Afslutningsrapport. Kemisk karakterisering af sekundær metabolitdannelse fra skimmelsvampe på ost Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr.
|
|
- Lotte Nissen
- 4 år siden
- Visninger:
Transkript
1 Afslutningsrapport Kemisk karakterisering af sekundær metabolitdannelse fra skimmelsvampe på ost Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr August 2000
2 Mejeriforeningen Afslutningsrapport for FØTEK-samarbejdsprojektet Kemisk karakterisering af sekundær metabolitdannelse fra skimmelsvampe på ost. Medarbejdere der har været ansat på projektet: Forskningslektor, Ph.D., Thomas stenfeld Larsen (Projektleder), Levnedsmiddelcenteret ved Institut for Bioteknologi, Bygning 221, Søltofts Plads, Danmarks Tekniske Universitet, 2800 Lyngby. Tlf Laboratorietekniker, anne Jakobsen og Laborant, Trine Camilla Rasted, begge Institut for Bioteknologi, Bygning 221, Søltofts Plads, Danmarks Tekniske Universitet, 2800 Lyngby. Videnskabelige medarbejdere ansat i kortere perioder: Dan Sørensen, Ph.D. stud. og Lisa Rahbæk, Cand. Scient., Ph.D. Øvrige medarbejdere/samarbejdspartnere: Lektor Jens C. Frisvad Forskningsadjunkt Jørn Smedsgaard og Forskningsadjunkt Flemming Lund alle Mykologigruppen Docent Carsten Christophersen, Lektor Uffe Anthoni og Lektor Per. ielsen alle Marin Kemi Gruppen Forord: Projektets medarbejdere vil gerne takke Mejeriforenigen (Mejeribrugets ForskningFond), Levnedsmiddelcenteret ved DTU og Strukturdirektoratet for økonomisk og administrativ støtte til projektet. Vi vil også gerne takke Mejeriforeningen for den store interesse og opbakning, som den har udvist for projektet igennem de fire år, som projektet har varet. 1
3 Resumé (dansk) Projektet har resulteret i ny viden omkring sekundær metabolitdannelse fra en række skimmelsvampe, der er kontaminanter på ost. Der er udviklet metoder til oprensning af rene stoffer fra svampe ekstrakter og ialt er omkring 25 stoffer isoleret. Strukturen for 20 af stofferne er opklaret og 9 af stofferne har vist sig at være ikke tidligere beskrevne naturstoffer. Det har derimod ikke været muligt at oprense og karakterisere farvestoffer dannet af Penicillium caseifulvum på Danablu. Farvestofdannelsen er mest udpræget når svampen vokser ved lavt p og ved lave fosfat koncentrationer, mens væksten er korreleret til salt koncentrationen. Foruden nye stoffer er en række kendte mykotoksiner og andre metabolitter også vist at blive produceret på oste baserede substrater. De to arter Penicillium caseifulvum og P. camemberti har vist sig at være meget ensartede mht. fysiologi, cytotoksisitet og dannelse af flygtige stoffer. Projekt arbejdet har været grundlæggende for genintroduktionen af arten Penicillium nordicum, der ligesom P. verrucosum producer ochratoxin. Førstnævnt art isoleres primært fra ost og kød produkter. Resumé (engelsk) The project has provided new knowledge about secondary metabolism of a number of cheese associated fungal contaminants. Methods for isolation of pure compounds from fungal extracts have been developed an in total about 25 metabolites have been isolated. The structure of 20 compounds have been elucidated and 9 compounds turned out to be novel natural products. It has not been possible to isolate and characterize pigments produced by Penicillium caseifulvum on Danablu. Pigmentation is most pronounced when the fungus is growing at low p and low phosphate concentrations, while growth is correlated to salt concentration. Apart from novel compounds a number of known mycotoxins and other metabolites have been shown to be produced on cheese based substrates. The two species P. caseifulvum and P. camemberti have been shown to be very similar with respect to physiology, cytotoxicity and production of volatile metabolites. Work made in this project has been the basis for the reintroduction of the species Penicillium nordicum, which produces ochratoxines like P. verrucosum. The former species is primarily isolated from cheese and meat products. 2
4 1. Formål Det har været projektets formål at udvikle metoder til karakterisering af sekundære metabolitter fra skimmelsvampe. Disse metoder har omhandlet oprensning, påvisning og strukturopklaring af kendte og ukendte sekundære metabolitter fra skimmelsvampe, der forekommer på ost. Projektet har primært fokuseret på Penicillium caseifulvum, men andre vigtige arter som; P. commune, P. camemberti, P. solitum, P. nalgiovense, P. roqueforti, P. discolor, P. nordicum, P. verrucosum og Aspergillus versicolor er også blevet undersøgt. 2. Baggrund Som de fleste andre fødevarer forurenes oste af og til med skimmelsvampe. Disse kan give anledning til misfarvninger, ændringer af smag, lugt og konsistens, samt til dannelse af toksiske komponenter (mykotoksiner). Samtidig er enkelte skimmelsvampearter dog meget værdifulde starterkulturer til fremstilling af skimmelmodnede oste, idet skimmelsvampenes evne til at ændre ostens sensoriske og konsistensmæssige egenskaber her udnyttes til produktion af specielle ostetyper. I et tidligere samarbejdsprojekt mellem Mejeribrugets ForskningsFond og Levnedsmiddelcenteret ved Institut for Bioteknologi på Danmarks Tekniske Universitet, ved forskningsadjunkt Flemming Lund (FL) og kollegaer, er det blevet kortlagt hvilke arter, der er dominerende på forskellige typer af danske oste. På faste og halv faste oste er langt den mest dominerende forurenende skimmelsvamp Penicillium commune, men arter som P. nalgiovense, P. roqueforti, P. solitum, P. discolor, P. verrucosum, Aspergillus versicolor m.fl. ses også af og til. På oste af Danablu typen er det for få år siden desuden blevet opdaget, at en hidtil ukendt art Penicillium caseifulvum, kan være et stort problem. P. caseifulvum blev opdaget, da man på en række danske osterier i perioder fik problemer med gul/orange misfarvninger på overfladen af Danablu oste. Misfarvninger viser sig som regel, når ostene efter ca. 3 ugers lagring vaskes på overfladen, inden de pakkes til yderligere lagring. I andre tilfælde ses gulfarvningen først under den videre lagring. Ved at pode direkte fra gule pletter isolerede FL renkulturer af P. caseifulvum (billede 1). Ved nærmere eftersyn kunne P. caseifulvum også tydeligt ses som en grå/blå overfladevækst på Danablu oste i modsætning til starterkulturen P. roqueforti, der som bekendt har mørke olivengrønne sporer. Den seneste udvikling i P. caseifulvum historien er, at vi her i starten af år 2000, fra et nyligt introduceret tysk skimmeloste produkt, har isoleret en renkultur af P. caseifulvum, hvilket klart tyder på, at arten bruges som starterkultur. vennævnte farvestofproblematik har været den væsentligste baggrund for dette projekt. Det primære formål med projektet har således været at isolere/oprense og karakterisere de ovenfor beskrevne gul/orange farvestoffer fra P. caseifulvum, og i mindre grad stoffer fra andre nært beslægtede oste associerede svampe. år rene stoffer er isoleret analyseres de efterfølgende ved spektroskopiske metoder således, at stoffernes nøjagtige kemiske strukturer kan fastlægges, ligesom stoffernes evt. toksiske egenskaber kan undersøges. På basis af en nøjagtig kemisk struktur kan de byggesten, som bruges til skimmelsvampens syntese af stoffet (biosyntesevejen) med stor sandsynlighed fastlægges. Efterfølgende kan det undersøges hvilke 3
5 procesfaktorer, der påvirker et givent stofs biosyntesevej. Dette kan i bedste fald lede til, at der findes betingelser, hvor dannelsen af det uønskede stof helt kan undgås. Billede 1. Renkultur af Penicillium caseifulvum på de fire agar medier CYA, YES, MEA og CREA. Top (forside af kulturer), bund (bagside). år man taler om kemiske stofskifteprodukter (eller metabolitter) fra mikroorganismer og planter, taler man som regel om henholdsvis primære og sekundære stoffer. De primære stoffer findes i alle levende organismer og er livsnødvendige for deres overlevelse. Som eksempel kan nævnes de primære stoffer, der dannes ved nedbrydning af sukker under energidannelse. Primære stoffer indgår som regel i cykliske stofskifte processer, hvor de hele tiden regenereres. Sekundære stoffer betegnes derimod som stoffer, der tjener mere artsspecifikke og ikke nødvendigvis livsnødvendige funktioner for den producerende organisme. Det nok mest kendte eksempel på et sekundært stof fra skimmelsvampe er penicillin, der dannes af bl.a. Penicillium nalgiovense. Af andre kendte stoffer kan nævnes mykotoksinerne aflatoxin B 1 og ochratoxin A. Projektet er blevet udført i samarbejde mellem Mykologigruppen på Institut for Bioteknologi, Danmarks Tekniske Universitet og Marin Kemi Gruppen på Kemisk Lab. II,.C. Ørsted Instituttet, Københavns Universitet. Den kemifaglige baggrund for projektet har således i høj grad været; 1) Mykologigruppens mangeårige arbejde med udvikling af analytiske metoder til mikro-ekstraktion og detektion/påvisning af profiler eller fingeraftryk af kendte og ukendte metabolitter fra skimmelsvampe, og deraf store know-how omkring forskellige stoftypers spektroskopiske karakteristika, og 2) Marin Kemi gruppens store erfaring omkring oprensning og strukturopklaring af forskellige typer af naturstoffer (som alkaloider) fra især planter og marineorganismer herunder skimmelsvampe. 4
