Identifikation af coliforme bakterier som et nyt redskab til kildesporing

Identifikation af coliforme bakterier som et nyt redskab til kildesporing

Titel: Forfatter: Anden bidragyder URL: Identifikation af coliforme bakterier som et nyt redskab til kildesporing Linda Bagge, By- og Landskabsstyrelsen Trine-Maria Damgaard, Aaron Marc Saunders, Ketil Sørensen og Jan Lorenzen, Center for Kemi- og Vandteknik, Teknologisk Institut www.blst.dk ISBE: 978-87-92548-87-0 ISBN: 978-87-92548-88-7 Udgiver: Udgiverkategori: By- og Landskabsstyrelsen Statslig År: 2009 Sprog: Copyright Forbehold: Dansk Må citeres med kildeangivelse. By- og landskabstyrelsen, Miljøministeriet By- og Landsskabsstyrelsen vil, når lejligheden gives, offentliggøre rapporter inden for miljøsektoren, finansieret af By- og Landskabsstyrelsen. Det skal bemærkes, at en sådan offentliggørelse ikke nødvendigvis betyder, at det pågældende indlæg giver udtryk for By- og Landskabsstyrelsens synspunkter. Offentliggørelsen betyder imidlertid, at By- og Landskabsstyrelsen finder, at indholdet udgør et væsentligt indlæg i debatten omkring den danske miljøpolitik

Indhold FORORD 5 SAMMENFATNING OG KONKLUSIONER 7 1.1 DNA-IDENTIFIKATION ER ET BRUGBART VÆRKTØJ VED COLIFORME FORURENINGER 7 1.1.1 Baggrund og formål 7 1.1.2 Undersøgelsen 7 1.1.3 Hovedkonklusioner 7 1.1.4 Projektresultater 8 SUMMARY AND CONCLUSIONS 9 2 INTRODUKTION 11 2.1 PROJEKTBESKRIVELSE OG FORMÅL 11 2.2 SÅDAN DEFINERES COLIFORME BAKTERIER 11 2.3 SÅDAN KLASSIFICERES BAKTERIER PÅ BAGGRUND AF DNA-ANALYSER 11 2.3.1 Et stamtræ viser, hvordan bakterierne er beslægtede med hinanden 11 3 BESKRIVELSE AF VANDPRØVERNE 13 3.1 BESKRIVELSE AF DE FIRE HOVEDKATEGORIER 13 4 METODER 14 4.1 INDSAMLING AF PRØVER 14 4.2 ISOLERING AF COLIFORME BAKTERIER 14 4.3 DNA-SEKVENTERING 14 4.4 IDENTIFIKATION OG NAVNGIVNING AF BAKTERIERNE 15 5 RESULTATER 16 5.1 RESULTATERNE PRÆSENTERES I TRE AFSNIT 16 5.1.1 Overordnede resultater 16 5.1.2 Mønstre mellem bakteriefylotyper og forureningsgrad 19 5.1.3 Sammenhæng mellem specifikke forureningskilder og fylogrupper 21 6 DISKUSSION 22 6.1 DRIKKEVANDSPRØVERNE AFDÆKKER FOREKOMST OG DIVERSITET AF COLIFORME BAKTERIER I DANSK DRIKKEVAND 22 6.2 COLIFORME BAKTERIER KAN BRUGES TIL AT INDKREDSE FORURENINGSKILDEN OG INDGÅ I EN SUNDHEDSRISIKOVURDERING 22 6.3 DEN SPECIFIKKE FORURENINGSKILDE KAN IKKE UDPEGES ENTYDIGT 23 7 KONKLUSION 24 8 PERSPEKTIVERING 25 8.1 DNA-IDENTIFIKATION AF COLIFORME BAKTERIER ER ET BRUGBART VÆRKTØJ I FORURENINGSSITUATIONER 25 8.2 VÆRKTØJET KAN GØRES HURTIGERE OG ENDNU BEDRE 25 3

Bilag A Bilag B Bilag C Bilag D Bilag E Liste over samtlige prøver (inkl. dubletter) DNA-identifikation og navngivning Oversigt over slægter i Enterobacteriaceae og coliforme afhængig af definition og detektionsmetode Detaljer om vandprøver Liste over deltagende vandforsyninger 4

Forord Projektet er udført af Teknologisk Institut, Center for Kemi- og Vandteknik for By- og Landskabsstyrelsen. Til projektet har der været knyttet en række danske vandforsyninger, uden hvilke det ikke ville have været muligt at indsamle så stort et datasæt. Tak til de mange vandforsyninger, der har deltaget i projektet, og til de laboratorier, der har bidraget ved at videresende de udtagne prøver. 5

6

Sammenfatning og konklusioner 1.1 DNA-identifikation er et brugbart værktøj ved coliforme forureninger Projektet beskriver coliforme bakterier i dansk drikkevand samt hyppigt forekommende coliforme bakterier tilknyttet forskellige forureningsgrader. Samtidig giver resultaterne en forståelse af fordelingen og variationen af coliforme bakterier i miljøet såvel som i forureningskilder, vandværk og ledningsnet. Projektets resultater og metoder kan bruges i forbindelse med coliforme forureninger af drikkevand: som hjælp i afgrænsning og opklaring af en coliform forurening til at indgå i en sundhedsrisikovurdering af en coliform forurening 1.1.1 Baggrund og formål I projektet er fordelingen af coliforme organismer i miljøet relateret til kildesporing i drikkevand blevet undersøgt. Vandprøver fra potentielle forureningskilder, specifikke forureningssager samt positive fund af coliforme bakterier fra deltagende vandforsyningers almindelige drikkevandsovervågning har indgået i undersøgelsen. Formålet med projektet er: At undersøge forekomst af coliforme bakterier i drikkevand og miljøet, hvilke forskellige coliforme bakterier der optræder samtidig (samforekomst) og forskelligheden (diversitet) af de coliforme bakterier i dansk drikkevand. At undersøge værdien af identifikation af coliforme bakterier i forbindelse med kildesporing ved drikkevandsforureninger. Igennem projektet ønskedes frembragt viden, der kan indgå i sundhedsrisikovurderingen ved konstatering af forekomst af coliforme bakterier i dansk drikkevand; en problemstilling, der er blevet mere aktuel siden overgangen til en ny metode til detektion af coliforme bakterier i drikkevandsovervågningen i 2005. 1.1.2 Undersøgelsen Projektet er gennemført af Teknologisk Institut i samarbejde med en række danske vandforsyninger. Der er foretaget identifikation af coliforme bakterier fra forskellige typer af prøver, primært prøver fra den almindelige drikkevandsovervågning, men også fra det omgivende miljø og fra potentielle forureningskilder. Prøverne er i høj grad tilvejebragt gennem de deltagende vandforsyninger og afspejler tilfælde af coliforme fund i årets løb samt de formodninger forsyningerne har om potentielle forureningskilder. 1.1.3 Hovedkonklusioner Forekomst, samforekomst og diversitet af coliforme bakterier forekommende i det danske drikkevand er blevet afdækket. Der er opbygget et betydeligt viden, der i fremtiden vil 7

Coliforme bakterier kan bruges til at indkredse forureningskilden og indgå i en vurdering af hvilke afhjælpende foranstaltninger der bør foretages i det givne tilfælde både til gavn for vandforsyninger og myndigheder.. Ud fra det begrænsede datamateriale og det begrænsede kendskab til årsagen af forureningerne er der ikke grundlag for at konkludere, at en given bakterie stammer fra en specifik forureningskilde, som fx snegle, orm, jord eller overfladevand. 1.1.4 Projektresultater Forurening med coliforme bakterier i drikkevandet er et velkendt problem, som mange vandforsyninger, myndigheder og Sundhedsstyrelsen jævnligt skal forholde sig til. Nærværende projekt har resulteret i et mere solidt datagrundlag end det, der hidtil har været tilgængeligt, hvad angår forurening af drikkevand med coliforme bakterier. Projektet beskriver således, hvilke coliforme bakterier der forefindes i dansk drikkevand, og udpeger tilknytningen af hyppigt forekommende coliforme bakterier til forskellige forureningsgrader. Samtidig giver resultaterne en forståelse af fordelingen og variationen af coliforme bakterier såvel i miljøet som i forureningskilder, vandværk og ledningsnet. Projektets metoder og resultater kan bidrage til: En hurtig og effektiv sporing af kildestedet ved fremtidige fund af coliforme organismer i drikkevand. At opnå en forbedret forståelse af de sundhedsmæssige implikationer af forhøjede coliformtal i drikkevandsprøver. 8

Summary and conclusions 1.2 DNA-identification of bacteria is a useful tool in investigating coliform contaminations This project describes the presence of coliform bacteria in Danish drinking water as well as comparing contamination events of differing degrees. The results provide an understanding of the variety of colifoms and their distribution in the environment as well as in water distribution systems and different potential sources of contaminations. Results and methods obtained in the project are useful in the case of coliform contamination of drinking water: As a tool to contain and rectify a contamination As supplementary information in evaluating the health risk of a coliform contamination 1.2.1 Background and Aim This project investigated the distribution of coliform bacteria in the environment related to source tracking in drinking water. Water samples from potential sources of contamination, specific contamination cases in addition to coliforms detected in the water distributions systems of the project partners, as a part of routine monitoring. The project aimed to: To investigate the diversity of the coliform organisms in Danish drinking water and the cooccurences of coliform bacteria in drinking water and the surrounding environment To evaluate the value of identification of coliforms as a tool in tracking the source of drinking water contaminations. The project was suggested to generate knowledge that is useful in the evaluation of health risk in cases of coliform contamination in Danish drinking water; a subject that has become even more Topical, following the adoption in 2005 of a new standard test method for monitoring the quality of drinking water. 1.2.2 The Investigation The project was conducted by the Danish Technological Institute in cooperation with several Danish water supply utilities. Coliform bacteria isolated from different types of samples have been identified, primarily from the regulatory monitoring programs, but also from the environment and other potential sources of contamination. The samples have primarily been supplied by the project partners and therefore represent the cases of coliform contamination during the project period as well as contamination sources suspected by the partners. 1.2.3 Main conclusions The diversity of coliform bacteria, their frequency of occurrence and co-occurrence has been investigated in Danish drinking water. Knowledge has been obtained, that will make 9

Coliform bacteria can be useful in narrowing in on the source of contamination. The information can be used by water supply utilities and regulators as supplementary data for evaluating which remediative actions should be taken. Due to the limited data and the limited knowledge of the causes of the studied coliform contaminations, it is not possible to conclude if particular coliform bacteria originate from specific sources of contamination e.g. snails, worms, soil or surface water. 1.2.4 Results Contamination of drinking water with coliform bacteria is a known issue that both water supply utilities and environmental and public-health regulators must deal with on a regular basis. This project constitutes the most comprehensive study of the occurrences of coliform bacteria in Danish drinking water to date. The project describes which coliform bacteria are present in the Danish drinking water and that some bacteria are associated with different degrees of contamination. Furthermore, the results describe the distribution and variation of coliform bacteria in the water distribution system, the environment and in other potential sources of contaminations. The methods and results can contribute to: A rapid and effective identification of the location of the contamination source in future cases of coliform contamination. An improved understanding of the health risk associated with coliform contaminations in drinking water. 10

2 Introduktion 2.1 Projektbeskrivelse og formål I projektet er fordelingen af coliforme organismer i miljøet relateret til kildesporing i drikkevand undersøgt. Vandprøver fra potentielle forureningskilder, specifikke forureningssager samt positive fund af coliforme bakterier fra deltagende vandforsyningers almindelige drikkevandsovervågning er indgået i undersøgelsen. Formålet med projektet er: At undersøge forekomst, samforekomst og diversitet af coliforme bakterier i dansk drikkevand. At undersøge værdien af identifikation af coliforme bakterier i forbindelse med kildesporing ved drikkevandsforureninger. 2.2 Sådan defineres coliforme bakterier Coliforme bakterier er en undergruppe af enterobakterierne. Coliforme bakterier bliver traditionelt bestemt ud fra forskellige vækstfysiologiske parametre, som afhænger af, hvilken metode de detekteres med. Den tidligere anvendte metode DS 2255 detekterer bakterier, som producerer syre og gas under fermentering af laktose - den tidligere definition af coliforme bakterier. Den nyere metode (colilert-metoden) detekterer direkte på det aktive enzym, β-galaktosidase, som coliforme bakterier skal have for at kunne fermentere laktose. Bilag C opsummerer, hvilke bakterieslægter der detekteres med de forskellige metoder, samt hvilke enterobakterier der ikke hører til de coliforme bakterier. I nærværende undersøgelse er anvendt definitionen efter den nye metode med den ene undtagelse, at de i undersøgelsen identificerede Raoultella-grupper medregnes i de coliforme bakterier, idet de er testet positive for β-galaktosidase. 2.3 Sådan klassificeres bakterier på baggrund af DNA-analyser Moderne teknikker til identifikation af bakterier baseres i stigende grad på sammenligning af DNA, hvilket giver en meget præcis karakterisering. Der er anvendt DNA-metoder i denne undersøgelse. Når en bakteries DNA-analyseres, er resultatet en række bogstaver - en såkaldt DNA-sekvens - som er karakteristisk for netop denne bakterieart. Ved at sammenligne flere bakteriers DNAsekvenser kan det fastslås, om bakterierne er af samme slags, om de er beslægtet med nogle kendte bakterier, og hvor beslægtede de er med hinanden og andre bakterier. Forskellige bakteriers indbyrdes slægtskab kan analyseres og fremstilles grafisk i et stamtræ. 2.3.1 Et stamtræ viser, hvordan bakterierne er beslægtede med hinanden Baseret på ensartetheden af DNA-sekvenserne kan man konstruere et stamtræ (fylogenetisk træ), der illustrerer slægtskabet imellem forskellige organismer jo tættere beslægtede to bakteriestammer er, des tættere er de på hinanden i stamtræet. Resultaterne af DNAidentifikationen i denne undersøgelse præsenteres på fylogruppeniveau (se metodeafsnittet). I Figur 2.1er vist et sådant stamtræ, der illustrerer slægtskabet mellem de væsentligste af de forskellige fylogrupper af coliforme bakterier og ikke-coliforme bakterier, som er blevet isoleret og identificeret fra colilert-medie. 11

12 Figur 2.1 Et fylogenetisk træ, der illustrerer slægtskabet mellem forskellige fylogrupper af coliforme og ikkecoliforme bakterier. Træet er konstrueret således, at længden af stregerne, der adskiller de enkelte arter, svarer til den genetiske forskel. Genetisk afstand mellem grupperne kan sammenlignes ved at måle længden af linjerne mellem grupperne. Målestokken viser 0,1 % variation i 16S rrna gensekvensen. Forklaringer på forkortelser, E. kobei: Enterobacter kobei; P. aggl.: Pantoea agglomerans; K. oxy.: Klebsiella oxytoca; R. terrig. Raoultella terrigena; R. planti: Raoultella plantiocola; fg: fylogruppe.

3 Beskrivelse af vandprøverne I denne undersøgelse indgår vandprøver af forskellig slags. De er i høj grad tilvejebragt gennem de deltagende vandforsyninger og afspejler de tilfælde, der har været af coliforme fund i drikkevand i årets løb, samt de formodninger forsyningerne har om potentielle forureningskilder. Det er valgt at inddele prøverne i fire hovedkategorier. Dette overskueliggør datasættet og besvarer projektets formål bedst muligt inden for de givne rammer. De 4 kategorier beskrives nedenfor. 3.1 Beskrivelse af de fire hovedkategorier Drikkevandsprøverne er inddelt i tre kategorier, der afspejler forureningsgraden af prøven. De øvrige prøver er blevet poolet i én kategori for sig. De fire kategorier er nærmere defineret som følger: < 20 Vandprøver fra det almindelige drikkevandssystem med færre end 20 coliforme bakterier MPN pr. 100 ml. > 20 Vandprøver fra det almindelige drikkevandssystem med flere end 20 coliforme bakterier MPN pr. 100 ml. E. coli Vandprøver fra det almindelige drikkevandssystem, hvor der ud over coliforme bakterier er E. coli, uanset det målte antal af colifome bakterier. I disse prøver er der en begrundet mistanke om forurening med spildevand og tilsvarende sundhedsrisiko. Miljøprøve Prøver som ikke stammer fra det almindelige drikkevandssystem, men fra det omgivende miljø. Denne kategori rummer mange forskellige slags prøver for eksempel jord, spildevand og udskylninger fra nye vandledninger. Ud over de fire hovedkategorier er hver prøve fra drikkevandssystemet mærket med en underkategori, som beskriver det sted i vandforsyningen, hvor prøven er udtaget. Denne kategori er medtaget i databasen og fremgår af Bilag A, men behandles ikke yderligere i denne rapport. 13

4 Metoder I dette afsnit beskrives de anvendte metoder kort. I bilag B kan man læse mere om metoderne. 4.1 Indsamling af prøver 37 danske vandforsyninger har indsendt positive colilert-quantitrayplader fra den almindelige drikkevandsovervågning. Disse prøver blev sendt fra forsyningernes normale analyselaboratorier til Teknologisk Institut 1-7 dage efter endt colilert-analyse. Miljøprøverne blev modtaget direkte fra vandforsyningerne eller udtaget af Teknologisk Institut, hvorefter colilert-analysen blev foretaget kvalitativt. Alle prøverne blev fortløbende nummereret (CID1-CID454) og taget i arbejde til yderligere analyser. Desuden indgår prøver fra tidligere projekter om samme emne 1. I alt indgår der prøver fra 53 vandforsyninger. En liste over samtlige prøver fremgår af Bilag A. En liste over de deltagende vandforsyninger fremgår af Bilag E. 4.2 Isolering af coliforme bakterier De bakterier, der er blevet isoleret og identificeret fra vand- og miljøprøverne, blev først beriget i et selektivt vækstmedium ved colilert-analysen. Derefter er berigelseskulturen (den gule væske) strøget ud og inkuberet på agarplader ved 35 C. Fra agarpladerne er velafgrænsede kolonier (isolater) blevet videreanalyseret. De enkelte isolater er nummereret med prøvenummer efterfulgt af a, b, c osv. Isolaterne blev derefter identificeret ud fra deres DNA-sekvenser. Ikke alle de identificerede bakterier viste sig at være coliforme bakterier, men alle er vokset op i colilert-mediet. For detaljer om metoden, se Bilag B. 4.3 DNA-sekventering DNA er bakteriernes arvemateriale. Det er et meget stort molekyle, som består af en lang række små enheder, såkaldte nukleotider. Der findes fire forskellige nukleotider, og disse kan kombineres på et uendeligt antal måder i et DNA-molekyle, meget lig med forskelligt farvede perler på en snor. Rækkefølgen af de forskellige nukleotider er unik for hver enkelt bakterieart, og den kan analyseres ved såkaldt DNA-sekventering. For hvert isolat blev DNA-sekvensen af genet for 16S ribosomalt RNA (16S rrna) fastlagt, hvilket er den moderne standard for klassifikation af bakterier, da dette gen findes i alle bakterier og er relativt konserveret (genet er kun lidt ændret på trods af evolution). DNA-sekvensen af 16S rrna-genet varierer typisk med et par procent inden for en slægt og betydeligt mindre inden for enkelte arter. 1 DNA-identifikation af colilert-positive bakterier i det danske drikkevand. 2008. En undersøgelse udført af Teknologisk Institut, Kemiog Vandteknik i samarbejde med By- og Landskabsstyrelsen og en række danske vandforsyninger af Trine-Maria Damgaard, Ketil Sørensen, Aaron M. Saunders og Jan Lorenzen. 14

4.4 Identifikation og navngivning af bakterierne Fylogrupper er det begreb, der anvendes til navngivning og klassifikation af bakterier i denne undersøgelse i andre sammenhænge og i daglig tale bruges begrebet art. Det er dog værd at bemærke, at det klassiske artsbegreb, som vi bruger om for eksempel pattedyr og fugle, strengt taget ikke giver mening inden for bakteriologien, hvorfor vi anvender begrebet fylotype i denne rapport. For yderligere information om DNA-identifikation og navngivning, se Bilag B. En fylogruppe er en gruppe af meget tæt beslægtede bakterier. Navnet på fylogruppen er det samme som navnet på en af de velbeskrevne bakterier, der tilhører gruppen. Sådan et navn består af et slægtsnavn efterfulgt af et arts -navn for eksempel Escherichia coli eller Citrobacter freundii. Inden for en fylogruppe kan det uden problemer lade sig gøre at skelne yderligere mellem bakterierne, så de også får tildelt en typebetegnelse eller et nummer, som for eksempel Escherichia coli 157, Salmonella dt 104, men når det drejer sig om at klarlægge hyppighedsmønstre, som det er tilfældet i denne undersøgelse, giver det ikke mening at underinddele yderligere, da det vil udviske de mere overordnede mønstre, som netop ønskes belyst. Dog kan der med den anvendte metode godt skelnes yderligere imellem bakterierne, og dette kan vise sig relevant i konkrete tilfælde af drikkevandsforureninger eller ved sygdomstilfælde, hvor man vil fastslå, om sygdommen har en forbindelse med bakterier i drikkevandet. 15

5 Resultater 5.1 Resultaterne præsenteres i tre afsnit Resultaterne af undersøgelsen er inddelt i tre afsnit. Et afsnit, der overordnet beskriver, hvilke bakterier der er blevet fundet i hvilke prøver, hyppighederne af de identificerede bakteriefylogrupper og samforekomst imellem dem. Dernæst følger et afsnit, der fokuserer på at beskrive forskelle relateret til forureningsgraden. Slutteligt følger et kort afsnit, der beskriver de resultater, der er forbundet med specifikke forureningskilder som jord, spildevand og dyr. 5.1.1 Overordnede resultater 5.1.1.1 Sådan er fordelingen af prøver og isolater på de fire prøvekategorier Det samlede prøvemateriale, som indgår i undersøgelsen, består af i alt 438 vandprøver. Herfra blev der identificeret 965 bakterieisolater (Tabel 5.1). I nogle tilfælde blev der identificeret flere isolater fra den samme prøve (2,1 per prøve i gennemsnit). Nogle af disse isolater fra den samme prøve viste sig efter endt analyse at være identiske. Sådanne dubletter indgår ikke i den videre analyse af data. Samtlige isolater inklusive dubletterne fremgår dog af Bilag A. En oversigt over de fundne prøver og isolater ses i Tabel 5.2. Tabel 5.1 Antallet af prøver og identificerede isolater for hver prøvekategori, før og efter at datasættet er renset for dubletter. Prøvekategori < 20 > 20 E. coli Miljøprøve I alt Antal prøver 304 29 28 77 438 Antal isolater 575 80 72 238 965 Antal isolater u. dubletter 401 50 67 137 655 - coliforme isolater 350 43 52 106 551 - ikke-coliforme isolater 51 7 15 31 104 Langt størsteparten (ca. 70 %) af prøverne indeholdt færre end 20 coliforme bakterier per 100 ml. Den gennemsnitlige koncentration af coliforme bakterier i disse prøver var ca. 2 MPN/ 100 ml, og mange havde kun en enkelt coliform pr. 100 ml. Prøver af kategorierne > 20 og E. coli udgjorde hver ca. 7 % af det samlede antal prøver. Det gennemsnitlige coliformniveau var ens for begge disse to prøvekategorier, omkring 60 coliforme pr. 100 ml. I de ca. 18 % af prøverne, som var miljøprøver, er der oftest kun foretaget en kvalitativ colilertanalyse, og derfor kendes koncentrationen af coliforme bakterier ikke. Miljøprøverne er taget fra vidt forskellige miljøer, fx jord, spildevand og udskyl fra vandledninger. Detaljerne om, hvor disse prøver stammer fra, er vedhæftet (Bilag D). 5.1.1.2 34 forskellige bakteriefylogrupper Samlet set blev der i undersøgelsen identificeret bakterier fra 34 forskellige fylogrupper, heraf 25 fylogrupper af coliforme og 9 fylogrupper af ikke-coliforme grupper. Hyppigheden af fund af hver fylogruppe var meget forskellig (Tabel 5.2). For eksempel var Buttiauxella agrestis den mest hyppige fylogruppe fundet i 168 af prøverne (37 %), mens andre fylogrupper kun blev fundet en enkelt gang. I den senere databearbejdning har vi valgt ikke at medtage de fylogrupper, som blev fundet i færre end 5 prøver (< 1 % af prøverne). Derved reduceres listen til 17 coliforme fylogrupper og 6 ikke-coliforme fylogrupper. 16

Tabel 5.2 Antallet af prøver, hvori hver af fylogrupperne blev fundet; totalt set og fordelt på hver prøvekategori. De ikke-coliforme grupper er markeret med gult. Prøvekategori Fylogruppe <20 >20 E. coli Miljøprøve I alt* Buttiauxella agrestis** 131 15 4 18 168 Serratia fonticola 47 2 5 54 Citrobacter freundii 19 7 4 18 48 Enterobacter amnigenus 24 4 4 15 47 Serratia proteoamaculans 39 1 1 3 44 E. Coli 26 18 44 Klebsiella oxytoca 15 1 3 4 23 Cedecea phylotype nn** 12 4 1 17 Kluyvera cochleae** 11 1 3 15 Enterobacter kobei 5 2 3 5 15 Raoultella plantiocola** 4 2 4 2 12 Raoultella terrigena** 6 1 1 4 12 Yersinia phylotype nn 2 2 5 9 Pantoea agglomerans** 9 9 Yersinia frederiksenii 4 2 6 Enterobacter hormaechei 4 2 6 Rahnella aquatilis** 6 6 Serratia marcescens 4 4 Erwinia amylovora** 2 1 3 Yersinia intermedia 2 1 3 Klebsiella pneumoniae 1 1 2 Hafnia alvei 1 1 Moellerella wisconsensis** 1 1 Yersinia mollaratii 1 1 Yokenella regensburgei** 1 1 Pseudomonas sp. 22 3 7 16 48 Aeromonas hydrophila 8 4 12 Providencia stuartii 4 4 4 12 Acinetobacter sp. 5 4 9 Shewanella putrefaciens 5 3 1 9 Acidovorax 4 2 6 Morganella morganii 2 1 3 Stenotrophomonas sp. 2 1 3 Brevundimonas diminuta 1 1 2 Total 401 50 67 137 655 * Der blev identificeret i gennemsnit 2,1 isolater per prøve, og kolonnen summerer dermed ikke til det totale antal prøver, men det totale antal isolater. ** Angiver, hvilke fylogrupper der ikke kan detekteres med den gamle metode DS2266. Det kan konstateres, at ca. halvdelen (51 %) af de identificerede coliforme bakterier ikke ville være blevet detekteret med den tidligere anvendte metode, jf. bilag C. 5.1.1.3 Hyppigheden af bakterierne hænger sammen med prøvekategorien Nedenfor ses et billede af, hvor hyppigt de identificerede coliforme bakterier er fundet i prøver fra hver af de fire prøvekategorier. 17

50% 45% 40% 35% 30% 25% 20% 15% 10% 5% 0% <20 >20 E. coli miljøprøve Buttiauxella agrestis Serratia fonticola Citrobacter freundii Enterobacter amnigenus Serratia proteoamaculans Klebsiella oxytoca Cedecea phylotype nn Enterobacter kobei Kluyvera cochleae Raoultella plantiocola Raoultella terrigena Pantoea agglomerans Yersinia phylotype nn Enterobacter hormaechei Rahnella aquatilis Yersinia frederiksenii E. Coli Tabel 5.3 Forekomst af de coliforme fylogrupper i hver af de fire prøvekategorier, angivet som procent af prøver, som indeholdte denne gruppe. Figuren er fremstillet således, at hver af fylogrupperne præsenteres med hver sin farve. Højden på søjlen svarer til den %-vise del af prøverne, hvori bakterien er fundet. Da der er forskel på højden af søjlerne for de enkelte fylogrupper afhængig af prøvekategori, kan der derfor konstateres en vis sammenhæng mellem hyppigheden af forekomsten og prøvekategorien. For eksempel er Buttiauxella agrestis fundet i ca. 40 % af prøverne fra kategorien < 20, og E. coli er selvsagt fundet i 100 % af prøverne i kategorien E. coli. Antallet af observationer for hver bakteriefylotype samt prøvekategori fremgår af Tabel 5.1 og Tabel 5.2. 5.1.1.4 Nogle bakteriefylogrupper forekommer hyppigere sammen end andre Projektet vil identificere mønstre i samforekomst af bakterier, altså om nogle bakterier optræder samtidig i prøverne (Tabel 5.4). Buttiauxella agrestis, Pseudomonas sp., Citrobacter freundii, E. coli og Enterobacter amnigenus er de 5 fylogrupper, der oftest er fundet sammen men andre fylogrupper. For eksempel er Buttiauxella agrestis fundet sammen med 11 andre i 75 prøver, Citrobacter freundii er fundet sammen med 10 andre grupper i i alt 63 prøver, og E. coli er fundet sammen med 10 andre i 66 prøver. De hyppigst optrædende par er Buttiauxella agrestis+ Pseudomonas sp. (17 prøver), Buttiauxella agrestis + Enterobacter amnigenus (14 prøver), Pseudomonas sp + E. coli (14 prøver), Buttiauxella agrestis + Citrobacter freundii (12 prøver), Citrobacter freundii + E. coli (12 prøver). 18

Tabel 5.4 Samforekomst af bakteriefylogrupper, der optræder sammen i mindst tre prøver. Samforekomst Buttiauxella agrestis Raoultella plantiocola Raoultella terrigena Serratia fonticola Enterobacter kobei Buttiauxella agrestis 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Raoultella plantiocola 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Raoultella terrigena 3 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Serratia fonticola 4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Enterobacter kobei 3 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Klebsiella oxytoca 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Serratia proteoamaculans 7 0 0 2 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Pantoea agglomerans 3 0 0 2 0 1 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 E. Coli 8 4 2 1 6 3 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Enterobacter amnigenus 14 2 5 1 1 1 4 1 7 0 0 0 0 0 0 0 Enterobacter hormaechei 1 0 0 0 1 0 0 0 3 0 0 0 0 0 0 0 Citrobacter freundii 12 3 3 3 2 4 5 0 12 7 2 0 0 0 0 0 Pseudomonas sp. 17 2 2 4 4 2 2 1 14 10 0 10 0 0 0 0 Cedecea phylotype nn 9 0 2 4 0 0 4 0 1 3 0 2 4 0 0 0 Shewanella putrefaciens 2 0 1 0 1 0 0 0 1 3 0 0 3 1 0 0 Providencia stuartii 2 0 1 1 0 2 0 0 6 0 0 4 1 0 0 0 Klebsiella oxytoca Serratia proteoamaculans Pantoea agglomerans E. Coli Enterobacter amnigenus Enterobacter hormaechei Citrobacter freundii Pseudomonas sp. Cedecea phylotype nn Shewanella putrefaciens Providencia stuartii 5.1.2 Mønstre mellem bakteriefylotyper og forureningsgrad Tilstedeværelsen af nogle coliforme bakterier hænger sammen med forureningsgraden af prøven, hvilket illustreres i det følgende. De fire kategorier afspejler forureningsgraden af prøven, som omtalt i afsnit 2.1. Der er 7 af de coliforme fylogrupper, som i nogen grad synes at hænge sammen med prøvekategorien. Data for disse 7 fylogrupper er fremstillet i Figur 5.1, hvor hver søjle angiver, hvor stor en del af prøverne i den pågældende kategori bakterien er fundet i. For eksempel er Serratia fonticola hyppigere identificeret fra prøver i kategorien < 20 end i de tre øvrige kategorier. Modsvarende er for eksempel Citrobacter freundii mindre hyppig i kategorien < 20 end i de tre øvrige kategorier. 19

50% 40% 30% <20 >20 E. coli miljøprøve 20% 10% 0% Serratia fonticola Serratia proteoamaculans Buttiauxella agrestis Citrobacter freundii Enterobacter amnigenus Klebsiella oxytoca Raoultella plantiocola Overrepræsenteret i mindst forurenede prøver Overrepræsenteret i alvorligt forurenede prøver Figur 5.2 De coliforme fylogrupper, som viste tydeligst mønster af hyppighed i de 4 prøvekategorier. < 20 er de mindst forurenede prøver, dernæst kommer > 20 og prøver med E. coli. Miljøprøverne kan ikke direkte indsættes på denne forureningsgradsskala. Tilsvarende ses der også en sammenhæng mellem ikke-coliforme fylogrupper og forureningsgraden. Sammenhængen for de to tydeligste fylogrupper er vist i Figur 5.3. 25% 20% <20 >20 E. coli miljøprøve 15% 10% 5% 0% Pseudomonas sp. Providencia stuartii Figur 5.3 2 fylogrupper af ikke-coliforme bakterier, der er overrepræsenteret i de mest forurenede prøver. Her ses en endnu tydeligere sammenhæng mellem forureningsgraden og tilstedeværelsen af visse fylogrupper, hvor de ikke-coliforme bakterier er hyppigst i de mest forurenede prøver. Generelt kan det siges, at des mere forurenet en prøve er, jo hyppigere kan der isoleres ikke-coliforme bakterier fra prøven. Hvis man sammenholder data præsenteret i Tabel 5.4 og data i Figur 5.2 og Figur 5.3, ses det, at de grupper, der hyppigt optræder i de mest forurenede prøver, i nogen grad er de samme som dem, der er samforekommende med andre grupper. Dette kan hænge sammen med, at diversiteten af bakterier i en prøve forventeligt hænger sammen med antallet af bakterier i prøven, som igen hænger sammen med forureningsgraden. 20

5.1.3 Sammenhæng mellem specifikke forureningskilder og fylogrupper Der er i projektets løbetid blevet analyseret mange forskellige prøver fra potentielle forureningskilder i miljøet, dels prøver der er indsendt af de deltagende forsyninger, dels prøver der er udtaget af Teknologisk Institut. Disse prøver er i databehandlingen blevet poolet til en fælles kategori kaldet miljøprøver. Denne kategori er derfor meget divers og indeholder bl.a. boremudder, spildevand og jord samt orm og snegle fanget i sandfiltre og andre steder. Der er desværre ikke prøvemateriale nok for hver af de specifikke forureningskilder i datasættet til at konkludere noget om de bakterier, der er associeret med hver af disse specifikke forureningskilder. For at opnå dette kræves en del flere prøver af samme slags. Flere detaljer om, hvilke fylogrupper der er fundet i de forskellige miljøprøver fremgår af tabellen i Bilag D. 21

6 Diskussion Projektets formål var at afdække forekomst, samforekomst og diversitet af de coliforme bakterier i dansk drikkevand og at undersøge værdien af identifikation af coliforme bakterier i forbindelse med kildesporing. 6.1 Drikkevandsprøverne afdækker forekomst og diversitet af coliforme bakterier i dansk drikkevand Et stort antal forsyninger er med i undersøgelsen og synes at dække det danske drikkevand repræsentativt. Større vandforsyninger er dog bedre repræsenteret end de mindre og helt små vandforsyninger. Samlet set er der dog tale om et godt udsnit. Hvad angår de tre kategorier af drikkevand < 20, > 20 og E. coli må materialet derfor siges at være repræsentativt for det danske drikkevand, idet der i projektet er indgået hovedparten af de positive colilert-prøver, der har været i årets løb. Nærværende projekt har tilvejebragt en stor viden ud fra et meget stort prøvemateriale, som i høj grad beskriver både forekomst, samforekomst og diversitet af de coliforme bakterier i det danske drikkevand samt andre grupper af bakterier, som også vokser op i colilert-analysen. Den første del af formålet er dermed stort set opfyldt. Analysemetoden til bestemmelse af coliforme bakterier i drikkevand blev per 1. maj 2005 ændret fra DS 2255 til colilert-analysemetoden 2. Resultaterne i denne undersøgelse peger på, at stigningen i antallet af positive coliforme fund siden ændringen skyldes dette metodeskifte, idet ca. halvdelen (51 %) af de identificerede bakterier ikke ville være blevet detekteret med den tidligere anvendte metode jf. Bilag C. Datasættet rummer desuden mange detaljer, som ikke er vurderet i nærværende rapport. Den valgte inddeling i 4 prøvekategorier er en arbitrær operativ inddeling, som afspejler forureningsgraden af prøverne og samtidig fremstiller data rimeligt overskueligt. Denne inddeling kunne have været mere nuanceret, så man for eksempel undersøgte nærmere, hvilke bakterier der findes i prøver med meget få (fx >3) coliforme pr. 100 ml. 6.2 Coliforme bakterier kan bruges til at indkredse forureningskilden og indgå i en sundhedsrisikovurdering DNA-identifikation gør det muligt at identificere og genfinde bakterier med stor nøjagtighed. Hermed kan én forurening afgrænses og skelnes fra en eventuel anden i både tid og sted. Dette kan være til stor hjælp for vandforsyningerne, når en forurening varer ved eller i de mange tilfælde, hvor der hyppigt dukker et lavt antal coliforme bakterier op i drikkevandet. Der er i datasættet grundlag for at konkludere, at visse bakterier er hyppigere i miljøprøverne end i drikkevandssystemet, og ligeledes er der grundlag for at kunne konkludere, at visse bakterier er hyppigere i alvorlige forureninger end i de mindre alvorlige forureninger. Hermed kan det bruges 2 Miljøprojekt nr. 1162, 2007 Vurdering af metodeskifte for coliforme bakterier i drikkevand kan der læses mere om metodeskiftet 22

som supplerende information i forbindelse med den sundhedsrisikovurdering, der foretages ved de alvorlige forureninger. 6.3 Den specifikke forureningskilde kan ikke udpeges entydigt Datasættet indeholder kun relativt få miljøprøver af meget forskellig slags (Bilag D). Den opnåede viden om miljøprøverne i dette projekt skal derfor betragtes som en screening. Resultaterne tillader ikke at sammenkoble bestemte bakterier med specifikke forureningskilder som fx snegle, orm, jord og spildevand. For at få et nærmere kendskab til sammenhængen mellem specifikke forureningskilder og forekomsten af bestemte bakterier bør der i fremtiden fokuseres på enkelte forureningssager, som studeres indgående og enkelte specifikke forureningskilder som ligeledes studeres indgående og i stort antal. 23

7 Konklusion Forekomst, samforekomst og diversitet af coliforme bakterier forekommende i det danske drikkevand er blevet afdækket. De identificerede coliforme bakterier tilhører 17 forskellige fylogrupper af coliforme bakterier. Der er opbygget et betydeligt datasæt, der i fremtiden vil muliggøre en hurtig og sikker identifikation af coliforme bakterier i drikkevandssystemet. De hyppigste fylogrupper af coliforme bakterier i drikkevandsprøverne er Buttiauxella agrestis (40 %), Serratia fonticola (13 %) og Serratia proteoamaculans (11 %). De hyppigste fylogrupper af coliforme bakterier i miljøprøverne var Buttiauxella agrestis (13 %), E. coli (13 %) og Citrobacter freundii (13 %). Cirka halvdelen af de fundne bakterier, bl.a. Buttiauxella, vil ikke kunne detekteres med den tidligere anvendte metode DS 2255. Disse resultater støtter hypotesen om, at den øgede frekvens af coliform-positive prøver i den danske drikkevandskontrol skyldes metodeskiftet og ikke en øget frekvens af drikkevandskontaminering. Coliforme bakterier kan bruges til at indkredse forureningskilden og indgå i en sundhedsrisikovurdering. DNA-identifikation gør det muligt at identificere og genfinde bakterier med stor nøjagtighed. Hermed kan en forurening afgrænses og skelnes fra en anden i både tid og sted. Visse bakterier er hyppigere i alvorlige forureninger end i knap så alvorlige forureninger. I alvorligt forurenede prøver er Citrobacter freundii (9 %), Enterobacter amnigenus (7 %), Klebsiella oxytoca (4 %), Raoultella plantiocola (5 %) og ikke-coliforme bakterier (19 %) hyppigere end i de mindre alvorligt forurenede prøver. I miljøprøver er Citrobacter freundii (13 %), E. coli (13 %), Enterobacter amnigenus (11 %), og ikke-coliforme bakterier (23 %) hyppigere end i de mindst alvorligt forurenede prøver. I de mindst forurenede prøver er Serratia fonticola (12 %) og Serratia proteoamaculans (10 %) mere hyppige end i alvorlige forureninger. Den specifikke forureningskilde kan endnu ikke udpeges Der er i datamaterialet ikke grundlag for at konkludere, at en given bakterie stammer fra en specifik forureningskilde som fx snegle, orm, jord eller overfladevand. 24

8 Perspektivering 8.1 DNA-identifikation af coliforme bakterier er et brugbart værktøj i forureningssituationer Hypotesen i denne undersøgelse var, at specifikke bakteriegrupper er associeret til bestemte forureningskilder, og at DNA-identifikationen på den måde kunne bruges operationelt til at spore den specifikke kilde til en coliform-forurening. På trods af, at resultaterne ikke direkte kan bruges til at udpege den specifikke forureningskilde ved en forurening med coliforme bakterier, er DNA-analyse et meget brugbart værktøj i forureningssituationer både for vandforsyningerne og for embedslægeinstitutionen. Der har været et par forureningssager, hvor DNA-identifikationen har været brugt til at indkredse problemet i forsyningsnettet og/eller til at sammenkoble forurening med forureningskilde. For eksempel har metoden i et tilfælde kunnet indkredse forureningskilden til at være børsteorm i et filter. I et andet tilfælde kunne metoden indsnævre forureningen til et bestemt område af forsyningsnettet, som så kunne undersøges nærmere og afkobles. Og i et tredje tilfælde har metoden kunnet påvise sammenhæng mellem flere på hinanden forekommende forureningen i løbet af året. Det kan således opsummerende konstateres, at projektets resultater kan bruges: Som hjælp i afgrænsning, identificering og opklaring af en coliform forurening. Til at indgå i en vurdering af hvilke afhjælpende foranstaltninger der skal iværksættes. 8.2 Værktøjet kan gøres hurtigere og endnu bedre Der er forskellige måder, hvorpå man kan optimere metoderne, sådan at vandforsyninger og myndigheder kan få et endnu bedre værktøj. 1. Dels vil det gavne at udbygge vores viden endnu mere - specielt med prøver fra forureninger, hvor der er E. coli samt forureninger, hvor den specifikke forureningskilde er kendt. Jo flere oplysninger vi får om de enkelte forureningskilder, des bedre vil vi stå i opklaring, vurdering og afhjælpning af en forureningssag. 2. Dels kan metoden gøres hurtigere således at vandforsyning og myndigheder hurtigere kan få et resultat. 3. Og endelig kan en optimering af metoden give et mere fuldstændigt billede af, hvilke coliforme bakterier en prøve rummer. 25

Bilag A Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID1a 4 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID1b 4 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID2 4 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID3 3 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID4 2 Nej < 20 Forbruger Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID5 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID6 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID7 1 Nej < 20 Filterafgang Buttiauxella agrestis Coliform CID8a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Raoultella plantiocola Coliform CID8b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Acinetobacter sp. Ikke Coliform CID9 1 Nej < 20 Ledningsnet Raoultella terrigena Coliform CID10 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID11 2 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID12 2 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID13 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID15 1 Nej < 20 Filterafgang Buttiauxella agrestis Coliform CID16 1 Nej < 20 Filterafgang Buttiauxella agrestis Coliform CID17 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID18 3 Nej < 20 Råvand Serratia fonticola Coliform CID19a 5 Nej Miljøprøve Udskylning Kluyvera cochleae Coliform CID19b 5 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter kobei Coliform CID20 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID21a 0,014 Nej < 20 Ledningsnet Raoultella plantiocola Coliform CID21b 0,014 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID22 4 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID23 1 Nej < 20 Afgang vandværk Klebsiella oxytoca Coliform CID24a 36 Nej > 20 Filterafgang Buttiauxella agrestis Coliform CID24b 36 Nej > 20 Filterafgang Buttiauxella agrestis Coliform CID25 7 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID26 1 Nej < 20 Filterafgang Buttiauxella agrestis Coliform CID27 7 Nej < 20 Filterafgang Buttiauxella agrestis Coliform CID28 2 Nej < 20 Filterafgang Klebsiella oxytoca Coliform CID29 1 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID30 0,19 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID31 1 Nej < 20 Forbruger Raoultella terrigena Coliform CID32 15 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID34 0,02347 Nej < 20 Afgang vandværk Klebsiella oxytoca Coliform CID35 3 Nej Miljøprøve Udskylning Yersinia frederiksenii Coliform CID37 5 Nej < 20 Råvand Buttiauxella agrestis Coliform CID39 5 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID40 4 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID41a 10 Nej < 20 Indgang ejendom Raoultella terrigena Coliform CID41b 10 Nej < 20 Indgang ejendom Buttiauxella agrestis Coliform CID42 11 Nej < 20 Indgang ejendom Serratia fonticola Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID43 3 Nej < 20 Beholder Klebsiella oxytoca Coliform CID44 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID45 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID46a 9 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID46b 9 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID46c 9 Nej < 20 Afgang vandværk Pantoea agglomerans Coliform CID47 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID48a 2 Nej Miljøprøve Udskylning Raoultella terrigena Coliform CID48b 2 Nej Miljøprøve Udskylning Buttiauxella agrestis Coliform CID51a 200 Nej > 20 Råvand Buttiauxella agrestis Coliform CID51b 200 Nej > 20 Råvand Buttiauxella agrestis Coliform CID52a 1 Nej < 20 Andet Yersinia phylotype nn Coliform CID52b 1 Nej < 20 Andet Yersinia phylotype nn Coliform CID54 1 Nej < 20 Forbruger Serratia fonticola Coliform CID56a 0,011 Nej < 20 Afgang vandværk Acinetobacter sp. Ikke Coliform CID56b 0,011 Nej < 20 Afgang vandværk Kluyvera cochleae Coliform CID57a 1 Nej < 20 Andet Yersinia phylotype nn Coliform CID57b 1 Nej < 20 Andet Yersinia phylotype nn Coliform CID58 1 Nej < 20 Råvand Buttiauxella agrestis Coliform CID59 1 Nej < 20 Ledningsnet Klebsiella oxytoca Coliform CID60 2 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID61 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia proteoamaculans Coliform CID62a 200 ja E. coli Forbruger Morganella morganii Ikke Coliform CID62b 200 ja E. coli Forbruger E. Coli Coliform CID63 1 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID65 1 Nej < 20 Ledningsnet Klebsiella oxytoca Coliform CID66 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID67 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID68a 0,01 Nej < 20 Afgang vandværk Acinetobacter sp. Ikke Coliform CID68b 0,01 Nej < 20 Afgang vandværk Acinetobacter sp. Ikke Coliform CID69 2 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID70 2 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID71a 22 Nej > 20 Afgang vandværk Raoultella plantiocola Coliform CID71b 22 Nej > 20 Afgang vandværk Enterobacter amnigenus Coliform CID71c 22 Nej > 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID72 0,009921 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID73 1 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID74 2 Nej < 20 Forbruger Enterobacter hormaechei Coliform CID76 1 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID77 1 Nej < 20 Forbruger Klebsiella oxytoca Coliform CID78 178,2 Nej > 20 Råvand Enterobacter kobei Coliform CID79a 2000 Nej > 20 Andet Yersinia phylotype nn Coliform CID79b 2000 Nej > 20 Andet Yersinia phylotype nn Coliform CID80a 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID80b 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID81 6 Nej Miljøprøve Udskylning Citrobacter freundii Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID83 14 Nej Miljøprøve Udskylning Klebsiella oxytoca Coliform CID87 0,001075 Nej < 20 Afgang vandværk Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID88 4 Nej < 20 Råvand Rahnella aquatilis Coliform CID89a 1 Nej < 20 Forbruger Serratia fonticola Coliform CID89b 1 Nej < 20 Forbruger Serratia fonticola Coliform CID90 2 Nej < 20 Ledningsnet Yersinia frederiksenii Coliform CID91 4 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID92 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID93 4 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID94 9 Nej Miljøprøve Udskylning Buttiauxella agrestis Coliform CID95 7 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID96 0,00248 Nej < 20 Afgang vandværk Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID97 78 Nej > 20 Ledningsnet Kluyvera cochleae Coliform CID99a 0,00397 Nej < 20 Afgang vandværk Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID99b 0,00397 Nej < 20 Afgang vandværk Enterobacter kobei Coliform CID100 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID101 1 Nej < 20 Beholder Citrobacter freundii Coliform CID102 14 Nej < 20 Afgang vandværk Citrobacter freundii Coliform CID103 3 Nej < 20 Forbruger Kluyvera cochleae Coliform CID104 21 Nej > 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID105 6 Nej < 20 Forbruger Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID106 10 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID107 6 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID108 1 Nej < 20 Afgang vandværk Citrobacter freundii Coliform CID109 2 Nej < 20 Ledningsnet Serratia proteoamaculans Coliform CID110 1 Nej < 20 Ledningsnet Rahnella aquatilis Coliform CID111 1 Nej Miljøprøve Udskylning Klebsiella oxytoca Coliform CID112 1 Nej Miljøprøve Udskylning Buttiauxella agrestis Coliform CID114 0 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID115 3 Nej Miljøprøve Udskylning Erwinia amylovora Coliform CID116 5 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID117 3 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID118 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia proteoamaculans Coliform CID119 1 Nej < 20 Afgang vandværk Erwinia amylovora Coliform CID120 11 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID121 Neg Nej < 20 Indgang ejendom Stenotrophomonas sp. Ikke Coliform CID122 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID123 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID124 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID125 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID126a 4 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID126b 4 Nej < 20 Beholder Cedecea phylotype nn Coliform CID127a 2 Nej Miljøprøve Udskylning Citrobacter freundii Coliform CID127b 2 Nej Miljøprøve Udskylning Klebsiella oxytoca Coliform CID128 0,00575 Nej < 20 Indgang ejendom Acinetobacter sp. Ikke Coliform CID129 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID130b 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia proteoamaculans Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID131 1 Nej Miljøprøve Udskylning Buttiauxella agrestis Coliform CID132 3 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID133 25 Nej > 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID134 15 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID135 27 Nej > 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID137 2 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID137c 2 Nej < 20 Beholder Citrobacter freundii Coliform CID138a 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID138b 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID139a 100 Nej > 20 Andet Yokenella regensburgei Coliform CID139b 100 Nej > 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID140 6 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID141 1 Nej < 20 Ledningsnet Stenotrophomonas sp. Ikke Coliform CID142 9 Nej < 20 Afgang vandværk Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID143 1 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID144a 29 Nej > 20 Andet Yersinia phylotype nn Coliform CID144b 29 Nej > 20 Andet Brevundimonas diminuta Ikke Coliform CID145 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID146 1 Nej < 20 Ledningsnet Pantoea agglomerans Coliform CID147a 5 Nej < 20 Ledningsnet Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID147b 5 Nej < 20 Ledningsnet Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID148a 18 Nej < 20 Indgang ejendom Buttiauxella agrestis Coliform CID148b 18 Nej < 20 Indgang ejendom Buttiauxella agrestis Coliform CID149 1 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID150 1 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID151 21 Nej > 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID152 7 Nej < 20 Ledningsnet Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID153a 3 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID153b 3 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID154 2 Nej < 20 Afgang vandværk Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID155 2 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID156 2 ja Miljøprøve gylle E. coli Coliform CID157 2 ja Miljøprøve gylle Enterobacter amnigenus Coliform CID158 2 ja Miljøprøve gylle Enterobacter amnigenus Coliform CID160a 1 Nej < 20 Ledningsnet Enterobacter amnigenus Coliform CID160b 1 Nej < 20 Ledningsnet Enterobacter amnigenus Coliform CID161 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID162a 2 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID163a 32 Nej > 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID163b 32 Nej > 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID164 1 Nej Miljøprøve Udskylning Serratia fonticola Coliform CID164b 1 Nej Miljøprøve Udskylning Yersinia frederiksenii Coliform CID165a Neg Nej Miljøprøve Orm Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID165b Neg Nej Miljøprøve Orm Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID165c Neg Nej Miljøprøve Orm Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID166a Neg Nej Miljøprøve Orm Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID166b Neg Nej Miljøprøve Orm Aeromonas hydrophila Ikke Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID166c Neg Nej Miljøprøve Orm Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID167a Neg Nej Miljøprøve Myggelarver Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID167b Neg Nej Miljøprøve Myggelarver Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID167c Neg Nej Miljøprøve Myggelarver Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID168x 1 Nej < 20 Ledningsnet Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID168a 1 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID168b 1 Nej < 20 Ledningsnet Yersinia phylotype nn Coliform CID168c 1 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID168d 1 Nej < 20 Ledningsnet Yersinia phylotype nn Coliform CID168e 1 Nej < 20 Ledningsnet Yersinia phylotype nn Coliform CID169 1 Nej < 20 Forbruger Enterobacter hormaechei Coliform CID170a 18 ja E. coli Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID170b 18 ja E. coli Andet Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID170c 18 ja E. coli Andet Stenotrophomonas sp. Ikke Coliform CID170d 18 ja E. coli Andet Raoultella plantiocola Coliform CID170e 18 ja E. coli Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID170f 18 ja E. coli Andet E. coli Coliform CID171 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID172a 2 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID172b 2 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID173 1 Nej < 20 Indgang ejendom Buttiauxella agrestis Coliform CID174a 2 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID174b 2 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID175a 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID175b 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID175c 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID175d 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID175e 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID175f 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID175g 3 Nej < 20 Afgang vandværk Erwinia amylovora Coliform CID175h 3 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID175i 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID175j 3 Nej < 20 Afgang vandværk Erwinia amylovora Coliform CID176 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID177 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID178a 2 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID178b 2 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID178c 2 Nej < 20 Beholder Serratia marcescens Coliform CID179 1 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID180a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID180b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID180c 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID181a 2 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID181b 2 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID182a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Cedecea phylotype nn Coliform CID182b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Cedecea phylotype nn Coliform CID183 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID184 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID185a 3 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID185b 3 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID185c 3 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID186a 2 Nej < 20 Serratia fonticola Coliform CID186b 2 Nej < 20 Serratia fonticola Coliform CID186c 2 Nej < 20 Serratia fonticola Coliform CID187a 4 Nej < 20 Forbruger Serratia marcescens Coliform CID187b 4 Nej < 20 Forbruger Serratia marcescens Coliform CID187c 4 Nej < 20 Forbruger Serratia marcescens Coliform CID187d 4 Nej < 20 Forbruger Serratia marcescens Coliform CID188a 4 Nej < 20 Beholder Serratia marcescens Coliform CID188b 4 Nej < 20 Beholder Serratia marcescens Coliform CID188c 4 Nej < 20 Beholder Serratia marcescens Coliform CID188d 4 Nej < 20 Beholder Serratia marcescens Coliform CID189a 2 Nej < 20 Beholder Serratia marcescens Coliform CID189b 2 Nej < 20 Beholder Serratia marcescens Coliform CID190 Neg Nej Miljøprøve Orm Acinetobacter sp. Ikke coliform CID191a Neg Nej Miljøprøve Orm Acinetobacter sp. Ikke coliform CID191b Neg Nej Miljøprøve Orm Acinetobacter sp. Ikke coliform CID191c Neg Nej Miljøprøve Orm Acinetobacter sp. Ikke coliform CID192a 1 Nej < 20 Ledningsnet Pantoea agglomerans Coliform CID192b 1 Nej < 20 Ledningsnet Pantoea agglomerans Coliform CID192c 1 Nej < 20 Ledningsnet Pantoea agglomerans Coliform CID192d 1 Nej < 20 Ledningsnet Hafnia alvei Coliform CID192e 1 Nej < 20 Ledningsnet Pantoea agglomerans Coliform CID193a 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID193b 1 Nej < 20 Ledningsnet Pantoea agglomerans Coliform CID193c 1 Nej < 20 Ledningsnet Pantoea agglomerans Coliform CID194a 2 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID194b 2 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID194c 2 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID194d 2 Nej < 20 Afgang vandværk Pantoea agglomerans Coliform CID195d Neg Nej Miljøprøve Andet Acinetobacter sp. Ikke coliform CID195e Neg Nej Miljøprøve Andet Acinetobacter sp. Ikke coliform CID196a 1 Nej Miljøprøve Jord Enterobacter kobei Coliform CID196b 1 Nej Miljøprøve Jord E. coli Coliform CID196c 1 Nej Miljøprøve Jord E. coli Coliform CID197a 2 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID197b 2 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID197c 2 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID198a 2 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID198b 2 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID199 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID200a 5 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID200b 5 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID200c 5 Nej < 20 Andet Acidovorax Ikke coliform CID201a 34 Nej > 20 Råvand Raoultella plantiocola Coliform CID201b 34 Nej > 20 Råvand Buttiauxella agrestis Coliform CID202a 16 ja E. coli Andet Citrobacter freundii Coliform CID202b 16 ja E. coli Andet Raoultella plantiocola Coliform CID202c 16 ja E. coli Andet E. coli Coliform CID203b 8 ja E. coli Andet E. coli Coliform CID205a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID205b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID206 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID207a 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID207b 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID207c 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID207d 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID207e 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID208a 1 Nej < 20 Beholder Moellerella wisconsensis Coliform CID209a 4 Nej < 20 Indgang ejendom Enterobacter hormaechei Coliform CID209b 4 Nej < 20 Indgang ejendom Enterobacter hormaechei Coliform CID209c 4 Ja E. coli Indgang ejendom E. coli Coliform CID209d 4 Nej < 20 Indgang ejendom Enterobacter hormaechei Coliform CID209e 4 Nej < 20 Indgang ejendom Enterobacter kobei Coliform CID210a 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID210b 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID211b 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID212a 4 Nej < 20 Andet Enterobacter kobei Coliform CID212b 4 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID212c 4 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID212d 4 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID212e 4 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID213a 6 Nej < 20 Andet Enterobacter kobei Coliform CID213b 6 Nej < 20 Andet Enterobacter kobei Coliform CID213c 6 Nej < 20 Andet Enterobacter kobei Coliform CID213d 6 Nej < 20 Andet Enterobacter kobei Coliform CID213e 6 Nej < 20 Andet Enterobacter kobei Coliform CID213f 6 Nej < 20 Andet Enterobacter kobei Coliform CID214a 10 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID214b 10 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID214c 10 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID214d 10 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID214e 10 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID214f 10 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID215a 0 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID215b 0 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID216a 2 Nej < 20 Andet Serratia fonticola Coliform CID216b 2 Nej < 20 Andet Acidovorax Ikke coliform CID216c 2 Nej < 20 Andet Serratia fonticola Coliform CID216d 2 Nej < 20 Andet Serratia fonticola Coliform CID217a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID218a 1 Nej < 20 Forbruger Serratia fonticola Coliform CID218b 1 Nej < 20 Forbruger Serratia fonticola Coliform CID219a 1 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter kobei Coliform CID219b 1 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter kobei Coliform CID220a 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID220b 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID221a 0,0023 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID221b 0,0023 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID222a 0,0023 Nej < 20 Forbruger Citrobacter freundii Coliform CID222b 0,0023 Nej < 20 Forbruger Citrobacter freundii Coliform CID223 0,011 Ja E. coli Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID223b 0,011 Ja E. coli Forbruger Raoultella plantiocola Coliform CID223x 1,011 Ja E. coli Forbruger E. coli Coliform CID224 1,011 Nej < 20 Forbruger Raoultella plantiocola Coliform CID225a 0,087 Ja E. coli Afgang vandværk Enterobacter kobei Coliform CID225x 0,087 Ja E. coli Afgang vandværk E. coli Coliform CID225c 0,087 Ja E. coli Afgang vandværk Raoultella plantiocola Coliform CID225d 0,087 Ja E. coli Afgang vandværk Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID226a 0,087 Ja E. coli Ledningsnet Enterobacter kobei Coliform CID226b 0,087 Ja E. coli Ledningsnet Enterobacter kobei Coliform CID226c 0,087 Ja E. coli Ledningsnet Enterobacter kobei Coliform CID226x 0,087 Ja E. coli Ledningsnet E. coli Coliform CID227 1 Nej < 20 Råvand Serratia fonticola Coliform CID228 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID229a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Enterobacter amnigenus Coliform CID229b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID230a 1 Ja E. coli Andet E. coli Coliform CID231a 3 Nej < 20 Råvand Serratia fonticola Coliform CID231b 3 Nej < 20 Råvand Serratia fonticola Coliform CID231c 3 Nej < 20 Råvand Serratia proteoamaculans Coliform CID232a 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID232b 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID232c 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID233 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID234 1 Nej < 20 Råvand Serratia fonticola Coliform CID235b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID235c 1 Nej < 20 Afgang vandværk Yersinia mollaratii Coliform CID236a Pos Nej > 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID236b Pos Nej > 20 Andet Serratia fonticola Coliform CID236c Pos Nej > 20 Andet Citrobacter freundii Coliform CID237b Pos Nej Miljøprøve Jord Enterobacter amnigenus Coliform CID237c Pos Nej Miljøprøve Jord Citrobacter freundii Coliform CID238a Pos Nej Miljøprøve Bænkebidder Citrobacter freundii Coliform CID238b Pos Nej Miljøprøve Bænkebidder Raoultella plantiocola Coliform CID238c Pos Nej Miljøprøve Bænkebidder Citrobacter freundii Coliform CID238d Pos Nej Miljøprøve Bænkebidder Citrobacter freundii Coliform CID239a Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID239b Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID239c Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID239x Pos Ja Miljøprøve Overfladevand E. coli Coliform CID240a Pos Nej Miljøprøve Snegl Providencia stuartii Ikke Coliform CID240b Pos Nej Miljøprøve Snegl Pseudomonas sp. Ikke coliform CID240c Pos Nej Miljøprøve Snegl Providencia stuartii Ikke Coliform CID240d Pos Nej Miljøprøve Snegl Citrobacter freundii Coliform CID241a Pos Ja Miljøprøve Jord Pseudomonas sp. Ikke coliform CID241b Pos Ja Miljøprøve Jord Pseudomonas sp. Ikke coliform CID241c Pos Ja Miljøprøve Jord Pseudomonas sp. Ikke coliform CID241x Pos Ja Miljøprøve Jord E. coli Coliform CID242a Pos Nej Miljøprøve Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID242b Pos Nej Miljøprøve Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID242c Pos Nej Miljøprøve Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID243a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Klebsiella oxytoca Coliform CID243b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Pantoea agglomerans Coliform CID244a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID244b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID244c 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID244d 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID245 1 Nej < 20 Andet Serratia proteoamaculans Coliform CID246 1 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID247 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID248 1 Nej < 20 Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID249a 43 Nej > 20 Forbruger Klebsiella oxytoca Coliform CID249b 43 Nej > 20 Forbruger Klebsiella oxytoca Coliform CID249c 43 Nej > 20 Forbruger Klebsiella oxytoca Coliform CID249d 43 Nej > 20 Forbruger Klebsiella oxytoca Coliform CID249e 43 Nej > 20 Forbruger Citrobacter freundii Coliform CID249f 43 Nej > 20 Forbruger Klebsiella oxytoca Coliform CID250a 31 Nej Miljøprøve Udskylning Buttiauxella agrestis Coliform CID250b 31 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID250c 31 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID250d 31 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID250e 31 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID250f 31 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID251a 24 Nej > 20 Beholder Enterobacter kobei Coliform CID251b 24 Nej > 20 Beholder Enterobacter kobei Coliform CID251c 24 Nej > 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID251d 24 Nej > 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID251e 24 Nej > 20 Beholder Citrobacter freundii Coliform CID251f 24 Nej > 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID252a 5 Nej < 20 Råvand Serratia proteoamaculans Coliform CID252b 5 Nej < 20 Råvand Serratia proteoamaculans Coliform CID252c 5 Nej < 20 Råvand Serratia proteoamaculans Coliform CID252d 5 Nej < 20 Råvand Enterobacter amnigenus Coliform CID252e 5 Nej < 20 Råvand Serratia proteoamaculans Coliform CID253a 2 Nej < 20 Ledningsnet Enterobacter amnigenus Coliform CID253b 2 Nej < 20 Ledningsnet Serratia proteoamaculans Coliform CID253c 2 Nej < 20 Ledningsnet Serratia proteoamaculans Coliform CID254 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia Proteoamaculans Coliform CID255a 2 Nej < 20 Ledningsnet Serratia proteoamaculans Coliform CID255b 2 Nej < 20 Ledningsnet Pantoea agglomerans Coliform CID255c 2 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID256 1 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID257 1 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID258 1 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID259a 1 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID259b 1 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID259c 1 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID259d 1 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID259e 1 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID260a 3 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID260b 3 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID260c 3 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID260d 3 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID261a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID261b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID261c 1 Nej < 20 Afgang vandværk Cedecea phylotype nn Coliform CID262a 2 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID262b 2 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID263 1 Nej < 20 Afgang vandværk Kluyvera cochleae Coliform CID264 1 Nej < 20 Råvand Buttiauxella agrestis Coliform CID265a 1 Nej < 20 Råvand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID265b 200 Nej > 20 Råvand Buttiauxella agrestis Coliform CID265c 200 Nej > 20 Råvand Citrobacter freundii Coliform CID265d 200 Nej > 20 Råvand Citrobacter freundii Coliform CID266a 1 Nej < 20 Råvand Citrobacter freundii Coliform CID266b 1 Nej < 20 Råvand Enterobacter amnigenus Coliform CID266c 1 Nej < 20 Råvand Buttiauxella agrestis Coliform CID266d 1 Nej < 20 Råvand Cedecea phylotype nn Coliform CID267a 24 Nej > 20 Råvand Raoultella terrigena Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID267b 24 Nej > 20 Råvand Buttiauxella agrestis Coliform CID267c 24 Nej > 20 Råvand Cedecea phylotype nn Coliform CID267d 24 Nej > 20 Råvand Enterobacter amnigenus Coliform CID267e 24 Nej > 20 Råvand Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID267f 24 Nej > 20 Råvand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID267g 24 Nej > 20 Råvand Buttiauxella agrestis Coliform CID268a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Citrobacter freundii Coliform CID268b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Enterobacter amnigenus Coliform CID268c 1 Nej < 20 Afgang vandværk Citrobacter freundii Coliform CID269 0 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID270a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID270b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID270c 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID271a 0 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID271b 0 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID271c 0 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID271d 0 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID272 0 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID273a 5 Ja E. coli Beholder Cedecea phylotype nn Coliform CID273b 5 Ja E. coli Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID273c 5 Ja E. coli Beholder Enterobacter amnigenus Coliform CID273d 5 Ja E. coli Beholder Yersinia intermedia Coliform CID273e 5 Ja E. coli Beholder Pseudomonas sp. Ikke coliform CID273f 5 Ja E. coli Beholder E. coli Coliform CID274b 0 Nej < 20 Beholder Cedecea phylotype nn Coliform CID274c 0 Nej < 20 Beholder yersinia frederiksenii Coliform CID274d 0 Nej < 20 Beholder Serratia fonticola Coliform CID274f 0 Nej < 20 Beholder Pseudomonas sp. Ikke coliform CID275a 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID275b 1 Nej < 20 Beholder Yersinia intermedia Coliform CID275c 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID275d 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID275e 1 Nej < 20 Beholder Yersinia intermedia Coliform CID276a 3 Nej < 20 Beholder Serratia fonticola Coliform CID276b 3 Nej < 20 Beholder Citrobacter freundii Coliform CID276d 3 Nej < 20 Beholder Citrobacter freundii Coliform CID276e 3 Nej < 20 Beholder Cedecea phylotype nn Coliform CID276f 3 Nej < 20 Beholder Yersinia intermedia Coliform CID277 Pos Nej > 20 Beholder Citrobacter freundii Coliform CID278 Pos Nej > 20 Beholder Citrobacter freundii Coliform CID279a 2 Nej < 20 Forbruger Klebsiella pneumoniae Coliform CID279b 2 Nej < 20 Forbruger Klebsiella pneumoniae Coliform CID280 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID281a 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID281b 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID282a 4 Nej < 20 Råvand Enterobacter amnigenus Coliform CID282b 4 Nej < 20 Råvand Enterobacter amnigenus Coliform CID282c 4 Nej < 20 Råvand Enterobacter amnigenus Coliform CID282d 4 Nej < 20 Råvand Raoultella terrigena Coliform CID282e 4 Nej < 20 Råvand Kluyvera cochleae Coliform CID283 1 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID284 1 Nej < 20 Forbruger Enterobacter amnigenus Coliform CID285a 3 Nej < 20 Råvand Enterobacter amnigenus Coliform CID285b 3 Nej < 20 Råvand Klebsiella oxytoca Coliform CID285c 3 Nej < 20 Råvand Citrobacter freundii Coliform CID285d 3 Nej < 20 Råvand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID286b 2 Nej < 20 Forbruger Serratia proteoamaculans Coliform CID287a 3 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID291a 2 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID291b 2 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID292a 5 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID292b 5 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID292c 5 Nej < 20 Ledningsnet Citrobacter freundii Coliform CID292e 5 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID293 1 Nej < 20 Ledningsnet Enterobacter hormaechei Coliform CID294f Pos Ja Miljøprøve Snegl Raoultella terrigena Coliform CID294g Pos Ja Miljøprøve Snegl Enterobacter amnigenus Coliform CID294h Pos Ja Miljøprøve Snegl Enterobacter amnigenus Coliform CID294x Pos Ja Miljøprøve Snegl E. coli Coliform CID295d Pos Nej Miljøprøve Snegl Raoultella terrigena Coliform CID295e Pos Nej Miljøprøve Snegl morganella morganii Ikke coliform CID295f Pos Nej Miljøprøve Snegl Citrobacter freundii Coliform CID295g Pos Nej Miljøprøve Snegl Providencia stuartii Ikke coliform CID296a Pos Ja Miljøprøve Snegl E. coli Coliform CID296c Pos Ja Miljøprøve Snegl Providencia stuartii Ikke coliform CID296d Pos Ja Miljøprøve Snegl E. coli Coliform CID296f Pos Ja Miljøprøve Snegl Citrobacter freundii Coliform CID296x Pos Ja Miljøprøve Snegl E. coli Coliform CID297a Pos Nej Miljøprøve Orm Pseudomonas sp. Ikke coliform CID297b Pos Nej Miljøprøve Orm Pseudomonas sp. Ikke coliform CID297c Pos Nej Miljøprøve Orm Pseudomonas sp. Ikke coliform CID297d Pos Nej Miljøprøve Orm Pseudomonas sp. Ikke coliform CID297e Pos Nej Miljøprøve Orm Pseudomonas sp. Ikke coliform CID298a Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID298b Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID298c Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID298d Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID298e Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID299a Pos Ja Miljøprøve Ålegylle Citrobacter freundii Coliform CID299b Pos Ja Miljøprøve Ålegylle Citrobacter freundii Coliform CID299c Pos Ja Miljøprøve Ålegylle Providencia stuartii Ikke coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID299d Pos Ja Miljøprøve Ålegylle Providencia stuartii Ikke coliform CID299x Pos Ja Miljøprøve Ålegylle E. coli Coliform CID300a Pos Nej Miljøprøve Biofilm Buttiauxella agrestis Coliform CID300b Pos Nej Miljøprøve Biofilm Citrobacter freundii Coliform CID300c Pos Nej Miljøprøve Biofilm Citrobacter freundii Coliform CID300d Pos Nej Miljøprøve Biofilm Citrobacter freundii Coliform CID301a Pos Nej Miljøprøve Biofilm Citrobacter freundii Coliform CID301b Pos Nej Miljøprøve Biofilm Citrobacter freundii Coliform CID301c Pos Nej Miljøprøve Biofilm Klebsiella oxytoca Coliform CID301d Pos Nej Miljøprøve Biofilm Citrobacter freundii Coliform CID301e Pos Nej Miljøprøve Biofilm Pseudomonas sp. Ikke coliform CID302c Pos Ja Miljøprøve Spildevand Serratia proteoamaculans Coliform CID302d Pos Ja Miljøprøve Spildevand Acidovorax Ikke coliform CID302f Pos Ja Miljøprøve Spildevand Citrobacter freundii Coliform CID302g Pos Ja Miljøprøve Spildevand E. coli Coliform CID302i Pos Ja Miljøprøve Spildevand E. coli Coliform CID303a Pos Ja Miljøprøve Spildevand Citrobacter freundii Coliform CID303b Pos Ja Miljøprøve Spildevand Buttiauxella agrestis Coliform CID303e Pos Ja Miljøprøve Spildevand Serratia proteoamaculans Coliform CID303f Pos Ja Miljøprøve Spildevand Citrobacter freundii Coliform CID303g Pos Ja Miljøprøve Spildevand Enterobacter amnigenus Coliform CID303x Pos Ja Miljøprøve Spildevand E. coli Coliform CID304a Pos Ja Miljøprøve Spildevand Citrobacter freundii Coliform CID304b Pos Ja Miljøprøve Spildevand Klebsiella pneumoniae Coliform CID304c Pos Ja Miljøprøve Spildevand Klebsiella pneumoniae Coliform CID304d Pos Ja Miljøprøve Spildevand Klebsiella pneumoniae Coliform CID304e Pos Ja Miljøprøve Spildevand Enterobacter hormaechei Coliform CID304f Pos Ja Miljøprøve Spildevand Kluyvera cochleae Coliform CID304h Pos Ja Miljøprøve Spildevand Klebsiella pneumoniae Coliform CID304x Pos Ja Miljøprøve Spildevand E. coli Coliform CID305a 2 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID308a 2 Nej < 20 Afgang vandværk Enterobacter amnigenus Coliform CID308b 2 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID309 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID310b 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID310c 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID310d 1 Nej < 20 Ledningsnet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID310e 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID311a 1 Ja E. coli Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID311c 1 Ja E. coli Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID311c 1 Ja E. coli Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID312a 2 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID312b 2 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID312c 2 Nej < 20 Andet Citrobacter freundii Coliform CID312d 2 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID313b 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID314 1 Nej < 20 Råvand Enterobacter amnigenus Coliform CID315b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID315c 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID316a 1 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID316b 1 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform CID317 1 Nej < 20 Beholder Raoultella plantiocola Coliform CID318 1 Nej < 20 Afgang vandværk Enterobacter amnigenus Coliform CID319 1 Nej Miljøprøve Udskylning Serratia fonticola Coliform CID320 1 Nej Miljøprøve Udskylning Buttiauxella agrestis Coliform CID321 1 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID322 1 Nej < 20 Afgang Vandværk Enterobacter amnigenus Coliform CID323a 7 Ja E. coli Andet Citrobacter freundii Coliform CID323c 7 Ja E. coli Andet Enterobacter kobei Coliform CID323d 7 Ja E. coli Andet Citrobacter freundii Coliform CID323e 7 Ja E. coli Andet Raoultella terrigena Coliform CID323f 7 Ja E. coli Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID323g 7 Ja E. coli Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID323x 7 Ja E. coli Andet E. coli Coliform CID324 1 Nej < 20 Ledningsnet Kluyvera cochleae Coliform CID325a Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Yersinia phylotype nn Coliform CID325b Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID325c Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID325d Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID325e Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Yersinia phylotype nn Coliform CID325x Pos Ja Miljøprøve Overfladevand E. coli Coliform CID326 0 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID327b 0 Nej < 20 Beholder Acidovorax Ikke coliform CID328a 0 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID328b 0 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID329a 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID329b 1 Nej < 20 Beholder Citrobacter freundii Coliform CID329c 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID330a 1 Nej < 20 Beholder Enterobacter kobei Coliform CID330b 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID330c 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID330d 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID330e 1 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID331 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID332 1 Nej < 20 Afgang vandværk Citrobacter freundii Coliform CID333 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID334a 3 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID334b 3 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID334c 3 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID335a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID335b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Cedecea phylotype nn Coliform CID336 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID337 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID338 1 Nej Miljøprøve Udskylning serratia fonticola Coliform CID339a 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID339b 1 Nej < 20 Afgang vandværk Citrobacter freundii Coliform CID340a 3 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID340b 3 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID340c 3 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID340d 3 Nej < 20 Afgang vandværk Providencia stuartii Ikke coliform CID341a 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID341c 1 Nej < 20 Ledningsnet yersinia frederiksenii Coliform CID342a 14 Nej < 20 Andet Serratia proteoamaculans Coliform CID342b 14 Nej < 20 Andet Serratia proteoamaculans Coliform CID342c 14 Nej < 20 Andet Rahnella aquatilis Coliform CID343 1 Nej < 20 filterafgang Buttiauxella agrestis Coliform CID344a 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID344b 1 Nej < 20 Beholder Cedecea phylotype nn Coliform CID345 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID346a 1 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID346b 1 Nej < 20 Andet Cedecea phylotype nn Coliform CID346c 1 Nej < 20 Andet Serratia proteoamaculans Coliform CID346d 1 Nej < 20 Andet brevundimonas diminuta Ikke coliform CID347 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID348a 2 Nej < 20 Andet Raoultella terrigena Coliform CID348b 2 Nej < 20 Andet Cedecea phylotype nn Coliform CID349 1 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID350a 2 Nej < 20 Ledningsnet Kluyvera cochleae Coliform CID350b 2 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID350c 2 Nej < 20 Ledningsnet yersinia frederiksenii Coliform CID351 1 Nej < 20 Ledningsnet Kluyvera cochleae Coliform CID352 1 Nej < 20? Buttiauxella agrestis Coliform CID353a 1 Nej < 20 Kluyvera cochleae Coliform CID354 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID355 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID356 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID357a 1 Nej < 20 Beholder Enterobacter amnigenus Coliform CID357b 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID357c 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID357d 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID357f 1 Nej < 20 Beholder Pantoea agglomerans Coliform CID357g 1 Nej < 20 Beholder Pantoea agglomerans Coliform CID358a 0 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID358b 0 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID358c 0 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID358d 0 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID358e 0 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID359a 0 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID359b 0 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID359c 0 Nej < 20 Beholder Serratia proteoamaculans Coliform CID359d 0 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID359e 0 Nej < 20 Beholder Pseudomonas sp. Ikke coliform CID359f 0 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID359j 0 Nej < 20 Beholder Pantoea agglomerans Coliform CID360b 0 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID365a 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID365b 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID366b 2 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID367 1 Nej < 20 Forbruger Kluyvera cochleae Coliform CID368a 2 Nej < 20 Beholder Enterobacter amnigenus Coliform CID368b 2 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID369a 8 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID369b 8 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID369c 8 Nej < 20 Beholder Enterobacter amnigenus Coliform CID369d 8 Nej < 20 Beholder Citrobacter freundii Coliform CID369e 8 Nej < 20 Beholder Rahnella aquatilis Coliform CID369f 8 Nej < 20 Beholder Pseudomonas sp. Ikke coliform CID370a 11 Nej Miljøprøve Udskylning Serratia fonticola Coliform CID370b 11 Nej Miljøprøve Udskylning Serratia fonticola Coliform CID370c 11 Nej Miljøprøve Udskylning Citrobacter freundii Coliform CID370d 11 Nej Miljøprøve Udskylning Serratia proteoamaculans Coliform CID370e 11 Nej Miljøprøve Udskylning Serratia fonticola Coliform CID370f 11 Nej Miljøprøve Udskylning Pseudomonas sp. Ikke coliform CID371a 2 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID371b 2 Nej < 20 Ledningsnet Serratia fonticola Coliform CID372a 34 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID372b 34 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID372c 34 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID372d 34 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID372e 34 Nej Miljøprøve Udskylning Enterobacter amnigenus Coliform CID373a 19 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID373f 19 Nej < 20 Andet Serratia fonticola Coliform CID373c 19 Nej < 20 Andet Cedecea phylotype nn Coliform CID373d 19 Nej < 20 Andet Cedecea phylotype nn Coliform CID373e 19 Nej < 20 Andet Kluyvera cochleae Coliform CID374a 4 Nej < 20 Afgang vandværk Enterobacter amnigenus Coliform CID374b 4 Nej < 20 Afgang vandværk Enterobacter amnigenus Coliform CID374c 4 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID374d 4 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID376 3 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID376b 3 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID376c 3 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID376d 3 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID376e 3 Nej < 20 Andet Kluyvera cochleae Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID377a 2 Nej < 20 Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID377b 2 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID377c 2 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID377d 2 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID377f 2 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID378a 3 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID378b 3 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID378c 3 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID378d 3 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID379e 3 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID379 1 Nej < 20 Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID379b 1 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID380b 2 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID380e 2 Nej < 20 Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID380d 2 Nej < 20 Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID382a 38 Nej > 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID383a 83 Nej > 20 Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID383b 83 Nej > 20 Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID383f 83 Nej > 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID384a 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID384b 1 Nej < 20 Ledningsnet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID385 1 Nej < 20 Ledningsnet Buttiauxella agrestis Coliform CID385b 1 Nej < 20 Ledningsnet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID386 1 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID387 1 Nej < 20 Buttiauxella agrestis Coliform CID388a Pos Nej > 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID388b Pos Nej > 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID388c Pos Nej > 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID388d Pos Nej > 20 Afgang vandværk Enterobacter amnigenus Coliform CID388e Pos Nej > 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID389a 10 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke coliform CID389b 10 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke coliform CID389c 10 Nej < 20 Andet Aeromonas hydrophila Ikke coliform CID389d 10 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke coliform CID390a 2 Nej < 20 Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID390b 2 Nej < 20 Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID391a 19 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID391c 19 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID391d 19 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID391e 19 Nej < 20 Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID392a 3 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID392b 3 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID393a 11 Nej < 20 Andet Rahnella aquatilis Coliform CID393b 11 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID393c 11 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID393d 11 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID393e 11 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID394a 4 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID394c 4 Nej < 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID394d 4 Nej < 20 Andet Cedecea phylotype nn Coliform CID395a 100 Nej > 20 Andet Serratia fonticola Coliform CID395b 100 Nej > 20 Andet Cedecea phylotype nn Coliform CID395c 100 Nej > 20 Andet Serratia fonticola Coliform CID395d 100 Nej > 20 Andet Buttiauxella agrestis Coliform CID395e 100 Nej > 20 Andet Serratia fonticola Coliform CID396a 3 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID396c 3 Nej < 20 Afgang vandværk Acidovorax Ikke Coliform CID397a 2 Nej < 20 Forbruger Enterobacter amnigenus Coliform CID398a 5 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID398b 5 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID398c 5 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID398d 5 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID398e 5 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID399b 3 Nej Miljøprøve Udskylning Pseudomonas sp. Ikke coliform CID399c 3 Nej Miljøprøve Udskylning Buttiauxella agrestis Coliform CID400a 1 Nej Miljøprøve Udskylning Buttiauxella agrestis Coliform CID401a 1 Ja E. coli E. coli Coliform CID402a 3 Nej < 20 Citrobacter freundii Coliform CID402b 3 Nej < 20 Buttiauxella agrestis Coliform CID402c 3 Nej < 20 Buttiauxella agrestis Coliform CID403a Pos Nej Miljøprøve Overfladevand Serratia fonticola Coliform CID403b Pos Nej Miljøprøve Overfladevand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID403c Pos Nej Miljøprøve Overfladevand Serratia fonticola Coliform CID403d Pos Nej Miljøprøve Overfladevand Serratia fonticola Coliform CID403x Pos Nej Miljøprøve Overfladevand E. coli Coliform CID404a Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Enterobacter amnigenus Coliform CID404b Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Pseudomonas sp. Ikke coliform CID404c Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Buttiauxella agrestis Coliform CID404d Pos Ja Miljøprøve Overfladevand Buttiauxella agrestis Coliform CID404e Pos Ja Miljøprøve Overfladevand E. coli Coliform CID405a Pos Nej Miljøprøve Jord Citrobacter freundii Coliform CID405b Pos Nej Miljøprøve Jord Buttiauxella agrestis Coliform CID405c Pos Nej Miljøprøve Jord Acinetobacter sp. Ikke Coliform CID405x Pos Nej Miljøprøve Jord E. coli Coliform CID405e Pos Nej Miljøprøve Jord Enterobacter hormaechei Coliform CID406a Pos Ja Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID406b Pos Ja Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID406c Pos Ja Miljøprøve Orm Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID406d Pos Ja Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID406e Pos Ja Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID406x Pos Ja Miljøprøve Orm E. coli Coliform CID407a Pos Nej Miljøprøve Orm Pseudomonas sp. Ikke Coliform CID407b Pos Nej Miljøprøve Orm Citrobacter freundii Coliform CID407c Pos Nej Miljøprøve Orm Citrobacter freundii Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID407d Pos Nej Miljøprøve Orm Citrobacter freundii Coliform CID407e Pos Nej Miljøprøve Orm Citrobacter freundii Coliform CID407f Pos Nej Miljøprøve Orm Citrobacter freundii Coliform CID407x Pos Nej Miljøprøve Orm E. coli Coliform CID408a Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID408b Pos Nej Miljøprøve Orm Citrobacter freundii Coliform CID408c Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID408d Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID408e Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID408f Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID408x Pos Nej Miljøprøve Orm E. coli Coliform CID409a Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID409b Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID409c Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID409d Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID409e Pos Nej Miljøprøve Orm Buttiauxella agrestis Coliform CID409f Pos Nej Miljøprøve Orm Pseudomonas sp. Ikke coliform CID410a Pos Nej Miljøprøve Overfladevand Kluyvera cochleae Coliform CID410b Pos Nej Miljøprøve Overfladevand Buttiauxella agrestis Coliform CID410d Pos Nej Miljøprøve Overfladevand Buttiauxella agrestis Coliform CID410e Pos Nej Miljøprøve Overfladevand Enterobacter kobei Coliform CID410f Pos Nej Miljøprøve Overfladevand Enterobacter kobei Coliform CID411a Pos Ja Miljøprøve Jord Enterobacter kobei Coliform CID411b Pos Ja Miljøprøve Jord Pseudomonas sp. Ikke coliform CID411x Pos Ja Miljøprøve Jord E. coli Coliform CID412a Pos Ja Miljøprøve Boremudder Pseudomonas sp. Ikke coliform CID412b Pos Ja Miljøprøve Boremudder Buttiauxella agrestis Coliform CID413a Pos Ja Miljøprøve Boremudder Citrobacter freundii Coliform CID413b Pos Ja Miljøprøve Boremudder Raoultella plantiocola Coliform CID413c Pos Ja Miljøprøve Boremudder Raoultella terrigena Coliform CID413d Pos Ja Miljøprøve Boremudder Citrobacter freundii Coliform CID413e Pos Ja Miljøprøve Boremudder Acidovorax Ikke Coliform CID413f Pos Ja Miljøprøve Boremudder Raoultella plantiocola Coliform CID414a Pos Nej > 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID414b Pos Nej > 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID414c Pos Nej > 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID414d Pos Nej > 20 Afgang vandværk Cedecea phylotype nn Coliform CID414e Pos Nej > 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID415a Pos Nej > 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID415b Pos Nej > 20 Afgang vandværk Cedecea phylotype nn Coliform CID416 Pos Nej > 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID417 1 Nej < 20 Beholder Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID418 1 Nej < 20 Beholder Klebsiella oxytoca Coliform CID419a 2 Nej < 20 Beholder Serratia fonticola Coliform CID419b 2 Nej < 20 Beholder Klebsiella oxytoca Coliform CID420 1 Nej < 20 Beholder Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID421a 3 Nej < 20 Beholder Enterobacter amnigenus Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID421b 3 Nej < 20 Beholder Enterobacter amnigenus Coliform CID421c 3 Nej < 20 Beholder Raoultella terrigena Coliform CID422a 2 Nej < 20 Beholder Buttiauxella agrestis Coliform CID422b 2 Nej < 20 Beholder Acinetobacter sp. Ikke Coliform CID423 1 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID424a > 20 Ja E. coli Andet E. coli Coliform CID424b > 20 Ja E. coli Andet Citrobacter freundii Coliform CID425a > 20 Ja E. coli Andet E. coli Coliform CID425b > 20 Ja E. coli Andet Shewanella putrefaciens Ikke Coliform CID426a > 20 Ja E. coli Andet E. coli Coliform CID426b > 20 Ja E. coli Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID427 > 20 Ja E. coli Andet Pseudomonas sp. Ikke coliform CID427x > 20 Ja E. coli Andet E. coli Coliform CID428a > 20 Ja E. coli Andet E. coli Coliform CID428b > 20 Ja E. coli Andet Enterobacter amnigenus Coliform CID429 > 20 Ja E. coli Andet Klebsiella oxytoca Coliform CID429x > 20 Ja E. coli Andet E. coli Coliform CID430a > 20 Ja E. coli Andet E. coli Coliform CID430b > 20 Ja E. coli Andet Providencia stuartii Ikke coliform CID431a > 20 Ja E. coli Andet E. coli Coliform CID431b > 20 Ja E. coli Andet Citrobacter freundii Coliform CID432 < 5 Nej < 20 Afgang vandværk Buttiauxella agrestis Coliform CID433 < 5 Nej < 20 Beholder Providencia stuartii Ikke coliform CID434 < 5 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia proteoamaculans Coliform CID435 < 5 Nej < 20 Beholder Klebsiella oxytoca Coliform CID436 < 5 Nej < 20 Afgang vandværk Providencia stuartii Ikke coliform CID437 < 5 Nej < 20 Beholder Providencia stuartii Ikke coliform CID438 < 5 Ja E. coli CID439a < 5 Ja E. coli CID439b < 5 Ja E. coli CID439c < 5 Ja E. coli CID440a < 5 Ja E. coli CID440b < 5 Ja E. coli CID440c < 5 Ja E. coli CID440x < 5 Ja E. coli CID441 < 5 Ja E. coli Forbruger E. coli Coliform Beholder Providencia stuartii Ikke coliform Beholder Buttiauxella agrestis Coliform Beholder E. coli Coliform Beholder E. coli Coliform Beholder Klebsiella oxytoca Coliform Beholder Providencia stuartii Ikke Coliform Beholder E. coli Coliform Afgang vandværk Morganella morganii Ikke Coliform

Prøve og isolatnummer Coliform niveau #/100 ml Positiv for E. coli? Prøvekategori Anden prøvekategori Resultat Coliform eller ikke-coliform CID442 < 5 Ja E. coli Forbruger E. coli Coliform CID443 < 5 Ja E. coli Beholder E. coli Coliform CID444 < 5 Nej < 20 Afgang vandværk Klebsiella oxytoca Coliform CID445a < 5 Ja E. coli Beholder Klebsiella oxytoca Coliform CID445b < 5 Ja E. coli Beholder Providencia stuartii Ikke Coliform CID445c < 5 Ja E. coli Beholder E. coli Coliform CID446 < 5 Nej < 20 Afgang vandværk Serratia fonticola Coliform CID447 < 5 Nej < 20 Afgang vandværk Klebsiella oxytoca Coliform CID448 < 5 Nej < 20 Afgang vandværk Pseudomonas sp. Ikke coliform CID449 < 5 Nej < 20 Forbruger Klebsiella oxytoca Coliform CID450 > 20 Nej Miljøprøve Orm Yersinia phylotype nn Coliform CID451a > 20 Nej Miljøprøve Orm Yersinia phylotype nn Coliform CID451b > 20 Nej Miljøprøve Orm Yersinia phylotype nn Coliform CID452 > 20 Nej Miljøprøve Orm Yersinia phylotype nn Coliform CID453a > 20 Nej Miljøprøve Orm Yersinia phylotype nn Coliform CID453b > 20 Nej Miljøprøve Orm Aeromonas hydrophila Ikke Coliform CID453c > 20 Nej Miljøprøve Orm Yersinia phylotype nn Coliform CID454 < 5 Nej < 20 Forbruger Buttiauxella agrestis Coliform

Bilag B Metoder - isolering og karakterisering af coliforme bakterier I undersøgelsen har vand- og miljøprøverne først været igennem et selektivt berigelsesstep ved colilert-analysen, derefter er berigelseskulturen (den gule væske) strøget ud og inkuberet på agarplader med TBX-medie, der er et almindeligt brugt medie til opformering af enterobakterier. Fra agarpladerne er velafgrænsede kolonier (isolater) udvalgt og brugt i DNA-analysen. Teknologisk Institut opbevarer isolaterne i en kultursamling, så de kan anvendes i senere projekter eller andre sammenhænge. Sådan fremkom isolaterne, der blev DNA-sekventeret. To typer af vandprøver blev modtaget, og de er blevet analyseret for, hvilke coliforme bakterier de indeholdt. Metoden for isolering af bakterierne er lidt forskellig i de to prøvetyper og beskrives derfor separat nedenfor. Positive colilert quantitray-plader Fra hver colilert-plade blev der efter modtagelsen af prøverne udtaget en væske fra hver af de positive (gule) brønde (dog maksimalt 5 fra hver af de almindelige vandprøver) og tilføjet hhv a, b, c osv. til prøvenummeret. Væsken fra brøndene blev udstrøget på hver sin TBX-agarplade og inkuberet i varmeskab ved 35 C, indtil der tydeligt kunne ses bakteriekolonier på pladerne (typisk 48-72 timer). Der blev sekventeret mindst en koloni fra hver plade, svarende til en bakterie fra hver af de positive brønde i den oprindelige colilert-analyse. Andre prøver I de tilfælde, hvor Teknologisk Institut selv foretog colilert-analysen, blev denne oftest foretaget kvalitativt og ikke i quantitrays. I de tilfælde, hvor colilertanalysen var positiv, blev der ligeledes udstrøget væske på TBX-plader til videre analyse. Derefter blev der udvalgte 5-10 kolonier (helst forskellige kolonityper) fra hver prøve til videre analyse. De udvalgte kolonier blev nummereret efter prøvenummer tilføjet et a, b, c etc. Det skal understreges, at de identificerede bakterier er stikprøver af de kolonier, der er til stede i colilert-brøndene, og ikke nødvendigvis repræsenterer den totale diversitet af coliforme organismer i den enkelte prøve. Det antages dog, at der ved denne fremgangsmåde er foretaget en repræsentativ analyse under hensyntagen til de økonomiske rammer, da hver positiv brønd på en colilert-plade tilnærmelsesvis repræsenterer 1 coliform bakterie (CFU). Det er dog sandsynligt, at der vil være flere slags coliforme bakterier i prøven end dem, der er blevet analyseret. DNA-sekventeringen Fra hvert af isolaterne har vi oprenset DNA fra cellerne og opformeret 16S rrna genet i en PCR-reaktion med standardmetoder. PCR-produktet er derefter blevet sekventeret. De mange DNA-sekvenser, som er resultatet af DNA-analyserne, er derefter blevet bearbejdet i en fylogenetisk analyse og indsat i et stamtræ, som rummer over 500.000 sekvenser af bakterier fra internationale forskningsstudier. Resultatet er, at hver af de sekventerede isolater har fået tildelt et navn på fylogruppe-niveau. Navngivning af bakterierne Bakterier tildeles som regel et navn, der består af først et slægtsnavn, efterfulgt af et arts -navn.

Som nævnt tidligere er 16S rrna-genet relativt konserveret, og forskellen mellem isolerede bakterier af samme slægt kan være lille. Da populationer i naturen har en vis diversitet, vil bakterier isoleret fra naturen typisk afvige en smule fra tidligere isolerede arter. Det vil derfor ikke altid være muligt at bestemme bakterien til arts -niveau på grundlag af 16S rrna-genet, men den kan reproducerbart placeres i en fylogruppe af nært beslægtede bakterier. Det klassisiske artsbegreb giver strengt taget ikke mening inden for bakteriologien, da bakterier ikke har kønnet formering. I stedet for arter anvendes typisk begrebet fylotype, men da bakterier varierer så meget fra naturens hånd, er dette begreb ikke særligt operationelt fordi det er svært at genfinde lige præcis den samme fylotype. I stedet for kan man operere med grupper af meget tæt beslægtede bakterier - såkaldte fylogrupper - som det er gjort i denne rapport. Ydermere vanskeliggøres navngivningen af bakterier af, at traditionel navngivning af bakterier er baseret på vækstfysiologiske karakteristika og morfologi, som ikke altid hænger sammen med, hvor tæt beslægtede de er. Derfor er resultatet af en karakterisering af bakterier i høj grad afhængig af den anvendte metode. Og derfor er nogle slægtsnavne som var navngivet med vækst-fysiologiske metoder placeret flere steder i stamtræet, som det for eksempel er tilfældet for Klebsiella og Enterobacter (se Figur 1). Derfor kan det i enkelte tilfælde endda være svært at bestemme bakterierne til slægtsniveau. Dette gælder for eksempel for flere arter af Citrobacter og Enterobacter, fordi disse slægtsnavne findes flere steder i stamtræet (de er ikke monofyletiske). Begrænsninger ved metoden Den valgte metode har været velegnet i denne undersøgelse, da den giver os et overblik over, hvilke bakterier der findes i hvilke prøvetyper. Vi har valgt denne fremgangsmåde, fordi den er både praktisk, relativ billig og ikke kræver den store udvikling. Der har dog tre væsentlige begrænsninger: 1. Analysetiden er forholdsvis lang. 2. Den analyserer kun nogle af bakterierne i prøven. 3. Den repræsenterer ikke nødvendigvis sammensætningen i den oprindelige prøve. Sådan kan man imødegå begrænsningerne Ved at anvende en DNA-fingerprintingteknik vil der kunne reduceres væsentlig i den samlede analysetid, fordi man undgår opformeringstrinnet på TBX-pladerne. Desuden vil det give et mere fuldstændigt billede af, hvilke coliforme bakterier en prøve rummer (berigelse eller ej), fordi hele prøven analyseres i stedet for de udvalgte kolonier. Herved analyseres også de svagt repræsenterede coliforme bakterier. Det kræver til gengæld noget udvikling før der foreligger en metode, som er operationel. Ønsker man et billede af fordelingen af bakterier i den oprindelige vandprøve, vil det være optimalt at analysere direkte på vandprøven og undgå berigelsestrinnet. Der kan der også spares en dags tid i den samlede analysetid. Berigelsestrinnet har dog disse åbenlyse fordele: De foretages rutinemæssigt i drikkevandsovervågningen.

Kan gemmes og kræver derfor ikke at nye prøver udtages. De er nemme at håndtere og indsamle. Relateres til det kvantitative analyseresultat overvågningen. Der er en stor biomasse at analysere på.

Bilag C Oversigt over slægter i Enterobacteriaceae og coliforme afhængig af definition og detektionsmetode.

Tabellen er udfærdiget af Charlotte B. Corfitzen og Hans-Jørgen Albrechtsen DTU, environment (efter Stevens et al., 2003; Bergey's manual, 1984; Euzéby, 2007; Leclerc et al., 2001) Definition Slægter Coliform-kilde Coliforme baseret på syre- og gasproduktion under fermentering af lactose Escherichia Citrobacter Enterobacter Klebsiella Hafnia Serratia Yersinia Udelukkende fra faeces Faeces og miljø Coliforme baseret på ß-galactosidase Enterobacteriaceae Arsenophonus Budvicia Buttiauxella Cedecea Erwina Ewingella Kluyvera Leclercia Moellerella Pantoea Rahnella Trabulsiella Yokenella Fortrinsvis fra miljø Brenneria Buchnera Calymmatobacteriu m Dickeya Edwardsiella Leminorella Morganella Obesumbacterium Pectobacterium Photorhabus Plesiomonas Pragia Proteus Providencia Raoultella Saccharobacter Salmonella Samsonia Shigella Tatumella Thorsellia Wiggleswothiia Xenorhabus

Bilag D Tabellen viser, hvilke bakterier der er identificeret fra de forskellige miljøprøver. Miljøprøver Buttiauxella agrestis E. Coli Citrobacter freundii Enterobacter amnigenus Yersinia phylotype nn Serratia fonticola Enterobacter kobei Raoultella terrigena Serratia proteoamaculans Kluyvera cochleae Klebsiella oxytoca Yersinia frederiksenii Raoultella plantiocola Enterobacter hormaechei Pseudomonas sp. Providencia stuartii Aeromonas hydrophila Acinetobacter sp. Acidovorax Udskylning 8 3 9 4 2 1 1 1 3 2 2 36 Orm 4 3 2 4 4 3 2 22 Spildevand 1 3 3 1 2 1 1 1 13 Jord 1 4 2 1 2 1 2 1 14 Overfladevand 2 4 1 1 1 1 1 4 15 Snegle 2 3 1 2 1 3 12 Boremudder 1 1 1 1 1 1 6 Bænkebidder 1 1 2 i alt 17 16 15 13 5 5 5 4 3 3 3 2 2 2 14 3 3 3 2 120 Total

Bilag E Liste over vandforsyninger som har deltaget i projektet Assens Vandforsyning Ballerup, Forsyningen Energi Randers Vand Esbjerg Kommune, Forsyningen Frederikshavn, Forsyningen Frederikssund Kommunale Vandforsyning Gilleleje Vandværk Gladsaxe vandforsyning Grindsted Vandværk Haderslev vandforsyning Havnbjerg Vandforsyningsselskab Herning, Energigruppen Vand Hillerød Horsens Hvidovre Forsyning A/S Kalundborg Kommune Københanvs Energi Køge, Energiforsyningen Lemvig Vandforsyning Marstal Vandforsyning Norddjurs Kommune, Forsyningsafdelingen Odense Vandselskab A/S Ringkøbing-Skjern Forsyning Roskilde Forsyning Silkeborg Kommune SK-Vand A/S Skive Vand Struer Forsyning Vand A/S Svendborg Vand A/S Søndervig Vandværk Thisted Kommunale Vandforsyning Tre-For Vand A/S Tønder Kommunes Forsyning Vestforsyning A/S, Holstebro Viborg VAnd Århus kommune Aars Vand Ud over prøver fra de deltagende vandforsyninger indeholder databasen også prøver fra tidligere undersøgelser, hvor andre vandforsyninger har deltaget. Brande Vandværk, Brande Djurs Vandforsyning Grenå - Anholt Forsyning Fåborg Vandforsyning Ikast Vandværk Lolland Kommune, Drift og Forsyning Ølstykke Vandværk Åbenrå Kommune, Vandforysningen Aalborg Kommune, Forsyningsvirksomhederne Desuden 7 vandværker, som ikke ønsker deres navn oplyst.

Miljøministeriet By- og Landskabsstyrelsen Haraldsgade 53 2100 København Ø Telefon 72 54 47 00 blst@blst.dk www.blst.dk