Vanderwall D. K. The heat is on: Whats new for suppression of estrus in mares Jornal of Clinical Theriogenology 2009;1:207-13

Transkript

1 SvH s Årsmøde November 2012 Specialdyrlæge i Reproduktion hos Heste Ansager Dyrehospital Gartnerhaven Ansager jespermoller@ansagerdyrehospital.dk Undertrykkese af østrus. Vanderwall D. K. The heat is on: Whats new for suppression of estrus in mares Jornal of Clinical Theriogenology 2009;1: Exogen progesteron/progestiner Forlængelse af Corpus Luteum funktion Glas/Sølv/Plastik kugle Oxytocin i diøstrus Nedregulation af den neurohormonale akse Gnrh-agonister Anti-GNRH vaccine Ovariectomi Abortering efter dag 36 Daglig indgift af Altronogest Regumate 1 ml / 50 kg 0,0044mg/kg Daglig indgift nødvendig Andre progesteron præparater? Bivirkninger Forskning ligger langt tilbage Doping Ingen evidens baserede undersøgelser Forbund/Poiltik 1

2 13 behandlede hopper mellem dag 5 og 11 efter inseminering 12 kontrol hopper Ingen forskel fundet i senere drægtighedsrate samt Embryo størrelse og udvikling mellem kontrol- og behandlet gruppe 12 behandlede og 12 kontrol hopper Forlænget CL funktion hos 9 behandlede mod 0 kontrolhopper Gns. 57 dage hos behandlede mod gns. 16 dg hos kontrolhopper Let forøget væske hos 6 ud af 9 behandlede Ingen neutrofile eller bakterier Ingen forskel i endometreibiopsi scores mellem behandlet og kontrol PGF2α sekretion var nedreguleret i alle behandlede hopper Den fysiske tilstedeværelse efterligner på ukendt vis conceptus Proceedings Society for Theriogenology 2012 side i.e. oxytocin dgl. i diøstrus dag 7-14 Nedregulerer udskillelse af PGF2α fra endometriet så luteolyse forstyrres og skaberforlænget CL funktion dage 9 behandlede og 9 kontrol Teasing og daglig måling af progesteron 6 af 9 behandlede havde forlænget CL funktion i gns. 68,8 dage 2 af 9 kontrol havde forlænget CL funktion i gns 77,5 dage Svage østrus symptomer kunne findes hos 3 af 8 hopper med forlænget CL funktion Forlænget CL funktion kan opnås hos ca. 2/3 af behandlede hopper Deslorelin 2,3 mg, sc implantat, Ovuplant R Deslorelin 4,7 mg, retard præparat, sc implantat, Suprelorin R Suprimerer hypofysefunktionen Nedregulerer evenen til at syntetisere/frigive FSH og LH Virkningsperiode? Doping? 2

3 Blokerer udskillelsen af GNRH Vaccineres initialt 2 x med 4 ugers interval Virkningsperiode ca. 50 uger Ikke alle kommer tilbage i cyklus Doping? Registreret i DK til svin, men rapporteret bivirkninger som hævelser, bylder og ømhed Registreret i Australien i hestevenlig formulering. 9 vaccinerede og 9 kontrol hopper Ugentlig ultralydsscanning 3-60 uger Teasing Ugentlig blodprøve for progesteron, østradiol og GNRH-antistoffer Vaccination reducerede alle parametre (P>0,05) Alle vaccinerede stoppede cyklus inden for 8 uger og forblev acykliske i mindst 23 uger 3 fortsatte med at udvise svage brunsttegn hver 3. uge En hoppe var ikke i cyklus igen efter 2 år Normal inseminering Manuel eller kemisk abort efter dag 36 Bivirkninger Etik Man får en vallak Ikke alle får ændret adfærd Stadig mulig brunstadfærd pga østrogen fra binyrebarken Irreversibel Infektionsrisiko Risiko for sammenvoksninger Ingen doping Stående operation Kolportomi Gennem flanken Laparoskopi Med fjernelse af ovarier Ved blokering af blodforsyning til ovarier 3

