SOP #1, HÅNDTERING AF BLOD

Transkript

1 Introduktion Følgende standard operating procedure (SOP) beskriver arbejdsgangen i forbindelse med indsamling og håndteringen af blod til opbevaring i (DRB). Blod tappes fra reumatologiske patienter én eller flere gange i et udrednings/behandlingsforløb. Blodprøvepakken rekvireres på den lokale reumatologiske afdeling. På figur 3 ses et stort procedureflowskema, der kan hænges op i laboratoriet. Der kan bruges serum-gel rør i stedet for serum rør, hvis blodprøverne skal transporteres i længere tid inden håndtering. Procedure (se figur 1/tabel 1) Blodprøvetagning i ambulatoriet: 1. Veneblod tappes i 1x9ml-EDTA rør, 2x9ml serum/serum-gel rør og 2xPAXgene RNA rør (PAXgene rørene tappes altid som de sidste). Stasebåndet udløses, så snart blodet begynder at løbe i PAXgene røret. Rørene vendes godt 8-10 gange lige efter blodprøvetagning. Håndtering i laboratoriet: Hvis blodprøverne står længe inden håndtering, opbevares de ved 4 C indtil håndteringen påbegyndes. Er der ikke materiale nok til at fylde mikrorørene, fordeles materialet ligeligt mellem rørene. EDTA rør: 1. Afpipetter 1 1,5 ml EDTA-fuldblod i et mikrorør. 2. Centrifuger EDTA røret ved 2000xg, 10 min, 4 C. 3. Afpipetter 0,5 cm over cellelaget: 2 mikrorør af ca. 2 ml EDTA-plasma. 4. Afpipetter 1 EDTA-buffy coat i et mikrorør. Serum (serum-gel) rør: 5. Lad serum rørene koagulere i min. 30 min (max. 2 timer) ved stuetemperatur. 6. Centrifuger serum rørene ved 2000 g, 10 min, 4 C. 7. Afpipetter 0,5 cm over cellelaget: 4 2 ml serum. PAXgene rør: 8. PAXgene RNA røret henstår ved stuetemperatur i min. 2 timer (max. 72 timer). 9. Indfryses ved -20 C i timer. Opbevaring: 10. Håndteringen resulterer optimalt i 8 fraktioner og 2 PAXgene rør. Fraktionerne opbevares som følger: EDTA-fuldblod og EDTA-buffy coat: -20 C eller -80 C EDTA-plasma: -80 C Serum: -80 C PAXgene: -80 C Side 1 af 5

2 Figur 1. Håndtering af blod. Ved begrænset kapacitet/materiale er prioriteringsrækkefølgen: fuldblod, serum, plasma/buffy coat, PAXgene. Ved begrænset mængde serum eller EDTA-plasma fordeles materialet i fraktionsrørene. Side 2 af 5

3 Prøvetagningsrør Håndtering Fraktioner til opbevaring Slutopbevaring 1 EDTA rør (9 ml) 2 serum rør (2 9 ml) 2 x PAXgene RNA rør (2 2,5 ml) Vendes godt 8-10 gange Afpipettering af 1 1,5 ml velblandet EDTA-fuldblod Centrifugering: 2000 g, 10 min, 4 C Afpipettering af 2 2 ml EDTAplasma Afpipettering af EDTA-buffy coat 1 1,5 ml EDTA-fuldblod 2 2 ml EDTA-plasma EDTA-buffy coat -20 C eller -80 C -80 C Koagulation 30 min (max 2 timer) ved stuetemperatur Centrifugering: 2000 g, 10 min, 4 C Afpipettering af 4 2 ml serum 4 2 ml serum -80 C Vendes godt 8-10 gange Henstår ved stuetemperatur i min. 2 timer (max. 72 timer) Indfryses ved -20 C i timer Ingen fraktionering -80 C -20 C eller -80 C Tabel 1. Håndtering af blod til. Ved begrænset kapacitet/materiale er prioriteringsrækkefølgen: fuldblod, serum, plasma/buffy coat, PAXgene. Ved begrænset mængde serum eller EDTA-plasma fordeles materialet i fraktionsrørene. Etiketter Ved indregistrering af blodfraktionerne printes etiketter, som påsættes de respektive fraktionsrør. Se eksempel i figur 2. Figur 2. Eksempel på etiketter til fraktionsrør. Anbefalinger til laboratoriet Det anbefales at bruge handsker ved håndtering af prøver i laboratoriet. Vi henviser til Dansk CancerBiobanks utensilieliste Forslag til utensilier og reagenser vedrørende indkøb af utensilier og reagenser. Se under mappen for fagfolk. Laboratoriets gængse EDTA- og serum/serum-gel rør anvendes og behandles som laboratoriets øvrige blodprøver. Som standard anbefales serum rør; ved længere transport før håndtering kan serum-gel rør anvendes som alternativ. Serum-gel rør centrifugeres før transport. Side 3 af 5

4 Efter modtagelse i laboratoriet opbevares blodprøver optimalt ved 4 C indtil de præpareres. Det anbefales, at man tilstræber en maksimal håndteringstid på 3 timer regnet fra blodprøvetagning til indfrysning. Blodprøver der modtages uden for normal arbejdstid bør stå på køl til næste dag. Mikrorør til opbevaring af blodfraktioner bør være forsynet med tætsluttende skruelåg med gummi O-ring. Det anbefales at anvende mikrorør og skruelåg, der er certificeret fri for DNase, RNaser og humant DNA. Frysere tilkobles alarm for temperaturstigning og der udarbejdes en instruks for aktion ved driftsstop. Det anbefales endvidere at udarbejde instruks for manuel overvågning af frysere, samt at tilslutte frysere et system for enten temperaturlogning (hvor den absolutte temperatur henover døgnet fremgår) eller et system, hvor evt. afvigelser udover de fastsatte grænseværdier kan ses. Fyldte vanddunke placeret i en halvtom fryser kan forsinke optøningen af prøver i tilfælde af driftsstop En tom -80 C reservefryser skal være til rådighed til brug ved driftsstop. Det anbefales at reservefryseren er afkølet. Dokumenttype: Udkast, SOP, håndtering af blod, version 1 Udarbejdet af: Tina Kringelbach Revisionsansvarlig: Tina Kringelbach Gældende for: Prøveindsamlende afdelinger Godkendt af: - Godkendelse: Gældende fra: dd-mm-åååå Målgruppe: Prøveindsamlende personale Faglig ansvarlig: Estrid Høgdall Senest revideret: Side 4 af 5

5 Figur 3. Stort procedureflowskema for håndtering af blod til. Side 5 af 5