Mercodia Lp(a) ELISA Brugsanvisning 10-1106-01 REAGENS TIL 96 BESTEMMELSER Til in vitro-diagnosticering Fremsstillet af Mercodia AB, Sylveniusgatan 8A, SE-754 50 Uppsala, Sverige
FORKLARING AF SYMBOLER ANVENDT PÅ ETIKETTER Reagens til 96 bestemmelser = 96 Udløbsdato Opbevar ved 2 8 C Partinr. Til in vitro-diagnosticering Mercodia 2009-2015
TILSIGTET ANVENDELSE Mercodia Lp(a) ELISA er en metode til kvantitativ bestemmelse af humant Lp(a) i serum eller plasma. OVERSIGT OG FORKLARING AF TESTEN Apolipoprotein(a), Apo(a), er et glykoprotein, som er sammenkædet af disulfid-broer, til apolipoprotein B i Lp(a) partiklen. Apo(a) er formet af tre forskellige strukturelle domæner. Et af domænerne, kaldet kringle 4, typ 2, er til stede i mange kopier, hvis antal varierer og er genetisk bestemt, hvilket forårsager forskellige størrelser af Apo(a). Afhængig af den anvendte metode, har man identificeret fra seks til 23 isoformer af Apo(a) i området fra omkring 300 til 900 kd (1,2,15,16). De fleste mennesker har to Apo(a) isoformer, selvom der ikke kan konstateres et Apo(a)-bånd hos visse forsøgspersoner, ved analyse i SDS-gel elektroforese efterfulgt af immunoblotting (3). På det seneste har der været megen fokus på Lp(a), da der er mange beviser for, at dets cirkulerende niveau af antikoagulationsmiddel udgør en selvstændig risikofaktor for hjerte- /karsygdomme. Man har konstateret, at Lp(a) niveauet udgør en medfødt risikofaktor for iskemisk hjertesygdom (4 8). Høje Lp(a) niveauer er blevet påvist i familiær hyperkolesterolæmi, og dens måling kan være klinisk anvendelig til risikovurdering ved disse patienter (9,10). Der er også offentliggjort resultater vedr. Lp(a) som en kraftig indikation for cerebrovaskulær sygdom (11,12). Apo(a) er homolog med protease zymogen plasminogen (13,14). Lp(a) har hæmmende effekt på aktiveringen af plasminogen, og nye undersøgelser har vist, at Apo(a) og Lp(a) konkurrerer med plasminogen om at binde plasminogen-receptoren. Disse egenskaber hos Apo(a) kan forklare forbindelsen mellem høje Lp(a) koncentrationer og myokardeinfarkt. PRINCIP FOR PROCEDUREN Mercodia Lp(a) ELISA er en tosidet solid phase enzym-immunoanalyse. Den er baseret på den direkte sandwich-teknik, hvor to monoklonale antistoffer rettes mod separate antigene determinanter på Apo(a) molekylet. Under inkubation reagerer Apo(a) i prøven med peroxydasekonjugeret anti-apo(a)-antistoffer og anti-apo(a)-antistoffer bundet til microtitreringsbrønden. En simpel skylning fjerner ubundet enzym-mærket antistof. Det bundne konjugat registreres ved reaktion med 3,3,5,5 -tetramethylbenzidin. Reaktionen stoppes ved at tilsætte syre for at give et kolorimetrisk endepunkt, der aflæses spektrofotometrisk. 3
ADVARSLER GO FORHOLDSREGLER Til in vitro-diagnostisering. Indholdet af dette sæt, samt rester deraf, må ikke komme i kontakt med drøvtyggende dyr eller svin. Stop Solution i dette sæt indeholder 0.5 M H 2 SO 4. Overhold almindelige forholdsregler for håndtering af farlige kemikalier. Alle patientprøver skal håndteres som potentielt smittefarlige. Hver brønd kan kun bruges en gang. Advarsel! Sættet indeholder potientielt smittefarlige reagenser! Sættet indeholder reagenser, der er fremstillet af humane blodkomponenter. Kildematerialet er blevet testet ved immunanalyse for hepatitis B-overfladeantigen, antistoffer mod hepatitis C virus og antistoffer mod HIV-virus og er fundet negativt. Men alle anbefalede forholdsregler for håndtering af blodderivater skal overholdes. Se HHS Publication no.(cdc) 88-8395 eller tilsvarende lokale/nationale retningslinjer for sikkerhedsprocedurer for laboratorier. NØDVENDIGE, MEN IKKE MEDFØLGENDE MATERIALER Pipetter med passende volumen (repetitionspipetter foretrækkes til tilsætning af enzyme conjugate 1X opløsning, Substrate TMB og Stop Solution) Rør, bægerglas og målebægre til klargøring af reagenser Redestilleret vand Magnetomrører Hvirvelblander Mikropladeaflæser (450 nm-filter) Rystebord (700-900 omdrejninger per minute, orbital bevægelse) Skylleanordning til mikroplader med overflow funktion (anbefalet men ikke påkrævet) 4
REAGENSER Hvert Mercodia Lp(a) ELISA sæt indeholder reagenser til 96 brønde, nok til 43 prøver og en kalibratorkurve i duplet. Til større analyseserier skal der bruges puljereagenser fra pakker med samme partinumre. Udløbsdatoen for hele sættet er angivet på den yderste etiket. Den anbefalede opbevaringstemperatur er 2 8 C. Coated Plate 1 plade 96 brønde Klar til brug Monoklonalt anti-apo(a) fra mus 8-brøndstrimler Ved ubrugte mikropladebrønde skal posen genforsegles med klæbebånd. Opbevares ved 2 8 C og bruges inden for 2 måneder. Calibrators 1, 2, 3, 4 4 hætteglas 500 μl Frysetørret Humant Lp(a) Tilsæt 500 μl Farvekodet gul redestilleret vand pr. Koncentration angivet på hætteglassets etiket. hætteglas Opbevaring af rekonstitueret. Calibrator i mere end 1 uge bør ske ved 20 C. Calibrator 0 1 hætteglas 500 μl Klar til brug Farvekodet gul Enzyme Conjugate 11X 1 hætteglas 700 μl Klargøring, se Peroxidase-konjugeret fra mus nedenfor monoklonalt Anti-Apo(a) Enzyme Conjugate Buffer 1 hætteglas 7 ml Klar til brug Farvekodet blå Pretreatment Solution 1 hætteglas 5 ml Klar til brug Sample Buffer 5X 2 flasker 50 ml Farvekodet rød. Fortynd hver flaske med 200 ml redestilleret vand for lave sample buffer 1X opløsning. Bemærk! Der kan forekomme bundfald, når det opbevares ved 2-8 C. Lad Sample Buffer 5X nå stuetemperatur. Omryst eller bland med vortex-blander, indtil bundfaldet er opløst. Wash Buffer 21X 1 flaske 50 ml Fortynd med 1000 ml redestilleret vand for lave at wash buffer 1X opløsning. Opbevaring efter fortynding: 2-8 C i 2 måneder. Substrate TMB 1 hætteglas 22 ml Klar till brug Farveløs opløsning. Bemærk! Lysfølsom! Stop Solution 1 hætteglas 7 ml Klar till brug 0.5 M H 2 SO 4 Dansk 5
Forberedelse af enzyme conjugate 1X opløsning Klargör den påkrævede mængde af enzyme conjugate 1X opløsning ved at fortynde Enzyme Conjugate 11X med Enzyme Conjugate Buffer (1+10) i henhold till till tabellen nedenfor. Hvis der forberedes enzyme conjugate 1X opløsning til en hel plade, hæld hele indholdet af Enzyme Conjugate Buffer over i Enzyme Conjugate 11x røret. Bland forsigtigt. Oppbevaring efter fortynding: 2 uger (2-8 C) Antal strimler Enzyme Enzyme Conjugate Conjugate 11X Buffer 12 strimler 1 hætteglas 1hætteglas 6 strimler 300 μl 3.0 ml 4 strimler 200 μl 2.0 ml UDTAGNING OG HÅNDTERING AF PRØVER Serum Tag blod ved venepunktur, lad det koagulere, og adskil serummet ved centrifugering. Prøver kan opbevares ved 2-8 C i en uge. Længere opbevaring skal ske ved -20 C. Undgå at nedfryse og optø af flere omgange. Plasma Tag blod ved venepunktur i rør med EDTA eller heparin som antikoagulant, og adskil plasmafraktionen ved centrifugering. Prøver kan opbevares ved 2-8 C i en uge. Længere opbevaring skal ske ved -20 C. Undgå at nedfryse og optø af flere omgange. KLARGØRING AF PRØVER Alle prøver skal forbehandles på følgende måde: 1 Prøve 25 μl 2 Pretreatment Solution 25 μl 3 Bland og inkuber i 1 time ved stuetemperatur 4 Tilsæt sample buffer 1X opløsning og bland 5.0 ml Som et resultat af denne procedure fortyndes prøverne med 1/202. Denne fortynding kan holde i 1 uge ved 2 8 C. Hvis koncentrationen af Lp(a) i prøven er >1000 U/L, fortyndes den forbehandlede og fortyndede prøve (1/202) yderligere i prøve buffer, f.eks. 1/4 hvilket giver en endelig fortynding i forholdet 1/808. 6