6 3. Resultater 3.1 Udvikling af metoder til oprensning af skimmelsvampe metabolitter Indledende i projektet blev der indkøbt et semipræparativt PLC system (flow område 1-40 ml/min) af mærket Waters. I modsætning til typiske traditionelle præparative systemer hvor detektion baseres på måling ved en bølgelængde, har detektoren været en photodiode array detektor. Det har derfor i projektet været muligt at optage fulde UV spektre af de stoffer, som er blevet adskilt, svarende til hvad der er muligt på analytiske PLC systemer. Dette sammenholdt med at det har været muligt at indkøbe forskellige kolonnetyper til projektet har betydet, at det har været muligt at arbejde på et state-of-the-art system. For hurtigt og nemt at få oprenset nogle ukendte svampe stoffer blev det indledende i projektet valgt at arbejde med en modelsvamp (Penicillium verrucosum isolat, IBT 5891), hvis 4 hovedkomponenter tilsyneladende var nye stoffer. Strategien lykkedes og efter indkøring af metoder blev store mængder af stofferne oprenset. Strukturen af de rene stoffer (figur 1) blev efterfølgende fastlagt ved tolkning af spektroskopiske data fra kernemagnetiske resonans målinger og massespektrometriske data og er beskrevet i artiklerne (1, 2 og 5). Igennem projektforløbet har flere studerende kunne drage nytte af udstyret og de udviklede metoder. Især har speciale studerende Dan Sørensen (DS) fra Københavns Universitet været knyttet til projektet. DS har arbejdet med ukendt kemi fra Penicillium solitum og P. nalgiovense, hvilket udmøntede sig i to artikler (6, 7) og bl.a. fundet af den nye compactin analog solistatin (figur 1). fumiquinazoline F Me alantrypinone Ac Ac daldinin D o Ac o verrucolone penigequinolone solistatin Figur 1. Metabolitter karakteriseret indlende i projektet fra Penicillium verrucosum og P. solitum (solistatin). 5
7 3.2 Kemisk karakterisering af Penicillium caseifulvum, P. camemberti og P. commune elt fra da de første kulturer af P. caseifulvum blev isoleret, har det været klart, at arten er nært beslægtet med både P. camemberti og dens vildtype P. commune. Sidstnævnte to arter kan producere mykotoksinet cyclopiazonsyre, som P. caseifulvum ikke producerer. P. caseifulvum danner derimod stofferne rugulovasine A og B samt cyclopeptine, alle stoffer som P. commune også er kendt for at kunne danne (figur 2). C 3 C 3 Figur 2. Sekundære metabolitter fra Penicillium caseifulvum, P. camemberti og P. commune (cyclopiazonsyre, rugulovasine A, cyclopeptine og sclerotigenin). Strategien i arbejdet med at karakterisere de uønskede farvestoffer fra P. caseifulvum har været at starte med at analysere for indholdet af svampestoffer i rigtige misfarvede osteskorper fra de fire forskellige danske mejerier, hvor P.caseifulvum er påvist som kontaminant, samt at undersøge renkulturer fra mejerierne dyrket på syntetiske medier. Disse analyser viste, at osteekstrakterne indholdt en lang række stoffer inklusivt farvestoffer, der ligeledes dannes af renkulturer af P. caseifulvum, når disse dyrkes på syntetiske medier (figur 3). mau min Figur 3. PLC kromatogram der viser profilen af svampe metabolitter ekstraheret fra en Danablu med kraftig overflade kontamination af Penicillium caseifulvum. Kromatogramet viser absorptionen ved 340 nm. Figur 4 viser UV spektra af de to største toppe, der ses ved hhv og 34.6 min. Stoffer med UV absorption i det synlige område (ca nm) blev valgt som targets for præparativ oprensning fra store syntetisk fremstillede farvede ekstrakter. Specielt har projektet fokuseret på de to hovedkomponenter navngivet lys 6
8 gul og metabolit I (figur 4). For begge stoffers vedkommende var der mange analoge stoffer i det farvede ekstrakt. Analyserne viste samtidig, at isolater fra de forskellige fire danske mejerier havde en meget ensartet produktion (eller profil) af sekundære stoffer både ved ekstraktion af oste og syntetiske medier. DAD1, (84.5 mau, - ) of D ma U ma U 80 DAD1, (95.9 mau, - ) of D nm nm Figur 4. UV spektre af ukendte formodede farvestoffer ( lys gul og metabolit I ) dannet af Penicillium caseifulvum både på Danablu oste og på syntetiske medier. I mere end to år har projektet vha. diverse tilgængelige oprensningsmetoder forsøgt at oprense en række af de ovenfor nævnte farvestoffer. Indtil videre har det dog vist sig, at farvestofferne er meget ustabile eller har en sådan kemisk natur, at de adsorberes (bliver hængende) på de typer af kolonner, som har været brugt i projektet. I de få tilfælde, hvor der tilsyneladende har været en tilstrækkelig mængde stof oprenset til spektroskopiske undersøgelser, har stofferne alligevel været nedbrudt før det har været muligt at gennemføre de nødvendige undersøgelser, der skulle danne grundlag for bestemmelse af farvestoffernes kemiske struktur. Vores resultater stemmer overens med virkeligheden i den forstand, at misfarvninger på osteoverflader ofte tilsyneladende forsvinder, hvilket således indikerer, at farvestofferne også er ustabile i ostemiljøet. Det kan dog også være at farvestofferne virker som p indikatorer, således at de ændrer farve i takt med at ostens p ændres. Det er dog lykkedes at opklare strukturen af den ufarvede benzodiazepin sclerotigenin (10) fra et isolat af P. commune. Sclerotigenin blev også detekteret i et ekstrakt fremstillet fra en kraftigt kontamineret Danablu ost, hvilke indikerer at stoffet dannes af P. caseifulvum, selv om renkulturer aldrig er påvist at kunne danne sclerotigenin på syntetiske substrater. Der vil i resten af år 2000 fortsat blive arbejdet med at isolere og karakterisere ukendte stoffer fra P. caseifulvum, idet speciale studerende Bo Jørgensen (i samarbejde med KU) arbejder med P. caseifulvum i sit speciale projekt. 3.3 Aromastofdannelse Flere af de Danablu osterier, hvor Penicillium caseifulvum er fundet som kontaminant, har vundet priser for deres ostes gode kvalitet. Fra Mykologigruppens side har det derfor været foreslået at P. caseifulvum måske ligefrem kan bidrage til en positiv aromaudvikling. Den nærtbeslægtede P. camemberti bruges til både hvid og til 7
9 blå hvid (sammen med P. roqueforti) oste fermentering. For at undersøge dette har vi dyrket isolater af P. caseifulvum og P. camemberti under realistiske vækst betingelser, dvs. ved ca. 12 o C, på et fløde medium. Indenfor de første 10 dage, dvs. i det tidsrum hvor myceliet voksede frem og blev synligt, viste de to arter sig at have praktisk talt ens aromaprofiler (3). Begge arter dannede store mængder af især methyl-ketoner (2-pentanone, 2-heptanone og 2- nonanone), små alkoholer som isobutanol, organiske syrer samt en lang række andre kendte oste aromastoffer (figur 5). Ældre og kraftigt sporulerende kulturer dannede kun små mængder af ovennævnte stoffer. Istedet sås en væsentlig øget produktion af terpener som 3,7- dimethyl-1,3,7-octatriene, β-caryophyllene samt en lang række ukendte stoffer. Aromaprofilerne for de ældre kulterer var mere forskellige end for de unge kulturer, men samlet sås et meget ensartet billede for de to arter. Ingen af kulturerne dannede under de givne betingelser den kendte off-flavor 2-methyl-isoborneol, dog dannede P. caseifulvum relativt store mængder af off-flavoren styren (figur 5). Figur 5. Flygtige stoffer fra P. caseifulvum (isobutanol, 2-heptanone, styrene, 2-methylisoborneol og β-caryophyllene). 3.4 Fysiologiske undersøgelser af Penicillium caseifulvum I projektet er det også blevet undersøgt hvilke fysisk-kemiske faktorer, der har betydning for vækst og farvestofdannelse for P. caseifulvum (11). I to faktor forsøg er følgende faktorer valgt på to niveauer blevet undersøgt: p, salt koncentration (acl), P, K, Mg, Fe, Cu, Zn, Mn, S og. Det viste sig, at lavt p (< 5) og lavt fosfat indhold i mediet gav øget farvestofdannelse, mens høj salt koncentration var korreleret til vækst. Dette stemmer godt overens med, at det netop er om sommeren, hvor der er lavest fosfat indhold i mælk, at der ses de største problemer med misfarvning. Farvestof dannelse var ikke korreleret med vækst. år forskellige isolater af P. caseifulvum og P. camemberti dyrkes ved 12 o C på et Danablu agar medium (DBA) (fremstillet ved at blande smeltet blendet Danablu ost med agar), ser de to arter både morfologisk og fysiologisk meget ens ud. Begge arter bliver meget vatagtige og indtil P. caseifulvum begynder at sporulere er det praktisk talt umuligt at kende forskel på de to arter (13). år P. caseifulvum podes som 3-stik bliver den grå/blå, mens den ved podning med en kraftig sporesuspension får grå sporer. 3.5 Kemisk karakterisering af øvrige skimmelsvampe associeret til ost 8
