ScanGel Anti-IgG Kort Kort

Transkript

1 ScanGel Anti-IgG Kort Kort GEL, DER ER FREMSTILLET AF ET POLYKLONALE ANTI-IgG ANTI-HUMANT GLOBULIN Irregulær Ab-screening, forligelighed, fænotypebestemmelse IVD Alle de af Bio-Rad producerede og markedsførte produkter gennemgår fra modtagelse af råmateriale til markedsføring af slutproduktet i et komplet kvalitetssikringssystem. Hvert batch af slutproduktet gennemgår kvalitetskontrol og markedsføres kun, hvis det opfylder de fastsatte kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert batch opbevares af producenten. 69

2 I - BRUG AF OG PRINCIPPET FOR TESTEN Dette kort er udelukkende beregnet til professionel in vitro-diagnostisk anvendelse. Testen kombinerer principperne for agglutination og gelfiltrering og er designet til screening og identifikation af irregulære erythrocytbundne antistoffer, forligelighedstest og fænotypebestemmelse. Reaktionen opnås og aflæses efter centrifugering af specialdesignede mikrorør, der indeholder gel, imprægneret med antiglobulinreagens. Erythrocytsuspensionen og serum eller plasma fordeles i mikrorørene, og mikrorørene centrifugeres efter en inkubationsperiode. Ikke- agglutinerede røde blodlegemer samles i bunden af mikrorøret, mens agglutinater forbliver i den øverste del af gelen, afhængigt af agglutinatets størrelse. Deres position i gelen er udtryk for reaktionens intensitet Gelens evne til at adskille røde blodlegemer fra serum eller plasma overflødiggør vaskeproceduren, som er obligatorisk i traditionelle metoder. II - BESKRIVELSE AF REAGENSERNE Mikrorørene på ScanGel Anti-IgG-kortet indeholder en gel, der er imprægneret med Anti-IgG antihuman globulin. Dette Anti-IgG-fraktionen er fremstillet af sera fra hyperimmuniserede geder. Disse reagenser indeholder natriumazid (< 0,1%) som konserveringsmiddel. Bestillingskoden og antallet af kort pr. kasse er angivet på kassens etiket. III - OPBEVARING HOLDBARHED Udløbsdatoen og opbevaringsbetingelserne er angivet på æsken. Opbevar kortene ved stuetemperatur (+15 C til +25 C). Kortene opbevares vertikalt og beskyttet for varmepåvikning i et rum med en relativt konstant temperatur og luftfugtighed. IV - ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Resultaternes pålidelighed afhænger af en korrekt implementering af følgende regler for god laboratoriepraksis : Brug ikke reagenserne efter den udløbsdato, der er angivet på etiketten. Brug ikke kort, hvor der er tegn på udtørring, bobler eller en beskadiget eller delvist fjernet forseglingsstrimmel. 70

3 Det er vigtigt at udvise forsigtighed for at undgå kontaminering mellem mikrorørene især under under afpipetteringerne. Brug en ny pipette til hver prøve, hvert reagens eller erythrocytsuspension. Kontrollér, at pipetterne og andet udstyr fungerer korrekt, og kontrollér også deres nøjagtighed. Brug handsker og sikkerhedsbriller under håndtering af reagenser og prøver. Pipettér aldrig direkte med munden. Undgå stænk. I tilfælde af stænk, skal der rengøres med 12% hypoklorit i en 1:10-opløsning og tørres efter med absorberende papir. Det materiale, der anvendes til rengøringen, skal kasseres og placeres i beholderen til kontamineret affald. Forbrugsartikler og andre produkter, der har været i kontakt med prøver eller reagenser, som indeholder materiale af human oprindelse, må først kasseres efter dekontaminering. Sikkerhedsdatablad udleveres på forespørgsel. V - PRØVETAGNING OG BEHANDLING AF PRØVER Foretag en aseptisk blodprøvetagning i et rør med eller uden antikoagulans (EDTA, CPD). Udfør testen snarest muligt efter prøvetagningen. Prøver, der ikke kan analyseres straks, skal opbevares ved +2 C - +8 C og skal testes inden for 48 timer. Der må under ingen omstændigheder kunne ses hæmolyse. Undgå at opvarme prøvematerialet. VI - METODE Leveret udstyr ScanGel Anti-IgG-kort Nødvendig, ikke leveret materiale ScanLiss : Erytrocytsuspensionsreagens ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi IH QC 4 x 6 ml Centrifuge : ScanGel Centrifuge Varmeskab : ScanGel Incubator Automatiske eller semiautomatiske pipetter Pipettespidser Engangsrør Beholder til affald, der er forbundet med biologisk risiko Hypoklorit 71