4 Spørgeskemaundersøgelse 23 hopper Opførselsproblem eller agression Generel tilfredshed 18/23 (78%) Bedring af specifikke problemer 86% Bedring af ulydighed 81% Mindre excitation 75% mindre bidden og sparken 73% Bedring af problemer i træning 72% Mindre urinering i sjatter 64% Bedre over for andre heste 64% Ingen metode er perfekt Der findes en hel pallet af behandlingsmetoder Individuel evaluering sammen med klienten er nødvendig Paul Loomis (personal communication 2010): People like you and me, we kill a lot of sperms! Toksisk Indeholder vand Uønsket ved frysning Indeholder proteiner Beskytter levende celler Hjælper med udskillelse af døde celler (Troedsson et al. 2010) Bufferprincip Næringsstoffer Fortynding Koncentrerer ikke sæden Kun til kølesæd Centrifugering Pakker cellerne hårdt, cussion? Ødelægger sædceller Dårligt for i forvejen kompromiterede spermier Kan forbedre kvalitet af kølesæd Nødvendig ved indfrysning Forsvinder % sædceller i processen Filtrering Ny metode Lavteknologsik 4

5 Kommercielt tilgængelige filtre Syntetisk hydrofil membran Porestørrelse 2 μm Tilbageholder spermier Filtrerer vand Kan genbruges 10 X til samme hingst Dyrt Newshour 2012\147.flv 8 ejakulater fra 8 hingste Fortynding 1:2 i kommerciel fortynder Filter A, pore str. 2 μm, flere porer pr. cm 2 Filter B, pore str. 2 μm, færre porer pr cm 2 Centrifugering Med og uden køling CASA + membranintegritet, ANOVA Spermier genfundet: A = 95%, B = 92% Ingen signifikant forskel på Total motilitet Progessiv motilitet VAP, VSL og VCL Plasma membrane integrity Dog stor talmæssig forskel på PMI A = 61,0 B = 63,5 Kontrol = 61,5 Centrifugereing = 49,0 God genfindelsesprocent Ingen skade på spermier Kun hingste med god sædkvalitet i forsøg Måske signifikans på PMI ved flere prøver Både A og B potentielt anvendeligt til koncentrering af spermier Frysning Lav dosis Inseminering Dårlig sædkvalitet Kommercielt filter bør udvikles 5

6 31 hingste uden problemer med sædkvalitet Fotyninding 1:1 med skummetmælksfortynder Sammenligner fjernelse af sædplasma ved Konventionel centrifugering 600 G i 10 minutter i 50 ml konisk glas, fjernelse af supernatant med sprøjte og kanyler og resususpension af pellet i fortynder Centrifugering med cushion 600 G i 10 minutter i 50 ml konisk glas med minitübe cushion fluid i bunden, fjernelse af supernatant med sprøjte og kanyler og resususpension af pellet i fortynder Filtrering Botu Sperm filter R Eksperiment 1 Frysning i BotuCrio Ingen forskel før og efter frysning (P>0,05) Sperm kinetics PMI Eksperiment 2 Kølesæd i BotuSemen (Skummetmælk) Ingen forskel før og efter frysning (P>0,05) Sperm kinetics PMI Eksperiment 3 2 ejakulater fra 10 hingste Fortyndet til kølesæd og kølet 24 timer ved 5 0 C Centrifugering og filtrereing samt refortynding Sperm kinetics and PMI e. 24 og 48 timer ved 5 0 C Total motilitet, progressiv motilitet og PMI var bedre for filtreret sæd (P<0,05) Eksperiment 4 Et ejakulat fra 12 hingste Fortyndet til 90 ml og delt i tre Centrifugeret med og uden cushion samt filtreret Refortyndet med skummetmælksfortynder Sperm kinetics and PMI Sperm longevity (SL) var bedre for filtreret sæd (P<0,05) alle andre målinger var uden significans (P>0,05) Eksperiment 5 (Bakteriel kontamination) 12 hingste, penis vasket med vand før tapning Fortynding 1:1 med skummetmælksfortynder med antibiotika Centrifugering og filtrereing samt refortynding Opbevaret 24 timer ved 15 0 C BU på ufortyndet, frisk fortyndet og opbevaret sæd CFU: ufortyndet=236926, frisk=394, filtr.=94 (P<0,05) Forskel i de isolerede arter Flest isolerede arter i ufortyndet sæd Eksperiment 6 (fertilitetsresultater) 24 hopper insemineret med samme hingst Induktion af ovulation med deslorelin AI efter 24 timer med 1 milliard spermier AI med filtreret og centrifugeret sæd som eksperiment 2 (12 i hver gruppe) Drægtighedsus. med ultralyd dag 15 Filtreret: 9/12 drægtige Centrifugeret 8/12 drægtige P>0,05 6

