DA212115.03 1 BRUGSANVISNING KLAR TIL BRUG DYPPEOBJEKTGLASMEDIER DA212115.03 Rev.: Oct 2005 BBL UROTUBE BBL UROTUBE M BBL UROTUBE E BBL UROTUBE E. coli BBL UROTUBE SXT TILSIGTET BRUG BBL UROTUBE produkter er dyppeobjektkglas til isolering og bestemmelse af kolonitællingen af mikroorganismer, der er isoleret fra urinpræparater. Overfladerne på dyppeobjektglassene er belagt med to eller tre forskellige kulturmedier. Alle BBL UROTUBE produkter indeholder CLED agar til bestemmelsen af den totale tælling af bakterier og/eller gærarter, og MacConkey agar til påvisningen af gramnegative bakterier, f.eks. Enterobacteriaceae. Det tredje, hvis tilgængeligt, afhænger af det respektive produkt. PROCEDURENS PRINCIPPER OG FORKLARING Mikrobiologisk metode. Dyppeobjektglas anvendes i dag almindeligt som en screeningsteknik til optælling og isolering af mikroorganismer fra rutinemæssige urinpræparater. 15 Efter nedsænkning af dyppeopjektglasset i et korrekt indsamlet friskt urinpræparat og efterfølgende inkubation af objektglasset sammenlignes koloninummeret på overfladen af CLED agar med et referencebillede. CLED agar blev udviklet af Sandys i 1960 for at forhindre sværmen af Proteus ved at begrænse elektrolytterne i kulturmediet, hvilket senere blev modificeret flere gange til brug i urinkultur. 6 Det blev udpeget som et CystineLactoseElectrolyteDeficient (Cystinlactoseelektrolytfattigt CLED) og rapporteret som værende ideelt til dyppeinokulumteknikker og urinær bakteriologi i almindelighed. 6,7 Næringsstofferne i CLED agar forsynes af gelatine og caseinpeptonerne samt okseekstrakt. Lactose er inkluderet for at forsyne en energikilde for organismer, som er i stand til at anvende den ved brug af en fermenteringsmekanisme. Bromthymolblåt anvendes som en phindikator for at skelne mellem lactosefermentorer og lactosenonfermentorer. Organismer, som fermenterer lactose, vil sænke ph og ændre farven på mediet fra grøn til gul. Cystin tillader væksten af "dværgkoloni"coliformer. 3 Elektrolytkilder reduceres for at minimere sværmen af Proteusarter. Antallet af på CLED agar er direkte proportionalt med antallet af bakterier pr. ml urinpræparat. CLED agar er inkluderet på alle BBL UROTUBE dyppeobjektglas som 1. Det andet er MacConkey agar. Det er kun let selektivt, da koncentrationen af galdesalte, som hæmmer grampositive mikroorganismer, er lav i sammenligning med andre enteriske plademedier. Dette anbefales til brug med kliniske præparater, som sandsynligvis indeholder blandet mikrobiel flora, såsom urin, fordi det muliggør en præliminær gruppering af enteriske og mange andre gramnegative bakterier i lactosefermentorer og lactosenonfermentorer. 8,9 I MacConkey agar forsyner peptoner næringsstoffer. Krystalviolet hæmmer grampositive bakterier, især enterokokker og stafylokokker. Differentiering af enteriske mikroorganismer opnås ved kombinationen af lactose og den neutrale røde ph indikator. Farveløse eller pink til røde produceres, afhængigt af isolatets evne til at fermentere kulhydratet. MacConkey agar er inkluderet på alle BBL UROTUBE dyppeobjektglasprodukter som 2. Et tredje er inkluderet på overfladerne af alle tresidede dyppeobjektglas for at detektere tilstedeværelsen af karakteristiske bakteriegrupper og gærarter. Typen af mediet afhænger af det anvendte produkt: BBL UROTUBE, samt 1 og 2 nævnt ovenfor, indeholder Cetrimide agar, et almindeligt anvendt til den selektrive isolering af Pseudomonas aeruginosa. 10,11 Gelatinpepton og casein forsyner næringsstoffer. Kalium og magnesiumsalte forøger pigementdannelsen af P.