10 Som nævnt på side 3 har FL m.fl. karakteriseret den associerede funga på ost og beskrevet de relativt få arter, der er dominerende. I dette projekt er et antal isolater fra tolv af de vigtigste blevet dyrket på DBA medium. Efter vækst i 2 uger ved 12 o C er der blevet fremstillet ekstrakter fra overflade kulturer. Ekstrakterne blev analyseret ved PLC og efterfølgende testet vha. MTT-testen (se afsnit 3.6 og tabel 3 herunder). En lang række kendte stoffer (som f.eks. cyclopiazonsyre, rugulovasiner, penitrem A og sterigmatocystin m.fl.) kunne påvises i de enkelte ekstrakter (tabel 1 og figur 6). Skimmelsvamp Sekundære metabolitter påvist fra ostebaseret medium Penicillium roqueforti Roquefortine A og analoger P. commune Rugulovasine A & B, viridicatin, cyclopiazonsyre m.fl., metabolit I P. camemberti Cyclopiazonsyre,metabolit I P. caseifulvum Rugulovasine A & B, metabolit I P. nalgiovense Diaportinol, diaportin syre, dichlorodiaportine og analoger P. atramentosum Rugulovasine A & B, meleagrin, oxaline P. solitum Cyclopenol, viridicatol, cyclopeptine, dehydrocyclopeptine, solistatin, viridicatin, compactin P. discolor Cyclopenol, viridicatol, cyclopeptine, dehydrocyclopeptine, chaetoglobosiner, P. crustosum Cyclopenol, cyclopeptin, penitrem A P. nordicum Sclerotigenin, anaciner, viridic syre og analoger, metabolit I P. verrucosum Verruciner Aspergillus versicolor Sterigmatocystin, versicoloriner Tabel 1. Liste over hvilke skimmelsvampe arter, der er blevet dyrket på et oste baseret medium (DBA) og angivelse af hvilke stoffer, der er påvist i ekstrakter (se også figur 6). versicolorin A anacine viridicatol 2 Cl C 3 C 3 3 C C 3 compactin penitrem A chaetoglobosin A Figur 6. Sekundære metabolitter dannet af oste associerede Penicillium arter på DBA. Flere af de nævnte stoffer (som sclerotigenin, anaciner, verruciner, compactiner, solistatin, diaportiner, chaetoglobosiner) er os bekendt aldrig tidligere påvist fra oste eller oste baserede substrater. En litteratur søgning vil klarlægge dette og en endelig afrapportering vil fremgå af den planlagte artikel (13). 9
11 Det fremgår af tabel 1, at P. nordicum danner (store mængder) af stoffet sclerotigenin på ost. Dette er helt ny viden, idet vi i vores beskrivelse af hvilke arter (indenfor Penicillium), der laver stoffet slet ikke nævner arten P. nordicum (10). P. nordicum svarer i artiklen til de 4 af de 8 undersøgte P. verrucosum isolater der danner sclerotigenin. At P. nordicum er en selvstændig art er endeligt blevet klarlagt i FØTEK3 projektet The role secondary metabolites on fungal activities in foods, hvor arbejdet med karakterisering af kemotyper indenfor P. verrucosum er fortsat. I dette projekt har vi fundet, at der udover stofferne citrinin og sclerotigenin også er to serier af analoge stoffer kaldet verruciner og anaciner, som aldrig dannes samtidigt. Sammenholdes alle data fra de ialt 45 isolater, der er undersøgt, finder vi nu fire kemotyper, hvor de to største grupper i arbejdet konkluderes at repræsentere arterne P. verrusosum og P. nordicum, idet eks-type kulturen af sidstnævnte art var indeholdt i den ene gruppe. Begge arter producerer ochratoxin A (TA) og B, verrucoloner og metabolit I, mens de fleste P. verrucosum isolater desuden producerer verruciner og citrinin. Sidstnævnte to stoftyper dannes aldrig af P. nordicum isolater, der derimod næsten alle producerer anaciner og desuden ofte sclerotigenin (tabel 2). Skimmelsvamp Forekomst Karakteristiske sekundære metabolitter P. verrucosum Cerealier chratoxiner, verrucoloner, citrinin, verruciner P. nordicum st & kød chratoxiner, verrucoloner, sclerotigenin, anaciner Tabel 2. Karakteristiske metabolitter dannet af Penicillium verrucosum og P. nordicum, som er ochratoxin producerende skimmelsvampe, der forekommer på hhv. cerialier og ost/kød. Isolater af P. verrucosum er næsten altid isoleret fra cerealier og er som regel orangebrune på bagsiden af YES agar, mens P. nordicum isolater oftest er isoleret fra kød eller ost og er svagt creme farvede på bagsiden af YES agar. Disse klare forskelle underbygger ligeledes, at der er tale om to forskellige arter (12). Generelt danner P. nordicum væsentligt større mængder TA end P. verrucosum, hvilket kan skyldes, at aminosyren phenylalanine, der er en væsentlig byggesten i biosyntesen af TA, også indgår i biosyntesen af verruciner, som er hovedkomponenter for P. verrucosum. På DBA mediet dannede de to undersøgte isolater af P. nordicum dog ikke TA. Igennem de seneste år har Mykologigruppen også arbejdet en del med kemisk karakterisering af P. roqueforti. ovedkonklusionen har været, at der er blevet beskrevet to nært beslægtede arter P. carneum og P. paneum, som både morfologisk og især kemisk afviger meget fra den traditionelle P. roqueforti art, der bruges som starterkultur. Som navnene indikerer findes de to sidstnævnte arter ofte på kød og brød. Alle tre arter kan danne roquefortine C, mens kun P. carneum og P. paneum kan danne mykotoksinet patulin, ligesom der er andre kemiske forskellige. I dette projekt er det blevet vist, at de tre arter danner meget forskellige flygtige stoffer, hvilket giver en alternativ måde at identificere arterne på (14). 3.6 Screening af svampeekstrakter for cytotoksisitet Som nævnt ovenfor blev ekstrakterne fremstillet fra kulturer dyrket på DBA medium afsluttende i projektet screenet for deres evt. cytotoksisitet ved brug af den såkaldte MTT-test (13). Testen er tidligere brugt til undersøgelse af svampestoffer og 10
12 ekstrakter. Kort beskrevet går testen ud på, at en fortyndingsrække af ekstraktet (sammen med vækstmedium) tilsættes en velkarakteriseret cellelinie af opdyrkede svinenyre celler, der sidder som et monolag i mikrotiterbrønde. Cellerne vil herefter overleve, tage delvis skade eller dø afhængigt af ekstrakternes indhold af cytotoksiske stoffer. Princippet i testen baseres på at levende celler er i stand til at omdanne det gule farvestof 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide (MTT) til lilla formozaner, mens cellesuspensioner der indeholder døde celler forbliver gule, hvilket kan måles spektrofotometrisk. På trods af at testen kun skal betragtes som en hurtig diagnostisk screenings metode, giver den dog et udtryk for et givent antal ekstrakters relative cytotoksisitet. Metoden er således fundet relevant i dette projekt specielt til det formål at sammenligne de to nært beslægtede arter P. caseifulvum og P. camemberti. Ekstrakter af 5-7 isolater af disse to arter er blevet dyrket på henholdsvis et syntetisk agar medium (YES) og DBA medium med kontrol prøver og ekstrakter af to isolater af P. roqueforti. Skimmelsvamp Antal isolater/prøver Toksisk indtil fortynding # Kontrol 4 - Penicillium roqueforti 2 - P. commune 2 3, 3 P. camemberti 5 1, 2, 2, 2, 1 P. caseifulvum 7 1, 1, 3, 3, 2, 2, 1 P. nalgiovense 2 5, 5 P. atramentosum 2 1, 2 P. solitum 3 1, 3, 3 P. discolor 3 2, 2, 5 P. crustosum 2 2, 2 P. nordicum 2 1, 3 P. verrucosum 1 1 Aspergillus versicolor 2 2, 5 Tabel 3. versigt over de undersøgte ekstrakters (fra DBA medium) cytotoksisitet, angivet som antal fortyndinger et givent ekstrakt skal gennemgå før mere end 80% af det tilsatte gule farvestof MTT omdannes til lilla formazaner). Resultater fra det syntetiske medium viste (ikke illustreret her), at hverken ekstrakter fra P. caseifulvum eller P. camemberti var toksiske. Samtidig sås de to undersøgte P. roqueforti ekstrakter at være 3-4 fortyndingstrin mere toksiske, hvilket stemmer godt overens med, at arten er kendt for at producere mykotoxiner som roquefortiner og PR-toxin på syntetiske medier. Disse stoffer produceres under normale omstændigheder ikke på Danablu eller blå hvide oste. Ekstrakter fra Danablu agar mediet gav helt andre resultater, idet ekstrakter af P. roqueforti nu var nontoksiske ligesom kontrol ekstrakter, mens P. caseifulvum og P. camemberti ekstrakter derimod var toksiske fra første til tredie fortyndingstrin (tabel 3). I gennemsnit var der således meget lille forskel på de to arters cytotoksisitet og resultaterne stemmer således med de kemiske data, der har vist, at de to arter er meget ens. 11
13 år man ser på cytotoksisiteten af ekstrakter fra de øvrige 9 arter dyrket på DBA ses alle at være cytotoksiske (tabel 3). Ekstrakterne fra P. nalgiovense ses at være de mest cytotoksiske. ovedkomponenterne i P. nalgiovense ekstrakterne var diaportiner, en gruppe af isocoumariner på flere end de fem, som er blevet beskrevet i dette projekt (figur 6) (7). Vi har dog ikke testet de rene stoffers cytotosisitet. Me Cl Cl Me Me Figur 6. ye diaportiner fra P. nalgiovense (dichlorodiaportine, diaportinol og diaportinsyre) (7). Desuden ses ét P. discolor og ét A. versicolor isolat at være betydeligt mere toksiske end andre isolater af samme art. år man ser på PLC profilerne for de to isolater af sidstnævnte art sås meget store kemisk forskelle, hvilket forklarer MTTtest resultatet. Årsagen til at ekstraktet af de ene P. discolor isolat er så relativt mere toksisk end de to øvrige er derimod sværere at forklare idet kromatogrammerne for de tre ekstrakter ser meget ens ud. Dette tyder på at toksisiteten skyldes forskelle i mængder på nogle af de mindre komponenter. De øvrige ekstrakter var alle middel toksiske, hvilket der ikke umiddelbart kan konkluderes noget udfra. Mange mykotoksiner er ikke cytotoksiske og giver derfor intet eller kun ringe udslag i testen, eksempelvis sås de to ektrakter af P. crustosum at indeholde store mængder af det tremorgene toksin penitrem A. 4. Konklusioner Projektet har bidraget med ny viden angåede sekundær metabolitdannelse fra skimmelsvampe på ost. Således er der på basis af de metoder, som er udviklet i projektet blevet oprenset omkring 25 svampemetabolitter, hvoraf det er lykkedes at karakterisere de 20, hvoraf 10 har været nye. Blandt de fem metabolitter, som det endnu ikke er lykkedes at oprense og karakterisere er nogle af de tilsyneladende mange farvestoffer, som dannes i små mængder af Penicillium caseifulvum både på Danablu oste og på en række forskellige syntetiske medier. Mange af de nye stoffer er sammen med en række allerede kendte stoffer påvist for første gang i svampeekstrakter fra kontaminerede Danablu oste eller fra overflade kulturer dyrket på et oste baseret medium. Kemisk karakterisering af P. caseifulvum isolater fra fire danske mejerier og nogle få isolater af udenlandsk oprindelse har vist at alle eksisterende isolater har meget ensartede profiler af sekundære metabolitter. 12
14 Ved sammenligning af P. caseifulvum med P. camemberti mht. aromadannelse og toksisitet har det vist sig, at de to arter er meget ensartede. P. caseifulvum danner store mængder af aromastoffer, som er kendte fra P. camemberti. år ekstrakter af de to arter testes vha. den såkaldte MTT-test findes det, at de to arter er stort set lige toksiske. Alt i alt indikerer resultaterne i projektet således, at P. caseifulvum foruden at være kontaminant på Danablu oste, ligeså godt kan betragtes som en potentiel ny starterkultur, hvilket den tilsyneladende allerede bruges som i Tyskland. Fysiologiske undersøgelser har vist, at farvestofdannelse er mest udtalt ved lavt p og ved lave fosfat koncentrationer, mens saltkoncentrationen er korreleret til vækst. Dette stemmer godt overens med, at de største problemer med misfarvning ses om sommeren, hvor der netop er lavt fosfat indhold i mælken. Resultaterne peger derfor på at mejeriindustrien, ved at styre p, salt og fosfat indholdet i Danablu oste under deres fremstilling, herigennem har mulighed for at hæmme den uønskede farvestofdannelse. Projektet har samarbejdet med en lang række eksterne partnere og andre forskningsprojekter omkring kemisk karakterisering af andre oste associerede arter end P. caseifulvum. Af vigtige resultater kan nævnes, at det alene ved analyse af flygtige stoffer er muligt at identificere de tre arter P. roqueforti, P. carneum og P. paneum, hvoraf de to sidstnævnte ofte fejlidentificeres som P. roqueforti (14). Tilsvarende har det vist sig, at oste (og kød) associerede Penicillium isolater, der producerer ochratoxin A, desuden producerer en række andre unikke stoffer, som ikke produceres af ceriale associerede TA producerende arter. Resultaterne tyder klart på, at der er tale om to selvstændige arter, P. nordicum og P. verrucosum (13). Endeligt har projektet medvirket til opbygning af en ny videnplatform omkring naturstofkemi i Levnedsmiddelcenteret på Institut for Bioteknologi, Danmarks Tekniske Universitet. Projektet har allerede været grundlagsskabende for to andre projekter bevilget i Forskningsråds regi (FØTEK3 projektet: The role of secondary metabolites on fungal activities in foods og STVF rammebevillingen: Predictive biotechnology and functional biodiversity: intelligent screening and phenotypic informatics, begge projekter der udføres på Institut for Bioteknologi på Danmarks Tekniske Universitet). 13
15 Dokumentation Følgende artikler er publiceret i (eller er underarbejning til) internationale tidsskrifter 1. Larsen, T.., Frisvad, J.C. & Christophersen, C. (1998). Arabenoic acid, a major chemical indicator of Penicillium verrucosum. Biochemical Systematics and Ecology 26, Larsen, T.., Frydenvang, K., Frisvad, J.C. & Christophersen, C. (1998). UV-guided isolation of alantrypinone, a novel Penicillium alkaloid. Journal of atural Products 61, Larsen, T.. (1998). Aroma production by Penicillium caseifulvum. International Dairy Journal 8, Larsen, T.. & Smedsgaard, J. (1998). Fungal metabolites in chemotaxonomy. In: atural Product Analysis. Chromatography, Spectroscopy, Biological Testing. (Eds. P. Schreier, M. erderich,.-u. umpf & W. Schwab). Braunschweig, Viewig, pp ISB Larsen, T.., Smedsgaard, J., Frisvad, J.C., Anthoni, U. and Christophersen, C. (1999). Consistent production of penigeguinolone A and B by Penicillium scabrosum. Biochemical Systematics and Ecology 27, Sørensen, D., Larsen, T.., Christophersen, C., ielsen, P.. and Anthoni, U. (1999). Solistatin, an aromatic compactin analogue from Penicillium solitum. Phytochemistry 51, Sørensen, D., Larsen, T.., Christophersen, C., ielsen, P.. and Anthoni, U. (1999). Dipodazine, a diketopiperazine from Penicillium dipodomyis. Phytochemistry 51, Larsen, T. and Breinholt, J. (1999). Dichlorodiaportin, diaportinol and diaportinic acid, three novel isocoumarins from Penicillium nalgiovense. Journal of atural Products 62, Larsen, T.. (2000). Karakterisering af sekundære stoffer fra skimmelsvampe på ost. Mælkeritidende 7, Larsen, T.., Frydenvang, K. and Frisvad, J.C (2000). UV-guided screening of benzodiazepine producing species in Penicillium. Biochemical Systematics and Ecology (in press). 11. Suhr, K.I., aasum, I. & Larsen, T.. (200X). Factors effecting growth and pigmentation of Penicillium caseifulvum. International Dairy Journal (submitted). 12. Larsen, T.. and Svendsen (200X). Chemical characterization of the two ochratoxin producing Penicillium species, P. verrucosum and P. nordicum. Applied. & Environmental Microbiology (submitted). 13. Larsen, T.., Frisvad J.C., Christophersen, C. and Gareis, M. (200X). Chemical and biological characterization of cheese associated fungi. Journal of Food and Agricultural Chemistry (in prep). 14. Larsen, T.. (200X). Chemistry of Penicillium roqueforti, P. carneum and P. paneum on cheese, meat and bread. Journal of Food and Agricultural Chemistry (in prep). 15. Larsen, T.., Smedsgaard, J.S., Lund, F., Frisvad, J.C. (2000). Chemical characterisation of cheese associated fungi. Proceedings from the 22. Mycotoxin Workshop, Bonn, June 5-7, Mycotoxin Research (in press). 14
16 Følgende foredrag og posters er præsenteret i projektperioden: April. Industrial contact programme, DTU. ral presentation Kemiske forbindelser fra skimmelsvampe på ost. July 27 to 31. The 37th Annual Meeting of the American Society of Pharmacognosy, University of California, Santa Cruz. ral presentation: Secondary metabolites from fungi related to dairy products. 15 ovember. Visit at the group of professor John E. Smith at Strathclyde University, Glasgow. ral presentation: Pigments from cheese associated fungi July. The 38th Annual Meeting of the American Society of Pharmacognosy. University of Iowa, Iowa City. ral presentation: ew metabolites from penicillia related to cheese. 25 August. International symposium arranged by the Phytochemical Society of Europe. Bioassay Methods in atural Product Research. Biomedical Centre, Uppsala University, Sweden, August 24th to 27th. ral presentation: Chemoconsistency of secondary metabolites produced by penicillia. 29 Sep. - 1 ct. atural Product Analysis. Chromatography, Spectroscopy, Biological Testing. University of Würzburg, Germany. Poster: Larsen, T.. & Smedsgaard, J. Fungal metabolites in chemotaxonomy. 7 ov. Mejeriforskningsdag University of Århus. Poster: Larsen, T.. & Jakobsen,. Kemisk karakterisering af sekundær metabolitdannelse fra skimmelsvampe på ost and the poster: ielsen, P.V., Larsen, T.., aasum, I., and ielsen, M.S. Fysiologi, økologi og resistensforhold hos skimmelsvampe på ost 13 ov. ral presentation at Department of General and rganic Chemistry at the University of Copenhagen: atural product chemistry of food related fungi. 26 ov. ral presentation at the Royal Danish School of Pharmacy: Secondary metabolites from food related fungi. Methods for sampling & analysis, chemotaxonomy and pigments Jan. LMC Congress, DTU. Poster: Larsen, T.. & Jakobsen,. Kemisk karakterisering af sekundær metabolitdannelse fra skimmelsvampe på ost and the poster: Suhr, K., aasum, I., Larsen, T.., and ielsen, P.V. Physiological Characterization of Penicillium caseifulvum: A fungus causing yellow discolouration of Blue cheese 20 April. ral presentation during a visit at University of California Santa Cruz, at Department of Chemistry and Biochemistry with Professor Phil Crews: Identification of food-borne microfungi by fingerprinting of secondary metabolites. 22 April. ral presentation during visit at University of California Santa Cruz, at Department of Chemistry and Biochemistry with Professor Phil Crews: UV-guided isolation of new fungal metabolites. 6 May. ral presentation at Department of rganic Chemistry, Technical University of Denmark: Food related fungi and natural product chemistry, at Department of Biotechnology, DTU May. Frontiers in Food Biotechnology, DBC IV, Munkebjerg hotel, Vejle. Poster: Larsen, T.. atural product chemistry from cheese related fungi and the poster: aasum, I., Suhr, K., Larsen, T.., and ielsen, P.V. Physiological Characterization of Penicillium caseifulvum: A fungus causing yellow discolouration of Blue cheese. 15
17 1-2 September. ral presentation: Chemical characterization of fungal metabolites, during the first CST ACTI 835 meeting of the working group 4 (Chemical and biological characterization of toxic metabolites). ational Veterinary and Food Research Institue, elsinki, Finland. 8 December. rganizer of the half day meeting: Kemi og skimmelsvampe at the Technical University of Denmark February. ral presentation: Characterization of fungal metabolites at DTU, DK, at a minimeeting of the working group 4 (CST ACTI 835: Chemical and biological characterization of toxic metabolites). Federal Centre for Meat Research (BAFF), Kulmbach, Germany. 22 April. Scientific meeting with professor Alejando F. Barrero and his group at the University of Granada, Spain. ral presentation: " Food related fungi and natural product chemistry, at the Technical University of Denmark". 5-8 September. BIDIVERSITY. A source of new leads for the pharmaceutical and agrochemical industries. University of St. Andrews, Scotland. Poster: T.. Larsen, Chemoconsistency of microfungal species in drug discovery. 28 ctober. ral presentation at IBT, DTU. (y viden): Skimmelsvampe og deres kemi. (Lecture given to 3.g. class from erning Gymnsasium). 10 December. rganizer of the one day danish seminar: atural Product Chemistry at the Technical University of Denmark. ral presentation: Fungal Chemistry in Food Research. 16
18 Mejeriforeningen Danish Dairy Board Frederiks Allé 22 DK-8000 Århus C Telefon Fax ddb@mejeri.dk
Afslutningsrapport. Moderne levnedsmiddelmykologiske metoder i relation til hygiejne Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr
Afslutningsrapport Moderne levnedsmiddelmykologiske metoder i relation til hygiejne Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr. 1996-12 Juli 1996 MEJERIFORENINGEN dato: 9.3.1997 Slutrapport for FØTEK-samarbejdsprojekt
Læs mereAfslutningsrapport. Marts 1998
Afslutningsrapport Fysiologi, økologi og resistensforhold hos skimmelsvampe tilknyttet mejeriprodukter, især osteprodukter Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr. 1998-15 Marts 1998 Mejeriforeningen Afslutningsrapport
Læs mereSvampe og mykotoksiner i ensilage
Svampe og mykotoksiner i ensilage Ulf Thrane, DTU Systembiologi Ida ML Drejer Storm, DTU Systembiologi Rie Romme Rasmussen, DTU Fødevareinstituttet Jens Laurids Sørensen, DJF-Aarhus Universitet Ulf Thrane,
Læs mere14:15 14:30: Målinger i vand og fisk på forskellige danske typer anlæg og lidt om sensorik.
Temadag om: Håndtering af uønskede smagsstoffer (eksempelvis geosmin / MIB) i recirkulerede opdrætssystemer 13:35 14:00: Hvad er det man smager, og hvor kommer smagen fra? 14:15 14:30: Målinger i vand
Læs mereEngelsk. Niveau D. De Merkantile Erhvervsuddannelser September Casebaseret eksamen. og
052431_EngelskD 08/09/05 13:29 Side 1 De Merkantile Erhvervsuddannelser September 2005 Side 1 af 4 sider Casebaseret eksamen Engelsk Niveau D www.jysk.dk og www.jysk.com Indhold: Opgave 1 Presentation
Læs mereWorkshop C: Forskningslignende opgaver i biologiske og kemiske fag
Workshop C: Forskningslignende opgaver i biologiske og kemiske fag Forskningsbaseret undervisning Karla Frydenvang, lektor, PhD Institut for Medicinalkemi Farmaceutisk Fakultet, Københavns Universitet
Læs mereAfslutningsrapport. Juli 1998
Afslutningsrapport Lipolytisk og proteolytisk aktivitet samt forudsigelse af modningsforløb ved fremstilling af Danablu Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr. 1998-17 Juli 1998 Afslutningsrapport til
Læs mereTA BUSSEN - LINIE 888 - HURTIGT BILLIGT BEHAGELIGT NEMT KØBENHAVN SILKEBORG ÅRHUS THISTED AALBORG KUN 120 KR. til Århus og Silkeborg. Aalborg og Thisted kun 140 kr. Ovenstående priser er for studerende
Læs mereOur activities. Dry sales market. The assortment
First we like to start to introduce our activities. Kébol B.V., based in the heart of the bulb district since 1989, specialises in importing and exporting bulbs world-wide. Bulbs suitable for dry sale,
Læs mereBiokonservering af koldrøget laks
Af Lilian Nilsson og Lone Gram Afdeling for Fiskeindustriel Forskning, Danmarks Fiskeriundersøgelser Biokonservering af koldrøget laks - hvordan man forhindrer vækst af Listeria i fiskeprodukter er en
Læs mereEngelsk. Niveau C. De Merkantile Erhvervsuddannelser September 2005. Casebaseret eksamen. www.jysk.dk og www.jysk.com.
052430_EngelskC 08/09/05 13:29 Side 1 De Merkantile Erhvervsuddannelser September 2005 Side 1 af 4 sider Casebaseret eksamen Engelsk Niveau C www.jysk.dk og www.jysk.com Indhold: Opgave 1 Presentation
Læs mereErfaringer med GUDP ansøgninger og projekter - hvad skal der til?
CENTRE OF EXPERTISE FOR FOOD MICROBIOLOGY Erfaringer med GUDP ansøgninger og projekter - hvad skal der til? Anne Elsser-Gravesen ISI Protection Januar 2015 follow us on w w w. i s i f o o d p r o t e c
Læs mereSustainable use of pesticides on Danish golf courses
Indsæt nyt billede: Sustainable use of pesticides on Danish golf courses Anita Fjelsted - Danish EPA Ministry of the Environment 27 May 2015 - STERF The Danish Environmental Protection Agency 450 employees
Læs mereTOP SAFE projektet: fra idé til igangværende GUDP projekt. Anne Elsser-Gravesen ISI Food Protection ApS
TOP SAFE projektet: fra idé til igangværende GUDP projekt Anne Elsser-Gravesen ISI Food Protection ApS Founded end of 2009 Facilities in Agro Food Park Highly specialised on applied food microbiology L3*
Læs mereNye metoder til at vurdere planters ernæringstilstand
Nye metoder til at vurdere planters ernæringstilstand PhD-studerende Thomas Christian de Bang Jens Frydenvang Dias 1 Thomas Christian de Bang PhD-studerende B.Sc. (Naturressourcer) Kontakt: tdb@life.ku.dk
Læs mereMikrobiologiske bekæmpelsesmidler mod plantesygdomme: effekter og muligheder.
Mikrobiologiske bekæmpelsesmidler mod plantesygdomme: effekter og muligheder. Mikrobiologiske bekæmpelsesmidler (MBM) baseret på udvalgte mikroskopiske svampe har stort potentiale til forebyggelse af plantesygdomme.