7 Ingen målte parametre var dårligere for filtreret sæd Filtrering af sæd er mindst ligeværdigt med centrifugering som koncentrationsmetode Fordele: Mindre beskadigelse af sædceller Reducerer bakterievækst Nemmere at håndtere under praksisforhold Jesper Møller Nielsen Frederik Høgsberg Nielsen Morten Rønn Petersen 75 mares One breeding season Two farms Identical veterianry management All presented for routine swabbing Endometrial biopsy Microbiology Cytology Histology (HE) Flourescent In Situ Hybridisation (FISH) Pregnancy check at 70 days Statistics Cohen s kappa Fishers exact test, Significance p<0.05 Logistic regression test, significance p<0.05 PMNs detected on histology Cytology + 18 (24 %) 8 (11 %) 26 (35 %) - 26 (35 %) 23 (31 %) 49 (65 %) Total 44 (59 %) 31 (41 %) 75 (100%) Cohen s kappa k = Pregnant day 70 Cytology + 15 (21 %) 11 (15 %) 26 (36 %) - 32 (44 %) 14 (19 %) 46 (64 %) Total 47 (65 %) 25 (35 %) 72(100 %) Correlation between the two tests is not significant Fisher s exact test p =

8 Bacterial growth PMNs detected by histology + 22 (29 %) 6 (8 %) 28 (37 %) - 22 (29 %) 25 (33 %) 47 (63 %) Total 44 (59 %) 31 (41 %) 75(100 %) There is a significant correlation between bacterial growth and prescence of PMN s in a histological slide. Fishers Exact test p = Bacterial growth Pregnant day (19 %) 12 (17 %) 26 (36 %) - 33 (46 %) 13 (18 %) 46 (64 %) Total 47 (65 %) 25 (35 %) 72 (100 %) Fisher s exact test p = PMNs on histology Pregnant day (29 %) 21 (21 %) 42 (58 %) - 26 (36 %) 4 (6 %) 30 ( 41 %) Total 47 (65 %) 25 (35 %) 72 (100 %) There is a significant correlation between prescence of PMN s in a histological slide and day 70 pregnancy result. Fishers Exact test p = Only single factor with significant influence on day 70 preg. status in log. reg. test. p = Ods ratio = 0.15 Kenney score Pregnant day 70 I 14 (19 %) 2 (3 %) 16 a (22 %) IIa 18 (25 %) 6 (8 %) 24 a (33 %) IIb 11 (15 %) 16 (22 %) 27 b, c (38 %) III 4 (6 %) 1 (1 %) 5 a, c (7 %) Total 47 (65 %) 25 (35 %) 72 (100 %) There is a significant correlation between Kenney score and day 70 pregnancy result. Fishers Exact test p = FISH Cytology + 9 (12 %) 17 (23 %) 26 (35 %) - 22 (29 %) 27 (36 %) 49 (65 %) Total 31 (41 %) 44 (59 %) 75 (100 %) PNM s on histology FISH + 16 (21 %) 28 (37 %) 44 (59 %) - 15 (20 %) 16 (21 %) 31 (41 %) Total 31 (41 %) 44 (59 %) 75 (100 %) Fisher s exact test p = 0.09 Fisher s exact test p =

9 Growth S. Equi var. Zooepidem. FISH + 9 (12 %) 17 (23 %) 26 (35 %) - 22 (29 %) 27 (36 %) 49 (65 %) Total 31 (41 %) 44 (59 %) 75 (100 %) Cohen s kappa k = Day 70 pregnancy percent per cycle: FISH /- 7 % FISH- 33 +/- 5 % p=0.42 PMN /- 8 % FISH + PMN /- 8 % p<0.001 PMN /- 7 % FISH - PMN /- 8 % p=0.42 Cytology had no significant corellation to PMN s on histology and pregnancy result Bacterial growth corellated significantly to PMN s on histology but had a poor corellation to pregnancy results PMN s on histology corellated significantly to pregnancy results. A mare is 6.5 times less likly to become pregnant if PMN s are detected by histology than if no PMN s are detected There is a significant correlation between Kenney score and pregnancy result The results from FISH in a traditional microscope did not correlate significantly to cytology, PMN s on histology, microbiology and pregnancy results Traditional histological examination of a biopsy of the endometrium should be considered for the diagnosis of endometritis, even though referal and processing is time consuming, and time is not often available in the middle of a breeding season. 9