I II BBL Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) o BBL MacConkey II Aar with MUG- I Plate Rev. 03 April 2015 KVALITETSKONTROLPROCEDURER INDLEDNING Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (Trypticase sojaaar med 5 % fåreblod) brues til vækst af kræsne oranismer o til visualiserin af hæmolytiske reaktioner. MacConkey II Aar with MUG (MacConkey II aar med MUG) anvendes til den foreløbie identifikation af Escherichia coli. FUNKTIONSTESTPROCEDURE A. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood 1. Inokulér repræsentative prøver med fortyndiner af de kulturer, der er anført herunder. a. Tilfør med en volumetrisk pipettor eller tilsvarende metode 0,1 ml af en fortyndin, hvilket iver 30 til 300 CFU til hver plade, o inokulér ved hjælp af sprednin med en steril lasspreder. b. Inkubér Staphylococcus o Escherichia stammer ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære o Streptococcus stammer ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære beriet med kuldioxid. 2. Undersø pladerne efter 18 til 24 h for vækst, kolonistørrelse o hæmolytiske reaktioner. 3. Forventede resultater CLSI kontroloranismer (ATCC stammer) *Streptococcus pyoenes... Vækst, beta-hæmolyse (19615) *Streptococcus pneumoniae... Vækst, alfa-hæmolyse (6305) *Staphylococcus aureus... Vækst (25923) *Escherichia coli... Vækst (25922) *Anbefalet oranismestamme til bruerkvalitetskontrol. B. MacConkey II Aar with MUG 1. Inokulér repræsentative prøver med fortyndiner af de kulturer, der er anført herunder. a. Stry pladerne til isolerin med 18 til 24 h boillonkulturer fortyndet 10-1. For Proteus mirabilis laves to ekstra tifold-fortyndiner inden udstrynin. b. Inkubér pladerne ved 35 37 ºC i en aerob atmosfære. c. Inkludér Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood plader som non-selektive kontroller for alle oranismer. 2. Undersø pladerne efter 18 til 48 h for vækst, fluorescens, pimenterin o selektivitet. 3. Forventede resultater *Escherichia coli... Vækst, rosenrøde kolonier, fluorescens ATCC 25922 Proteus mirabilis... Vækst, farveløse kolonier, hæmnin af sværmnin, inen fluorescens ATCC 12453 *Salmonella enterica... Vækst, farveløse kolonier, inen fluorescens enterica underart... Typhimurium serotype ATCC 14028 *Enterococcus faecalis... Hæmnin (delvis eller fuldstændi), inen fluorescens ATCC 29212 *Anbefalet oranismestamme til bruerkvalitetskontrol. 1
III YDERLIGERE KVALITETSKONTROL 1. Undersø pladerne som beskrevet under Produktforrinelse. 2. Undersø visuelt repræsentative plader for at sikre, at eventuelle eksisterende fysiske defekter ikke vil påvirke anvendelsen. 3. Bestem ph potentiometrisk ved stuetemperatur for at overholde specifikationen på 7,4 ± 0,2 (TSA II) o 7,1 ± 0,2 (MacConkey II Aar with MUG). 4. Bemærk pladernes fasthed under inokulerinsproceduren. 5. Inkubér ikke-inokulerede repræsentative plader ved 35 ± 2 C i 72 h, o undersø dem for mikrobiel kontaminerin. PRODUKTINFORMATION IV TILSIGTET BRUG Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood brues til dyrknin af kræsne oranismer o til visualiserin af hæmolytiske reaktioner, som frembrines af mane bakteriearter. MacConkey II Aar with MUG anvendes til den foreløbie identifikation af Escherichia coli. V RESUMÉ OG FORKLARING A. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood Den ernærinsmæssie sammensætnin af Trypticase sojaaar har jort det til et populært medium, både usuppleret o som en base for medier indeholdende blod. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood brues i stor udstræknin til isolerin o dyrknin af kræsne mikrobearter o til bestemmelse af hæmolytiske reaktioner, som er vitie differentierinskarakteristika for bakterier, især Streptococcus arter. B. MacConkey II Aar with MUG BBL MacConkey II Aar formulerinen blev stillet til rådihed i 1983. Den blev specielt desinet til at forbedre hæmninen af sværmende Proteus arter for at opnå en mere definitiv differentierin af laktosefermentorer o ikke-fermentorer samt til vækstfremme af enteriske patoener. Trepeta o Edber 1 modificerede MacConkey Aar ved at inkorporere MUG (4-methylumbelliferyl-β-D-lukuronid). Resultatet var et medium, der jorde det mulit for forfatterne at lave en foreløbi identifikation af E. coli fra det primære plademedium inden for 5 min. VI PROCEDURENS PRINCIPPER A. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood Kombinationen af kasein o sojapeptoner i Trypticase sojaaarbasen ør mediet særdeles nærende ved at ive oranisk nitroen, især aminosyrer o storkædede peptider. Natriumchloriden opretholder osmotisk lievæt. Defibrineret fåreblod er det mest almindelit anvendte blod til at berie aarbasemedier. 2 Streptokokkers hæmolytiske reaktioner er typiske, o vækst af Haemophilus hemolyticus, et non-patoen, hvis hæmolytiske kolonier ikke kan skelnes fra kolonier af beta-hæmolytiske streptokokker, hæmmes. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) iver udmærket vækst o betahæmolyse ved Streptococcus pyoenes (Lancefield ruppe A) o iver oså udmærket vækst o passende hæmolytiske reaktioner med andre kræsne oranismer. Det er enet til bru med lavkoncentrations (0,04 enheder) bacitracin skiver (Taxo A) til foreløbi identifikation af ruppe A streptokokker (S. pyoenes). B. MacConkey II Aar with MUG MacConkey II Aar er et selektivt o differentielt medium. Det er kun let selektivt, da koncentrationen af aldesalte, som hæmmer rampositive mikrooranismer, er lav i sammenlinin med andre enteriske plademedier. Krystalviolet inkluderes oså i mediet for at hæmme vækst af rampositive bakterier, specielt enterokokker o stafylokokker. Differentierin af enteriske mikrooranismer opnås ved kombinationen af laktose o den neutralt røde indikator. Farveløse eller lyserøde til røde kolonier produceres, afhænit af isolatets evne til at fermentere kulhydratet. 2
De fleste stammer (96 97 %) af E. coli producerer et enzym, β-d-lukuronidase. 3 Enzymet hydrolyserer MUG til at afive 4-methylumbelliferon, en forbindelse, der fluorescerer under ultraviolet lys med lanbølelænde (366 nm). Tilsætninen af MUG til formulerinen tillader β-d-lukuronidase-positive stammer af E. coli at fluorescere blå-rønt, når de undersøes under ultraviolet lys. VII REAGENSER Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) Omtrentli formel* pr. liter oprenset vand Pankreatisk fordøjelse af kasein... 14,5 Papain-fordøjelse af sojabønnemåltid... 5,0 Natriumchlorid... 5,0 Aar... 14,0 Vækstfaktorer... 1,5 Defibrineret fåreblod... 5 % *Justeret o/eller suppleret som påkrævet for at opfylde funktionskriterier. MacConkey II Aar with MUG Omtrentli formel* pr. liter oprenset vand Pankreatisk fordøjelse af elatine... 17,0 Pankreatisk fordøjelse af kasein... 1,5 Peptisk fordøjelse af animalsk væv... 1,5 Laktose... 10,0 Galdesalte... 1,5 Natriumchlorid... 5,0 Neutral rød... 0,03 Krystalviolet... 0,001 MUG (4-methylumbelliferyl-β-D-lukuronid)... 0,1 Aar... 13,5 *Justeret o/eller suppleret som påkrævet for at opfylde funktionskriterier. Advarsler o forholdsreler Til in vitro dianostik. Hvis der ses for krafti futihed, inverteres bunden over et forskudt lå, hvilket iver mulihed for lufttørrin for at forhindre dannelse af en forselin mellem toppen o bunden af pladen under inkubation. Patoene mikrooranismer, herunder hepatitisvira o humant immundefekt virus, kan forekomme i kliniske prøver. Standardforholdsreler 4-7 o institutionelle retninslinier skal overholdes ved håndterin af alle emner, der er kontamineret med blod o andre leemsvæsker. Efter bru skal præparerede plader, prøvebeholdere o andre kontaminerede materialer steriliseres ved autoklaverin, inden de kasseres. Opbevarinsinstruktioner Opbevares efter modtaelse i mørke ved 2 8 C. Undå nedfrysnin eller overopvarmnin. Må ikke åbnes, før de skal brues. Minimér eksponerin for lys. Klarjorte plader skal opbevares i deres oriinale omsla ved 2 til 8 C indtil lie inden anvendelse. Kan inokuleres op til udløbsdatoen, o inkuberes i den anbefalede inkubationstid. Lad mediet opnå stuetemperatur inden inokulerin. Produktforrinelse Pladerne må ikke anvendes, hvis de viser ten på mikrobiel kontaminerin, misfarvnin, udtørrin eller andre ten på forrinelse. VIII PRØVEINDSAMLING OG -HÅNDTERING Præparater, der er enet til dyrknin, kan håndteres med forskellie teknikker. Læs relevante tekster for at få detaljerede oplysniner. 8,9 Præparaterne skal være opsamlet, inden der indives antimikrobielle stoffer. Sør for prompte leverin til laboratoriet. 3