Læs mereSSOG Scandinavian School of Gemology
SSOG Scandinavian School of Gemology Lektion 12: Syntetisk smaragd Indledning Det er min forventning, med den viden du allerede har opnået, at du nu kan kigge på dette 20x billede til venstre af en syntetisk
Læs merePolyteknisk Midtvejs Projekt Forår 2004 Karakterisering af antagonistiske skimmelsvampe
1 Indledning...2 2 Teori...3 2.1 Karakterisering af svampe...3 2.1.1 Hæmning og antagonisme...4 2.2 Kromatografi...6 2.2.1 TLC Thin Layer Chromatogarphy...6 2.2.2 HPLC High Performance Liquid Chromatography...7
Læs mereKU benchmark med udvalgte institutioner FORSKNING OG INNOVATION
KØBENHAVNS UNIVERSITET SAGSNOTAT Opdateret 04. MAJ 2017 Vedr. KU benchmark med udvalgte institutioner FORSKNING OG INNOVATION UNIVERSITETSPARKEN 1, Herunder er en benchmarking af KU med udvalgte europæiske
Læs mereVarespecifikation for DANABLU
Varespecifikation for DANABLU BGB 1. Navn Danablu 50+ eller Danablu 60+ (afhængig af fedtindholdet) 2. Beskrivelse af DANABLU Skimmelost, fuldfed eller ekstra fuldfed, halvfast til blød, blåskimmelmodnet,
Læs mereChallenges for the Future Greater Helsinki - North-European Metropolis
Challenges for the Future Greater Helsinki - North-European Metropolis Prof. Dr.-Ing. / M.A. soc. pol. HafenCity University Hamburg Personal introduction background: - urban and regional planning - political
Læs mereBioøkonomi: en spændende option hvor udkanten kan komme i centrum. Lene Lange, Professor og Forskningsdirektør Aalborg Universitet, Danmark
Bioøkonomi: en spændende option hvor udkanten kan komme i centrum Lene Lange, Professor og Forskningsdirektør Aalborg Universitet, Danmark Aalborg Universitet: Et netværk af tre Campus i Danmark Peter
Læs mere5T Projektet Together To Twenty Ton in RAPPORT MED FORSØGSDATA OG RESULTATTABELLER REPORT WITH TRIAL DATA AND TABLES OF RESULTS
778-20 5T Projektet Together To Twenty Ton in 20-20 RAPPORT MED FORSØGSDATA OG RESULTATTABELLER REPORT WITH TRIAL DATA AND TABLES OF RESULTS Otto Nielsen on@nbrf.nu +45 61 76 23 34 Nordic Beet Reseach
Læs mereDanish Language Course for International University Students Copenhagen, 12 July 1 August Application form
Danish Language Course for International University Students Copenhagen, 12 July 1 August 2017 Application form Must be completed on the computer in Danish or English All fields are mandatory PERSONLIGE
Læs mereDyrkning af svampe fra ost
Dyrkning af svampe fra ost Forord Velkommen til øvelsen Dyrkning af svampe fra ost der hører til undervisningsmaterialet Svampe laver din ost. Øvelsen er udarbejdet af Julie Mahler Nilsson med uundværlig
Læs mereMål og planer for det nationale olie/gas forskningscenter på DTU
Mål og planer for det nationale olie/gas forskningscenter på DTU Bo Cerup-Simonsen Direktør, Center for Olie og Gas DTU Baggrund Kilde: ENS, Quartz 2013 Baggrund Raison d etre The centre is part of the
Læs mereFølgebrev Kemisk og sensorisk bestemmelse af væg- og loftsmaling udtrykt som den Indeklima-relevante tidsværdi
Lerstensfabrikken Aps Att.: Per Olesen Haslevvej 81 4100 Ringsted 2010.01.11 lwf/-/hbs 333829 Følgebrev Kemisk og sensorisk bestemmelse af væg- og loftsmaling udtrykt som den Indeklima-relevante tidsværdi
Læs mereOpdagelse og heterolog produktion af nye bioaktive svampestoffer i skræddersyede mikrobielle cellefabrikker
Opdagelse og heterolog produktion af nye bioaktive svampestoffer i skræddersyede mikrobielle cellefabrikker Mange naturstoffer har farmakologisk aktivitet og er derfor interessante som lægemidler. De seneste
Læs mereNy viden om hvordan depressionsmedicin bindes i hjernens nerveceller
Ny viden om hvordan depressionsmedicin bindes i hjernens nerveceller Med ny præcision kortlægger Århus-forskere hvordan depressionsmedicin virker. Opdagelserne giver håb om at udvikle forbedret depressionsmedicin
Læs mereOPGAVER ØL -verdens første svar på anvendt bioteknologi
OPGAVER ØL -verdens første svar på anvendt bioteknologi Biotech Academy BioCentrum-DTU Søltofts Plads DTU - Bygning 221 2800 Kgs. Lyngby www.biotechacademy.dk bioteket@biocentrum.dtu.dk SMÅ OPGAVER Nedskriv
Læs merePlease report absence, also if you don t plan to participate in dinner to Birgit Møller Jensen Telephone: /
Annex 01.01 Board Meeting - Draft Agenda Wednesday, 24 th April 2013 at 15.00-20.00 in the Meetery, AADK, Fælledvej 12, 2200 Copenhagen N Agenda Status Time (proposed) Annex Comments 1. Welcome and approval
Læs mereLys og molekyler. Bo W. Laursen Nano-Science Center & Kemisk Institut Københavns Universitet
ano-science Center Lys og molekyler Bo W. Laursen ano-science Center & Kemisk Institut Københavns Universitet Akademiet for Talentfulde Unge Ringsted Gymnasium 31. Januar 2015 Enhedens navn Kemi og nano-videnskab
Læs mereBisphenol A baserede polymerer i fødevarekontaktmaterialer (FKM) til børn. BAGGRUND OG FORMÅL
SLUTRAPPORT Bisphenol A baserede polymerer i fødevarekontaktmaterialer (FKM) til børn. Projekt J. nr.: 2010-20-64-00238 BAGGRUND OG FORMÅL Bisphenol A bliver blandt andet anvendt i hårde plasttyper som
Læs mereAfprøvning af InVentilate Ventilationssystem
Afprøvning af InVentilate Ventilationssystem P. Heiselberg Udarbejdet for: InVentilate A/S DCE Contract Report No. 108 Department of Civil Engineering Aalborg University Department of Civil Engineering
Læs mereApplication form for access to data and biological samples Ref. no
Application form for access to data and biological samples Ref. 2016-02 Project title: Applicant: Other partners taking part in the project Names and work addresses: "Skilsmisse og selvvurderet mentalt
Læs mereBetydning af revision af en DS/EN ISO standard
By- og Landskabsstyrelsens Referencelaboratorium Betydning af revision af en DS/EN ISO standard Bestemmelser af total cyanid og fri cyanid i vand med flow analyse By- og Landskabsstyrelsen Rapport Juni
Læs mereAfslutningsrapport Effekt af miljøforhold på smag og aromastofdannelse i danske skimmeloste
Afslutningsrapport Effekt af miljøforhold på smag og aromastofdannelse i danske skimmeloste Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr. 2007-86 Marts 2007 Afslutningsrapport Effekt af miljøforhold på smag
Læs mereEksperimentelle øvelser, øvelse nummer 3 : Røntgenstråling målt med Ge-detektor
Modtaget dato: (forbeholdt instruktor) Godkendt: Dato: Underskrift: Eksperimentelle øvelser, øvelse nummer 3 : Røntgenstråling målt med Ge-detektor Kristian Jerslev, Kristian Mads Egeris Nielsen, Mathias
Læs mereAfholdt d. 23. maj 2019
DANMAP monitorering af antibiotikaforbrug og resistens - Og hvorfor det er så vigtigt at få infektionshygiejnen med Veterinary & food populations Design, adjustment & optimisation Laboratory analysis Data
Læs mereLiving with Statins. Final Symposium. University of Copenhagen
Living with Statins Final Symposium Monday 27 th Tuesday 28 th November 2017 University of Copenhagen Faculty of Faculty of Social Sciences Faculty Auditorium: Henrik Dam Blegdamsvej 3, 2200 Copenhagen
Læs mereBioteknologi A. Studentereksamen. Af opgaverne 1 og 2 skal begge opgaver besvares. Af opgaverne 3 og 4 skal en og kun en af opgaverne besvares.
Bioteknologi A Studentereksamen Af opgaverne 1 og 2 skal begge opgaver besvares. Af opgaverne 3 og 4 skal en og kun en af opgaverne besvares. frs111-btk/a-31052011 Tirsdag den 31. maj 2011 kl. 9.00-14.00
Læs mereModtagelse af svært tilskadekomne.
Modtagelse af svært tilskadekomne. Siden 1996 har vi på Odense Universitetshospital haft en særlig registrering af svært tilskadekomne, både fra trafikuheld og fra øvrige ulykker. Disse registreringer
Læs mereBilag J - Beregning af forventet uheldstæthed på det tosporede vejnet i åbent land Andersen, Camilla Sloth
Aalborg Universitet Bilag J - Beregning af forventet uheldstæthed på det tosporede vejnet i åbent land Andersen, Camilla Sloth Publication date: 2014 Document Version Også kaldet Forlagets PDF Link to
Læs mereThe two traction/speed curves can be seen below. Red for diesel, Green for electric.