4 Gummihandsker Sugende papir. Sikkerhedsbriller 1. Screening og identifikation af irregulære antierythrocyt antistoffer Kontroller Det anbefales at udføre en autokontrol (plasma eller serum og røde blodlegemer fra patienten), sideløbende med hver enkelt test. En positiv kontrolopløsning (kendt serum, der indeholder mindst et antistof, som kan påvises med indirekte antiglobulin teknik) og en negativ kontrolopløsning (kendt serum, der ikke indeholder nogen antistoffer), IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi. Nødvendig, ikke leveret materiale EryScan, ScanCell, ScanPanel : Brugsklar erythrocytsuspensionsreagens til screening og identifikation af irregulære erythrocytbundne antistoffer (indirekte antiglobulintest) EryScan 2 x 10 ml ScanCell 3 x 10 ml ScanPanel 10 x 3 ml Procedure Følg proceduren nøje. Alle reagenser skal have stuetemperatur, før de anvendes. Adskil serum eller plasma fra de røde blodlegemer i prøven ved centrifugering. Når blodet er tappet uden antikoagulans, skal prøven centrifugeres endnu en gang ved g i 10 minutter. a) Forbered en erythrocytsuspension, hvis disse ikke findes brugsklare Autokontrol : Overfør 1 ml ScanLiss til et mærket engangsrør. Tilsæt 10 µl røde blodlegemer (autokontrol). Bland. b) Metode 1. Mærk hvert kort eller del af kortet (afhængig af antal erythrocytsuspensions-reagenser, der anvendes til prøven) med tilsvarende prøvenavn eller -nummer. Mærk erythrocytsuspensionen, som skal overføres til hvert mikrorør. Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erythrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af hver Eryscan, ScanCell-, ScanPanel- eller 72

5 erythocytsuspension, der er klargjort ifølge afsnit 1- a) i brøndene i de relevante mikrorør. 3. Tilsæt straks 25 µl plasma eller serum i de respektive brønde på mikrorørene. Intervallet mellem tilførsel af erythrocytter og plasma eller serum må under ingen omstændighed overstige 10 minutter. 4. Inkuber ved 37 C i 15 minutter i en ScanGel Incubator. 5. Centrifuger i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. 6. Aflæs reaktionerne. 2. Forligelighedstest Kontroller En positiv kontrolopløsning (kendt serum, der indeholder mindst et antistof, som kan påvises med indirekte antiglobulin teknik) og en negativ kontrolopløsning (kendt serum, der ikke indeholder antistoffer), IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi. Procedure Følg proceduren nøje. Alle reagenser skal have stuetemperatur, før de anvendes. Adskil serum eller plasma fra de røde blodlegemer i prøverne ved centrifugering. Når blodet er tappet uden antikoagulans, skal prøven centrifugeres igen ved g i 10 minutter. a) Fremstil donorerythrocytsuspension(er) For hver donor : Overfør 1 ml ScanLiss i et mærket engangsrør. Tilsæt 10 µl erythrocytkoncentrat (donorerythrocyter). Bland. Erytrocytsuspensionen er klar til brug. b) Metode 1. Mærk hvert kort eller del af med tilsvarende prøvenavn eller -nummer. Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erythrocytsuspension(erne) igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af hver erythrocytsuspension i brøndene på de relevante mikrorør. 3. Tilsæt straks 25 µl af modtagers plasma eller serum i brøndene på de relevante mikrorør. Intervallet mellem overførslen af røde blodlegemer og plasma eller serum må under ingen omstændigheder overstige 10 minutter. 4. Inkuber ved 37 C i 15 minutter i en ScanGel Incubator. 5. Centrifuger i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. 6. Aflæs reaktionerne. 73

6 3. Fænotypebestemmelse Kontroller Positive og negative kontroller: røde blodlegemer, kendt positive og kendt negative for antigenet, testes sammen med prøven. IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi Prøvekontrol (kun røde blodlegemer fra prøven). Nødvendig, ikke leveret materiale Bio-Rad reagensen, som svarer til det undersøgte antigen. Procedure Følg proceduren nøje. Alle reagenser skal have stuetemperatur, før anvendelse. Adskil plasma fra de røde blodlegemer i den prøve, der skal testes, ved centrifugering. a) Fremstil en erytrocytsuspension For hver prøve : Overfør 1 ml ScanLiss i et mærket engangsrør. Tilsæt 10 µl koncentrat af røde blodlegemer fra prøven. Bland. Erytrocytsuspensionen er klar til brug. b) Metode 1. For hver prøve mærkes et mikrorør med den relevante prøves navn eller nummer og identifikation af den anvendte serumtest og et mikrorør med kontrolprøvens navn eller nummer. Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erytrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af hver erythrocytsuspension i brøndene på de relevante mikrorør. 3. Tilsæt straks 25 µl testserum i brøndene på de relevante mikrorør (undtagen i mikrorør, der bliver brugt til kontrol). Intervallet mellem overførslen af røde blodlegemer og testserum må under ingen omstændigheder overstige 10 minutter. 4. Inkuber ved 37 C i 15 minutter i en ScanGel Incubator. 5. Centrifuger i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. 6. Aflæs reaktionerne. 74

7 VII - RESULTATER OG FORTOLKNING Agglutinater (på overfladen af eller fordelt i gelen) eller hæmolyse i mikrorøret angiver et positivt resultat. Koncentration af røde blodlegemer i bunden af mikrorøret og fravær af hæmolyse angiver et negativt resultat. Resultaterne valideres kun, hvis de kontroller giver de forventede resultater. 1. Screening og identifikation af irregulære antierythrocyt antistoffer Et negativt resultat (ingen agglutination og ingen hæmolyse) i de enkelte mikrorør er udtryk for, at det testede serum eller plasma ikke indeholder antistoffer rettet mod de antigener, der findes på erythrocytsuspensionsreagenset og som kan påvises med den anvendte metode. Derimod indikerer et positivt resultat (agglutination og/eller hæmolyse) i mindst et af mikrorørene forekomst af et eller flere antistoffer i den prøve, der testes. Antistofferne skal derefter identificeres. En positiv reaktion i autokontrol -mikrorøret kan indikere tilstedeværelsen af autoantistof. Hvis, foruden den positive autokontrol, mindst et af erythrocytsuspensions-reagenserne agglutinerer, bør kombinationen af autoantistof og alloantistof tages i betragtming. Det er kun de antistoffer, der korresponderer med det antigen, som findes på testerythrocyterna, der kan konstateres. Ved at sammenligne de negative og positive reaktioner observeret med hver enkelt erythrocyt i den panel der anvendes med den masterliste, der følger med panelet er det muligt at karakterisere specificiteten af tilstedeværende antistoffer i prøveserum eller plasma. 2. Forligelighedstest Et positivt resultat (agglutination og/eller hæmolyse) viser at der er uforligelighed mellem modtagers serum eller plasma og donors røde blodlegemer. 3. Fænotypebestemmelse Se på indlægssedlen i pakken til den anvendte serumtest. Resultaterne er kun gyldige, hvis kontrollen er negativ. VIII - YDEEVNE 1. Screening og identifikation af irregulære antierythrocyt antistoffer Den specifikke ydeevne blev evalueret på 1086 patienter og viste en god balance mellem sensitivitet og specificitet. Hvert resultat er sammenlignet med de resultater, der er opnået med mikrotiterplade- eller gelfiltreringsteknikker. 75

8 Applikationen muliggør bestemmelse af human anti-rh1 (D)-koncentration svarende til 20 ng/ml. Specificiteten for en tilfældigt udvalgt patientpopulation var 99,6 %. Reproducerbarheden for programmet blev testet og viste god ydeevne i både interne og krydskontrollerede test. 2. Forligelighedstest Ydeevnen blev evalueret med gelfiltreringsteknikken som reference, og resultaterne var overensstemmende. Reproducerbarheden af testmetoden blev undersøgt og viste god ydeevne i både interne og krydskontrollerede test. 3. Fænotypebestemmelse Se på indlægssedlen i pakken til den anvendte serumtest. GRÆNSER Abnorme resultater kan være forårsaget af : bakteriel eller kemisk kontaminering af serum, plasma, de røde blodlegemer eller udstyret. patientmedicinering eller sygdom, der fremkalder en krydsreaktion. anvendelse af et andet erythrocytsuspensionsmedie end det anbefalede. en anden forberedelse af erythrocytsuspensionen end den anbefalede. ufuldstændig opblanding af de røde blodlegemer hæmolyse af prøven eller testerytrocytter. forekomst af fibrin (kompakt cellekoncentrat i bunden af mikrorøret sammen med et fint, lyserødt bånd øverst i gelen, der opstår som følge af røde blodlegemer, der tilbageholdes af fibrinresterne). kontaminering fra mikrorør til mikrorør. anvendelse af andre procedurer end de ovenfor beskrevne. Under licens fra DiaMed SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Schweiz 76

9 IX - LITERATURE 1. Löw B., Messeter L. : Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974;26: Kankura T., Kurashina S., Nakao M. : A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974;83: Rouger Ph., Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson Engelfriet C.P., Overbeeke M.A.M., Voak D. : the antiglobulin test (Coombs test) and the red cell ; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill Livingstone. 1987; vol2: Lapierre Y., Rigal D., Adam J. et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30: Bromilov I.M., Adams K.E., Hope J., Eggington J.A. and Duguid J.K.M. : Evaluation of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion Medecine 1991;1: Salmon Ch., Cartron J.P., Rouger Ph. : Les groupes sanguins chez l'homme. 2é ed. Masson Pottier C., Quillet P., Baufine-Ducroq H. : Gel-test : Interpretation and value of a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992;50: Burin des Rosiers N., Nasr O. : Recherche des anticorps irréguliers érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de échantillons. Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993;36: International Forum. What is the best technique for the detection of red cell alloantibodies. Vox Sang 1995;69: Issitt PD. : Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, 1998.

10 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2009 Fax.: Code: