for 12B medium (PP116JAA) og BACTEC 460TB System Product and Procedure Manual (MA-0029) for yderligere oplysninger. PROCEDURE Vedlagt materiale: BACTEC S.I.R.E. Drug Kit. Nødvendige materialer, der ikke er vedlagt: BACTEC 12B medium, BACTEC 460TB instrument, BACTEC fortyndingsvæske, 5 ml sprøjte, destilleret / demineraliseret vand, tuberkulinsprøjte med permanent fastmonteret kanyle, desinfektionsmiddel, 70 % isopropylalkohol. Testprocedure BACTEC S.I.R.E. medikamenter (streptomycin, isoniazid, rifampin og ethambutol) er vedlagt i frysetørret form. Standardprocedure og medikamentkoncentrationer bør følges. Koncentrationen af medikamenterne efter rekonstituering med 5 ml sterilt destilleret/demineraliseret vand og efter fortynding (hvor det er passende) er som følger: Dilution Mængde føjet Slutkoncentration Medikament Rekonstitueret Fortyndingsfaktor Koncentration/mL til 12B medium i 12B medium/ml Streptomycin 5 ml 240 µg 0,1 ml 6,0 µg Streptomycin 5 ml 1:3 fortynding 80 µg 0,1 ml 2,0 µg* Isoniazid 5 ml 4 µg 0,1 ml 0,1 µg* Rifampin 5 ml 80 µg 0,1 ml 2,0 µg* Ethambutol 5 ml 300 µg 0,1 ml 7,5 µg Ethambutol 5 ml 1:3 fortynding 100 µg 0,1 ml 2,5 µg* *Ækvivalent med de kritiske koncentrationer, der anbefales af CDC. Eksempler på konventionelle mediers ækvivalente koncentrationer for primære og sekundære medikamenter findes i BACTEC 460TB Product and Procedure Manual i afsnit IV. Hvis det er nødvendigt at fortynde for at opnå den ønskede medikamentkoncentration (se ovenfor), skal fortyndingen foregå aseptisk med destilleret/demineraliseret vand. Ryst godt. Klargøring af medikamentmediet: Anvend en frisk medikamentopløsning, eller optø et glas med frossen medikamentopløsning. Brug en 1 ml sprøjte til engangsbrug og tilsæt nøjagtigt 0,1 ml til et 4 ml BACTEC hætteglas med 12B medium. Brug en separat sprøjte til hvert medikament. Der skal udvises forsigtighed for at undgå luftbobler i sprøjten, og den sidste 0,1 ml i sprøjten bør ikke bruges. Alle 12B medium hætteglassene, der anvendes i testen, skal præ-testes på et BACTEC 460TB instrument for at etablere en CO 2 atmosfære i hætteglasset og for at sortere hætteglas med GI på 20 eller mere fra. Præparation af bakterielt inokulum: Aktivt voksende M. tuberculosis kulturer i 12B medium eller på solide medier bruges til opstilling af følsomhedstestning. Når et BACTEC 12B hætteglas aflæses som 10, skal det geninkuberes og testes dagligt. Se følgende diagram for hvornår følsomhedstesten skal opsættes. DAGLIG AFLÆSNING HANDLING GI Inkubér én dag mere og opsæt derefter testen. GI Opsæt test samme dag. GI 800 Fortynd 1:2 med 1 ml fortyndingsvæske; opsæt test. Hvis følsomhedstestning skal forsinkes, skal 12B glasset nedkøles. På dette tidspunkt skal følsomhedstesten opsættes i løbet af en uge. Præparer et ensartet bakterielt inokulum ved skiftevis at trække mediet ind i en sprøjte til engangsbrug med en permanent fastsat kanyle, og skubbe det tilbage ind i hætteglasset flere gange uden at fjerne kanylen fra hætteglassets septum. Dette inokulum anvendes direkte til medikamentfølsomhedstesten. Fast mediekultur: Lav en homogeniseret opløsning af flere kolonier på fast medium. Kulturen bør ikke være mere end 4 5 uger gammel. Juster suspensionen til McFarland nr. 1,0 hvis det daglige skema bruges og 0,5 for skemaet for ugedage. Hvis levedygtigheden eller kulturens alder er uvis, kan der kontroludsås i et 12B medium for at opnå frisk vækst. Inokulation: Arrangér hætteglassene med 12B medium i et stativ og markér dem korrekt (almindeligvis kontrol, streptomycin, isoniazid, rifampin, ethambutol). Der vil være brug for et hætteglas for hver medikamentkoncentration og et for kontrollen. (Papbakkerne, som var en del af emballagen, kan bruges som stativer.) Bær gummihandsker og arbejd i et biologisk sikkerhedsskab, og inokulér 0,1 ml af den bakterielle suspension ind i hver af de BACTEC 12B medium hætteglas, der indeholder et medikament. Brug en tuberkulinsprøjte med permanent fastmonteret kanyle 2