TESTPROCEDURE Klargør enzyme conjugate 1X opløsning, wash buffer 1X opløsning og sample buffer 1X opløsning. Udfør hver bestemmelse i duplet for Calibrators, kontroller og prøver. Lav en kalibratorkurve for hver analyskørsel. Undgå at pipetteopløsninger kommer på glassets vægge. Tilsæt til anti-apo(a) brønde Calibrators Prøver 1 Calibrators 25 μl 2 Forbehandlede prøver/kontroller 25 μl 3 Enzyme conjugate 1X opløsning 50 μl 50 μl 4 Inkuber på et rystebord (700-900 rpm) i 1 time ved stuetemperatur (18 25 C). 5 Vask 6 gange med 700 µl wash buffer 1X opløsning per brønd, anvend en automatisk pladevasker med overflow funktion. Efter sidste skylning vendes og bankes pladen mod absorberende papir. Benyt ikke soak funktion i vaske proceduren. Eller manuelt, Bortkast væsken i pladen ved at vende den på hovedet over en vask. Tilsæt 350 µl wash buffer 1X opløsning til hver brønd. Bortkast wash buffer 1X opløsning, bank pladen flere gange mod absorberende papir for at fjerne overskydende væske. Gentag 5 gange. Undgå at forlænge perioden hvor brøndene står med væske i løbet af vaskeperioden. 6 Tilsæt 200 μl Substrate TMB 7 Inkuber i 15 minutter 8 Tilsæt 50 μl Stop Solution. Placer pladen på et rystebord i 5 sekunder for at sikre blandingen af Substrate TMB og Stop Solution. 9 Aflæs optisk densitet ved 450 nm, og beregn resultaterne. Aflæs inden for 30 minutter Obs! Vær ekstra omhyggelig med ikke at forurene TMB Substrat med enzymkonjugatopløsning INTERN KVALITETSKONTROL Interne plasmapuljer med lave, mellem og høje Lp(a)-koncentrationer skal regelmæssigt analyseres som prøver, og resultaterne afbildes fra dag til dag. Der er god laboratoriepraksis at registrere følgende data for hver analyse: sættes partinummer; rekonstitueringsdatoer for sættets komponenter; OD-værdier for blindprøver og Calibrators. Laboratoriet skal følge regeringens regulativer eller akkrediterings krav for frekvens af kavalitetskontrol. Dansk BEREGNING AF RESULTATERNE Databehandlet beregning For at finde koncentrationen af Lp(a) skal der foretages en databehandlet datareduktion af absorbans for Calibrators, bortset fra Calibrator 0, mod koncentrationen vha. en cubic regression. Koncentrationen af de prøver multipliceres med fortyndingens faktor (f.eks. 202). 7
Manuel beregning 1. Plot de absorbansværdier, der er opnået for Calibrators, bortset fra Calibrator 0, mod Lp(a)-koncentrationen på et lin-lin papir og tegn en kalibratorkurve. 2. Aflæs koncentrationen for de prøver fra kalibratorkurven. 3. Multiplicer koncentrationen af de prøver med fortyndingens faktor (f.eks. 202). Eksempel på resultater Eksempel på resultater Brønde Værdier opnået Identitet med et 8 ugers gammel sæt. A450 Gennensnit konc. U/L * 1A B Brønde Identitet Calibrator 0 A450 0.061/0.064 Gennemsnit konc. U/l* 1C D 1A B Calibrator Calibrator 0 1 ** 0.061/0.064 0.194/0.197 1E F 1C D Calibrator Calibrator 0.31 2 ** U/l 0.194/0.197 0.535/0.537 62.6 1G H 1E F Calibrator Calibrator 1.11 3 ** U/l 0.535/0.537 1.129/1.131 224.2 2A B Calibrator 4 1G H Calibrator 2.8 ** 1.835/1.837 U/l 1.129/1.131 565.6 2C D Prøve 1 0.286/0.286 104.5 2A B Calibrator 5.6 U/l 1.835/1.837 1131.2 2E F Prøve 2 0.562/0.563 238.4 2C D Control L 0.239/0.242 83.8 2G H Prøve 3 1.070/1.073 525.4 2E F Control H 0.515/0.515 215.4 2G H Ukendt 1 0.286/0.286 104.5 * 3A B Resultat multipliceret Ukendt 2 med fortyndningens 0.562/0.563 faktor ( 202). 