Denne artikel er publiceret i det elektroniske tidsskrift Artikler fra Trafikdage på Aalborg Universitet (Proceedings from the Annual Transport Conference at Aalborg University) ISSN 1603-9696 www.trafikdage.dk/artikelarkiv
Læs mereTal og tabeller Facts and Figures. University of Southern Denmark
Tal og tabeller Facts and Figures 2012 S y d d a n s k U n i v e r s i t e t University of Southern Denmark syddansk universitet Syddansk Universitet udbyder uddannelser på højeste videnskabelige niveau
Læs mereEksempel på eksamensspørgsmål til caseeksamen
Eksempel på eksamensspørgsmål til caseeksamen Engelsk niveau E, TIVOLI 2004/2005: in a British traveller s magazine. Make an advertisement presenting Tivoli as an amusement park. In your advertisement,
Læs mereFølgebrev Kemisk og sensorisk bestemmelse af 1 kontorserie
Holmris Office Att.: Lene Nissen Odinsvej 5 8850 Bjerringbro 2011.04.13 lwf/-/hbs Følgebrev Kemisk og sensorisk bestemmelse af 1 kontorserie Ifølge aftale fremsendes vedlagt rapport vedrørende kemisk og
Læs mereKatalog over anvendelsesmuligheder for kød fra frasorterede hangrise
Katalog over anvendelsesmuligheder for kød fra frasorterede hangrise SALTNING TEMPERATUR KOMPLEKSITET HANGRIS RØGNING MASKERING FERMENTERING FORTYNDING Indholdsfortegnelse 03 Indledning 04 Fortynding 05
Læs mereBasic statistics for experimental medical researchers
Basic statistics for experimental medical researchers Sample size calculations September 15th 2016 Christian Pipper Department of public health (IFSV) Faculty of Health and Medicinal Science (SUND) E-mail:
Læs mereBilag. Resume. Side 1 af 12
Bilag Resume I denne opgave, lægges der fokus på unge og ensomhed gennem sociale medier. Vi har i denne opgave valgt at benytte Facebook som det sociale medie vi ligger fokus på, da det er det største
Læs mereTrolling Master Bornholm 2013
Trolling Master Bornholm 2013 (English version further down) Tilmeldingerne til 2013 I dag nåede vi op på 77 tilmeldte både. Det er lidt lavere end samme tidspunkt sidste år. Til gengæld er det glædeligt,
Læs mereShared space - mellem vision og realitet. - Lyngby Idrætsby som case
Downloaded from orbit.dtu.dk on: Jan 27, 2017 Shared space - mellem vision og realitet. - Lyngby Idrætsby som case Brinkø, Rikke Publication date: 2015 Document Version Peer-review version Link to publication
Læs mereAnalyse af benzoxazinoider i brød
Analyse af benzoxazinoider i brød Øvelsesvejledning til kemi-delen af øvelsen. Af Stine Krogh Steffensen, Institut for Agroøkologi, AU Eleven har forberedt før øvelsen: 1. Eleven har udfyldt skemaet herunder
Læs mere22. maj 2013, kl. 10.00 May 22, 2013 at 10.00 a.m. Tranegaardsvej 20, DK-2900 Hellerup, Denmark
Til aktionærerne i Azanta A/S To the shareholders of Azanta A/S Vedr. Ordinær generalforsamling 2013 Re. Annual General Meeting 2013 Der indkaldes herved til ordinær generalforsamling i Azanta A/S ( Selskabet
Læs mereDanish Language Course for Foreign University Students Copenhagen, 13 July 2 August 2016 Advanced, medium and beginner s level.
Danish Language Course for Foreign University Students Copenhagen, 13 July 2 August 2016 Advanced, medium and beginner s level Application form Must be completed on the computer in Danish or English All
Læs mereDatahåndtering og tolkning af jord- og grundvandsforurening ATV jord og Grundvand
Datahåndtering og tolkning af jord- og grundvandsforurening ATV jord og Grundvand Perspektivering ift. administrative afgørelser, grænseværdier og direktivkrav Ole Kiilerich Jord og Affald Sagshåndtering
Læs mereTeknisk tegning Flowdiagrammer til procesanlæg Generelle regler
Dansk Standard DS/EN ISO 10628 1. udgave Godkendelsesblad Godkendt:2001-04-06 Teknisk tegning Flowdiagrammer til procesanlæg Generelle regler Flow diagrams for process plants General rules DANSK STANDARD
Læs mereLandbrug og Fødevarer Sunde børn - Inspirationsmøde 16. november 2012
Landbrug og Fødevarer Sunde børn - Inspirationsmøde 16. november 2012 Så lad dem dog få fingrende i farsen! - de første pointer fra et igangværende forskningsprojekt om, hvad der skaber unges lyst til
Læs merePlantens rigdom. giver en verden af muligheder...
Plantens rigdom giver en verden af muligheder... Hvem er vi? Plant2Product er en del af Grønt Center, Råhavegård, der er et videns- og erhvervsudviklingscenter. Plant2Product er virksomhedernes samarbejdspartner
Læs mereAvancerede bjælkeelementer med tværsnitsdeformation
Avancerede bjælkeelementer med tværsnitsdeformation Advanced beam element with distorting cross sections Kandidatprojekt Michael Teilmann Nielsen, s062508 Foråret 2012 Under vejledning af Jeppe Jönsson,
Læs mereHUSSVAMP LABORATORIET ApS
HUSSVAMP LABORATORIET ApS Rådgivning vedr. svamp, skimmel & insekter i bygninger Rådgivende Mikrobiologer & Ingeniører Medlem af Foreningen af Rådgivende Ingeniører F.R.I. Bygstubben 7 DK-2950 Vedbæk Telefon
Læs mereAalborg Universitet. Undersøgelse af miljøvurderingspraksis i Danmark Lyhne, Ivar; Cashmore, Matthew Asa. Publication date: 2013
Aalborg Universitet Undersøgelse af miljøvurderingspraksis i Danmark Lyhne, Ivar; Cashmore, Matthew Asa Publication date: 2013 Document Version Peer-review version Link to publication from Aalborg University
Læs mereHandelsbanken. Lennart Francke, Head of Accounting and Control. UBS Annual Nordic Financial Service Conference August 25, 2005
Handelsbanken Lennart Francke, Head of Accounting and Control UBS Annual Nordic Financial Service Conference August 25, 2005 UBS Annual Nordic Financial Service Conference Handelsbanken, first half-year
Læs mereTo the reader: Information regarding this document
To the reader: Information regarding this document All text to be shown to respondents in this study is going to be in Danish. The Danish version of the text (the one, respondents are going to see) appears
Læs mereVidereudvikling af LDV til on-sitemåling
Videreudvikling af LDV til on-sitemåling Sammenligning mellem LDV og gasnormal i naturgasanlæg 19-21. maj 2010 Rapportforfattere: Matthew Adams, Teknologisk Institut Kurt Rasmussen, Force Technology LDV
Læs merePublikationer. Hjemmeside:
Nils Thidemann Chefkonsulent Aalborg Universitetsbibliotek VBN-teamet VBN-teamet Fælles Service Postaddresse: Langagervej 2 402 9220 Aalborg Ø Danmark Postaddresse: Langagervej 2 402 9220 Aalborg Ø Danmark
Læs mereSAS Corporate Program Website
SAS Corporate Program Website Dear user We have developed SAS Corporate Program Website to make the administration of your company's travel activities easier. You can read about it in this booklet, which
Læs mereDGF møde, 28.11.2013 i Odense DS 1537 Jordankre Prøvning. Disposition
DGF møde, 28.11.2013 i Odense DS 1537 Jordankre Prøvning Disposition Udførelse af jordankre: DS/EN 1537:2013 (indført 29/7 2013... ikke længere ny) Scope Bond type and compression type anchors Formål med
Læs mereFAUPE Forbedring af Afgrødernes Udbytte og Produktionsmæssige Egenskaber
K Ø B E N H A V N S U N I V E R S I T ET D E T N A T U R - O G B I O V I D E N S K A B E L I G E F A K U L T E T FAUPE Forbedring af Afgrødernes Udbytte og Produktionsmæssige Egenskaber Markforsøg generelt
Læs mereOliver Hendricks Overlæge, ph.-d. Klinisk lektor Syddansk Universitet
Oliver Hendricks Overlæge, ph.-d. Klinisk lektor Syddansk Universitet Compounds which are chemically foreign or hostile to a biological system Eukaryotic drugs Other chemical compounds Drugs Eukaryotedirected
Læs mereBan Ki-Moon har slået tonen an: Milk is perfection
Ban Ki-Moon har slået tonen an: Milk is perfection Mælk og Mejeriprodukter og realiseringen af FN s bæredygtighedsmål Jørgen Hald Christensen CEO Danish Dairy Board Danish Dairy Board Mejeribrugets Dag
Læs mereInternationalt uddannelsestilbud
t Internationalt uddannelsestilbud Lyngby-Taarbæk Vidensby Forberedende analyse blandt udenlandske ansatte 9. maj 2013 AARHUS COPENHAGEN MALMÖ OSLO SAIGON STAVANGER VIENNA 1 1. BAGGRUND Denne rapportering
Læs mereUndersøgelse af forskellige probiotiske stammer
Undersøgelse af forskellige probiotiske stammer Formål Formålet med denne øvelse er: 1. At undersøge om varer med probiotika indeholder et tilstrækkeligt antal probiotiske bakterier, dvs. om antallet svarer
Læs mereEngelsk 6. klasse årsplan 2018/2019
Måned Uge nr. Forløb August 32 American Summer 33 Camp 34 Antal Kompetencemål og lektioner færdigheds- og vidensområder 9 Tekst og medier (fase 1) Samtale (fase 2) Læringsmål I can use information from
Læs mereVandskade i bygninger
Vandskade i bygninger Fugt og skimmel - information til personalet om sundhedsrisici Informationspjece Juli 2016 Koncern HR, Fysisk Arbejdsmiljø Baggrund Denne informationspjece er udarbejdet efter ønske
Læs mereProcesoptimering med online fotometre
www.insatech.com Procesoptimering med online fotometre ON-14 Procesoptimering med online fotometre Ansat ved Insatech A/S siden marts 2014 Uddannet (industri-) laborant 18 års erhvervserfaring - Kemisk
Læs mereUdvikling indenfor nano teknnologi. Ejner Bech Jensen Vice President Molekylær Bioteknologi Novozymes R&D
Udvikling indenfor nano teknnologi hvad kan det betyde for Bioteknologien Ejner Bech Jensen Vice President Molekylær Bioteknologi Novozymes R&D Introduktion til Nano/ Bio teknologi : 1. Hvad er nano teknologi?
Læs mereFlag s on the move Gijon Spain - March 2010. Money makes the world go round How to encourage viable private investment
Flag s on the move Gijon Spain - March 2010 Money makes the world go round How to encourage viable private investment Local action groups in fisheries areas of Denmark Nordfyn The organization of FLAG
Læs mereVandeffektive mejerier. Projekter mellem Arla Foods og Ecolab
1 Vandeffektive mejerier Projekter mellem Arla Foods og Ecolab Optimisation of TCO (Total Cost of Operations) 2 3 TCO Project Model TASK FORCE ANALYSIS OPTIMIZATION VALIDATION Prioritization of projects
Læs mereFortynding er en mulig strategi i produkter, hvor kød fra de frasorterede slagtekroppe kan blandes med kød fra andre slagtekroppe.
Rapport Fortynding som strategi til anvendelse af kød fra frasorterede hangrise Hangrisekød i industriel anvendelse Margit Dall Aaslyng 10. oktober 2016 Proj.nr. 2004282 Version 1 MDAG/MT Baggrund Sammendrag
Læs merehansen facadeentreprenøren HSHansen Projekt: Novozymes - Bagsværd, København
hansen facadeentreprenøren HSHansen Projekt: Novozymes - Bagsværd, København Novozymes Bagsværd, København Copenhagen, Denmark Det falder naturligt at Novosymes som verdens førende inden for bioinnovation
Læs mereHvordan har unge det i de nordiske lande?
Hvordan har unge det i de nordiske lande? Nordisk topmøde om psykisk helse Oslo 27. februar 2017 Pernille Due Statens Institut for Folkesundhed Syddansk Universitet Formål med oplægget Hvordan har nordiske
Læs mereE-PAD Bluetooth hængelås E-PAD Bluetooth padlock E-PAD Bluetooth Vorhängeschloss
E-PAD Bluetooth hængelås E-PAD Bluetooth padlock E-PAD Bluetooth Vorhängeschloss Brugervejledning (side 2-6) Userguide (page 7-11) Bedienungsanleitung 1 - Hvordan forbinder du din E-PAD hængelås med din
Læs mereUdsættelse for MRSA ved arbejdsopgaver i svinebrug
P r æ s e n t a t i Anne Mette Madsen Seniorforsker Oktober 2018 Udsættelse for MRSA ved arbejdsopgaver i svinebrug MRSA en bakterie Methicillin Resistent Staphylococcus aureus MRSA Resistent over for
Læs mereOpera Ins. Model: MI5722 Product Name: Pure Sine Wave Inverter 1000W 12VDC/230 30A Solar Regulator
Opera Ins Model: MI5722 Product Name: Pure Sine Wave Inverter 1000W 12VDC/230 30A Solar Regulator I.Precautions 1. Keep the product away from children to avoid children playing it as a toy and resultinginpersonalinjury.
Læs mereMælkesyrebakterier og holdbarhed
Mælkesyrebakterier og holdbarhed Formål Formålet med denne øvelse er at undersøge mælkesyrebakteriers og probiotikas evne til at øge holdbarheden af kød ved at: 1. Undersøge forskellen på bakterieantal
Læs mereSvine-MRSA i RegionHovedstaden MRSA Knowledge Center Department of Clinical Microbiology Hvidovre Hospital University of Copenhagen Denmark
Svine-MRSA i RegionHovedstaden MRSA Knowledge Center Department of Clinical Microbiology Hvidovre Hospital University of Copenhagen Denmark Helle Neustrup, Heidi Meiniche, Ulla Kehlet, Mette Bartels, Henrik
Læs mereBlødgøring, natrium og sundhedseffekter Notat til HOFOR
Blødgøring, natrium og sundhedseffekter Notat til HOFOR Martin Rygaard Hans-Jørgen Albrechtsen November 2015 Forord I forbindelse med HOFORs ansøgning om tilladelse til at blødgøre drikkevand, udarbejdede
Læs mereKan sukkerroer være kick-start til bæredygtig dansk produktion of biopolymerer?
Kan sukkerroer være kick-start til bæredygtig dansk produktion of biopolymerer? John P Jensen, Senior Group Advisor, Nordzucker Technology & Innovation Siden mit spæde indlæg på den første konference -
Læs mereFORSKNING I HAVER TIL MAVER MED FOKUS PÅ EFFEKTER
10-05-2016 Karen Wistoft DPU/AU 1 FORSKNING I HAVER TIL MAVER MED FOKUS PÅ EFFEKTER Danmarks institut for Pædagogik og Uddannelse (DPU), Aarhus Universitet Mandag den 9. maj 14-16 Karen Wistoft, professor
Læs mereAfslutningsskema. 1. Projekttitel Muligheder for anvendelse af Compressed. 2. Projektidentifikation Energinet.dk projektnr. 6567
Dato: Afslutningsskema 1. Projekttitel Muligheder for anvendelse af Compressed Air Energy Storage for ellagring i fremtidens elsystem 2. Projektidentifikation Energinet.dk projektnr. 6567 3. Projektperiode
Læs mereAfslutningsrapport Cholesteroloxidation i mejeriprodukter Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr September 1995
Afslutningsrapport Cholesteroloxidation i mejeriprodukter Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr. 1995-1 September 1995 Afsluttende rapport for FØTEK I projektet Cholesteroloxidation i mejeriprodukter
Læs mereThe soil-plant systems and the carbon circle
The soil-plant systems and the carbon circle Workshop 15. november 2013 Bente Hessellund Andersen The soil-plant systems influence on the climate Natural CO 2 -sequestration The soil-plant systems influence
Læs mereFødevarers kvalitet en måleteknisk udfordring? v/lone Søvad Madsen, Teknologisk Institut cand.brom, seniorkonsulent
Fødevarers kvalitet en måleteknisk udfordring? v/lone Søvad Madsen, Teknologisk Institut cand.brom, seniorkonsulent Introduktion Lone Søvad Madsen M.Sc. Fødevareteknologi (Bromatologi 1996) Speciale i
Læs mereNy metode til at indsamle interviewdata om rejser med overnatning. Linda Christensen
Linda Christensen lch@transport.dtu.dk Undersøgelse af udlandsrejser med overnatning Hvorfor? Indenlandske rejser med overnatning er fravalgt Med de senere års TU haves rimelig god viden om indenlandske
Læs mereCurriculum. Publications
Kirubakaran Balasubramaniam PhD Student Research Unit of General Practice J.B. Winsløws Vej 9, indgang B, 1. Sal 5000 Odense C Denmark E-mail: kiruba@health.sdu.dk Direct phone: 65503739 Curriculum Født
Læs mereAfslutningsrapport. Bacillus cereus' betydning i danske mejeriprodukter Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr
Afslutningsrapport Bacillus cereus' betydning i danske mejeriprodukter Mejeribrugets ForskningsFond Rapport nr. 1998-19 September 1998 Slutrapport for projektet: Bacillus cereus betydning i danske mejeriprodukter
Læs mereRug danner store mængder af sekundære indholdsstoffer i kernen og under spiring af betydning for plantens forsvar og vores kost.
Rug danner store mængder af sekundære indholdsstoffer i kernen og under spiring af betydning for plantens forsvar og vores kost. Per L. Gregersen Fariha Tanwir Institut for Molekylærbiologi og Genetik
Læs mereNy rapport fra Fødevareøkonomisk Institut om danske forbrugeres opfattelse af tilsætningsstoffer og andre teknologier
Ny rapport fra Fødevareøkonomisk Institut om danske forbrugeres opfattelse af tilsætningsstoffer og andre teknologier Indledning Fødevareøkonomisk Institut, ved Københavns Universitet har undersøgt forbrugernes
Læs mereBILAG. til KOMMISSIONENS FORORDNING (EU) /
EUROPA- KOMMISSIONEN Bruxelles, den 11.12.2017 C(2017) 8238 final ANNEX 1 BILAG til KOMMISSIONENS FORORDNING (EU) / om ændring af bilag II, IV, VI, VII og VIII til Europa-Parlamentets og Rådets forordning
Læs mere