3 til denne inokulation. For kontrolglasset må suspensionen ikke inokuleres direkte, men først fortyndes 1:100 ved at overføre 0,1 ml af suspensionen ind i 9,9 ml af speciel fortyndingsvæske. Efter grundig blanding, hvor det vendes op og ned mindst 10 gange, inokuleres 0,1 ml af denne fortynding ind i kontrol 12B mediumglasset (uden et medikament). Tør toppen af hvert inokuleret hætteglas af med et stykke gaze gennemvædet med et egnet desinfektionsmiddel, efterfulgt af rengøring med en 70 % spritserviet. Inkubér ved 37 C ± 1 C. Aflæsningsplan: Daglig testningsplan: Test hætteglassene dagligt (også weekends og helligdage) omkring det samme tidspunkt hver dag (± 2 h) på en BACTEC 460TB, indtil der opnås en GI på 30 eller mere i kontrolglasset. Test i minimalt 4 dage eller maksimalt 12 dage. Med denne testplan kan der opsættes en medikamentfølsomhedstest på en hvilken som helst dag i ugen. Ugedagsplan: Proceduren er identisk med den daglige testningsplan, som beskrevet ovenfor med følgende undtagelser: 7 (a) Saml alle positive kulturer og opsæt følsomhedstesten på en fredag. Følg de tidligere beskrevne procedurer. (b) Hvis der anvendes et positivt BACTEC hætteglas, henvises der til ovenstående tabel. Start testning af inokulerede hætteglas om mandagen, idet weekenden springes over. Hætteglassene bør mindst testes om mandagen, tirsdagen og onsdagen (minimalt 5 dage fra inokuleringsdagen til maksimalt 12 dage) på omtrent det samme tidspunkt hver dag (± 2 h). Direkte medikamentfølsomhedstest: Hvis en prøve er positiv for AFB på en udstrygning, indeholder det normalt nok mycobacterier til at udføre en medikamentfølsomhedstest i 12B medium. Proceduren er stort set den samme som ved indirekte følsomhed. Forskellene i proceduren er som følger: Efter behandling af prøverne inokuleres kulturmedierne og der laves en udstrygning for AFB farvning. Afkøl resten af prøvekoncentrationen. Undersøg AFB udstrygningen. Hvis den er positiv med Ziehl-Neelsen eller fluorokrommetoden, skal følsomhedstesten opsættes samme dag. Tilsæt BACTEC PANTA til alle medikament- og medikamentfri (kontrol) hætteglas. Tilsæt 0,1 ml af velblandet prøvekoncentration til de hætteglas, der indeholder medikamentet. Fortynd prøvekoncentrationen 1:10 og inokulér 0,1 ml ind i kontrolglasset. Inkubér ved 37 C og test hætteglassene på BACTEC 460TB systeminstrument hver 2 til 3 dage i maksimalt 21 dage. Stærkt udstrygningspositive prøver skal testes dagligt. Tolk resultaterne, når kontrollens GI er 20 eller mere. Bekræft resultaterne med en indirekte følsomhedstest. Rapporter resultaterne, når identikationen af M. tuberculosis er bekræftet af en BACTEC NAP test eller andre tests. Kvalitetskontrol BRUG IKKE glas efter deres udløbsdato. BRUG IKKE glas med revner eller fejl. Kassér glasset på passende vis. Kvalitetskontrolcertifikater er vedlagt hver S.I.R.E. medikamentsæt. Kvalitetskontrolcertifikater viser de testorganismer, der blev brugt til denne produkttype. Inden brug skal brugeren undersøge alle dyrkningsglassene for tegn på nedbrydning. Dyrkningsglas, der udviser uklarhed, kontaminering eller misfarvning (mørkfarvning), må ikke bruges. S.I.R.E. medikamentglas, der udviser fugtighed (ikke loddent udseende) må ikke anvendes. Medikamentets virkning kan kontrolleres ved følsomhedstestning af en eller flere kvalitetskontrolorganismer med hver opsat følsomhedstest. ATCC nr. Stamme M. tuberculosis, H37Rv følsom overfor S.I.R.E. medikamenter M. tuberculosis, H37Rv Streptomycin resistent M. tuberculosis, H37Rv Isoniazid resistent M. tuberculosis, H37Rv Ethambutol resistent M. tuberculosis, H37Rv Rifampin resistent ATCC H37Rv bør altid blive inkluderes og bør altid være følsomt. Hvis denne kultur udviser resistens overfor et medikament, eller hvis kontrollen for følsomhedstesten for en af kulturerne ikke vokser (i løbet af 12 dage), må resultaterne ikke rapporteres. Gentag testen. Som en del af den daglige vedligeholdelsesplan, skal funktionstestglas (BACTEC Performance Test Kit) testes på BACTECinstrumentet. Hvis aflæsningerne er lave, selvom funktionstestglassene blev testet korrekt, kan dette tilkendegive mulige problemer med instrumentet (se BACTEC PTK indlægsseddel, PP046JAA). Krav til kvalitetskontrol skal udføres i overensstemmelse med lokale og nationale regulativer eller akkrediteringskrav og brugerens laboratoriums standard kvalitetskontrolprocedurer. Det anbefales, at brugeren læser de relevante CLSI (tidligere NCCLS)-retningslinier og CLIA-regulativer for passende kvalitetskontrolpraksis. 3

4 TOLKNING AF RESULTATER Når kontrolglassene når en GI på 30 eller mere, skal resultaterne tolkes som følger: hvis ΔGI er mindre i medikamentglasset end kontrollen, er populationen følsom. Hvis den er mere, er den resistent. ΔGI (kontrol) > ΔGI (medikament) følsom ΔGI (kontrol) < ΔGI (medikament) resistent ΔGI (kontrol) ΔGI (medikament) på grænsen Følgende tabel repræsenterer data opnået fra M. tuberculosis dyrket på fast medium og testet med BACTEC følsomhedsmetode. Lignende data fås fra M. tuberculosis indledningvis dyrket i et 12B medium. Men pga. færre celler i inokulum, kan de indledende aflæsninger være lavere. Daglig GI aflæsning Dag Kontrol Streptomycin Isoniazid Rifampin Ethambutol ΔGI Resultater Følsom Resistent Følsom Følsom PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Variationer i præparationen af inokulum påvirker udfaldet af følsomhedstestresultaterne, især tilstedeværelsen af store klynger og ukorrekt 1:100 fortynding for kontrolglasset. Hvis væksten i kontrolglasset er utilfredsstillende, bør testen gentages. Kontaminering Der bør udvises omhu for at forhindre kontaminering under inokulering i BACTEC-glasset. En kontamineret prøve vil give en positiv aflæsning, men vil ikke angive en klinisk relevant prøve. En sådan afgørelse skal foretages af brugeren baseret på sådanne faktorer som den isolerede organismetype, forekomst af den samme organisme i flere dyrkninger, sygdomsforløbet, passende udstyrskontrol, osv. Kontaminering kan også være et resultat af forkert vedligeholdelse af BACTEC-kanyler og slanger, dårlig rensning af membran eller funktionsfejl i BACTEC-kanylevarmelegemet (se TB Hood Operation and Maintenance Manual). På grund af de biologiske materialers beskaffenhed i medieprodukter og den iboende varians blandt organismer, skal brugeren være opmærksom på potentielt varierende resultater i opsamlingen af visse organismer. FORVENTEDE VÆRDIER Med rifampin, streptomycin og isoniazid er der normalt et kraftigt fald i GI i løbet af få dage, hvis populationen er følsom. Med ethambutol er der normalt en lille indledende stigning i GI, inden GI værdierne begynder at falde. Hastigheden af GI faldet afhænger af medikamentets påvirkningshastighed og bakteriernes følsomhed. Hvis en M. tuberculosis kultur har en blandet population af følsomme og resistente organismer, kan ΔGI værdierne kontra tiden variere afhængigt af procentdelen af den population, der er følsom. For den direkte følsomhedstest er den samlede succes og den påkrævede tid til at rapportere afhængig af udstrygningens positivitet. Et gennemsnit af dage med god overensstemmelse med de konventionelle testresultater er blevet rapporteret i litteraturen. 