IX PROCEDURE Vedlate materialer Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) o MacConkey II Aar with MUG (I Plate) Nødvendie materialer, der ikke er vedlat Hjælpedyrkninsmedier, reaenser, kvalitetskontroloranismer o laboratorieudstyr som påkrævet. Testprocedure Anvend aseptiske teknikker. Aaroverfladen skal være lat o futi, men uden overdreven fut. Udstry prøven så hurtit som mulit efter modtaelse i laboratoriet. Udstryninspladen anvendes primært til at isolere rene kulturer fra prøver, der indeholder blandet flora. Alternativt, hvis materialet dyrkes direkte fra en podepind, kan podepinden rulles over et lille område på overfladen ved kanten. Derefter stryes ud fra dette inokulerede område. Inkubér pladerne, der er beskyttet mod lys, ved 35 ± 2 C i 18 til 24 h. Ved præparater fra luftvejene inkuberes i en aerob atmosfære suppleret med kuldioxid. Ved andre præparater inkuberes aerobt uden tilsat CO 2. Bruerkvalitetskontrol Se Kvalitetskontrolprocedurer. Krav til kvalitetskontrol skal udføres i overensstemmelse med ældende lokale o/eller nationale reulativer eller akkrediterinskrav samt laboratoriets standardkvalitetskontrolprocedurer. Det anbefales at læse de relevante CLSI-retninslinjer o CLIA-reulativer mht. passende kvalitetskontrolprocedurer. X RESULTATER Efter inkubation vil de fleste plader vise et område med sammenflydende vækst. Da udstryninsproceduren i realiteten er en fortyndins teknik, deponeres et aftaende antal mikrooranismer på de områder, hvor udstryninen er sket. Som føle heraf bør et eller flere af disse områder udvise isolerede kolonier af oranismerne indeholdt i præparatet. Yderliere kan vækst af hver oranisme scores semikvantitativt på basis af vækst i hvert af de udstrøne områder. Typiske resultater på Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood er som føler: 1. Hæmolytiske streptokokker kan forekomme som ennemsitie eller uiennemsitie, rålie, små (1 mm), eller store matte o slimatie (2 til 4 mm) kolonier, omivet af en hæmolysezone. Gramfarvniner skal laves o undersøes for at kontrollere de makroskopiske fund. (Andre oranismer, som kan ive hæmolyse, omfatter Listeria, forskellie korynebakterier, hæmolytiske stafylokokker, Escherichia coli o Pseudomonas.) Ved rapporterin kan omtrentli kvantitetsbestemmelse af antallet af kolonier af hæmolytiske streptokokker være nyttit for klinikeren. 2. Pneumokkker forekommer normalt som meet flade, latte, ennemsitie, rålie o sommetider slimatie kolonier, omivet af en snæver zone af røn (alpha) hæmolyse. 3. Stafylokokker forekommer som uiennemsitie hvide til uldule kolonier med eller uden zoner af betahæmolyse. 4. Listeria. Der produceres små zoner af betahæmolyse. De kan kendes på deres stavform i farvniner o på bevæelihed ved stuetemperatur. 5. Andre oranismer, der repræsenterer minimal flora o klinisk sinifikante isolater, kan oså forventes at vokse på denne nonselektive formulerin. Typisk kolonimorfoloi på MacConkey II Aar with MUG er som føler: Kolonier af laktosefermenterende bakterier forekommer lyserøde til rosenrøde o kan være omivet af en zone af aldeudfældnin, hvorimod kolonier, der ikke fermenterer laktose, er farveløse. Undersø mediet under ultraviolet lanbølelys (366 nm). β-d-lukuronidase-positive kolonier har blårøn fluorescens; β-d-lukuronidase-neative kolonier fluorescerer ikke. 4
XI PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Det er rapporteret, at nole Enterobacteriaceae o Pseudomonas aeruinosa hæmmes på MacConkey Aar, når de inkuberes i en CO 2 -beriet atmosfære. 10 Ikke alle E. coli stammer fermenterer laktose eller producerer β-d-lukuronidase. Visse Salmonella o Shiella stammer producerer β-d-lukuronidase o vil fluorescere. 11 En lille procentdel af Yersinia o streptokokker er blevet rapporteret at have fluoresceret. 12 For at oranismerne skal kunne identificeres, skal de være i ren kultur. Der bør udføres morfoloiske, biokemiske o/eller seroloiske tests for at få en endeli identifikation. Læs de relevante tekster for detaljerede oplysniner o anbefalede procedurer. 8,9,13 XII FUNKTIONSDATA Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood blev brut som en kontrol i en undersøelse, der anvendte bouillon-forbedret kultur (Todd o Hewitt) o optisk immunanalysemetode til dianosticerin af beta-hæmolytisk streptokokinfektion. Femhundrede o to (502) præparater blev testet. TSA with 5% Sheep Blood havde en følsomhed o specificitet på henholdsvis 92,5 % o 99,4 %. 