Instruções de Utilização

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1 ddpcr Dx Universal Kit for QX200 ddpcr Dx System Instruções de Utilização PTrevB Abril 2018 UNITED STATES, Bio-Rad Laboratories, Inc., W. Las Positas Blvd, Pleasanton, CA FRANCE, Bio-Rad, 3 boulevard Raymond Poincaré, Marnes la Coquette

2 TRADUÇÕES Os documentos relativos ao produto podem ser fornecidos noutras línguas em suporte eletrónico. DICIONÁRIO DE SÍMBOLOS Conformidade Europeia Fabricante Representante Autorizado na União Europeia Número do lote Utilizar até Para utilização em diagnóstico in vitro Limite de temperatura Número de catálogo Consultar as Instruções de Utilização Número de testes Para utilizar com Número de série Sujeito a receita médica Contém látex ASSISTÊNCIA TÉCNICA DA BIO-RAD Para obter ajuda e aconselhamento técnico, contactar o departamento de Assistência Técnica da Bio-Rad. Nos Estados Unidos, o departamento de Assistência Técnica da Bio-Rad está aberto de segunda a sexta-feira, das 05h00 às 17h00, Horário da Costa Oeste dos EUA. Telefone: Fax: Endereço de correio eletrónico: LSG_TechServ_US@biorad.com (para clientes dos EUA e outros países) Estão disponíveis em assistência técnica on-line e informações de contacto mundiais. AVISOS LEGAIS Nenhuma parte desta publicação pode ser reproduzida ou transmitida sob qualquer forma ou por qualquer meio, eletrónico ou mecânico, incluindo fotocópia, gravação, ou qualquer sistemas de armazenamento ou recuperação de informação sem a autorização por escrito da Bio-Rad Laboratories. A Bio-Rad reserva-se o direito de alterar os seus produtos e serviços a qualquer momento. Este manual de instruções está sujeito a alterações sem aviso prévio. Embora tenha sido preparado para garantir a precisão, a Bio-Rad não assume qualquer responsabilidade por erros, ou por quaisquer danos decorrentes da aplicação ou utilização destas informações. Excel e Microsoft são marcas comerciais da Microsoft Corporation. FAM e VIC são marcas comerciais da Applera Corporation. TaqMan é uma marca comercial da Roche Molecular Systems, Inc. ii PTrevB

3 EvaGreen é uma marca comercial da Biotium, Inc. Bio-Rad Laboratories, Inc. é licenciada pela Biotium, Inc. para vender reagentes que contêm o corante EvaGreen para utilização em PCR em tempo real, exclusivamente para fins de investigação. Os termocicladores da Bio-Rad e os termocicladores em tempo real estão abrangidos por uma ou mais das patentes norte-americanas seguintes, ou suas homólogas estrangeiras, propriedade da Eppendorf AG: números de patentes dos EUA, e Este produto e/ou a sua utilização estão abrangidos(as) por reivindicações de patentes norte-americanas e/ou por pedidos de patente pendentes nos EUA ou em outros países, detidas por ou sob licença para a Bio-Rad Laboratories, Inc. A compra do produto inclui um direito limitado, não transferível, ao abrigo dessa propriedade intelectual para utilização do produto exclusivamente para fins de investigação interna e diagnóstico. Não são concedidos quaisquer direitos de utilização do produto para aplicações comerciais de qualquer tipo, incluindo, entre outros, o fabrico, o controlo de qualidade ou serviços comerciais de qualquer tipo, tais como serviços contratuais ou taxas por serviços. As informações relativas a uma licença para essas utilizações podem ser obtidas junto da Bio-Rad Laboratories. É da responsabilidade do comprador/utilizador final adquirir quaisquer direitos de propriedade intelectual adicionais que possam ser necessários. SEGURANÇA E OBSERVÂNCIA DA REGULAMENTAÇÃO O QX200 System foi testado e verificou-se estar em conformidade com todos os requisitos aplicáveis das normas de segurança e eletromagnéticas seguintes: 1. IEC :2010 (3.ª ed.), EN :2010 (3.ª ed). Equipamento elétrico de medição, de comando e de laboratório Parte 1: Requisitos gerais 2. EN :2006 (Classe A). Equipamento elétrico de medição, de comando e de laboratório. Requisitos de CEM, Parte 1: Requisitos gerais 3. UL :2004, Equipamento de laboratório, equipamento de teste e medição e controlos de processos industriais 4. CAN/CSA 22.2 n , Requisitos de segurança para equipamento elétrico de medição, de comando e de laboratório, Parte I: Requisitos gerais. 5. Este equipamento gera, utiliza e pode irradiar energia de radiofrequência e, se não for instalado e utilizado de acordo com o manual de instruções, poderá causar interferência prejudicial às comunicações por rádio. O funcionamento deste equipamento numa área residencial pode causar interferências prejudiciais, caso em que o utilizador terá de corrigir a interferência por conta própria. A marca CE indica que o fabricante garante que o produto está em conformidade com os requisitos essenciais da Diretiva Europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro. A marca CSA indica que o produto foi testado de acordo com as normas canadianas e norteamericanas, e que cumpre os requisitos das normas aplicáveis. Este equipamento foi testado e está em conformidade com os limites para um dispositivo digital de Classe A, conforme a Parte 15 das regras da FCC. Estes limites são projetados para fornecer proteção razoável contra interferência prejudicial quando o equipamento for utilizado num ambiente comercial. O símbolo da Diretiva relativa aos resíduos de equipamentos elétricos e eletrónicos indica que quando o utilizador final deseja eliminar este produto, deve ser enviado para instalações de recolha seletiva para reciclagem e recuperação. Este instrumento destina-se a ser utilizado apenas por pessoal com formação. Não posicionar o equipamento de forma que seja difícil de utilizar a ficha da alimentação elétrica. A ficha da alimentação elétrica é o dispositivo para desligar. Não existem peças às quais se possa efetuar manutenção PTrevB iii

4 ddpcr Dx Universal Kit for QX200 System, Avisos e Precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. Para utilização profissional em cuidados de saúde. Este kit de teste deve ser manipulado apenas por pessoal habilitado, com formação em procedimentos laboratoriais e familiarizado com os seus riscos potenciais. Usar vestuário de proteção, luvas e proteção do rosto/olhos adequados e aplicar adequadamente as Boas Práticas de Laboratório necessárias. Formação em EPI (Equipamento de Proteção Individual) Recomenda-se o devido uso de luvas durante a manipulação de óleos e placas de amostras. Os requisitos da OSHA relativos a EPI estão definidos no Código de Regulamentos Federais (CFR) em 29 CFR (requisitos gerais); 29 CFR (proteção das mãos); 29 CFR (critérios relativos a equipamento de proteção individual padrão). Quaisquer luvas com uma capacidade de proteção deteriorada devem ser eliminadas e substituídas. Deve considerar-se a toxicidade das substâncias químicas e de fatores tais como a duração da exposição, o armazenamento e a temperatura ao decidir reutilizar luvas expostas quimicamente. Características para auxiliar na seleção de luvas para o manuseamento de máquinas, ensaios, óleos e solventes de limpeza: as luvas de butilo são feitas de uma borracha sintética e protegem contra peróxido, ácido fluorídrico, bases fortes, álcoois, aldeídos e cetonas; as luvas de borracha natural (látex) são confortáveis para utilizar e apresentam níveis excelentes de resistência à tração, elasticidade e resistência à temperatura; as luvas de neopreno são feitas de borracha sintética e oferecem boa flexibilidade, destreza dos dedos, alta densidade e resistência ao desgaste; protegem contra álcoois, ácidos orgânicos e alcalis; As luvas de nitrilo são feitas de copolímero e fornecem proteção contra solventes clorados, tais como tricloroetileno e tetracloroeteno; oferecem proteção no trabalho com óleos, lubrificantes, ácidos e substâncias cáusticas. iv PTrevB

5 Índice Traduções... ii Dicionário de símbolos... ii Assistência técnica da Bio-Rad... ii Avisos legais... ii Segurança e observância da regulamentação...iii Formação em EPI (Equipamento de Proteção Individual)... iv Dispositivo médico de diagnóstico In Vitro...3 Utilização prevista...3 Princípio do procedimento...3 Reagentes e suprimentos...4 Materiais fornecidos...4 Materiais necessários, mas não fornecidos...5 Conservação e estabilidade...6 Avisos e precauções...6 Controlo de qualidade...6 Colheita de amostras...6 Preparação da amostra e da reação...6 Digestão do ADN...7 Digestão do ADN na reação de ddpcr...7 Digestão do ADN antes da reação de ddpcr...7 Procedimento...8 Fluxo de trabalho...8 Preparação e configuração da reação...8 Geração manual de gotículas...8 Aplicação de ciclos térmicos...9 Aquisição de dados e análise PTrevB 1