aeruginosa. Glycerol er en energi og kulstofkilde. Cetyltrimethylammoniumbromid (=cetrimid) er et rensemiddel, der selektivt hæmmer de fleste gramnegative stave andre end P. aeruginosa. BBL UROTUBE M, samt 1 og 2 nævnt ovenfor, indeholder maltagar, et delvist selektivt til isoleringen af gærarter, f.eks. Candida albicans. Maltekstrakt og mælkesyre forsyner næringsstoffer og bevarer ph ved et lavt niveau, hvilket forsyner selektivitet for at hæmme mange bakterielle arter. 11 BBL UROTUBE E, samt 1 og 2 nævnt ovenfor, indeholder Enterococcus agar, et selektivt differential for Enterococcusarter. 11 I Enterococcus agar forsyner casein og gærekstrakt næringsstoffer. Natriumchlorid bevarer den osmotiske stabilitet. Kombinationen af citrat, azid, kanamycin, polymyxin B, nalidixinsyre og neomycin hæmmer de fleste bakterier andre end Enterococcusarter. Esculin er et substrat for betaglucosidase, som karakteristisk findes i Enterococcusarter. Et af produkterne af enzymatisk hydrolyse, esculetin, reagerer med jernioner for at producere et brunt til sort præcipitat i mediet, som omringer Enterococcus. BBL UROTUBE E. coli, samt 1 og 2 nævnt ovenfor, indeholder betaglucuronidase (=BGLU) agar, et differential til den specifikke påvisning af E. coli og Proteusarter. Mediet indeholder nitrophenylßglucuronid, et kromogent substrat til påvisning af betaglucuronidaseaktivitet, hvilket typisk findes i Escherichia coli, mens mange andre bakterier, inklusive Proteus, Providencia og Morganella,er negative. 11,12 Ved nedbrydning af substratet akkumulerer gult nitrophenol i mediet og ne, mens glucuronidasenegative er farveløse til grålige på et farveløst. Gul vækst fra dette kan undergå en indoltest, som hvis positiv bekræfter identifikationen af E. coli. Indoldannelsen på dette forøges ved tilsættelse af indolforgængeren (tryptophan). Denne aminosyre er endvidere substratet for enzymtryptophandeaminase (TDA), hvilket karakteristisk findes i Proteus, Providencia og Morganellaarter. Dette enzym er let at påvise ved foretagelse af en TDAtest med jernchlorid. Hvis yderligere bekræftelse ønskes, kan en indoltest også foretages fra farveløs vækst, som er positiv i Proteus vulgaris, Providenciaarter og Morganella morganii. BBL UROTUBE SXT, samt 1 og 2 nævnt ovenfor, indeholder antagonistfrit følsomhedstest (PDM) med trimethoprim/sulfamethoxazol (SXT) til bestemmelse af resistens eller sensitivitet over for SXT. Bakterievækst på dette betyder resistens over for SXT. Efter inokulering eller efter inokulering og inkubation kan dyppeobjektglassene også anvendes som transportmedier fra lægepraksissen til analytiske laboratorier. Vækst fra medierne på dyppeobjektglassene kan anvendes til identifikation og følsomhedstestning af isolaterne. REAGENSER Formler* pr. liter renset vand Medium 1 og 2 er almindelige for alle BBL UROTUBE dyppeobjektglas. Medium 1: CLED agar Medium 2: MacConkey agar Peptisk fordøjelse af casein 4,0 g Peptisk fordøjelse af casein 17,0 g Valgte peptoner 4,0 Kødpepton 3,0 Kødekstrakt 3,0 Lactose 10,0 Lactose 10,0 Natriumchlorid 5,0 Cystin 0,128 Blanding af galdesalte 1,5 Bromthymolblåt 0,02 Neutral rød 0,03 Agar 15,0 Krystalviolet 0,001 ph 7,3 ± 0,2 Agar 13,5 ph 7,1 ± 0,2 Medium 3: Typen af 3 (hvis tilgængelig) afhænger af det anvendte produkt (se PROCEDURENS PRINCIPPER OG FORKLARING). BBL UROTUBE, samt 1 og 2 nævnt ovenfor, indeholder Cetrimide agar: Peptisk fordøjelse af gelatine 16,0 g Glycerol 8,0 g DA212115.03 2
Hydrolyseret casein 10,0 Cetyltrimethylammoniumbromid 0,3 Kaliumsulfat 10,0 Agar 13,0 Magnesiumchlorid 1,4 ph 7,1 ± 0,2 BBL UROTUBE M, samt 1 og 2 nævnt ovenfor, indeholder maltagar: Maltekstrakt 30,0 g Agar 18,0 g Mælkesyre 6,3 ph 4,0 ± 0,4 BBL UROTUBE E, samt 1 og 2 nævnt ovenfor, indeholder Enterococcus agar: Peptisk fordøjelse af casein 20,0 g Kanamycin 0,02 g Gærekstrakt 5,0 Polymyxin B 0,002 Natriumchlorid 5,0 Nalidixinsyre 0,0075 Citrat 1,5 Neomycin 0,002 Natriumazid 0,15 Agar 15,0 Esculin 1,0 ph 7,1 ± 0,2 Jernammoniumcitrat 0,5 BBL UROTUBE E coli, samt 1 og 2 nævnt ovenfor, indeholder Betaglucuronidase (=BGLU) agar: Pepton 10,0 g Natriumchlorid 5,0 g Nitrophenylßglucuronid 0,1 Agar 15,0 Tryptophan 0,3 ph 7,2 ± 0,2 BBL UROTUBE SXT, samt 1 og 2 nævnt ovenfor, indeholder antagonistfrit (PDM ) med trimethoprim/sulfamethoxazol (SXT). PDM 32,3 g Trimethoprim 0,003 g Sulfamethoxazol 0,04 ph 7,3 ± 0,3 *Formler kan justeres og/eller suppleres som påkrævet for at opfylde funktionsdata. FORHOLDSREGLER. Kun til professionel brug. Dyppeobjektglas må ikke anvendes, hvis de viser tegn på mikrobiel kontaminering, misfarvning, udtørring, brud eller andre tegn på nedbrydning. Overhold aseptiske teknikker og beskyttelsesforholdsregler mht. sundhedsfarer under hele proceduren. Anvend beskyttelseshandsker ved indsamling og håndtering af præparater og positive objektglas, som indeholder smittefarlige stoffer. Læs dokumentet GENEREL BRUGSANVISNING for procedurer om aseptisk håndtering, biologiske farer og bortskaffelse af de brugte produkter. Når disse produkter anvendes som et transport fra en lægepraksis til et diagnostisk laboratorium, skal lokale regler mht. fragt af smittefarlige præparater overholdes. OPBEVARING OG HOLDBARHED BBL UROTUBE produkter opbevares efter modtagelse i mørke ved 15 til 20 C i den originale pakke indtil umiddelbart inden ibrugtagning. Undgå nedfrysning, overophedning, udtørring og temperatursvingninger. Objektglassene kan inokuleres indtil udløbsdatoen (se etiketten på pakken) og inkuberes i de anbefalede inkubationstider. Uåbnede objektglas fra åbnede pakker kan anvendes indtil udløbsdatoen, så længe de opbevares rent ved 15 20 C. Efter åbning skal objektglassene anvendes øjeblikkeligt. BRUGERKVALITETSKONTROL Klargør suspensioner af teststammerne nævnt nedenfor i fysiologisk saltvand, som stemmer overens med MacFarland 0,5 standarden (cirka 5 x 10 7 CFU/ml). Fortynd suspensionerne til en DA212115.03 3
CFU på 10 4 til 10 5 pr. ml. Dyp prøver fra objektglassene ned i denne fortynding. Lad ekstra suspension løbe af, og returnér objektglassene til deres rør. Inkubér ved 35 til 37 C i 18 24 h. Efterse som beskrevet. De forventede resultater er nævnt i tabellen: Produkt og Farve (ikkeinokuleret) BBL UROTUBE Medium 1 gullig til gulgrøn Escherichia coli ATCC 25922 gult Medium 2 rosa +; pink ; rødt til pink Medium 3 farveløs til svagt ravgul BBL UROTUBE M Medium 1 gullig til gulgrøn gult Medium 2 rosa +; pink ; rødt til pink Medium 3 farveløs til svagt ravgul BBL UROTUBE E Medium 1 gullig til gulgrøn gult Medium 2 rosa +; pink ; rødt til pink Medium 3 svagt ravgul BBL UROTUBE E. coli Medium 1 gullig til gulgrøn gult Medium 2 rosa +; pink ; rødt til pink Medium 3 farveløs til svagt ravgul +; og gule Indolstikprøve a TDA b + Proteus mirabilis ATCC 12453 +; farveløse ; gulgrønt til grønt +; farveløse til beige ; orangebrunt Enterococcus faecalis ATCC 29212 gult Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Candida albicans ATCC 10231 +; lyse til blågrønne ; ; gulligt +; små, hvidlige blågrønt til blågrønt +; lyse til blågrønne med eller uden fluorescens +; gullige til blågrønne +; farveløse ; gulgrønt til grønt +; farveløse til beige ; orangebrunt gult +; lyse til blågrønne ; ; gulligt +; små, hvidlige blågrønt til blågrønt +; lyse til blågrønne med eller uden fluorescens +; hvidlige +; farveløse ; gulgrønt til grønt +; farveløse til beige ; orangebrunt gult +; brune til sorte, brunt til sort +; farveløse ; gulgrønt til grønt +; farveløse til