238.4 ** Koncentration angivet på hætteglassets etiket. 3C D Ukendt 3 1.070/1.073 525.4 Eksempel * Resultat multipliceret på kalibreringskurve med fortyndingens faktor ( 202). Der vises en typisk kalibreringskurve. Brug ikke denne kurve til at bestemme faktiske analyseresultater. Eksempel på kalibreringskurve Der vises en typisk kalibreringskurve. Brug ikke denne kurve til at bestemme faktiske analyseresultater. 2 1.5 OD O.D. 450 nm 1 0.5 0 0 1 2 3 4 5 6 U/L U/l PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Som ved alle diagnosticeringsanalyser må en definitiv klinisk diagnose ikke baseres på 8 resultaterne af en enkelt analyse, men skal foretages af lægen, efter at alle kliniske resultater er
PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Som ved alle diagnosticeringsanalyser må en definitiv klinisk diagnose ikke baseres på resultaterne af en enkelt analyse, men skal foretages af lægen, efter at alle kliniske resultater er blevet bedømt. Stærkt lipæmiske, ikteriske eller hæmolyserede prøver forstyrret ikke analysen. SAMMENLIGNING MED MED MERCODIA APO(a) APO(a) RIA RIA Sammenlignende undersøgelser mellem Mercodia Lp(a) Apo(a) ELISA ELISA og Mercodia og Mercodia Apo(a) Apo(a) RIA er RIA er blevet foretaget med 45 45 prøver, der der er er analyseret 22 gange ved ved 22 lejligheder. De De fundne værdier viser en en god god korrelation mellem de de to to teknikker, r=1.00 (se (se diagram). De forventede værdier for Mercodia De forventede Apo(a) RIA værdier kan også for anvendes Mercodia for Apo(a) Mercodia RIA kan Lp(a) også ELISA. anvendes for Mercodia Apo(a) ELISA. 1250 Mercodia Mercodia Lp(a) Apo(a) ELISA ELISA (U/L) ( U/l) 1000 750 500 250 0 0 250 500 750 1000 1250 Mercodia Apo(a) RIA (U/l) (U/L) FORVENTEDE VÆRDIER God praksis foreskriver, at hvert laboratorium fastlægger sine egne intervaller for forventede værdier. Følgende resultater, der opnås med Mercodia Apo(a) RIA, kan fungere som en vejledning, indtil laboratoriet selv har indsamlet tilstrækkelige data. Apolipoprotein(a) niveauet er blevet undersøgt i tre forskellige materialer: A Raske1, n=171, Sverige (kaukasisk) B Raske1, n=203, Canada (kaukasisk-asiatisk, heterogen) C Patienter med familiær hyperkolesterolæmi (FH), n=113, Canada (kaukasisk-asiatisk, heterogen) Gruppen med raske var udvalgte personer fra den almindelige befolkning og uden nogen tilsyneladende hjerte-kar- og/eller cerebrovaskulær sygdom. Fordelingen er vist i de følgende diagrammer. De tre undersøgte grupper viste ingen alders- eller kønsmæssige forskelle i deres apolipoprotein(a)-niveauer. Der blev ikke fundet nogen markant forskel i apolipoprotein(a)-niveauerne mellem grupperne med raske fra Sverige og gruppen med raske fra Canada. 9 Gruppen med FH-patienter havde markant højere apolipoprotein(a)-niveauer end gruppen Dansk Dansk
FORVENTEDE VÆRDIER God praksis foreskriver, at hvert laboratorium fastlægger sine egne intervaller for forventede værdier. Følgende resultater, der opnås med Mercodia Apo(a) RIA, kan fungere som en vejledning, indtil laboratoriet selv har indsamlet tilstrækkelige data. Lp(a) niveauet er blevet undersøgt i tre forskellige materialer: A Raske, n=171, Sverige (kaukasisk). B Raske, n=203, Canada (kaukasisk-asiatisk, heterogen). C Patienter med familiær hyperkolesterolæmi (FH), n=113, Canada (kaukasisk-asiatisk, heterogen). Gruppen med raske var udvalgte personer fra den almindelige befolkning og uden nogen tilsyneladende hjerte-kar- og/eller cerebrovaskulær