ScanGel Monoclonal ABO/RH 86496 48 kort 86426 288 kort

ScanGel Monoclonal ABO/RH 86496 48 kort 86426 288 kort GELER INDEHOLDENDE MONOKLONALE REAGENSER AF MURIN ELLER HUMAN OPRINDELSE ABO-blodtypebestemmelse. RH1 Ag bestemmelse IVD Alle de af Bio-Rad producerede og markedsførte produkter gennemgår fra modtagelse af råmateriale til markedsføring af slutproduktet i et komplet kvalitetssikringssystem. Hvert batch af slutproduktet gennemgår kvalitetskontrol og markedsføres kun, hvis det opfylder de fastsatte kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert batch opbevares af producenten. 57

I - BRUG AF OG PRINCIPPET FOR TESTEN Dette kort er udelukkende til professionel in vitro diagnostisk anvendelse. Testen, der er beregnet til ABO-blodtybestemmelse og bestemmelse af antigener RH1 (D), kombinerer agglutination- og gelfiltreringsprincipperne. Reaktionen opnås og aflases efter centrifugering af specielt udviklede mikrorør indeholdende gel, der er impragneret med reagens specifik for det erythrocytantigen, der skal påvises. En erythrocytsuspension tilsattes i hvert mikrorør, og røret centrifugeres omgående. Ikke agglutinerede røde blodlegemer samles i bunden af mikrorøret, mens agglutinater forbliver i mikrorørets gel, afhængig af agglutinatets størrelse. Deres position i gelen er udtryk for reaktionens intensitet. - + ++ +++ ++++ II - BESKRIVELSE AF REAGENSERNE De første tre mikrorør i ScanGel Monoclonal ABO/RH-kortet indeholder gel, imprægneret med murint monoklonal reagens specifikt for henholdsvis anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) og anti-abo3 (AB). Antistofferne fremstilles af følgende kloner : Anti-ABO1 (A) : 15750F7 Anti-ABO2 (B) : X9 Anti-ABO3 (AB) : AB5-63A5A2/X9 Det fjerde og femte mikrorør indeholder begge hver en gel, der er imprægneret med human, monoklonal reagens, der er specifik for henholdsvis anti-rh1 (D) og RH1, 2, 3 (DCE). Antistofferne fremstilles af følgende kloner : Anti-RH1 (D) : B9A4-B2A6A6A1A1 Anti-RH1, 2, 3 (DCE) : T3D2F6/MS24/MS260 Det sjette mikrorør indeholder en antistoffri gel og fungerer som kontrol (Ctl). Reagenserne indeholder natriumazid (< 0,1%) som konserveringsmiddel. Produktkoden og antallet af kort pr. kasse fremgår af etiketten på kassen. III - OPBEVARING HOLDBARHED Udløbsdatoen og opbevaringsbetingelser fremgår af kassen. Opbevar kortene ved stuetemperatur (+15 C til +25 C). Kortene opbevares vertikalt og beskyttes for varmepåvirkning i et rum med relativ konstant temperatur og luftfugtighed. 58

IV - ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Resultaternes pålidelighed afhænger af en korrekt implementering af følgende regler for god laboratoriepraksis : Brug ikke reagenserne efter den udløbsdato, der står på etiketten. Brug ikke kort, hvor der er tegn på udtørring, bobler eller en beskadiget forseglingsstrimmel. Mikrorørene indeholder forskellige reagenser, så det er vigtigt at udvise forsigtighed for at undgå kontaminering mellem mikrorørene; især under fjernelse af aluminiumsstrimlen og under afpipetteringerne. Brug en ny pipette til hver prøve. Kontrollér, at pipetterne og andet udstyr fungerer korrekt, og kontrollér også deres nøjagtighed. Brug handsker og sikkerhedsbriller, under håndtering af reagenser og prøver. Pipettér aldrig direkte med munden. Undgå stænk. I tilfælde af stænk, skal der rengøres med 12% hypoklorit i en 1:10-opløsning og tørres efter med absorberende papir. Det materiale, der anvendes til rengøringen, skal kasseres og placeres i beholderen til kontamineret affald. Forbrugsartikler og andre produkter, der været i kontakt med prøver eller reagenser, der indeholder materiale af human oprindelse, må først kasseres efter dekontaminering. Datablade vedr. sikkerhed udleveres på forespørqsel. V - UDTAGNING OG BEHANDLING AF PRØVER Foretag en aseptisk blodprøvetagning i et rør med eller uden antikoagulans (EDTA, CPD). Udfør testen, snarest muligt efter prøvetagning. Prøver, der ikke kan analyseres straks, skal opbevares ved +2 C til +8 C og skal testes inden for 48 timer. Der må under ingen omstændighed ses hæmolyse. Undgå at opvarme prøvematerialet. VI -METODE Leveret udstyr ScanGel Monoclonal ABO/RH-kort Ikke-leveret udstyr og materiale, der er nødvendigt Erythrocytsuspensionsreagens 86441 ScanLiss 100 ml 86442 ScanLiss 500 ml 86448 ScanSol 100 ml 86449 ScanSol 500 ml 59

IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi 86745 IH QC 4 x 6 ml Centrifuge : ScanGel Centrifuge Automatiske eller semiautomatiske pipetter Pipettespidser Engangsrør Beholder til affald, der er forbundet med biologisk risiko Hypoklorit Gummihandsker Sugende papir Sikkerhedsbriller Kontrolopløsninger Positive og negative kontrolopløsninger : Røde blodlegemer, der er kendt positive og negative overfor det undersøgte antigen, testes samtidig med prøvematerialets røde blodlegemer for at vurdere reagensaktiviteten. IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi. Fremgangsmåde Følg fremgangsmåden nøje. Alle reagenser skal have stuetemperatur, før de bruges. Adskil serum eller plasma fra de røde blodlegemer i den prøve, der skal testes ved centrifugering. VI.1 - Suspension i ScanLiss a) Fremstil en frisk erythrocytsuspension 1% i ScanLiss umiddelbart før brug Overfør 1 ml ScanLiss i et mærket engangsrør. Tilsæt 10 μl koncentrerede røde blodlegemer. Bland. Erythrocytsuspensionen er klar til brug. b) Metode 1. Sæt en etiket på kortet med prøvenavn eller -nummer. Fjern forsigtigt aluminiumstrimmelen fra kortet for at forhindre krydskontaminering. Bland erythrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Fordel 50 μl af suspensionen i hvert mikrorør på kortet. 3. Centrifugér derefter 10 minutter i ScanGelcentrifugen. 4. Aflæs reaktionerne. 60

VI.2 - Suspension i ScanSol a) Fremstil en frisk erythrocytsuspension 5% i ScanSol umiddelbart før brug Overfør 0,5 ml ScanSol i et mærket engangsrør. Tilsæt 25 μl koncentrerede røde blodlegemer. Bland. Erythrocytsuspensionen er klar til brug. b) Metode 1. Sæt en etiket på kortet med prøvenavn eller -nummer. Fjern forsigtigt aluminiumstrimmelen fra kortet for at forhindre krydskontaminering. Bland erythrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Fordel 10 μl af suspensionen i hvert mikrorør på kortet. 3. Centrifugér straks 10 minutter i ScanGel Centrifuge. Dette skal ske inden 10 minutter efter at prøvefordelingen er afsluttet. 4. Aflæs reaktionerne. VII - RESULTATER OG FORTOLKNING Agglutinater på overfladen af eller spredt i gelen viser et positivt resultat og indikerer tilstedeværelse af erytrocyt-antigenet. Koncentration af røde blodlegemer i bunden af mikrorøret er lig med et negativt resultat og indikerer, at det korresponderende erythrocytantigen ikke er påvist. En positiv reaktion i et af mikrorørene kan kun valideres, hvis Ctl-mikrorøret er negativt. Hvis mikrorøret med kontrolopløsning viser en positiv reaktion, skal man : Vask de røde blodlegemer i en normal saltvandsopløsning (0,9% NaCl). Gentag fremgangsmåden, som angivet i afsnit VI.1 eller VI.2. Hvis mikrorøret med kontrolopløsning er negativt, er fortolkningen for hvert af de øvrige mikrorør som følger : Positivt resultat Svagt positivt resultat Negativt resultat ++++ + til +++ - Hvis mikrorøret med kontrolpløsning stadig viser positivt resultat, gentages testen med en anden metode end gelfiltration. Resultaterne valideres kun, hvis de positive og negative kontrolopløsninger giver de forventede resultater. a) Fortolkning af ABO1(A)-, ABO2 (B)-OG ABO3 (AB)- mikrorør En fuldstændig ABO-blodtypebestemmelse kræver 2 komplementerende test: den direkte test udført med anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) reagenser og om nødvendigt med anti-abo3 (AB) reagens og serumkontrol udført med 61