beige ; orangebrunt +; farveløse + +; lyse til blågrønne ; ; gulligt +; små, hvidlige blågrønt til blågrønt +; lyse til blågrønne med eller uden fluorescens gult (+)/ +; lyse til blågrønne ; ; gulligt +; små, hvidlige blågrønt til blågrønt +; lyse til blågrønne med eller uden fluorescens +; og (+) gule Produkt og Farve (ikkeinokuleret) Escherichia coli ATCC 25922 DA212115.03 4 Proteus mirabilis ATCC 12453 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Candida albicans ATCC 10231 BBL UROTUBE SXT Medium 1 gullig til +; farveløse +; lyse til blå +; små, hvidlige
gulgrøn gult Medium 2 rosa +; pink ; rødt til pink ; gulgrønt til grønt +; farveløse til beige ; orangebrunt gult grønne ; blågrønt +; lyse til blågrønne med eller uden fluorescens ; gulligt til blågrønt Medium 3 farveløs til + + svagt ravgul = ingen vækst til antydet vækst; (+) = svag vækst; + = god til fortrinlig vækst a, b Foretag disse supplerende test med vækst fra 3. Se Materialer, der ikke er vedlagt for information om bestilling af reagenser. PROCEDURE Vedlagte materialer BBL UROTUBE, BBL UROTUBE M, BBL UROTUBE E, BBL UROTUBE E. coli eller BBL UROTUBE SXT Mikrobiologisk kontrolleret. Materialer, der ikke er vedlagt Hjælpekulturmedier, reagenser og laboratorieudstyr som beskrevet. Til indol og TDAtest på 3 af BBL UROTUBE E. coli: Indole Dropper Reagent (indolpipettereagens) (kat. nr. 261185) eller Indole DMACA Dropper Reagent (Indol DMACA pipettereagens) (kat. nr. 261187). Ferric Chloride Dropper Reagent (ferrichloridpipettereagens) (kat. nr. 261190). Til oxidasetest på 3 af BBL UROTUBE: Oxidase Dropper Reagent (oxidasepipettereagens) (kat. nr. 261181). Præparattyper Disse produkter er egnede til isoleringen og optællingen af bakterier og fungi fra urin (midtstråle eller kateterurin eller urin indsamlet via suprapubisk blærepunktur). Se FUNKTIONSDATA OG PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER. Prøveindsamling og klargøring Overhold aseptisk teknik ved indsamling af præparater. Brug standardprocedurer ved indsamling. 1,13 Urin skal være frisk eller højst 2 h gammel. Urinpræparater kan som et alternativ opbevares i køleskab (højst 24 h) for at undgå overflod af smittefarlige stoffer eller kontaminanter inden inokulering. 13 Testprocedure 1. Efterse agaroverfladerne med røret lukket. Dyppeobjektglas, der viser tegn på udtørring, kontaminering eller anden nedbrydning, må ikke anvendes. 2. Mærk røret med patientnavn, præparatnummer og inokuleringsdato. 3. Skrå låget af og fjern objektglasset fra plastrøret uden at røre ved agaroverfladerne (fig. 1). Urinpræparater må ikke indsamles i BBL UROTUBE beholderrøret. 4. Dyp kort objektglassene tre gange i urinen, således at agaroverfladerne er helt nedsænket (fig. 2). Objektglasset må ikke efterlades i væsken i mere end 10 sekunder, da det kan vaske ingredienserne af medierne og/eller løsne gelen fra plastbæreren. Hvis der er tilstrækkelig urin til dypning, kan den hældes forsigtigt over agaroverfladerne. 5. Lad ekstra urin dryppe af ved at holde spidsen af objektglasset op mod rørets inderste kant (fig 3.) De sidste dråber kan fjernes fra spidsen af objektglasset med en serviet (fig. 4). 6. Returnér forsigtigt objektglasset til plastrøret og luk det godt til. 7. Inkubér røret i 18 til 24 h ved 35 til 37 C (fig. 5) eller videresend det til et bakteriologisk laboratorium for yderligere behandling. Bemærk, at inokulerede rør bør transporteres til laboratoriet i løbet af 24 h. Undgå høje temperaturer og nedfrysning af objektglassene under transport. DA212115.03 5