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7 Dispositivo médico de diagnóstico In Vitro. Nome comum: Dx Universal Kit for QX200 System Nome: Dx Universal Kit for QX200 ddpcr Dx System N.º de referência: UTILIZAÇÃO PREVISTA O ddpcr Dx Universal Kit for QX200 ddpcr Dx System (n.º de referência: ) é um conjunto de reagentes e consumíveis não específicos do analito, necessários para serem utilizados no QX200 Droplet Digital PCR System a fim de gerar e ler as gotículas. O utilizador final fornece o ensaio, os controlos e os calibradores de diagnóstico. PRINCÍPIO DO PROCEDIMENTO O ddpcr DX Universal Kit for QX200 ddpcr Dx System é um kit constituído por reagentes e consumíveis necessários para realizar um fluxo de trabalho da reação de ddpcr no QX200 System, com a exceção de iniciadores, sonda(s) e modelo. *Passo 0: Preparar/extrair ácido nucleico Passo 1: Configuração da reação Passo 2: Geração de gotículas Passo 3: Aplicação de ciclos térmicos Passo 4: Análise e aquisição de gotículas *O Passo 0 é necessário em caso de necessidade de converter ARN em ADN complementar. O Dx Universal Kit foi projetado e embalado para simplificar e permitir a utilização do QX200 ddpcr System no modo aberto. Possibilita ao laboratório desenvolver um ensaio de interesse sem a necessidade de descobrir quais são os consumíveis comuns necessários para o instrumento e a tecnologia. Assim, permite que o laboratório se concentre mais em projetar os iniciadores, sonda(s) e sequências de modelo. O kit é constituído por ddpcr Dx Consumable Pack, ddpcr Dx Supermix Pack e ddpcr Droplet Reader Oil Pack PTrevB 3

8 REAGENTES E SUPRIMENTOS Materiais fornecidos N.º de Catálogo NOTA: N.º de Catálogo abaixo ( , e ) estão todos incluídos no ddpcr Dx Universal Kit for QX200 ddpcr Dx System ddpcr Dx Universal Kit for QX200 ddpcr Dx System Componente Quantidade Descrição/apresentação 192 proc ddpcr 96-Well Plates 1x 5 5 placas de 96 poços prontas a usar ddpcr Pierceable Foil Heat Seal 1 x 50 1 saco de 50 selos térmicos prontos a usar Droplet Generation Oil for Probes 2 x 7 ml Frascos de 2 7 ml de óleo prontos a usar DG8 Cartridges 1 x 24 1 pacote com 24 cartuchos de geração de gotículas prontos a usar DG8 Gaskets 1 x 24 1 pacote com 24 selos prontos a usar Manual de Instruções 1 Instruções de utilização para ddpcr Dx Consumable Pack N.º de Catálogo Componente Quantidade Volume ddpcr Dx Supermix Pack 2 1 ml Descongelar à temperatura ambiente antes de utilizar o Supermix for Manual QX200 System N.º de Catálogo Componente Quantidade Volume QXDx Droplet Reader Oil Pack 1 1 L Droplet Reader Oil pronto a usar com o QX200 System PTrevB

9 Materiais necessários, mas não fornecidos QX200 Droplet Reader, IVD QuantaSoft Software Plate Holders (2) USB 2.0 cable Power Cord QX200 Droplet Generator, IVD Cartridge Holder Power Cord Descrição: N.º de Catálogo QX200 Dx Digital Droplet PCR System Contactar a assistência técnica Contactar a assistência técnica Contactar a assistência técnica Descrição: Pipets pipeta de 20 μl para carregamento de amostras pipeta de 50 μl para transferência de gotículas pipeta de 200 μl e 8 canais para óleo N.º de Catálogo Rainin L-20 Rainin L8-50 Rainin L8-200 Descrição: N.º de Catálogo Pipet Tip (filtered) Rainin GP-L10F GP-L200F Descrição: Necessário: termocicladores com especificações equivalentes às seguintes: Precisão: +/- 0,2 C Uniformidade: +/- 0,4 C poço a poço em 10 segundos Capacidade de rampa ajustável com a taxa de rampa necessária: até 2 C/s Intervalo de temperatura: C Descrição: N.º de Catálogo PX1 PCR Plate Sealer PTrevB 5