testerythrocyter A1, B, og om nødvendigt med A2 og O. Profilerne for de forventede resultater opnået med anti-abo1(a)-, anti-abo2(b)- og anti-abo3(ab)-reagenserne samt A1-, A2-, B- og O-reagens med røde blodlegemer og deres fortolkning vises i tabellen nedenfor : GRUPPER ABO-SERUMTEST : REAGENS ABO-ERYTHROCYTTEST : REAGENSER MED RØDE BLODLEGEMER Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) A1 A2 B O A + - + - - + - B - + + + + - - AB + + + - - - - O - - - + + + - Resultaterne af dendirekte test og serumtesten skal være overensstemmende. Enhver afvigelse mellem de to tests skal løses inden fastsættelse af ABO-blodtypebestemmelsen. Når resultaterne mellem dendirekte test og serumtesten afviger, skal der udføres komplementerende test med respektive kontroller. b) Fortolkning af RH1 (D)- mikrorøret Et positivt resultat i RH1 (D)-mikrorøret indikerer tilstedeværelse af antigenet RH1 (D) på overfladen af de røde blodlegemer. På trods af dens ydeevne gør ScanGel Monoclonal ABO/RH-kortet det ikke muligt hverken at påvise alle D-svage antigener eller at påvise fænotype RH1 delkategori (DVI). Hvis det er nødvendigt at påvise disse specielle antigener, skal der udføres en supplerende test med ScanGel Monoclonal Anti-RH1(D)/RHW1-reagensen sammen med ScanGel COOMBS Anti-IgG-,-C3d-kortet. c) Fortolkning af RH1, 2, 3 (DCE)- mikrorøret Et positivt resultat i RH1,2,3 (DCE)-mikrorøret indikerer tilstedeværelse af antigenet RH1 (D) og/eller antigen RH2 (C) og/eller RH3 (E) på overfladen af de røde blodlegemer. VIII - YDEEVNE ScanGel Monoclonal ABO/RH-kortets ydeevne er blevet evalueret på et panel af 1641 tilfældigt valgte prøver (1150 donorer, 332 patienter og 159 nyfødte) suppleret af et panel af udvalgte prøver (svage antigener eller antigenvarianter). Hvert resultat er blevet sammenlignet med det, der er opnået med objektglas-, rør-, mikrotiterplade- eller gelfiltreringsteknikker. 62

a) Særlig ydeevne for anti-abo1(a), anti-abo2 (B)- og anti-abo3 (AB)-reagenser De 1641 prøver gav de forventede resultater. Der blev også testet et panel på 17 udvalgte prøver (Ax, B3, AxB, Bh, CisAB, A3B, Abf). I alle prøver blev der konstateret en reaktion på 1+ til 3+. De testede, erhvervede B-antigener blev ikke påvist med anti-abo2(b) på ScanGel Monoclonal ABO/RH-kortet. Anti-ABO1(A)-, anti-abo2 (B) og anti-abo3(ab)-reagenser på ScanGel Monoclonal ABO/RH-kortet viste god reproducerbarhed i både interne og krydskontrollerede test. b) Særlig ydeevne for anti-rh1(d)-reagens De 1641 prøver gav forventede resultater. Et panel af 24 udvalgte prøver (svage antigener, varianter og særlige fænotyper) blev testet. Alle varianter og særlige fænotyper blev påvist, undtagen en prøve af fænotypen RH1 delkategori VI (DVI). 94% ag RHW1 (svag D)-testede antigener blev påvist. Anti-RH1 (D)-reagenser på ScanGel Monoclonal ABO/RH-kortet viste god reproducerbarhed i både interne og krydskontrollerede test. c) Særlig ydeevne for anti-rh1, 2, 3 (DCE)-reagens De 1641 prøver gav de forventede resultater. Anti-RH1, 2, 3 (DCE)-reagenser på ScanGel Monoclonal ABO/RH-kortet viste god reproducerbarhed i både interne og krydskontrollerede test. GRÆNSER Unormale resultater kan være forårsaget af : Bakteriel eller kemisk kontaminering af serum, plasma, de røde blodlegemer eller udstyr. Patientbehandling eller sygdom, der fremkalder krydsreaktion. Anvendelse af en ikke anbefalet suspensionsvæske til de røde blodlegemer. En erythrocytopløsning af røde blodlegemer, der afgiver fra det anbefalede. Tilstedeværelsen af fibrin (kompakt cellekoncentrat i bunden af mikrorøret sammen med et fint, lyserødt bånd øverst i gelen, som følge af de røde blodlegemer, der tilbageholdes af fibrinresterne). Kontaminering fra mikrorør til mikrorør. Anvendelse af andre procedurer end den ovenfor beskrevne. Under licens fra DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Schweiz 63

IX - LITERATURE 1. Kankura T., Kurashina S., Nakao M.: A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974; 83:840-844. 2. Rouger Ph., Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson 1981. 3. Lapierre Y., Rigal D., Adam J. et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30:109-113. 4. Salmon Ch., Cartron J.P., Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme, 2è éd. Masson 1991. 5. Agre P.C., Cartron J.P.: Protein blood group antigens of the human red cell. Structure, function and clinical significance. The John Hopkins University Press 1992. 6. Third international workshop and symposium on monoclonal antibodies and related antigens. Section Rh TCB 1996;6:331-404. 7. Reid M.E., Lomas-Francis C.: the blood group antigen facts book. Academic Press 1997. 8. Third international workshop and symposium on monoclonal antibodies and related antigens. Section ABO. TCB 1997;1:13-54. 9. Issitt P.D.: Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, 1998.

Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette - France Tél.: +33 1 47 95 60 00 01/2008 Fax.: +33 1 47 41 91 33 Code: 470185