sygdom. Fordelingen er vist i de følgende diagrammer. De tre undersøgte grupper viste ingen alders- eller kønsmæssige forskelle i deres Lp(a)-niveauer. Der blev ikke fundet nogen markant forskel i Lp(a)-niveauerne mellem grupperne med raske fra Sverige og gruppen med raske fra Canada. Gruppen med FH-patienter havde markant højere Lp(a)-niveauer end gruppen med raske fra det samme område (p<0.001, Wilcoxon rank sum test). Følgende Lp(a)-koncentrationer for median, 75, 85 og 95 percentiler blev opnået for de forskellige grupper. Median 75 perc. 85 perc. 95 perc. U/L U/l U/L U/l U/L U/l U/L U/l Raske, Sverige 131 448 612 795 Raske, Canada 117 379 525 1044 FH, Canada 294 660 863 1544 Apo(a) Lp(a) fordeling af af raske og og FH-patienter (Canada) (Canada) Cumulative frequency (%) 100 75 50 25 Normals FH patients 0 10 100 1000 Lp(a) Apo(a) U/L U/l 10
Fordelning Distribution af of raske normals (Canada) (Canada) 40 English Relative frequency (%) 30 20 10 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 Lp(a) U/L U/l 1400 1500 1600 1700 1800 1900 2000 2100 Fordeling Distribution af raske of normals (Sverige) (Sweden) 40 Relative frequency (%) 30 20 10 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 U/l Lp(a) U/L 1400 1500 1600 1700 1800 1900 2000 2100 Fordeling Distribution af FH-patienter of patients (Canada) (Canada) 40 Relative frequency (%) 30 20 10 Dansk 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 U/l Lp(a)U/L 1400 1500 1600 1700 1800 1900 2000 2100 13 11
YDEEVNE Registreringsgrænse Detektionsevnen skal betragtes som en del af metodevalideringen snarere end den laveste målbare koncentration. Detektionsgrænsen er 0.07 U/L bestemt ved hjælp af metodikken, der er beskrevet i ISO11843- Part 4. Koncentrationen af prøver med en absorbans, der ligger under Calibrator 1, skal ikke beregnes, men istedet udtrykkes som mindre end eller lig med ( ) koncentrationen, der er angivet på hætteglasset med Calibrator 1. Genfinding Genfinding efter tilsætning er 96 111 % (gennemsnit 102 %). Hook effect Prøver med en Lp(a) koncentration på op til 9600 U/L kan måles uden at få falsk lave resultater, hvis disse er forbehandlede og fortyndede 1/202 som beskrevet ovenfor. Coefficient of variation Prøve Gennemsnit U/L inden for analyse % mellem analyse % samlet analyse % 1 2 3 83 196 485 3.3 2.9 2.4 4.0 3.6 1.8 5.2 4.7 3.0 Prøver, der er forbehandlede og fortyndede 1/202 ved hver testlejlighed. Hver prøve analyseres 5 gange ved 5 forskellige lejligheder. Coefficient of variation Sample Gennemsnit U/L inden for analyse % mellem analyse % samlet analyse % 1 2 3 103 251 744 3.1 3.6 2.4 4.2 3.7 5.2 5.2 5.2 5.7 Specificitet En koncentration på op til 10 g/l plasminogen giver ingen målelig krydsreaktion i undersøgelsen. (Klinisk koncentration af plasminogen er under 2.1 g/l). Apolipoprotein B har ingen målbar krydsreaktion. 12
KALIBRERING Mercodia Lp(a) ELISA sættet er kalibreret mod en meget renset, helt valideret, kommerciel Lp(a) klargøring. Koncentrationen af Mercodia Lp(a) ELISA udtrykkes i Units/L. GARANTI De angivne ydeevnedata blev opnået ved hjælp af den angivne fremgangsmåde. Alle ændringer af fremgangsmåden, der ikke anbefales af Mercodia AB, kan påvirke resultaterne, og i dette tilfælde ophæver Mercodia AB alle garantier, det være sig udtrykkelige, stiltiende eller lovbefalede, herunder den stiltiende garanti for salgbarhed og egnethed til et bestemt formål. I et sådant tilfælde kan Mercodia AB og dennes autoriserede distributører ikke drages til ansvar for indirekte skader eller følgeskader. Dansk 13