10 CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADE O ddpcr Dx Supermix Pack é estável entre -25 C e -15 C até à data de validade indicada nos rótulos. Uma vez descongelado, o supermix pode ser conservado a 4 C até 2 semanas. Não são recomendados congelamentos e descongelamentos repetidos do supermix. O ddpcr Dx Consumable Pack é estável a C (temperatura ambiente) até à data de validade indicada nos rótulos. O ddpcr Dx Droplet Reader Oil Pack é estável a uma temperatura constante de C (temperatura ambiente) até à data de validade indicada nos rótulos. Avisos e precauções Este produto destina-se a ser utilizado exclusivamente em laboratório. Não utilizar materiais fora do prazo. Manusear sempre as amostras em conformidade com procedimentos de laboratório seguros, tais como o Documento M29 1 do CLSI. Proteger os reagentes do calor e da humidade. Usar equipamento de proteção individual durante o manuseamento de todos os reagentes. Lavar bem as mãos após realizar o teste. Eliminar. Controlo de qualidade O ddpcr Dx Supermix for Probes (No dutp) é isento de ADNase e ARNase contaminantes. As especificações rigorosas são mantidas para garantir a consistência de lote para lote. COLHEITA DE AMOSTRAS Colher as amostras e rotulá-las corretamente. As amostras colhidas devem ser mantidas de acordo com as condições validadas pelo utilizador. Para as melhores práticas, deve fazer-se a colheita das amostras de sangue total de acordo com as técnicas convencionais de cada instituição. Deve fazer-se a colheita de amostras de sangue no mínimo de 5 ml em tubos com EDTA como anticoagulante. Proceder à preparação da amostra e da reação. PREPARAÇÃO DA AMOSTRA E DA REAÇÃO É necessária a extração da amostra. Colocar no fluxo de trabalho de ddpcr para extrair ADN ou ADN complementar. O utilizador deve desenvolver e validar procedimentos de preparação de extração específicos da aplicação. As metodologias comuns de preparação de amostras para extração de ADN a partir de sangue total ou camada leucocitária são compatíveis com os métodos de ddpcr. As metodologias comuns de preparação de amostras para extração de ADN a partir de tecido FFPE são compatíveis com os métodos de ddpcr. Para as melhores práticas, devem ser colhidas e extraídas pelo menos 10 milhões (1x10 7 ) células nucleadas PTrevB

11 Recomendação para obter melhores resultados Seguir as orientações e recomendações gerais do manual de instruções do QX200 ddpcr System. A concentração de ADN genómico humano deve ser 30 pg ~330 ng por reação digerida de 20 μl. Digestão do ADN A fragmentação do ADN por digestão de restrição antes da geração de gotículas permite uma precisão ideal através da separação de cópias de genes em paralelo, reduzindo a viscosidade da amostra e melhorando a acessibilidade do modelo para as amostras de entrada. A digestão de restrição melhora o desempenho geral da PCR digital nas aplicações. Recomendação: escolher uma endonuclease de restrição que não corte o alvo ou o amplicão de referência e que seja insensível à metilação. São preferíveis cortadores de quatro bases e enzimas de elevada fidelidade. Podem utilizar-se duas estratégias para realizar a digestão de restrição de amostras de ADN: digestão diretamente na reação de ddpcr durante a configuração, ou digestão convencional antes de ddpcr. Digestão do ADN na reação de ddpcr Pode conseguir-se a digestão eficiente da amostra de ADN através da adição direta de enzimas de restrição à reação de ddpcr. Diluir a enzima de restrição utilizando a solução tampão diluente recomendada de acordo com as instruções do fabricante, e 1 μl para a reação de ddpcr. Recomenda-se cerca de 2-5 unidades de enzima de restrição por reação de ddpcr de 20 μl. A adição da solução tampão da enzima de restrição com alto teor de sal pode inibir a PCR digital e deve evitar-se. Observou-se que HaeIII, MseI, AluI, HindIIII e CviQI resultam bem para digestões em reações de ddpcr. Digestão do ADN antes da reação de ddpcr A digestão com enzimas de restrição pode ser realizada como uma reação separada antes da configuração da reação de ddpcr. Utilizar 5-10 unidades de enzima por micrograma de ADN e unidades de enzima por micrograma de ADN genómico. Incubar a reação durante 1 hora à temperatura recomendada para a enzima de restrição. A inativação por calor não é necessária, mas pode ser considerada, se o armazenamento de longo prazo for necessário; não aqueça o inativado acima de 65 C. Não é necessária a purificação do ADN após a digestão de restrição. Utilizar um mínimo de 10 vezes a diluição da digestão para reduzir o teor de sal da amostra na reação de ddpcr. Conservar o ADN digerido a -20 C ou menos. Preparar o mix de reação de ddpcr sem a enzima de restrição diluída PTrevB 7

12 PROCEDIMENTO Fluxo de trabalho *Passo 0: Preparar/extrair ácido nucleico Passo 1: Configuração da reação Passo 2: Geração de gotículas Passo 3: Aplicação de ciclos térmicos Passo 4: Leitura das gotículas, aquisição de dados e análise *O Passo 0 é necessário em caso de necessidade de converter ARN em ADN complementar. Preparação e configuração da reação 1. Descongelar todos os componentes supermix, iniciadores e sondas para ficarem à temperatura ambiente. Misturar bem com a aplicação de vórtex ao tubo para garantir a homogeneidade porque pode formar-se um gradiente de concentração durante a conservação a -20 C. Centrifugar brevemente para acumular o conteúdo no fundo do tubo. 2. Preparar as amostras com a concentração pretendida antes de configurar o mix de reação. 3. Preparar o mix de reação para o número de reações necessárias. 4. Reunir todos os componentes necessários, exceto a amostra, distribuir alíquotas iguais por cada tubo de reação e, como passo final, adicionar a amostra a cada tubo de reação. 5. Misturar bem com a aplicação de vórtex ao tubo. Centrifugar brevemente para assegurar que todos os componentes estejam no fundo do tubo de reação. Deixar que os tubos de reação equilibrem à temperatura ambiente durante cerca de 3 minutos. Componente PTrevB Volume por reação (μl) Concentração final ddpcr Supermix for Probes (No dutp) 12,5 1x 20x iniciadores-alvo/sonda (FAM) 1, nm/250 nm 20x iniciadores de referência/sonda (HEX/VIC) 1, nm/250 nm Enzima de restrição diluída (ver digestão do ADN) 1 Variável Amostra Variável Até 330 ng* Água isenta de ARNase e ADNase Variável - Volume total 25 - Tabela 1: *As concentrações de amostras >66 ng por reação e determinadas aplicações podem exigir a digestão de restrição para uma deteção ideal do alvo. Se a digestão não for necessária, preparar o mix de reação de ddpcr sem a enzima de restrição diluída. Após a conclusão da preparação e configuração da reação, avançar para o passo 2 Fluxo de trabalho de geração de gotículas. Geração manual de gotículas Consultar o Manual de Instruções do QX200 Dx Digital Droplet PCR System (N.º de Catálogo ) para uma configuração e instruções de utilização detalhadas, orientadas por gráficos. O QX200 Droplet Generator, IVD prepara gotículas para até 8 amostras de cada vez. A geração de gotículas demora ~2 minutos para cada conjunto de oito amostras (~30 minutos para uma placa de 96 poços). NOTA: todos os 8 poços no DG8 Droplet Generator cartridge devem conter amostra ou não ter controlo do modelo e todos os 8 poços devem conter Droplet Generation Oil.