8,9 FUNKTIONSDATA Flere offentliggjorte undersøgelser har rapporteret, at resultater opnået med BACTEC følsomhedsmetode passede godt med den konventionelle proportionsmetode (med 7H10/7H11 medier) eller resistensforholdsmetoden (med Lowenstein-Jensen æggemedium). 1,10-15 Nøjagtigheden og reproducerbarheden af BACTEC følsomhedsmetode er også blevet evalueret, med resultater, der ofte opnås med 4 6 dage

5 En undersøgelse af Huang et al, sammenlignede BACTEC 460TB systemet med proportionsmetoden, og gav følgende resultater: 21 Tabel 1. Resultater for den antimikrobielle følsomhedstest og diagnostiske ydelse som bestemt af BACTEC 460TB system, sammenlignet med agar fortyndingsmetoden, baseret på 47 isolater af M. tuberculosis. Antal isolater med specificerede resultater Diagnostisk ydelsesindeks Medikament, metode og Begge Begge Agar F Agar R Specificity Specificitet medikamentkoncentration* F R BACTEC R BACTEC F (%) (%) STR BACTEC 2,0 µg/ml ,8 INH BACTEC 0,1 µg/ml ,1 96,7 RMP BACTEC 2,0 µg/ml ,8 87,5 EMB BACTEC 2,0 µg/ml ,7 25 *Med agar fortyndingsmetoden blev lægemidlerne testet ved følgende koncentrationer: STR, 2 µg/ml; INH, 0,2 µg/ml RMP, 1,0 µg/ml; og EMB, 5 µg/ml. F = følsom; R = resistent. En undersøgelse af Bemer et al. sammenlignede BACTEC 460TB S.I.R.E. systemet med BACTEC MGIT 960 S.I.R.E. system. 110 stammer blev testet med en samlet overensstemmelse på 93,5 %. Ventetiderne var på mellem 4,0 til 10,0 dage for BACTEC 460TB S.I.R.E., med en median på 7,0 dage. 22 Tabel 2. Resultater for medikamentfølsomheden for kliniske stammer af M. tuberculosis som bestemt af BACTEC MGIT 960 OG BACTEC 460 TB system. Antal resultater der var: Medikament Antal F i begge R i MGIT 960; F i MGIT 960; R i begge tester Overensstemmelse (konc i µg/ml) tester tester F i 460 TB R i 460 TB (%) INH (0,1) ,4 INH (0,4) ,7 RIF (2,0) ,1 EMB (2,5) ,4 EMB (7,5) ,4 STR (2,0) ,8 STR (6,0) ,6 Totale antal tester ,5 F, følsom; R, resistent. En undersøgelse af Bergmann og Woods sammenlignede BACTEC 460TB S.I.R.E. medikamenterne ethambutol og streptomycin med proportionsmetoden. Resultaterne er vist i nedenstående tabel: 23 Tabel 3. Indledende ethambutol og streptomycin følsomhedstestresultater med BACTEC og proportionsmetoden. Antal af resultater der var: Medikament BACTEC system MOP Antal isolater Ethambutol F F 63 R R 8 F R 3 Streptomycin F F 59 R R 14 R F 1 Forkortelser: Proportionsmetode (MOP, Method of Proportion); F. følsom; R, resistent. 5

6 I en separat undersøgelse undersøgte Bergmann og Woods også på BACTEC 460TB S.I.R.E. medikamenterne isoniazid og streptomycin og sammenlignede dem med proportionsmetoden: 24 Tabel 4. Afklarede følsomhedstestresultater for kliniske isolater af M. tuberculosis ved proportionsmetode, BACTEC 460 TB. Antal isolater med resultater af a : Medikament og MOP BACTEC resultat 460 TB Isoniazid (lav b ) Følsom Resistent 4 4 Isoniazid (høj c ) Følsom Resistent 1 2 Rifampin Følsom Resistent 3 3 a MOP, proportionsmetode. b Lav, 0,2 µg/ml for proportionsmetode og 0,1 µg/ml for BACTEC 460 TB. chøj, 1,0 µg/ml for proportionsmetode og 0,4 µg/ml for BACTEC 460 TB. BESTILLING Kat. nr. Beskrivelse BACTEC S.I.R.E. Drug Kit, 2 hætteglas frysetørret streptomycin, 2 hætteglas frysetørret isoniazid, 2 hætteglas frysetørret rifampin, 2 hætteglas frysetørret ethambutol BACTEC Isoniazid, 1 glas frysetørret isoniazid BACTEC 12B Medium, 4 ml, 100 pr. karton. LITTERATUR 1. Canetti, G. et al. Advances in techniques of testing mycobacterial drug susceptibility, and the use of sensitivity test in tuberculosis programmes. Bull. W.H.O. 1969, 41: National Commitee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, PA. 3. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC) 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 5. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Kent, P.T. et al. Public health mycobacteriology, a guide for the level III laboratory. Centers for Disease Control, Division of Laboratory Training and Consultation. Atlanta, GA, Hawkins, J.E. Non-weekend schedule for BACTEC susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 23: , Libonati, J.P. et al. Identification and direct drug susceptibility testing of mycobacteria by the radiometric method. Abstract C300, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, Stager, C.E. et al. Identification and susceptibility testing of M. tuberculosis by direct inoculation of smear-positive specimens into BACTEC 12A media. Abstract, C301, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, Bannister, E.R. et al. Comparison of detection, identification and drug susceptibility testing of mycobacteria by using the BACTEC radiometric method and conventional methods. Abstract C260, A.S.M. Annual Meeting, Las Vegas, Roberts, G.D. et al. Evaluation of BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens. J. Clin. Microbiol. 18: , Siddiqi, S.H. et al. Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1981, 13: Siddiqi, S.H. et al. Interlaboratory drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and two conventional method. J. Clin. Microbiol. 1985, 22: Vincke, G. et al. Rapid susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by a radiometric technique. J. Antimicrobiol. Chemother. 1982, 10: Snider, Jr., D.E. et al. Rapid drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Am. Rev. Respir. Dis. 123: ,

7 16. Good, R.C. et al. Reproducibility of drug susceptibility tests with M. tuberculosis. Abstract U5, A.S.M. Annual Meeting, St. Louis, MO, Siddiqi, S.H. et al. Accuracy and reproducibility of the BACTEC drug susceptibility testing of M. tuberculosis. Abstract 1041, I.C.A.A.C. Annual Meeting, Las Vegas, NV, Terrand, J.J. et al. Evaluation of the BACTEC radiometric method for detection of 1% resistant populations of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1985, 21: Woodley, C.L. Evaluation of streptomycin and ethambutol concentrations for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by radiometric and conventional procedures. J. Clin. Microbiol. 1986, 23: Heifets, L.B. "Drug susceptibility in the chemotherapy of mycobacterial infection." C.R.C. Press, Inc., Boca Ratan, FL, Huang, T., H. Tu, S. Lee, W. Huang and Y. Liu Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to firstline drugs: comparisons of the MGIT 960 and BACTEC 460 systems. Ann. Clini. Lab. Sci. 32: Bemer, P., F., Palicova, S., Rüsch-Gerdes, H., Drugeon, and G., Pfyffer, Multicenter evaluation of fully automated BACTEC Mycobacteria Growth Indicator Tube 960 System for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 40: Bergmann, J.S., and G.L. Woods Reliability of mycobacteria growth indicator tube for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to ethambutol and streptomycin. J. Clin. Microbiol. 35: Bergmann, J.S., and G.L. Woods Evaluation of the ESP culture system II for testing susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis isolates to four primary antituberculosis drugs. J. Clin. Microbiol. 36:

8 8

9 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, MGIT, PANTA and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.