TEKNISKE ANBEFALINGER FOR BLOD

TEKNISKE ANBEFALINGER FOR BLOD DANSK CANCERBIOBANK DCB indsamler korresponderende blod- og vævsprøver fra patienter med nydiagnosticeret/formodet kræft (primær prøve). Forløbsprøver kan evt. indsamles efter aftale med det enkelte center. Blodprøver tages indenfor maks. 14 dage før operation/behandlingsstart. I tilfælde af længere tidsinterval mellem blod- og vævsprøve anbefales fornyet blodprøvetagning. PROCEDURE (Figur 1, Tabel 1) Prøvetagning Dato og klokkeslæt for prøvetagning noteres. Veneblod tappes i serumrør/serum-gel rør og i EDTA-rør - i den nævnte rækkefølge hvis kanylen sættes direkte på røret. Hvis der benyttes sommerfugl betyder rækkefølgen ingenting. Serumrør/serum-gel rør vendes 5 gange, EDTA-rør 8-10 gange. Håndtering i laboratoriet Blodprøverne transporteres til laboratoriet ved stuetemperatur eller på is (transporttemp. registreres i modulet). Efter modtagelse opbevares de optimalt ved 4 C, indtil de præpareres. Dato og klokkeslæt for modtagelse i laboratoriet og for nedfrysning noteres. Tidspunkt for centrifugering kan evt. registreres. Der opbevares optimalt 1 EDTA-fuldblod (01), 2 EDTA-plasma (02-03), 1 EDTA-buffy coat (04) og 4 serum/serum-koagel (05-08). Ved begrænset kapacitet/materiale er prioriteringsrækkefølgen 1. Fuldblod. 2. Serum. 3. Plasma/buffy coat. Ved begrænset mængde serum eller EDTA-plasma fordeles materialet i fraktionsrørene. EDTA rør: o Blandes grundigt på blodvender eller manuelt (min. 10 ). o 1,5 ml fuldblod overføres med engangspipette til mikrorør mrk. EDTA-fuldblod (01). o EDTA-røret centrifugeres ved 4 C el. stuetemp., 2000g, 10 min. (4 C anbefales). o 2 ~2 ml plasma fordeles i 2 mikrorør mrk. plasma (02-03). o Buffy coat (nederste del af plasma, hvide mellemlag og øverste del af erythrocytter) overføres til 1 mikrorør mrk. EDTA-buffy coat (04). Serum-rør/serum-gel: o Koagulerer ved stuetemperatur min. 30 min-maks. 2 timer inden håndtering. o Centrifugeres ved 4 C eller stuetemp., 2000g, 10 min. (4 C anbefales). o 4 ~2 ml serum fordeles i 4 mikrorør mærket serum (05-08). DCB BLOD tekniske anbefalinger/21-10-2015 1

Figur 1. Håndtering i laboratoriet 01 1 ~1,5 ml EDTA-fuldblod 1 9 ml EDTA rør LILLA Vendes ~10 gange Fuldblod afpipetteres 2 ~9 ml serum / serum-gel Koagul. 30 min-2 t, stuetemp. Centrifuger 4 C, 2000g, 10 min 02 03 05 06 2 ~2 ml EDTA-plasma 04 1 EDTA-buffy coat Buffy coat (hvidt mellemlag) 07 08 4 2 ml serum-koagel /serum Prioritering: 1. Fuldblod. 2. Serum. 3. Plasma/buffy coat Opbevaring: Fuldblod og buffy coat -20 C Serum og plasma -80 C DCB BLOD tekniske anbefalinger/21-10-2015 2

ANBEFALINGER TIL LABORATORIET Laboratoriets gængse EDTA-rør og serumrør/serum-gel rør anvendes og behandles som laboratoriets andre blodprøver. Det anbefales at bruge serumrør fremfor serum-gel for at undgå evt. interferens fra gelmaterialet på biokemiske analyser. Ved risiko for lang transporttid før håndtering kan serum-gel rør anvendes. Serum-gel rør centrifugeres da før transport. Det anbefales at man tilstræber en maksimal håndteringstid på 3 timer regnet fra blodprøvetagning til indfrysning. Blodprøver, der modtages udenfor normal arbejdstid, bør opbevares på køl til næste dag. Centrifugering: Blodprøverør centrifugeres ved 4 C el. stuetemp., 2000g, 10 min. Centrifugering ved 4 C anbefales. Mikrorør til opbevaring af prøver bør være forsynet med tætsluttende skruelåg med gummi O-ring. Det anbefales at anvende mikrorør og skruelåg, der er certificeret fri for DNaser, RNaser og humant DNA. Det anbefales at bruge handsker ved håndtering af prøver i laboratoriet. Se dokumentet Forslag til utensilier og reagenser for vejledende indkøbsinformationer. Opbevaring Serum og plasma opbevares ved -80 C. Fuldblod og buffy coat opbevares ved -20 C, alternativt ved -80 C. Fryser, racks og bokse i fryser mærkes med etiketter udskrevet fra DCB registreringsmodul (Tabel 2.Etiketter til fryser). Frysere tilkobles alarm for temperaturstigning samt instruks for aktion ved driftsstop. Det anbefales at udarbejde instruks for manuel overvågning af frysere samt at tilslutte frysere et system for enten temperatur logning, hvor den absolutte temperatur hen over døgnet fremgår, eller et system hvor evt. afvigelser udover fastsatte grænseværdier kan ses. Fyldte vanddunke placeret i en halvtom fryser kan forsinke optøning af prøver i tilfælde af driftsstop. En tom -80 C reservefryser skal være til rådighed til brug ved driftsstop; reservefryseren anbefales at være forafkølet. DCB REGISTRERINGSMODUL I DCB registreringsmodul oprettes på forhånd flg.: Klassifikationer: Beholder type, katalognummer og producent for prøvetagningsrør, mikrorør og fryser. Fryser: Frysere oprettes lokalt eller centralt afhængig af brugerrettigheder i registreringsmodulet. Fryser indrettes med antal søjler (racks), bokse og antal positioner i den enkelte boks. Fryser navngives; forkortelse tildeles automatisk af registreringsmodulet. Fryser, racks og æsker mærkes med etiketter udskrevet fra DCB registreringsmodul (Tabel 2.Etiketter til fryser) Fraktionssæt: Standardsæt med relevante fraktioner og angivelse af evt. centrifugeringstid, g-tal 1 og centrifugeringstemperatur (Tabel 3.Materiale i DCB registreringsmodul) 1 g=0,00001118*r*rpm 2, eksempelvis 4500 RPM ved rotorradius 9 cm svarer til 2038 g. DCB BLOD tekniske anbefalinger/21-10-2015 3

Registrering og mærkning af blodprøver Blodfraktioner registreres online i DCB registreringsmodul via patientens CPR-nr. Det registreres som en selvstændig prøve med ét materiale (Standardsæt), hvorved man kan registrere de specifikke prøvetagnings- og nedfrysningstider for materialet. Som basisoplysninger for den enkelte prøve registreres følgende: Prøvetagende Laboratorium (SHAKkode, Sygehus afdelingsklassifikation), evt. Eksternt prøvenr. (står nederst på etiketten), Patient CPR-nr., evt. Rekvirerende afd. (SHAKkode), tidspunkter for Materiale udtaget af patient og for Materiale modtaget i laboratoriet, kræfttype i form af Formodet primært organ [Tabel 5. Formodet primært organ (cancertype) i Dansk CancerBiobank], Patientsamtykke til biobank, Transporttemperatur samt Projektoplysninger ved tilknytning til forskningsprojekt (navn på projektet samt evt. projektpatientid). Evt. afvigelser fra nærværende standard operating procedures (fx temperaturændring, apparatursvigt, optøningsepisoder) noteres under Supplerende oplysninger. Registreringsmodulet tildeler hver prøve, materiale og fraktion et unikt ID (Tabel 4.Unikke ID er og etiket til fraktion) Fra registreringsmodulet udskrives etiketter til cryorør/mikrorør til opbevaring af prøver. Af etiketten fremgår FraktionsID (årstal og DCB fortløbende nummer, materiale- og fraktionsnummer, laboratorium Shak), centerafdeling, formodet primært organ, fraktionstype og evt. eksternt prøvenummer (Tabel 4.Unikke ID er og etiket til fraktion). FraktionsID er indeholdt i 2D stregkoden. Det eksterne prøvenummer (valgfrit) kan anvendes til at sikre prøveidentitet ved håndtering af flere prøver på én gang ved at koble en prøve med den medfølgende blodprøveseddel fra Labka/LIMS. DCB BLOD tekniske anbefalinger/21-10-2015 4

Tabel 1.Blod håndtering Prøvetagningsrør Håndtering Fraktioner til opbevaring Opbevaring Vendes ~10 gange 1 EDTA (9 ml) 2 serum rør/ serum-gel (~8 ml) Afpipettering af fuldblod 1 1,5 ml EDTA-fuldblod -20 C eller -80 C Centrifugering: 4 C/RT, 2000g, 10 Afpipettering af plasma 2 2 ml EDTA-plasma -80 C Afpipettering af buffy coat* 1 1,5 ml EDTA-buffy coat* -20 C eller -80 C Koagulation 30 min Centrifugering: 4 C/RT, 2000g, 10 Afpipettering af serum 4 2 ml serum -80 C Tabel 2.Etiketter til fryser Fryser Rack Boks Påsættes bund og låg (2 etiketter udskrives automatisk) Tabel 3.Materiale i DCB registreringsmodul Materiale i DCB Standardsæt, serum-koagel Standardsæt Prøvetagningsrør 1 10 ml EDTA Fraktioner til opbevaring Antal Standardværdier Opbevaring Fuldblod-EDTA 1 - -20 C eller -80 C Plasma-EDTA 2 4 C/RT, 2000g, 10 min -80 C Buffycoat-EDTA 1 4 C/RT, 2000g, 10 min -20 C eller -80 C Koagulering 18 C 4 C/RT, 2000g, 10 min -80 C Fuldblod-EDTA 1 - -20 C eller -80 C Plasma-EDTA 2 4 C/RT, 2000g, 10 min -80 C Buffycoat-EDTA 1 4 C/RT, 2000g, 10 min -20 C eller -80 C Serum 4 Koagulering 18 C 4 C/RT, 2000g, 10 min -80 C 2 ~10 ml serum Serum-koagel 4 1 ~10 ml EDTA 2 ~8 ml serum-gel Tabel 4.Unikke ID er og etiket til fraktion Unikke ID er i DCB registreringsmodul Etiket til fraktion DCB BLOD tekniske anbefalinger/21-10-2015 5

Tabel 5. Formodet primært organ (cancertype) i Dansk CancerBiobank Analregionen Andet Appendix Binyre Blod Blodkar Bronchie og lunge Cervix uteri Colon Corpus uteri Esophagus Galdeveje Hjerte Hud og subcutis Knoglemarv Knogler og led Larynx Lever Lymfeknude og thymus Mamma Milt Mund, læbe og tunge Muskler, sene og bløddele Nervesystem Nyre Næse og bihule Ovarium Pancreas Penis Pharynx Placenta Pleura Prostata Rectum Reuma Spytkirtel Testis Thyreoidea og parathyreoidea Tonsil Tuba Uterina, parametrium Tyndtarm Urinveje og blære Vagina Ventrikel og oment Vulva Øje Øre DCB BLOD tekniske anbefalinger/21-10-2015 6