13 Após a conclusão da geração de gotículas, a partir do QX200 Droplet Generator, transferir cuidadosamente as gotículas para uma placa de 96 poços limpa e selá-la com um PX1 PCR Plate Sealer. Retirar a placa de gotículas que contém gotículas ddpcr e selar dentro de 30 minutos após a conclusão da geração de gotículas. Seguir as instruções indicadas no PX1 PCR Plate Sealer: Definir a temperatura do Plate Sealer para 180 C e o tempo para 5 segundos. Tocar na seta para abrir a porta da bandeja PX1. Posicionar o bloco de apoio na bandeja com o lado dos 96 poços voltado para cima. Colocar a placa de 96 poços no bloco de apoio e certificar-se de que todos os poços da placa estejam alinhados com o bloco de apoio. Cobrir a placa de 96 poços com uma folha de papel de alumínio perfurável. (O rótulo amarelo no saco termosselado da Bio-Rad identifica a superfície de selagem.) Não tentar colocar a estrutura sobre a placa coberta com papel de alumínio. A estrutura destina-se apenas a ser utilizada com outros selos. Quando a placa de 96 poços estiver segura no bloco de apoio e coberta com o selo em papel de alumínio perfurável, tocar no botão Seal (Selar). A bandeja fecha e a termosselagem terá início. Após o término da termosselagem, a porta do PX1 abre-se automaticamente. Retirar a placa do bloco para a aplicação de ciclos térmicos. Retirar o bloco do PX1 Sealer. Verificar se todos os poços da placa estão selados; as posições dos poços devem ser visíveis ao longo do papel de alumínio. Quando selada, a placa está pronta para a aplicação de ciclos térmicos. Aplicação de ciclos térmicos Quando a placa de 96 poços que contém as gotículas estiver selada, colocá-la no termociclador para amplificação por PCR. Passo de aplicação de ciclos Temperatura ( C) Tempo Ativação das enzimas min Taxa de rampa Número de ciclos Desnaturação s 40 Renaturação/extensão 60 1 min 2 C/s 40 Desativação das enzimas min 1 Manter (opcional) 4 Infinito 1 Tabela 2: Condições de aplicação de ciclos para o C1000 Touch Thermal Cycler da Bio-Rad* * Utilizar uma tampa aquecida ajustada para 105 C e definir o volume de amostra para 40 μl. * Modificar as condições de aplicação de ciclos térmicos conforme for necessário para o ensaio individual. AVISO: a utilização de uma taxa de rampa diferente pode afetar a amplificação por PCR e os resultados. Aquisição de dados e análise 1. Após a aplicação de ciclos térmicos, colocar a placa de 96 poços selada no QX200 Dx Droplet Reader. 2. Abrir o software QX200 (QuantaSoft ) para configurar uma nova disposição da placa de acordo com o seu projeto experimental. 3. Consultar o Manual do QX200 Dx Droplet Reader (N.º de Catálogo ) para obter instruções detalhadas PTrevB 9

14 4. Indicar as seguintes informações no software: Nome da amostra Tipo de experiência Tipo de Supermix: ddpcr Supermix for Probes (No dutp) Nomes do alvo Tipo(s) de alvo: (Can. 1 para FAM e Can. 2 para HEX/VIC) 5. Selecionar Apply (Aplicar) para configurar a disposição da placa e selecionar OK para terminar. 6. Após a conclusão, selecionar RUN (Processar) para iniciar o processo de leitura de gotículas (aquisição de dados). 7. Após a conclusão da aquisição de dados, analisar e rever o resultado. 8. O resultado reportado é cópias/ μl da reação final de 1x ddpcr PTrevB

15 Notas: PTrevB 11

16 Bio-Rad Laboratories, Inc. For further information, please contact the Bio-Rad office nearest you or visit our website at Clinical Diagnostics Group 4000 Alfred Nobel Drive Hercules, California Telephone (510) FAX (510) Australia, Bio-Rad Laboratories Pty. Ltd., Level 5, 446 Victoria Road, Gladesville NSW 2111 Phone Telefax Austria, Bio-Rad Laboratories Ges.m.b.H., Hummelgasse 88/3-6, A-1130 Vienna Phone Telefax Belgium, Bio-Rad Laboratories N.V., Winninglaan 3, BE-9140 Temse Phone +32 (3) Telefax +32 (3) Brazil, Bio-Rad Laboratórios Brasil Ltda, Rua Alfredo Albano da Costa, 100, Lagoa Santa - MG, CEP: Phone +55 (31) Telefax +55 (31) Canada, Bio-Rad Laboratories, Ltd., 2403 Guénette Street, Montréal, Québec H4R 2E9 Phone Telefax China, Bio-Rad Laboratories Shanghai Ltd., 3rd Floor, #18 Dong Fang Road, Bldg E, Poly Plaza, Pudong, Shanghai, PRC Phone Telefax Czech Republic, Bio-Rad spol. s r.o., Nad ostrovem 1119/7, Prague 4 Phone Telefax Denmark, Bio-Rad Laboratories, Symbion Science Park, Fruebjergvej 3, DK-2100 Copenhagen East Phone Telefax Finland, Bio-Rad Laboratories, Linnanherrankuja 16, FIN Helsinki Phone Telefax France, Bio-Rad, 3 boulevard Raymond Poincaré, Marnes-la-Coquette Phone Telefax Germany, Bio-Rad Laboratories GmbH, Heidemannstrasse 164, D Munich Phone +49 (0) Telefax +49 (0) Greece, Bio-Rad Laboratories M E.P.E, 2-4 Mesogeion Street, Fourth Floor Athens Phone Telefax Hong Kong, Bio-Rad Pacific Ltd., Unit 1101, 11/F DCH Commercial Centre, 25 Westlands Road, Quarry Bay Phone Telefax Hungary, Bio-Rad Hungary Ltd., H-1082 Budapest, Futo Street 47-53, Hungary Phone Telefax India, Bio-Rad Laboratories (India) Pvt. Ltd., Bio-Rad House, 86-87, Udyog Vihar Phase IV, Gurgaon, Haryana Phone Telefax Israel, Bio-Rad Laboratories Ltd., 14 Homa Street, New Industrial Area, Rishon Le Zion Phone Telefax Italy, Bio-Rad Laboratories S.r.l., Via Cellini 18/A, Segrate, Milan Phone Telefax Japan, Bio-Rad Laboratories K.K., Tennoz Central Tower 20F, Higashi-Shinagawa, Shinagawa-ku, Tokyo Phone Telefax Korea, Bio-Rad Korea Ltd., 10th Floor, Hyunjuk Building, , Gangnam-gu, Seoul Phone Telefax Mexico, Bio-Rad, S.A., Avenida Eugenia 197, Piso 10-A, Col. Narvarte, C.P Mexico, D.F. Phone +52 (55) Telefax +52 (55) The Netherlands, Bio-Rad Laboratories B.V., Postbus 222, 3900 AE Veenendaal Phone Telefax New Zealand, Bio-Rad New Zealand, 189 Bush Road Unit B, Albany, Auckland Phone Telefax Norway, Bio-Rad Laboratories, Nydalsveien 33, 0484 Oslo Phone Telefax +46(0) Poland, Bio-Rad Polska Sp. z o.o., Nakielska Str. 3, Warsaw Phone Telefax Portugal, Bio-Rad Laboratories, Lda., Edificio Prime, Ave. Quinta Grande, 53 Fracção 3B Alfragide Amadora Phone Telefax Russia, Bio-Rad Laboratorii, , Russian Federation, Moscow, Varshavskoe sh., 9, Bldg., 1B Phone Telefax Singapore, Bio-Rad Laboratories (Singapore) Pte. Ltd., 27 International Business Park, #01-02 Singapore Phone Telefax South Africa, Bio-Rad Laboratories (Pty) Ltd., 34 Bolton Road, Parkwood, Johannesburg 2193 Phone Telefax Spain, Bio-Rad Laboratories, S.A., C/ Caléndula, 95, Edificio M. Miniparc II, El Soto de la Moraleja, Madrid Phone Telefax Sweden, Bio-Rad Laboratories A.B., Box 1097, Solna Strandväg 3, SE , Solna Phone Telefax Switzerland, Bio-Rad Laboratories AG, Pra Rond 23, CH-1785 Cressier Phone +41 (0) /06 Telefax +41 (0) Taiwan, Bio-Rad Laboratories Taiwan Ltd., 14F-B, No. 126 Nan-King East Road, Sec. 4, Taipei, Taiwan R.O.C. Phone Telefax Thailand, Bio-Rad Laboratories Ltd., 1st & 2nd Floor, Lumpini I Bldg., 239/2 Rajdamri Road., Lumpini, Pathumwan, Bangkok Phone Telefax United Kingdom, Bio-Rad Laboratories Ltd., Bio-Rad House, Maxted Road, Hemel Hempstead, Herts HP2 7DX Phone +44 (0) Telefax +44 (0)