Resultater og tolkning Efter inkubation fjernes objektglasset fra røret for tolkning. Ved kvantitativ estimering af de levedygtige optællinger sammenlignes væksten på CLED agar med referencebillederne nedenfor. God belysning anbefales ved tolkningen (fig 6.). Konfluent vækst forårsaget af levedygtige optællinger 10 6 /ml kan være vanskelig at registrere, da den kan dække hele agaroverfladen ensartet. Berøring af overfladen med en loop eller podepind kan være nyttig i dette tilfælde. Vækst på MacConkey agar ( 2) angiver tilstedeværelsen af gramnegative stave. Tilstedeværelsen af vækst på 3 (hvis tilgængeligt) angiver tilstedeværelsen af de respektive gruuper af mikroorganismer afhængig af det anvendte og den anvendte objektglastype. En detaljeret beskrivelse af væksten på medierne vises nedenfor. Forsøg ikke at fastsætte den levedygtige optælling af organismerne, som vokser på side 2 og 3, da de selektive stoffer indeholdt i disse medier kan påvirke væksten. Efter videredyrkning på de passende plademedier kan vækst fra medierne indeholdt på objektglassene anvendes til yderligere biokemiske eller følsomhedstest. CLED agar ( 1 på alle BBL UROTUBE produkter): CLED agar vil vokse grampositive og gramnegative bakterier og gærarter. En gul misfarvning af mediet angiver lactosefermentering, mens et gulgrønt eller grønt angiver lactosenonfermentorer. Følgende retningslinjer og tolkningsguiden (billeder) i slutningen af dette dokument kan anvendes til tolkning af de levedygtige tællinger indsamlet på CLED agar: Levedygtig tælling Mindre end 10.000 bakterier pr. ml Klinisk tolkning Midtstråleurin: Kontaminering. Lave tællinger kan være signifikante hos forbehandlede patienter eller hos patienter med kroniske infektioner. Urin indsamlet via kateterisation eller blærepunktur: I disse tilfælde kan mindre end 10.000 bakterier pr. ml allerede angive en infektion. 10.000 til 100.000 bakterier pr. ml Midtstråleurin: Tvivlsomt. Det anbefales at gentage testen, da disse bakterielle tællinger forekommer i forbindelse med kroniske urinvejsinfektioner, men også kan være til stede i midtstråleurin som kontaminanter. Disse tællinger kan være signifikante hos forbehandlede patienter eller hos patienter med kroniske DA212115.03 6
Mere end 100.000 bakterier pr. ml infektioner. Urin indsamlet via kateterisation eller blærepunktur: I disse tilfælde kan mindre end 10.000 bakterier pr. ml allerede angive en infektion. Disse høje levedygtige tællinger angiver tilstedeværelsen af en infektion i alle typer eller urin (inklusive midtstråleurin). I disse tilfælde kan diagnosen bekræftes med tilstedeværelsen af høje leukocyttællinger i urinbundfald. Hos kvinder kan en høj bakteriel kolonitælling forekomme som et resultat af ekstern kontaminering (leukorrhea, vaginitis). Denne diagnose bekræftes med tilstedeværelsen af et øget antal af pladeepitelceller uden en stigning i leukocyttællingen i urinbundfaldet. MacConkey agar ( 2 på alle BBL UROTUBE produkter): På dette vil alle Enterobacteriaceae og visse nonfermentorer (f.eks. Pseudomonas aeruginosa) vokse. En pink til rød misfarvning er et tegn på lactosefermentering, f.eks. med E. coli, mens farveløse, beige eller ravfarvede på et orangebrunt angiver lactosenonfermentorer. Tolkning af væksten på det respektive tredje ( 3) Som angivet ovenfor afhænger det tredje af den anvendte objektglastype: BBL UROTUBE: Vækst på Cetrimide agar bør tolkes som følger: grønne til gule fluorescerende angiver tilstedeværelsen af Pseudomonas aeruginosa. Diagnosen kan bekræftes med en positiv oxidasetest (se Materialer, der ikke er vedlagt). Ikkefluorescerende vækst på dette skal testes yderligere for fuldstændig identifikation. BBL UROTUBE M: Vækst på maltagar angiver tilstedeværelsen af gærarter, f.eks. Candida albicans eller andre fungi. Bemærk, at visse gærstammer kræver 42 til 48 h for fuldstændig vækstudvikling på medierne. Visse bakterier, såsom lactobacilli, vokser sjældent på dette. En gramfarvning fra væksten på dette kan derfor være nyttig. Yderligere testning er nødvendig for fuldstændig identifikation. BBL UROTUBE E: Brune til sorte på Enterococcus agar angiver tilstedeværelsen af Enterococcusarter, f.eks. Enterococcus faecalis. Vækst af farveløse til grå kan være et tegn på tilstedeværelsen af streptokokker, men bekræftelse er nødvendig. BBL UROTUBE E. coli: Hvis BGLUmediet bliver gult, er Escherichia coli eller andre betaglucuronidasepositive bakterier til stede. Foretag en indoltest fra gul vækst på dette. En positiv indolreaktion angiver tilstedeværelsen af E. coli. Hvis der forekommer farveløs til beige vækst på dette, skal en TDAtest foretages. En positiv TDAtest angiver tilstedeværelsen af organismer fra ProteusMorganellaProvidenciagruppen. Se Materialer, der ikke er vedlagt for information om bestilling af indol og TDAreagenser. Følg instruktionerne, som fulgte med reagenserne, for information om foretagelse af disse supplerende test. BBL UROTUBE SXT: Dette anvendes til at bestemme følsomheden (eller resistensen) af de isolerede bakterier over for trimethoprim/sulfamethoxazol (SXT). Ingen vækst på dette angiver sensitivitet, stærk vækst angiver resistens over for SXT. En reduceret vækst på dette ved sammenligning med CLED agar ( 1) kan angive tilstedeværelsen af en blandet kultur, der indeholder mindst én SXTresistent organisme. Efter brug og inden bortskaffelse skal alle brugte rør og andre kontaminerede materialer autoklaveres eller brændes. Se dokumentet GENEREL BRUGSANVISNING for detaljer. FUNKTIONSDATA OG PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER BBL UROTUBE, BBL UROTUBE M, BBL UROTUBE E, BBL UROTUBE E. coli og BBL UROTUBE SXT er egnede til diagnosticering af almene urinvejsinfektioner fra urinpræparater. Det er blevet bevist, at dyppeobjektglasmetoden med CLED og MacConkey agarer er en effektiv og enkel metode til tælling af almene bakterier (f.eks. Enterobacteriaceae, andre gramnegative stave (såsom pseudomonaer), enterokokker, stafylokokker og andre, som er til stede i urin). 18 Brug af et tredje (hvis tilgængeligt) udover disse standardmedier er nyttigt, hvis særlige grupper af organismer mistænkes for at være til stede som smittefarlige stoffer. 912 DA212115.03 7
Det er obligatorisk, at urinpræparater, som anvendes med disse eller andre systemer og medier, blev indsamlet aseptisk, og at de er friske (ikke mere end 2 h gamle) eller har været opbevaret i køleskab (i højst 24 h). 1,13 Forkert indsamling af urinen, opbevaring af præparaterne i længere tid end perioderne angivet ovenfor, lange transportperioder inden behandlingen af de inokulerede objektglas og eksponering af de inokulerede objektglas for ekstreme temperaturer kan resultere i forkert diagnose eller endog gøre diagnose umulig. 1,13 Den mest præcise diagnose af urinvejsinfektioner fås, hvis urin indsamlet via blærepunktur anvendes, da mikroorganismer, som er til stede i den normale uretralflora kan kontaminere urin indsamlet ved brug af andre indsamlingsteknikker. Kræsne bakterier, såsom mycoplasmaer, chlamydiae, Neissseria gonorrhoeae, mycobakterier eller Gardnerella vaginalis, vil ikke vokse på medierne fra disse objektglasprodukter. Hvis disse organismer forventes at være involveret i en urinvejsinfektion, skal de passende teknikker anvendes til deres påvisning. 