14 Nuyen et al. anvendte Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood som den yldne standard til påvisninen af ruppe B Streptococcus fra de nedre kønsdele hos ravide kvinder. 15 I en anden undersøelse enisolerede Rossmann et al. med succes Lautropia mirabilis på Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood fra mundhulen på børn, der er inficeret med HIV virus. 16 Af de 85 børn, der blev evalueret i denne undersøelse, var 35 (41,4 %) positive for L. mirabilis. Isenber et al. anvendte Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood som en kontrol for at evaluere isolerinen af Enterococcus fra et selektivt medium under undersøelse. 17 Der blev anvendt tohundrede o halvtres (250) ruppe D streptokokstammer isoleret fra klinisk materiale o 8 strammer taet fra National Communicable Disease Center (Atlanta, Ga.). MacConkey II Aar with MUG I en klinisk undersøelse, der blev foretaet på et universitetshospital, blev MUG inkorporeret i BBL MacConkey II Aar for at påvise tilstedeværelsen af β-lukuronidase. Det blev fundet, at den tid, der skulle til for at identificere E.coli stammer, blev reduceret fra en time til fem minutter, o evnen til at identificere denne oranisme i blandede prøver blev forbedret. 1 XIII BESTILLING Kat. nr. Beskrivelse 221949 BD BBL Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) o BD BBL MacConkey II Aar with MUG-I Plate, Pakke med 20 plader XIV LITTERATUR 1. Trepeta, R.W., and S.C. Edber. 1984. Methylum belliferyl-β-d-lucuronide-based medium for rapid isolation and identification of Escherichia coli. J. Clin. Microbiol. 19:172-174. 2. Vera, H.D., and D.A. Power. 1980. Culture media, p. 969. In E.H. Lennette, A. Balows, W.J. Hausler, Jr., and J.P. Truant (ed.), Manual of clinical microbioloy, 3rd ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 3. Killian, M., and P. Bulow. 1976. Rapid dianosis of Enterobacteriaceae. I Detection of bacterial lycosidases. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec. B, 84:245-251. 4. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 5. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 6. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbioloical and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printin Office, Washinton, D.C. 7. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to bioloical aents at work (seventh individual directive within the meanin of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 8. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbioloy, 8th ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 9. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2002. Bailey & Scott's dianostic microbioloy, 11th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 10. Mazura-Reetz, G., T.R. Neblett, and J.M. Galperin. 1979. MacConkey aar: CO 2 vs. ambient incubation, abstr. C 179, p. 339. Abstr. 79th Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1979. 11. Fen, P.C.S., and P.A. Hartmen. 1982. Fluoroenic assays for immediate confirmation of Escherichia coli. Appl. Environ. Microbiol. 43:1320-1329. 12. Robison, B.J. 1984. Evaluation of a fluoroenic assay for detection of Escherichia coli in foods. Appl. Environ. Microbiol. 48:285-288 13. Holt, J.G., N.R. Krie, P.H.A. Sneath, J.T. Staley, and S.T. Williams (ed.). 1994. Berey's Manual of determinative bacterioloy, 9th ed. Williams & Wilkins, Baltimore. 14. Fries, S.M. 1995. Dianosis of roup A streptococcal pharynitis in a private clinic: comparative evaluation of an optical immunoassay method and culture. J. Pediatr. 126:933-936. 5
15. Nuyen, T.M., et al. 1998. Detection of roup B streptococcus: comparison of an optical immunoassay with direct platin and broth-enhanced culture methods. J. Matern. Fetal. Med. 7:172-176. 16. Rossmann, S.N. et.al. 1998. Isolation of Lautropia mirabilis from oral cavities of human immunodeficiency virus-infected children. J. Clin. Microbiol. 36:1756-1760. 17. Isenber, H.D., D. Goldber, and J. Sampson, 1970. Laboratory studies with a selective medium. Appl. Microbiol. 20: 433-436. BD Dianostics Teknisk service o support: skal De kontakte den lokale BD repræsentant eller besø www.bd.com/ds. Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD 21152 USA Benex Limited Pottery Road, Dun Laohaire Co. Dublin, Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Loo, and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 2015 BD 6