REFERENCER 1 Utermann G. (1989) The mysteries of lipoprotein (a). Science 17 Nov:904 910 2 MBewu AD and Durrington PN (1990) Lipoprotein (a): structure, properties and possible involvement in trombogenesis and atherogenesis. Atherosclerosis 85:1 14 3 Albers JJ, Marcovina SM and Lodge MS (1990) The unique lipoprotein(a): properties and immunochemical measurement. Clin Chem 36: 2019 2026 4 Rosengren A, Wilhelmsen L, Eriksson E, Risberg B and Wendel H (1990) Lipoprotein(a) and coronary heart disease: a prospective case control study in a general population sample of middle aged men. Br Med J 301:1248 1251 5 Rhoads GG, Dahlén G, Berg K, Morton NE and Danneberg AL (1986) Lp(a) Lipoprotein as a risk factor for myocardial infarction. JAMA 256:2540 2544 6 Dahlen GH, Guyton JR, Attar M, Farmer JA, Kautz JA and Gotto AM Jr (1986) Association levels of lipoprotein Lp(a), plasma lipids and other lipoproteins with coronary artery disease documented by angiography. Circulation 74:758 765 7 Dembinski T, Nixon P, Shen G, Mymin D and Choy PC. (2000) Evaluation of a new apolipoprotein(a) isoform-independent assay for serum Lipoprotein(a). Mol Cell Biochem 207:149 155 8 Houlston R and Friedl W (1988) Biochemistry and clinical significance of lipoprotein (a). Ann Clin Biochem 25:499 503 9 Wiklund O, Angelin B, Olofsson SO, Eriksson M, Fager G, Berglund L and Bondjers G(1990) Apolipoprotein (a) and ischaemic heart disease in familial hypercholesterolaemia. Lancet 335:1360 1363 10 Seed M, Hoppichler F, Reaveley D, McCarthy S, Thopmson GR, Boerwinkel E and Utermann G (1990) Relation of serum lipoprotein(a) concentration and apolipoprotein(a) phenotype to coronary heart disease in patients with familial hypercholesterolemia. New En J of Med 322:1494 1499 11 Zenker G, Költringer P, Boné G, Niederkorn K, Pfeiffer K and Jürgens G (1986) Lipoprotein (a) as a strong indicator for cerebrovascular disease. Stroke 17:942 945 12 Murai A, Miyahara T, Fujimoto N, Matsuda M and Kameyama M (1986) Lp(a) lipoprotein as a riskfactor for coronary heart disease and cerebral infarction. Atherosclerosis 59:199 204 13 McLean JW, Tomlinson JE, Kuang WJ, Eaton DL, Chen EY, Fless GM, Scanu AM and Lawn RM (1987) cdna sequence of human apolipoprotein(a) is homologous to plasminogen. Nature 330: 132 137 14 Eaton DL, Fless GM, Kohr WJ, McLean JW, Xu QT, Miller CG, Lawn RM and Scanu AM (1987) Partial amino acid sequence of apolipoprotein (a) shows that it is homologous to plasminogen Biochemistry 84:3224 3228 15 Lackner C, Boerwinkle E, Leffert CC, Rahmig T and Hobbs HH (1991) Molecular basis of apolipoprotein(a) isoform size heterogenity as revealed by pulsed-field gel electrophoresis. J Clin Invest 87:2153 2161 16 Kamboh MI, Ferrell RE and Kottke BA (1991) Expressed hypervariable polymorphism of apolipoprotein (a). Am J Hum Genet 49:1063 1074 17 Solymoss BC, Marcil M, Wesolowska E, Gilfix BM, Lespérance J and Campeau L (1993) Relation of coronary artery disease in women <60 years of age to the combined elevation of serum lipoprotein(a) and total cholesterol to high-density cholestrolratio. Am J Cardiol 72:1215 19. 14
Tilsæt Calibrators, forbehandlede kontroller* och prøver Tilsæt enzyme conjugate 1X opløsning OVERSIGTSPROTOKOLARK Mercodia Lp(a) ELISA 25 μl 50 μl X-O Graf Tryckeri AB Inkuber 1 time ved 18 25 C på et ryste-bord, 700-900 rpm Vask 700 µl, 6 gange Tilsæt Substrate-TMB 200 μl Inkuber 15 min Tilsæt Stop Solution 50 μl Ryst i 5 sekunder for sikre blanding Aflæs A 450 Evaluere resultaterne * ikke medsendt For alle detaljer se side 7 31-3104 Version 8.0 16