1,13 Visse stammer af streptokokker, især af Streptococcus agalactiae (gruppe B) vil ikke vokse tilstrækkeligt på 1 (CLED agar). Hvis de mistænkes for at være involveret i en urinvejsinfektion, anbefales en dyrkning af urinen på en blodagarplade (f.eks. BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood (BD Columbia agar med 5% fåreblod)). Medier på dyppeobjektglas må ikke anvendes til foretagelse af følsomhedstest med diskdiffusionsmetoden. Selvom visse diagnostiske test kan udføres direkte på medierne, er det nødvendigt at udføre biokemiske og, hvis det angives, immunologiske analyser med rene kulturer for at opnå fuldstændig identifikation. Undtagelser er E. coli og ProteusMorganellaProvidenciagrupperne, som kan identificeres på 3 (BGLU agar) af BBL UROTUBE E. coli, hvis de anbefalede supplerende test (indol, TDA) er blevet udført. Pseudomonas aeruginosa kan også identificeres direkte på 3 (Cetrimide Agar) af BBL UROTUBE, hvis grønlige fluorescens findes, hvilket producerer en positiv oxidasereaktion. For passende behandling kan følsomhedstest af de isolerede organismer være nødvendige. Vækst på bakterier på 3 (PDM med trimethoprim/ sulfamethoxazol) af BBL UROTUBE SXT skal tolkes som resistens af organismerne over for dette antimikrobielle stof (SXT). LITTERATUR 1. Gallien, R.1988. Mikrobiologische Diagnostik in der ärztlichen Praxis, G. Fischer Verlag, Stuttgart. 2. Ellner, P.D., and M.S. Papachristos. 1975. Detection of bacteriuria by dipslide. Am. J. Clin. Pathol. 63: 516521. 3. Guttmann, D. 1967. Dipslide: an aid to quantitative urine culture in general practice. Br. Med. J. 3: 343345. 4. McAllister, T.A., et al. 1973. Assessment of plane dipslide quantitation of bacteriuria. Nephron 11: 111122. 5. Van Dorsten, J.P., and E.R. Bannister. 1986. Office diagnosis of asymptomatic bacteriuria in pregnant women. Am. J. Obstet. Gynecol. 155: 777780. 6. Sandys, G.H. 1960. A new method of preventing swarming of Proteus sp. with a description of a new suitable for use in routine laboratory practice. J. Med. Lab. Technol. 17:224233. 7. Mackey, J.P., and G.H. Sandys. 1965. Laboratory diagnosis of infection of the urinary tract in general practice by means of a dipinoculum transport. Br. Med. J. 2:12861288. 8. Farmer III, J.J. 2003. Enterobacteriaceae: introduction and identification. In: Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R.H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. King, E.O., M.K. Ward, and E.E. Raney. 1954. Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescein. J. Lab. Clin. Med. 44: 301. DA212115.03 8
11. MacFaddin, J.F. 1985. Media for the isolation cultivation maintenance of medical bacteria. Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London. 12. Chapin, K.C., and T.L. Lauderdale. 2003. Reagents, stains, an media: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Thomson, R.B. jr., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. BESTILLING Kat. nr. Produktnavn Pakkestørrelse 212115 BBL UROTUBE E. coli 10 objektglas 272805 BBL UROTUBE E 10 objektglas 273007 BBL UROTUBE 10 objektglas 273357 BBL UROTUBE 50 objektglas 273008 BBL UROTUBE SXT 10 objektglas 273171 BBL UROTUBE M 10 objektglas YDERLIGERE INFORMATION Kontakt den lokale BD repræsentant angående yderligere oplysninger. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D69126 Heidelberg/Germany Phone: +4962 2130 50, Fax: +4962 2130 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès 38800 Le Pont de Claix/France Tel: +33476 68 3636 Fax: +33476 68 3292 http://www.bd.com BD, BD logo and BBL are trademarks of Becton, Dickinson and Company. Urotube is a trademark of Becton Dickinson GmbH. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton, Dickinson and Company TOLKNINGSGUIDE (CLED Agar, kun 1) DA212115.03 9 Contamination: 1 000 10 000 3 4 Doubtful: >10 000 <100 000 4 5 Infection: 100 000 1 000 000 5 6
1 000 10 000 (=10 3 )/ml (=10 4 )/ml Kontaminering 1 000 10.000 (=10 3 10 4 ) CFU/mL Tvivlsomt >10 000 <100.000 (=10 4 10 5 ) CFU/mL 100 000 1 000 000 (=10 5 )/ml (=10 6 )/ml Infektion 100.000 1.000.000 (=10 5 10 6 ) CFU/mL DA212115.03 10