Fisk som forsøgsdyr (Hormonforstyrrende stoffer) Henrik Holbech Biologisk Institut, SDU Odense

Fisk som forsøgsdyr (Hormonforstyrrende stoffer) Henrik Holbech Biologisk Institut, SDU Odense

Fisk som forsøgsdyr (Hormonforstyrrende stoffer) Både miljø og sundhed Miljø Kemikalier/Forurening risikovurdering Sundhed Fisk og pattedyr har samme hormonsystem

Zebrafisk som forsøgsdyr

Zebrafisk som forsøgsdyr Tropisk art Lille fisk kort generationstid Kontinuert æglæggende, gennemsigtige æg, genetisk kortlagt

Zebrafisk som forsøgsdyr Der er udgivet mere end 17 000 artikler om zebrafisk og forskning. Transgene zebrafisk: Et responselement kobles til et reporter-gen A: Normal zebrafisk B: zebrafisk med humant pigment gen

Påvisning af hormonforstyrrende effekter

Blommeproteinsyntese som markør for østrogen påvirkning Gonadotropiner Østrogen Lever Æggestok Blommeprotein (Vitellogenin)

Regnbueørred Copyright Lisette B. Christiansen

Kønsdifferentiering hos fisk Genetisk køn: XX XY Fænotypisk køn fysisk oversættelse af det genetiske køn. Det fænotypiske køn er påvirkeligt hos fisk Nogle udviklingsperioder er meget følsomme.

Fish Sexual Development Test (FSDT) En OECD test-guideline Kønsdifferentiering hos fisk Let at påvirke med kemikalier/hormoner: Østrogener hunner Androgener hanner Aromatasehæmmere - hanner

FSDT Forsøgsdesign (zebrafisk) Eksponering starter Kontrolgruppe og mindst 3 testkoncentrationer 160 befrugtede æg fordelt på mindst 4 replikater pr. koncentration Eksponering slutter Dage efter klækning -3 0 10 20 40 60 Befrugtning Klækning Ovariedannelse starter Transformation af ovarier til testikler starter Differentiering af gonaderne afsluttes Differentiering af gonaderne afsluttes

FSDT setup

Biomarkører og endpoints klækning overlevelse vækst vitellogenin kønsratio Histopathology (option) C ut behind dorsal fin C ut behind pectoral fin

Matrix Østrogene Sex-ratio hunner, Anti-androgene Sex-ratio hunner, Anti-østrogene Sex-ratio hanner, Androgene Sex-ratio hanner, Aromatasehæmmere Sex-ratio hanner, Vtg op i hanner og hunner Vtg op i hanner, uændret i hunner? Vtg ned i hunner og hanner? Vtg uændret eller ned i hanner Vtg ned i hunner

Prochloraz (svampemiddel) Brugt som modelstof for aromatasehæmning i FSDT validering Vitellogenin og kønsratio analyseret dag 60 A FSDT zebrafisk, hunner 0-60 dage FSDT zebrafisk, kønsratio 0-60 dage 1e+7 100 1e+6 80 ng vitellogenin/g fisk 1e+5 1e+4 1e+3 * * * % 60 40 20 * * * * * 1e+2 1e+1 control 77 25 24 10 4 60 µg/l 135 µg/l 183 µg/l 233+1166 µg/l Eksponeringskoncentrationer 0 control female Male intersex undifferentiated * * * 175 81 84 75 79 77 60 µg/l 135 µg/l 183 µg/l 233 µg/l 1166 µg/l Eksponeringskoncentrationer

Trenbolone Et syntetisk væksthormon til kvæg Brugt som androgent modelstof i FSDT udvikling I Bl.a. USA implanteres kvæg med 140 mg trenbolone Forbudt i EU

Trenbolone Vitellogenin og kønsratio ng vitellogenin/g fish 100 10 * * % 100 80 60 40 * * * * * * * Female Male Intersex Undifferentiated 20 1 control < 5 ng/l 9,7 ng/l 23 ng/l Exposure Trenbolone 117 ng/l 2779 ng/l 0 91 27 39 39 65 67 Control < 5 ng/l 39 9.7 ng/l 23 ng/l 117 ng/l 67 2779 ng/l trenbolone trenbolone trenbolone trenbolone trenbolone

100 mg hver anden dag! Anbefalet dosis Googling Trenbolone

Trenbolone, et væksthormon til kvæg Kan det være et problem i Europa? Kun hanner ved 10 ng/l : Svømmehal = 500 m 3 vand. 5 mg trenbolone => 100 % hanner 1 dosis trenbolone => 20 svømmehaller X-Trenbolon 10 ml vial - 200 mg/ml 800 DKK

17β-estradiol (E2) Østrogent modelstof i FSDT udviklingen ng vitellogenin/g fish 10 8 10 7 10 6 10 5 10 4 10 3 10 2 * * * % 100 80 60 40 * * * Female Male Intersex Undifferentiated 10 1 20 10 0 20 20 20 20 20 20 20 20 20 control Ethanol control 4 ng E2/l 8 ng E2/l 14 ng E2/l 24 ng E2/l 17β-estradiol exposure 54 ng E2/l 96 ng E2/l 250 ng E2/l 0 32 36 Control Solvent control 32 35 35 35 37 30 35 8 ng/l 14 ng/l 24 ng/l 54 ng/l 96 ng/l E2 E2 E2 E2 E2 4 ng/l E2 250 ng/l E2

Gravide kvinder og 17 b-estradiol En gravid kvinde udskiller ca 20 mg E2/døgn Ingen hanner ved 54 ng/l : Svømmehal = 400 m 3 vand. => 100 % hunner

Fish Sexual development Test (FSDT) To endokrine markører Vitellogenin Biomarkør virkningsmekanisme Kønsratio Populationsrelevant TG 229 TG 230 (Screeningsassays) Risikovurdering af kemikalier

ERROR: undefined OFFENDING COMMAND: f ~ STACK: